FR3105222A1 - Inhibiteur du transporteur MCT7/SLC16A6 pour son utilisation pour la régulation de la pigmentation cutanée et une composition comprenant ledit inhibiteur - Google Patents

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Abstract

Inhibiteur du transporteur MCT7 /SLC16A6 pour son utilisation dans la régulation de la pigmentation cutanée et une composition comprenant ledit inhibiteur L’invention concerne un inhibiteur du transporteur membranaire MCT7 /SLC16A6 pour son utilisation pour la régulation de la pigmentation cutanée. Selon un autre aspect, l’invention concerne une composition pour son utilisation pour la régulation de la pigmentation cutanée comprenant une quantité efficace d'un inhibiteur du transporteur membranaire MCT7 /SLC16A6 ou d'un sel cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable de celui-là. Elle trouve pour application particulièrement avantageuse le domaine des soins de la peau et tout particulièrement pour la régulation de la pigmentation cutanée dont la dépigmentation cutanée ou bien le blanchiment cutané.

Description

Inhibiteur du transporteur MCT7/SLC16A6 pour son utilisation pour la régulation de la pigmentation cutanée et une composition comprenant ledit inhibiteur
DOMAINE TECHNIQUE DE L’INVENTION
L’invention concerne le domaine de la cosmétique et/ou de la dermatologie. Elle trouve pour application particulièrement avantageuse le domaine des soins de la peau et tout particulièrement pour la régulation de la pigmentation cutanée dont la dépigmentation cutanée ou bien le blanchiment cutané.
ÉTAT DE LA TECHNIQUE
La régulation de la pigmentation cutanée, et notamment la dépigmentation de la peau ou le blanchiment, peut être souhaitée dans diverses circonstances, soit pour un éclaircissement global de celle-ci ou soit pour éliminer ou atténuer des taches provoquées par des troubles locaux de la pigmentation dans le cadre de la cosmétique, soit encore pour traiter des hyperpigmentations dans le cadre de la dermatologie.
La peau comprend plusieurs couches intégrées, allant de la couche superficielle, l’épiderme (tissu épithélial), jusqu'aux couches plus profondes, le derme et l'hypoderme (tissu conjonctif), et chacune possède des propriétés spécifiques permettant à l'ensemble de réagir et de s'adapter aux conditions de son environnement.
La pigmentation de la peau résulte de la présence de mélanine dans l'épiderme et le derme. La mélanine est produite par les mélanocytes situés principalement dans la couche basale.
Il existe des pathologies associées au mauvais fonctionnement des mélanocytes engendrant une hyperpigmentation comme les taches de vieillesse (lentigo actinique) ou le mélasma. Ces défauts pigmentaires ne mettent pas en danger la vie des personnes atteintes, mais ont un impact psychologique important.
De nombreux produits sont actuellement disponibles sur le marché pour pallier ces problèmes d'hyperpigmentation. La plupart de ces produits comportent dans leurs formules un ou plusieurs ingrédients aujourd'hui controversés, car responsables d'effets indésirables. En effets, ces produits contiennent des ingrédients dont l'innocuité est sévèrement remise en question par les autorités sanitaires de différents pays ou communautés.
Un objet de la présente invention est donc de proposer une composition pour la régulation de la pigmentation cutanée présentant une meilleure innocuité.
Les autres objets, caractéristiques et avantages de la présente invention apparaitront à l'examen de la description suivante et des dessins d'accompagnement. Il est entendu que d'autres avantages peuvent être incorporés.
RÉSUMÉ
Pour atteindre cet objectif, selon un mode de réalisation la présente invention prévoit un inhibiteur du transporteur MCT7/ SLC16A6 pour son utilisation dans la régulation de la pigmentation cutanée.
De manière surprenante, les inventeurs se sont aperçus que l'inhibition du transporteur MCT7/ SLC16A6 avait un effet sur la mélanogenèse et notamment une diminution de la production de mélanine qui permet de réguler la pigmentation cutanée.
L'utilisation d'un inhibiteur de la famille de transporteurs MCT/ SLC16A permet en limitant, voire en bloquant, la production de mélanine d'assurer un blanchiment de la peau ou une dépigmentation cutanée.
Le transporteur MCT7/ SLC16A6 est à ce jour un récepteur orphelin dont les substrats restent inconnus. La demanderesse a constaté que ce transporteur était une protéine ayant pour fonction le transport cellulaire de monocarboxylates, tels que le lactate, le pyruvate, et acides aminés à chaine courte. Le transporteur MCT est un transporteur transmembranaire. MCT est l'acronyme de l'anglais MonoCarboxylate Transporter. Le transporteur MCT7 est codé par le gène SLC16A6.
Le transporteur MCT7 est exprimé dans un grand nombre de types de cellules allant des cellules T, aux cellules cancéreuses ou bien encore dans les cellules endothéliales du cerveau.
L'implication du transporteur MCT7 dans la mélanogenèse n'a pas été documentée avant la présente demande. Ainsi, l'inhibition de ce MCT pour réguler la pigmentation cutanée est surprenante.
Avantageusement, l'inhibiteur du transporteur MCT7 /SLC16A6 est le UK5099. Le numéro CAS de cet inhibiteur est 56396-35-1.
Un autre aspect de la présente invention concerne une composition pour son utilisation pour la régulation de la pigmentation cutanée comprenant une quantité efficace d'un inhibiteur du transporteur MCT7 /SLC16A6 ou d'un sel cosmétiquement ou phamarceutiquement acceptable de celui-là.
BRÈVE DESCRIPTION DES FIGURES
Les buts, objets, ainsi que les caractéristiques et avantages de l’invention ressortiront mieux de la description détaillée d’un mode de réalisation de cette dernière qui est illustrée par les dessins d’accompagnement suivants dans lesquels :
Les Figures 1 et 2 représentent le niveau d'expression de SLC16A6 dans des cellules B16F10 transfectées par un siRNA contrôle ou deux siRNA différents dirigés contre SLC16A6 par PCR quantitative (figure 1), et par Western Blot (figure 2).
La figure 3 représente la quantification du niveau de mélanine produit dans les cellules B16F10 après transfection avec un siRNA contrôle ou deux siRNA différents dirigés contre SLC16A6 et stimulation de la pigmentation avec Forskoline et IBMX, au spectrophotomètre à 405nm.
La figure 4 représente la viabilité des cellules B16F10 après 72 heures de traitement avec différentes doses de UK5099.
La figure 5 représente la quantification du niveau de mélanine produit dans les cellules B16F10 après traitement par différentes doses de UK5099 et stimulation de la pigmentation avec Forskoline et IBMX, au spectrophotomètre à 405nm.
La figure 6 représente la viabilité des cellules MNT1 après 72 heures de traitement avec différentes doses de UK5099.
La figure 7 représente la quantification du niveau de mélanine produit dans les cellules MNT1 après traitement par deux doses de UK5099 pendant 7 à 28 jours au spectrophotomètre à 405nm.
La figure 8 représente la quantification du niveau de mélanine des épidermes pigmentés humains reconstruits après traitement par l’inhibiteur UK5099 à 5 ou 10µM pendant 7 jours.
DESCRIPTION DÉTAILLÉE DE L'INVENTION
Avant d’entamer une revue détaillée des modes de réalisation de l’invention, sont énoncées ci-après des caractéristiques optionnelles qui peuvent éventuellement être utilisées en association ou alternativement :
Avantageusement, la régulation de la pigmentation cutanée comprend en une dépigmentation de la peau.
Avantageusement, la régulation de la pigmentation cutanée comprend en un blanchiment de la peau.
Avantageusement, la composition comprend comme inhibiteur du transporteur MCT7 /SLC16A6 le UK5099.
Avantageusement, la composition est adaptée à une application topique.
Composition dans laquelle la régulation de la pigmentation cutanée comprend le blanchiment de la peau et/ou la dépigmentation de la peau.
Dans la présente invention, on entend par :
  • « application topique », le fait d'appliquer ou d'étaler les compositions selon l'invention à la surface de la peau,
  • « cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable », que la composition selon l'invention est appropriée pour entrer en contact avec le corps et plus particulièrement la peau sans provoquer de réactions de toxicité ou d'intolérance.
  • « quantité efficace » et « quantité suffisante » les quantités nécessaires soit des constituants soit de la composition qu'il convient d'utiliser pour obtenir une efficacité de régulation de la pigmentation cutanée sur la peau sans engendrer d'effet indésirable.
L'inhibiteur du transporteur MCT7 /SLC16A6 et la composition selon l'invention sont destinés à être utilisés pour la régulation de la pigmentation cutanée. La régulation de la pigmentation cutanée s'entend comme contrôle de la pigmentation de la peau y compris le cuir chevelu. Le contrôle de la pigmentation comprend la dépigmentation de la peau, notamment de zones hyper pigmentées et/ou le blanchiment de la peau, en particulier pour obtenir une pigmentation homogène de la peau et/ou une uniformisation du teint et/ou une atténuation des tâches et/ou un éclaircissement de la peau.
Un rôle de MCT7 et donc de SLC16A6 dans la mélanogenèse a été identifié par les inventeurs en étudiant l'effet de l'extinction ou de la réduction de l'expression de SLC16A6, selon l'exemple 1.
L'inhibition du transporteur MCT7 /SLC16A6 est effectuée par un inhibiteur de cette famille de transporteurs. Préférentiellement, l'inhibiteur choisi est le UK5099.
Le UK5099 est une molécule de formule .Le UK5099 est représenté par la formule Chem. 1 ci-dessous. Le numéro CAS étant 56396-35-1.
Selon un autre aspect, l'invention concerne une composition pour son utilisation pour la régulation de la pigmentation cutanée qui comprend un inhibiteur tel que décrit ci-dessus. Avantageusement, la composition comprend un inhibiteur tel que décrit ci-dessus ou un sel cosmétiquement ou pharmaceutiquement, notamment dermatologiquement, acceptable.
Préférentiellement, la composition comprend au moins un inhibiteur du transporteur MCT7 /SLC16A6. Par exemple, la composition comprend une quantité efficace de UK5099. À titre d'exemple préféré, la quantité efficace in vitro de U5099 est avantageusement inférieure ou égale à 10µM. La composition selon l'invention pour son utilisation pour la régulation de la pigmentation cutanée comprend avantageusement comme principe actif principal un inhibiteur du transporteur MCT7 /SLC16A6. Préférentiellement, le principe actif principal est le UK5099.
Selon une possibilité, la composition comprend de 0,5% à 20% en poids d'inhibiteur du transporteur MCT7 /SLC16A6 par rapport au poids total de la composition.
Selon une possibilité, la composition comprend en plus d'un inhibiteur du transporteur MCT7 /SLC16A6, comme le UK5099, un agent synergique. Par agents synergétiques dépigmentant on peut citer l’hydroquinone, l’acide kojique, l’acide azélaïque, acide phytique, acide mandélique, la vitamine C et ses dérivés, la vitamine B et ses dérivés, la vitamine A et ses dérivés, les extraits de plantes tels que Glycyrrhiza glabra, Morus Alba, le resveratrol, l’undecylenoyl phenylalanine, les peptides tels que Acetyl Glycyl β-Alanine, les dérivés du Resorcinol, Hexyl resorcinol, Butyl Resorcinol, Phenylethyl Resorcinol.
Préférentiellement, la composition selon l'invention est une composition cosmétique ou dermatologique. Avantageusement, la composition est sous une forme adaptée à une application topique.
La composition selon l'invention peut également contenir d'autres ingrédients usuels en cosmétologie ou en dermatologie, tels que des agents humectant, des conservateurs, des colorants, des parfums, des agents de pénétration tels que le monoéthyléther de diéthylèneglycol, etc.
La composition selon l'invention comprend avantageusement un véhicule approprié ou des excipients appropriés pour une administration topique externe, en particulier des excipients acceptables sur le plan dermatologique et cosmétologique. Ces excipients appropriés pour la formulation sont bien connus de l'homme du métier et comprennent en particulier des agents de pénétration tels que l'éthoxydiphénol, le phytantriol, l'octyl dodécanol et l'escine ; les épaississants tels que les gommes naturelles et les polymères de synthèse ; les émollients et les tensioactifs tels que l'octanoate de cétéaryle, le myristate d' isopropyle, l 'isononanoate de cétéaryle, la diméthicone, la cyclométhicone, le 3-diisostéarate de polyglycéryle, le polyisobutène hydrogéné, l'alcool cétylique, le palmitate cétylique, le phosphate cétylique, des triglycérides d'acide caprique et caprylique ; les émulsionnants tels que des esters de sorbitane, des dérivés d'acide stéarique ou palmitique, des sucro-esters ou glucolipides du type myristyl glucoside ou stéaryl glucoside ; les conservateurs tels que le phénoxy- éthanol, le parahydroxybenzoate de méthyle (méthylparaben), le parahydroxybenzoate d'éthyle (éthylparaben), le parahydroxybenzoate de propyle (propylparaben) et le Phenonip® associant du phénoxyéthanol et des parahydroxybenzoates de méthyle, éthyle, butyle et isobutyle ; une association à effet antimicrobien d'un lipoaminoacide, d'un acide gras hydroxylé de 8 à 12 atomes de carbone et d'un alkyléther de glycérine; les colorants ; les parfums ; etc.
La composition selon l'invention est présente sous toutes les formes galéniques normalement utilisées dans les domaines cosmétique et dermatologique convenant pour l'application topique par exemple: lotion sérum, émulsion de consistance plus ou moins fluide, blanche ou colorée, obtenue par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse, émulsion huile dans eau (H/E) ou inversement émulsion eau dans huile (E/H) de type lait, crème, gel, gel-émulsion, d'un masque ou d'un produit anhydre huile baume, poudre. Elles peuvent également se présenter sous forme de bâtonnet.
Parmi ces préparations on préfère les crèmes, les gels fluides ou épais, ou le vaporisateur dont l'application est simple et facile sur toutes les parties du corps.
Les compositions selon l'invention sont appliquées par voie topique en quantité suffisante chez l'homme, c'est-à-dire en quantité correspondant aux doses d'application usuelles pour le type de composition considéré (gel, crème, lotion, etc.). Par exemple, dans le cas d'une crème pour le visage, on applique de 0,5 à 3 g, et notamment de 1 à 2 g de crème par jour en une ou plusieurs expositions. Par exemple, dans le cas d'une crème pour le corps, on applique de 5 à 12 g, et notamment de 7 à 10 g de crème par jour en une ou plusieurs expositions.
Exemple 1
Il a été étudié l’effet de l’extinction de l’expression de SLC16A6 par une approche de RNA silencing dans un modèle de culture cellulaire de mélanomes de souris (cellules B16F10), connues pour leur réponse aux activateurs chimiques de la pigmentation (Forskoline et IBMX : activateurs d’AMPc). Pour cela les cellules ont reçu deux siRNA différents dirigés contre SLC16A6 par transfection avec le réactif HiPerfect (si#1: Flexitube Qiagen, SI01419915, si#2: siGENOME Dharmacon D-052094-01). Après 24 heures, le processus de pigmentation a été induit par ajout des activateurs d’AMPc précédemment cités. Au bout de 48 heures, les cellules ont été observées par microscopie afin d’évaluer leur degré de pigmentation. Le silencing du gène SLC16A6 entraine une très forte diminution de la pigmentation dans ces cellules, et ce avec les deux siRNA utilisés.
Exemple 2
Il a ensuite été vérifié le niveau d’expression de SLC16A6 en réponse aux deux siRNA au niveau ARN messagers par PCR quantitative (figure 1) et au niveau protéique par Western blot (figure 2).
Les deux siRNA utilisés apparaissent efficaces pour diminuer l’expression de SLC16A6 tant au niveau ARN (figure 1) que protéique (figure 2), confirmant que l’effet observé sur la pigmentation des cellules à l'exemple 1 est bien dû au silencing de SLC16A6.
Exemple 3
Le niveau de production de mélanine a ensuite été quantifié en réponse à l’extinction de l’expression de SLC16A6 (figure 3). Pour cela les cellules B16F10 ont été transfectées avec un siRNA contrôle ou deux siRNA différents dirigés contre SLC16A6, et ont reçu 24 heures plus tard les activateurs de la pigmentation (Forskoline et IBMX) pendant 48 heures. Les cellules ont ensuite été traitées par une solution de NaOH 0.5M afin de quantifier leur teneur en mélanine par spectrophotométrie à 405nm. Pour chaque condition, la quantité de mélanine a été rapportée à la quantité de protéines présentes dans les cellules. On observe dans la figure 3 que le silencing de SLC16A6 conduit à une diminution significative de la production de mélanine dans les cellules B16F10, et ce de manière similaire et significative avec les deux siRNA utilisés.
Ces expérimentations ont donc permis de mettre en évidence un rôle de SLC16A6 dans le processus de pigmentation cellulaire, qui n’avait pas été mis en évidence jusqu’à présent.
Exemple 4
Étude de l’effet d’un inhibiteur commercial de la famille de transporteurs MCT/ SLC16A, nommé UK5099.
Dans un premier temps, l’effet de cet inhibiteur a été analysé sur la viabilité des cellules B16F10 après traitement par différentes doses pendant 72 heures. La viabilité a été mesurée par spectrophotométrie à 490nm après ajout du réactif Cell Titer Acqueous One Solution (Promega) (figure 4). À partir de 10µM, la viabilité cellulaire diminue à 70% par rapport au contrôle et la viabilité cellulaire est de 40% à la dose de 50µM. Il apparait donc nécessaire de travailler à des concentrations inférieures à 50µM sur ce modèle cellulaire, plus préférentiellement inférieures ou égales à 10µM.
Exemple 5
Étude de l’effet de l’inhibiteur UK5099 sur la production de mélanine dans les cellules B16F10 après 72 heures de traitement pour des doses allant jusqu'à 10µM. Pour cela, les cellules ont reçu le UK5099 à 0.5, 1, 5 ou 10µM pendant 24 heures, et 24 heures plus tard, les activateurs d’AMPc (Forskoline et IBMX) ont été ajoutés pour 48 heures comme précédemment. En observant les cellules au microscope, on peut noter une diminution visible de la pigmentation dépendant de la dose de UK5099 reçue, à partir de 5µM, 40% de diminution, et qui est encore plus marquée avec 10µM, 58% de diminution. La quantité de mélanine produite par les cellules B16F10 en réponse aux activateurs d’AMPc est donc fortement diminuée après traitement par 5µM et 10µM de UK5099 et ce de manière significative (figure 5).
L’inhibiteur UK5099, spécifique de la famille de transporteurs MCT a donc un effet notable sur la mélanogenèse dans les cellules de mélanome murin B16F10.
Exemple 6
Afin de conforter ces résultats, un autre modèle, à savoir les cellules de mélanome humain MNT1, a été étudié. Ces cellules ont la particularité d’être basalement très pigmentées et constituent un modèle de choix pour étudier l’effet de composés dépigmentants.
La viabilité cellulaire de la lignée MNT1 a d'abord été testée en réponse au traitement par des doses croissantes de UK5099, et ce pendant 72 heures (figure 6).
Les cellules apparaissent résistantes au UK5099 qui ne présente aucun effet sur la viabilité des cellules quelle que soit la dose utilisée pendant 72 heures.
La mélanine produite par les cellules MNT1 en réponse au UK5099 administré à 10 ou 20µM pendant 28 jours de traitement continu (figure 7) a été analysée. La mélanine produite en réponse est quantifiée aux temps intermédiaires de 7, 14 et 21 jours. Ces deux concentrations permettent de diminuer la production de mélanine à partir de 14 jours de traitement qui s'accentue de manière significative avec la durée du traitement. A 28 jours, il a été constaté une diminution de 27% avec 10µM et diminution de 34% avec 20µM.
Exemple 7
L’effet du UK5099 a ensuite été testé sur des épidermes pigmentés humains reconstruits de phototype VI. Pour cela les épidermes ont reçu quotidiennement le UK5099 à 5 ou 10µM pendant 7 jours. La mélanine produite en réponse est quantifiée. Une diminution significative de la quantité de mélanine dans les épidermes traités avec 5µM de UK 5099 est constatée, 18% de diminution. Cette diminution est accentuée avec un traitement par 10µM de UK5099, 34% de diminution. Ces deux concentrations permettent de diminuer la production de mélanine (figure 8).
L’invention n’est pas limitée aux modes de réalisations précédemment décrits et s’étend à tous les modes de réalisation couverts par les revendications.

Claims (8)

  1. Inhibiteur du transporteur membranaire MCT7/ SLC16A6 pour son utilisation dans la régulation de la pigmentation cutanée.
  2. Inhibiteur pour son utilisation selon la revendication précédente étant le UK5099.
  3. Inhibiteur pour son utilisation selon l'une quelconque des deux revendications précédentes dans lequel la régulation de la pigmentation cutanée comprend une dépigmentation de la peau.
  4. Inhibiteur pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2 dans lequel la régulation de la pigmentation cutanée comprend un blanchiment de la peau.
  5. Composition pour son utilisation pour la régulation de la pigmentation cutanée comprenant une quantité efficace d'un inhibiteur du transporteur MCT7/ SLC16A6 ou d'un sel cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable de celui-là.
  6. Composition pour son utilisation selon la revendication précédente dans laquelle l'inhibiteur du transporteur MCT7/SLC16A6 est UK5099.
  7. Composition pour son utilisation selon l'une quelconque des deux revendications précédentes adaptée à une application topique.
  8. Composition selon l'une quelconque des trois revendications précédentes dans laquelle la régulation de la pigmentation cutanée comprend le blanchiment de la peau et/ou la dépigmentation de la peau.
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