JPS63502113A - イソキサントプテリン−８−（１′−β−アルドグリコシジル）誘導体を含む組成物による動物細胞応答の変調 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 インキサントプテリン−８−（１’−β−アルドグリコシジル）誘導体を含む組 成物による動物細胞応答の変調同時係属出願のクロス・リファレンス 本出願人は、１９８３年１１月１日に提出した同時係属特許出願第５４６．６７ ９号の継続出願である１９８５年１１月１５日に提出した第７９８．６２９号の 一部継続である１９８５年１２月１３日に提出した同時係属特許出願第８０８． ８８６号の一部継続出願である。

技術分野 本発明はインキサントプテリンの低分子量誘導体を含む組成物による動物細胞応 答の変調、殊に抗原特異性免疫および他の動物細胞の変調に関する。

背景技術 動物免疫系は個々におよび（または）協調して作用し、その系により動物宿主に 対する異質として認識される物質を妨害し、排除し、または中和する多くの要素 からなる。一般に、しかし必然的ではなく、免疫系により異質として認識される 物質は宿主に対し外因性の由来を有する。そのような外因性物質の適例は感染性 細菌およびその細胞活性の副生物、ウィルス粒子およびそのタンパク質、昆虫穿 刺により注入されるタンパク質などである。自己免疫疾患、例えば慢性関節リウ マチ、において宿主の免疫系は宿主の作る例えばすなわぢ自生タンパク質を異質 として認識する。

免疫系の主エフェクターは白血球であり、それは胸腺由来のリンパ球（Ｔ細胞） 、骨髄腫中に生ずるリンパ球（Ｂ細胞）、中でも細菌に細胞毒性効果を有する酸 化剤例えば過酸化水素を作る酵素を生ずる好中球、Ｔ細胞およびＢ細胞に異質物 質または免疫原（抗原）を与え、またＴ細胞のＴヘルパー細胞へのＴ細胞の形質 転換並びにＢ細胞およびＴ細胞増殖を援助する゛インターロイキンｌと称される タンパク質を生ずるマクロファージが含まれる。オーダードカスケーディング的 に異質物質に作用するタンパク質の複合体混合物である補体もまた免疫反応に主 要な役割を果たす。

Ｂ細胞は、とりわけその表面膜上のモノマー性免疫グロブリン（抗体）の存在に よりＴ細胞と識別される。成熟Ｂ細胞は適当に活性化するとその環境中へ抗体を 分泌する。

免疫グロブリン分子の一部を作る５つの抗原的に異なる重鎮タンパク質を基にし て１　ｇＡ、Ｉ　ｇＤ、Ｉ　ｇＥ％ＩｇＧおよびＩｇＭとして確認される５種類 の公知免疫グロブリンが存在する。Ｂ細胞はまた補体受容体（ＣＲ）　、免疫グ ロブリンのＦｃ’１分に対する受容体（ＦｃＲ）％　１９Ｘ域関連抗原（Ｉａ） を含む非免疫グロブリン細胞マーカーを支持し、抗血清および他の手段により確 認される一組の分化抗原（Ｌ、ｂｌ〜７）はＢ細胞成熟および活性化の種々の観 点に相関する。これらのマーカーはＢ細胞およびＢ細胞兼集団の表現型的確圧に 有用である。

免疫グロブリンは異質物質、または抗原に作用するけれども、Ｔ細胞、殊にヘル パーＴ細胞はＢ細胞を刺激して分裂させ、体液性免疫に対する抗体分泌細胞に分 化させるのに必要であると思われる。サプレッサーＴ細胞は体液・性免疫の調節 に寄与するが、細胞毒性Ｔ細胞および遅延型過敏性のＴ細胞メディエータ−は細 胞仲介免疫の主エフェクターである。

マウスＴ細胞はり、ｔｌ、２および３、並びにＬ３とＬ４と称されるＴ細胞機能 に関連する表面抗原を支持する。ヘルパーＴ細胞前駆物質はり、ｔ　１”、２− １３−１Ｌ３と５４９表現型である。これらの細胞は通常Ｂ細胞の活性化および 調節に関与する。

ヘルパーＴ細胞は抗原提供細胞によるプロセフシング後第１メフセージがＢ細胞 により、通常それに与えられる活性化免疫原（抗原）剤から受取られた後、免疫 グロブリン分泌Ｂ細胞の活性化および分化を援助することが知られている。しか し、Ｔ細胞がＢ細胞の活性化および分化に対する援助を与える方式は論争問題で ある。

動物細胞により示される免疫応答は人為的な抑圧（免疫抑制）または増強（免疫 強化）により修飾することができる。人為的に誘導する免疫抑制は６つの一般的 方法：（１）抑圧用量の抗原の投与、（２）特異的抗血清または抗体の投与、（ ３）他の生物学的試薬例えば抗リンパ球抗血清の使用、（４）薬物またはホルモ ンの使用、（５）放射線、および（６）リンパ系組織の外科除去、により達成す ることができる。

免疫強化は［１１免疫応答を生ずる速度の増大、（２）応答の強さまたは水準の 増大、（３）応答の遷延、または（４）他の非免疫原物質に対する応答の発生に 影響を与える薬剤の投与により達成することができる。

免疫応答を増強することが知られた薬剤は一般にアジュバントと称され、２つの 一般的範Ｑ：１ｌ−ｆＱ的強化を与えるもの、すなわち広範な抗原に対する細胞 および（または）体液応答を増強する物質、および（２）特異的強化を与えるも の、すなわち単に一定抗原に対する特異的応答を増強する物質、に入れることが できる。

アジュバントとして作用できる物質は次の範Ｑ：（１１水および油性乳濁液例え ばフロインドアジュバント、（２）合成ポリヌクレオチドおよび他のポリアニオ ン、（３）ホルモン、薬物および環状ヌクレオチド、（４）微生物生成物例えば 内毒素、（５）リンフ才力インおよびモノカイン例えばインターロイキン、およ び（６）合成ペプチド例えばベスタチンおよびタフトシン、に入れることができ る。

免疫反応を特異的に強化できる物質は伝達因子、ヒト末梢白血球から得られる透 析性白血球抽出物（Ｄ　Ｌ　Ｅ）である。伝達因子が、免疫不全を存する患者に おける若干の有効性、並びに癌患者および限定免疫不全を有する患者における可 能な有効性を示すこそれについて学ぶべきことが多く残っている。

若干の疾患および生理的状態例えばＸ染色体結合ガンマグロブ°リン″欠乏血症 、老化および薬物誘導免疫抑制にはＢ細胞活性化および分化が存在しないかまた は単に低水準で存在し、それにより宿主の免疫応答能力が低下する。これらの疾 患および状態は代表的な免疫抑制状態である。これに関して、増強されたＢ細胞 活性化および分化を行なうことができれば、疾患として表われることができる免 疫欠損が有益に軽減され、および（または）患者の状態が改良される傾向がある 。

免疫強化状態は予防接種後の身体状態により例示することができる。これに関し て、免疫応答は初めにワクチンの免疫原に対する一次応答に基いて増強され、通 常免疫の度合の改良および（または）接続を与えるために後に投与される免疫原 またはワクチンのブースター注入により一層有益に高めることができる。

リンフ才力インおよびモノカインはそれぞれリンパ球および単球マクロファージ 系の細胞により生成される免疫強化タンパク質である。モノカインの１つ、イン ターロイキン１はマクロファージにより、それがマイトジェンまたは抗原により 刺激されたときに生成される。インターロイキン１は通常−次抗原応答の生成に 必要である。

インターロイキン１はＴ１１ｌ胞によるインターロイキン２の生成を援助する。

インターロイキン２はＴ細胞に対する増殖因子であり、ヘルパーＴ細胞の形質転 換を援助する。従って、インターロイキ・ン１の生成またはインターロイキン１ により生成されるものに類似するＴ細胞上のタンパク質応答活性の誘導は、殊に マクロファージが存在しない場合またはそのモノカインの生成が不十分な場合に 免疫応答の増強に有益であろう。

共通に譲渡されたグツトマンはか（ＧｏｏｄＩＩｌａｎ　ａｎｄ　Ｗｅｉｇｌｅ ）に対する米国特許第４．５３９，２０５号にはアルドース鎖（環）中に５個ま たは６個の炭素原子を有するアルドースに９−１′結合した８−置換グアニジン 誘導体による動物細胞応答の変調が記載されている。その特許に記載された細胞 変調は主に免疫修飾例えば−次および二次免疫応答の生成におけるアジュバント 活性に関する。一定腫瘍状態に対する活性もまたＴ細胞置換活性、胸腺細胞上の ＩＬ−１ｍ活性、および好中球からのリゾソーム酵素の放出の誘導であるとして 開示される。これらの分子中の８−置換基は水素に比較して電子吸引性誘起効果 を有する。従って、ハロ、メルカプトまたはそのチオキソ互変異性体、アシルメ ルカプト、アルキルスルフィド、ニトロ、シアノ、ケト、ハロメチルおよびメチ レンオキシアルキルなどが有用であると開示されたが、電子供与性置換基例えば アミノ基は不活性であると認められた。

さらに、共通に譲渡された同時係属米国特許出願第５４６．６７９号およびその 相応する公表欧州特許出願第８３，３０５，７９１．１号にはさらに８−ヒドロ キシグアニン（８−オキソグアニン）、７−メチル−８−オキソグアニンおよび ７−メチル−８−チオキソ−グアニンの誘導体の動物細胞応答の変調における使 用が開示されている。

米国特許第４．５３９．２０５号に開示されたグアニン誘導体を用いた他の結果 もまた、該出願に初めに開示されたグアニン誘導体を用いた結果に類似するとし て開示されている。

フレイプラー（Ｐｆｌｅｉｄｅｒｅｒ）に対する米国特許出願第３．７９８．２ １０号にはイソキサントプテリン誘導体を含め、８−（１’グルコシジル）プテ リジン類の合成が開示されている。該特許は特定病原体例えばマラリアおよび結 核菌、病原真菌、ガンマ陽性およびガンマ陰性菌に対する、並びに主にウィルス 例えばヘルペスウィルスおよびインフルエンザウィルスに対する活性医薬品とし てのその化合物の使用を教示する。フレイプラー（Ｐｆｌｅｉｄｅｒｅｒ）の特 許の化合物の若干はまたここに有用であるがフレイプラー　（Ｐｆｌｅｉｄｅｒ ｅｒ）に教示されたような抗生物質としてではない。この使用が以下に記載され る。

発明の概要 動物細胞を、イソキサントプテリン誘導体である活性成分の有効量と混合した希 釈量の生理的に耐えられる担体を含む組成物に接触させることにより動物細胞応 答が変調される。インキサントプテリン誘導体の構造は式： Ｒ１は水素、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、ポリヒドロキシ低級アル キル、フェニル、フェニル−低級アルキル、低級アルキルフェニル、低級アルコ キシフェニル、ハロフェニル、トリフルオロメチルフェニル、ヒドロキシ、オキ ソ（Ｏ＃）、低級アルコキシ、フェニル−低級アルコキシ、ハロ、メルカプチオ 、フェニル−低級アルキルチオ、低級アルカノイル（低級アシル）、カルボキシ 、低級アルコキシカルボニル、低級アルキルカルボキシ、低級アルキレン低級ア ルキルカルボキシラード、低級アルコキシ低級アルキルカルボニル、並びにカル ボキサミドおよび低級アルキルカルボキサミド〔ただし、カルボキサミド基は式 、ＣＯＮＲ３Ｒ４（式中、Ｒ３およびＲ，は同一であるかまたは異なり、水素お よび低級アルキルからなる群から選ばれ、あるいはＮＲ：＋Ｒ４は一緒に、環中 に５個または６個の原子を有する複素環を形成する）を有する〕からなる群から 選ばれる基であり、 Ｒ２は１′−アルドペントシジル、１′−アルドヘキソシジル、モノ脱酸素１′ −アルドペントシジルおよびモノ脱酸素１′−アルドヘキソシジル、並びにそれ らの〇−置換低級アルキル、低級アルカノイル、ベンジルおよびベンゾイル誘導 体（ただし、〇−置換基は、１酸素上に存在すれば全利用可能環置換基酸素上に 存在する）からなる群から選ばれるβ−結合アルドグリコシド基である〕 のイソキサントプテリン誘導体、 イソキサントプテリン誘導体の製剤に許容される塩、および、イソキサントプテ リン誘導体の互変異性体、の構造に適合する。

細胞と組成物との間の接触は、接触した細胞の応答の変調に十分な時間維持され る。

免疫原の存在下に高い抗体分泌を与えるアジュバント活性を生ずる免疫原（抗原 ）特異的体液免疫応答の増強は本発明により変調できる動物細胞応答の特定の例 である。用いた種々の文法形態における「変調」という語は試験管内および（ま たは）生体内の動物細胞応答の増強並びに抑制を示す。

本発明の細胞応答変調組成物を用いて、とりわけ投与の方法、用量および投与さ れる細胞集団により、関連するけれども異なる結果を誘導することができる。活 性成分のイソキサントプテリン誘導体は固体イソキサントプテリン誘導体の固体 または液体担体中の悲濁体として、あるいは担体中に溶解した溶質として担体中 に混合された組成物中に存在することができる。

白血球例えば８９７８球と本発明の化合物とを接触させてその接触を予定時間維 持するとこれらの白血球の免疫応答が変調される。８９７８球（Ｂ細胞）応答の 変調はＢ細胞を有効量の免疫原で処理して免疫原感作Ｂ細胞を形成させ、次いで Ｂ細胞を免疫応答変調組成物およびさらに有効量の免疫原と接触させることによ り行なうことができる。Ｂ細胞免疫応答はまたＢ細胞を感作免疫原および本発明 の免疫応答変調組成物と接触させ、その後免疫原感作細胞をさらに有効量の免疫 原のみ、またはさらに免疫応答変調組成物と接触させることにより変調すること ができる。さらに、免疫応答変調組成物を投与して動物細胞に接触させ、その後 イソキサントプテリン誘導体が動物細胞に接触している間に、すなわち生体内ま たは試験管内に１種またはそれ以上の免疫処置用量の免疫原を与えることができ る。これらの細胞応答変調はアジュバント活性として示す効果内にあり、すなわ ちイソキサントプテリン誘導体が免疫原に対するアジュバントとして作用し、従 って免疫原または抗原特異性変調を与える。

本発明の方法は生体内および試験管内で細胞に用いることができる８組成物は液 体形態で皮下、静脈内、腹腔内に、あるいは乳剤またはカプセル形態で、あるい はスラリー、悲濁液または溶液として液体形態で経口的に投与することができる 。

本発明は若干の利益および利点を有する。

本発明の利益の１つはその使用が一次感作（免疫原）メツセージに対する応答に おける８９７８球活性化および分化に必要な「２次メツセージ」を与えることが できることである。

本発明の利点は前記動物細胞の接触がこれらの細胞の活性化おン（抗体）の分泌 、マクロファージからのモノカイン分泌、およびＴ細胞からのリンフ才力イン分 泌の場合のように、タンパク質生成の誘導を生ずることができることである。

本発明の他の利点は増強した免疫応答をＴヘルパー細胞活性の存在下および存在 しないときにともに行なうことができることである。従って、増強免疫応答はＴ 細胞依存およびＴ細胞非依存性系の両方に認められ、宿主白血球がＴヘルパー細 胞機能を失なりで免疫弱化しているとき、並びに正常Ｔヘルパー機能を有する白 血球において本発明を有用にする。

本発明のなお他の利益および利点は以下の詳細な説明から当業者に明らかになろ う。

発明の詳細な説明 Ａ、インキサントプテリン−８−アルドグリコシド類２−アミノ−４−ヒドロキ シプテリジンおよびその誘導体はそれぞれプテリンおよびその誘導体として知ら れている。プロトトロピー的に活性なプテリン類は通常２−アミノプテリン−４ −オンおよびその誘導体としてその最も支持される互変異性体式゛で表わされる 、フレイプラー（Ｐｆｌｅｉｄｅｒｅｒ）、ｒコンプリヘンシブ・ヘテロサイク リック・ケミストリー（Ｃｏ＋＊ｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌ ｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ　）　Ｊ　、３巻２Ｂ部、カドリフキーほか（Ｋａｔｒ ｉｔｚｋｙ　ａｎｄＲｅｅｓ）　＆ｌｉｆ、バーガモン０ブレス（Ｐｅｒｇａｍ ｏｎ　Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　）　％（１９８４）、６３〜３２７頁中 の２．１６章。

２−アミノ−４，７−シヒドロキシブテリデンおよびその互変異性体２−アミノ プテリン−４，７−ジオンはイソキサントプテリンとして知られている。イソキ サントプテリンに対するより正確な化学名は２−アミノ−３，４，７，８−テト ラヒドロ−４゜７−シオキソプテリジンである。有用な化合物は一般にイソキサ ントプテリンおよびその誘導体として示される。これらの有用なイソキサントプ テリン誘導体はすべてプテリジン環系の８−位置に置換基としてアルドグリコシ ド（Ｉｉアルデヒド）を有し、また６−位置に水素以外の置換基を含むことがで きる。

テリンおよび６−１換イソキサントプテリン自体は公知反応により容易に製造さ れる。１反応図式において、２．５．６−）リアミノ−４−ヒドロキシピリミジ ンを、カルボキシ基にβの置換基がこの構造式中のＲ１基を形成するα−ケト酸 と反応させる。バースト（Ｂｕｒｓｔ　）、「ピリミジン、プリンおよびプテリ ジンの化学および生化学概論（Ａｎ　Ｉｎｔｙｏｄｕｃｔｉｏｎ　Ｔｏ　Ｔｈｅ 　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ＡｎｄＢｉｏｃｈｅａ＋１ｓｔｒｙ　Ｏｆ　Ｐｙｒｉｍ ｉｄｉｎｅｓ、Ｐｕｒｉｎｅｓ　Ａｎｄ　Ｐｔｅｒｉｄｉｎｅｓ）　Ｊ　％ジョ ン・ワイリー・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｅｓ、Ｎｅ ｗＹｏｒｋ）　、８６〜１０３頁（１９８０）およびその引用文献参照。

他の反応図式において、上記ピリミジンをアセチレンジカルボン酸のジ低級アル キルエステルと反応させて６−位置に低級アルキルカルボン酸およびその低級ア ルキルエステルを形成させる、イワナミ（Ｉｗａｎａ＋ａｉ　）　、ビュレチン ・牙ブ・ザ・ケミカル・ソサイエティー・オブ・ジャパン（Ｂｕｌｌ、Ｃｈｅｍ 、Ｓｏｃ、Ｊａｐａｎ　）　ｓ　４４　：１３１４　（１９７１）。なお他の化 合物および反応図式はフレイプラー（Ｐｆｌｅｉｄｅｒｅｒ）、ｒコンプリヘン シブ・ヘテロサイクリック・ケミストリー（Ｃｏｏ＋ｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　Ｈ ｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）　Ｊ、前掲、２．１６章に論議 されている。

有用なインキサントプテリン８−アルドグリコシド誘導体は、好ましくはイソキ サントプテリンまたはその６−置換イソキサントプテリン誘導体から製造され、 その後それにアルドグリコシド基が米国特許第３，７９８，２１０　％に記載さ れたフレイダ−（Ｐｆｌｅｉｄｅｒ）の方法により付加される、前記特許の開示 は参照により加入される。他の製造方法、例えばロールマンはか（Ｌｏｈｒｍａ ｎｎ　ａｎｄＦｏｒｒｅａｔ　）　％ジャーナル・オブ・ケミカル・ソサイエテ ィー（Ｊ。

Ｃｈｅａ＋、Ｓｏｃ、）、４６０〜４６５　（１°９６５）により記載された２ −アミノ−３，４−ジヒドロ−５−ニトロ−４−オキソ−６−アミラグリシジル −ピリミジンの環化もまた有用である。

簡単に述べると、フレイダ−（Ｐｆｌｅｉｄｅｒ　）法によれば適当に置換され たイソキサントプテリンを周期系の第■主族、第■〜第Ｖ周期の四価金属で７− 位置に〇−金属化する。そのように調製した〇−金属化化合物を、１′−位置と ヒドロキシル基自体が反応性エステル例えば酢酸のような低級カルボン酸のエス テルとして、またはエーテル例えばメチルエーテルのような低級アルキルエーテ ルとして誘導体化されているアルドグリコシドと反応させる。

１′−位置にヒドロキシルはまたフレイダ−（Ｐｆｌｅｉｄｅｒ）およびその共 同研究者によりヘミフシェ・ベリヒテ（Ｃｈｅｍ、Ｂｅｒ、）、皿、３１７〜３ ３１　（１９７３）；ヘミッシェ・ベリヒテ（Ｃｈｅｍ、Ｂｅｒ、）、１０６． １９５２〜１９７５　（１９７３）；およびヘミ７シエ・ベリヒテ（Ｃｈｅｍ、 Ｂｅｒ、）　、１０７．３３９〜３６１　（１９７４）に教示されたようにハロ 基例えばプロミドにより置換することができる。

四価のゲルマニウム、スズ、殊にケイ素は好ましい〇−金属化剤である。殊に好 ましい金属化剤はへキサメチルジシラザンである。

強酸触媒例えば硫酸のような無機酸が、好ましくは０−メチル化剤例えばヘキサ メチルジシラザンとともに使用される。ヘキサメチルジシラザンは好ましくは過 剰に、水の存在なく、好ましくは空気よりも窒素またはアルゴンの存在下に使用 される。

？−０−金属化イツキサントプテリンはその後、典型的には捕集され、不活性溶 媒例えば乾燥ベンゼン中で、１′−位置以外のヒドロキシル基が例えばベンゾイ ルまたはアセチル基により保護されたアルドグリコシドと反応させる。選んだア ルドグリコシドの１′−位置は前記のように保護される。

グリコシド化反応は好ましくは第二水銀塩例えばハロゲン化第二水銀、あるいは アルドグリコシジル１′−エーテルまたは１′−エステルを用いる場合にハロゲ ン化第二水銀の混合物の存在下に行なわれる。高温例えば１気圧の圧力でベンゼ ンを還流させる温度がアルドグリコジル化反応（糖とイソキサントプテリンとの 縮合）に使用される。

水銀塩を用いた場合これを反応が終った後反応媒質から濾過し、インキサントプ テリン−８−（ヒドロキシ保護アルドグリコシド）誘導体を、例えばカラムクロ マトグラフィーにより回収する。ヒドロキシ保護基例えばベンゾイルまたはアセ チルは、その後標準操作例えばナトリウムメトキシド−メタノール中の反応、次 いで中和により除去する。その後所望のイソキサントプテリン−８−（１′−ア ルドグリコシド）誘導体を捕集し、例えば結晶化により精製する。

有用なイソキサントプテリン誘導体は式：Ｒ，は水素、低級アルキル、ヒドロキ シ低級アルキル、ポリヒドロキシ低級アルキル、フェニル、フェニル−低級アル キル、低級アルキルフェニル、低級アルコキシフェニル、ハロフェニル、トリフ ルオロメチルフェニル、ヒドロキシ、オキソ（０−）、低級アルコキシ、フェニ ル−低級アルコキシ、ハロ、メルカプト、チオキソ（Ｓ＝）、低級アルキルチオ 、低級アルキロイルチオ、フェニル−低級アルキルチオ、低級アルカノイル（低 級アシル）、カルボキシ、低級アルキルアルコキシカルボニル、低級アルキルカ ルボキシ、低級アルキレン低級アルキルカルボキシラード、低級アルコキシ低級 カルボニル、並びにカルボキサミドおよび低級アルキルカルボキサミド〔ただし 、カルボキサミド基は式、Ｃ０ＮＲ，Ｒ，（式中、Ｒ３およびＲ４は同一である かまたは異なり、水素および低級アルキルからなる群から選ばれ、あるいはＮＲ ２Ｒ４は一緒に、環中に５個または６個の原子を有する複素環を形成する）を有 する〕からなる群から選ばれる基であり、 Ｒ２は１′−アルドグリコシジル、１′−アルドヘキソシジル、モノ脱酸素１′ −アルドグリコシジルおよびモノ脱酸素１′−アルドヘキソシジル、並びにそれ らの〇−置換低級アルキル、低級アルカノイル、ベンジルおよびベンゾイル誘導 体（ただし、−〇−置換基ば１酸素上に存在すれば全利用可能環置換基酸素上に 存在する）からなる群から選ばれるβ−結合アルドグリコシド基である〕 インキサントプテリン誘導体の製剤に許容される塩、および、イソキサントプテ リン誘導体の互変異性体、に相当する構造を有する。

「低級」として示した基およびラジカルはそれらが１〜約６個の炭素原子、好ま しくは１〜約３個の炭素原子を有することを示す。

低級アルキル基には例えばメチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ｎ　−ブ チル、ｓ　７’チル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、２−メチル−３−ブチル、１ −メチルブチル、２−メチルブチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、ｌ−メチル ペンチル、３−メチルペンチル、１−エチルブチル、２−エチルブチル、２−ヘ キシル、３−ヘキシルなどが含まれる。

ヒドロキシ低級アルキル基にはヒドロキシメチル、２−ヒドロキシエチル、２− ヒドロキシプロピル、３−ヒドロキシプロピル、３−ヒドロキシ−２−ブチル、 ３−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロピル、６−ヒドロキシヘキシルなどが含 まれる。

ポリヒドロキシ低級アルキル基には１．２−ジヒドロキシエチル、１．２．３− ）ジヒドロキシプロピル、２．３−ジヒドロキシプロピル、３，４−ジヒドロキ シブチルなどが含まれる。当業者は意図ポリオール類が単に１個のヒドロキシ基 を低級アルキル基の各炭素原子上に含むことを理解するで艷ろう。

フェニル低級アルキル基には、基のアルキル部分がインキサントプテリン８−ア ルドグリコシドの６−位置に結合する上記フェニル置換低級アルキル基が含まれ る。該基の適例にはベンジル、フェネチル、２−フェニルプロピル、２−フェニ ル−３−メチルペンチルなどが含まれる。

低級アルキルフェニル基は、イソキサントプテリン８−アルドグリコシドの６− 位置に結合するフェニル基上を前記低級アルキル基で置換された基である。その ような低級アルキルフェニル基の適例は０−キシリル、ｐ−（２−ヘキシル）フ ェニル、ｍ−（Ｉ−プロピル）フェニルなどである。イソキサントプテリンの６ −位置に対する結合位置に対してオルト、メタまたはバラ置換したトリフルオロ メチルフェニルは低級アルキルフェニル基のサブクラスを構成する。

低級アルコキシフェニル基は、低級アルキル基が前記のとおりであるオルト、メ タまたはパラ−イソキサントプテリン置換フェノールの低級アルキルエーテルと みなすことができる。低級アルコキシフェニル基の通例にはＯ−メトキシフェニ ル、ｍ−（ｓ−ブトキシ）フェニル、およびｐ−（２−エチルブトキシ）フェニ ルが含まれる。

へロフェニル基にはハロゲンが好ましくはフルオロ、クロロおよびブロモであり 、またヨードを含むハロゲン置換フェニル基が使用される。該基の通例には０− クロロフェニル、ｐ−フルオロフェニル、およびｍ−ブロモフェニルが含まれる 。

ヒドロキシおよびメルカプト基はまたその互変異性体の形成のためにそれぞれオ キソおよびチオキソ基として示される。

低級アルコキシ基は６−ヒトロキシイソキサントプテリンと前記低級アルキル基 とから形成されたエーテルとみなすことができる。咳基の適例にはメトキシ、エ トキシ、プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブトキシなどが含まれる。フェニル 低級アルコキシ基は同様に６−ヒトロキシイソキサントプテリンと前記フェニル 低級アルキル基とから形成されたエーテルとみなすことができる。

これらの物質の適例はベンジルオキシ、２−フェニルエトキシ、２−フェニルエ トキシなどである。

ハロ基には好ましくはクロロ、ブロモ、並びにフルオロおよびヨードが含まれる 。

低級アルキルチオおよびフェニル−低級アルキルチオ基はフルフィトエーテルで あり、従って前記酸素エーテル、例えばそれぞれ低級アルコキシおよびフェニル −低級アルコキシ基に類似する。

カルボキシ基はインキサントプテリン８−アルドグリコシドの６−位置に結合し たカルボン酸（−ＣＯ２Ｈ）である。低級アルコキシカルボニル基は、アルコー ルの低級アルキル部分が前記のような低級アルキル基である低級アルキルアルコ ールで形成された６−カルボキシイソキサントプテリンのエステルとみなすこと ができる。エステルの適例にはエチル、メチル、ｔ−ブチル、ネオペンチル−カ ルボキシラードなどである。これらのエステルはまたそれぞれエトキシカルボニ ル、メトキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニルおよびネオペントキシカルボ ニルと称することができる。

低級アルキルカルボキシ基はさらにカルボキシ基を含む前記低級アルキル基であ る。低級アルコキシ低級アルキルカルボニル基はすぐ前に定義した置換低級アル キルカルボキシ基と低級アルキルアルキルアルコールとのエステルとみなすこと ができる。低級アルキルカルボキシ基の適例にはカルボキシメチル、２−カルボ キシエチル、２−カルボキシヘキシルなどが含まれる。低級アルコキシ低級アル キルカルボニル基の適例には３−イソプロポキシカルボニルプロビル、４−へキ シルオキシカルボニルペンチルなどが含まれる。

カルボキサミドおよび低級アルキルカルボキサミド基はそれぞれカルボキシまた は低級アルキルカルボキシ置換基とアミンとから形成されたとみなすことができ る。カルボキサミド基は式、Ｃ０ＮＩ？１Ｒ４（式中、Ｒ１およびＲ４は同一で あるかまたは異なり、水素および低級アルキルからなる基から選ばれる。あるい はＮＲ，Ｒ，は−緒に環中に５個または６個の原子を有する複素環を形成するこ とができる）を有する。有用なアミンの適例はメチルアミン、プロピルアミン、 Ｓ−ブチルアミン、ヘキシルアミン、ジメチルアミン、メチルエチルアミン、ブ チルヘキシルアミン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ビロールおよび４ −メチルビペラジンが含まれる。非置換カルボキシアミド（式中、Ｒ５およびＲ ４が水素である）はアミンとしてアンモニアから形成される。

また低級アシル基として知られる低級アルカノイル基置換基はイソキサントプテ リン環の６−位置に直接結合したカルボニル基を含み、それにより化合物を適当 にケトンまたはアルデヒドにする。低級アルカノイル基の適例にはホルミル、ア セチル、ピロピオニル、２−メチルピロピオニル、ブチリル、３−メチルバレリ ルなどが含まれる。基のアシル炭化水素は「低級」アルカノイルまたはアシル基 の一部分として考えられる。

低級アルキロイルチオまたは低級アシルチオ基はイソキサントプテリン誘導体の 適当な６−メルカプト置換基と低級アルキル力そのような基の通例はチオアセチ ル、チオプロピオニル、チオヘキサノイルなどである。

低級アルキレン低級アルキルカルボキシラード基は置換基ヒドロキシ低級アルキ ル基と低級アルキルカルボン酸とのエステルとみなすことができる。ヒドロキシ 低級アルキル置換基の適例は、そのようなエステル中に存在できる低級アルキル カルボン酸の低級アルカノイル（低級アシル）部分を有するとして前に論議した 。

インキサントプテリン８−アルドグリコシド類は弱塩基であり、従って酸付加塩 を形成することができる。イソキサントプテリン誘導体の製剤に許容される非毒 性酸付加塩は有用であり、イソキサントプテリン８−アルドグリコシドを適当な 酸で処理することにより形成することができる。無機酸の適例には塩酸、臭化水 素酸、硫酸、リン酸などの酸が含まれる。有機酸の適例には酢酸、プロピオン酸 、グリコール酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リ ンゴ酸、酒石酸、クエン酸゛、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホ ン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホンＭ、ｐ−）ルエンスルホン酸、サリ チル酸、ｐ−アミノサリチル酸などの酸が含まれる。逆に、酸付加塩形態はアル カリによる処理により遊離塩基形態に転化することができる。

有用なイソキサントプテリン誘導体はまた、既に記載したように６−置換カルボ ン酸および低級アルキル置換カルボン酸を含む。

これらのカルボン酸の塩基塩もまた意図され、カルボン酸を適当なアルカリ試薬 で処理することにより形成され、６−インキサントプテリン８−アルドグリコシ ドカルボキシラートカチオン塩を形成する。そのようなカルボン酸の非毒性カチ オン塩の適例にはナトリウム、カリウム、亜鉛、アルミニウム、カルシウム、マ グネシウムなどが含まれる。

有用なインキサントプテリン誘導体の８−アルドグリコシド部分（Ｒ２）は環状 であり、５個または６個の炭素原子を含み、１′−アルドペントシジル、１′− アルドヘキソシジル、モノ脱酸素１′−アルドベントシジル、およびモノ脱酸素 １′−アルドヘキソシジル基からなる群から選ばれる。

１′−アルドグリコシジル基の適例にはリボース、アラビノース、リキソースお よびキシロースの１′−基であり、それらはそれぞれ１′−リボフラッジジル、 １′−アラビノフラッジジル、１′−リキソフラッジジル、および１′−キシロ フラッジジル基と称される。１′−アルドヘキソシジル基の適例にはグルコース 、ガラクトース、マンノース、グロース、アロース、アルドロース、およびラム ノースの１′−基であり、それらはそれぞれ１′−グルコピラノシジル、１′− ガラクトピラノシジル、１′−マンノピラノシジル、１′−グリピラノシジル、 １′−アロピラノシジル、１′−アルトロピラノシジル　ｌ　Ｉ−ラムノピラノ シジル基と称される。モノ脱酸素１′−アルドグリコシジル基の適例は１’−（ ２’−デオキシ）リボフラッジジル基と称されるデオキシリボースの基である。

モノ脱酸素１′−アルドヘキソシジル基の通例は１’−（２’−デオキシ）グリ ピラノシジル基と称されるデオキシグルコースの基である。

有用なアルドグリコシジル基は低級アルカノイル基例えばホルミル、アセチル、 プロピオニルまたはヘキサノイルにより、またベンゾイル基によりエステル化さ れた１個またはそれ以上のヒドロキシル基を有することができる６、アルドグリ コシジル基はまた低級アルキル、殊にメチルおよびエチル基によりエーテル化し たときに有用であるが、ベンジルエーテルもまた有用である。

適当なアルドグリコシジル基は式： ％式％ Ｒ１は水素、ヒドロキシ、低級アルコキシ例えばメトキシおよびエトキシ（並び に前に記載した他のもの）、ベンジルオキシ、低級アルカノイルオキシ例えばホ ルミルオキシ、アセトキシ（および前に記載した他の低級アルキルカルボキシラ ード基）またはベンゾキシであり、 存在すればＲ＆、並びにＲ１およびＲ１はすべて同一である。

これらの基はヒドロキシ、低級アルキルエーテル（低級アルコキシ）例えばメト キシおよびエトキシ、ベンジルエーテル（ベンジルオキシ）、低級アルカノイル 基（低級アシル）例えばホルミルオキシ、アセトキシ、またはベンゾアートエス テル（ベンゾキシ）であることができる、Ｒ２が水素以外であるとき、Ｒｓ　” Ｒｂ　（存在すれば）＝Ｒｔ　＝Ｒａである。従って、〇−置換基は、１個の酸 素上に存在すると、すべての利用できる環置換基酸素上に存在する〕 に適合する。

上記式の結合はβ−アノマーを示す１′−位置を除いて特定の立体特異性配置を 表わす意図ではない。

好ましい実施においてアルドグリコシジル基は１′−リボフラッジジル、１′− グリコピラノシジル、および１’−（２’−デオキシ）リボフラッジジル基から なる群から選ばれる。従って好ましくけ、ｎがＯであり、Ｒ５５ＲｔおよびＲ８ がすべてヒドロキシであり、Ｒ６が存在しないときにアルドグリコシジル基は１ ′−リボフラッジジルからなる群から選ばれ；ｎが０であり、ＲＳが水素であり 、Ｒ７およびＲ，がヒドロキシルであり、Ｒ，が存在しないときにアルドグリコ シジル基は２′−デオキシ−１′−リボフラッジジルであり；ｎが１であり、Ｒ ，＝Ｒ，＝Ｒ？　”Ｒ１＝ｍヒドロキシルであるときに１′−グリコピラノシジ ルはアルドグリコシジル基である。

既に記載したように、アルドグリコシドはその１′−位置がらイソキサントプテ リン誘導体の８＝位置に結合する。イソキサントプテリン誘導体として示すとき 、その結合は８−１′結合として記載することができる。アルドグリコシドのβ アノマーが好ましいが、しかしαおよびβアノマーの混合物もまた有用である。

使用されるアルドグリコシドはＤ立体配置であり、配置が記載されない場合にそ の配置が意味される。

本発明の方法にを用なイソキサントプテリン誘導体の適例の構造式が次に示され 、式中のＲ１およびＲ２は構造式の次の表に示されるとりである。

Ｒ，Ｒ。

メチル　１′−アラビノフラッジジル ミープロピル　１′−リキソフラッジジルｎ　−７”チル　１′−リボフラッジ ジルネオペンチル　１′−キシロフラッジジルｎ−ヘキシル　１′−グロピラノ シジルベンジル　１′−ガラクトピラノシジルフェネチル　１′−マンノピラノ シジル　′Ｏ−キシリル　１　’−（２’、３’、５’−）ソー０−アセチル） アラビノフラッジジル ｐ−（２−ヘキシル）　１’−（２’−デオキシ−３’、５’フエニル　−ジー 〇−メチル）リボフラッジジルｐ−（トリフルオロ　１’−（２’、３’、５’ −トリーＯメチル）フェニル　−ベンジル）リボフラッジジルｐ−（２−エチル ブト　１’−（２’−デオキシ−３’、５’キシ）フェニル　−ジー０−メチル ）リボフラッジジル０−クロロフェニル　１′−グロピラノシジルｍ−ブロモフ ェニル　１′−アロピラノシジルｐ−フルオロフェニル　１′−アルトロピラノ シジルヒドロキシ　１′−ラムノピラノシジルメルカプト　１′−ガラクトピラ ノシジルメトキシ　１′−グルコピラノシジル ミープロポキシ　１′−キシロフラッジジルベンゾキシ　１′−リボフラッジジ ル ２−フェニルエトキシ　１′−リキソフラッジジルクロロ　１′−グルコピラノ シジル フルオロ　１′−リボフラッジジル ヨード　ｌ′−リボフラッジジル エチルスルフィド　１′−グルコピラノシジルベンジルスルフィド　１′−アラ ビノフラッジジルカルボキシ　１′−リキソフラッジジルカルボメトキシ　１′ −リボフラッジジルカルボ−ｔ−ブトキシ　１′−キシロフラッジジルネオベン トキシカルボ　１′−グルコピラノシジルニル ２−カルボキシエチル　１′−ガラクトピラノシジル４−カルボキシブチル　１ ′−マンノピラノシジル殊に好ましいイソキサントプテリン８−アルドグリコシ ドは、６−位置に結合した水素、ヒドロキシ、低級アルキル例えばメチル、カル ボキシ、および低級アルキルカルボキシラード例えばエチルカルボキシラードま たはメチルカルボキシラード（エトキシカルボニルまたはメトキシカルボニル） 、並びにポリヒドロキシ低級アルキルを有し、その分子の８−アルドグリコシド 部分がβ−１′−リボフラッジジル、β−１’−（２’−デオキシ）リボフラッ ジジル、およびβ−１′−グルコピラノシジルであるものである。そのような殊 に好ましい物質の適例は次のものである＝８−（１’−β−Ｄ−リボフラッジジ ル）イソキサントプテリン、 ８−（１’−β−Ｄ−２′−デオキシリボフラノシジル）イソキサントプテリン 、 ８−（１’−β−Ｄ−グルコピラノシジル）インキサントプテリン、 ６−ヒドロキシ−８−（１’−β−Ｄ−リポフラッジジル）インキサントプテリ ン、 ６−ヒドロキシ−８−（１’−β−Ｄ−２′−デオキシリボフラノシジル）イソ キサントプテリン、 ６−ヒドロキシ−８−（１’−β−Ｄ−グルコピラノシジル）インキサントプテ リン、 ６−メチル−８−（１’〜β−Ｄ−リボフラッジジル）イソキサントプテリン、 ６−メチル−８−（１’−β−Ｄ−グルコピラノシジル）イソキサントプテリン 、 ６−メチル−８−（１’−β−Ｄ−２′−デオキシリボフラノシジル）イソキサ ントプテリン、 ６−カルポキシー８−（１’−β−Ｄ−リボフラッジジル）イソキサントプテリ ン、 ６−カルボキシ−８−（１’−β−Ｄ−グルコピラノシジル）イソキサントプテ リン、 ６−カルボキシ−８−（１’−β−Ｄ−２′−デオキシリボフラノシジル）イソ キサントプテリン、 ６−メドキシカルボニルー８−（１’−β−Ｄ−リボフラッジジル）インキサン トプテリン、 ６−メドキシカルポニルー８−（１’−β−Ｄ−２′−デオキシリポフラノシジ ル）イソキサントプテリン、および６−メドキシカルボニルー８−（１’−β− Ｄ−グルコピラノシジル）イソキサントプテリン。

本発明の方法に有用な最も好ましいインキサントプテリン誘導体はＲ１が１’− Ｄ−リボフラッジジル基であり、Ｒ，が水素、メチルおよびカルボキシからなる 群から選ばれる化合物である。

これらの化合物は式： （式中、Ｒ１は水素、メチルおよびカルボキシからなる群から選ばれる） に適合する構造を有する。

Ｂ０組成物の接触 本発明に用いる活性成分インキサントプテリン誘導体は試験管内で培養中に、あ るいは生体内で慣用投薬単位の組成物で、すなわち有効投薬単位のイソキサント プテリン誘導体と混合した生理的に耐えられる担体を含む単位投薬形態における 組成物として経口または非経口的に動物に投与することにより、応答を変調しよ うとする動物細胞に接触させる。

用いた「単位用量」およびその文法的に等しい語はヒト患者および他の温血動物 に対する単一投薬として適する物理的に分離された単位を示し、各単位は必要な 生理的に耐えられる担体例えば希釈剤またはビヒクルに関連して所望の治療効果 を生ずるように計算した予定量の活性成分を含む０本発明の新規な単位投薬形態 に対する仕様は（ａｌ活性イソキサントプテリン誘導体成分および達成すべき個 々の治療効果、並びに〜）試験管内並びにヒトおよび他の動物の生体内で治療に 用いるそのような活性成分を配合する技術に固有の制限により指令され、それに 直接依存する。

本発明よる適当な単位投薬形態の例は錠剤、カプセル、火剤、粉末パケット、顆 粒、カシェ剤など、前記のいずれかの分離マルチプル、並びに液体溶液、乳濁液 および懸濁液である。液体組成物は常法例えば皮下、腹腔内、筋肉内、経口など で投与することができる。

生体内に投与される活性成分の量は患者の年令および体重、治療すべき個々の状 態、投与の頻度、並びに投与の経路による。用量範囲は約０．０１〜約２００ミ リグラム毎キログラム体重、より好ましくは約０．１〜約２５ミリグラム毎キロ グラム体重、最も好ましくは約１〜約ｌＯミリグラム毎キログラム体重であるこ とができる。ヒト成人用量は約５〜約１４００ミリグラム毎日の範囲で、１回量 または３〜４分割景として与えられる。獣医学投薬はヒト投薬に相応し、投与量 は成人ヒトに比較した動物の体重および代謝速度に比例する。

動物細胞の試験管内接触のための濃度は約２〜５Ｘ１０６細胞毎ミリリフドルの 細胞濃度に対し約ｌＸｌ０−＠〜約Ｉ　Ｘ　１０−”モルである。より好ましく は濃度は約Ｉ　Ｘ　１０−’〜約ｌＸｌ０−’モル、さらに好ましくは同一細胞 濃度で約３Ｘ１０−’〜約３Ｘ１０−５モルである。動物細胞を接触させる組成 物は固体または液体であることができる。インキサントプテリン誘導体は固体ま たは液体の生理的に耐えられる担体中の固体イソキサントプテリン誘導体の懸濁 体として混合しあるいは担体中に溶質として溶解または懸濁、あるいはそれらの 組合せにすることができる。

生理的に耐えられる担体はよく知られている。液体担体の適例は無菌水溶液であ り、それは活性成分および水のほかに物質を合理的食塩水またはその両方例えば リン酸緩衝食塩水を含むことができる。さらに水性担体は１種以上の緩衝塩、並 びに塩例えば塩化ナトリウムおよびカリウム、デキストロース並びに他の溶質を トロース注射剤、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射剤並びに乳酸加リン ゲル注射剤により例示される。

液体組成物はまた水に加えて、および水を排除して液相を含むことができる。そ のような追加液相の適例はグリセリン、植物油例えば綿実油またはごま油、およ び水−油孔濁液である。

固相担体の通例には火剤または錠剤の製造に通常使用される物質が含まれ、コー ンスターチ、ラクトース、リン酸二カルシウム、粘稠化剤例えばトラガカントお よびメチルセルロース、ｕ、ｓ、ｐ、、微粒ＳｉＯ□、ポリビニルピロリドン、 ステアリン酸マグネシウムなどが含まれる。さらに、固体担体は生物分解性およ び非生物分解性ポリマー、ポリペプチド担体、アフィニティー担体例えばＡＦＦ Ｉ−ＧＥＬ６０１　（バイオ−ラド・ラボラトリーズ（Ｂｉｏ−Ｒｅｄ　Ｌａｂ ｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｒｉｃｈｎ＋ｏｎｄ、ＣＡ）がら入手できるフェニルポロ ナート樹脂〕、および公知のリポソームを含むことができる。酸化防止側例えば メチルパラベンおよびプロピルパラベンは甘味剤例えばシｇ糖またはビート糖、 ナトリウムサンカリン、シフラミン酸ナトリウム、およびジー・ディー・シアル 社（Ｇ、Ｄ、５ｅａｒｌｅ　Ｃｏ、）により商標ＮＵＴＲＡＳＷＥＥＴ　（アス パルターム）のもとで販売されるジペプチドメチルエステル甘味剤と同様に固体 および液体組成物の両方に存在することができる。

組成物と動物細胞との間の接触は、接触した細胞がその細胞応答の変調を示す十 分な時間維持する。細胞応答（活性）の変調は高い抗体分泌、高いＴヘルパー活 性、高いリンフ才力イン生成な−どに示されることができる。

生体内に用いるには、動物細胞と最適濃度の組成物との間の接触は典型的には動 物が代謝、排泄または両過程によりその身体からインキサントプテリン誘導体を 浄化するのに十分な時間維持される。その時間は細胞応答を示すのに必要な時間 よりも長いことができる。従って個々の単位用量との接触は典型的には約１〜約 ７日の期間維持される。連続的接触は免疫不全動物宿主に有利であることができ る。

試験管内接触は標準検定法により測定したときに前記細胞機能の１つが示される 十分な時間維持することができる。そのような維持時間は典型的には約１〜約７ 日、より普通には約２〜約４日を要する。

Ｃ９変調された細胞応答 （１）試験管内アジュバント活性 動物の抗体生成細胞と有用な組成物との接触は試験管内で評価すると５ＲＢＣお よび他の免疫原（抗原）に対する一次抗体応答にアジュバント効果を与える。免 疫応答変調組成物および有効量の免疫原（ヒツジ赤血球、５ＲＢＣ）を典型的に 混合して実質的に同時に細胞に接触させる。「抗原」および「免疫原」という語 は同じ意味に使用される。

最適濃度で有用イソキサントプテリン誘導体の有効量を含む組成物は５ＲＢＣに 対する応答を約２〜６倍高める。その効果は用量依存性である。抗体応答の増強 は５ＲＢＣに対する特異的応答およびイソキサントプテリン誘導体に対する多ク ローン性応答の加酸効果により説明することができない。

有用なイソキサントプテリン誘導体を含む組成物のアジュバント効果は免疫原経 験（感作）および自・然細胞上に及ぼされる０両応答が細胞と有効量のイソキサ ントプテリン誘導体を含む組成物との接触により高められる。このアジュバント 効果は培養に加えた免疫原の濃度に依存する。

免疫応答、すなわち８９７８球またはＢ細胞の応答は免疫原の。

全免疫有効用量で高められることが認められるけれども、増強の程度は通常最適 または最適に近い免疫原濃度で最大である。さらにイソキサントプテリン誘導体 のアジュバント活性は免疫と相乗的であり、単なる独立の免疫原特異的および老 クローン性（非特異的）応答の合計のためではない。

イソキサントプテリン誘導体を含む組成物による抗体生成の増強は自然免疫原未 経験Ｂ細胞だけでなく、また前記のように免疫原経験または記憶Ｂ細胞を含む。

従って免疫原（抗体）に対する−次ＩｇＭ並びに二次１ｇＭおよびＩｇＧ応答が Ｂ細胞と有効量のイソキサントプテリン誘導体を活性成分としで含む組成物とを 接触させその接触を前記のように維持することにより増強される。

記憶応答のために、よく知られているように、Ｂ細胞を有効感作量の免疫原で処 理することにより感作する。その感作処理は免疫応答変調組成物の存在または不 在下であることができる。そのような組成物の存在下に接触するとき、Ｂ細胞の 感作量の免疫原による処理は、好ましくは細胞と本発明に有用な組成物との接触 と実質的に同時、すなわち約１２時間以内である。より好ましくは免疫原は、組 成物中にあることによりその効果が例えば変性により損なわれなければ、免疫応 答変調組成物中に含まれる。

従って変調された細胞応答はＢｆ−ＩＨ胞を有効感作量の免疫原および有用な免 疫応答変調組成物に実質的に同時に接触させ、−次免疫応答が得られた後さらに 感作した細胞をさらに有効量の免疫原（抗原）単独またはさらに免疫応答度１Ｊ ｉｉ組成物と実質的に同時に接触させることにより得ることができる。

有用な組成物の存在なくＢ細胞を感作するとき、この感作細胞と有用組成物との 接触と実質的に同時に感作細胞を再びさらに有効量の免疫原で処理するとアジュ バント活性を示すことができる。

従って有効感作量の免疫原に対し感作されるＢ細胞をさらに有効量の免疫原およ び、好ましくはＢ細胞を第２の有効量の免疫原で処理すると実質的に同時（約１ ２時間以内）にこれらの細胞に接触させる有用な免疫応答変調組成物で処理する ことにより変調された細胞応答を示すことができる。

有用なイソキサントプテリン誘導体含有組成物は一次体液免疫応答をＢ細胞およ び（または）免疫原提供細胞に直接作用することにより高めると思われる。従っ て、これらの誘導体の使用はＴ非依存性抗原に対して備えた抗体応答、すなわち Ｂ細胞および免疫原提供細胞を含む応答を高める。さらに、インキサントプテリ ン誘導体を含む組成物は後記のように、Ｂ細胞のＴヘルパー細胞に対する要求に 代ることができ、従って無傷機能性Ｔ細胞の存在なく開始された培養にそのアジ ュバント効果を与える。混合リンパ球培養（ＭＬ、Ｃ）上澄み中に含まれるＴ細 胞ヘルパー活性を存するＴ細胞の置換はイソキサントプテリン誘導体の抗体応答 を高める能力を低下しない。

さらに、ＭＬＣ上澄み中に含まれる可溶性Ｔ細胞シグナルとイソキサントプテリ ン誘導体含有組成物との間に認められた相乗作用はそれぞれにより供給されるシ グナルが定性的に異なることを示す。この相乗作用は上澄み濃度の範囲にわたっ て認められ、インキサントプテリン誘導体が単にＴ細胞が与える同じ「シグナル 」を多く与えるのではないことを示す。匹敵する程度の相乗作用はそのようなり 細胞培養をＴ細胞様上澄み、（これは実際に誘導されたＴ細胞である）よりもむ しろＴ細胞を補足し、免疫原の存在下に本発明に有用なインキサントプテリン誘 導体を含む組成物に効果はそのアジュバント活性のＴ非依存性の観察により除外 されず、すなわちＴ細胞非依存相の存在はＴ細胞依存相の存在に関係がない。従 って、より実質的な増強はＴ非依存性１型抗原（一層完全にＴ細胞非依存性）よ りも低用量のＴ依存性およびＴ非依存性２型抗原（Ｔ細胞依存性状態）による刺 激条件のもとでイソキサントプテリン誘導体を含む組成物から認めることができ 、それはＴ細胞依存性成分の存在を示唆する。さらに、イソキサントプテリン誘 導体はＴヘルパー細胞の前駆物質に作用（直接または間接に）してそのような細 胞の集団の免疫原に対する抗体応答を支持する能力を増すと思われる。

（２）　免疫応答の生体内変調 生体内の５ＲＢＣに対する一次抗体（Ｂ細胞）応答に対する免疫強化効果は有用 なイソキサントプテリン誘導体を含む液体組成的に同時に、組成物をＣＢＡ／Ｃ ａＪマウスに注入することにより動物細胞に接触させると認められる。比較的高 い用量例えば約２．５ミリグラム毎動物（約１／Ｌｏｇ毎ｋｇ）が動物により耐 えられる。

腹腔内（ｉ、ｐ、）注入したインキサントプテリン誘導体の一定水準のアジュバ ント効果に対する上記マウス中の免疫原用量依存性は、対照とした普通塩水（Ｎ Ｓ）注入と比較される。免疫原注入のすべての有用（有効）水準で免疫応答に増 強があるけれども、典型的には増強は基礎応答の大きさが高いほど大きくなる。

上記−次免疫処置におけるように動物細胞応答の生体内変調はまた、前にＢ細胞 の二次免疫応答の試験管内変調に関して記載したように行なうことができる。

（３）Ｔ細胞置換活性 本発明の方法はＴ依存性免疫原に対する抗体応答においてＴ細胞の置換に用いる ことができる。これに関して、Ｔ細胞は試験管内で補体および単りローン性抗ｔ ｈＶ１．２抗体で処理し、免疫原としての５ＲＢＣとともにまたはなしで、イン キサントプテリン誘導体の増加濃度を含む組成物の存在下に培養することにより 除去する。これらの条件下で、分泌したＢ細胞培養は、例えば有効量のイソキサ ントプテリン誘導体を含む組成物により含まれるＴ細胞様シグナルを補足しなけ れば免疫原に対し応答できない。変調した細胞応答は用量依存性並びに免疫原依 存性である。さらに、この応答はＢ細胞の非特異的多クローン性活性化に帰着で きなし）。

本発明の方法の使用は他のＴ依存性応答の条件下にＴ細胞に対する要求に全く代 る免疫原刺激Ｂ細胞に対するＴ細胞様シク゛ナルを与えることができる。従って 、ｔｂｙｌ、２支持Ｔ細胞を除去したマウスＢ細胞培養の、有効量のイソキサン トプテリン誘導体を含む組成物による補足が５ＲＢＣに対する一次抗体応答の発 生においてＴヘルパー細胞に対する要求を置換する。これは肺細胞の単りローン 性抗ｔｈｙｔ、２抗体および補体による試験管内処理によりＴ細胞を除去しても 、またはウサギ抗マウス胸腺リン／＜球血清（ＡＴＳ）を生体内注射し次いでＡ ＴＳ、抗ｔｈｙｔｚ、抗１．ｙｔ１および抗Ｌｙｔ２並びに補体によりノ１−ウ ェル（ｌｌａｒｗｅｌｌ）　Ｌより）、ジャーナル・オプ・エクスペリメンタル ・メデイシン（Ｊ、　Ｅｘｐ。

Ｍｅｄ、　）、１５２：８９３　（１９８０）に記載されたように試験管内処理 しても生ずる。

本発明の組成物の作用の機構はＴ細胞誘導リンフオ力インの作用およびそれに含 まれるＴ細胞置換（またはＢ細胞刺激）活性と異なると思われる。これは上澄み により支持される抗５ＲＢＣプラーク形成細胞（ＰＦＣ）応答が有効量のインキ サントプテリン誘導体を含む組成物の添加により増幅されるＭＬＣ上澄み中に生 ずるイソキサントプテリン誘導体とＴヘル）ｉ−因子との相乗効果により示され る。

（４）経口投与によるアジュバント活性生体内ｔ、　ｐ、または皮下注入により 投与された本発明のアジュバント活性は以下に論議した。動物の胃中に延びる管 を通して、または各動物の食道中へ延びる先端を丸めた供給針の使用により経口 的に投与した本発明の組成物のアジュ）Ｙント活性もまた示すことができる。

これに関して、５ＲＢＣはｔ、り、注入し、ＰＦＣ測定は５ＲＢＣの初期ｉ、Ｉ ）、注入の７日後に行なう。有効量のインキサントプテリン誘４体を含む有用組 成物は５ＲＢＣの免疫原投与と同じ２４時間以内またはその７２時間後に経口的 に投与する。動物細胞に接触させる本発明の化合物の投与は、細胞を免疫原にさ らした同じ２４時間以内またはその７２時間後に動物細胞に接触させても高い一 次応答を与える。

試験管内接触には、細胞を、典型的にはイソキサントプテリン誘導体を前記濃度 で含む培地中で培養する。生体内接触には組成物は動物に１回またはそれ以上の 回数投与し最後の投与量が前記のように自然身体過程により動物身体から、それ により動物細胞との接触から除かれるまで動物内に維持される。

（Ｄ）発明を実施するための最良の形態実施例１　錠剤 錠剤は次の成分から配合されるニ −１１皿− ８−（１’−β−Ｄ−リボフラッジジル）インキサントプテリン　０・５ ラクトース、粉末　３７．４ コーンスターチ、乾燥　３５．５ 微粒　５ｉ（ｈ　５．６ ポリビニルピロリドン　０．６ ステアリン酸マグネシウム　０．４ ８０．０ イソキサントプテリン誘導体をラクトース、コーンスターチ２５．０重量部およ びＳｉＯ□４．０重量部と混合する。生じた混合物を次にポリビニルピロリドン の５％エタノール溶液で均一に湿らせる。次いで湿潤塊を１ｍｍ網目ふるいに通 して顆粒を生成させる。

生じた顆粒を乾燥室中で６０℃で約２４時間乾燥する。乾燥した顆粒を再び１１ 璽網目ふるいに通す。得られた顆粒７０．０部を、残余のＳｉＯ□、残余のコー ンスターチ、および全ステアリン酸マグネシウムからなる予め１１網目ふるいに 通した混合物と適当なミキ　□サー中で混合する。得られた混合物を次いで各８ ００ミリグラムでイソキサントプテリン５ミリグラムを含む錠剤にプレスする。

実施例２　デンプンカプセル カプセル内容物を次の成分から配合するニー里呈並− ６−カルボキシ−８−（１’−β−Ｄ−グルコピラノシジル）インキサントプテ リン　１．０ラクトース　４５０．０ コーンスターチ　５４９．０ イソキサントプテリン誘導体を徐々にラクトースと混合する。

ラクトースがすべて混合されると、得られた混合物をコーンスターチと配合する 。生した配合物を次いで配合物１．０グラムを保持するカプセルに入れる。各カ プセルはイソキサントプテリン誘導体１．０ミリグラムを含有する。

実施例３　錠剤 各６−メチル−８−（１’−β−Ｄ−デオキシリポフラノシジル）イソキサント プテリン５０ミリグラムを含む１０．０００錠のロフトを次の型および量の成分 から調製する：６−メチルー８−（１’−β−Ｄ− デオキシリボフラノシジル）インキサントプテリン　５００グラム リン酸二カルシウム　１０００グラム メチルセルロース、Ｕ、Ｓ、Ｐ、（１５ｃｐｓ）　７５グラムタルク　１５０グ ラム コーンスターチ　２５０グラム ステアリン酸マグネシウム　２５グラムインキサンドプテリン誘導体とリン酸二 カルシウムをよく混合し、メチルセルロースの水中７．５％溶液で粒化し、嵐８ ふるい（ＵＳ標準ふるい列）に通し、注意深く乾燥する。乾燥した顆粒を隘１２ ふるい（ＵＳ標準ふるい列）に通し、タルク、スターチおよびステアリン酸マグ ネシウムと十分混合し、錠剤に圧縮する。

これらの錠剤は約６〜８時間毎に１〜３錠の用量で経口的に投与すると抗体生成 の増強に有用である。

実施例４　注射用調製物 皮下または洞内注入に適し、６−カルポキシエチルー８−（１’−β−Ｄ−リボ フラッジジル）イソキサントプテリン５０ミリグラムを成分毎ミリリットル中に 含む無菌調製物が次の型および量の成分から調製される： ６−カルポキシエチル−８＝ （１−β−Ｄ−リボフラッジジル） イソキサントプテリン　５グラム 生理食塩水　９８ミリリツトル 綿実油（またはごま油）　２ミリリフドルイソキサントプテリン誘導体および食 塩水を混合して実質的に均一な分散体を与える十分な時間音波処理する。その後 綿実油（またはごま油）を混合し、新混合物を同様に均一化して乳濁液にする。

乳化後この無菌調製物の最終容積の１〜３％が、体液免疫を高めるために週１回 皮下または腹腔内に注入される。

実施例５　経日用水性調製物 ６−カルボキシ−８−（１’−β−Ｄ−グルコピラノシジル）イソキサントプテ リン５ミリグラムを各５ミリリツトル（１茶さじ量）中に含む経口用の水性調製 物が次の成分から調製される＝６−カルボキシ−８−（１’−β−Ｄ−グルコピ ラノシジル）インキサンド プテリン　１．０グラム メチルパラベン、Ｕ−５，Ｐ、　０．７５グラムプロピルパラベン、［１，Ｓ、 Ｐ、　０．２５グラムナツカリンナトリウム　１．２５グラムシクラミン酸ナト リウム　０．２５グラムグリセリン　３００ミリリツトル トラガカント　粉末　１．０グラム 橙皮油　香味剤　１．０グラム Ｆ、Ｄ、およびＣ，オレンジ染料　０．７５グラム脱イオン水、適量、全量　１ ０００ミリリットル毎日２〜４回の１茶さじ量の用量が体液免疫の増強に有用で ある。

細胞接触条件 リンパ球培養 １００ミリリツトル当りに次のものを含む血清含有培地を調製する：ＲＰＭＩ　 １６４０　（フロー・ラボラトリーズ社（ＦｌｏｗＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　 Ｉｎｃ、　、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、　１１０）製）９１．９ミリリツトル、１０ ０×グルタミン０．１ミリリツトル、１００×ピルビン酸ナトリウム１．０ミリ リツトル、５０×非必須アミノ酸１．０ミリリツトル、ペニシリンＧ１０４ｊｌ ｉ位およびストレプトマイシン１０４マイクログラムを含む水１．０ミリリット ル、並びにウシ胎仔血清（Ｆｅ２）の支持ロフト５．０ミリリツトル。これらの 成分を外観的に均一になるまで混合す為。グツドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ）ほか、 ジャーナル・オプ・イムノロジー（Ｊ、　Ｉｎｕ＋＋ｕｎｏ１．）　１２１　： 　１９０５（１９７８）の記載のように牌細胞慈濁液および肺臓Ｂ細胞に対して 濃縮した集団を調製する。

ヒツジ赤血球（Ｓ　ＲＢ　Ｃ）に対する一次体液免疫応答の評価のために、５Ｘ １０’〜１０フマウス牌細胞を５％ＦＣ３含有培地１．０ミリリツトル中で免疫 原の存在下に４日または５日間培養する。細胞を培養トレー（３４２４，コスタ −（Ｃｏｓｔａｒ、　Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ。

ＭＡ）製〕中で７サイクル毎分の振動数で揺動する組織培養箱〔ＣＢＳサイエン スティフィー／り（ＣＢＳ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、　Ｄｅｌ　Ｍａｒ＋　ＣＡ ）製〕を用いて空気中１０％Ｃｏ２の増湿雰囲気中で３７℃でインキュベートす る。プールした５ＲＢＣはコロラド・セラム社（Ｃｏｌｏｒａｄ。

Ｓｅｒｕｍ　Ｃｏ、　、　Ｄｅｎｖｅｒ　ＣＯ）から入手できる。

ブー−タイ　細　（Ｐ　Ｆ　Ｃ）の ５ＲＢＣに対するＰＦＣ分泌抗体はイエルネはか（Ｊｅｒｎｅ　ａｎｄＮｏｒｄ ｉｎ）　、　サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　、１４０　：　４０５　（１９６ ３）の瀉血プラーク検定の変形を用いて培養の４日または５日後に評ＣＢＡ／Ｃ ａＪマウス、８〜１６週令はジャソクソン・ラボラトリ−（Ｊａｃｋｓｏｎ　Ｌ ａｂｏｒａｔｏｒｙ、　Ｂａｒ　Ｂａｒｂｅｒ、　ＭＥ）から購入される。

マウスはすべて−ａｙｎｅ　Ｌａｂ　Ｂｌｏｘ　Ｆ６ペレント〔アライド、ミル ス社（Ａｌｌｉｅｄ　Ｍｉｌｌｓ　Ｉｎｃ、　、　Ｃｈｉｃａｇｏ、　ＩＬ）） およびＨＣｌで３．０のｐＨ値に酸性化した塩素化水上に維持する。

豊凶叫製 肺臓および胸腺細胞懸濁液はグツドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ）ほか、ジャーナル・ オブ・イムノロジー（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　）、↓２１　：　１９０５（１ ９７８）に記載のように調製する。Ｔリンパ球について濃縮した肺細胞はジュリ ウス（ＪｕＨｕｓ）ほか、ユーロピアン・ジャーナル・オプ・イムノロジー（Ｅ ｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　）、３　：　６４５（１９７３）のプロトコ ルに従いナイロンウール（ＮＷ）　を通すことにより調製する。Ｂ細胞濃縮集団 は１０８牌細胞を１：１０００希釈の単りローン性抗Ｔｈｙ１．２に体〔二ニー ・イングランド・ニュクリア（Ｎｅｗ　ＥｎｇＩａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ、　Ｂ ｏｓｔｏｎ、　ＭＡ）製〕で４℃で３０分間処理することにより調製する。処理 した細胞は２８０ｘｇで１０分間遠心分離し、抗体を除き、細胞を１：６希釈の ＣＢＡＲＢＣ吸収モルモット補体中に３７℃で４５分間再懸濁する。次いで細胞 を洗浄し、前記のように培養する。

笠ｉ インキサントプテリン−８−β−Ｄ−リボヌクレオシドはフレイプラー（叶、　 Ｗｏｌｆｇａｎａ　Ｐｆｌｅｉｄｅｒｅｒ、　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｋ ｏｎｓｔａｎｚ。

Ｋｏｎｓｔａｎｚ　Ｗｅｓｔ　Ｇｅｒｍａｎｙ）の寄贈品であった。８−オキソ グアノシン（８−ｏｘｏ　Ｇｕｏ　）は“ロビンス（叶＋　Ｒｏｌａｎｄ　Ｒｏ ｂｉｎｓ、　ＩＣＮＰｈａｒｌＩＩａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、　Ｃｏ５ｔａ　Ｍｅ ｓａ＋　ＣＡ）からの寄贈品であった。ヒトＩＬ−２、ロフト１４６４−５２は エレクトローニュータレオニクス社（Ｅｌｅｃｔｒｏ−Ｎｕｃｌｅｏｎｉｃｓ、 　Ｉｎｃ、　＋　５ｉｌｖｅｒ　Ｓｐｒｉｎｇ、　ＭＤ）がら部分精製調製物と して入手した。この調製物はインターフェロン−γ活性を含まないと認められた 。

抜本 洗浄した５ＲＢＣの食塩水中興なる濃度の懸濁液でｉ、ｐ、注入する。その後種 々の時間に種々の量のイソキサントプテリン誘導体をｉ、ｐ、または皮下に注入 する。イソキサントプテリン誘導体は典型的には、塩水中、水油乳濁液中あるい は通常塩水（ＮＳ）または生理食塩水中の１０■／１ａｌｌのナトリウムカルボ キシメチルセルロース（ＣＭＣ）中の懸濁液として注入する。経口供給研究には マウスに、口から胃へ延びるポリ　（プロピレン）カテーテルまたは前記のよう に先端を丸めた２０ゲージ供給針を挿入し、それを通して計測量の組成物を導入 する。

実施例６−次抗体応答の増強 ５Ｘ１０’生ＣＢＡ／ＣａＪマウス牌細胞を血清含有培地ｈｉ中で、５ＲＢＣの 存在または不在下にＯ（Ｎｏｎｅ）　〜Ｉ　Ｘ　１０−’モルの濃度範囲にわた って存在する８−（１’−β−Ｄ−リポフラッジジル）イソキサントプテリンの 増加量で培養した。５ＲＢＣに対するＰＦＣを培養４日後に数えた。

前記マウス系を用いた２研究の結果は表１に示される。

表１ 直接抗５ＲＢＣＰＦＣ／培養 Ｎｏｎｅ　Ｎｏｎｅ　６２　３５ ＳＲＢＣＮｏｎｅ　４６８　４９５ Ｉｓｏｘ、　Ｒｉｂ。

５ＲＢＣ１０−”　６３８　４１８ ＳＲＢＣ１０−’　７７３　９４８ ＳＲＢＣ１０−”　７７８　６６０ ＳＲＢＣ１０−’　４９０　５４０ ＳＲＢＣ１０−’　２０８　１７８ ８−ｏｘｏＧｕ。

１、　５Ｘ１０’５ＲＢＣを抗原毎培養として用いた。

２、　ヌクレオシドは存在なしくＮｏｎｅ）またはモル毎リフドル例えば１０− ５　の濃度であると示される。

ｌ５ｏｘ、　Ｒｉｂ、＝イソキサントプテリンリボシド；８−ｏｘｏＧｕｏ＝　 ８−オキソグアノシン。

知見できるように、５ＲＢＣおよびイソキサントプテリン誘導体の存在下に、５ ＲＢＣのみを含む培養より高いＰＦＣの用量依存性増強が認められる。この化合 物の１０−８モル程度の低い濃度における活性が殊に意外である。

実施例７　二次抗体応答の増強 １０７生５ＲＢＣ感作ＣＢＡ／ＣａＪマウス牌細胞を血清含有培地中で、培地ｍ ｌ当り６Ｘ１０’プール５ＲＢＣとともに、種々の濃度の８−（１’−β−Ｄ− リボフラッジジル）イソキサントプテリンの存在または不在下に培養する。５Ｒ ＢＣに対する直接ＰＦＣを培養４日後に測定する。同様の培養を、対照として５ ＲＢＣの同じ増加量を用い、しかしインキサントプテリン誘導体なく調製する。

ＰＦＣは５ＲＢＣのみを含む培養に比べてイソキサントプテリンおよび５ＲＢＣ の両方を含む培養中で増大される。

６−メチル−８−（１’−β−Ｄ−リポフラッジジル）イソキサントプテリンお よび６−カルボキシ−８−（１’−β−Ｄ−リボフラッジジル）インキサントプ テリンの使用は類似の結果を与える。

実施例８　免疫応答の生体内変調 ＣＢＡ／ＣａＪマウスに６Ｘ１０’　５ＲＢＣを、および３日後のＣＭＣ中の増 加量の６−メチル−８−（１’−β−Ｄ−リボフラッジジル）イソキサントプテ リンを腹腔内に注入する。０〜２．５ミリグラム毎動物の濃度を用いる。その５ 日後の５ＲＢＣに対する直接ＰＦＣの評価は抗体応答の用量依存性増強を示す。

同様の結果が、インキサントプテリン誘導体として８−（１’−β−Ｄ−リボフ ラッジジル）イソキサントプテリンおよび６−カルボキシ−８−（１’−β−Ｄ −リポフラッジジル）インキサントプテリンを用いて得られる。

実施例９　ヒトー次免疫応答の試験管内増強ヒト末梢血リンパ球（Ｐ　Ｂ　Ｌ） をフィコルージアドリゾエート（Ｆｉｃｏｌｌ−ｄｉａｔｒｉｚｏａｔｅ）密度 勾配遠心分離により正常ヘパリン化静脈血から調製した。ＰＢＬはヒスタミン２ 型受容体を支持するサプレッサーＴ細胞をビスタミンウサギアルブミン被覆プラ スチックペトリ皿（Ｃｅｌｌ　−ｅｃｔ　Ｎａ　２キット；セラゲン（Ｓｅｒａ ｇｅｎ　。

Ｂｏｓｔｏｎ　＋　ＭＡ）製〕の表面に付着させ、ウィソキーほか（Ｗｙｓｏｃ ｋ　１ａｎｄ　５ａｔｏ）　＋　プロシーデイングズ・オプ・ザ・ナショナル・ アカデミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ 、）　ＵＳＡ。

１５：２８４４　（１９７８）により記載され、カバグナロほか（Ｃａｖａｇｎ ａｒｏ　ａｎｄ　０ｓｂａｎｄ）　、バイオテクニークス（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉ ｑｕｅｓ）１月／２月：３０（１９８３）により改良されたパニングにより非付 着細胞を回収することにより除去した。

この研究に用いた組織培養液は次のように調製した：１００ミリリットル（ｍＪ ）が８７．９ｍｆのＲＰＭＩ　１６４０（フロー・ラボラトリーズ（Ｆｌｏｗ　 Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ＋　ＭＩＤ）製〕、０．１＋ ＋＋ｊ！の１００Ｘグルタミン、１．０Ｍ−ＨＥＰＥＳ緩衝液〔ミクロバイロジ カル・アソシエーテス（Ｍｉｃｒｏｂｉｌｏｇｉｃａｌ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ 。

Ｂｅｔｈｅｓｅｄａ、　ＭＯ）製）　１．０　ｌｌＩｎ、ペニシリンＧ１０’Ｕ およびストレプトマイシン１０４マイクログラムを含む水１．０＋ｍＪおよび新 自原性熱不活性化血漿１０　ｍｌを含有した。５ＲＢＣに対する一次体液免疫応 答の評価のため、抗体として５Ｘ１０’　５ＲＢＣ〔コロラド・セラム社（Ｃｏ ｌｏｒａｄｏ　５ｅｒｕｔｓ　Ｃｏ、　、　Ｄｅｎｖｅｒ＋　Ｃｏ）製）を含む １．０ｍｊ！の容積中２Ｘ１０’／＋ｇｊ！の密度でリンパ球系細胞をＩＬ−２ およびインキサントプテリンリボヌクレオシドとともに培養した。

５ＲＢＣに対する抗体を分泌するプラーク形成細胞（Ｐ　Ｆ　Ｃ）の計数は培養 ６日後イエルネほかＵｅｒｎｅ　ａｎｄ　Ｎｏｒｄｉｎ）、サイエンス（Ｓｃｉ ｅｎｃｅ）、１４０：４０５　（１９６３）の瀉血プラーク検定の変形を用いる ことにより行なった。細胞はプラーキング前に完全培地を引上げ、それを標準像 Ｍｒアガロース〔パイオーラド・ラボラトリーズ（Ｂｉｏ　Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒ ａｔｏｒｉｅｓ、　Ｒｉｃｔ＋ｓ＋ｏｎｄ、　ＣＡ）製〕中でプラークさせ、補 体なしで１．５時間インキュベートした後５ＲＢＣ吸収モルモット補体中で１時 間インキュベートした。

２研究の結果は表２に示される。

表１ Ｎｏｎｅ　Ｎｏｎｅ　７　１２ ＳＲＢＣＮｏｎｅ　５，３８３　３６３Ｉｓｏｘ、　Ｒｉｂ。

５ＲＢＣ１０−”　５，２５８　− ５ＲＢＣ１０−’　６，０１７　− ５ＲＢＣ１０−’　５，４８３　、− ５ＲＢＣ１０−’　７，５９２　６６５ＳＲＢＣ３ｘｌＯ−’　２４８ ＳＲＢＣ１０−’　３２．０００　１８０ＳＲＢＣ３Ｘｌ０−’　２３０ ８−ｏｘｏＧｕ。

５ｌｌｔｌｃ　３ｘｌＯ−’　１１７５１、　５ＲＢＣは抗原として５Ｘ１０’ 細胞毎培養で用いた。

２、　ヌクレオシドは存在なしく　ｈ　ｏ　ｎ　ｅ　）またはモル毎リンドル、 例えば１０−Ｓ　の濃度であるとして示される。

ｌ５ｏｘ、　Ｒｉｂ、＝イソキサントプテリンリボシド；８−ｏｘｏＧｕｏ＝　 ８−オキシグアノシン。

３、　直接抗５ＲＢＣプラーク形成細胞（Ｐ　Ｆ　Ｃ）毎培養は２つの異なるヒ ト供血者からのＰＢＬを用い、前記のように測定した。

上記データから知見できるように、用量依存性抗原特異性の増強がインキサント プテリンリボヌクレオシドで得られた。得られた結果は実施例６のマウス系にお いて最適化したよりも高い濃度のイソキサントプテリン誘導体で認められた。こ れらの結果は８−置換グアノシンを用いて認められたマウスおよびヒト系におけ る結果に一敗する、グツドマンはか（ＩＩ：ｏｏｄｍａｎ　ａｎｄ　Ｈｅｎｎｅ ｎ）＋セルラー・イムノロジー（Ｃｅ１１．　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）、　１０２　 ：　３９５　（１９８６）、並びにグツドマンはか（Ｇｏｏｄｍａｎ　ａｎｄ　 Ｗｅｉｇｌｅ）、ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ、　Ｉｎ川用ｎｏ１．） 、１３５：３２８４　（１９８５）参照。

実施例１０　Ｔ細胞置換活性 ４Ｘ１０’生ＣＢＡ／ＣａＪマウス牌細胞を初めにＴ細胞のｔｈｙｌ、２抗原と 免疫反応する補体固定華クローン性抗体次いで存在するＴ細胞を溶解する補体〔 二ニー・イングランド・ニュークリア（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａ ｒ＋　Ｂｏｓｔｏｎ、　Ｍ＾）製〕で処理する。そのように処理した細胞をその 後さらにθ〜１ｏ−４モルの量の増加量の８−（１’−β−Ｄ−リボフラッジジ ル）イソキサントプテリンを含む血清含有培地中で、免疫原として５ＲＢＣとと もにまたはそれなしで成長させる。その４日後に５ＲＢＣに対する直接ＰＦＣを 測定する。この研究の結果はイソキサントプテリン誘導体の存在が免疫に対する Ｂ細胞応答の誘導に役立つこと、および誘導された結果が用量依存性であること を示す。従って非溶解胛細胞（すなわちＢ細胞）と有用な組成物との接触がこれ らの非溶解牌細胞にＴ細胞様「シグナル」を与える。

類似の結果が上記イソキサントプテリン誘導体の代りに６−メチル−８−（１’ −β−Ｄ−リポフラッジジル）イソキサントプテリンおよび６−カルボキシ−８ −（１’−β−Ｄ−リボフラッジジル）インキサントプテリンを用いて得られる 。

本発明は好ましい態様に関して記載された。示した本発明の範囲から逸脱するこ となく開示主題の改変および（または）変更をなすことができることは当業者に 明らかであろう。

国際調査報告

Claims (19)

【特許請求の範囲】
1. １．動物細胞を、構造が式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、 Ｒ１は水素、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、ポリヒドロキシ低級アル キル、フェニル、フェニル−低級アルキル、低級アルキルフェニル、低級アルコ キシフェニル、ハロフェニル、トリフルオロメチルフェニル、ヒドロキシ、オキ ソ、低級アルコキシ、フェニル−低級アルコキシ、ハロ、メルカプト、チオキソ 、低級アルキルチオ、低級アルキロイルチオ、フェニル−低級アルキルチオ、低 級アルカノイル、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキルカルボ キシ、低級アルキレン低級アルキルカルボキシラート、低級アルコキシ低級アル キルカルボニル、並びにカルボキサミドおよび低級アルキルカルボキサミド〔た だし、カルボキサミド基は式、ＣＯＮＲ３Ｒ４（式中Ｒ３およびＲ４は同一であ るかまたは異なり、水素および低級アルキルからなる群から選ばれ、あるいはＮ Ｒ３Ｒ４は一緒に、環中に５個または６個の原子を有する複素環を形成する）を 有する〕からなる群から選ばれる基であり、 Ｒ２は１′−アルドペントシジル、１′−アルドヘキソシジル、モノ脱酸素１′ −アルドペントシジルおよびモノ脱酸素１′−アルドヘキソシジル、並びにそれ らのＯ−置換低級アルキル、低級アルカノイル、ベンジルおよびベンゾイル誘導 体（ただし、Ｏ−置換基は、１酸素上に存在すれば全利用可能環置換基酸素上に 存在する）からなる群から選ばれるβ−結合アルドグリコシド基である〕 の構造に適合するイソキサントプテリン誘導体、前記イソキサントプテリン誘導 体の互変異性体、および前記イソキサントプテリン誘導体の製剤に許容される塩 、である活性成分の有効量と混合した希釈量の生理的に耐えられる担体を含む組 成物と接触させ、 前記接触を前記細胞がその応答を変調するのに十分な時間維持する、 ことを含む、動物細胞応答を変調する方法。
2. ２．Ｒ２が１′−リボフラノシジル、１′−（２′−デオキシ）リボフラノシジ ルおよび１′−グルコピラノシジル基からなる群から選ばれる、請求の範囲第１ 項記載の方法。
3. ３．イソキサントプテリン化合物の構造が式：▲数式、化学式、表等があります ▼ に適合する、請求の範囲第２項記載の方法。
4. ４．Ｒ１が水素、メチル、およびカルボキシからなる群から選ばれる、請求の範 囲第３項記載の方法。
5. ５．アルドグリコシド基の構造が式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、 ｎは０または１であり、 Ｒ５は水素、ヒドロキシ、低級アルコキシ、ベンジルオキシ、低級アルカノイル オキシ、およびベンゾキシからなる群から選ばれ、 Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は同一であり、ヒドロキシ、低級アルコキシ、ベンジルオ キシ、低級アルカノイルオキシおよびベンゾキシからなる群から選ばれ、 Ｒ５が水素意外のときＲ５＝Ｒ６＝Ｒ７＝Ｒ８である）に適合する、請求の範囲 第１項記載の方法。
6. ６．ｎが０であり、Ｒ５、Ｒ７およびＲ８がヒドロキシである、請求の範囲第５ 項記載の方法。
7. ７．ｎが１であり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８がヒドロキシである、請求の範 囲第５項記載の方法。
8. ８．細胞が白血球である、請求の範囲第１項記載の方法。
9. ９．白血球がＢリンパ球である、請求の範囲第８項記載の方法。
10. １０．さらにＢリンパ球を、組成物に接触させる前に有効量の免疫原で処理する 段階を含み、前記免疫原処理が前記リンパ球を感作する、請求の範囲第９項記載 の方法。
11. １１．Ｂリンパ球を、前に免疫反応のために前記Ｂリンパ球の感作に用いた免疫 原の追加量とともに組成物に接触させる、請求の範囲第１０項記載の方法。
12. １２．Ｂリソパ球を有効量の免疫原と実質的に同時に組成物に接触させる、請求 の範囲第９項記載の方法。
13. １３．変調される動物細胞応答が免疫応答であり、組成物に接触させる動物細胞 が白血球である、請求の範囲第１項記載の方法。
14. １４．動物細胞を試験管内で接触させる、請求の範囲第１３項記載の方法。
15. １５．白血球を、構造が式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、 Ｒ１は水素、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、ポリヒドロキシ低級アル キル、フェニル、フェニル−低級アルキル、低級アルキルフェニル、低級アルコ キシフェニル、ハロフェニル、トリフルオロメチルフェニル、ヒドロキシ、オキ ソ、低級アルコキシ、フェニル−低級アルコキシ、ハロ、メルカプト、チオキソ 、低級アルキルチオ、低級アルキロイルチオ、フェニル−低級アルキルチオ、低 級アルカノイル、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキルカルボ キシ、低級アルキレン低級アルキルカルボキシラート、低級アルコキシ低級アル キルカルボニル、並びにカルボキサミドおよび低級アルキルカルボキサミド〔た だし、カルボキサミド基は式、ＣＯＮＲ３Ｒ４（式中、Ｒ３およびＲ４は同一で あるかまたは異なり、水素および低級アルキルからなる群から選ばれ、あるいは ＮＲ３Ｒ４は一緒に、環中に５個または６個の原子を有する複素環を形成する） を有する〕からなる群から選ばれる基であり、Ｒ２は１′−アルドペントシジル 、１′−アルドヘキソシジル、モノ脱酸素１′−アルドペントシジルおよびモノ 脱酸素１′−アルドヘキソシジル、並びにそれらのＯ−置換低級アルキル、低級 アルカノイル、ベンジルおよびべンゾイル誘導体（ただし、Ｏ−置換基は、１酸 素上に存在すれば全利用可能環置換基酵素上に存在する）からなる群から選ばれ るβ−結合アルドグリコシド基である〕 の構造に適合するイソキサントプテリン誘導体、前記イソキサントプテリン誘導 体の互変異性体、および前記イソキサントプテリン誘導体の製剤に許容される塩 、である活性成分の有効量を混合した希釈量の生理的に耐えられる担体を含む組 成物に接触させる段階、前記白血球がその応答を変調するのに十分な時間前記接 触を維持する段階、 を含む白血球の細胞応答を増強する方法。
16. １６．イソキサントプテリン誘導体の構造が式：▲数式、化学式、表等がありま す▼ に適合する、請求の範囲第１５項記載の方法。
17. １７．Ｒ１が水素、メチルおよびカルボキシからなる群から選ばれる、請求の範 囲第１６項記載の方法。
18. １８．免疫グロブリン生成細胞を、（ａ）抗体の分泌を誘導する予め選んだ抗原 の有効量、および（ｂ）構造が式：▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、 Ｒ１は水素、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、ポリヒドロキシ低級アル キル、フェニル、フェニル−低級アルキル、低級アルキルフェニル、低級アルコ キシフェニル、ハロフェニル、トリフルオロメチルフェニル、ヒドロキシ、オキ ソ、低級アルコキシ、フェニル−低級アルコキシ、ハロ、メルカプト、チオキソ 、低級アルキルチオ、低級アルキロイルチオ、フェニル−低級アルキルチオ、低 級アルカノイル、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキルカルボ キシ、低級アルキレン低級アルキルカルボキシラート、低級アルコキシ低級アル キルカルボニル、並びにカルボキサミドおよび低級アルキルカルボキサミド〔た だし、カルボキサミド基は式、ＣＯＮＲ３Ｒ４（式中、Ｒ３およびＲ４は同一で あるかまたは異なり、水素および低級アルキルからなる群から選ばれ、あるいは ＮＲ３Ｒ４は一緒に、環中に５個または６個の原子を有する複素環を形成する） を有する〕からなる群から選ばれる基であり、Ｒ２は１′−アルドペントシジル 、１′−アルドヘキソシジル、モノ脱酸素１′−アルドペントシジルおよびモノ 脱酸素１′−アルドヘキソシジル、並びにそれらのＯ−置換低級アルキル、低級 アルカノイル、ベンジルおよびベンゾイル誘導体（ただし、Ｏ−置換基は、１酸 素上に存在すれば全利用可能環置換基酸素上に存在する）からなる群から選ばれ るβ−結合アルドグリコシド基である〕 の構造に適合するイソキサントプテリン誘導体、前記イソキサントプテリン誘導 体の互変異性体、および前記イソキサントプテリン誘導体の製剤に許容される塩 、のイソキサントプテリン誘導体のアジュバント量と混合した希釈量の生理的に 耐えられる担体に接触させる段階、前記接触細胞が前記免疫原に対する抗体を分 泌するのに十分な時間前記接触を維持する段階、 を含む、予め選んだ免疫原に対する抗体の分泌を増強する方法。
19. １９．免疫グロブリン生成細胞が接触段階前に予め選んだ免疫原に感作これる、 請求の範囲第１８項記載の方法。