HU194741B - Process for the preparation of contrast substances used for nmr exposures - Google Patents

Process for the preparation of contrast substances used for nmr exposures Download PDF

Info

Publication number
HU194741B
HU194741B HU851601A HU160185A HU194741B HU 194741 B HU194741 B HU 194741B HU 851601 A HU851601 A HU 851601A HU 160185 A HU160185 A HU 160185A HU 194741 B HU194741 B HU 194741B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
paramagnetic
vesicles
contrast
dtpa
iii
Prior art date
Application number
HU851601A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT37569A (en
Inventor
Ronald C Gamble
Paul G Schmidt
Original Assignee
Vestar Research Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vestar Research Inc filed Critical Vestar Research Inc
Publication of HUT37569A publication Critical patent/HUT37569A/hu
Publication of HU194741B publication Critical patent/HU194741B/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01R—MEASURING ELECTRIC VARIABLES; MEASURING MAGNETIC VARIABLES
    • G01R33/00—Arrangements or instruments for measuring magnetic variables
    • G01R33/20—Arrangements or instruments for measuring magnetic variables involving magnetic resonance
    • G01R33/44—Arrangements or instruments for measuring magnetic variables involving magnetic resonance using nuclear magnetic resonance [NMR]
    • G01R33/48—NMR imaging systems
    • G01R33/54—Signal processing systems, e.g. using pulse sequences ; Generation or control of pulse sequences; Operator console
    • G01R33/56—Image enhancement or correction, e.g. subtraction or averaging techniques, e.g. improvement of signal-to-noise ratio and resolution
    • G01R33/5601—Image enhancement or correction, e.g. subtraction or averaging techniques, e.g. improvement of signal-to-noise ratio and resolution involving use of a contrast agent for contrast manipulation, e.g. a paramagnetic, super-paramagnetic, ferromagnetic or hyperpolarised contrast agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/18—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes
    • A61K49/1806—Suspensions, emulsions, colloids, dispersions
    • A61K49/1812—Suspensions, emulsions, colloids, dispersions liposomes, polymersomes, e.g. immunoliposomes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Condensed Matter Physics & Semiconductors (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Signal Processing (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • High Energy & Nuclear Physics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Magnetic Resonance Imaging Apparatus (AREA)
  • Gyroscopes (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Silver Salt Photography Or Processing Solution Therefor (AREA)
  • Prostheses (AREA)

Description

A találmány tárgya mágneses magrezonancia (NMR) színképek kontrasztjának fokozására szolgáló olyan paramágneses anyag, amely asszociátumot képez foszfolipid cseppecskékkel, vezikulákkal.
Részletesebben a találmány szerinti kontrasztanyagok olyan foszfolipid vezikulákból állnak, melyekben paramágneses anyagként átmeneti fémek, aktinidák és lantanidák sói, így Gd(III), Mn(II), Cu(II), Cr(III), Fe(II), Fe(III), Co(II), Er(III) és Ni(II) sói, ezeknek dietilén-triamin-pentaecetsawal, etilén-diamin-tetraecetsawal és más ligandumokkal képzett ionkomplexei, valamint stabil szabad gyököket tartalmazó paramágneses vegyületek, előnyösen szerves nitroxidok vannak jelen; ezek a paramágneses anyagok tehát adott esetben egy kelátképző szerrel vannak asszociálva. A szóban forgó kontrasztanyagok kívánt esetben töltéssel rendelkező polimert és fajlagos sejtfelismerést elősegítő anyagokat is tartalmaznak.
Az emberekről készített NMR-felvételek hamarosan fontos diagnosztikai eszközzé válnak. Ezen felvételeknél elérhető felbontás jelenleg azonos szinten áll a számítógépes röntgen-tomográfiáéval. Az NMR alapvető előnye ugyanakkor abban a képességében rejlik, hogy eltérő T, és T2 NMR relaxációs idők segítségével szövettípusokat képes megkülönböztetni. A kontraszt szót ebben az értelemben használjuk. Mivel a mágneses magrezonancia relaxációs időket erősen befolyásolhatja paramágneses ionok (mint például a Mn/II/ és a Gd/III/) vagy stabilis szabad gyökök jelenléte, ezeket az anyagokat abból a célból vizsgáltuk, hogy meghatározzuk esetleges további kontrasztnövelő sajátságukat, nevezetesen, hogy megváltoztatják-e a víz protonjainak Ti és T2 értékeit kimetszett állati szervekben és élő állatokban; lásd például Mendonca Dias és munkatársai „Paramágneses kontrasztanyagok használata NMR-felvételeknél” című cikkét, Absts. Soc. Mag. Rés. Med., 1982,103-104. oldal; Brady és munkatársai „Lokálisan ischaemiás kutyaszívek proton-mágneses magrezonancia vizsgálata: a paramágneses protonjel fokozásának hatásai” című cikkét, Radiology, 1982, 144, 343-347. oldal; Brasch és munkatársai „Nitroxid stabilis szabad gyökök alkalmazása NMR-felvételek kontrasztjának fokozására” című cikkét, Absts. Soc. Mag. Rés. Med., 1982. 25-26. oldal; Brasch „Fejlesztés alatt: Kontrasztnövelő módszerek és lehetséges alkalmazásaik az NMR-felvételtechnikában” című cikkét, Radiology, 1983, 147, 781-788. oldal; valamint Grossmann és munkatársai „Agyi tályogok gadolíniummal kiemelt NMR-felvételei” című cikkét, J. Comput. Asst. Tomogr., 1984,8,204-207. oldal. A közölt eredmények azt mutatják, hogy a kontrasztot különböző paramágneses anyagok egész sora fokozza.
Mindezek ellenére a számításba vehető paramágneses anyagok számához képest a használható vegyületek száma erősen korlátozott, az optimális hatás eléréséhez szükséges koncentrációnál fellépő toxikus hatások miatt. így a tématerület legkomolyabb és legnehezebb problémáinak olyan kontrasztanyagok felkutatását tekintik, amelyeknek toxicitása elegendően alacsony ahhoz, hogy lehetővé tegye végleges alkalmazásukat az orvosi diagnosztikában. (Lásd Mendonca Dias és munkatársai „Paramágneses kontrasztanyagok használata NMR-felvételeknél” című cikkét, Absts. Soc. Mag. Rés. Med., 1982,105-106. oldal.) Az itt leirt találmány így arra irányul, hogy növelje a csökkentett toxicitású NMR-kontrasztanyagok használhatóságát. A használhatóság növelése egy paramágneses anyagnak egy olyan micelluláris testecskével való asszociálódása révén valósítható meg, amely az NMR-felvételek egyedülálló követelményeihez alakított tulajdonságokkal rendelkezik.
Másik jelentős problémaként említhető meg, hogy a micellák (vezikulák) által elfoglalt maximális szövettérfogat általában nem haladja meg a körülbelül 0,l%ot. ami azt jelenti, hogy a micellának már nagyon kis térfogat-százaléknál is alkalmasnak kell lennie arra, hegy befolyásolja a felvételt. Ebből a szempontból tehát a paramágneses NMR-kontrasztanyagok alapvetően különböznek a röntgensugár abszorbensként vagy gammasugár emitterként alkalmazott kontrasztnevelő anyagoktól, vagy más hasonló felvételi módozatoknál alkalmazott anyagoktól, melyeknél a jel vagy a csillapodás egyszerűen arányos az egységnyi térfogatban lévő részecskeszámmal, függetlenül attól, hogy azok kémiailag többé-kevésbé kötöttek-e vagy sem. A mágneses magrezonanciában a kontrasztanyagok (ionok vagy stabilis szabad gyökök) azáltal fejtik ki hatásukat, hogy megnövelik a szabad elektrospint környező víz-protonok zömének relaxációs idejét. Ajelenség függ a víz gyors cserélődésétől az ion környezete és a t ívolabbi régiók között, illetve a víz gyors diffúziójától egy szerves szabad gyök szomszédságában. Ilyen estiekben a nettó relaxációs idő a szabad és a kötött vízre vonatkozó súlyozott átlagként adódik.
\ paramágneses anyagnak egy foszfolipid vezikulába való zárványosítása, úgy tűnik, ellentmond annak a megfigyelésnek, hogy a paramágneses anyagot csak a körött víz közelítheti meg, mely tipikusan a teljes térfogat kevesebb mint 0,1%-a. Ilyen körülmények között az NMR-fevétel nem változhatna kimutatható mértékben a vezikulába ágyazott kontrasztanyag esetén. Egyedül a víznek a kettős rétegen keresztül történő elegendően gyors cserélődése növelheti a víz főtömegének relaxációs idejét, amint az Andrasko és munkatársai „Gyors víz-diffúzió tanulmányozása NMR-módszerrel lipid kettős rétegen keresztül dipalmitoil-lecitin ve5 ikulákban” című cikkükben leírták (Biochem. Bicphys. Rés. Comm., 1974, 60, 813-819. oldal). Jelen találmány éppen ezen probléma megoldását célozza azáltal, hogy a micella és a paramágneses anyag egy olyan összekapcsolását javasolja, mely egyidejűleg maximalizálja a micella stabilitását és a víznek membrán kettősrétegen keresztül történő cserélődésének sebességét.
A foszfolipid vezikulákról tudjuk, hogy bizonyos fajta szövetekben feldúsulnak, így a hatásukra létrejövő kor trasztnövekedés szövetspecifikus lesz. így például megfigyelték, hogy a foszfolipid vezikulák egerekbe ültetett daganatokban feldúsulnak, lásd Proffitt és munkatársai „A retikuloendotéliás rendszer liposzomális blokádja: A daganatok megjavított felvételtechnikája kis unilamellás vezikulákkal” című cikkét (Science, 1983,220, 502-505. oldal), valamint Proffitt és munkatársai „In(III)-NTA-val töltött liposzomák daganatmegjelenítő képessége: Bioeloszlás egerekben” című cikkét (Journal of Nuclear Medicine, 1983, 24, 45-51. oldal.)
A találmány ugyancsak kiterjed a micelluláris testecskék kontrasztanyag-hordozóként felhasználására olyan alkalmazásokban, ahol a micellák antitestekhez
194 741 kapcsolódnak. Bár beszámoltak arról, hogy a kimetszett szív Ϊ! relaxációs idejének szelektív csökkentése érhető el mangánnal jelölt monoklonális antimiazin antitestekkel (lásd Brady és munkatársai „Infravörös miokardium relaxációs idejének szelektív csökkentése mangánnal jelölt monoklonális antitestekkel” című cikkét, Soc. Magn. Rés. Med., Works in Progress, Second Annual Meeting, 1983,10. oldal), mindazonáltal főleg olyan megfontolások alapján, mint az előzőekben említett toxicitás, az ilyen antitestek gyakorlati alkalmazása igen korlátozott mindmáig. Jelen találmány alkalmazása esetén az érzékenység növekedése mellett a specifikusság is megmarad, az antitestnek a micelluláris testecskék felületéhez való kapcsolódása miatt. Az antitestek nagyfokú specifikusságot biztosítanak bizonyos sejt vagy szövettípusokra, míg a kapcsolódó vezikula hatóanyag-hordozók azon szint fölé emelik az NMR-kontrasztot, mely csupán az antitesthez kötődő ionok által lenne elérhető.
Az itt leírt találmány olyan micelluláris testecskék előállítására irányul, mint a kicsi unilamelláris hólyagocskák, melyekhez valamilyen paramágneses anyag asszociálódik, tipikusnak tekinthető esetben a paramágneses vegyületeket a vezikulák zárványosítják. A vezikulák antitestekkel is rendelkezhetnek, mint például az antimiozin vagy az antifibrin, melyek vagy a felületükhöz kapcsolódnak, vagy olyan felületi módosulást okoznak, melyekre specifikus sejtreceptorok találhatók bizonyos szövetekben.
A vezikulaalkotókra példák az olyan foszfolipidek, mint a DSPC (disztearil-foszfatidil-kolin), a DPPC (dipalmitil-foszfatidil-kolin) vagy a DMPC (dimirisztilfoszfatidil-kolin). A paramágneses anyagok olyan átmeneti fémek, aktinidák és lantanidák sói, mint a Gd(III), a Mn(II), a CU(II), a Cr(III), a Fe(II), a Fe(III), a Co(II), az Er(III) és a Ni(II), valamint ugyanezen ionok komplexei DTPA-val (dietilén-triamin-pentaecetsav), EDTA-val (etilén-diamin-tetraecetsav) és egyéb ligandumokkal. Más paramágneses vegyületek szabad gyököket tartalmaznak, mint például a szerves nitroxidok.
A vezikulákba zárványosított kontrasztanyagok előállíthatok, ha megfelelő módon eloszlatjuk a lipid vezikulákat a paramágneses reagenst tartalmazó vizes oldatban, például szonikációval, homogenizálással, kelét dialízissel, illetve egyéb módszerekkel, majd megszabadítjuk a vezikulákat a reagensektől ultraszűréssel, gélszűréssel vagy más hasonló eljárással. A továbbiakban a paramágneses anyag oldata úgy módosítható, hogy az egységnyi reagens relaxációs sebessége maximális legyen, mely cél elérhető például egy töltött polimerrel (például poli-L-lizinnel) való összekapcsolással.
A jelenlegi szóhasználat szerint a „micelluláris testecske” és a „micellák” olyan részecskéknek felelnek meg, melyek amfifil molekulák aggregációjakor képződnek. Jelen találmányban ezen amfifil vegyületek a biológiai lipidek.
A „vezikula” olyan micellát jelent, mely többnyire gömb alakú, és gyakran olyan lipidből nyerhető, mely kettősrétegű membránt alkot és általában „liposzómaként’’ emlegetik. Az ilyen vezikulák előállítási módszerei manapság rendkívül jól ismertek. Tipikusan foszfoiipidekből állítják elő őket, például disztearil-foszfatidil-kolinból vagy lecitinből, jellemzőjük, hogy más anyagokat is tartalmazhatnak, például neutrális lipideket, valamint felületmódosító, többnyire pozitív, illetve negatív töltésű vegyületeket. Az előállítási technikától függően a burkoló felület lehet egyszerű kettősrétegű gömbhéj (unilamelláris vezikula) vagy többszörös rétegű (multilamelláris vezikula).
DSPC = disztearil-foszfatidil-kolin
Ch = koleszterin
DPPC = dipalmitil-foszfatidil-kolin
DMPC = dimirisztil-foszfatidil-kolin
DTPA = dietilén-diamin-pentaecetsav
EDTA = etilén-diamin-tetraecetsav
SUV = kicsi unilamelláris vezikula
A paramágneses vegyületek komplexei ioncserélt vízben vagy pH = 7,4-es (PBS) pufferben (4,0 mM Na2HPO„ 0,90% NaCl) készültek.
Gd(III)-citrát. Az 1,0 mM Gd(III)-10,0 mM citrát törzsoldata úgy készült, hogy 10,0 pmól GdCl·,. 6H2O (99,999%, Aldrich)-t oldottunk 9 ml ioncserélt vízben, majd hozzáadtunk 100 mól Na2-citrátot (analitikai minőség, Mallinckrodt). A pH-t semlegesig változtattuk, a térfogatot 10,0 ml-re egészítettük ki mérőlombikban.
Mn(ll)-citrát. Az 1,0 mM Mn(II) 10,0 mM citrát törzsoldata úgy készült, hogy 9 ml vízbe 10,0 /mól MnClj. 4H2O (analitikai minőség, Baker)-t és 100 /mól Na3-citrátot adagoltunk. A semleges pH elérése után a térfogatot 10,0 ml-re egészítettük ki mérőlombikban.
Gd(III)-DTPA. A 200 mM Gd(III)-210 mM DTPA törzsoldata úgy készült, hogy minimum 6NNaOH-ban
2,1 mmól DTPA-t oldottunk 10 ml-es mérőlombikban. 2,0 mmól GdCl3.6H2O-t adtunk hozzá, majd 6N NaOH-dal beállítottuk a pH-t 7,4-re. Ezután a mintát jelre töltöttük.
La(III)-DTPA. A 200 mM La(III)-210 mM DTPA törzsoldata a Gd(III) DTPA-oldattal analóg módon készült, LaCl3.7H2O (99,999%, Aldrich) felhasználásával.
Er(III)-EDTA. A törzsoldat a Gd(III)-DTPA előállításánál megismert módon készült.
Poli-L-lizin-hidrobromid. A közelítőleg 25 000 és 4000 átlagos molekulatömegű minták a Sigma Chemical Co-nál készültek.
Koleszterin. Mallinckrodt gyártmány (98%).
DSPC. A Cal-Biochem. szintetikus anyaga.
DSPCIkoleszterin vezikulába zárványosított kontrasztanyag 16 mg DSPC-t és 4 mg koleszterint oldottunk 2 ml CHCl3-ban. 0,16 mM koleszterin CHCI3-as oldatának 10 μΐ-ét [u-14C] (56,5 mCi/mmól) adagoltunk hozzá abból a célból, hogy a végső preparátumokban a lipid-koncentráció kvantitatívan mérhető legyen. A lipidoldatot vákuum exszikkátorban szárazra pároltuk, ily módon a tesztcsőben egy lipidfilm képződött. Nem azonnali felhasználás esetén az anyagot ugyanott tároltuk.
A kicsi unilamelláris vezikulák (SUV) előállítása 200 mM Gd(III)-DTPA oldatban történt, az ionkomplex 2,0 ml mennyiségű a leírt módon előállított törzsoldatának a fenti módon nyert, tesztcsőben lévő lipidfilmhez való hozzáadásával. Az oldat hozzákötődött a lipidfilmhez. A keveréket Ultrasonics Inc. szondával szonikáltuk, 56 W-os mikrohegy alkalmazásával. A cső hűtése vízfürdőbe való részleges bemerítéssel lett megoldva, a szonikáció nitrogén atmoszféra alatt történt. A szonikáció teljes ideje 15 perc vagy több volt, addig tartott a szonikáció, míg az oldat enyhén opálossá nem vált.
A vezikulán kívüli paramágneses reagens elválasztá3 sa a SUV-tól PBS-ben duzzasztott Sephadex G-50 oszlopokon keresztüli átpréseléssel történt, az anyagot 3 ml-es műanyag fecskendő szárába töltöttük és előcentrifugáltuk. A vezikulaoldat a fecskendő csúcsába került, a centrifugálás során képződő eluátumot megfelelően elhelyezett üvegcsőbe gyűjtöttük. A vezikuláknak az oszlopoktól való elválasztására 300 pl PBS-t használtunk fel. Az eljárást háromszor teljesen megismételtük, hogy a szabad reagens maradék koncentrációja minimális legyen és kicserélődjön PBS-re.
A végtermékben a vezikula koncentrációt az oldat alikvot részének szcintillációs számlálóval történő vizsgálatából határoztuk meg, standard keveréket is felhasználva. A közepes vezikulaméretet Model 200 típusú (Nicomp Instruments) lézeres részecskemérővel határoztuk meg. Minden egyes kísérletben a részecskeméretet 600± 100 Á-nek találtuk.
Az NMR relaxációs idők mérése az alábbi módon történik.
Ha másképp nincs jelezve, a T, és T2 mérése 20 MHz-es impulzus NMR spektrométerrel (IBM PC/20 gyártmány) lett elvégezve, mely IBM PC mikroszámítógéphez kapcsolódott. Z, az úgynevezett inversion-recovery módszerrel (lásd Farrar, T.C., Becker, E.D., Impulzus és Fourier-transzformációs NMR, 1971, Academic Press, New York, című könyvét), míg T2 a CarrPurcell szekvenciák alapján (lásd Carr, Η. Y., Purcell, E.H., Diffúzió hatása a szabad precesszióra NMR kísérletekben, Phys. Rév., 1954, 94, 630-633. oldal, című cikkét), a Meiboom és Gill által javasolt módosításoknak megfelelően (Meiboom, S., Gill D., Módosított spin-echo módszer a mag-relaxációs idők mérésére című cikke, Rév. Sci. Instrum., 1958, 29, 688-691. oldal) került meghatározásra. A számítógépe automatikusan, legkisebb négyzetes értelemben exponenciálisokat illesztett a mérési adatokra. A közölt T, és T2 adatok 38 °C-os mérési hőmérsékletnek felelnek meg. A T, értékek kísérleti bizonytalansága ±10% reprodukálhatóságuk ±5%. A T2 értékek általában ±20°/o-on belül pontosak, és ±5%-ra reprodukálhatók. Ez a pontosság elegendő ahhoz, hogy a kívánt hatásokat világosan megfigyelhessük. Néhány T, értéket a 10 MHz-en működő Praxis II típusú NMR spektrométeren határoztunk meg, 25 °C mérési hőmérsékleten.
Állatkísérletek
Az EMT6 tumoros szövet [lásd Laboratory Animál Research, Vol. 27. No. 5, 831-851 (1977), és Cancer Research, Vol. 39 (1979)] hímnemű Balb/c egerek horpaszának bőre alá lett beültetve, majd 10 napig növekedhetett. A tizedik napon az egereket intravénásán beinjektáltuk 200 pl vezikulaoldattal vagy kontrollpufferrel. Az egereket meghatározott időközönként elpusztítottuk, a tumorokat felboncoltuk. Néhány kísérletben a májat és a lépet is boncoltuk. A szövetet PBS-ben öblítettük, könnyedén leitattuk, megmértük, majd légmentesein zárható műanyag zsákokba csomagoltuk. Az NMR relaxációs méréseket a boncolást követő fél órán belül végeztük el, a vízvesztés és az emiatt megváltozó Ti és T2 idők hibájának csökkentése céljából.
Az ábrák jelentése az alábbi:
Az 1. ábra a longitudinális relaxációs időt ábrázolja a paramágneses ionok koncentrációjának függvényében. A szabványoldatok alikvot részeit PBS pufferhez adagoltuk. A T , méréseket 10 MHz-en végeztük a 90°-90° módszerrel. A mérési hőmérséklet 25 °C volt. Az
Er-EDTA koncentráció skálája nM egységekben, míg a
Mn-citráté M egységekbe került megadásra.
A 2. ábra l/T,-nek a hozzáadott különböző formájú Cd-ionoktól való függését ábrázolja. A szabványoldatok alikvot részeit vízhez (Gd/citrát esetén) vagy FBShez (Gd/DTPA és vezikulába zárványosított Gd/DTPA esetén) adagoltuk, a jelzett ion teljes koncentrációjának meghatározása céljából.
A 3. ábra a paramágneses ionkomplexek koncentrációjának hatását ábrázolja az 1/T,, illetve 1/T2 értékekre. A DSPC/koleszterin vezikulák PBS-be ágyazott növekvő koncentrációjú Gd-DTPA-val lettek előállítva. A lipid (vezikula) koncentrációk 8,3 mg/ml teljes lipid végső koncentrációval megegyező FBS-re lettek beállí va.
A 4. ábra mutatja az egérszövetek és daganatok relaxációs sebességeit. A Balb/c egerekbe beinjekcióztunk 200 pl-t a DSPC/koleszterin vezikulákban zárványosított 200 mmól Gd-DTPA-ból (10 mg/ml lipid) (Gd vez.), a DSPC/koleszterinben zárványosított 200 mmól La-DTPA-ból (La vez.), 2,0 mmólt a PBS-ben o dott Gd-DTPA-ból (Gd puffer) vagy PBS-t (puffer). 16 óra elteltével az egereket megöltük és a szöveteket felboncoltuk. A közölt relaxációsidők legalább három állat átlagát mutatják.
Az 5. ábra mutatja a hozzáadott poli-L-lizin hatását a Gd-DTPA oldatok relaxációs sebességére. A poIi-L-lizin szárazon mért alikvotjait 2,0 ml 2,0 mmól GdETPA-t tartalmazó vízben oldottuk. A T, és T2 idők mérése a szövegben leírtak szerint történt.
A 6. ábra egérdaganatok 1/T, idejét mutatja. 200 rrM Gd-DTPA-t tartalmazó, 10 mg/ml-es koncentrációjú lipid vezikula preparátumok 200 pl-jét injektáltuk olyan Balb/c egerek farokvénájába, melyek 10 napos, implantált daganattal rendelkeztek. Meghatározott időközönként öltük meg az egereket, a boncolás után azonnal mértük a daganatok T, idejét. A kontroll egyedekbe vagy nem injekcióztunk semmit (0) vagy 200 pl PBS-ben oldott 2,0 mM Gd-DTPA-t injekcióztunk (□). Az ábrán a három kísérletet egyszerre tüntetjük fel. A 0 és □ adatok esetén minden pont az egyedi daganatokra jellemző T, értéket adja meg. A Δ adatok esetén 2 vagy 3 T, értéket mértünk véletlenszerűen az egyedi daganatra.
A következőkben, részletesebben referálva az ábrákat, a jelen találmány alkalmazásával elérhető javított eredményeket diszkutáljuk. Az 1. ábrán az Er-EDTA és a Mn-citrát oldatok relaxációs sebességeit láthatjuk. A 10 MHz-en és 25 °C-on mért 1/T, értékeket ábrázolttik az ionkoncentráció függvényében. Az ábra egér lágy szöveteire vonatkozó átlagos 1/T, értékeket tüntet fel. A koncentráció skála az Er-EDTA-ra millimólos, míg a Mn-citrátra mikromólos. 18 mM Er-EDTA komplex hozzáadása a PBS oldathoz 2,4 s''-gyel növeli az egérszövet 1/T, értékét. Ugyanezen relaxációs sebesség érhető el csupán 0,17 mM Mn-citrát komplex hozzáadásával is. Tehát a Mn gyenge komplexe mintegy százszor hatásosabb a relaxáció növelésében, mint az erősen kötött Er-EDTA, ami jól mutatja a Mn(II)ion lényegesen erősebb relaxációs erejét, akárcsak a Mn-nak a vízhez való fokozottabb hozzáférését.
A 2. ábrán a Gd(III) relaxációs hatásait tanulmányozhatjuk. 20 MHz-en 1 mM Gd-citrát hozzáadása a H2O 1/T, értékét 8,1 s'’-gyel növeli meg. DTPA-hoz kötődve az ion fele ekkora relaxációs hatással rendel-47
194 741 kezik. Ez a csökkenés amiatt lép fel, minthogy a vízmegkötő helyeknek a DTPA funkciós csoportjai által okozott ellépését részben egyensúlyozza a komplex növekvő forgási relaxációs ideje. A DSPC-koleszterin vezikulákban zárványosított Gd-DTPA komplexekkel az oldat 1/T, értéke 2,5 s'-es értékre növekszik 1,0 mM teljes Gd-DTPA-ra. Bár a szabad Gd-DTPA-nál kevésbé hatásosan, de a vezikulák szintén lényegesen befolyásolják a víz relaxációját.
A 3. ábra mutatja paramágneses ion-komplexek koncentrációjának hatását a vezikulába zárványosított Gd-DTPA relaxációs sebességére. A vezikula oldatok 1 /Ti és 1/T2 értéke a Gd-DTPA koncentrációval lineárisan nő egészen 150 mM-ig. A következő egyenlet, _J___Eh_ , _L
T, kis - (T,b+fö) T,a’ ahol b a vezikula belsejét és a a külső részt jelöli, rb a belső víz protonjainak élettartama, T,b a belső víz tiszta relaxációs ideje (a paramágneses reagens jelenléte miatt kis érték) és Pb a víz aránya a vezikulán belül, 1/ T,-nek a paramágneses ion koncentrációjától való lineáris függését jósolja mindaddig, míg T, értéke el nem éri vagy kisebbé nem válik rb értékénél. A 3. ábrán látható eredmények azt sugallják, hogy egészen 150 mM Gd-DTPA koncentrációig a vezikulán belüli T, érték meghaladja a b kicserélődési élettartamot.
Az egér szövetében és daganataiban tapasztalt relaxációs hatásokat a 4. ábra mutatja. A Balb/c egér máj, lép, vese és EMT6 daganatos szöveteinek T, értékeit vetjük össze. 16 órával a paramágneses reagensek, illetve a kontroll anyagok beinjektálása után megállapíthatjuk, hogy a vezikulába ágyazott Gd-DTPA lép és EMT6 daganatok esetén elősegíti a T, érték szignifikáns csökkenését. Kontrollként, lép esetén a diamágneses La-DTPA vezikulába zárványosított komplexét, daganat esetén PBS puffért és PBS puffer plusz 2,0-t alkalmaztuk. A Gd/DTPA-vezikulákkal kezelt egerek esetén az átlagos T, értékek 17%-kal kisebbek a nem kezelt kontroll állatokban mérhetőknél.
A megelőző adatok lehetőséget teremtenek a minimális Gd/DTPA vagy más paramágneses specieszek vezikulán belüli azon minimális koncentrációjának becslésére, mely már kontrasztnövelést eredményez. A hatáskiváltó tényezőknek komplex sora állítható fel, melyben szerepel a daganatos sejtek membránjain keresztül történő protonkicserélődés sebessége, a szabad Gd/DTPA-nak lipid vezikulákból való kimosódási sebessége, valamint a makromolekulás környezetben lévő komplex módosult forgási korrelációs ideje, amely befolyásolja a proton T, relaxációs sebességét és így a kontraszt növekedését. A vizsgált szövetben felhalmozódó vezikulák mennyisége határozza meg a zárványosított paramágneses anyag minimálisan szükséges koncentrációját. Egérdaganati modellre bizonyították, hogy a daganat térfogatának közelítően 0,1%-a betöltött intakt vezikulákkal.
Míg a zárványosított paramágneses anyag pontos mennyisége változhat a használt anyag minőségétől és a fent említett tényezőktől függően, általában igaz, hogy a paramágneses anyag mennyiségének el kell érnie a vezikulánkénti 50 Mm-t. A maximális mennyiséget az ár, a toxicitás és a vezikula szerkezete határozza meg, de rendszerint nem magasabb 1 M zárványosítási koncentrációnál.
Az 5. ábra mutatja be a polimer hozzáadása miatt megnövekedett relaxációs sebességeket. A Gd-DPTA relaxációs hatása növelhető a pozitív töltésű polimer, a poli-L-lizin hozzáadásával. Az 5. ábrán látható a 25 000 átlagos molekulatömegű poli-L-lizinnek 2,0 mM GdDTPA-t tartalmazó vizes oldathoz való hozzáadásának eredménye. Az 1/T, relaxációs sebesség 40%-kal, míg 1/T2 30%-kal növekedik. 3 mg/ml-es szint fölött adagolt poli-L-lizin hatására már csupán „gyenge kötődés” jön létre. Ez a kikapcsolási jelenség szintén azt mutatja, hogy a relaxációs sebesség növekedése nem a viszkozitás növekedésének tulajdonítható. Ugyanis ez a hatás a teljes koncentrációtartományban lineárisan változna a poli-lizin adagolásával. A kisebb molekulatömegű poliL-lizin kevésbé hatásos. A Gd-DTPA negatív töltésű komplex, amely reverzibilisen kötődik a pozitív töltésű poli-lizinhez. A makromolekula nagy mérete és ebből következő lassú mozgása hatásosabbá teszi a paramágneses ion relaxációját. Ez a hatás használható ki a GdDTPA és a poli-lizin vagy más pozitívan töltött makromolekula együttes zárványosításával, mely esetben nő az egységnyi Gd-ionra eső hatás és így csökken a végtermék nettó toxicitása.
Az EMT6 tumorokon mért relaxációs effektus időlefutása látható a 6. ábrán. A vezikulában zárt GdDTPA a maximális hatást a reagens injektálása után
3-4 órával éri el. A 4 óra elteltével tapasztalt átlagos hatás közelítően azonos az injektálás után 16 órával mérhető hatással, ami sugallja, hogy a rendszer egyensúlyi állapotba kerül, ahol a daganat okozta sebességnövekedést a vérkeringésbe kerülő anyagveszteség kompenzálja.
A 6. ábrán feltüntetett kísérleteknél alkalmazott dózisnál magasabbat használva, három különböző liposzómának Balb/c egerek bőr alá implantált EMT6 daganataira gyakorolt hatását teszteltük. Az egerekbe intravénásán injekcióztuk a reagenst, majd meghatározott időközönként megöltük őket. Mértük a daganati és máji T, értékeket, az állat megölésétől számított fél órán belül. A daganatokra vonatkozó eredményeket az I. táblázatban, a májra vonatkozókat a II. táblázatban tüntetjük fel. A csupán puffért kapó állatok átlagos daganati T, értéke 960± 41 ms (n = 25), míg az átlagos máji T, értéke 392±31 ms (n = 24). Az 1:1 arányú DSPC/CHOL alkalmazása esetén az injektálás után 24 órával a daganati relaxációs idő 665±28 ms-ra (n = 4) csökkent, míg ugyanezen állatok átlagos máji T, értéke 370± 13 ms (n = 4) volt. Tehát daganatok esetén a T, érték 44%-os változása lényegesen meghaladja a májra vonatkozó csökkenés mértékét (6%).
Az általánosan használatos sokféle liposzóma alkalmazása során a tapasztalatok szerint a máj (és a lép) akkumulálja a vezikuladózis döntő részét. A jelen találmányban megadott különleges összetételű anyag így daganat-specifikus, legalábbis az NMR relaxációs időre gyakorolt hatását tekintve. A jelen találmányban megadott, vezikulába ágyazott paramágneses komplex kielégíti az NMR-elvétel kontrasztanyag iránti igényét; azaz bizonyos szövetekben a Ti idő redukcióját okozza. Jelen esetben a kontrasztanyag alkalmazása előtti eredendően hosszú daganati T, idő (átlaga 960 ms) az NMR-felvételen sötéten hagyja a daganatot, míg a reagens injektálás után a daganat világosan megjelenhet vizsgálatkor.
194 741
I. táblázat
DAGANATOK RELAXÁCIÓS SEBESSÉGE EMT6 daganat a Balb/c egér horpaszában (10 napos daganati növekedés)
Vezikulába ágyazott kontrasztanyag A megadott értékek; T, (ms-ban) + standard deviáció n = egerek száma
Rendszer* Injektálás utáni idő (óra) Megjegyz.
1-2 2-5 5-8 24
PBS kontroll 962+ 24 974+50 920± 19 926 Teljes átlag
n = 9 n=ll n = 4 960+41 n = 25
DPPC/CHOL
2:1 Gd/DTPA 869+28 840+30 845±40
200 mM n = 14 n = 13 n = 13
DSPC/CHOL
2:1 Gd/DTPA 812+45 768+30 769+28
200 mM n = 8 n = 8 n = 4
DSPC/CHOL
1:1 710± 19 720± 21665+28
Gd/DTPA
200 mM n = 2 n = 3 n = 4 ♦Injektálási térfogat = 250-300 ml A lipidkoncentráció általában 20 mg/ml
II. táblázat
MÁJAK RELAXÁCIÓS SEBESSÉGE Daganatos Balb/c egér Kontrasztanyag injektálás után Vezikulába zárt NMR kontrasztanyag A megadott értékek; T, (ms-ban) + standard deviáció n = az egerek száma
Rendszer* Injektálás utáni idő (óra) Megjegyz.
1-2 2-5 5-8 24_ ™S *t „ 400+39 380+26 411+6 412 kontroll atlag n = 8 n = 12 n = 3 n = 1
DPPC/CHOL
2:1 379+35 377+29 375±34
Gd/DTPA
200 mM n = 11 n= 11 n= 11
DSPC/CHOL
2:1 349+17 345+13 379+29
Gd/DTPA
200 mM n = ll n=ll n = 7
DSPC/CHOL
1:1 330+32 342+11370+13
Gd/DTPA n = 2 n = 3 n=4 ♦Injektálási térfogat = 250-300 ml
A lipidkoncentráció általában 20 mg/ml
Az NMR felvételi technika számára akkor igazán hasznos egy kontrasztanyag, ha minimális toxicitás mellett maximálisan növeli 1ZT, -et és specifikus a vizsgálni kívánt szövettípusra. Jelen találmány anyagai kielégítik ezen követelményeket. Makromolekuláris sokaság növelheti az egységnyi ion okozta relaxációs hatást, ahogyan a poli-lizin Gd/DTPA oldatok 1/T, és 1/ T2 értékeire gyakorolt hatása demonstrálta (lásd 5. ábra). Az alacsony toxicitást úgy értük el, hogy a közönséges körülmények között toxikus paramágneses iont egy erős keláttal asszociáltuk a makromolekulás sokaságba (zárványosítás vezikulába), mely esetben alig kerül ion a vérkeringésbe. Az NMR relaxáció tovább növel szik azáltal, hogy a vezikula maximálja a víz protonjainak az ionhoz való hozzáférhetőségét. Ez a hatás, mint a zárványosított Gd/DTPA erős relaxációs hatása mutatja (lásd a 2. ábra), kísérleteinkben bekövetkezett. A szövetspecifitást a micelluláris sokaság komplex természete biztosítja, minthogy a biológiai alakfelismerési folyamatok a makromolekulát meghatározott helyekre „vezetik”. Jól demonstrálja ezt a foszfolipid vezikiIáknak a szöveti relaxációs sebességekre gyakorolt eltérő hatása (lásd 4. ábra, valamint I. és II. táblázat), továbbá a vezikulákba ágyazott Gd/DTPA-nak a daganati relaxációra gyakorolt specifikus hatása, összevetve a közel azonos, teljes koncentrációjú oldott szabad Gd/DTPA hatásával (lásd 4. és 6. ábra).
Fentiekben leírtuk, hogy az antitesteknek vezikulákhoz kötődése szövetspecifitást eredményez (lásd Martin és munkatársai „Liposzómák sejtekhez való immunspecifikus kötődése” című cikkét, Biochemistry, 1981, 20, 4229-4238. oldal), melynek közlése, speciálisan, a fenti referenciában foglaltatik. Az antimiozin kimetszett szívizom NMR-felvételéhez potenciális jelölt. Az antifibrin előállítását a közelmúltban publikálták (lásd Hűi és munkatársai „Monoklonális antitestecskék szintetikus fibrinszerű peptidek emberi fibrinhez és nem fibrinogénhez való kötésére” című cikkét, Science, 1983, 222, 1129-1131. oldal). Ez az antitest várhatóan a vérrögök azon helyein koncentrálódik, ahol a fibrin képződik. Az antifibrinhez kapcsolódó reagenshordozók a véredényekben lévő rögök és trombusok NMR-felvételéhez szolgálhatnak kontrasztanyagként. Mindazonáltal vannak más felületi mechanizmusok is, melyek a sejtfelismerést segítik, és arról ismertek, hogy a vezikulák bioeloszlását módosítják. Például a hólyagocskák felületéhez kötődő szénhidrát receptor analógokról kimutatták, hogy kiválasztják a vezikulákat (lásd Mauk és munkatársai „Lipid vezikulák kiválasztása: Szénhidrát receptor analógok egérleukocitákhoz való specifitása” című cikkét. Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 1980, 77, 4430-4434. oldal; Mauk és munkatársai „Vezikula kiválasztás: Egérleukociták felszabadulási ideje bőr ala adott injekciók hatására” című cikkét, Science, 1980, 207, 309-311. oldal). Az ilyen felületmódosító anyagok általi kiválasztás közvetlenül alkalmazható a paramágneses ion bioeloszlásának módosítására.

Claims (5)

  1. Szabadalmi igénypontok
    1. Paramágneses anyagokat tartalmazó mágneses magrezonancia kontrasztanyagok, melyekben a paramágneses anyag adott esetben egy kelátképző szerrel van asszociálva, azzal jellemezve, hogy 50 pmól/l és 1 mól/1 közötti koncentrációban paramágneses anyagként átmeneti fémek, aktinidák és lantanidák sói, így Gd(III), Mn(II), Cu(II), Cr(III), Fe(II), FeQII),
    -611
    194 741
    Co(II), Er(III) és NI(II) sói, ezeknek dietilén-triaminpentaecetsawal, etilén-diamin-tetraecetsavval és más ligandumokkal képzett ionkomplexeí, valamint stabil szabad gyököket tartalmazó paramágneses vegyületek, előnyösen szerves nitroxidok vannak jelen koleszterin segítségével előállított foszfolipid-vezikulákban, és a kontrasztanyag kívánt esetben töltéssel rendelkező polimert és fajlagos sejtfelismerést elősegítő anyagokat is tartalmaz.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti kontrasztanyagok, azzal jellemezve, hogy ezekben a foszfolipid disztearil-foszfatidinil-kolin, dipalmitil-foszfatidinil-kolin vagy dimirisztil-foszfatidinil-kolin.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti kontrasztanyagok, azzal jellemezve, hogy töltéssel rendelkező poli5 merként poli-L-lizint tartalmaznak.
  4. 4. Az 1. igénypont szerinti kontrasztanyagok, azzal jellemezve, hogy fajlagos sejtfelismerést elősegítő anyagként antitestet vagy egy szénhidrátot tartalmaznak,
  5. 5. A 4. igénypont szerinti kontrasztanyagok, azzal 10 jellemezve, hogy antitestként antimiozinantitestet vagy antifibrin antitestet tartalmaznak.
HU851601A 1984-04-27 1985-04-25 Process for the preparation of contrast substances used for nmr exposures HU194741B (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US60472184A 1984-04-27 1984-04-27
US06/720,954 US4728575A (en) 1984-04-27 1985-04-10 Contrast agents for NMR imaging

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT37569A HUT37569A (en) 1986-01-23
HU194741B true HU194741B (en) 1988-03-28

Family

ID=27084736

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU851601A HU194741B (en) 1984-04-27 1985-04-25 Process for the preparation of contrast substances used for nmr exposures

Country Status (12)

Country Link
US (1) US4728575A (hu)
EP (1) EP0160552B1 (hu)
KR (1) KR920010391B1 (hu)
AT (1) ATE61117T1 (hu)
AU (1) AU585506B2 (hu)
CA (1) CA1245553A (hu)
DE (1) DE3581830D1 (hu)
DK (1) DK168853B1 (hu)
ES (1) ES8703019A1 (hu)
HU (1) HU194741B (hu)
IE (1) IE58354B1 (hu)
IL (1) IL74985A (hu)

Families Citing this family (126)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4957939A (en) * 1981-07-24 1990-09-18 Schering Aktiengesellschaft Sterile pharmaceutical compositions of gadolinium chelates useful enhancing NMR imaging
US5017379A (en) * 1984-05-25 1991-05-21 Lemelson Jerome H Drug units and methods for treating blood clots
DE3577185D1 (de) * 1984-11-01 1990-05-23 Nycomed As Paramagnetische kontrastmittel fuer die anwendung in "in vivo" nmr-diagnostischen methoden und die herstellung davon.
SE465907B (sv) * 1984-11-01 1991-11-18 Nyegaard & Co As Diagnosticeringsmedel innehaallande en paramagnetisk metall
DE3508000A1 (de) * 1985-03-04 1986-09-04 Schering AG, Berlin und Bergkamen, 1000 Berlin Ferromagnetische partikel fuer die nmr-diagnostik
US5314642A (en) * 1984-11-27 1994-05-24 Igen, Inc. Interaction system comprising a surfactant-stabilized aqueous phase containing an antibody fragment
US4951675A (en) * 1986-07-03 1990-08-28 Advanced Magnetics, Incorporated Biodegradable superparamagnetic metal oxides as contrast agents for MR imaging
US5219554A (en) 1986-07-03 1993-06-15 Advanced Magnetics, Inc. Hydrated biodegradable superparamagnetic metal oxides
US4770183A (en) * 1986-07-03 1988-09-13 Advanced Magnetics Incorporated Biologically degradable superparamagnetic particles for use as nuclear magnetic resonance imaging agents
IL79559A0 (en) * 1986-07-29 1986-10-31 Univ Ramot Contrast agents for nmr medical imaging
US5320906A (en) * 1986-12-15 1994-06-14 Vestar, Inc. Delivery vehicles with amphiphile-associated active ingredient
DE3709851A1 (de) * 1987-03-24 1988-10-06 Silica Gel Gmbh Adsorptions Te Nmr-diagnostische fluessigkeitszusammensetzungen
ES2026257T3 (es) * 1987-06-23 1992-04-16 Hafslund Nycomed Innovation Ab Mejoras introducidas en la presentacion de imagenes por resonancia magnetica nuclear.
US5681543A (en) * 1988-02-29 1997-10-28 Shering Aktiengesellschaft Polymer-bonded complexing agents and pharmaceutical agents containing them for MRI
DE68912139T2 (de) * 1988-11-09 1994-04-28 Colin Tilcock Liposomale radiologische kontrastmittel.
US5314681A (en) * 1988-12-23 1994-05-24 Nycomed Innovation Ab Composition of positive and negative contrast agents for electron spin resonance enhanced magnetic resonance imaging
EP0469082B1 (en) * 1989-04-18 1995-04-05 Vestar, Inc. Liposomal targeting of ischemic tissue
US5230883A (en) * 1989-05-04 1993-07-27 Wisconsin Alumni Research Foundation Method for localization and treatment of tumors using polylysine complexes
US5087440A (en) * 1989-07-31 1992-02-11 Salutar, Inc. Heterocyclic derivatives of DTPA used for magnetic resonance imaging
US5064636A (en) * 1989-10-19 1991-11-12 Li King C P Paramagnetic oil emulsions as enteric MRI contrast agents
US5120527A (en) * 1989-10-19 1992-06-09 King Chuen Peter Li Paramagnetic oil emulsions as mri contrast agents
US5776429A (en) * 1989-12-22 1998-07-07 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of preparing gas-filled microspheres using a lyophilized lipids
US5922304A (en) 1989-12-22 1999-07-13 Imarx Pharmaceutical Corp. Gaseous precursor filled microspheres as magnetic resonance imaging contrast agents
US5469854A (en) * 1989-12-22 1995-11-28 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods of preparing gas-filled liposomes
US5230882A (en) * 1989-12-22 1993-07-27 Unger Evan C Liposomes as contrast agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same
US5334381A (en) * 1989-12-22 1994-08-02 Unger Evan C Liposomes as contrast agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same
US5542935A (en) * 1989-12-22 1996-08-06 Imarx Pharmaceutical Corp. Therapeutic delivery systems related applications
US20020150539A1 (en) * 1989-12-22 2002-10-17 Unger Evan C. Ultrasound imaging and treatment
US6088613A (en) * 1989-12-22 2000-07-11 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of magnetic resonance focused surgical and therapeutic ultrasound
US6001335A (en) * 1989-12-22 1999-12-14 Imarx Pharmaceutical Corp. Contrasting agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same
US5088499A (en) * 1989-12-22 1992-02-18 Unger Evan C Liposomes as contrast agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same
US5305757A (en) * 1989-12-22 1994-04-26 Unger Evan C Gas filled liposomes and their use as ultrasonic contrast agents
US5705187A (en) * 1989-12-22 1998-01-06 Imarx Pharmaceutical Corp. Compositions of lipids and stabilizing materials
US5585112A (en) * 1989-12-22 1996-12-17 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of preparing gas and gaseous precursor-filled microspheres
US5209720A (en) * 1989-12-22 1993-05-11 Unger Evan C Methods for providing localized therapeutic heat to biological tissues and fluids using gas filled liposomes
US5733572A (en) * 1989-12-22 1998-03-31 Imarx Pharmaceutical Corp. Gas and gaseous precursor filled microspheres as topical and subcutaneous delivery vehicles
US5352435A (en) * 1989-12-22 1994-10-04 Unger Evan C Ionophore containing liposomes for ultrasound imaging
US5228446A (en) * 1989-12-22 1993-07-20 Unger Evan C Gas filled liposomes and their use as ultrasonic contrast agents
US5773024A (en) * 1989-12-22 1998-06-30 Imarx Pharmaceutical Corp. Container with multi-phase composition for use in diagnostic and therapeutic applications
US6551576B1 (en) 1989-12-22 2003-04-22 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Container with multi-phase composition for use in diagnostic and therapeutic applications
US6146657A (en) * 1989-12-22 2000-11-14 Imarx Pharmaceutical Corp. Gas-filled lipid spheres for use in diagnostic and therapeutic applications
US5656211A (en) * 1989-12-22 1997-08-12 Imarx Pharmaceutical Corp. Apparatus and method for making gas-filled vesicles of optimal size
US5149319A (en) * 1990-09-11 1992-09-22 Unger Evan C Methods for providing localized therapeutic heat to biological tissues and fluids
US5123414A (en) * 1989-12-22 1992-06-23 Unger Evan C Liposomes as contrast agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same
US5580575A (en) * 1989-12-22 1996-12-03 Imarx Pharmaceutical Corp. Therapeutic drug delivery systems
US5525232A (en) * 1990-03-02 1996-06-11 The Liposome Company, Inc. Method for entrapment of cationic species in lemellar vesicles
US5215680A (en) * 1990-07-10 1993-06-01 Cavitation-Control Technology, Inc. Method for the production of medical-grade lipid-coated microbubbles, paramagnetic labeling of such microbubbles and therapeutic uses of microbubbles
GB9024528D0 (en) * 1990-11-12 1991-01-02 Instrumentarium Corp Improvements in and relating to magnetic resonance imaging
US5205290A (en) 1991-04-05 1993-04-27 Unger Evan C Low density microspheres and their use as contrast agents for computed tomography
US5874062A (en) * 1991-04-05 1999-02-23 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods of computed tomography using perfluorocarbon gaseous filled microspheres as contrast agents
US5240693A (en) * 1991-05-01 1993-08-31 University Of New Mexico Image enhancement by coadministration of biomodulators and structurally modified imaging agents
WO1992019264A1 (en) * 1991-05-01 1992-11-12 University Of New Mexico Biomodulators as universal imaging agents
JPH06507904A (ja) * 1991-05-23 1994-09-08 イマアーレクス・フアーマシユーチカル・コーポレーシヨン 磁気共鳴画像形成用の油脂可溶化合物
US5443813A (en) * 1991-06-06 1995-08-22 Associated Universities, Inc. Loading and conjugating cavity biostructures
US5262532A (en) * 1991-07-22 1993-11-16 E.R. Squibb & Sons, Inc. Paramagnetic metalloporphyrins as contrast agents for magnetic resonance imaging
US5325860A (en) * 1991-11-08 1994-07-05 Mayo Foundation For Medical Education And Research Ultrasonic and interventional catheter and method
EP0804944A3 (en) 1992-05-04 1998-08-26 UNGER, Evan C A method of providing a gas composition in a biological tissue or fluid in vivo
US5464696A (en) * 1992-08-13 1995-11-07 Bracco International B.V. Particles for NMR imaging
US5551429A (en) * 1993-02-12 1996-09-03 Fitzpatrick; J. Michael Method for relating the data of an image space to physical space
US5593688A (en) * 1993-06-25 1997-01-14 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Liposomal targeting of ischemic tissue
US6004534A (en) * 1993-07-23 1999-12-21 Massachusetts Institute Of Technology Targeted polymerized liposomes for improved drug delivery
WO1995003035A1 (en) * 1993-07-23 1995-02-02 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes with enhanced stability for oral delivery
US7083572B2 (en) * 1993-11-30 2006-08-01 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Therapeutic delivery systems
US5736121A (en) * 1994-05-23 1998-04-07 Imarx Pharmaceutical Corp. Stabilized homogenous suspensions as computed tomography contrast agents
US5567410A (en) * 1994-06-24 1996-10-22 The General Hospital Corporation Composotions and methods for radiographic imaging
US5820873A (en) * 1994-09-30 1998-10-13 The University Of British Columbia Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof
US6743779B1 (en) 1994-11-29 2004-06-01 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods for delivering compounds into a cell
US5830430A (en) * 1995-02-21 1998-11-03 Imarx Pharmaceutical Corp. Cationic lipids and the use thereof
US5997898A (en) * 1995-06-06 1999-12-07 Imarx Pharmaceutical Corp. Stabilized compositions of fluorinated amphiphiles for methods of therapeutic delivery
US6139819A (en) * 1995-06-07 2000-10-31 Imarx Pharmaceutical Corp. Targeted contrast agents for diagnostic and therapeutic use
US6521211B1 (en) 1995-06-07 2003-02-18 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Methods of imaging and treatment with targeted compositions
US6333971B2 (en) 1995-06-07 2001-12-25 George S. Allen Fiducial marker
US6231834B1 (en) 1995-06-07 2001-05-15 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods for ultrasound imaging involving the use of a contrast agent and multiple images and processing of same
US6033645A (en) * 1996-06-19 2000-03-07 Unger; Evan C. Methods for diagnostic imaging by regulating the administration rate of a contrast agent
US5833948A (en) * 1995-06-15 1998-11-10 Bracco Research S.A. Blood-pool imaging composition comprising micelles containing a lipophilic chelating agent and a non-ionic surfactant
WO1997040679A1 (en) 1996-05-01 1997-11-06 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods for delivering compounds into a cell
US6414139B1 (en) 1996-09-03 2002-07-02 Imarx Therapeutics, Inc. Silicon amphiphilic compounds and the use thereof
US5846517A (en) * 1996-09-11 1998-12-08 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods for diagnostic imaging using a renal contrast agent and a vasodilator
ES2189974T3 (es) * 1996-09-11 2003-07-16 Imarx Pharmaceutical Corp Procedimientos mejorados para la obtencion de imagenes de diagnostico usando un agente de contraste y un vasodilatador.
US6120751A (en) 1997-03-21 2000-09-19 Imarx Pharmaceutical Corp. Charged lipids and uses for the same
US6537246B1 (en) * 1997-06-18 2003-03-25 Imarx Therapeutics, Inc. Oxygen delivery agents and uses for the same
US6143276A (en) * 1997-03-21 2000-11-07 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods for delivering bioactive agents to regions of elevated temperatures
US6090800A (en) * 1997-05-06 2000-07-18 Imarx Pharmaceutical Corp. Lipid soluble steroid prodrugs
AU7104598A (en) 1997-04-09 1998-10-30 Philipp Lang New technique to monitor drug delivery noninvasively (in vivo)
US6060082A (en) * 1997-04-18 2000-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes targeted to M cells and useful for oral or mucosal drug delivery
US7452551B1 (en) 2000-10-30 2008-11-18 Imarx Therapeutics, Inc. Targeted compositions for diagnostic and therapeutic use
US6416740B1 (en) 1997-05-13 2002-07-09 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Acoustically active drug delivery systems
US6548047B1 (en) 1997-09-15 2003-04-15 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Thermal preactivation of gaseous precursor filled compositions
US6734171B1 (en) 1997-10-10 2004-05-11 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating nucleic acids in lipid bilayers
US6123923A (en) * 1997-12-18 2000-09-26 Imarx Pharmaceutical Corp. Optoacoustic contrast agents and methods for their use
US20010003580A1 (en) 1998-01-14 2001-06-14 Poh K. Hui Preparation of a lipid blend and a phospholipid suspension containing the lipid blend
CA2327816A1 (en) * 1998-04-09 1999-10-21 Nycomed Imaging As Use of particulate contrast agents in diagnostic imaging for studying physiological parameters
AU2001236798B2 (en) 2000-02-08 2004-11-04 Rice University Optically-active nanoparticles for use in therapeutic and diagnostic methods
US20030129223A1 (en) * 2000-10-11 2003-07-10 Targesome, Inc. Targeted multivalent macromolecules
US20030133972A1 (en) * 2000-10-11 2003-07-17 Targesome, Inc. Targeted multivalent macromolecules
US20030082103A1 (en) * 2000-10-11 2003-05-01 Targesome, Inc. Targeted therapeutic lipid constructs having cell surface targets
JP2004528321A (ja) 2001-04-04 2004-09-16 ノルディック ワクチン テクノロジー アクティーゼルスカブ ステロールおよびサポニンを含むポリヌクレオチド結合複合体
US20060073530A1 (en) * 2001-08-15 2006-04-06 Olaf Schneewind Methods and compositions involving sortase B
WO2003079149A2 (en) * 2002-03-11 2003-09-25 The University Of Vermont And State Agriculture College Blood clotting predictor
US20090060992A1 (en) * 2002-05-08 2009-03-05 University Of Central Florida Research Foundation, Inc., Preparation of magneto-vesicles with DOPE/DDAB layers
US7769423B2 (en) * 2002-09-11 2010-08-03 Duke University MRI imageable liposomes for the evaluation of treatment efficacy, thermal distribution, and demonstration of dose painting
AU2003272341A1 (en) * 2002-09-11 2004-04-30 Duke University Methods and compositions for blood pool identification, drug distribution quantification and drug release verification
US20060147509A1 (en) * 2002-10-02 2006-07-06 Kirkby Nikolai S Composition for vaccination
US20080241262A1 (en) * 2004-03-29 2008-10-02 The University Of Houston System Nanoshells and Discrete Polymer-Coated Nanoshells, Methods For Making and Using Same
AU2005284909B2 (en) * 2004-09-13 2011-11-17 Gilead Sciences, Inc. Delivering iron to an animal
WO2006051542A1 (en) * 2004-11-12 2006-05-18 Kpe Ltd. Nanoparticle mediated ultrasound therapy and diagnostic imaging
WO2007115134A2 (en) 2006-03-29 2007-10-11 Wayne State University Liposomal nanoparticles and other formulations of fenretinide for use in therapy and drug delivery
WO2007120818A2 (en) * 2006-04-12 2007-10-25 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for inhibiting adhesions
WO2007127439A2 (en) 2006-04-28 2007-11-08 Children's Hospital Medical Center Compositions comprising fusogenic proteins or polypeptides derived from prosaposin for application in transmembrane drug delivery systems
US20080241065A1 (en) * 2007-03-27 2008-10-02 Benaron David A Systems and methods for the detection and analysis of in vivo circulating cells, entities, and nanobots
WO2008137114A1 (en) * 2007-05-04 2008-11-13 University Of Hawai'i Methods and compositions for targeted delivery of gene therapeutic vectors
DE102008005673A1 (de) * 2008-01-23 2009-08-20 Universität Augsburg Bläschen, sowie Verfahren zur Herstellung und Manipulation von Bläschen
WO2009128950A2 (en) 2008-04-18 2009-10-22 Vaxinnate Corporation Deletion mutants of flagellin and methods of use
US20090298103A1 (en) * 2008-05-20 2009-12-03 The University Of Vermont And State Agriculture College Predicting hemostatic risk; dependence on plasma composition
US8797031B2 (en) * 2011-01-27 2014-08-05 Siemens Medical Solutions Usa, Inc. MR imaging system for discriminating between imaged tissue types
WO2012119095A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Fus1/tusc2 therapies
CN110464709A (zh) 2012-08-10 2019-11-19 德克萨斯州大学系统董事会 用于治疗中风的神经保护性脂质体组合物和方法
US10736880B2 (en) 2015-12-18 2020-08-11 The Board Of Regents Of The University Of Texas Systems Therapeutics for preterm labor management
CN110072540B (zh) 2016-10-12 2023-06-02 得克萨斯州大学系统董事会 用于tusc2免疫治疗的方法和组合物
CN111511484A (zh) 2017-11-04 2020-08-07 索纳纳米技术公司 金属纳米颗粒及制备所述金属纳米颗粒的方法
ES2895180T3 (es) 2018-03-23 2022-02-17 Bexion Pharmaceuticals Inc Composiciones farmacéuticas de saposina C y su uso en el tratamiento de cáncer
US20210395721A1 (en) 2018-10-24 2021-12-23 Codiak Biosciences, Inc. Methods to improve potency of electroporation
JP2022519718A (ja) 2019-02-08 2022-03-24 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム 加齢および加齢性臓器不全に関連する疾患の処置のためのテロメラーゼ含有エキソソーム
CA3175301A1 (en) 2020-04-20 2021-10-28 Hugh D.C. Smyth Biologically active dry powder compositions and method of their manufacture and use
WO2022040435A1 (en) 2020-08-19 2022-02-24 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Nanodrugs for targeted drug delivery and use thereof
WO2023225160A1 (en) 2022-05-18 2023-11-23 The Children's Hospital Of Philadelphia Compositions and methods for inducible alternative splicing regulation of gene expression

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3850578A (en) * 1973-03-12 1974-11-26 H Mcconnell Process for assaying for biologically active molecules
US4320121A (en) * 1976-10-12 1982-03-16 Sears Barry D Method of emulsifying cholesterol, cholesterol esters and triglyceride compounds
US4192859A (en) * 1978-09-29 1980-03-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. Contrast media containing liposomes as carriers
DE3000483A1 (de) * 1979-01-09 1980-07-17 Fuji Photo Film Co Ltd Mikrokapseln fuer immunologische bestimmungen
US4301054A (en) * 1979-06-04 1981-11-17 Thermal Imagery, Inc. Thermographic cholesteric coating compositions
GR77320B (hu) * 1980-12-22 1984-09-11 Procter & Gamble
US4485045A (en) * 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
DE3129906C3 (de) * 1981-07-24 1996-12-19 Schering Ag Paramagnetische Komplexsalze, deren Herstellung und Mittel zur Verwendung bei der NMR-Diagnostik
US4442834A (en) * 1981-10-02 1984-04-17 Jobst Institute, Inc. Pneumatic splint
DE3141641A1 (de) * 1981-10-16 1983-04-28 Schering Ag, 1000 Berlin Und 4619 Bergkamen Ultraschall-kontrastmittel und dessen herstellung
US4452747A (en) * 1982-03-22 1984-06-05 Klaus Gersonde Method of and arrangement for producing lipid vesicles
US4485054A (en) * 1982-10-04 1984-11-27 Lipoderm Pharmaceuticals Limited Method of encapsulating biologically active materials in multilamellar lipid vesicles (MLV)
NL194579C (nl) * 1983-01-21 2002-08-05 Schering Ag Diagnostisch middel.
FR2550449B1 (fr) * 1983-08-12 1986-01-31 Commissariat Energie Atomique Agents de relaxation specifiques d'organes ou de pathologies, utilisables pour modifier les contrastes en imagerie medicale par resonance magnetique nucleaire
CA1243602A (en) * 1983-08-25 1988-10-25 Hong-Ning Yeung Methods for enhancing the contrast in nmr imaging

Also Published As

Publication number Publication date
KR920010391B1 (ko) 1992-11-27
DK168853B1 (da) 1994-06-27
DK188785A (da) 1985-10-28
US4728575A (en) 1988-03-01
CA1245553A (en) 1988-11-29
EP0160552A3 (en) 1986-08-20
EP0160552B1 (en) 1991-02-27
ES542604A0 (es) 1987-01-16
ATE61117T1 (de) 1991-03-15
EP0160552A2 (en) 1985-11-06
IE851035L (en) 1985-10-27
KR850007562A (ko) 1985-12-07
DK188785D0 (da) 1985-04-26
DE3581830D1 (de) 1991-04-04
IL74985A (en) 1989-03-31
IL74985A0 (en) 1985-08-30
AU585506B2 (en) 1989-06-22
ES8703019A1 (es) 1987-01-16
HUT37569A (en) 1986-01-23
AU4170385A (en) 1985-10-31
IE58354B1 (en) 1993-09-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU194741B (en) Process for the preparation of contrast substances used for nmr exposures
Mendonça-Dias et al. Paramagnetic contrast agents in nuclear magnetic resonance medical imaging
Bulte et al. Short‐vs. long‐circulating magnetoliposomes as bone marrow‐seeking MR contrast agents
Kabalka et al. Gadolinium-labeled liposomes: targeted MR contrast agents for the liver and spleen.
US7385395B2 (en) Apparatus for preparing a solution of a hyperpolarized noble gas for NMR and MRI analysis
US5248498A (en) Fullerene compositions for magnetic resonance spectroscopy and imaging
JPH10501708A (ja) 過分極した貴ガスを利用した磁気共鳴映像化
US5330742A (en) Methods and compositions for magnetic resonance imaging
Alecci et al. Simultaneous 280 MHz EPR imaging of rat organs during nitroxide free radical clearance
Grucker Oxymetry by magnetic resonance: applications to animal biology and medicine
NIESMAN et al. Liposome encapsulated MnCl2 as a liver specific contrast agent for magnetic resonance imaging
Komoroski Biomedical applications of 7Li NMR
Ferrauto et al. Chemical exchange saturation transfer (CEST) contrast agents
Komoroski Applications of 7Li NMR in biomedicine
Schwendener Liposomes as carriers for paramagnetic gadolinium chelates as organ specific contrast agents for magnetic resonance imaging (MRI)
Miller et al. Shift-reagent-aided 23Na NMR spectroscopy in cellular, tissue, and whole-organ systems
JPH0586380B2 (hu)
Dias et al. Contrast agents for nuclear magnetic resonance imaging
Smirnova et al. Interaction of Gd (III) MRI contrast agents with membranes: a review of recent EPR studies
Wijesekera Evaluating Hypoxia-Targeting Vectors for MRI Applications
EP2062600A1 (en) CEST MRI contrast agents based on non-spherical particles
Grynko The medical applications of hyperpolarized Xe and nonproton magnetic resonance imaging
Slack Controlling Water Exchange Kinetics and Improving ParaCEST Imaging
Ganz Positron emission tomography and nuclear magnetic resonance
Lauterbur et al. NMR Zeugmatographic Imaging of Organs and Organisms

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628