FR3098117A1 - Nouvelle composition pharmaceutique et cosmétique et ses applications dans la lutte contre l’alopécie de type androgénétique et sa conséquence notamment sur l’affinement progressif des cheveux - Google Patents

Nouvelle composition pharmaceutique et cosmétique et ses applications dans la lutte contre l’alopécie de type androgénétique et sa conséquence notamment sur l’affinement progressif des cheveux Download PDF

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Abstract

L’invention se reporte à une nouvelle composition pharmaceutique et cosmétique dénommée CERES-2 contenant dans des proportions bien définies un mélange de Puerarrie Flos, de Curcuma Aeroginosa, de Sophora Flavescens et de Curcuma Longa et à ses utilisations notamment dans les domaines pharmaceutiques et cosmétiques dans les traitements des troubles capillaires consécutifs à l’activité négative des hormones mâles sur le cycle de vie des cheveux.

Description

Nouvelle composition pharmaceutique et cosmétique et ses applications dans la lutte contre l’alopécie de type androgénétique et sa conséquence notamment sur l’affinement progressif des cheveux
La présente invention a pour objet une nouvelle composition chimique, les préparations qui la contiennent et ses applications dans le traitement des cellules de cheveux vieillissantes sous l’effet de l’action des hormones mâles.
Dans les domaines de la cosmétologie et de la dermatologie, de plus en plus d’efforts ont été engagés pour permettre de préserver les cellules des follicules pileux, organes producteurs de la kératine des cheveux.
Ces recherches sont motivées par deux phénomènes fondamentaux que sont l’allongement de la durée de vie et l’accumulation de plus en plus importante de stress extérieurs.
Les progrès en matière de soins médicaux ainsi que les progrès réalisés en matière d’hygiène de vie ont eu pour conséquence un accroissement de la durée de vie moyenne d’un individu d’environ 25 à 30 années depuis le début du XXième siècle. Les cheveux se renouvellent selon un cycle bien connu: la phase anagène (croissance du cheveu) suivie de la phase catagène (dégradation du cheveu) et enfin de la phase télogène (repos et chute). Quand tout se passe bien, ce cycle se reproduit à l’identique tout au long de la vie d’un individu, chaque cheveu qui tombe étant alors remplacé par un cheveux de calibre identique. Dans ce cas, la chevelure ne s’appauvrit pas.
Toutefois ce cycle est souvent perturbé pas l’activité des hormones mâles et surviennent alors des alopécies dites androgénétiques. Les alopécies androgénétiques représentent plus de 95% des chutes de cheveux chez l’homme, et 90% chez la femme. Elles sont dues à un dysfonctionnement des hormones androgènes, au niveau des follicules pileux, organes producteurs de la kératine des cheveux. Ce dysfonctionnement entraîne le métabolisme de la testostérone en circulation dans le sang en une nouvelle hormone, la DHT (dihydrotestostérone) sous l’impulsion d’une enzyme locale, la 5 alpha-réductase.
Véhiculée par le plasma sanguin, la DHT envoie à la papille dermique du follicule pileux une série d’informations négatives qui dérèglent l’horloge du cycle capillaire.
Ces informations imposent aux follicules une cadence de production débridée, les obligeant à enclencher des cycles de vie de plus en plus rapprochés. En conséquence de ce qui précède, les cheveux tombent de plus en plus prématurément, leur repousses sont de plus en plus fines et éphémères. A terme, épuisés, les follicules se miniaturisent et finissent par ne produire qu'un fin duvet, puis plus rien du tout. En fin de processus, les follicules inactifs s'enfoncent dans le derme et la peau devient lisse.
L’objet de la présente invention est une nouvelle composition permettant de protéger le cycle de vie du cheveu de l’action négative de la DHT et de stimuler la production de kératine, matière constituant la fibre capillaire.
Exemple 1: Effet sur la prolifération cellulaire et la protection de ladite prolifération contre l’activité négative de la DHT.
L’effet du CERES-2 a été mis en évidence sur un modèle in vitro. Les cellules modèles utilisées pour stimuler la croissance des follicules pileux humains in vitro sont des cellules de la lignée primaire HHFK (Human Hair Follicular Keratinocytes). Cette lignée est composée de cellules souches de kératinocytes intervenant dans la morphogenèse des follicules capillaires. Les cellules HHFK ont été cultivées à 37°C, sous atmosphère enrichie à 5% de CO2 en milieu spécifique (Keratinocyte Médium).
La prolifération cellulaire est mesurée par dosage colorimétrique du MTT. Le réactif utilisé est le sel de tétrazolium MTT (bromure de 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium). L’anneau du tétrazolium qu’il contient est réduit, par la succinate déshydrogénée mitochondriale des cellules vivantes actives en formazan. Ceci forme un précipité dans la mitochondrie de couleur violette.
La quantité de précipité formée est proportionnelle à la quantité de cellules vivantes et à l’activité métabolique de chaque cellule. Il convient donc après l’incubation des cellules avec du MTT pendant un certain temps à 37°C (3 heures) de lyser les cellules, leurs mitochondries et de dissoudre les précipités de Formazan violets dans du DMSO 100%. Un simple dosage de la densité optique à 570 nm par spectroscopie permet de connaître la quantité relative de cellules vivantes et actives métaboliquement et ainsi quantifier la prolifération cellulaire.
L’activité inhibitrice du CERES-2 sur l’hormone dihydrotestostérone (DHT) responsable de l’alopécie androgénétique (AGA) a été mesurée par la technique du MTT. La DHT a été employée à la concentration de 100 nM.
Le CERES-2 a été testé aux concentrations suivantes: 1%, 2,5% et 5%.
Les essais sont donc réalisés sur des kératinocytes folliculaires cultivés dans des supports sous forme de plaques de 96 puits.
Chaque formulation capillaire est mise en contact avec les cellules à la concentration voulue avec ou sans DHT. Les cellules sont ensuite incubées à 37°C sous une atmosphère enrichie de 5% de CO2.
Au bout de chaque période de 24h, les puits sont lavés et les cellules reçoivent du milieu de culture frais supplémenté en formulation capillaire avec ou sans DHT, avant mise en culture à 37°C sous 5% de CO2.
Dès 4h, puis toutes les 24h, la prolifération cellulaire est mesurée par un test colorimétrique MTT avec lecture de la densité optique à 570 nm. Les résultats sont exprimés selon une valeur d’absorbance obtenue en fonction du temps.
L’expérience 1 mesure l’effet des formulations capillaires sur la stimulation de la croissance des kératinocytes folliculaires.
Certaines substances contenues dans le CERES-2 sont décrites pour stimuler la croissance des follicules pileux.
C’est dans le but d’observer cette stimulation de la croissance des cheveux humains que différentes formules capillaires sont testées ici. Les cellules représentatives de la croissance des cheveux in vitro utilisées dans cette étude sont des kératinocytes folliculaires humains.
Pour observer cet effet stimulant, chaque formulation capillaire est mise en contact à différentes concentrations avec les kératinocytes, avec une application quotidienne répétée sur 5 jours.
Chaque jour (toutes les 24h), le milieu de culture est renouvelé, et le volume nécessaire de formulation capillaire est remis en contact sur les cellules.
Lecture des résultats.
Tableau généré à l’aide des outils de MS Word :
4h 24h 48h
CT 0,154 0,164 0,172 0,182 0,244 0,253
C-2, 1,0% 0,305 0,312 0,325 0,315 0,385 0,391
C-2, 2,5% 0,295 0,300 0,301 0,323 0,331 0,341
C-2, 5,0% 0,302 0,315 0,312 0,335 0,333 0,322
Tableau généré à l’aide des outils de MS Word :
72h 96h 120h
CT 0,289 0,290 0,265 0,278 0,311 0,320
C-2, 1,0% 0,422 0,446 0,502 0,510 0,603 0,610
C-2, 2,5% 0,450 0,491 0,512 0,521 0,595 0,607
C-2, 5,0% 0,390 0,401 0,489 0,492 0,588 0,594
Tableau généré à l’aide des outils de MS Word :
4h 24h 48h
M E M E M E
CT 0,159 0,007 0,177 0,007 0,248 0,006
C-2, 1,0% 0,309 0,005 0,320 0,007 0,388 0,004
C-2, 2,5 0,298 0,003 0,312 0,015 0,336 0,007
C-2, 5,0% 0,309 0,009 0,324 0,016 0,327 0,008
Tableau généré à l’aide des outils de MS Word :
72h 96h 120h
M E M E M E
CT 0,290 0,001 0,272 0,009 0,315 0,006
C-2, 1,0% 0,434 0,017 0,506 0,006 0,607 0,005
C-2, 2,5 0,471 0,029 0,517 0,006 0,601 0,008
C-2, 5,0% 0,396 0,008 0,491 0,002 0,591 0,005
CT = Contrôle
C-2 = Ceres-2
M = Moyenne
E = Ecart-type
CERES-2 démontre un effet stimulant sur la croissance des kératinocytes folliculaires. L’effet est marqué dès 4 heures de contact. Les effets stimulants sont observés dès la concentration de 1%. Les concentrations à 1% et 2,5% produisent des effets comparables (près de 90% de kératinocytes folliculaires en plus que sur la culture contrôle) et supérieurs à la concentration à 5%.
Nous comparons maintenant les taux de croissance. Le taux de croissance est calculé par comparaison de l’absorbance obtenue avec les cellules traitées, avec l’absorbance obtenue avec les cellules témoins, prise comme valeur de référence (=1), selon la formule:
TC = A (cellules traitées) / A (cellules témoins)
Où TC = Taux de Croissance et A = Absorbance.
Tableau généré à l’aide des outils de MS Word :
4h 24h 48h 72h 96h 120h
Contrôle 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000
CERES-2 1,00 % 1,937 1,811 1,562 1,500 1,863 1,923
2,50 % 1,868 1,766 1,353 1,626 1,901 1,905
5,00 % 1,937 1,832 1,319 1,366 1,805 1,874
CERES-2 démontre une action stimulante similaire avec les trois concentrations testées: les valeurs obtenues se situent toutes au-dessus de la valeur de référence (cellules témoins) dès 4 heures de contact. L’effet stimulant est très marqué: les taux de croissance se trouvent quasiment doublés à 120 heures pour les trois concentrations testées.
L’expérience 2 mesure l’action des formulations sur l’hormone responsable de l’alopécie androgéno-dépendante, de dihydrotestostérone (DHT).
L’action de la DHT sur l’apparition de la calvitie, l’affinement des cheveux (racines et kératines) a été démontrée dans de fort nombreuses études. Les alopécies androgéno-dépendantes résultent d’un raccourcissement de la phase anagène du cycle de vie du cheveu et d’une miniaturisation des follicules pileux. En pénétrant les follicules pileux, la dihydrotestostérone stimule la production de certaines protéines qui inhibent à leur tour la croissance des cheveux.
Le protocole de la première expérience a été reproduit.
Les cultures de kératinocytes folliculaires ont cette fois été mises en présence de DHT employée à la concentration de 100 nM. Lecture des résultats :
Tableau généré à l’aide des outils de MS Word :
4h 24h 48h
CT 0,154 0,146 0,172 0,161 0,244 0,226
CT + DHT 0,119 0,111 0,134 0,121 0,196 0,175
C-2, 1,0% 0,247 0,287 0,280 0,309 0,339 0,377
C-2, 2,5% 0,263 0,280 0,253 0,271 0,301 0,314
C-2, 5,0% 0,257 0,296 0,259 0,303 0,320 0,307
Tableau généré à l’aide des outils de MS Word :
72h 96h 120h
CT 0,270 0,269 0,246 0,251 0,288 0,293
CT + DHT 0,224 0,208 0,224 0,192 0,231 0,223
C-2, 1,0% 0,410 0,393 0,487 0,497 0,543 0,567
C-2, 2,5% 0,446 0,428 0,486 0,481 0,565 0,583
C-2, 5,0% 0,367 0,386 0,484 0,464 0,529 0,559
Tableau généré à l’aide des outils de MS Word :
4h 24h 48h
M E M E M E
CT 0,150 0,006 0,166 0,008 0,235 0,012
CT + DHT 0,115 0,005 0,123 0,010 0,128 0,015
C-2, 1,0% 0,271 0,021 0,359 0,044 0,451 0,067
C-2, 2,5% 0,265 0,014 0,333 0,077 0,453 0,083
C-2, 5,0% 0,271 0,022 0,324 0,029 0,423 0,083
Tableau généré à l’aide des outils de MS Word :
72h 96h 120h
M E M E M E
CT 0,270 0,001 0,249 0,004 0,291 0,003
CT + DHT 0,158 0,011 0,185 0,023 0,200 0,005
C-2, 1,0% 0,401 0,012 0,492 0,007 0,555 0,017
C-2, 2,5% 0,437 0,013 0,484 0,004 0,574 0,013
C-2, 5,0% 0,376 0,014 0,474 0,014 0,544 0,021
CT = Contrôle
C-2 = Ceres-2
M = Moyenne
E = Ecart-type
CERES-2 démontre un effet inhibiteur très marqué sur la DHT, visible dès 4h de traitement, particulièrement aux concentrations 1,0% et 2,5%. Avec le CERES-2 concentré à 2,5%, on dénombre après 120 heures près de 2 fois plus de kératinocytes folliculaires que pour la culture « contrôle » et près de 3 fois plus que dans la culture « contrôle + DHT ».
Comparons maintenant les taux de croissance. Le taux de croissance est calculé par comparaison de l’absorbance obtenue avec les cellules traitées, avec l’absorbance obtenue avec les cellules témoins, prise comme valeur de référence (=1), selon la formule:
TC = A (cellules traitées) / A (cellules témoins)
Où TC = Taux de Croissance et A = Absorbance.
Tableau généré à l’aide des outils de MS Word :
4h 24h 48h 72h 96h 120h
CT 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000
CT + DHT 0,765 0,739 0,543 0,587 0,745 0,687
CERES-2 1,00 % 1,806 2,158 1,918 1,487 1,979 1,908
2,50 % 1,767 2,006 1,928 1,619 1,946 1,975
5,00 % 1,803 1,951 1,798 1,395 1,907 1,871
Le CERES-2 démontre une activité inattendue et expliquée par la mise en synergie des mécanismes d’action pharmacologique des substances formant sa composition: CERES-2 confirme une forte activité inhibitrice de la DHT. Le ralentissement de la production de kératinocytes folliculaires sous l’action de la DHT est visible dès 4 heures et ne s’atténue pas à 120 heures.
Exemple 2: Exemple de formulation pharmaceutique ou cosmétique du CERES-2.
Cet exemple est donné à titre indicatif et sans caractère limitatif.
Les pourcentages de la composition sont donnés en poids par rapport au poids total (pour 100g).
Principe actif:
CERES-2. Extrait aqueux à 2,5% représentant 0,05% d’extrait sec tel que défini dans l’exemple 1.
Excipients sans effets notoires (en % de masse)
EAU PURIFIEE: 90,741749
PROPANEDIOL: 2,817
POLYGLYCERYL-4 CARATE: 2,25
BENZYL ALCOHOL: 0,91225
SODIUM PCA: 0,756
SODIUM LACTATE: 0,7545
QUATERNIUM-52: 0,35
CITRUS AURANTIUM DULCIS OIL: 0,3
LAVANDULA HYBRIDA OIL: 0,3
ROSMARINUS OFFICINALIS (ROSEMARY) LEAF OIL: 0,3
HYDROLYZED SOY PROTEIN: 0,3
DEHYDROACETIC ACID: 0,1075
BAICALIN: 0,033
CITRIC ACID: 0,0315
NIACINAMIDE: 0,22
CYSTEINE: 0,16667
METHIONINE: 0,16667
TRYPTOPHAN: 0,16667
SODIUM BENZOATE: 0,016
DISODIUM PHOSPHATE: 0,0155
FRUCTOSE: 0,015
GLYCERIN: 0,015
GLYCINE: 0,015
PYRIDOXINE HCL: 0,011
CARTHAMUS TINCTORIUS (SAFFLOWER) SEED OIL: 0,01
PHENOXYETHANOL: 0,01
UREA: 0,009
RETINYL PALMITATE: 0,0058
PANTHENOL: 0,005
HELIANTHUS ANNUUS (SUNFLOWER) SEED OIL: 0,004
HYDROLYZED YEAST PROTEIN: 0,0035
ALLANTOIN: 0,0025
THREONINE: 0,0025
INOSITOL: 0,0015
POTASSIUM SORBATE: 0,00125
BIOTIN: 0,00025
TOCOPHEROL: 0,0002
Exemple 3: Effet sur l’épaississement de racines de cheveux et sur l’épaississement des cheveux.
Dans les alopécies de type androgénétiques, l’activité de la DHT produit comme effet notable la diminution de la taille des racines de cheveux situées dans les follicules pileux, laquelle diminution entrainant par voie de conséquence un affinement des cheveux produits par ces follicules pileux.
L’effet du CERES-2 a donc été mis en évidence sur un modèle in vivo en utilisant la mesure du diamètre des racines et des kératines de sujets présentant les signes d’une alopécie androgénétique.
Les résultats expriment le pourcentage d’augmentation du calibre des racines et du calibre des kératines chez la totalité des sujets ayant commencé à utiliser le CERES-2 incorporé au produit décrit à l’exemple 2 entre le 1 janvier et le 31 mars 2018, en application locale sur le cuir chevelu à raison de deux fois par semaine au moins et sur une durée de quatre mois. Les premières mesures sont effectuées au début du traitement (T0). Les secondes le sont après quatre mois (T4).
Les mesures sont réalisées sur des cheveux prélevés sur une zone atteinte par l’alopécie de type androgénétique (vertex par exemple), cheveux prélevés en phase de chute (telogène). Les cheveux ne sont pas arrachés. A chaque fois, les mesures sont prises sur le même cheveu (une mesure de racine et une mesure de kératine).
Les photos sont réalisées au moyen d’un microscope électronique de type Proscope HR Bodelin Technologies muni d’un objectif d’un grossissement de 200. Les mesures sont effectuées au moyen du logiciel Luxus LX.
La significativité des résultats est calculée selon le Test t de Student apparié (NS: pour Non Significatif si p<0,1, S pour Significatif si p<0,05, HS pour significatif si p<0,001).
Nombre de sujets inclus: 37. Les valeurs sont exprimées en micromètres.
Tableau généré à l’aide des outils de MS Word :
(en micromètres) T0 T4
Racines
Calibre moyen 38,89 62,68
Ecart type 12,48 14,45
Test t de student HS HS
Kératines
Calibre Moyen 22,91 29,24
Ecart type 07,42 06,59
Test t de Student HS HS
Ainsi les résultats obtenus montrent que l’application du CERES-2 selon le protocole décrit entraîne une augmentation hautement significative du calibre des racines des cheveux (+72,83%) et une augmentation également hautement significative du calibre des kératines (+35,58%).
L’atrophie des racines et l’affinement des cheveux étant le marqueur de l’alopécie de type androgénétique, le fait de produire un effet notable inverse par application locale démontre la pertinence et l’efficacité de CERES-2 dans la lutte contre une alopécie androgénétique.
La présente invention est une composition chimique caractérisée en ce qu’elle contient en solution ou en suspension, ses constituants selon les proportions suivantes Curcuma aeruginosa Root Extract 25%, Curcuma Long Root Extract 25%, Puerarie Flos Extract 25% et Sophora Flavescens Root extract 25%. Ces désignations sont établies en fonction de la nomenclature INCI Europe (International Nomenclature of Cosmetic Ingredients).
Cette formulation pharmaceutique et cosmétique caractérisée en ce qu’elle contient entre 0,05 et 5,00% de la composition chimique selon la revendication 1 en association avec des excipients habituellement utilisés par l’Homme de l’Art dans des solutions.

Claims (3)

  1. Composition chimique caractérisée en ce qu’elle contient en solution ou en suspension:
    • 25% d’extrait de racine de Curcuma Aeruginosa
    • 25% d’extrait de racine de Curcuma Longa
    • 25% d’extrait de racine de Puerarie Flos
    • 25% d’extrait de racine de Sophora Flavescens
  2. Formulation pharmaceutique et cosmétique caractérisée en ce qu’elle contient entre 0,05 et 5,00% de la composition chimique selon la revendication 1 en association avec des excipients cosmétiquement et pharmaceutiquement acceptables.
  3. Formulation pharmaceutique et cosmétique selon la revendication 2 utilisable dans le traitement des troubles capillaires consécutifs à l’activité perturbatrice de la DHT sur le cycle de vie des cheveux (alopécie de type androgénétique).
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