FR3094494A1 - Procédé de détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique proliférative par dosage immunologique - Google Patents
Procédé de détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique proliférative par dosage immunologique Download PDFInfo
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Abstract
L’invention a pour objet un procédé ex vivo de détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique proliférative, dans un échantillon de sérum ou de plasma humain ou animal, par dosage immunologique de la présence d’anticorps dans l’échantillon dont au moins un des anticorps suivants :- anticorps dirigé(s) contre le Benzo(a)pyrène,- anticorps dirigé(s) contre le phosphatidyl inositol,- anticorps dirigé(s) contre l’acide azélaique. L’invention concerne également un kit pour la mise en œuvre d’un tel procédé.
Description
L’invention concerne la détection ex vivo et le suivi de l’évolution de maladies chroniques prolifératives chez l’homme ou l’animal.
La prolifération excessive de cellules humaines ou animales contribue à la pathogenèse de plusieurs maladies chroniques que l’on appelle maladies prolifératives, telles que les cancers, lymphomes, myélomes et leucémies. Ces pathologies impliquent une transformation cellulaire à laquelle est associée généralement des processus inflammatoires et le passage de composants bactériens, viraux et d’endotoxines à travers les muqueuses. En plus de présenter la caractéristique d’être prolifératives, il peut se développer au cours de l’évolution de la maladie des processus dégénératifs et/ou auto-immuns. On parle alors de co-morbidité qui correspond au résultat de l’association entre maladie proliférative et auto immune et /ou dégénérative
Les solutions thérapeutiques apportées aux maladies prolifératives sont souvent des traitements immunosuppresseurs comme la chimiothérapie ou la radiothérapie qui ne sont pas assez spécifiques, ou des immuno régulateurs (Anticorps Monoclonaux) qui ont une efficacité limitée dans le temps et limitée un certain nombre de patients seulement. En plus, de l’inefficacité de certains de ces traitements, ils sont généralement toxiques et présentent des effets secondaires importants.
Par ailleurs, les traitements sont souvent inefficaces dans les cas très fréquents où les maladies prolifératives sont diagnostiquées tardivement. En effet, s’il existe plusieurs tests de diagnostiques, ceux-ci sont souvent chers, compliqués à mettre en œuvre et pas toujours fiables.
De plus, ces pathologies étant chroniques, elles nécessitent un suivi régulier de l’évolution de la maladie et il n’existe pas aujourd’hui de solution simple et fiable qui permette un tel suivi.
L’objectif de l’invention est de pallier les inconvénients de l’art antérieur en proposant un procédé à la fois de détection et de suivi de l’évolution d’une maladie chronique proliférative chez l’homme ou l’animal, simple à mettre en œuvre, peu invasif, rapide, efficace et faible.
A cet effet l’invention a pour objet un procédéex vivode détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique proliférative, dans un échantillon de fluide biologique humain ou animal, préférentiellement de plasma et/ou sérum humain ou animal, par dosage immunologique de la présence d’anticorps dans l’échantillon dont au moins un des anticorps suivants :
- anticorps dirigé(s) contre le benzo(a)pyrène,
- anticorps dirigé(s) contre le phosphatidyl inositol,
- anticorps dirigé(s) contre l’acide azélaique,
c’est-à-dire dont au moins un anticorps dirigé contre le benzo(a)pyrène et/ou au moins un anticorps dirigé contre le phosphatidyl inositol et/ou au moins un anticorps dirigé contre l’acide azélaique.
- anticorps dirigé(s) contre le benzo(a)pyrène,
- anticorps dirigé(s) contre le phosphatidyl inositol,
- anticorps dirigé(s) contre l’acide azélaique,
c’est-à-dire dont au moins un anticorps dirigé contre le benzo(a)pyrène et/ou au moins un anticorps dirigé contre le phosphatidyl inositol et/ou au moins un anticorps dirigé contre l’acide azélaique.
Avantageusement, ce procédé est simple à réaliser puisqu’il est effectué sur un échantillon de fluide biologie et qu’il met en œuvre des techniques classiques de dosages immunologiques. Le procédé de dosage immunologique mime ex vivo ce qui se passe in vivo où des antigènes sont liés à des immunoglobulines (antigènes).
Le procédé selon l’invention peut être mis en œuvre à l’aide d’un kit qui constitue un autre objet de l’invention.
D’autres caractéristiques et avantages de l’invention ressortiront de la description en détails qui va suivre.
Définitions
Par « anticorps circulants » au sens de l’invention, on entend des anticorps que l’on retrouve dans les fluides biologiques humains ou animaux, en particulier dans le sang, le sérum et/ou le plasma d’êtres humains ou d’animaux.
Par « blanc réactif » au sens de l’invention, on entend une solution ou un mélange contenant l’ensemble des réactifs utilisés au cours du procédé selon l’invention, mais qui ne contient pas l’échantillon à analyser. Il permet d’apporter une correction de base aux résultats du dosage. Il définit le bruit de fond du procédé de dosage.
Par « constituant bactérien » on entend un produit de dégradation des bactéries qui résulte de la lyse bactérienne
Par « fluide biologique » au sens de l’invention, on entend fluide du corps d’un être humain ou d’un animal, en particulier le sang, le sérum et/ou le plasma, le liquide céphalo rachidien, les liquides pleuraux et intra péritonéaux, les liquides intra articulaires, la salive ou l’urine.
Par « maladie proliférative » au sens de l’invention on entend une maladie caractérisée par une prolifération cellulaire anormale et anarchique.
Par « produits du métabolisme bactérien » on entend des molécules produites par les le métabolisme des bactéries, le métabolisme d’une bactérie étant l'ensemble des réactions biochimiques mises en jeu par la bactérie pour permettre sa croissance.
Description détaillée de l’invention
L’invention a donc pour objet un procédéex vivode détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique proliférative.
La maladie peut être toute maladie chronique proliférative, et en particulier il peut s’agir d’un cancer, notamment d’un lymphome, d’un myélome ou d’une leucémie.
Le procédé est réaliséex vivo, en dehors du corps humain ou animal, dans un échantillon de fluide biologique humain ou animal, préférentiellement de sérum ou de plasma humain ou animal, qui a été prélevé avant la mise en œuvre du procédé. L’échantillon de fluide biologique est un échantillon qui a été prélevé et conservé selon les normes habituelles et connues de l’homme du métier.
Le procédé selon l’invention est réalisé par dosage immunologique de la présence dans l’échantillon d’anticorps circulants dirigés contre des antigènes spécifiques des maladies chroniques prolifératives.
Le procédé peut être tout type de procédé de dosage immunologique. Il peut s’agir en particulier d’un dosage Elisa, de tests bandelettes, de tests réalisés à l’aide de billes magnétiques ou encore de test Western Blot. La mise en œuvre de ces tests peut être réalisée selon les connaissances de l’homme du métier.
Dans la mise en œuvre du procédé selon l’invention :
- Les antigènes utilisés pour la mise en œuvre du procédé sont préférentiellement des antigènes synthétisésex vivo. Dans le cas où les antigènes sont des bactéries, ils peuvent être obtenus à partir de cultures bactériennes, ces cultures bactériennes étant préférentiellement identifiées par un système d’identification microbienne automatisé comme le Vitek®.
- Si les antigènes utilisés ne sont pas des bactéries, ils sont préférentiellement couplés (conjugués) à une protéine, telle que la Sérum Albumine Bovine par exemple, pour faciliter la fixation de l’antigène sur le support (plaque, bandelette, etc. en fonction de la méthode de dosage) ; ainsi un anticorps dirigé contre un antigène au sens de la présente invention peut signifier (hors bactéries) anticorps dirigé contre un antigène conjugué que l’expression « conjugué » après l’antigène soit indiquée ou non.
- Les anticorps secondaires, dits anti-isotypes, utilisés, sont fabriqués selon les méthodes classiques connues de l’homme du métier. En particulier, ils peuvent être obtenus comme suit :
* purification d’anticorps (immunoglobulines) humains à partir de sérums témoins
* ces immunoglobulines humaines sont purifiées par chromatographie permettant de séparer les différents isotopes A, M et G pour l’homme, A, M, G et E pour l’animal,
* chaque pic d’électrophorèse (A, M, G ou A, M, G, E) est injecté à des animaux naïfs (rats, lapins par exemple ; animaux non immunisés)
* après trois ou quatre immunisations, la réponse est optimale et les sérums animaux sont prélevés.
* ces sérums sont purifiés ; on obtient ainsi des immunoglobulines (Ig) soit anti-IgA, soit anti IgM, soit anti-IgG ; soit anti-IgE (pour l’animal uniquement),
* sur ces immunoglobulines purifiées, peuvent être ensuite liées une enzyme telle que la peroxydase ou la phosphatase.
* l’excès de réactif est éliminé par chromatographie.
- Les antigènes utilisés pour la mise en œuvre du procédé sont préférentiellement des antigènes synthétisésex vivo. Dans le cas où les antigènes sont des bactéries, ils peuvent être obtenus à partir de cultures bactériennes, ces cultures bactériennes étant préférentiellement identifiées par un système d’identification microbienne automatisé comme le Vitek®.
- Si les antigènes utilisés ne sont pas des bactéries, ils sont préférentiellement couplés (conjugués) à une protéine, telle que la Sérum Albumine Bovine par exemple, pour faciliter la fixation de l’antigène sur le support (plaque, bandelette, etc. en fonction de la méthode de dosage) ; ainsi un anticorps dirigé contre un antigène au sens de la présente invention peut signifier (hors bactéries) anticorps dirigé contre un antigène conjugué que l’expression « conjugué » après l’antigène soit indiquée ou non.
- Les anticorps secondaires, dits anti-isotypes, utilisés, sont fabriqués selon les méthodes classiques connues de l’homme du métier. En particulier, ils peuvent être obtenus comme suit :
* purification d’anticorps (immunoglobulines) humains à partir de sérums témoins
* ces immunoglobulines humaines sont purifiées par chromatographie permettant de séparer les différents isotopes A, M et G pour l’homme, A, M, G et E pour l’animal,
* chaque pic d’électrophorèse (A, M, G ou A, M, G, E) est injecté à des animaux naïfs (rats, lapins par exemple ; animaux non immunisés)
* après trois ou quatre immunisations, la réponse est optimale et les sérums animaux sont prélevés.
* ces sérums sont purifiés ; on obtient ainsi des immunoglobulines (Ig) soit anti-IgA, soit anti IgM, soit anti-IgG ; soit anti-IgE (pour l’animal uniquement),
* sur ces immunoglobulines purifiées, peuvent être ensuite liées une enzyme telle que la peroxydase ou la phosphatase.
* l’excès de réactif est éliminé par chromatographie.
Le procédé selon l’invention comporte préférentiellement un test immuno enzymatique basé sur la méthode Elisa. Le procédé de dosage immunologique peut comprendre les étapes suivantes :
- les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps que l’on cherche à détecter dans l’échantillon, sont adsorbés et séchés sur des plaques de micro-titration ; cette étape consiste à sensibiliser des plaques de micro-titration avec le ou les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon.
Les plaques sont ensuite soit directement utilisées pour la mise en œuvre du procédé, soit séchées et conservées en atmosphère sèche et à l’abri de la lumière.
- l’échantillon à tester est ensuite préférentiellement dilué ; cette dilution peut être comprise entre 150 et 1000 fois ;
- de même, de façon préférée, des sérums ou plasmas tests, appelés étalons internes, qui sont des fluides biologiques de sujets sains, préférentiellement des sérums ou plasma de sujets sains (population représentative et appariée avec celle des malades au moins pour le sexe et l’âge), sont utilisés et préférentiellement dilués ; cette dilution peut être comprise entre 150 et 1000 fois,
- l’échantillon, un blanc réactif et préférentiellement également les étalons internes, sont répartis, de façon préférée en duplicate, dans des puits d’au moins une plaque de micro-titration sensibilisée,
- préférentiellement la ou les plaques sont incubées ; selon un mode de réalisation particulièrement adapté elles sont incubées entre 1h30 et 2h00 à une température de 35 à 39°C,
- préférentiellement la ou les plaques sont lavées, c’est-à-dire rincées, préférentiellement plusieurs fois, dans l’objectif d’éliminer toutes les protéines et immunoglobulines non spécifiques ;
- on ajoute ensuite des anticorps anti immunoglobulines humaines ou animales dit anticorps secondaires, dirigés contre des isotypes A, M ou G pour l’homme, A, M, G ou E chez l’animal ; ces anticorps secondaires sont des anticorps dirigés contre les immunoglobulines liées aux antigènes présents dans les puits des plaques de micro-titration ; les anticorps secondaires sont préférentiellement couplés à une enzyme, et de façon préférée à la peroxydase ou phosphatase alcaline ou biotynilés, pour permettre de faire une réaction colorimétrique,
- préférentiellement les plaques sont de nouveau incubées pendant 1 heure à 2 heures à une température comprise entre 35 et 39°C,
- préférentiellement les plaques sont ensuite de nouveau lavées, c’est-à-dire que l’on procède à plusieurs rinçages de façon à éliminer ce qui n’a pas été spécifiquement reconnu,
- préférentiellement on applique ensuite un substrat de l’enzyme (H202pour la peroxydase ou pour la phosphatase) avec un chromogène , cette étape a pour objectif de visualiser les réactions immunologiques. Le chromogène peut être par exemple le tétra-méthyl-benzédine (TMB) ou DAB Diamino benzedin; une réaction colorimétrique apparaît ; celle-ci est d’autant plus intense qu’il y a d’immunoglobulines humaines ou animales fixées sur les antigènes présents dans les puits ;
- éventuellement incuber de nouveau entre 10 et 30 minutes à une température comprise entre 18 et 20°C ; la réaction est ensuite stoppée, préférentiellement en solution acide ;
- la densité optique de chaque puit des plaques de micro-titration est ensuite lue, préférentiellement à l’aide d’un spectrophotomètre ; la lecture se fait préférentiellement à 450 nm avec un alpha de correction à 650 nm ; ces densités optiques sont ensuite préférentiellement enregistrées dans un logiciel.
- les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps que l’on cherche à détecter dans l’échantillon, sont adsorbés et séchés sur des plaques de micro-titration ; cette étape consiste à sensibiliser des plaques de micro-titration avec le ou les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon.
Les plaques sont ensuite soit directement utilisées pour la mise en œuvre du procédé, soit séchées et conservées en atmosphère sèche et à l’abri de la lumière.
- l’échantillon à tester est ensuite préférentiellement dilué ; cette dilution peut être comprise entre 150 et 1000 fois ;
- de même, de façon préférée, des sérums ou plasmas tests, appelés étalons internes, qui sont des fluides biologiques de sujets sains, préférentiellement des sérums ou plasma de sujets sains (population représentative et appariée avec celle des malades au moins pour le sexe et l’âge), sont utilisés et préférentiellement dilués ; cette dilution peut être comprise entre 150 et 1000 fois,
- l’échantillon, un blanc réactif et préférentiellement également les étalons internes, sont répartis, de façon préférée en duplicate, dans des puits d’au moins une plaque de micro-titration sensibilisée,
- préférentiellement la ou les plaques sont incubées ; selon un mode de réalisation particulièrement adapté elles sont incubées entre 1h30 et 2h00 à une température de 35 à 39°C,
- préférentiellement la ou les plaques sont lavées, c’est-à-dire rincées, préférentiellement plusieurs fois, dans l’objectif d’éliminer toutes les protéines et immunoglobulines non spécifiques ;
- on ajoute ensuite des anticorps anti immunoglobulines humaines ou animales dit anticorps secondaires, dirigés contre des isotypes A, M ou G pour l’homme, A, M, G ou E chez l’animal ; ces anticorps secondaires sont des anticorps dirigés contre les immunoglobulines liées aux antigènes présents dans les puits des plaques de micro-titration ; les anticorps secondaires sont préférentiellement couplés à une enzyme, et de façon préférée à la peroxydase ou phosphatase alcaline ou biotynilés, pour permettre de faire une réaction colorimétrique,
- préférentiellement les plaques sont de nouveau incubées pendant 1 heure à 2 heures à une température comprise entre 35 et 39°C,
- préférentiellement les plaques sont ensuite de nouveau lavées, c’est-à-dire que l’on procède à plusieurs rinçages de façon à éliminer ce qui n’a pas été spécifiquement reconnu,
- préférentiellement on applique ensuite un substrat de l’enzyme (H202pour la peroxydase ou pour la phosphatase) avec un chromogène , cette étape a pour objectif de visualiser les réactions immunologiques. Le chromogène peut être par exemple le tétra-méthyl-benzédine (TMB) ou DAB Diamino benzedin; une réaction colorimétrique apparaît ; celle-ci est d’autant plus intense qu’il y a d’immunoglobulines humaines ou animales fixées sur les antigènes présents dans les puits ;
- éventuellement incuber de nouveau entre 10 et 30 minutes à une température comprise entre 18 et 20°C ; la réaction est ensuite stoppée, préférentiellement en solution acide ;
- la densité optique de chaque puit des plaques de micro-titration est ensuite lue, préférentiellement à l’aide d’un spectrophotomètre ; la lecture se fait préférentiellement à 450 nm avec un alpha de correction à 650 nm ; ces densités optiques sont ensuite préférentiellement enregistrées dans un logiciel.
Un rapport Z est ensuite établi pour chaque antigène testé, par rapport à la densité optique des étalons internes :
Z = (DO de l’échantillon à tester – DO moyenne des étalons internes) / Ecart-type contrôle des étalons internes.
Le test est positif (présence de l’anticorps recherché dans l’échantillon donc maladie confirmée) si Z est supérieur ou égal à + 2 ou inférieur ou égal à -2 :
- si Z est inférieur ou égal à -2, il y a une négativité par rapport aux témoins (étalons internes) : il y a eu activation immune mais les anticorps sont à présent complexés à leurs antigènes (complexes immuns)
- si Z est supérieur ou égal à + 2, il y a positivité par rapport aux témoins (étalons internes) : il y a eu activation immune.
Si Z est compris entre -2 et + 2, les valeurs sont dites normales car elles correspondent à la dispersion gaussienne de la population contrôle : l’anticorps recherché n’est pas présent dans l’échantillon.
Z = (DO de l’échantillon à tester – DO moyenne des étalons internes) / Ecart-type contrôle des étalons internes.
Le test est positif (présence de l’anticorps recherché dans l’échantillon donc maladie confirmée) si Z est supérieur ou égal à + 2 ou inférieur ou égal à -2 :
- si Z est inférieur ou égal à -2, il y a une négativité par rapport aux témoins (étalons internes) : il y a eu activation immune mais les anticorps sont à présent complexés à leurs antigènes (complexes immuns)
- si Z est supérieur ou égal à + 2, il y a positivité par rapport aux témoins (étalons internes) : il y a eu activation immune.
Si Z est compris entre -2 et + 2, les valeurs sont dites normales car elles correspondent à la dispersion gaussienne de la population contrôle : l’anticorps recherché n’est pas présent dans l’échantillon.
Il est ainsi possible de détecter si l’être humain ou l’animal à qui appartient le sérum et/ou le plasma testé est atteint d’une maladie proliférative ou non.
De plus le procédé selon l’invention permet également de suivre l’évolution de la maladie. La variation de la valeur Z pour le ou les anticorps recherchés permet de vérifier la variation, l’évolution de la maladie :
- plus Z se rapproche de l’intervalle -2 à +2, plus le taux d’anticorps diminue et la maladie évolue vers une rémission. On peut ainsi vérifier que le traitement est actif sur les processus pathogéniques ;
- tant que Z est supérieur à +2 ou inférieur à -2 la maladie est toujours active.
- plus Z se rapproche de l’intervalle -2 à +2, plus le taux d’anticorps diminue et la maladie évolue vers une rémission. On peut ainsi vérifier que le traitement est actif sur les processus pathogéniques ;
- tant que Z est supérieur à +2 ou inférieur à -2 la maladie est toujours active.
Dans le cas de cancers, si Z est supérieur à + 2 pour les anticorps recherchés selon l’invention, cela signifie qu’il s’agit d’un cancer « liquide » tel qu’un lymphome, un myélome ou une leucémie, et si Z est inférieur à -2 pour les anticorps recherchés selon l’invention, cela signifie qu’il s’agit d’un cancer « solide » tel que des tumeurs sur des organes.
Le dosage d’un ou plusieurs anticorps spécifique(s) permet également de proposer un traitement adapté en fonction du ou des anticorps testés présents dans l’échantillon.
Selon un mode de réalisation particulier, le procédé selon l’invention comprend au moins la mise en œuvre des étapes suivantes :
- fabriquer au moins une plaque de micro titration sensibilisée avec le ou les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon, ou utiliser au moins une plaque de micro titration déjà sensibilisée avec ces antigènes,
- répartir sur la plaque la même quantité d’étalons internes, d’échantillon et de blanc réactif,
- ajouter le ou les anticorps secondaires couplé(s) à une enzyme,
- ajouter un substrat de l’enzyme et un chromogène, attendre la coloration des puits,
- stopper la réaction de coloration,
- lire la densité optique des puits à l’aide d’un spectrophotomètre une longueur d’onde appropriée.
- fabriquer au moins une plaque de micro titration sensibilisée avec le ou les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon, ou utiliser au moins une plaque de micro titration déjà sensibilisée avec ces antigènes,
- répartir sur la plaque la même quantité d’étalons internes, d’échantillon et de blanc réactif,
- ajouter le ou les anticorps secondaires couplé(s) à une enzyme,
- ajouter un substrat de l’enzyme et un chromogène, attendre la coloration des puits,
- stopper la réaction de coloration,
- lire la densité optique des puits à l’aide d’un spectrophotomètre une longueur d’onde appropriée.
Notamment, un mode de réalisation particulièrement adapté de l’invention est un procédé qui comprend au moins la mise en œuvre des étapes suivantes :
- fabriquer au moins une plaque de micro titration sensibilisée avec le ou les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon, ou utiliser au moins une plaque de micro titration déjà sensibilisée avec ces anticorps,
- diluer l’échantillon à tester et des étalons internes,
- répartir en duplicate sur la plaque la même quantité d’étalons internes dilués, d’échantillon dilué et de blanc réactif,
- incuber,
- laver,
- ajouter le ou les anticorps secondaires couplés à la peroxydase ou phosphatase alcaline ou biotynilés,
- incuber,
- laver,
- ajouter un substrat et un chromogène,
- stopper la réaction en solution acide
- lire à 450nm avec un alpha de correction à 650 nm.
- fabriquer au moins une plaque de micro titration sensibilisée avec le ou les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon, ou utiliser au moins une plaque de micro titration déjà sensibilisée avec ces anticorps,
- diluer l’échantillon à tester et des étalons internes,
- répartir en duplicate sur la plaque la même quantité d’étalons internes dilués, d’échantillon dilué et de blanc réactif,
- incuber,
- laver,
- ajouter le ou les anticorps secondaires couplés à la peroxydase ou phosphatase alcaline ou biotynilés,
- incuber,
- laver,
- ajouter un substrat et un chromogène,
- stopper la réaction en solution acide
- lire à 450nm avec un alpha de correction à 650 nm.
Les anticorps recherchés dans le cadre du procédé selon l’invention, quelques soient les antigènes contre lesquels ils sont dirigés, peuvent être des IgM (immunoglobulines d’isotype M), des IgA (immunoglobulines d’isotype A), ou des IgG (immunoglobulines d’isotype G) et chez l’animal uniquement des IgE (immunoglobulines d’isotype E) :
- les anticorps IgA : sont le résultat d’une activation immunitaire mucosal (intestinal, orl, peau, vésical)
- les anticorps IgM: sont le résultat d’une activation du système immunitaire actuel,
- les anticorps IgG : sont le résultat d’une activation du système immunitaire ancien (immunité mémoire)
- les anticorps IgE (chez l’animal uniquement) sont le résultat de la stimulation des mastocytes qui libèrent de l’histamine, c’est-à-dire qu’ils sont le résultat d’un contact avec des antigènes allergisants.
- les anticorps IgA : sont le résultat d’une activation immunitaire mucosal (intestinal, orl, peau, vésical)
- les anticorps IgM: sont le résultat d’une activation du système immunitaire actuel,
- les anticorps IgG : sont le résultat d’une activation du système immunitaire ancien (immunité mémoire)
- les anticorps IgE (chez l’animal uniquement) sont le résultat de la stimulation des mastocytes qui libèrent de l’histamine, c’est-à-dire qu’ils sont le résultat d’un contact avec des antigènes allergisants.
Le procédé selon l’invention est donc réalisé par dosage immunologique de la présence d’anticorps dans l’échantillon dont au moins un anticorps choisis parmi :
- les anticorps dirigé(s) contre le benzo(a)pyrène,
- les anticorps dirigé(s) contre le phosphatidyl inositol,
- les anticorps dirigé(s) contre l’acide azélaique.
- les anticorps dirigé(s) contre le benzo(a)pyrène,
- les anticorps dirigé(s) contre le phosphatidyl inositol,
- les anticorps dirigé(s) contre l’acide azélaique.
En effet, selon l’invention, la présence d’anticorps dirigé(s) contre le benzo(a)pyrène et/ou d’anticorps dirigé(s) contre le phosphatidyl inositol et/ou d’anticorps dirigé(s) contre l’acide azélaique, préférentiellement la présence d’au moins deux de ces trois anticorps, et encore plus préférentiellement la présence de ces trois anticorps, dans un fluide biologique humain ou animal, indique la présence d’une maladie chronique proliférative. Selon l’invention ces anticorps sont impliqués dans les mécanismes physiologiques à l’origine de toutes les maladies chroniques prolifératives.
L’acide azélaïque est un produit de la dégradation des acides gras insaturés. La présence d’acide azélaique chez l’homme ou l’animal provoque une activation du système immunitaire par ce produit de la lipopéroxydation. En effet la présence d’acide azélaïque chez l’homme ou l’animal est le résultat d’une oxydation et l’intervention de radicaux libres OH, 02, NO et N02. Cela signifie notamment qu’il y a une destruction membranaire ou une liaison anarchique à d’autres constituants du soi et par conséquent il devient immunogénique.
Selon l’invention, la présence dans le fluide biologique d’anticorps dirigés contre l’acide azélaïque, en particulier d’IgA et/ou d’IgG, signifie obligatoirement que la personne ou l’animal concerné est atteint par une maladie proliférative chronique.
La présence de benzo(a)pyrene et/ou de phosphatidyl inositol indique une activation du système immunitaire par des constituants cellulaires.
Le benzo(a)pyrene est un carcinogène chimique qui se lie à un récepteur intracyto plasmique appelé AhRmi et le benzo(a)pyrène est représentatif de tous les ligands qui se lient à ce récepteur pour l’activer et entraîner la dérépression de gènes qui provoquent une prolifération.
Selon l’invention, la présence dans le fluide biologique, en particulier dans le sérum et/ou dans le plasma, d’anticorps dirigé(s) contre le benzo(a)pyrene, préférentiellement IgA et/ou IgG, signifie obligatoirement que la personne ou l’animal concerné est atteint par une maladie proliférative chronique.
Le phosphatidyl inositol est un médiateur intracellulaire qui entraîne une cascade d’évènements métaboliques lors de la transformation cellulaire. Ce métabolite est augmenté de façon excessive (jusqu’à 200 fois)
Selon l’invention, la présence dans le fluide biologique d’anticorps dirigé(s) contre le phosphatidyl inositol, préférentiellement IgA et/ou IgG, signifie obligatoirement que la personne ou l’animal concerné est atteint par une maladie proliférative chronique.
Préférentiellement, le procédé selon l’invention comprend le dosage immunologique de la présence d’anticorps dans l’échantillon dont au moins un des anticorps suivants :
- IgG et/ou IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le benzo(a)pyrène, et/ou
- IgG et/ou IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le phosphatidyl inositol, et/ou
- IgG et/ou IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acide azélaique.
- IgG et/ou IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le benzo(a)pyrène, et/ou
- IgG et/ou IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le phosphatidyl inositol, et/ou
- IgG et/ou IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acide azélaique.
Selon une variante particulièrement adaptée, le procédé selon l’invention comprend le dosage immunologique de la présence d’anticorps dans l’échantillon dont au moins les anticorps suivants :
- IgG et IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le benzo(a)pyrène, et
- IgG et IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le phosphatidyl inositol, et
- IgG et IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acide azélaique.
- IgG et IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le benzo(a)pyrène, et
- IgG et IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le phosphatidyl inositol, et
- IgG et IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acide azélaique.
Il suffit que l’un de ces anticorps soit présent dans l’échantillon de fluide biologique testé, en particulier dans le sérum et/ou le plasma testé, c’est-à-dire que le test soit positif pour au moins un de ces anticorps, pour que la personne soit atteinte d’une maladie proliférative chronique.
Le procédé selon l’invention, en plus (soit en même temps, soit dans un test séparé) du dosage immunologique de la présence dans l’échantillon d’au moins un anticorps dirigé contre le benzo(a)pyrène, et/ou d’au moins un anticorps dirigé contre le phosphatidyl inositol, et/ou d’au moins un anticorps dirigé contre l’acide azélaique, peut comprendre également le dosage immunologique de la présence dans l’échantillon d’un ou plusieurs autres anticorps. Il peut s’agir préférentiellement :
- d’anticorps dirigé(s) contre des antigènes qui sont des cofacteurs à l’origine des maladies chroniques prolifératives, et qui permettent de confirmer ou d’affiner le diagnostic et/ou qui permettent de suivre l’évolution de la maladie et/ou qui permettent de proposer un traitement ciblé dirigé contre le ou les antigènes concernés, et/ou
- d’anticorps dirigé(s) contre des antigènes qui sont des conséquences de maladies chroniques prolifératives, et qui permettent de suivre l’évolution de la maladie et/ou qui permettent de proposer un traitement ciblé dirigé contre le ou les antigènes concernés.
- d’anticorps dirigé(s) contre des antigènes qui sont des cofacteurs à l’origine des maladies chroniques prolifératives, et qui permettent de confirmer ou d’affiner le diagnostic et/ou qui permettent de suivre l’évolution de la maladie et/ou qui permettent de proposer un traitement ciblé dirigé contre le ou les antigènes concernés, et/ou
- d’anticorps dirigé(s) contre des antigènes qui sont des conséquences de maladies chroniques prolifératives, et qui permettent de suivre l’évolution de la maladie et/ou qui permettent de proposer un traitement ciblé dirigé contre le ou les antigènes concernés.
Selon un mode particulier de réalisation, le procédé selon l’invention comprend également le dosage immunologique de la présence dans l’échantillon d’au moins un anticorps dirigé contre un antigène qui est un cofacteur à l’origine d’une maladie chronique proliférative, et notamment d’au moins un des anticorps suivants :
- anticorps dirigé contre une entérobactérie, en particulier contre une entérobactérie à Gram négatif, préférentiellement au moins un anticorps dirigé contreMorganella morganiiet/ou au moins un anticorps dirigé contreP seudomonas putida, et/ou au moins un anticorps dirigé contreHafnia alvei, et/ou au moins un anticorps dirigé contre Pseudomonas aeruginosa, et/ou au moins un anticorps dirigé contreCitrobacter koseri, et/ou au moins un anticorps dirigé contreKlebsiella pneumoniae,
- anticorps dirigé(s) contre l’acide palmitique,
- anticorps dirigé(s) contre l’acide oléique,
- anticorps dirigé(s) contre l’acide myristique
- anticorps dirigé(s) contre le malondialdéhyde
- anticorps dirigé(s) contre l’acétylcholine.
- anticorps dirigé contre une entérobactérie, en particulier contre une entérobactérie à Gram négatif, préférentiellement au moins un anticorps dirigé contreMorganella morganiiet/ou au moins un anticorps dirigé contreP seudomonas putida, et/ou au moins un anticorps dirigé contreHafnia alvei, et/ou au moins un anticorps dirigé contre Pseudomonas aeruginosa, et/ou au moins un anticorps dirigé contreCitrobacter koseri, et/ou au moins un anticorps dirigé contreKlebsiella pneumoniae,
- anticorps dirigé(s) contre l’acide palmitique,
- anticorps dirigé(s) contre l’acide oléique,
- anticorps dirigé(s) contre l’acide myristique
- anticorps dirigé(s) contre le malondialdéhyde
- anticorps dirigé(s) contre l’acétylcholine.
Le procédé selon l’invention comprend préférentiellement le dosage immunologique de la présence dans l’échantillon d’au moins deux ou d’au moins trois ou d’au moins quatre des anticorps suivants ou de tous les anticorps suivants :
- anticorps dirigé(s) contre au moins une entérobactérie, en particulier contre au moins une entérobactérie à Gram négatif, préférentiellement anticorps dirigé(s) contreMorganella morganiiet/ou anticorps dirigé(s) contreP seudomonas putida, et/ou anticorps dirigé(s) contreHafnia alvei, et/ou anticorps dirigé(s) contrePseudomonas aeruginosa, et/ou anticorps dirigé(s) contrePseudomonas aeruginosa, et/ou anticorps dirigé(s) contreKlebsiella pneumoniae,
- anticorps dirigé(s) contre l’acide palmitique,
- anticorps dirigé(s) contre l’acide oléique,
- anticorps dirigé(s) contre l’acide myristique
- anticorps dirigé(s) contre le malondialdéhyde
- anticorps dirigé(s) contre l’acétylcholine.
- anticorps dirigé(s) contre au moins une entérobactérie, en particulier contre au moins une entérobactérie à Gram négatif, préférentiellement anticorps dirigé(s) contreMorganella morganiiet/ou anticorps dirigé(s) contreP seudomonas putida, et/ou anticorps dirigé(s) contreHafnia alvei, et/ou anticorps dirigé(s) contrePseudomonas aeruginosa, et/ou anticorps dirigé(s) contrePseudomonas aeruginosa, et/ou anticorps dirigé(s) contreKlebsiella pneumoniae,
- anticorps dirigé(s) contre l’acide palmitique,
- anticorps dirigé(s) contre l’acide oléique,
- anticorps dirigé(s) contre l’acide myristique
- anticorps dirigé(s) contre le malondialdéhyde
- anticorps dirigé(s) contre l’acétylcholine.
Les entérobactéries et en particulier les entérobactéries à Gram négatif, telles queMorganella morganii, Pseudomonas putida,Hafnia alvei,Pseudomonas aeruginosa,Pseudomonas aeruginosaetKlebsiella pneumoniae, possèdent une paroi dont la structure en trois couches leur est spécifique. Cette paroi est constituée de l’extérieur vers l’intérieur : d’une membrane externe, d’une couche mince de peptidoglycane, d’un espace périplasmique qui entoure la membrane cytoplasmique. La membrane externe est constituée d’une double couche lipidique dans laquelle sont incluses des molécules de lipopolysaccharides. Le peptidoglycane constitue une couche rigide, plus mince et plus lâche que chez les bactéries à Gram positif. Il est composé de chaînes linéaires et polyosides reliées entre elles par des peptides. L’espace périplasmique entoure la membrane cytoplasmique.
Ces bactéries sont non pathogènes et peuvent être présentes sur les muqueuses. Toutefois, si elles passent à travers les muqueuses elles peuvent être à l’origine de pathologies chroniques, en particulier de pathologies chroniques prolifératives. Leur passage transmucosal engendre :
- une activation du système immun inné,
- une activation du système immunitaire adaptatif,
- une activation non spécifique de clones auto réactifs (super antigènes),
- une toxicité directe (lipopolysaccharides, endotoxines)
- une activation de systèmes enzymatiques : NO synthase inductible et 'Indoléamine 2,3-dioxygénase (IDO-1).
Selon l’invention, la présence dans le fluide biologique testé, en particulier dans le sérum et/ou dans le plasma d’anticorps dirigé(s) contre ces bactéries signifie une hyper perméabilité mucosale, qui participe au développement des maladies prolifératives.
Ces bactéries sont non pathogènes et peuvent être présentes sur les muqueuses. Toutefois, si elles passent à travers les muqueuses elles peuvent être à l’origine de pathologies chroniques, en particulier de pathologies chroniques prolifératives. Leur passage transmucosal engendre :
- une activation du système immun inné,
- une activation du système immunitaire adaptatif,
- une activation non spécifique de clones auto réactifs (super antigènes),
- une toxicité directe (lipopolysaccharides, endotoxines)
- une activation de systèmes enzymatiques : NO synthase inductible et 'Indoléamine 2,3-dioxygénase (IDO-1).
Selon l’invention, la présence dans le fluide biologique testé, en particulier dans le sérum et/ou dans le plasma d’anticorps dirigé(s) contre ces bactéries signifie une hyper perméabilité mucosale, qui participe au développement des maladies prolifératives.
L’acide palmitique, l’acide oléique et l’acide myristique sont des agents acylants de protéines membranaires et cytoplasmiques. Ces composés ne sont pas naturellement immuno géniques. Ce sont des produits de la lipopéroxydation. Ils le deviennent en cas de déstructuration membranaire liée à l’intervention de radicaux libres. La présence d’ un ou plusieurs anticorps circulants dirigé(s) contre l’un de ces acides signifie donc qu’il y a eu une activation des protéines acylées par des acides gras et signifie donc une destruction membranaire.
Le malondialdéhyde (ou aldéhyde malonique), est la conséquence du stress oxydant. Il est issu notamment de l'action des dérivés réactifs de l'oxygène, du NO sur des acides gras. Il réagit avec la désoxyadénosine et la désoxyguanosine pour former des adducs à l'ADN. Comme l’acide azélaïque, il est le résultat de l’oxydation et de l’intervention de radicaux libres sur les acides gras. Il est donc également un marqueur de la destruction membranaire.
L’acétylcholine est un neurotransmetteur qui est libéré de façon excessive notamment dans les processus prolifératifs. Ainsi la présence d’anticorps circulants dirigé(s) contre ce neurotransmetteur peut-être le signe de la présence d’une maladie proliférative.
Préférentiellement, le procédé selon l’invention comprend le dosage immunologique de la présence d’anticorps dans l’échantillon dont au moins un des anticorps suivants :
- IgA dirigé(s) contre une entérobactérie, préférentiellement IgA dirigé(s) contreMorganella morganiiet/ou IgA dirigé(s) contreP seudomonas putida, et/ou IgA dirigé(s) contreHafnia alvei, et/ou IgA dirigé(s) contrePseudomonas aeruginosa, et/ou IgA dirigé(s) contrePseudomonas aeruginosa, et/ou IgA dirigé(s) contreKlebsiella pneumoniae
- IgM et/ou IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acide palmitique,
- IgM (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acide oléique,
- IgM (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acide myristique,
- IgM et/ou IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le malondialdéhyde,
- IgM (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acétylcholine.
- IgA dirigé(s) contre une entérobactérie, préférentiellement IgA dirigé(s) contreMorganella morganiiet/ou IgA dirigé(s) contreP seudomonas putida, et/ou IgA dirigé(s) contreHafnia alvei, et/ou IgA dirigé(s) contrePseudomonas aeruginosa, et/ou IgA dirigé(s) contrePseudomonas aeruginosa, et/ou IgA dirigé(s) contreKlebsiella pneumoniae
- IgM et/ou IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acide palmitique,
- IgM (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acide oléique,
- IgM (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acide myristique,
- IgM et/ou IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le malondialdéhyde,
- IgM (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acétylcholine.
Selon une variante particulièrement adaptée, le procédé selon l’invention comprend le dosage immunologique de la présence d’anticorps dans l’échantillon dont au moins les anticorps suivants :
- IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre une entérobactérie, préférentiellement IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contreMorganella morganiiet/ou IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contreP seudomonas putida, et/ou IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contreHafnia alvei, et/ou IgA dirigé(s) contrePseudomonas aeruginosa, et/ou IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contrePseudomonas aeruginosa, et/ou IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contreKlebsiella pneumoniae, et
- IgM et IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acide palmitique, et
- IgM (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acide oléique, et
- IgM (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acide myristique, et
- IgM et IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le malondialdéhyde, et
- IgM (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acétylcholine.
- IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre une entérobactérie, préférentiellement IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contreMorganella morganiiet/ou IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contreP seudomonas putida, et/ou IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contreHafnia alvei, et/ou IgA dirigé(s) contrePseudomonas aeruginosa, et/ou IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contrePseudomonas aeruginosa, et/ou IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contreKlebsiella pneumoniae, et
- IgM et IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acide palmitique, et
- IgM (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acide oléique, et
- IgM (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acide myristique, et
- IgM et IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le malondialdéhyde, et
- IgM (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acétylcholine.
Selon un autre mode particulier de réalisation, le procédé selon l’invention comprend également le dosage immunologique de la présence dans l’échantillon d’au moins un anticorps dirigé contre un antigène qui est une conséquence d’une maladie chronique proliférative, et notamment d’au moins un anticorps choisi parmi les anticorps suivants :
- anticorps dirigé(s) contre le lactate
- anticorps dirigé(s) contre la cadeverine,
- anticorps dirigé(s) contre la putrescine
- anticorps dirigé(s) contre le succinate,
- anticorps dirigé(s) contre le butyrate,
- anticorps dirigé(s) contre l’acétate,
- anticorps dirigé(s) contre le propionate
- anticorps dirigé(s) contreMycobacterium tuberculosis.
- anticorps dirigé(s) contre le lactate
- anticorps dirigé(s) contre la cadeverine,
- anticorps dirigé(s) contre la putrescine
- anticorps dirigé(s) contre le succinate,
- anticorps dirigé(s) contre le butyrate,
- anticorps dirigé(s) contre l’acétate,
- anticorps dirigé(s) contre le propionate
- anticorps dirigé(s) contreMycobacterium tuberculosis.
Le procédé selon l’invention comprend préférentiellement le dosage immunologique de la présence dans l’échantillon d’au moins deux ou de tous les anticorps suivants :
- anticorps dirigé(s) contre le lactate
- anticorps dirigé(s) contre la cadeverine,
- anticorps dirigé(s) contre la putrescine
- anticorps dirigé(s) contre le succinate,
- anticorps dirigé(s) contre le butyrate,
- anticorps dirigé(s) contre l’acétate,
- anticorps dirigé(s) contre le propionate,
- anticorps dirigé(s) contreMycobacterium tuberculosis.
- anticorps dirigé(s) contre le lactate
- anticorps dirigé(s) contre la cadeverine,
- anticorps dirigé(s) contre la putrescine
- anticorps dirigé(s) contre le succinate,
- anticorps dirigé(s) contre le butyrate,
- anticorps dirigé(s) contre l’acétate,
- anticorps dirigé(s) contre le propionate,
- anticorps dirigé(s) contreMycobacterium tuberculosis.
Le lactate, le succinate, le butyrate, l’acétate et le proprionate sont des molécules du métabolisme bactérien. Ils sont produits de façon excessive en cas de déséquilibre entre la flore intestinale et la muqueuse intestinale et indiquent une perturbation de l’équilibre au sein de la flore commensale, qui peut être une conséquence de la maladie chronique proliférative et qui est défavorable au traitement de la maladie.
La cadaverine et la putrescine sont des marqueurs (conséquence) de l’hyper production de polyamines. Ils ont une influence négative sur les malades et notamment sur leur perte d’appétit.
Mycobacterium tuberculosisest une bactérie pathogène à Gram positif responsable de la tuberculose. Elle intervient également chez des patients atteints d’autres maladies tels que des personnes ou animaux atteints de certaines maladies prolifératives. Elle ne produit pas de toxine et doit son pouvoir pathogène à sa capacité à se multiplier. La lyse des bactéries libère des constituants antigéniques qui suscitent une réaction immunitaire induisant un état d’hypersensibilité
Préférentiellement, le procédé selon l’invention comprend le dosage immunologique de la présence d’anticorps dans l’échantillon dont au moins un des anticorps suivants :
- IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le lactate,
- IgA et/ou IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre la cadeverine,
- IgA et/ou IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre la putrescine,
- IgA et/ou IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le succinate, préférentiellement IgA,
- IgA et/ou IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le butyrate, préférentiellement IgA,
- IgA et/ou IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acétate, préférentiellement IgA,
- IgA et/ou IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le propionate, préférentiellement IgA,
- IgA et/ou IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contreMycobacterium tuberculosis.
- IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le lactate,
- IgA et/ou IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre la cadeverine,
- IgA et/ou IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre la putrescine,
- IgA et/ou IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le succinate, préférentiellement IgA,
- IgA et/ou IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le butyrate, préférentiellement IgA,
- IgA et/ou IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acétate, préférentiellement IgA,
- IgA et/ou IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le propionate, préférentiellement IgA,
- IgA et/ou IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contreMycobacterium tuberculosis.
Selon une variante particulièrement adaptée, le procédé selon l’invention comprend le dosage immunologique de la présence d’anticorps dans l’échantillon dont au moins les anticorps suivants :
- IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le lactate, et
- IgA et IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre la cadeverine, et
- IgA et IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre la putrescine, et
- IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le succinate, et
- IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le butyrate, et
- IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acétate, et
- IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le propionate
- IgA et IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contreMycobacterium tuberculosis.
- IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le lactate, et
- IgA et IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre la cadeverine, et
- IgA et IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre la putrescine, et
- IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le succinate, et
- IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le butyrate, et
- IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre l’acétate, et
- IgA (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contre le propionate
- IgA et IgG (et/ou IgE pour les animaux) dirigé(s) contreMycobacterium tuberculosis.
Pour mettre en œuvre le procédé, l’invention a également pour objet des kits de diagnostic.
En particulier, l’invention a pour objet un kit pour son utilisation dans la détection ou le suivi de l’évolution d’une maladie chronique proliférative, dans un échantillon de fluide biologique, en particulier dans un échantillon de fluide biologique humain ou animal comprenant au moins le ou les antigènes contre lesquels est (sont) dirigé(s) les anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon, à savoir :
- au moins le benzo(a)pyrène et/ou le phosphatidyl inositol et/ou l’acide azélaique, et
- éventuellement au moins un des antigènes suivants : une ou plusieurs entérobactéries (préférentiellementMorganella morganiiet/ouPseudomonas putida), l’acide palmitique, le malondialdéhyde l’acétylcholine, lactate, cadeverine, putrescine, l’acide oléique, l’acide myristique, succinate, butyrate, acétate, propionate,Mycobacterium tuberculosis.
- au moins le benzo(a)pyrène et/ou le phosphatidyl inositol et/ou l’acide azélaique, et
- éventuellement au moins un des antigènes suivants : une ou plusieurs entérobactéries (préférentiellementMorganella morganiiet/ouPseudomonas putida), l’acide palmitique, le malondialdéhyde l’acétylcholine, lactate, cadeverine, putrescine, l’acide oléique, l’acide myristique, succinate, butyrate, acétate, propionate,Mycobacterium tuberculosis.
Préférentiellement, le kit selon l’invention comprend au moins :
- le ou les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon, préférentiellement couplés à une protéine lorsqu’il ne s’agit pas de bactéries, et une plaque de micro titration destinée à être sensibilisée avec le ou les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon, ou une plaque de micro titration déjà sensibilisée avec le ou les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon, ou une bandelette ou barrette déjà sensibilisée avec le ou les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon,et
- les étalons permettant d’évaluer la qualité du test et le calcul du z, et/ou
- des tampons et des solutions adaptés à la réalisation d’un test Elisa, et/ou
- le ou les anticorps secondaire(s) en solution, lesdits anticorps secondaire(s) correspondant aux anticorps primaires dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon et avec la même isotypie, et/ou
- des tampons de dilution et de lavage, et/ou
- des tampons de révélation, et/ou
- une solution d’arrêt.
- le ou les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon, préférentiellement couplés à une protéine lorsqu’il ne s’agit pas de bactéries, et une plaque de micro titration destinée à être sensibilisée avec le ou les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon, ou une plaque de micro titration déjà sensibilisée avec le ou les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon, ou une bandelette ou barrette déjà sensibilisée avec le ou les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon,et
- les étalons permettant d’évaluer la qualité du test et le calcul du z, et/ou
- des tampons et des solutions adaptés à la réalisation d’un test Elisa, et/ou
- le ou les anticorps secondaire(s) en solution, lesdits anticorps secondaire(s) correspondant aux anticorps primaires dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon et avec la même isotypie, et/ou
- des tampons de dilution et de lavage, et/ou
- des tampons de révélation, et/ou
- une solution d’arrêt.
L’invention est à présent illustrée par des exemples et des résultats de mise en œuvre de procédés selon l’invention.
Pour chaque exemple, le protocole a été le suivant :
- prélèvement du plasma du patient
- mise en œuvre du procédé selon l’invention
- résumé des résultats obtenus dans un tableau pour visualiser la détection des anticorps circulants et suivre leur évolution. Si la valeur est < à -2 ou > à +2 la maladie est en train de se développer et si elle passe entre -2 et +2 la maladie est en train de se stabiliser voir de régresser.
- prélèvement du plasma du patient
- mise en œuvre du procédé selon l’invention
- résumé des résultats obtenus dans un tableau pour visualiser la détection des anticorps circulants et suivre leur évolution. Si la valeur est < à -2 ou > à +2 la maladie est en train de se développer et si elle passe entre -2 et +2 la maladie est en train de se stabiliser voir de régresser.
Chaque exemple permet de faire le lien entre le taux d’anticorps et l’état du patient dans sa pathologie.
Exemple 1 : Résultats de la mise en
œuvre d’un procédé selon l’invention sur une personne atteinte d’un cancer de la prostate diagnostiqué en 2015 et opéré en 2016, sous traitement.
Les résultats de la détection et de l’évolution des anticorps circulants au cours de l’évolution de la maladie sont présentés dans le Tableau 1.
| Marqueurs / Ig | 07/06/2016 | 03/10/2016 | 30/01/2017 | 11/07/2017 | 23/01/2018 | 03/07/2018 |
| anti-benzo(a)pyrène Conjugué/ A | 2,05 | 3,00 | 1,48 | 0,76 | 0,27 | 1,53 |
| anti-acide azélaique Conjugué/ G | -0,80 | -1,14 | -0,79 | -1,17 | -1,92 | -2,42 |
| anti-acide azélaique Conjugué/ A | 3,22 | 2,42 | 2,39 | 1,69 | 1,34 | 0,91 |
| anti-malondialdéhyde Conjugué/ M | -1,97 | -2,01 | -1,88 | -1,39 | -1,52 | -1,11 |
| anti-NO-tryptophane Conjugué/ M | -1,55 | -1,52 | -1,64 | -1,12 | -1,42 | -2,05 |
| anti-hafnia alvei / A | 7,02 | 4,75 | 7,23 | 7,10 | 2,98 | 7,45 |
| anti-morganella morganii / A | 1,70 | 2,86 | 0,98 | 1,41 | 0,82 | 1,22 |
| anti-pseudomonas putida / A | 1,12 | 2,71 | 1,82 | 0,31 | 1,11 | 1,19 |
| anti-citrobacter koseri / A | 2,27 | 7,43 | 3,74 | 3,68 | 4,90 | 4,61 |
| anti-klebsiella pneumoniae / A | 0,90 | 8,89 | 5,64 | 0,86 | 1,36 | 1,20 |
| anti-mycobacterium tuberculosis / A | 2,39 | 4,80 | 3,45 | 1,32 | 0,73 | 0,73 |
| anti-phosphatidylinositol Conjugué/ A | 2,84 | 2,69 | 3,07 | 2,13 | 2,44 | 1,41 |
Exemple 2
: Résultats de la mise en œuvre d’un procédé selon l’invention sur une personne atteinte
d’une tumeur pulmonaire maligne découverte en 2017 opérée en 2018
, sous traitement.
Les résultats de la détection et de l’évolution des anticorps circulants au cours de l’évolution de la maladie sont présentés dans le Tableau 2.
| Marqueurs | 21/12/2016 | 12/12/2017 | 22/05/2018 |
| anti-acide azélaique Conjugué/ A | 0,66 | 2,09 | 2,60 |
| anti-acide oléique Conjugué/ M | 3,31 | 1,84 | 5,91 |
| anti-malondialdéhyde Conjugué/ M | 1,53 | 1,63 | 2,21 |
| anti-phosphatidylinositol Conjugué/ M | 1,75 | 1,77 | 3,44 |
| anti-NO-cystéine Conjugué/ M | 0,75 | 2,58 | 0,51 |
| anti-NO-serum albumine Conjugué/ M | -0,04 | 3,53 | 2,05 |
| anti-citrobacter koseri / M | 2,31 | 0,63 | 1,18 |
| anti-hafnia alvei / A | 2,70 | 0,67 | 2,86 |
| anti-pseudomonas aeruginosa / A | 4,52 | 2,42 | 2,00 |
| anti-morganella morganii / A | 1,12 | 0,34 | 2,20 |
| anti-pseudomonas putida / A | 2,43 | 2,09 | 6,55 |
| anti-citrobacter koseri / A | 2,05 | 1,33 | 3,50 |
| anti-klebsiella pneumoniae / A | 1,83 | 1,31 | 2,40 |
| anti-phosphatidylinositol conjugué / G | 0,07 | -0,04 | 0,00 |
| anti-phosphatidylinositol conjugué / A | 0,74 | 1,71 | 2,64 |
Exemple 3
: Résultats de la mise en œuvre d’un procédé selon l’inve
ntion sur une personne atteinte
de lymphome malin non hodgkinien B de type folliculaire avec thrombopénie modérée diagnostiqué
e
en juillet 2009
, sous traitement.
Les résultats de la détection et de l’évolution des anticorps circulants au cours de l’évolution de la maladie sont présentés dans le Tableau 3.
| Marqueurs | 17/06/2016 | 14/09/2016 | 09/01/2017 | 21/03/2017 | 15/06/2017 | 07/09/2017 | 08/01/2018 | 09/04/2018 | 29/08/2018 |
| anti-benzo(a)pyrène Conjugué/ G | -1,07 | -1,88 | -1,77 | -1,38 | -5,51 | -1,56 | -0,95 | -1,15 | -1,88 |
| anti-benzo(a)pyrène conjugué / A | -2,93 | -2,41 | -2,99 | -2,62 | -3,42 | -2,34 | -2,11 | -2,76 | -5,66 |
| anti-acide azélaique Conjugué/ G | -1,16 | -1,65 | -1,74 | -1,26 | -3,54 | -1,43 | -1,84 | -1,22 | -1,62 |
| anti-acide azélaique Conjugué/ A | -2,99 | -2,19 | -3,06 | -2,53 | -2,24 | -3,07 | -1,53 | -2,74 | -2,42 |
| anti-acide azélaïque Conjugué/ M | -2,11 | -1,60 | -2,84 | -2,34 | -1,71 | -1,80 | -1,90 | -2,12 | -2,04 |
| anti-acide oléique Conjugué/ M | -2,21 | -2,67 | -2,36 | -3,55 | -3,63 | -2,77 | -2,48 | -2,94 | -2,42 |
| anti-malondialdéhyde Conjugué/ M | -2,68 | -2,64 | -2,73 | -2,90 | -2,09 | -1,77 | -2,90 | -2,43 | -2,47 |
| anti-phosphatidylinositol Conjugué/ M | -1,79 | -2,05 | -2,82 | -3,50 | -3,29 | -2,88 | -2,03 | -3,14 | -1,80 |
| anti-NO-cystéine Conjugué/ M | -1,82 | -1,52 | -1,69 | -2,39 | -2,09 | -1,52 | -1,82 | -1,79 | -2,07 |
| anti-NO2-tyrosine Conjugué/ M | -5,27 | -3,16 | -2,05 | -2,00 | -1,76 | -1,93 | -2,00 | -1,68 | -2,11 |
| anti-NO-tryptophane Conjugué/ M | -2,06 | -1,34 | -1,76 | -1,59 | -2,22 | -1,09 | -1,82 | -2,05 | -1,88 |
| anti-NO-serum albumine Conjugué/ M | -2,57 | -2,44 | -1,57 | -2,49 | -3,25 | -1,69 | -1,73 | -3,66 | -1,83 |
| anti-hafnia alvei /M | -1,94 | -1,99 | -1,91 | -1,67 | -1,69 | -2,16 | -1,46 | -1,64 | -2,06 |
| anti-pseudomonas aeruginosa / M | -1,73 | -1,87 | -1,89 | -1,86 | -1,53 | -2,13 | -1,56 | -1,73 | -1,86 |
| anti-morganella morganii / M | -1,82 | -1,85 | -2,02 | -1,39 | -1,71 | -2,22 | -1,42 | -1,67 | -1,73 |
| anti-pseudomonas putida / M | -2,46 | -1,94 | -1,91 | -1,42 | -1,70 | -1,97 | -1,65 | -1,58 | -1,87 |
| anti-citrobacter koseri / M | -1,99 | -2,80 | -1,98 | -1,74 | -1,84 | -2,30 | -1,71 | -1,45 | -2,00 |
| anti-klebsiella pneumoniae / M | -1,69 | -2,17 | -1,72 | -1,74 | -1,33 | -1,74 | -1,68 | -1,63 | -1,61 |
| anti-hafnia alvei / A | -1,74 | -1,50 | -2,48 | -2,03 | -1,85 | -2,63 | -1,68 | -2,31 | -1,84 |
| anti-pseudomonas putida/A | -1,50 | -0,98 | -1,31 | -0,94 | -2,04 | -1,59 | -1,29 | -1,45 | -2,38 |
| anti-citrobacter koseri / A | -1,50 | -1,10 | -1,76 | -1,38 | -1,59 | -2,47 | -1,67 | -1,21 | -2,69 |
| anti-klebsiella pneumoniae / A | -1,42 | -2,42 | -1,78 | -1,26 | -1,46 | -2,29 | -1,24 | -1,24 | -1,62 |
| anti-mycobacterium tuberculosis / G | -1,41 | -1,63 | -1,59 | -1,55 | -1,95 | -2,07 | -1,29 | -1,51 | -1,36 |
| anti-mycobacterium tuberculosis / A | -1,59 | -2,39 | -2,06 | -0,75 | -1,36 | -2,78 | -2,43 | -0,50 | -2,20 |
| anti-phosphatidylinositol Conjugué/ G | -1,48 | -2,72 | -1,45 | -1,50 | -4,47 | -2,08 | -1,74 | -1,65 | -1,06 |
| anti-phosphatidylinositol Conjugué/ A | -2,58 | -2,42 | -3,73 | -2,63 | -3,00 | -2,38 | -2,71 | -2,90 | -2,52 |
Exemple 4
: Résultats de la mise en œuvre d’un procédé selon l’inve
ntion sur une personne atteinte
de prostatite
, sous traitement.
Les résultats de la détection et de l’évolution des anticorps circulants au cours de l’évolution de la maladie sont présentés dans le Tableau 4.
| Marqueurs | 24/08/2016 | 27/12/2016 | 29/03/2017 | 08/08/2017 | 13/01/2018 | 14/05/2018 | 17/09/2018 |
| anti-morganella morganii/A | -0,87 | -0,31 | -1,22 | -1,02 | -0,65 | -1,24 | -2,01 |
| anti-benzo(a)pyrène conjugué/G | -0,34 | -2,08 | -1,74 | -2,41 | -0,39 | -0,28 | -1,27 |
| anti-phosphatidylinositol conjugué/G | -0,43 | -0,94 | -0,37 | 1,37 | 0,37 | 0,34 | 3,88 |
Exemple 5
: Résultats de la mise en œuvre d’un procédé selon l’inve
ntion sur une personne atteinte
d’une masse ganglionnaire abdominale
, sous traitement.
Les résultats de la détection et de l’évolution des anticorps circulants au cours de l’évolution de la maladie sont présentés dans le Tableau 5.
| Marqueurs | 09/09/2016 | 22/12/2016 | 05/04/2017 | 05/07/2017 |
| anti-benzo(a)pyrène Conjugué/ A | 3,86 | 2,82 | 1,94 | 1,45 |
| anti-acide azélaique Conjugué/ A | 3,61 | 4,42 | 2,49 | 3,66 |
| anti-phosphatidylinositol Conjugué/ A | 5,31 | 3,14 | 3,07 | 4,15 |
| anti-NO-serum albumine/M | -1,34 | -2,68 | -2,07 | -1,36 |
Exemple 6
: Résultats de la mise en œuvre d’un procédé selon l’inve
ntion sur une personne atteinte
d’une masse ganglionnaire abdominale
, sous traitement.
Les résultats de la détection et de l’évolution des anticorps circulants au cours de l’évolution de la maladie sont présentés dans les Tableaux 6 et 7.
| Marqueurs | 13/09/2016 | 14/12/2016 | 31/03/2017 | 18/05/2017 |
| anti-benzo(a)pyrène Conjugué/ G | -2,25 | -2,17 | -1,55 | -1,71 |
| anti-benzo(a)pyrène Conjugué/ A | -0,48 | -1,26 | -1,27 | -1,01 |
| anti-acide azélaique Conjugué/ G | -1,92 | -1,50 | -1,93 | -1,21 |
| anti-acide azélaique Conjugué/ A | -0,89 | -0,96 | -1,28 | 1,44 |
| anti-phosphatidylinositol Conjugué/ G | -2,54 | -1,65 | -2,13 | -0,63 |
| anti-pseudomonas putida Conjugué/ A | 0,37 | -0,23 | -1,53 | -0,69 |
| anti-klebsiella pneumoniae / A | -0,93 | -0,86 | -1,12 | -1,02 |
| anti-NO-serum albumine Conjugué/ M | -1,50 | -0,74 | -1,49 | -1,10 |
| Marqueurs | 26/06/2018 | 17/08/2018 | 12/10/2018 | 25/01/2019 |
| anti-benzo(a)pyrène Conjugué/ G | -2,52 | -1,63 | -1,42 | -0,60 |
| anti-benzo(a)pyrène Conjugué/ A | -1,58 | -2,41 | -1,39 | 0,05 |
| anti-acide azélaique Conjugué/ G | -1,75 | -2,57 | -0,49 | -0,31 |
| anti-acide azélaique Conjugué/ A | -1,14 | -2,01 | -1,05 | -1,23 |
| anti-phosphatidylinositol Conjugué/ G | -2,31 | -1,26 | 0,57 | -0,89 |
| anti-pseudomonas putida / A | -0,74 | -1,03 | -1,36 | -1,54 |
| anti-klebsiella pneumoniae Conjugué/ A | -1,07 | -1,04 | -0,84 | -1,58 |
| anti-NO-serum albumine Conjugué/ M | -2,28 | -1,33 | -1,54 | -1,60 |
Exemple 7
: Résultats de la mise en œuvre d’un procédé selon l’inve
ntion sur une personne atteinte
d’un carcinome oesophagien diagostiqué fin 2016
, sous traitement.
Les résultats de la détection et de l’évolution des anticorps circulants au cours de l’évolution de la maladie sont présentés dans les Tableau 8.
| Marqueurs | 10/09/2016 | 03/12/2016 | 18/03/2017 | 17/06/2017 |
| anti-benzo(a)pyrène conjugué/G | 1,03 | 2,36 | 0,93 | -0,99 |
| anti-acide azélaique conjugué/G | 1,25 | 3,84 | 2,74 | 0,47 |
| anti-phosphatidylinositol conjugué/G | 1,81 | 5,84 | 3,00 | 0,89 |
| anti-morganella morganii/A | 5,69 | 3,03 | 13,54 | 8,52 |
| anti-citrobacter koseri/A | 2,99 | 2,05 | 5,49 | 2,81 |
| anti-klebsiella pneumoniae/A | -0,10 | -0,41 | 2,16 | 0,98 |
| anti-citrobacter koseri/M | -2,03 | -1,35 | -1,18 | -1,60 |
| anti-acide oléique conjugué/M | -1,79 | -1,73 | -2,88 | -2,78 |
| anti-phosphatidylinositol conjugué/M | -1,27 | -1,64 | -2,27 | -2,19 |
| anti-NO-cystéine conjuguée/M | -1,34 | -1,26 | -2,62 | -1,70 |
| anti-NO-serum albumine/M | -1,81 | -0,67 | -3,26 | -1,48 |
Ces différents exemples montrent notamment que les personnes atteintes de maladies dégénératives présentent toujours des anticorps circulants dirigés contre au moins un des anticorps choisis parmi :
- anticorps dirigé(s) contre le Benzo(a)pyrène,
- anticorps dirigé(s) contre le phosphatidyl inositol,
- anticorps dirigé(s) contre l’acide azélaique.
- anticorps dirigé(s) contre le Benzo(a)pyrène,
- anticorps dirigé(s) contre le phosphatidyl inositol,
- anticorps dirigé(s) contre l’acide azélaique.
Le procédé selon l’invention permet également de suivre l’évolution de la maladie.
Claims (13)
- Procédéex vivode détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique proliférative, dans un échantillon de fluide biologique humain ou animal, par dosage immunologique de la présence d’anticorps dans l’échantillon dont au moins les anticorps suivants :
- au moins un anticorps dirigé(s) contre le Benzo(a)pyrène, et
- au moins un anticorps dirigé(s) contre le phosphatidyl inositol, et
- au moins un anticorps dirigé(s) contre l’acide azélaique. - Procédéex vivode détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique proliférative selon la revendication 1, caractérisé en ce que l’échantillon est un échantillon de sérum ou de plasma humain ou animal.
- Procédéex vivode détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique proliférative selon l’une des précédentes, caractérisé en ce qu’il comprend également le dosage immunologique de la présence dans l’échantillon d’au moins un des anticorps suivants :
- anticorps dirigé(s) contre une entérobactérie,
- anticorps dirigé(s) contre l’acide palmitique,
- anticorps dirigé(s) contre le malondialdéhyde
- anticorps dirigé(s) contre l’acétylcholine,
- anticorps dirigé(s) contre l’acide oléique,
- anticorps dirigé(s) contre l’acide myristique. - Procédéex vivode détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique proliférative selon la précédente revendication, caractérisé en ce qu’il comprend le dosage immunologique de la présence dans l’échantillon d’au moins un des anticorps suivants :
- anticorps dirigé(s) contre la bactérieMorganella morganii ,et/ou
- anticorps dirigé(s) contre la bactériePseudomonas putidaet/ou
- anticorps dirigé(s) contre la bactérieHafnia alveiet/ou.
- anticorps dirigé(s) contre la bactériePseudomonas aeruginosa, et/ou
- anticorps dirigé(s) contre la bactérieKlebsiella pneumoniae. - Procédéex vivode détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique proliférative selon l’une des précédentes revendications caractérisé en ce qu’il comprend également le dosage immunologique de la présence dans l’échantillon d’au moins un des anticorps suivants :
- anticorps dirigé(s) contre le lactate
- anticorps dirigé(s) contre la cadeverine,
- anticorps dirigé(s) contre la putrescine,
- anticorps dirigé(s) contre le succinate,
- anticorps dirigé(s) contre le butyrate,
- anticorps dirigé(s) contre l’acétate,
- anticorps dirigé(s) contre le propionate,
- anticorps dirigé(s) contreMycobacterium tuberculosis. - Procédéex vivode détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique prolifératives selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce que les anticorps sont des immunoglobulines A et/ou des immunoglobulines G et/ou des immunoglobulines M et/ou, pour les animaux uniquement, des immunoglobulines E.
- Procédéex vivode détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique proliférative selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce que ladite maladie est choisie parmi les cancers.
- Procédéex vivode détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique proliférative selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce que la maladie est choisie parmi les lymphomes, les myélomes et leucémies.
- Procédéex vivode détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce que le dosage immunologique est réalisé par la mise en œuvre d’un procédé immuno-enzymatique.
- Procédéex vivode détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu’il comprend au moins la mise en œuvre des étapes suivantes :
- fabriquer au moins une plaque de microtitration sensibilisée avec le ou les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon, ou utiliser au moins une plaque de microtitration déjà sensibilisée avec ces antigènes,
- répartir sur la plaque la même quantité d’étalons internes, d’échantillon et de blanc réactif,
- ajouter le ou les anticorps secondaires couplé(s) à une enzyme,
- ajouter un substrat de l’enzyme et un chromogène, attendre la coloration des puits
- stopper la réaction de coloration,
- lire la densité optique des puits à l’aide d’un spectrophotomètre une longueur d’onde appropriée. - Procédéex vivode détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique selon la précédente revendications, caractérisé en ce qu’il comprend au moins la mise en œuvre des étapes suivantes :
- fabriquer au moins une plaque de microtitration sensibilisée avec le ou les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon, ou utiliser au moins une plaque de microtitration déjà sensibilisée avec ces antigènes,
- diluer l’échantillon à tester et des étalons internes,
- répartir en duplicate sur la plaque la même quantité d’étalons internes dilués, d’échantillon dilué et de blanc réactif,
- incuber,
- laver,
- ajouter le ou les anticorps secondaires couplés à la peroxydase ou phosphatase alcaline ou biotynilés,
- incuber,
- laver,
- ajouter un substrat et un chromogène,
- Stopper la réaction en solution acide,
- lire à 450nm avec un alpha de correction à 650 nm. - Kit pour son utilisation dans un procédé de détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique proliférative selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu’il comprend au moins le ou les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon.
- Kit selon la revendication 12, caractérisé en ce qu’il comprend au moins :
- une plaque de micro titration sensibilisée avec le ou les antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon,
- des tampons et des solutions,
- le ou les anticorps secondaire(s) en solution, anticorps secondaire(s) correspondant aux anticorps dont on cherche à détecter la présence dans l’échantillon.
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| US17/600,728 US20220196669A1 (en) | 2019-04-01 | 2020-04-01 | Method for detecting or monitoring the development of a chronic proliferative disease by immunoassay |
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Patent Citations (1)
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|---|---|---|---|---|
| BE1006974A3 (fr) * | 1993-04-23 | 1995-02-07 | Anda Biolog Sa | Procede de detection et/ou de quantification de differentes classes d'immunoglobulines specifiques d'une pathologie comportant une reponse auto-immunitaire. |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| CHAGNAUD J-L ET AL: "MONOCLONAL ANTI-IDIOTYPIC ANTIBODIES AS PROBES FOR COMMON IDIOTOPES SHARED BY ANTI-"BENZO(A)PYRENE-LIKE" IGA OF CANCER PATIENTS AND RABBIT ANTI-CONJUGATED BENZO(A)PYRENE ANTIBODIES", ANTICANCER RESEARCH - INTERNATIONAL JOURNAL OF CANCER RESEARCH AND TREATMENT, INTERNATIONAL INSTITUTE OF ANTICANCER RESEARCH, GR, vol. 15, no. 5B, 1 January 1995 (1995-01-01), pages 2161 - 2168, XP008062253, ISSN: 0250-7005 * |
| FAIDERBE S ET AL: "Anti-phosphoinositide auto-antibodies in sera of cancer patients: isotypic and immunochemical characterization", CANCER LETTERS, NEW YORK, NY, US, vol. 66, no. 1, 14 September 1992 (1992-09-14), pages 35 - 41, XP023164098, ISSN: 0304-3835, [retrieved on 19920914], DOI: 10.1016/0304-3835(92)90277-3 * |
| S FAIDERBE ET AL: "Identification and Characterization of a Specific Autoantiphosphatidylinositol Immune Response during the Time Course of Benzo(a)pyrene-induced Malignant Tumors in Female Sprague-Dawley Rats1", CANCER RESEARCH, 15 March 1992 (1992-03-15), pages 2862 - 2865, XP055656038, Retrieved from the Internet <URL:https://cancerres.aacrjournals.org/content/52/10/2862.full-text.pdf> * |
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