HU189519B - Process for preparing 2'''-o-demethyl-macrocin derivatives - Google Patents

Process for preparing 2'''-o-demethyl-macrocin derivatives Download PDF

Info

Publication number
HU189519B
HU189519B HU812054A HU205481A HU189519B HU 189519 B HU189519 B HU 189519B HU 812054 A HU812054 A HU 812054A HU 205481 A HU205481 A HU 205481A HU 189519 B HU189519 B HU 189519B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
domm
dihydro
doml
medium
formula
Prior art date
Application number
HU812054A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Richard H Baltz
Gene M Wild
Eugene T Seno
Original Assignee
Eli Lilly And Co,Us
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Eli Lilly And Co,Us filed Critical Eli Lilly And Co,Us
Publication of HU189519B publication Critical patent/HU189519B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C12P17/08—Oxygen as only ring hetero atoms containing a hetero ring of at least seven ring members, e.g. zearalenone, macrolide aglycons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
    • C07H17/08—Hetero rings containing eight or more ring members, e.g. erythromycins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
    • C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces
    • C12R2001/54—Streptomyces fradiae

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás a jól ismert, terápiás tilozinhoz (lásd például Tetrahedron Letters, 2339 (1970)] hasonló makrolid antibiotikumok előállítására.
A tilozin nagyértékü antibiotikum, annak ellenére azonban, a rezisztens törzsek megjelenésének lehetősége miatt állandó igény van új antibiotikumok kifejlesztésére. Ezenkívül a vegyületek szerkezetének változtatásai az érzékeny mikroorganizmusok spektrumának változásával járhat.
Sajnos, a tilozinhoz hasonló makrolidok szerkezetmódosítása különösen nehéz. Például a J. Org. Chem., 44 (12). 2050-2052 (1979) közleményben utalnak rá. hogy milyen nehézségekbe ütközik a tilozin micinozil-glükozid kötésének hasítása kémiai módszerekkel. Valóban; az esetek nagy részében a lenti területen működő kutatók az új szerkezetű vegyületek szűrővizsgálatát új mikroorganizmusok kutatásával végzik, abban a reményben, hogy a természetben előforduló, vagy más, előállított törzsek tenyésztésekor rokon szerkezetű vegyületekhez jutnak.
Úgy találtuk, hogy a Streptomyces fradiae bizonyos törzseinek süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények közötti tenyésztésekor tilozinhoz hasonló vegyületek keletkeznek.
A találmány tárgya eljárás új, az (I) általános képleten bemutatott szerkezetű, antibiotikum előállítására. ahol az általános képletben:
Q aldehidcsoport, vagy hidroxil-metil-csoport. és
Y hidroxilcsoport, vagy mikarozil-oxi-csoport.
Az (I) általános képletű vegyületek 2'-O-demetil-makrocinok, a továbbiakban demetil-makrocinnak, vagy DOMM-nak nevezzük őket, szerkezetüket a (II) képleten mutatjuk be. A DOMM dihidroszármazékát. azaz a 20-dihidro-2-O-demetilmakrocint a továbbiakban dihidro-DOMM-nek nevezzük, szerkezeti képletét a (III) képleten mutatjuk be.
A 2'-de-O-metil-aklenocint a továbbiakban DOML-nek nevezzük, szerkezetét a (IV) képleten mutatjuk be. Az (V) képletű 20-dihidro-2'-de-Ometil-aktenoeint a továbbiakban dihidro-DOM Lnek nevezzük.
A találmány szerinti vegyületek sztereokémiája azonos a jól ismert makrolid-típusú tilozinéhoz. (Lásd például Tetrahedron Letters, 4737, 1970). A mikaminóz a vegyületben az aminocukor, a baloldali semleges cukor 6-dezoxi-D-allóz, és a (II) és (III) képletekben a semleges cukor mikaróz.
A DOMM és a dihidro-DOMM 2'-, 4-, 3-, 2'-, 3'-, 4'. és 3-helyzetű hidroxilcsoportjai értékes acil-észter-származékok előállítására észterezhetök. A DOML és a dihidro-DOML 2'-, 4'-, 2'-, 3'-, 4'- és 3-helyzetü hidroxilcsoportjai észterezhetők, ami után értékes acil-észter-származékokat kapunk. Ezenkívül a dihidro-DOMM és a dihidroDOML észterezhető a 20-hidroxil-csoporton. A DOMM és a dihidro-DOMM 2'-hidroxilesoportjának észterezése könnyen megy. A DOML és a dihidro-DOML 2'- és 4'-hidroxil-csoportjai szintén könnyen észtereződnek. Jellemző észterek a rnonokarbonsavval alkotott észterek, vagy egy
I 2-18 szénatomos dikarbonsavval alkotott hemiészter.
A DOMM, a dihidro-DOMM, a DOML, a dihidro-DOML és ezek acil-észter-származékai bázikus vegyületek, savakkal kombinálva savaddiciós sókká alakulnak. A savaddiciós sók szintén a találmány oltalmi köréhez tartoznak. Az egyszerűség kedvéért a DOMM jelzést használjuk a DOMM, a dihidro-DOMM, a DOML, a dihidro-DOML és 10 ezen vegyületek specifikus acil-észtereinek, a DOMM, a dihidro-DOMM, a DOML, a dihidroDOML és ezen vegyületek acil-észter-származékainak gyógyszerészeti szempontból elfogadható savaddíciós sóinak jelölésére.
ö A találmány értelmében úgy járunk el, hogy Streptomyces fradiae ATCC 31 669 törzset süllyesztett, levegőztetett körülmények között addig tenyésztünk, míg jelentős mennyiségű antibiotikum halmozódik fel. Adott esetben a (IV) vagy (V) kép20 letű vegyületek előállítására a tenyésztést enyhén savas körülmények között végezzük.
A találmány szerinti eljárást a Streptomyces fradiae mikroorganizmussal végezzük, ezt NRRL. 12.187, számon letétbe helyeztük.
25 A DOMM vízben oldódik, oldódik továbbá a legtöbb poláris, szerves oldószerben, például acetonban, metanolban, etanolban, kloroformban, dimetil-formamidban és dimetil-szulfoxidban. A DOMM savaddiciós sói vízben jobban oldód30 nak, mint maga a bázis.
A DOMM a tilozintól papír- és vékonyrétegkromatográfiával megkülönböztethető. Az I. és II. táblázatban megadjuk a DOMM és a tilozin R,- es „ R-értékeit. A 11. táblázatban mcuadoll R -érlékek 35 w ' a tilozin elmozdulásához viszonyított elmozdulási jelzi, a tilozin futásának helyét 1.0-val jellemezzük. A bioautográfiát Baeillus subtilis mikroorganizmussal végeztük.
/. Táblázat
A DOMM vé kanvréieg krnniatiigrá/iáia
Vegyület lilozi DOMM
R-erlek
V ' B (
0.53 0.53 0.67
0.05 0.44 0.44 ' = gél: Merek. Darmsladl szilikagél 60 50 b = oldószer-elegy: A - etil-acetát és dielil-amin
96:4 arányú elegye
B = acélon és etanol 2:1 arányú elegye C = kloroform és metanol 3:1 arányú elegye.
//. lithlüziH
A DOMM' papír kriiinalográliája
Vegyület tilozin DOMM
Időérték
D'
1.0 1.0
0.17 O.XS “ = papír: Whalman No. 1.. ezt 0.75 mólos káliumdihidrogén-foszfát 4.0 pH-jú púderrel kezeltük és szárítottuk.
i
-2ι
189 519 b = oldószer-elegy: D = vízzel telített etil-acetát E = n-butanoi, amit vízzel telítettünk.
A DOMM dihidro-származékát kémiai redukcióval vagy fermentációval kapjuk meg. Ha a dihidro-DOMM-t kémiai redukcióval állítjuk elő, úgy ismert módszereket használunk, például úgy járunk el. hogy a DOMM-t sztöchiometrikus mennyiségű nátrium-bór-hidriddel reagáltatjuk, alkoholos oldószerrel készült reakcióelegyben. A dihidro-DOMM-t megkapjuk a S. fradiae NRRL 12 187 mikroorganizmus szabályozott fermentációs körülmények közötti tenyésztésével is.
A találmány tárgya továbbá eljárás a DOML és a dihidro-DOML előállítására, sorrendben a DOMM és a dihidro-DOMM enyhén savas körülmények közötti hidrolízisével. A dihidro-DOML előállítására eljárhatunk oly módon is, hogy 1) a DOML előállítására enyhén savas körülmények között hidrolizáljuk a DOMM-t, majd 2) a dihidroDOML előállítására redukáljuk a DOML-t. Az enyhén savas hidrolízis reakciókörülményei ismertek az irodalomból. A hidrolízist megfelelő vizes oldószerben végezzük, az elegy pH-ja 4 vagy ennél kisebb. A reakcióelegy hőmérsékletét 20 °C és 100 °C közötti értékre állítjuk be. A szükséges reakcióidő változik, függ a reakcióelegy pH-jától és hőmérsékletétől. Magasabb pH-értékeken a reakció lassúbb, és magas hőmérsékleteken a reakció gyorsabb. Körülbelül 2 pH-értéken és szobahőmérsékleten végezve a reakciót, a reakcióidő 6-24 óra. A reakciót oly módon végezzük, hogy a DOMM-t vagy a dihidro-DOMM-t enyhén savas oldattal kezeljük a mikarozil-csoport hasításához elegendő ideig, a reakciót követően megkapjuk sorrendben a DOML-t vagy a dihidro-DOML-t.
Eljárhatunk oly módon is, esetenként ez előnyös, hogy a DOML vagy a dihidro-DOML előállítására a DOMM-t vagy a dihidro-DOMM-t abban a fermentációs táptalajban kezeljük, amelyben azt előállítottuk, a kezelést enyhén savas reakcióelegyben végezzük, a fentiek szerint, annyi időn át, amely alatt a DOMM vagy a dihidro-DOMM, sorrendben a DOML- vagy dihidro-DOML-vé alakul. Az így előállított DOML-t vagy dihidro-DOML-t a léimentációs táptalajból ismert módszerekkel különítjük el.
A találmány szerinti vegyületeket általában állatorvosi készítmények alakjában adagoljuk, a készítmények ismert hígítóanyagokat és vivőanyagokat tartalmaznak, azaz gyógyszerészeti szempontból elfogadható szerves vagy szervetlen vivöanyagokat. amelyek alkalmasak enterális, parenterális vagy topikális adagolásra, és amelyek gyakorlatilag nem reagálnak az aktív vegyületekkel.
Előnyös, gyógyszerészeti szempontból elfogadható vivőanyagok például - de nem korlátozva körüket a víz, sók oldatai, alkoholok, növényi olajok, polietilén-glikolok, zselatin, laktóz, amilóz, magnézium-sztearát, talkum, szilicium-dioxid, paraffinok. /.sírsav-monogliceridek és digliceridek. és a hidroxi-meiil-cellulóz. A gyógyszerészeti készítményeket sterilezhetjük. és adott esetben más szerekkel keverhetjük, például lubrikánsokkal, tartósítószerekkel, nedvesítöszerekkel, emulgeálószerekkel, pufferekkel, színező- vagy ízesítőanyagokkal, amelyek gyakorlatilag nem reagálnak az aktív vegyületekkel.
A találmány szerinti vegyületeket általában állatorvosi készítmények alakjában adagoljuk, a készítmények ismert hígítóanyagokat és vivőanyagokat tartalmaznak, azaz gyógyszerészeti szempontból elfogadható szerves vagy szervetlen vivőanyagokat, amelyek alkalmasak enterális, parenterális vagy topikális adagolásra, és amelyek gyakorlatilag nem reagálnak az aktív vegyületekkel.
Előnyös, gyógyszerészeti szempontból elfogadható vivőanyagok például - de nem korlátozva körüket - a víz, sók oldatai, alkoholok, növényi olajok, polietilén-glikolok, zselatin, laktóz, amilóz, magnézium-sztearát, talkum, szilicium-dioxid, paraffinok, zsirsav-monogliceridek és digliceridek, és a hidroxi-metil-cellulóz. A gyógyszerészeti készítményeket sterilezhetjük, és adott esetben más szerekkel keverhetjük, például csúsztatószerekkel, tartósítószerekkel, nedvesítőszerekkel, emulgeálószerekkel, pufferekkel, színező- vagy ízesítőanyagokkal, amelyek gyakorlatilag nem reagálnak az aktív vegyületekkel.
A találmány szerinti vegyületeket használhatjuk takarmány-adalékként, például takarmánypremixben, amelyet ismert módon állítunk elő.
Az állatorvosi készítmény 0,1% és 90% közötti mennyiségben tartalmazza az (I) általános képletű vegyületet, vagy ennek gyógyszerészeti szempontból elfogadható sóját vagy észterét, egy vagy több, gyógyszerészeti szempontból elfogadható vivőanyaggal vagy hígitöszerrel együtt.
A jelen szabadalmi leírás új kiindulási vegyületet biztosít az OMT és a dihidro-OMT előállítására. Úgy járunk el, hogy a 3.459.853 számú amerikai szabadalmi leírás szerint a DOMM-t és DOML-t hidrolizáljuk az OMT előállítására. A dihidroOMT előállítására pedig a dihidro-DOMM-t és a dihidro-DOML-t használjuk.
A DOMM és a dihidro-DOMM előállítására a találmány értelmében úgy járunk el, hogy a vegyületeket termelő Streptomyces fradiae ATCC 31 669 törzset vagy annak (1) általános képletü vegyületet termelő mutánsát vagy variánsát süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között tenyésztjük megfelelő táptalajban mindaddig, míg jelentős mennyiségű antibiotikum halmozódik fel. Ahogy az a szakember számára érthető, a fermentáció során először a DOMM keletkezik. A dihidro-DOMM akkor bioszintetizálódik, amikor a fermentáció hosszabb időn át folyik, ami idő alatt a DOMM enzimatikusan redukálódik.
A Streptomyces fradiae ATCC 31 669 számú törzs növesztéséhez számtalan táptalajt használhatunk. A termelés gazdaságossága, az optimális kitermelés és az izolálás egyszerűsége miatt azonban bizonyos táptalajok előnyösek. így például szénforrásként a nagyméretű fermentáció során előnyösen szénhidrátokat, például dextrint, glükózt, keményítőt. kukoricalisztet, és olajokat, például szójabab olajat használunk. Nitrogénforrúskent előnyösen kukoricalisztet, szójabab lisztet, hallisztet, aminosavakat és más, hasonlókat használunk. A táptalajba adott esetben szervetlen sókat is ada-31
189 519 gólunk, ezek közönséges sók, például vas-, kálium-, nátrium-, magnézium-, kalcium-, ammónium-, klorid-. karbonát-, szulfát- és nitrát-ionokra disszociált» sók.
A mikroorganizmus növekedéséhez és fejlődéséhez szükséges eszenciális nyomelemeket is tartalmaznia kell a táptalajnak. Ezek a nyomelemek általában szennyező anyagként jelen vannak a táptalaj más összetevőiben, mégpedig a mikroorganizmus növekedési igényének megfelelő mennyiségben. A nagyméretű fermentációkor, habzáskor szükséges kevés (például 0,2 ml/1) habzásgátló szer, például polipropilén-glikol (molekulasúlya körülbelül 2000) adagolása.
Nagymennyiségű DOMM vagy dihidro-DOMM előállítására süllyesztett, levegőztetett fermentációt végzünk tankfermentorban. Kevés DOMM vagy dihidro-DOMM előállítható rázott tenyészetben is. Az antibiotikum-termelésben mutatkozó lag-fázis miatt a nagyméretű tankfermentorokat nem a mikroorganizmus spóráival oltjuk, hanem előnyösen vegetatív inokulumot használunk. A vegetatív inokuluni előállítására kevés táptalajt beoltunk a mikroorganizmus spóráival vagy micéliumaival, ebből friss, aktívan növekvő tenyészetet kapunk. Ezután beoltjuk azzal a vegetatív inokulummal, a nagyméretű tankfermentorban lévő táptalajt. A vegetatív inokulum előállításához használt táptalaj a főfermentációs táptalajjal azonos lehet, de használhatunk más táptalajt is.
Az S. fradiae ATCC 31 669 10°Cés37’C közötti hőmérsékleten nő. Az antibiotikum-termelés szempontjából az optimális hőmérséklet 28 ’C.
Ahogy az a levegőztetett, süllyesztett, fermentációs folyamatoknál szokásos, a táptalajon steril levegőt buborékoltatunk át. A legtöbb antibiotikum akkor bioszintetizálódik, ha a tankfermentorban lévő táptalaj levegötelitettsége 30%, vagy ennél nagyobb (28 ’C hőmérsékleten és 1 atm nyomáson).
Az antibiotikum-termelést a fermentáció során oly módon követjük, hogy a tenyészlevel az antibiotikumokkal szemben érzékeny mikroorganizmusokkal vizsgáljuk. Ilyen, alkalmas mérőorganizmus a Staphylococcus aureus ATCC 9144. A biológiai értékmérést ismert módon, automatizált turbidimetriás módszerrel végezzük. Az antibiotikumtermelést ezenkívül a kiextraháll lérmenllé ultraibolya abszorpciós spektrumának felvételével is követhetjük. A termelést ezenkívül nagyfelbontású fólyadék-kromatográfiával (UV-detekció) is követhetjük (lásd például Kennedy, J. Chromatographic Science, 16, 492^495., 1978.).
A süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények közötti tenyésztést követően a DOMM-t vagy a dihidro-DOMM-t a fermentációs iparban ismert módszerekkel különíthetjük el a táptalajból. A DOMM és a dihidro-DOMM elkülönítését úgy kezdjük, hogy szűrjük a tenyészlevet. A szűrt levet ezután az előállítandó antibiotikum izolálására tovább tisztítjuk. A tisztítás során különböző módszereket használhatunk. A szűrt lé egyik előnyös tisztítási módszere szerint úgy járunk el, hogy 9-re állítjuk be az oldat pH-ját, megfelelő oldószerrel, például etil-acetáttal, amil-acetáttal, vagy metilizobutil-ketonnal extraháljuk az oldatot, a szerves fázist elkülönítjük és vizes, savas oldattal extraháljuk, és ezt követően a vizes extrakt pH-ját bázikusra állítva kicsapjuk az antibiotikumot. A továbbiak során a tisztítást extrakcióval, adszorpcióval és/ vagy kristályosítással végezzük.
Ahogy az más mikroorganizmusoknál is megfigyelhető, a Streptomyces fradiae ATCC 31 669 törzs tulajdonságai is variálnak. Például mesterséges variánsok és mutánsok nyerhetők az ATCC 31 669 törzsből oly módon, hogy különböző ismert fizikai és kémiai mutagénekkel kezeljük, például ultraibolya sugarakkal, X-sugarakkal, gammasugarakkal, N-metil-N'-nitro-N-nitrozó-guanidinnel. A Streptomyces fradiae ATCC 31 669 összes olyan természetes és mesterséges variánsa és mutánsa és rekombinánsa, amely megtartja a DOMM termelő képességet, a találmány szerinti eljárás során használható.
A DOMM különböző vegyületei gátolják a palogén baktériumok, különösen a Gram-pozitiv festödésü baktériumok és a Mycoplasma fajok növekedését.
Ily módon a találmány egyik további tárgya eljárás bakteriális fertőzések, különösen a Gram-pozitív festödésű baktériumok és a mycoplasmák által okozott fertőzések gátlására, kontrollálására vagy kezelésére a találmány szerinti új vegyiiletekkel.
A III. táblázatban megadjuk a standard agarhigitásos méréssel meghatározott legkisebb növekedésgátló koncentrációkat, amely koncentrációk mellett a DOMM (szabad bázis) gátolja bizonyos baktériumok növekedését.
///. Táblázat
A DOMM szabad bázis in vára aktivitása
Mikroorganizmus 1 cgkischh uo\ ckcdcNgállo koneeniravio (μμ inh
Slreptoeoeeus pyogenes C203 0.25
Streptoeoeeus pneumoniae Park 1 0.25
Slreptoeoeeus sp. (D-esoport) 282 4.0
Pasteurella multoeida 12.5
Pasleurellu hemolyliea 50.0
Mycoplasma galliseplieum 0.78
Mycoplasma hyopneunioniae 0.78
Mycoplasma hyorhinis 3,12
A DOMM vegyületek in vivő anlimikrobiális aktivitással rendelkeznek, kísérleti bakteriális fertőzésekkel szemben. Ha kísérleti úton fertőzött egereknek két dózisban adagoljuk a vizsgált vegyüleleket, az aktivitást hl)5(,-értékben kapjuk meg (hatásos dózis mg/kg-ban. amely a vizsgált állatok 50%át megvédi a fertőzéstől: lásd Wiek és munkatársai. J. Bacteriol., 81. 233 235. 1961). A l)()MM-re vonatkozóan mért HD5(1-érlekeket a IV. táblázatban adjuk meg.
, 189 519
ÍV. Táblázat
A DOMM szubkután ED50-értékei (mg/kg x 2)
Vegyület Strepto- coccus pyogenes C203 Streptococcus pneumoníae Park I Staphylococcus aurcus 3055
DOMM u 37.5 3.8
baktérium-fertőzés (x LDJ0) 133 41,2 139
Az alábbiakban példákkal szemléltetjük a találmány szerinti eljárást, a példák a találmány oltalmi körét nem korlátozzák.
1. példa
A) A DOMM előállítása rázott tenyészetben A Streptomyces fradiae ATCC 31 669 törzs fagyasztva szárított tenyészetét 1-2 ml steril vízben szuszpendáljuk. A szuszpenzió 0,5 ml-ével 150 ml alábbi összetételű vegetatív táptalajt oltunk:
összetevő Mennyiség (%)
kukoricalekvár 1,0
élesztőkivonat 0,5
szójabab dara 0,5
kalcium-karbonát 0,3
szójabab olaj (nyers) 0,45
ionmentes víz 97,25
Eljárhatunk oly módon is, hogy a S. fradiae ATCC 31 669 vegetatív tenyészetének 1 ml-nyi mennyiségét, amit folyékony nitrogénben tároltunk, felhasználjuk a vegetatív táptalaj oltására. A beoltott vegetatív táptalajt 500 ml térfogatú Erlenmeyer-lombikban inkubáljuk 29 ’C hőmérsékleten, 48 órán át olyan zárt rázógépben, amely percenként 300-at fordul.
Az inkubált vegetatív tenyészet 0,5 ml-ével 7 ml termelő táptalajt oltunk. A táptalaj összetétele a következő:
összetevő Mennyiség (%)
répamelasz 2,0
kukoricaliszt 1,5
halliszt 0,9
kukoricadara 0,9
nátrium-klorid 0,1
diammónium-hidrogén-foszfát 0,04
kalcium-karbonát 0,2
szójabab olaj (nyers) 3,0
ionmentes víz 91,36
A beoltott főfermentációs táptalajt 50 ml térfogatú lombikokban inkubáljuk 29 °C hőmérsékleten, 6 napon át, olyan zárt rázógépben, amely percenként 300-at fordul.
B) A DOMM előállítása tankfermentorban
Nagymennyiségű inokulum előállítására az A) pontban megadottak szerint előállított 60 ml kiiiott vegetatív tenyészettel 40 1 második fokozatú vegetatív táptalajt oltunk.
A táptalaj összetétele a következő:
összetevő Mennyiség (%)
kukoricalekvár 1,0
szójabab olajliszt 0,5
éiesztőkivonat 0,5
kalcium-karbonát 0,3
szójabab olaj (nyers) 0,5
lecitin (nyers) 0,015
víz 97,185
A táptalaj pH-ját 50%-os nátrium-hidroxid-oldattal 8,5-re állítjuk be.
A második fokozatú vegetatív tenyészetet 68 liter össztérfogatú fermentorban tenyésztjük, 40 órán át, 29 ’C hőmérsékleten, miközben levegőztetjük és keveijük a tenyészetet.
1 inkubált második fokozatú táptalajjal 44 l steril, alábbi összetételű főfermentációs táptalajt oltunk:
összetevő Mennyiség (%)
halliszt 0,875
kukoricaliszt 1,5
kukoricadara 0,875
kalcium-karbonát 0,2
nátrium-klorid 0,1
diammónium-hidrogén-foszfát 0,04
répamelasz 2,0
szójabab olaj (nyers) 3,0
lecitin 0,09
víz 91,32
A táptalaj pH-ját 50%-os nátrium-hidroxid-oldattal 7,2-re állítjuk be.
A beoltott főfermentációs táptalajt 68 1-es fermentorban tenyésztjük, 4 napon át, 28 ’C hőmérsékleten. A táptalajon steril levegőt buborékoltatunk át, olyan mennyiségben, hogy az oldott oxigén értéke 30% és 50% között legyen, a keverót 250 percenkénti fordulattal működtetjük.
2. példa
A DOMM izolálása
1 összegyűjtött, teljes tenyészlevet, amit az 1. példában megadottak szerint állítunk elő, szűrési segédanyag jelenlétében szűrünk. A micéliumot vízzel mossuk, a mosófolyadékot hozzáadjuk a szűrlethez.
A szűrlet pH-ját 25%-os, vizes nátrium-hidroxidoldattal 9,1 -re állítjuk be. 9 liter és 5 liter etil-acetáttal extraháljuk a szűrletet. Az etil-acetátos extraktumhoz 3500 ml ionmentes vizet adunk. Az óidat
189 519 pH-ját 28%-os foszforsav-oldattal 4,1-re állítjuk be (a foszforsav-oldatot úgy állítjuk elő, hogy 2 rész vizet és 1 rész koncentrált foszforsavat keverünk). Extrakciót követően elkülönítjük a vizes fázist. Az etil-acetátos extraktumot 3500 ml vízzel újra-extraháljuk. A két vizes extraktumot egyesítjük.
Az egyesített, vizes extraktumok pH-ját nátriumhidroxtddal 8,5-re állítjuk be, és kétszer kloroformmal (3000 és 1200 ml) extraháljuk. Csökkentett nyomáson vízmentesítjük és desztilláljuk a kloroformos extraktumot, desztillációs maradékként 40 g nyers DOMM bázist kapunk. Ezt a bázist víz és aceton elegyéből kristályosítva tisztítjuk, ezután 30 g DOMM bázist kapunk.
A DOMM fehér színű, szilárd halmazállapotú termék, amely aceton és víz elegyéből kristályosodik. A DOMM 135-140 ’C hőmérsékleten lágyul, és 160 ‘C hőmérsékleten teljesen felolvad. A DOMM elemanalízise szerint a következő - közelítő - %-os összetételű:
szén: 59,5%; hidrogén: 8%; nitrogén: 2%; oxigén: 30,5%.
A DOMM tapasztalati képlete Ο^,Η-,ΝΟ,-,. molekulasúlya pedig 888 (a tömegspektrometriás mérés szerint: 887).
A DOMM infravörös abszorpciós spektrumában (szabad bázist vizsgálunk, kloroformos oldatban) az alábbi és a mellékletben megadott elnyelési maximumokat találjuk (cm-1): 3679 (kicsi), 3604 (váll), 3486 (széles), 3012 (váll), 2979 (intenzív), 2938 (intenzív), 2880 (váll), 2821 (váll), 2794 (kicsi), 2735 (kicsi), 1723 (intenzív), 1678 (közepes), 1627 (kicsi), 1593 (intenzív), 1477 (váll), 1459 (közepes), 1409 (közepes), 1373 (közepes), 1333 (váll), 1316 (közepes), 1273 (kicsi), 1183 (váll), 1161 (intenzív), 1114 (közepes), 1080 (intenzív), 1048 (intenzív), 1013 (középes), 996 (közepes), 984 (váll), 960 (váll), 924 (kicsi), 902 (kicsi), 865 (kicsi) és 841 (kicsi).
A DOMM semleges etanolos oldatban vizsgált ultraibolya abszorpciós spektrumában 283 nm hullámhosszon (epszilon 22,550) látszik elnyelési maximum.
A DOMM szabad bázis alakjának specifikus forgatása: [α](,5: -39,69’ (konc.: 1, metanol).
A DOMM 66%-os, vizes dimetil-formamidban végzett elektrometrikus titrálása szerint a vegyület egy titrálható csoportot tartalmaz, ennek pK.-értéke: 7,14.
DOML bázist kapunk. Ez a vegyület 115-120 °C hőmérsékleten lágyul, és 134-140 ’C hőmérsékleten olvad.
4. példa
A dihidro-DOMM előállítása
A 2. példában megadottak szerint előállított DOMM 50 mg-ját vizes, izopropil-alkoholban (40%-os, 25 ml) oldjuk. 30%-os, vizes izopropilalkohol 10 ml-ében 20 mg nátrium-bór-hidridet oldunk. 1 ml ilyen nátrium-bór-hidrides oldatot adunk a DOMM-t tartalmazó oldathoz. 5 percen át keverjük a reakcióelegyet, pH-ját foszforsavval
7,5-re állítjuk be, majd csökkentett nyomáson desztilláljuk az izopropil-alkohol eltávolítására. A vizes sűrítményhez addig adunk vizet, mig térfogata 25 ml lesz. Ezután 50 ml kloroformot adagolunk. A vizes fázis pH-ját 7,5-re állítjuk be. Extrakciót követően elkülönítjük a kloroformot, csökkentett nyomáson szárazra desztilláljuk, desztillációs maradékként dihidro-DOMM-t kapunk.
5. példa
A dihidro-DOML előállítása
A 4. példában megadottak szerint előállított dihidro-DOMM-t a 3. példában megadottak szerint reagáltatjuk, ami után dihidro-DOML-t kapunk.
6. példa
A DOML előállításának másik változata
A DOMM-ből előállítjuk a DOML-t oly módon, hogy a DOMM-t a tenyészlében kezeljük, amelyben előállítottuk; a kezelést a 3. példában megadottak szerint, enyhén savas körülmények között végezzük. A DOML izolálását a DOMM kapcsán a 2. példában megadottak szerint végezzük.
7. példa
A dihidro-DOML előállításának következő változata
A 3. példában megadottak szerint előállított DOML-t a 4. példában megadottak szerint redukáljuk, amiután dihidro-DOML-t kapunk.
3. példa
A DOML előállítása
A 2. példában megadottak szerint előállított DOMM-t híg hidrogén-klorid-oldatban oldjuk (addig adunk vízhez hidrogén-kloridot, míg annak pH-ja 1,8 lesz). A kapott oldatot 8 órán át szobahőmérsékleten hagyjuk állni, majd pH-ját nátriumhidroxid-oldattal 9,0-ra állítjuk be. Ezt a bázikus oldatot etil-acetáttal, diklór-metánnal vagy kloroformmal extraháljuk. Az extraktumot csökkentett nyomáson desztilláljuk, desztillációs maradékként

Claims (1)

  1. Szabadalmi igénypont
    Eljárás az (I) általános képletű makrolidok, ahol Q —CHO vagy —CH20H csoport, és Y hidroxil- vagy mikarozil-oxi-csoport előállítására, azzal jellemezve, hogy Streptomyces fradiae ATCC 31 669 törzset vagy annak (I) általános képletű vegyületet termelő mutánsát vagy variánsát süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között tenyésztjük, azzal a feltétellel, hogy olyan (I) általános képletű vegyület előállítására, ahol Y hidroxilcsoport, a tenyésztést enyhén savas körülmények között végezzük, majd a kapott ter-61 . 189519 2 méket ismert módon kinyerjük, kívánt esetben egy letű vegyületek előállítására egy keletkezett olyan kapott, Y helyén mikarozil-oxi-csoportot tartalma- (I) általános képletű vegyületet, ahol Q —CHO zó makrolidot savval kezelünk, és/vagy a Q helyén csoport, hidrogénezünk.
    —CH2OH csoportot tartalmazó (I) általános kép4 oldal rajz
HU812054A 1980-07-24 1981-07-13 Process for preparing 2'''-o-demethyl-macrocin derivatives HU189519B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB8024211 1980-07-24

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HU189519B true HU189519B (en) 1986-07-28

Family

ID=10514997

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU812054A HU189519B (en) 1980-07-24 1981-07-13 Process for preparing 2'''-o-demethyl-macrocin derivatives

Country Status (23)

Country Link
EP (1) EP0045157B1 (hu)
JP (1) JPS5750998A (hu)
KR (1) KR840001193B1 (hu)
AR (1) AR227325A1 (hu)
AU (1) AU7286281A (hu)
CA (1) CA1174994A (hu)
CS (1) CS228512B2 (hu)
DD (1) DD202452A5 (hu)
DE (1) DE3163204D1 (hu)
DK (1) DK313081A (hu)
ES (1) ES8206622A1 (hu)
FI (1) FI812209L (hu)
GB (1) GB2080798B (hu)
GR (1) GR74509B (hu)
HU (1) HU189519B (hu)
IE (1) IE51619B1 (hu)
IL (1) IL63312A (hu)
PH (1) PH18089A (hu)
PL (1) PL232190A1 (hu)
PT (1) PT73370B (hu)
RO (1) RO81671B (hu)
YU (1) YU173981A (hu)
ZA (1) ZA814789B (hu)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4411892A (en) * 1982-05-03 1983-10-25 Pfizer Inc. Tylosin macrolide antibiotics from streptomyces
US4443436A (en) * 1982-09-13 1984-04-17 Eli Lilly And Company C-20-Modified macrolide derivatives of the macrolide antibiotics tylosin, desmycosin, macrocin, and lactenocin
US4820694A (en) * 1986-09-29 1989-04-11 Eli Lilly And Company Modifications of 3-O-demethylmycinose in macrocin and lactenocin

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4201843A (en) * 1975-08-01 1980-05-06 Sanraku Ocean Co., Ltd. Process for manufacturing tylosin derivatives

Also Published As

Publication number Publication date
RO81671A (ro) 1983-04-29
AR227325A1 (es) 1982-10-15
ES503957A0 (es) 1982-05-16
EP0045157A1 (en) 1982-02-03
GB2080798B (en) 1984-07-25
IL63312A (en) 1985-04-30
EP0045157B1 (en) 1984-04-18
DE3163204D1 (en) 1984-05-24
IL63312A0 (en) 1981-10-30
JPS5750998A (en) 1982-03-25
RO81671B (ro) 1983-04-30
YU173981A (en) 1983-09-30
ES8206622A1 (es) 1982-05-16
CA1174994A (en) 1984-09-25
PH18089A (en) 1985-03-20
PL232190A1 (hu) 1982-03-29
PT73370B (en) 1982-08-09
DK313081A (da) 1982-01-25
GB2080798A (en) 1982-02-10
IE811581L (en) 1982-01-24
CS228512B2 (en) 1984-05-14
AU7286281A (en) 1982-01-28
KR840001193B1 (ko) 1984-08-18
PT73370A (en) 1981-08-01
FI812209L (fi) 1982-01-25
DD202452A5 (de) 1983-09-14
GR74509B (hu) 1984-06-29
IE51619B1 (en) 1987-01-21
ZA814789B (en) 1983-02-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4321361A (en) Demycinosyltylosin and process for its production
KR850001666B1 (ko) 마크로라이드 항생물질의 제조방법
US3094460A (en) Decoyinine
US4247542A (en) A-40104 Antibiotics and process for production thereof
HU189519B (en) Process for preparing 2'''-o-demethyl-macrocin derivatives
US4385116A (en) Demethylmacrocin and process for its production
CA1211731A (en) De(mycinosyloxy)tylosin derivatives
US4440857A (en) Process for preparing mycarosyltylactone
EP0236894B1 (de) Efomycin G, seine Herstellung und seine Verwendung als Leistungsförderer bei Tieren
US4129721A (en) A-40104 antibiotics and process for production thereof
JPH0633312B2 (ja) １４−ハイドロキシエリスロマイシン誘導体およびその製造方法
GB2077730A (en) Macrolide antibiotics
FR1465395A (fr) Composé nouveau, la décoyinine et son procédé de fabrication
US4528369A (en) 20-Dihydro-20-deoxy-23-de(mycinosyloxy)tylosin
US4486584A (en) Demethylmacrocin compounds and derivatives thereof
US4216206A (en) Antibiotics S 53210/A-I, S 53210/A-II and S 53210/A-III
US4419447A (en) Fermentation process for producing demycinosyltylosin
US4334019A (en) Process for producing de(mycinosyloxy)tylosin
JPH0578322A (ja) 新規抗生物質ｓｆ２７３８物質及びその製造法並びに制癌剤
US4537957A (en) Process for the production of mycaminosyltylonolide
KR820002138B1 (ko) A-40104 항생물질의 제조방법
HU188681B (en) Process for the preparation of mycarosyl-tilactone
EP0052361A1 (en) Novel 16-membered macrolide compounds