FR3065877B1 - Extraits d’aiguilles de sapin, compositions et utilisations - Google Patents

Extraits d’aiguilles de sapin, compositions et utilisations Download PDF

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Abstract

La présente invention concerne le domaine de la cosmétique, de la dermo-cosmétique et/ou de la nutraceutique. Plus particulièrement, l'invention s'intéresse à des compositions comprenant un extrait d'aiguilles de sapin, notamment du genre Abies, et à leur utilisation en tant qu'actif cosmétique ou dermo-cosmétique, ou principe actif en nutraceutique.

Description

EXTRAITS D’AIGUILLES DE SAPIN, COMPOSITIONS ET UTILISATIONS
DOMAINE DE L’INVENTION
La présente invention concerne le domaine de la cosmétique, de la dermo-cosmétique et/ou de la nutraceutique. Plus particulièrement, l’invention s’intéresse à des compositions comprenant un extrait d’aiguilles de sapin, notamment de l’espèce Abies alba, et à leur utilisation en tant qu’actif cosmétique ou dermo-cosmétique, ou en tant qu’actif nutraceutique.
ÉTAT DE LA TECHNIQUE
Si en premier lieu, l’application d’un produit cosmétique vise à embellir, la cosmétologie est devenue aujourd’hui une véritable science basée sur des recherches accrues en biologie et en chimie. Ainsi, le consommateur de produits cosmétiques ne vise plus seulement à améliorer son apparence physique, mais également, à prendre soin de son corps afin de conserver une bonne santé tout au long de sa vie.
La recherche et/ou l’élaboration d’actifs ou de principes actifs s’est souvent orientée vers l’utilisation de ressources naturelles ; en particulier, l’exploitation de végétaux.
Parmi les plantes d’intérêts, le sapin est un arbre conifère appartenant au genre Abies. Il est originaire des régions tempérées de l’hémisphère nord. L’utilisation d’extraits de sapin a déjà été mise en œuvre pour la synthèse de produits dermo-cosmétiques. Par exemple, la demande FR 1550215 décrit un extrait aqueux de graines de sapin et son utilisation en tant qu’agent cosmétique. La demande FR 1550217 quant à elle décrit une huile de graines de sapin et son utilisation en tant qu’agent cosmétique. Les aiguilles de sapin sont également connues sous forme de décoction ou tisanes, notamment pour leurs vertus expectorantes, leur teneur en vitamine C ou leur propriétés olfactives.
La Demanderesse a acquis une forte expertise dans l’extraction d’actifs à partir de plantes et s’intéresse particulièrement aux propriétés des extraits issus de composés naturels.
La Demanderesse a constaté que son procédé d’extraction permet d’obtenir des extraits d’intérêts cosmétique, dermocosmétique et/ou nutraceutique à partir d’aiguiiles de sapin.
Les aiguilles de sapin sont aplaties et denses, et elles ont un aspect laqué. En outre, elles sont piquées sur deux rangées. Chaque année, les conifères produisent de nouvelles aiguilles et perdent une partie de leurs vieilles aiguilles. La perte annuelle du feuillage est donc un phénomène naturel. La récolte d’aiguilles de sapin ne produit ainsi aucun traumatisme à l’arbre, et s’inscrit dans une démarche de développement durable. A la connaissance de la Demanderesse, l’intérêt des extraits d’aiguilles de sapin ont été très peu, voire pas explorés en cosmétique et en nutraceutique. Or, il existe toujours un besoin de trouver de nouveaux actifs permettant de limiter la prise de poids ou encore de réduire le poids corporel ; de lutter contre les effets du vieillissement ; et de soigner d’atténuer les imperfections de la peau telles que notamment les rougeurs ou les cicatrices superficielles, de cicatriser les plaies superficielles ou encore d’atténuer l’hyperpigmentation de la peau.
De manière surprenante, la Demanderesse a mis en évidence qu’un extrait d’aiguilles de sapin pouvait être utilisé comme actif cosmétique et/ou dermocosmétique ou comme actif nutraceutique, comme agent amincissant, antiâge, lissant, hydratant et/ou éclaircissant de la peau. D’autre part, la Demanderesse a constaté de manière inattendue et surprenante qu’un extrait d’aiguilles de sapin présente simultanément des propriétés régulatrices du métabolisme et de l’assimilation des lipides et des glucides par l’inhibition de la lipase, de l’alpha amylase et de l’alpha glucosidase. L’extrait présente également des propriétés inhibitrices de la collagénase, de la hyaluronidase et un pouvoir antioxydant qui n’avaient jamais été reportées dans l’art antérieur. RÉSUMÉ
La présente invention concerne un extrait d’aiguilles de sapin, caractérisée en ce qu’il comprend de 5 à 50 % de composés polyphénoliques en poids par rapport au poids total de l’extrait sec ; de 0 à 40 % de sucres en poids par rapport au poids total de l’extrait sec ; de 0 à 30 % de protéines en poids de protéines par rapport au poids total de l’extrait sec ; et de 2 à 30 % de niasse sèche en poids par rapport au poids total de l’extrait.
La présente invention porte également sur une composition comprenant un extrait d’aiguilles de sapin tel que décrit dans l’invention, en association avec au moins un excipient acceptable.
Selon un mode de réalisation, la composition de l’invention est caractérisée en ce que l’excipient est cosmétiquement acceptable et que la composition est sous forme de gel, lait, crème, lotion, émulsion, huile, baume ou onguent.
Selon un mode de réalisation, la composition de l’invention est caractérisée en ce que l’excipient est nutraceutiquement acceptable et que la composition est sous forme solide, liquide ou gel, notamment sous forme poudre, comprimé sécable ou non, pelliculé ou non, sous forme orodispersible, ou encore sous forme de granule, de capsule, de gélule, d’ampoule.
La présente invention concerne en outre un actif cosmétique ou dermocosmétique caractérisé en ce qu’il comprend un extrait d’aiguilles de sapin ou une composition selon l’invention. L’invention a également pour objet un actif nutraceutique, caractérisé en ce qu’il comprend un extrait d’aiguilles de sapin ou une composition selon l’invention.
Un autre objet de l’invention concerne l’utilisation d’un extrait, d’une composition ou d’un actif de l’invention, en tant qu’agent amincissant, notamment pour limiter et/ou réduire la prise de poids ; et/ou réduire, maintenir et/ou améliorer le poids corporel chez un individu.
La présente invention concerne également l’utilisation d’un extrait d’aiguilles de sapin, d’une composition ou d’un actif selon l’invention, en tant qu’agent antiâge et/ou agent lissant de la peau, notamment pour prévenir et/ou atténuer le vieillissement de la peau et/ou l'apparition des signes de vieillissement de la peau.
La présente invention concerne en outre l’utilisation d’un extrait d’aiguilles de sapin, d’une composition ou d’un actif selon l’invention, en tant qu’agent antioxydant et/ou cicatrisant, notamment pour prévenir et atténuer les rougeurs ou les cicatrices superficielles de la peau.
Un autre objet de l’invention concerne l’utilisation d’un extrait, d’une composition ou d’un actif de l’invention, en tant qu’agent éclaircissant de la peau, notamment des peaux ethniques, ou pour lutter contre l’hyperpigmentation de zones de la peau, en particulier contre les tâches de pigmentation liées à l’âge.
La présente invention concerne également l’utilisation d’un extrait d’aiguilles de sapin, d’une composition ou d’un actif selon l’invention, en tant qu’agent hydratant de la peau, pour protéger l’hydratation de la peau et/ou pour hydrater la peau. L’invention a en outre pour objet une méthode de soin cosmétique comprenant l’administration d’un extrait d’aiguilles de sapin, d’une composition ou d’un actif selon l’invention.
DÉFINITIONS
Dans la présente invention, les termes ci-dessous sont définis de la manière suivante :
Le terme « extrait » concerne une préparation liquide, semi-solide ou solide, obtenue par extraction d’aiguilles de sapin. Selon un mode de réalisation selon l’invention, l’extrait est aqueux. Selon un autre mode de réalisation selon l’invention, l’extrait aqueux est ensuite séché, par toute méthode connue de l’homme du métier. Au sens de la présente invention, le terme « extrait aqueux » inclut l’extrait obtenu directement par un procédé enzymatique ou hydroalcoolique ou subcritique ou de macération aqueuse, ainsi que ledit extrait ayant subi une étape de séchage et étant rendu sec. De préférence, l’extraction est biologique, très préférentiellement enzymatique.
Le terme « actif » concerne un ingrédient qui possède une activité précise à l’origine de l’efficacité du produit cosmétique et/ou dermocosmétique ou nutraceutique.
Les termes « cosmétiquement acceptable » concernent un composant qui est utilisable en contact avec la peau sans effet secondaire tel que toxicité, irritation ou réponse allergique.
Le terme « nutraceutique » concerne un produit fabriqué à partir de substances alimentaires, mais rendu disponible sous forme de liquide ou solide, et qui s'avère avoir un effet physiologique bénéfique ou protecteur contre des conditions chroniques, et notamment dans la lutte contre le vieillissement, contre les irritations cutanées ou les cicatrices superficielles, en tant qu’agent éclaircissant de la peau. Selon un mode de réalisation, le terme « nutraceutique » est également appelé « alicament » ou « aliment fonctionnel ». Selon un mode de réalisation, le terme « nutraceutique » inclut, mais ne se limite pas aux, compléments alimentaires.
Le terme « antioxydant » concerne un agent qui diminue ou empêche l’oxydation d’autres substances. Un antioxydant peut protéger les cellules contre les effets des espèces réactives d’oxygène.
Le terme « anti-âge » concerne un agent possédant la propriété de prévenir, retarder et/ou de lutter contre les effets du vieillissement de la peau et des tissus.
Précédant une valeur chiffrée, le terme « environ » signifie plus ou moins 10 % de ladite valeur.
DESCRIPTION DÉTAILLÉE
La présente invention concerne un extrait issu d’aiguilles de sapin. Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention est un extrait aqueux.
Selon un mode de réalisation, le sapin dont est issu l’extrait de l’invention est du genre Abies. Selon un mode de réalisation, le sapin dont est issu l’extrait de l’invention est sélectionné parmi le groupe comprenant Abies alba, Abies amabilis, Abies cephalonica, Abies concolor, Abies fraseri, Abies grandis, Abies homolepis, Abies lasiocarpa, Abies nordmanniana, Abies borisii-regis, Abies pinsapo, Abies procera, et Abies sibirica. Selon un mode de réalisation préféré, le sapin dont est issu l’extrait de l’invention, est un sapin de l’espèce Abies alba.
Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention n’est pas un extrait d’aiguilles de pin, du genre Pinus.
Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention est un extrait aqueux. Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention n’est pas une solution huileuse, ni une émulsion.
Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention comprend des composés polyphénoliques, des sucres et/ou des protéines.
Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention comprend des composés polyphénoliques. Selon un mode avantageux de réalisation, l’extrait de l’invention comprend de 0,1 à 50 g/L ; de préférence de 1 à 20 g/L ; de préférence de 3 à 10 g/L de composés polyphénoliques. Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention comprend de 5 à 9 g/L de composés polyphénoliques. Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention comprend environ 5, 6, 7, 8 ou 9 g/L de composés polyphénoliques.
Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention comprend de 1 à 95 % ; de préférence, de 5 à 50 % ; plus préférentiellement, de 10 à 30 % de composés polyphénoliques en poids par rapport au poids total de l’extrait sec. Selon un mode particulier de l’invention, l’extrait de l’invention comprend de 10 à 17 % de composés polyphénoliques en poids par rapport au poids total de l’extrait sec. Selon un mode de réalisation, la quantité de composés polyphénoliques est mesurée après atomisation de l’extrait.
Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention comprend des composés polyphénoliques tels que des lignanes, de l’acide homovanillique, et de l’acide p-coumarique.
Selon un premier mode de réalisation, l’extrait de l’invention ne comprend pas de sucres.
Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention comprend des sucres, de préférence des oligosaccharides (mono et di-polysaccharides). Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention comprend des hétérosides, comme par exemple de la picéïne ou de la salicinéréïne. Selon un mode avantageux de réalisation, l’extrait de l’invention comprend de 0,01 à 100 g/L ; de préférence, de 1 à 60 g/L ; plus préférentiellement, de 5 à 50 g/L ; encore plus préférentiellement, de 8 à 30 g/L de sucres. Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention comprend de 10 à 25 g/L de sucres. Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention comprend environ 3,8, 10, 12, 15, 18, 20, 23 ou 25 g/L de sucres.
Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention comprend de 0 à 50 % ; de préférence, de 1 à 45 % ; plus préférentiellement, de 5 à 40 % ; encore plus préférentiellement, de 10 à 35 % de sucres en poids par rapport au poids total de l’extrait sec. Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention comprend de 0 à 40 % de sucres en poids par rapport au poids total de l’extrait sec. Selon un mode particulier de réalisation, l’extrait de l’invention comprend de 12 à 32 % de sucres en poids par rapport au poids total de l’extrait sec. Selon un mode de réalisation, la quantité de sucres est mesurée après atomisation de l’extrait.
Selon un premier mode de réalisation, l’extrait de l’invention ne comprend pas de protéines.
Selon un second mode de réalisation, l’extrait de l’invention comprend des protéines. Dans ce mode de réalisation, l’extrait de l’invention peut comprendre de 0,01 à 50 g/L ; de préférence de 0,5 à 30 g/L ; plus préférentiellement, de 1 à 20 g/L ; encore plus préférentiellement de 1,5 à 10 g/L de protéines. Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention comprend de 2 à 5 g/L de protéines.
Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention comprend de 0 à 30 % ; de préférence, de 0,5 à 25 % ; plus préférentiellement, de 1 à 20 % ; encore plus préférentiellement, de 2 à 15 % de protéines en poids par rapport au poids total de l’extrait sec. Selon un mode particulier de réalisation, l’extrait de l’invention comprend de 3 à 12 % de protéines en poids par rapport au poids total de l’extrait sec. Selon un mode de réalisation, la quantité de protéines est mesurée après atomisation de l’extrait.
Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention comprend des composés polyphénoliques, des sucres et des protéines. En particulier, selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention comprend des composés polyphénoliques, des sucres et des protéines dans des proportions telles que décrites ci-dessus.
Selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention est un extrait aqueux qui comprend de 0 à 90 % ; de préférence, de 1 à 50 % ; plus préférentiellement, de 2 à 30 % ; encore plus préférentiellement, de 3 à 20 % de masse sèche en poids par rapport au poids total de l’extrait. Selon un mode particulier de réalisation, l’extrait de l’invention comprend de 3 à 10 % de masse sèche en poids par rapport au poids total de l’extrait.
Selon un mode de réalisation, l’extrait aqueux est séché, atomisé, lyophilisé ou déshydraté et comprend de 95 à 100% de matière sèche. Dans la présente invention, le terme « extrait aqueux » est aussi utilisé en référence à un tel extrait. L’extrait selon l’invention peut être obtenu par toute méthode d’extraction connue de l’homme du métier. Selon un mode de réalisation, le procédé d’extraction comprend une étape de macération aqueuse. Selon un mode de réalisation, le procédé d’extraction comprend une étape de macération hydro-alcoolique ; de préférence, eau-éthanol. Selon un mode de réalisation, le procédé d’extraction comprenant une étape d’extraction à l’eau sub critique.
Cependant, la Demanderesse a acquis une expertise dans l’extraction de composés d’intérêts à partir de végétaux, ayant l’avantage de fournir des produits non contaminés par des composés ou solvants chimiques. En particulier, la Demanderesse a acquis une expertise dans le domaine des procédés d’extraction biologique, de préférence enzymatique. Selon un mode de réalisation, le procédé d’extraction comprend au moins une étape d’hydrolyse enzymatique. Selon un mode de réalisation, le procédé d’extraction est réalisé suivant le procédé décrit dans la demande de brevet internationale WO2011045387.
Ainsi, l’invention concerne également un procédé d’extraction d’aiguilles de sapin et l’extrait d’aiguilles de sapin susceptible d’être obtenu par ledit procédé, comprenant au moins les étapes suivantes : le mélange d’aiguilles de sapin préalablement broyées et d’eau, et l’incubation de ce mélange avec au moins une enzyme ou un mélange enzymatique.
Selon un mode de réalisation, les aiguilles de sapin sont issues du genre Abies \ de préférence de l’espèce Abies alba.
Selon un mode de réalisation du procédé de l’invention, on mélange les aiguilles de sapin broyées et l’eau dans un ratio massique de la quantité d’aiguilles de sapin sur la quantité d’eau compris de 0 à 50 ; de préférence, de 0,1 à 10 ; plus préférentiellement, de 1 à 5 ; encore plus préférentiellement de 1 à 4. Puis, on introduit une quantité d’enzyme ou de mélange enzymatique de plus de 0 à 20% ; de préférence, de 1 à 10 %; plus préférentiellement, d’environ 5 % en poids par rapport au poids du mélange aiguilles de sapin/eau.
Selon un mode de réalisation, l’enzyme ou le mélange enzymatique comprend au moins une enzyme choisie parmi les cellulases, les hémicellulases, les pectinases ou les protéases. Selon un mode de réalisation, le mélange enzymatique comprend une cellulase et une hémicellulase. Selon un mode de réalisation, le mélange enzymatique comprend une cellulase et une pectinase. Selon un mode de réalisation, le mélange enzymatique comprend une pectinase et une hémicellulase Selon un mode de réalisation, le mélange enzymatique est constitué d’une cellulase, d’une hémicellulase, d’une pectinase et d’une protéase. Selon un mode de réalisation, le mélange enzymatique est constitué d’une cellulase, d’une hémicellulase et d’une protéase. Selon un mode de réalisation, le mélange enzymatique est constitué d’une cellulase, d’une hémicellulase et d’une pectinase.
Selon un mode de réalisation, le mélange enzymatique comprend de 1 à 50 % d’une hémicellulase, d’une cellulase et d’une pectinase, et de 1 à 100 % d’un mélange de protéases.
Selon un mode de réalisation, la quantité de mélange enzymatique ajoutée au mélange d’aiguilles de sapin préalablement broyées et d’eau va de 1 à 15 % en poids; de préférence, de 2 à 10 % en poids ; plus préférentiellement, de 3 à 8 % en poids. Selon un mode particulier de réalisation, la quantité de mélange enzymatique ajoutée au mélange d’aiguilles de sapin préalablement broyées et d’eau est d’environ 5 % en poids.
Selon un mode de réalisation, l’incubation du mélange d’aiguilles de sapin préalablement broyées et d’eau avec l’enzyme ou le mélange enzymatique est réalisée à une température comprise dans une gamme de 30°C à 80°C ; de préférence, de 40°C à 60°C ; plus préférentiellement à environ 50°C.
Selon un mode de réalisation, l’incubation avec l’enzyme ou le mélange enzymatique est réalisée sous agitation, située entre 50 et 1000 rpm ; de préférence, entre 100 et 500 rpm. Selon un mode préféré de réalisation, l’incubation avec l’enzyme ou le mélange enzymatique est réalisée sous une agitation à environ 100 ou 150 rpm. Selon un autre mode préféré de réalisation, l’incubation avec l’enzyme ou le mélange enzymatique est réalisée sous une agitation à environ 200 ou 250 rpm. Selon un autre mode préféré de réalisation, l’incubation avec l’enzyme ou le mélange enzymatique est réalisée sous une agitation à environ 300 rpm. Selon un autre mode préféré de réalisation, l’incubation avec l’enzyme ou le mélange enzymatique est réalisée sous une agitation à environ 400 rpm.
Selon un mode de réalisation, l’incubation avec l’enzyme ou le mélange enzymatique est réalisée pendant une durée comprise dans une gamme de lh à 8h ; de préférence, de 2h à 6h ; plus préférentiellement, de 3h à 5h ; encore plus préférentiellement pendant environ 4h.
Selon un mode de réalisation, le procédé de préparation de l’invention comprend en outre une étape de désactivation des enzymes avant et/ou après leur introduction dans le mélange aiguilles de sapin/eau. Selon un mode de réalisation, la désactivation des enzymes est réalisée par les techniques connues de l’homme du métier ; de préférence, par chauffage et/ou par microondes. Selon un mode particulier de réalisation, la désactivation des enzymes est réalisée par chauffage à environ 85°C pendant environ 10 minutes.
Selon un mode de réalisation, le procédé de préparation de l’invention ne comprend pas d’étape d’incubation avec une enzyme ou un mélange enzymatique. Ainsi, selon un mode de réalisation, le procédé d’extraction n’est pas un procédé enzymatique. Selon ce mode de réalisation, le procédé d’extraction comprend le mélange d’aiguilles de sapin préalablement broyées et d’eau.
Selon un mode de réalisation, le procédé de préparation de l’invention comprend en outre une étape de centrifugation.
Selon un mode de réalisation, le procédé de préparation de l’invention comprend en outre une étape d’incubation avec une composition huileuse, de préférence de l’huile. Cette étape supplémentaire de lavage a l’avantage d’extraire de l’extrait final toutes les molécules lipophiles, telles que des terpènes, des pesticides ou des allergènes, et facilite notamment la filtration, la concentration et le séchage.
Ainsi, selon un mode de réalisation, le procédé d’extraction d’aiguilles de comprend au moins les étapes suivantes : le mélange d’aiguilles de sapin préalablement broyées et d’eau, l’incubation de ce mélange avec au moins une enzyme ou un mélange enzymatique, et le lavage avec une composition huileuse.
Ainsi, selon un autre mode de réalisation, le procédé d’extraction d’aiguilles de comprend au moins les étapes suivantes : le mélange d’aiguilles de sapin préalablement broyées et d’eau, et le lavage avec une composition huileuse.
Selon un mode de réalisation, on introduit une quantité d’huile allant de 0.1 à 15 % en poids par rapport au poids des aiguilles de sapin ; de préférence, allant de 2 à 12 % ; plus préférentiellement allant de 5 à 10 % ; plus préférentiellement, une quantité d’huile d’environ 8 % en poids par rapport au poids des aiguilles de sapin.
Selon un mode de réalisation, l’huile est ajoutée dans le mélange réactionnel 1 à 3h après le début de la réaction, de préférence environ 2h. Selon un mode de réalisation, l’incubation avec l’huile est réalisée pendant une durée allant de 1 à 3h ; de préférence environ 2h.
Selon un mode de réalisation, l’incubation avec l’huile est réalisée à une température comprise dans une gamme de 30°C à 80°C ; de préférence, de 40°C à 60°C ; plus préférentiellement à environ 50°C.
Selon un mode particulier de réalisation, l’huile est une huile végétale. Selon un mode préféré de réalisation, l’huile est de l’huile de tournesol.
Selon un mode de réalisation, le procédé de préparation de l’extrait de l’invention est réalisé à un pH compris dans une gamme de 4 à 7 ; de préférence, à un pH d’environ 5.
Selon un mode de réalisation, le procédé de préparation de l’extrait de l’invention comprend en outre une étape de filtration de l’extrait.
Selon un mode de réalisation, le procédé de préparation de l’extrait de l’invention comprend en outre une étape de concentration de l’extrait. Les procédés de concentration d’extraits sont connus de l’homme du métier. Des exemples de procédés de concentration d’extraits incluent, mais ne se limitent pas à, la concentration sous vide, le passage sur une colonne de concentration, et autres.
Selon un mode de réalisation, le procédé de préparation de l’extrait de l’invention comprend en outre une étape de séchage. Les procédés de séchage d’extraits sont connus de l’homme du métier. Des exemples de procédés de séchage d’extraits incluent, mais ne se limitent pas à, l’atomisation, la lyophilisation, et autres. L’invention porte également sur un extrait d’aiguilles de sapin obtenu ou susceptible d’être obtenu par l’un des procédés de préparation tels que décrits ci-dessus. En particulier, selon un mode de réalisation, l’extrait de l’invention est obtenu ou susceptible d’être obtenu par un procédé enzymatique, de préférence comprenant une étape d’incubation au moins une enzyme choisie parmi les cellulases, les hémicellulases, les pectinases ou les protéases. Selon un autre mode de réalisation, l’extrait de l’invention est obtenu ou susceptible d’être obtenu par un procédé non enzymatique, de préférence comprenant une étape de macération avec de l’eau. L’invention concerne également une composition comprenant l’extrait de l’invention en tant qu’actif en cosmétique, en dermocosmétique et/ou actif en nutraceutique. Selon un mode de réalisation, la composition de l’invention comprend au moins un extrait de l’invention en tant qu’actif cosmétique ou dermocosmétique, et au moins un excipient.
Selon un mode de réalisation, la composition de l’invention est une composition cosmétique et comprend un excipient cosmétiquement acceptable. Selon un autre mode de réalisation, la composition de l’invention est une composition dermocosmétique et comprend un excipient dermocosmétiquement acceptable.
Les excipients acceptables et leurs quantités sont ceux classiquement utilisés dans les domaines considérés et bien connus par l’homme du métier.
Dans un mode de réalisation, la composition de l’invention comprend une teneur en extrait de l’invention d’au moins 1 % ; de préférence, d’au moins 5 % ; plus préférentiellement d’au moins 10 % ; encore plus préférentiellement d’au moins 15 % en poids par rapport au poids total de la composition.
Dans un mode de réalisation, la composition de l’invention comprend une teneur en extrait de l’invention allant de 0 à 90 % ; de préférence, de 1 à 80 % ; plus préférentiellement, de 5 à 70 % ; encore plus préférentiellement, de 10 à 60 % en poids par rapport au poids total de la composition. Selon un mode de réalisation, la composition de l’invention comprend une teneur en extrait de l’invention allant de 10 à 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 ou 90 % en poids par rapport au poids total de la composition.
Dans un mode de réalisation, la composition cosmétique ou dermocosmétique de l’invention peut comprendre en outre au moins un actif additionnel, par un exemple un extrait naturel ou un actif cosmétique ou dermocosmétique. Selon un mode de réalisation, la composition ne comprend pas d’association avec une cytokine et/ou une enzyme.
La composition cosmétique ou dermocosmétique selon l’invention peut également contenir les adjuvants habituels dans le domaine de la cosmétique ou de la dermocosmétique tels que les gélifiants, les épaississants, les conservateurs, les solvants, les parfums, les agents chélateurs, les absorbeurs d’odeur, les filtres chimiques ou minéraux, les pigments minéraux, les tensioactifs, les polymères et les matières colorantes. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés.
Dans un mode de réalisation, la composition cosmétique ou dermocosmétique de l’invention est administrée topiquement sur le visage et le corps. Selon un mode de réalisation, la composition de l’invention est avantageusement appliquée sur la peau du visage, c’est-à-dire la peau de la face, du cou, du décolleté et/ou du contour des yeux et sur la peau des mains. Selon un autre mode de réalisation, la composition de l’invention est avantageusement appliquée sur la peau du corps, en particulier de l’abdomen, des cuisses, des hanches, des fesses, des seins, des bras. La composition de l’invention peut alors être sous forme, par exemple, de gel, lait, crème, lotion, émulsion, huile, baume, onguent.
Dans un mode de réalisation, la composition cosmétique ou dermocosmétique de l’invention est administrée par voie orale. Selon un mode particulier de réalisation, la composition cosmétique ou dermocosmétique de l’invention est administrée sous forme de poudre, de comprimé sécable ou non, pelliculé ou non, de granule, de capsule, de gélule, ou d’ampoule. L’invention a également pour objet un nutraceutique comprenant un extrait aqueux d’aiguilles de sapin selon l’invention, ou une composition comprenant un tel extrait.
Selon un mode de réalisation, le nutraceutique ou la composition nutraceutique de l’invention est sous une forme adaptée connue de l’homme du métier pour une administration par voie orale, parentérale, entérale, de préférence orale, telle que, mais non limitée aux poudres, comprimés sécables ou non, pelliculés ou non, de granules, de capsules, de gélules, d’ampoules. Suivant un mode de réalisation préféré, le nutraceutique selon l’invention est sous forme de comprimé sécable. Suivant un autre mode de réalisation préféré, le nutraceutique selon l’invention est sous forme de comprimé orodispersible. L’invention a également pour objet un actif comprenant un extrait d’aiguilles de sapin ou une composition tels que décrits ci-dessus.
Selon un mode de réalisation, l’actif de l’invention est un actif cosmétique ou dermocosmétique. Selon un autre mode de réalisation, l’actif de l’invention est un actif nutraceutique. L’invention concerne également l’utiiisation d’un extrait, d’une composition cosmétique, dermocosmétique ou nutraceutique, ou d’un actif cosmétique, dermocosmétique ou nutraceutique de l’invention.
Nos expériences, qui sont discutées en détail ci-dessous, ont montré que les extraits aqueux des aiguilles de sapin inhibent la lipase, Γα-amylase et/ou Γα-glucosidase (voir Exemples 8 à 10). En outre, nos résultats prouvent une diminution de la masse grasse et de la prise de poids dans un modèle in vivo (voir Exemple 12).
La présente invention concerne donc l’utilisation de l’extrait, de la composition ou de l’actif de l’invention pour limiter et/ou réduire la prise de poids chez un individu. En particulier, selon un mode de réalisation, l’extrait ou la composition de l’invention est utile pour réduire la masse grasse d’un individu ; de préférence, la masse de graisse sous-cutanée, ou les surcharges graisseuses sous-cutanées, et/ou la masse hépatique. Selon un mode de réalisation, l’extrait ou la composition de l’invention peut être utilisé comme agent amincissant. L’invention a également pour objet l’utilisation d’extrait d’aiguilles de sapin ou d’une composition contenant un tel extrait, pour diminuer le poids corporel d’un individu. En particulier, selon un mode de réalisation, l’extrait ou la composition de l’invention est utile pour réduire, maintenir ou améliorer le poids corporel chez un mammifère.
Selon un mode de réalisation, l’extrait ou la composition de l’invention est utile pour inhiber l’activité des lipases, des amylases, de préférence Γα-amylase, et/ou des glucosidases, de préférence Γα-glucosidase.
Les glucides sont des composés nutritionnels présents dans un large éventail de denrées alimentaires. Ils sont un groupe de nombreux composés différents qui se produisent dans une variété de tailles et de configurations. Tous les hydrates de carbone sont composés d'une ou de plusieurs unités de sucre reliées ensemble par des liaisons glycosidiques. Les glucides complexes, tels que l'amidon, sont des molécules relativement grandes constituées de nombreuses unités répétitives dans une structure à ramifications multiples. Une variété d'enzymes digestives fonctionne de manière séquentielle pour casser les glucides complexes en des unités absorbables. Dans une première étape, les enzymes salivaires et pancréatiques connues sous le nom d'amylases cassent de gros hydrates de carbone en plus petites unités d'oligo- et de disaccharides. Dans une des étapes finales de la digestion des glucides, les enzymes α-glucosidases dans la bordure de la brosse de l'intestin grêle cassent les disaccharides (maltose et saccharose) dans leurs unités de monosaccharides respectives, qui peuvent ensuite être absorbées par le corps. Des études indiquent qu'un niveau disproportionné de glucides dans l'alimentation peut contribuer à l'obésité. L’inhibition de Γα-amylase et/ou de Γα-glucosidase par l’extrait de l’invention a donc pour effet de limiter et/ou empêcher l’absorption des glucides et peut être utilisée pour prévenir et/ou lutter contre l’obésité.
La présente invention concerne également l’utilisation de l’extrait, de la composition ou de l’actif de l’invention pour limiter l'absorption de glucides contenus dans une denrée alimentaire.
Selon un mode de réalisation, l’extrait ou la composition de l’invention est utile pour inhiber l’activité des amylases, de préférence Γα-amylase, et/ou des glucosidases, de préférence Γα-glucosidase.
Par ailleurs, les lipases sont des enzymes hydrosolubles capables d'effectuer l'hydrolyse de fonctions esters et sont spécialisées dans la transformation de glycérides (triglycérides, diglycérides, monoglycérides) en glycérol et en acides gras. A l'intérieur des adipocytes, les acides gras sont estérifiés en triglycérides. Le stockage des triglycérides est stimulé par l'insuline qui active la lipase et la pénétration des acides gras. L’inhibition des lipases a donc pour effet de diminuer l’absorption des graisses par l’organisme. L’inhibition de lipases par l’extrait de l’invention a donc pour effet de limiter et/ou empêcher l’absorption des lipides et peut être utilisée pour prévenir et/ou lutter contre l’obésité.
La présente invention concerne également l’utilisation de l’extrait, de la composition ou de l’actif de l’invention pour limiter l'absorption de lipides contenus dans une denrée alimentaire.
Selon un mode de réalisation, l’extrait ou la composition de l’invention est utile pour inhiber l’activité des lipases. L’inhibition des lipases a également un effet sur la cellulite. En effet, la cellulite correspond à une augmentation du nombre et du volume des adipocytes où s'accumule la graisse dans l'hypoderme. Le stockage des acides gras est associé à une augmentation de la taille des adipocytes, conduisant à la formation de cellulite. L’inhibition de la lipase par l’extrait de l’invention freine donc l’entrée des acides gras dans les adipocytes. L’invention a donc pour objet l’utilisation d’extrait d’aiguilles de sapin ou d’une composition contenant un tel extrait, pour réduire la cellulite chez un être vivant. Selon un mode de réalisation, l’extrait ou la composition de l’invention peut être utilisé comme agent anticellulite.
En outre, la Demanderesse a démontré que l’extrait de l’invention comprend des composés polyphénoliques (voir Exemple 1), notamment de l’acide phénolique, de l’acide p-coumarique, des lignanes et des tanins, ainsi que de la vitamine C et des fibres alimentaires. L’acide coumarique contribue à la diminution du cholestérol (en particulier le LDL-cholestérol).
Ainsi, l’invention porte également sur l’utilisation d’extrait d’aiguilles de sapin ou d’une composition contenant un tel extrait, pour réduire et/ou maintenir le taux de cholestérol chez un individu. La teneur en acide p-coumarique a également un effet sur la prise de poids (réduire de la prise de poids, diminuer/maintenir du poids corporel), le métabolisme glucidique (limiter l'absorption de glucides) et lipidique (limiter l'absorption de lipides) tels que décrits ci-dessus. Selon un mode de réalisation, l’inhibition des enzymes lipase, α-amylase et α-glucosidase telle que décrite ci-dessus et la teneur de l’extrait de l’invention en acide p-coumarique ont un effet synergique effet sur la prise de poids, le métabolisme glucidique et lipidique tels que décrits ci-dessus.
Le collagène est l’une des principales protéines structurales de la peau produit par les fibroblastes. Ses principales fonctions consistent à (1) fournir à la peau une fermeté mécanique grâce à sa structure rigide en triple-hélice, (2) amortir le tissu conjonctif, et (3) maintenir l’adhésion cellulaire. En particulier, il permet de renforcer et tendre la peau afin de la protéger des stimuli ou contraintes extérieures.
Avec le temps, la dégradation du collagène endogène par les collagénases conduit à (i) une diminution de l’élasticité et la souplesse de la peau, et (ii) à l’apparition de rides. L’invention a pour objet l’utilisation d’extrait d’aiguilles de sapin ou d’une composition contenant un tel extrait, comme agent antiâge. Dans la présente invention, il est démontré une forte action de l’extrait ou la composition de l’invention sur le collagène cutané. En particulier, selon un mode de réalisation, l’extrait ou la composition de l’invention est utile pour inhiber l’activité des collagénases et hyaluronidases (voir Exemples 5 et 6).
Selon un mode de réalisation, l’extrait ou la composition de l’invention est utile pour prévenir et/ou lutter contre le vieillissement cutané. Selon un mode de réalisation, l’extrait ou la composition de l’invention est utile pour prévenir et/ou lutter contre le photovieillissement.
Les résultats des essais biologiques réalisés par la Demanderesse montrent aussi que l’extrait d’aiguilles de sapin de l’invention présente une action anti-glycation (voir Exemple 7). Ainsi, l’extrait selon l’invention permet de renforcer les fibres élastiques de la matrice extracellulaire.
Ainsi, l’extrait ou la composition de l’invention est utile comme composition anti-âge, notamment pour prévenir et/ou atténuer le vieillissement de la peau et/ou l'apparition des signes de vieillissement de la peau. Les signes de vieillissement de la peau sont notamment les rides et/ou ridules, le relâchement cutané, la perte d'élasticité des fibres cutanées, une peau flétrie, une peau amincie, et une peau terne et/ou sans éclat. L’extrait selon l’invention présente des propriétés antioxydantes (voir Exemple 3).
Ainsi, un autre objet de l’invention concerne l’utilisation d’un extrait ou d’une composition de l’invention pour ses propriétés antioxydantes. Selon un mode de réalisation, l’extrait ou la composition de l’invention est utile pour lutter et/ou prévenir l’oxydation de la peau. Selon un mode de réalisation, l’extrait ou la composition de l’invention est utile comme agent antioxydant ou anti-radicalaire. L’extrait ou d’une composition de l’invention peut être utilisé pour prévenir ou atténuer les imperfections de la peau telles que les rougeurs ou les cicatrices superficielles. En particulier, l’extrait ou la composition de l’invention est utile comme agent lissant.
Selon un mode de réalisation, l’extrait ou la composition de l’invention est utile pour réduire et/ou atténuer les cicatrices d’acné. Selon un autre mode de réalisation l’extrait ou la composition de l’invention est utile pour réduire et/ou atténuer les cicatrices liées à l’âge. Selon un autre mode de réalisation l’extrait ou la composition de l’invention est utile pour réduire et/ou atténuer les cicatrices liées à une brûlure. Selon un autre mode de réalisation, l’extrait ou la composition de l’invention est utile pour réduire et/ou atténuer les cicatrices liées à une coupure. L’extrait selon l’invention présente des propriétés inhibitrices de la tyrosinase (voir Exemple 4). Ainsi, selon un mode de réalisation, l’extrait, la composition ou l’actif de l’invention est utile pour éclaircir la peau ou pour lutter contre l’hyperpigmentation de zones de la peau, en particulier contre les tâches de pigmentation liées à l’âge.
Les résultats des essais biologiques réalisés par la Demanderesse montrent que l’extrait d’aiguilles de sapin de l’invention présente une action inhibitrice de hyaluronidase (voir Exemple 6). La hyaluronidase est une enzyme de dégradation de l’acide hyaluronique, polymère hygroscopique à la longue structure linéaire qui garantit un stockage en eau durable et profond au cœur du derme et assurent par là-même de bonnes propriétés mécaniques à la peau (souplesse, élasticité...). L’inhibition de l’activité hyaluronidase permet donc de protéger l’hydratation de la peau.
Ainsi, l’invention porte également sur l’utilisation de l’extrait, de la composition ou de l’actif selon l’invention pour protéger l’hydratation cutanée et/ou pour hydrater la peau d’un individu. Selon un mode de réalisation, l’extrait selon l’invention peut être utilisé comme agent hydratant de la peau. L’extrait selon l’invention présente des propriétés inhibitrices de l'acide γ-aminobutyrique transaminase (voir Exemple 11). L'acide γ-aminobutyrique transaminase intervient dans la dégradation du neurotransmetteur GAB A, l'acide γ-aminobutyrique, qui est le principal neurotransmetteur inhibiteur du système nerveux central chez les mammifères.
Ainsi, l’invention porte également sur l’utilisation d’un extrait ou d’une composition selon l’invention pour inhiber le système nerveux central. En particulier, selon un mode de réalisation, l’extrait ou la composition selon l’invention peut être utilisé comme agent relaxant ou calmant.
Les analyses phytochimiques des extraits d’aiguilles de sapin ont révélé des teneurs élevées en manganèse (voir Exemple 13). En particulier, les extraits d’aiguilles de sapin contiennent au moins 0,3 mg de manganèse pour 100 g d’extrait.
Par conséquent, l’invention concerne également l’utilisation d’un extrait, d’une composition ou d’un actif de l’invention pour assurer un métabolisme énergétique normal, la formation normale du tissu conjonctif et/ou maintenir la santé des os chez un être vivant. L’invention porte aussi sur l’utilisation d’un extrait, d’une composition ou d’un actif de l’invention pour protéger les cellules d’un être vivant contre les radicaux libres. Selon un mode de réalisation, l’extrait ou la composition de l’invention peut être utilisé comme agent antioxydant. L’invention concerne également une méthode de soin cosmétique, dermocosmétique ou nutraceutique comprenant l’administration d’un extrait, d’une composition ou d’un actif de l’invention à un être vivant.
Dans la présente invention, par « soin cosmétique, dermocosmétique ou nutraceutique » on entend un soin non thérapeutique. Par « être vivant », on entend tout mammifère, de préférence, un être humain. Selon un mode de réalisation, l’invention s’adresse aux femmes. Selon un mode de réalisation, l’invention s’adresse aux hommes. Selon un mode de réalisation, l’invention s’adresse aux adultes (personnes de plus de 18 ans). Selon un mode de réalisation, l’invention s’adresse aux adolescents (personnes entre 8 et 18 ans).
Selon un mode de réalisation, l’extrait, la composition ou l’actif de l’invention est administré par voie orale.
Selon un mode de réalisation, l'administration est effectuée à un moment antérieur à la consommation des glucides par l'individu. Selon un mode particulier de réalisation, l'administration se fait entre 1 seconde et 30 minutes avant la consommation des glucides. Selon un mode avantageux de réalisation, l'administration est effectuée entre 10 et 25 minutes avant la consommation des glucides. Selon un mode préféré de réalisation, l'administration est effectuée environ 15 minutes avant la consommation des hydrates de carbone.
Selon un mode de réalisation, l’extrait, la composition ou l’actif de l’invention est administré à plusieurs reprises à un individu sur une période de temps. Selon un mode de réalisation, l’extrait, la composition ou l’actif de l’invention est administré au moins une fois par jour. Selon un autre mode de réalisation, l’extrait, la composition ou l’actif de l’invention est administré deux fois par jour. Selon un autre mode de réalisation, l’extrait ou la composition de l’invention est administré avant chaque repas. Selon un mode de réalisation, l’extrait, la composition ou l’actif de l’invention est administré avec des repas contenant des glucides plusieurs fois par jour pendant une période d'environ 1 mois. L’invention concerne également une méthode non-thérapeutique pour limiter et/ou empêcher l’absorption des glucides et/ou des lipides chez un être vivant. Selon un mode de réalisation, la méthode non-thérapeutique est utile pour réduire, maintenir ou améliorer le poids corporel chez un être vivant.
Selon un mode de réalisation, l’extrait, la composition ou l’actif de l’invention est administrée par voie topique. Selon un mode de réalisation, l’application est effectuée topiquement sur la peau du visage, des mains et/ou du corps, de préférence les zones sensibles visées par l’utilisation. Par exemple, l’application peut être réalisée simplement sur la peau ou accompagnée d'un massage de la peau avec la composition de la présente invention. Selon un mode de réalisation, il est recommandé de masser la peau jusqu’à pénétration complète de la composition dans la peau.
Selon un mode de réalisation, la quantité à appliquer de l’extrait ou de la composition de l’invention est suffisante pour que la surface de peau soit totalement couverte par l’extrait ou la composition de l’invention.
Selon un mode de réalisation, la méthode de soin comprend l’application d’un extrait ou d’une composition de l’invention à un être humain par une application quotidienne, hebdomadaire ou mensuelle. Selon un mode de réalisation, l’application est réalisée au moins une fois par jour. Selon un mode de réalisation, la composition est administrée le matin en tant que soin de jour et/ou le soir au coucher en tant que soin de nuit. L’invention concerne également une méthode de soin cosmétique amincissant du corps humain, caractérisé en ce qu'il consiste à appliquer à la surface de la partie du corps concerné un extrait ou une composition selon l’invention. Selon un mode de réalisation, la méthode de soin est destinée à diminuer les surcharges graisseuses sous-cutanées. Selon un mode de réalisation, la méthode de soin est destinée à limiter et/ou réduire la prise de poids. Selon un mode de réalisation, la méthode de soin est destinée à réduire, maintenir ou améliorer le poids corporel. Selon un mode de réalisation, la méthode de soin est destinée à limiter l'absorption de glucides contenus dans une denrée alimentaire. Selon un mode de réalisation, la méthode de soin est destinée à limiter l'absorption de lipides contenus dans une denrée alimentaire. Selon un mode de réalisation, la méthode de soin est destinée à réduire la cellulite.
Selon un mode de réalisation, la méthode de soin est une méthode de soin pour lutter contre le vieillissement de la peau, comprenant l’application d’un extrait ou d’une composition de l’invention.
Selon un mode de réalisation, la méthode de soin est une méthode de soin antiâge. Selon un mode de réalisation, la méthode de soin est utile pour prévenir la formation de rides et/ou ridules. L’invention concerne également une méthode de soin cosmétique ou dermocosmétique pour lutter contre les imperfections de la peau, comprenant l’application d’un extrait ou d’une composition de l’invention.
Selon un mode de réalisation, la méthode de soin est utile pour prévenir ou atténuer les irritations de la peau telles que les rougeurs de la peau. Selon un mode de réalisation, la méthode de soin est utile pour prévenir ou atténuer les cicatrices superficielles de la peau. L’invention concerne également une méthode de soin cosmétique ou dermocosmétique pour lutter contre l’oxydation cutanée comprenant l’application d’un extrait tel que défini selon l’invention en tant qu’actif, ou d’une composition selon l’invention. L’invention concerne également une méthode de soin cosmétique ou dermocosmétique pour lutter contre la cellulite comprenant l’application d’un extrait tel que défini selon l’invention en tant qu’actif, ou d’une composition selon l’invention.
Un autre objet de l’invention concerne une méthode de soin cosmétique ou dermocosmétique pour protéger l’hydratation de la peau et/ou hydrater la peau comprenant l’application d’un extrait tel que défini selon l’invention en tant qu’actif, ou d’une composition selon l’invention.
BRÈVE DESCRIPTION DES FIGURES
Figure 1 est un histogramme montrant le poids de différents organes (graisses sous-cutanée, pancréas, foie, reins, gastrocnemius, et plantaris) chez des rates soumises à un régime alimentaire standard ou gras, et ayant reçu un extrait de l’invention ou non.
Figure 2 est un graphe montrant le poids de rates soumises à un régime alimentaire standard ou gras, et ayant reçu un extrait de l’invention ou non, en fonction du temps.
Figure 3 est un graphe montrant le taux de triglycérides, de cholestérol total et de cholestérol HDL de rates soumises à un régime alimentaire standard ou gras, et ayant reçu un extrait de l’invention ou non.
EXEMPLES
La présente invention se comprendra mieux à la lecture des exemples suivants qui illustrent non-limitativement l’invention.
Exemple 1 : Extraits
Pour chaque extraction, une caractérisation de la teneur de l’extrait de l’invention en phénols, en sucres, en protéines et en matière sèche a été réalisée selon les protocoles ci-dessous.
Dosage des phénols
Un volume de 200 pL d’échantillon à doser (l’extrait de l’invention ou l’acide gallique, considéré comme une molécule représentative des composés phénoliques, à différentes concentrations pour la gamme d’étalonnage) a été mélangé à 1000 pL de réactif de Folin-Ciocalteu (10 %) et 800 pL de solution de carbonate de sodium (7 %), puis le mélange a été incubé pendant 30 min dans l’obscurité. L’absorbance à 760 nm est ensuite mesurée. Chaque échantillon est préparé en triplicat.
Par comparaison avec la courbe d’étalonnage, la concentration en phénols totaux de l’extrait de l’invention a ensuite été déterminée.
Dosage des sucres
Après précipitation des protéines contenues dans l’extrait et interférant avec le dosage des sucres, les extraits de l’invention ont été dilués. Un volume de 400 pL d’échantillon à doser (l’extrait de l’invention ou une solution standard en sucres comprenant 0,15 g/L de glucose et 0,15 g/L de fructose, à différentes concentrations pour la gamme d’étalonnage) a été mélangé à 400 pL de réactif cuprique. Le mélange est ensuite fortement agité puis incubé 10 min à 100°C et refroidi 10 min dans un bain d’eau froide. Un volume de 400 pL de réactif arsénomolybdique et 5 mL d’eau distillée ont ensuite été ajoutés au mélange et incubé pendant 10 min à température ambiante. L’absorbance à 500 nm est ensuite mesurée. Chaque échantillon est préparé en triplicat.
Par comparaison avec la courbe d’étalonnage, la concentration en sucres de l’extrait de l’invention a ensuite été déterminée.
Dosage de protéines
Un mélange dans des matras a été réalisé, comprenant environ 300 mg de catalyseur (à partir d’une préparation comprenant 1 g de sélénium amorphe, 1 g de sulfate de cuivre et 50 g de sulfate de sodium), 500 pL d’extrait de l’invention et 4 mL d’acide sulfurique concentré. Un mélange contrôle a été réalisé, comprenant le catalyseur et l’acide sulfurique, sans extrait.
Les matras ont ensuite été raccordés au récupérateur de vapeurs « Büchi Scrubber K-415 ». Puis, après préchauffage de la rampe de minéralisation « Büchi Digestion Unit K-424 » pendant 10 à 15 min, l’ensemble tubes - collecteur a été transféré sur la rampe. Les échantillons ont été chauffés jusqu’à clarification du liquide qui, en fin de minéralisation, présente une teinte verdâtre.
Une étape de distillation a ensuite été réalisée à l’aide d’un distillateur automatique « Büchi Distillation Unit K-335 » et la solution obtenue a ensuite été titrée avec une solution titrante d’acide chlorhydrique à 0,02 M.
La concentration massique de protéines en g/L a été déterminée selon l’équation suivante :
avec [Protéinesjm : la concentration massique en protéines (g/L), [HCl] : la concentration molaire de la solution titrante d’acide chlorhydrique (mol/1),
Veq : le volume équivalent de l’échantillon (mL),
Vtémoin : le volume équivalent du témoin (mL),
Mn : la masse molaire de l’azote (g/mol), Véchantiiion : le volume de l’échantillon (mL), 6,25 : le coefficient permettant de passer de la concentration en azote à la concentration en protéines.
Dosage de la. matière sèche L’extrait de l’invention a été pesé, puis placé dans une étuve à 105°C pendant au moins 24h avant d’être à nouveau pesé.
Le pourcentage de matière sèche de l’extrait (après incubation dans l’étuve) a ensuite été calculé par rapport au poids total de l’extrait (avant incubation dans l’étuve).
Extrait 1 : Extraction par hydrolyse enzymatique L’extrait de l’invention est obtenu selon le protocole suivant.
Dans un réacteur ont été introduits entre 110 et 350 g d’aiguilles de sapin (Abies alba), de l’eau et 5 % en poids d’un mélange enzymatique un mélange de 1-50 % d’une hémicellulase, d’une cellulase et d’une pectinase, et de 1-100 % d’un mélange de protéases. Le ratio aiguilles de sapin/eau est compris dans une gamme allant de 2,5 à 4.
Le mélange réactionnel est ensuite incubé à une température d’environ 50°C sous agitation. L’agitation est comprise dans une gamme d’environ 100 à 400 rpm. Le pH de ce mélange est compris dans une gamme d’environ 3,0 à 4,0. Puis une étape de centrifugation est réalisée à 9000 rpm pendant 20 min à température ambiante.
Finalement, une phase aqueuse a été extraite et caractérisée. L’extrait comprend des polyphénols (entre 5 et 9 g/L), des sucres (entre 10 et 18 g/L), et des protéines (entre 1,5 et 4,5 g/L). L’extrait aqueux est caractérisé par une matière sèche moyenne comprise entre 3 et 9 %.
Ainsi, l'extrait comprend entre 10 et 15 % de polyphénols en poids par rapport au poids total de l’extrait sec ; entre 20 et 32 % de sucres en poids par rapport au poids total de l’extrait sec ; et entre 4 et 8 % de protéines en poids par rapport au poids total de l’extrait sec. D’autres mélanges enzymatiques comprenant un mélange de pectinases et de cellulases, un mélange de pectinases et d’estérases, ou des pectinases seules ont également été testés (dans les mêmes conditions d’extraction que décrites ci-dessus). Les teneurs en polyphénols, sucres et protéines, ainsi que la matière sèche moyenne, se sont révélées similaires aux valeurs décrites ci-dessus.
Extrait 2 : Extraction sans enzyme L’extrait de l’invention est obtenu selon le protocole suivant.
Dans un réacteur ont été introduits 110 g d’aiguilles de sapin (Abies alba) et de l’eau. Le ratio aiguilles de sapin/eau est d’environ 2,5. Le mélange a été réalisé pendant une durée de 4 heures à une température de 50°C sous agitation.
Finalement, une phase aqueuse a été extraite et caractérisée. L’extrait aqueux comprend des polyphénols (environ 5,7 g/L), des sucres (environ 6,2 g/L), et des protéines (environ 5,1 g/L). L’extrait aqueux est caractérisé par une matière sèche moyenne d’environ 4,8 %.
Ainsi, l'extrait comprend environ 12 % de polyphénols en poids par rapport au poids total de l’extrait sec ; environ 13 % de sucres en poids par rapport au poids total de l’extrait sec ; et environ 10 % de protéines en poids par rapport au poids total de l’extrait sec.
Extrait 3 : Extraction avec huile L’extrait de l’invention est obtenu selon le protocole suivant.
Dans un réacteur ont été introduits 109 kg d’aiguilles de sapin (Abies alba) préalablement broyées et 424.5 L d’eau. Le ratio aiguilles de sapin/eau est d’environ 3,9. Le mélange a été réalisé pendant une durée de 4 heures à une température de 50°C sous agitation.
Après 3,5 heures de macération avec l’eau, un volume d’huile de tournesol représentant 16 % du volume total est ajouté au mélange. Le mélange a été réalisé pendant une durée de 2h à une température de 50°C sous agitation.
Finalement, une phase aqueuse a été extraite et caractérisée. L’extrait aqueux comprend des polyphénols (environ 5,6 g/L), des sucres (environ 3,8 g/L), et des protéines (environ 1,23 g/L). L’extrait aqueux est caractérisé par une matière sèche moyenne d’environ 3,3 %.
Ainsi, l'extrait comprend environ 17 % de polyphénols en poids par rapport au poids total de l’extrait sec ; environ 12 % de sucres en poids par rapport au poids total de l’extrait sec ; et environ 3,7 % de protéines en poids par rapport au poids total de l’extrait sec.
Exemple 2 : Compositions
Compositions cosmétiques
Compositions nutraceutiques - Formule gélule
- Formule comprimé à croquer
- Formule comprimé orodispersible
- Formules liquides A et B
Exemple 3 : Action antioxydante - tests DPPH et ORAC
Le but de ces expériences est de monter que les extraits aqueux d’aiguilles de sapin (Abies alba) ont une activité antioxydante.
Test ORAC
Principe
Le potentiel antioxydant de l’extrait de l’invention a été testé à l’aide de la méthode de dosage ORAC (Oxygen Radical Absorbance Capacity). Ce dosage est basé sur l’oxydation d’une sonde fluorescente.
Dans ce test, les radicaux libres présents dans l’échantillon réagissent avec une sonde fluorescente ce qui a pour conséquence de diminuer son intensité. Plus le nombre de radicaux est élevé dans l’échantillon, plus l’intensité de la sonde est faible. L’ajout d’un composé antioxydant dans l’échantillon permet d’absorber les radicaux libres et donc, permet de prolonger la durée de fluorescence de la sonde.
Pour déterminer si un composé présente une activité antioxydante, on compare la fluorescence de la sonde obtenue avec le composé d’intérêt, et la fluorescence obtenue avec un antioxydant de référence. Si le composé présente une activité antioxydante, son activité est donnée en moi d’équivalent de la référence par gramme de masse sèche du composé d’intérêt.
Protocole
Dans cette étude, la référence est le Trolox® (ou acide 6-hydroxy-2,5,7,8-tétraméthylchromane-2-carboxylique) et la sonde fluorescente est la fluorescéine.
Une solution témoin (T) a été réalisée par dissolution de Trolox® dans un tampon phosphate à pH 7,4. La concentration en Trolox® dans la solution témoin est de 1 mM.
La solution à analyser (S) est une solution comprenant l’extrait de l’invention tel que décrit précédemment. Cette solution est réalisée dans un tampon phosphate à pH 7,4.
La fluorescence de la sonde a été mesurée au cours du temps pour chacune des solutions (S) et (T). Résultats
Le dosage ORAC a permis de mettre en évidence une activité antioxydante de l’extrait aqueux d’aiguilles de sapin (1679 pmol de Trolox®/g de masse sèche).
- Test DPPH
Principe
Le potentiel anti-radicalaire d’une substance peut être testé à l’aide d’une méthode colorimétrique appelée test DPPH, en utilisant des radicaux de substitution tels que le radical l,l-diphényle-2-picrylhydrazil appelé DPPH. A température ambiante et en solution, le radical DPPH présente une coloration violette intense. Son passage à la forme non radicalaire, après saturation de ses couches électroniques s’accompagne d’une disparition de cette coloration suivant l’équation suivante : DPPH° + AH-> DPPH-H + A°
La diminution de l’intensité de la coloration d’une solution contenant le radical DPPH, appelée solution de DPPH, est suivie par mesure colorimétrique à 517 nm. Elle permet de se rendre compte de la capacité de piégeage des composés étudiés par rapport à celle du DPPH°. La diminution de l’absorbance met ainsi en évidence les propriétés anti-radicalaires des composés étudiés.
Protocole
Un volume de 25 pL d’extrait aqueux de l’invention ou de solution témoin d’acide ascorbique est injecté dans des tubes à hémolyses protégés de la lumière. Une solution de DPPH à 6.10'5 mol/L est ajoutée pour obtenir un volume final de 1 mL. Après agitation et incubation pendant 30 min à température ambiante et à l’abri de la lumière, l’absorbance de la solution est mesurée à 517 nm. Résultats
On observe une diminution très nette de l’absorbance à 517 nm en présence d’extrait de l’invention. La dose d'extrait de l’invention pour inhiber 50 % des radicaux libres est de 0,09 % de l’extrait sec. Le dosage DPPH a donc permis de mettre en évidence une activité antioxydante de l’extrait aqueux d’aiguilles de sapin.
Exemple 4 : Action dépigmentante
Le but est de montrer qu’un extrait d’aiguilles de sapin selon l’invention a des propriétés dépigmentantes.
Principe
La tyrosinase est une enzyme clé qui catalyse les deux premières étapes de la voie de synthèse de la mélanine. L’activité de cette enzyme peut être déterminée par mesure de l’oxydation de la L-DOPA (L-3,4-dihydroxyphenylalanine) en dopachrome, un intermédiaire de synthèse de la mélanine, en utilisant une tyrosinase de champignon. Une inhibition de la production de dopachrome correspond donc à une inhibition de la tyrosinase et à une inhibition de la synthèse de mélanine.
Protocole
Matériel
Tyrosinase from Mushroom > 1000 U/mg (ref Sigma T3824),
Tampon Phosphate de sodium pH 7.2 (ref Sigma 32048),
Tyrosine (ref Sigma T2900000),
Acide kojique (ref Sigma K3125). Méthode L’extrait de l’invention est dilué dans du tampon phosphate de sodium pH 7.2 (dilutions finales 1/2.5 à 1/160) puis est incubé avec la tyrosinase (9 U/puits) pendant 5 minutes à 35°C dans des plaques 96 puits. La tyrosine (2 mM) est ensuite ajoutée au mélange et la réaction est suivie par lecture de la DO à 492 nm pendant 5 minutes (apparition du dopachrome) à l'aide d'un spectrophotomètre à lecteur de microplaques (Optima Fluostar, BMG Labtech). Un témoin négatif est réalisé sans addition d'extrait (tampon) et un témoin positif (acide kojique) est également testé.
Le calcul du pourcentage d’inhibition de l'activité tyrosinase par les extraits est effectué en rapportant la DO de l'extrait à la DO du témoin négatif (sans extrait). La dilution de l'extrait qui inhibe 50 % de l'activité tyrosinase (ICso) est calculée à partir des équations des courbes dose-réponse. Résultats L’extrait de l’invention présente une ICso pour l’activité tyrosinase supérieure à 2 % et un pourcentage d’inhibition de l'activité tyrosinase de 40 %. L’extrait présente donc une activité anti-tyrosinase et par conséquent une activité inhibitrice de la synthèse de la mélanine.
Exemple 5 : Activité inhibitrice de la collagénase
Principe
Ce test permet de déterminer l’activité enzymatique de la collagénase, enzyme dégradant les liaisons peptidiques du collagène.
Le collagène est une protéine qui a pour fonction de conférer aux tissus une résistance mécanique à l'étirement, il est notamment indispensable aux processus de cicatrisation. Il existe plusieurs typeq de collagène, chacun possède une structure propre et se retrouve dans des organes particuliers (le collagène de type I intervient dans la formation de la peau, des tendons, des os... le type III se retrouve au niveau du système cardiovasculaire).
Le test se base sur la dégradation par la collagénase d’un substrat (N-[3-(2-Furyl)acryloyl]-Leu-Gly-Pro-Ala ou FALGPA) qui absorbe à 345 nm. La diminution de l’absorbance correspond donc à la dégradation du substrat, elle peut être empêchée ou ralentie en présence d’inhibiteur. Des inhibiteurs connus de la collagénase sont les tanins. L’acide tannique sert donc de contrôle positif.
Protocole
Le test est réalisé en plaque 96 puits. 5 pL d’échantillon, soit l’extrait selon l’invention à tester, soit l’acide tannique utilisé comme témoin positif à une concentration de 75 pg/mL, sont mélangés à 5 pL de collagénase à lOU/mL (Sigma, C6885), dans un volume de 50 pL de tampon tricine 50 mM. Après une incubation de 5 min à température ambiante, le substrat FALGPA est ajouté au mélange réactionnel (90 pL à 0.25 mM, Sigma, F5135). Une cinétique de 40 min est alors démarrée, avec une lecture à 325 nm toutes les 5 min. Résultats L’extrait selon l’invention présente une activité inhibitrice de la collagénase. En effet, l’extrait selon l’invention à 0,5 % présente une activité inhibitrice de la collagénase de 62,5 %. L’extrait de l’invention présente donc une activité inhibitrice de la collagénase significative.
Exemple 6 : Activité inhibitrice de la hyaluronidase
Principe
Le réactif utilisé est le Stains-all (l-ethyl-2-(3-(l-ethylnaphto-(1.2-D)-*thiazolin-2-Y ; l-ethyl-2-(3-(l-ethylnaphto(1.2-D)), qui forme un complexe coloré bleu avec les oligosaccharides de haut poids moléculaire de l’acide hyaluronique non dégradé par la hyaluronidase. Les petits fragments issus de la dégradation de l’acide hyaluronique ne complexent pas avec le Stains-all, ce qui entraînent une diminution de la coloration.
La coloration bleue est dosée par spectrométrie à 650 nm et rend compte de la quantité d’acide hyaluronique natif présent et donc de l’activité de la hyaluronidase.
Protocole
Le test est réalisé en plaque 96 puits. Un volume de 10 pL d’échantillon, soit l’extrait selon l’invention à tester, soit la Quercetine utilisée comme témoin positif à une concentration de 10 %, est mélangé à 90 pL de hyaluronidase 3000 U/mg (Sigma, T7755), dans du Tampon phosphate 200 mM pH 7,4. Un volume de 100 pL du substrat d’acide hyaluronique sont ajoutés au mélange réactionnel (15 mg/5 mL, Sigma, 53747). Une mesure de l’absorbance à 650 nm est réalisée à 37°C après l’addition du Stains-all : 0.00125 % (100 pL, Sigma E9379). Résultats L’extrait selon l’invention présente une activité inhibitrice de la hyaluronidase. En effet, l’extrait selon l’invention à 50 % présente une activité inhibitrice de la hyaluronidase de 21,2 %.
Exemple 7 : Activité d’inhibition de la glycation
Principe
La réaction non enzymatique se base sur l’interaction entre des sucres réducteurs et des protéines (la glycation). Ainsi, la glycation est réalisée entre le sérum bovine albumine (BSA) et la glycolaldéhyde.
Protocole
Le test est réalisé en plaque 96 puits. Un volume de 100 pL d’échantillon, soit l’extrait selon l’invention à tester, soit l’Aminoguanidine utilisé comme témoin positif à une concentration de 1 %, est mélangé à 100 pL de BSA à 15 mg/mL (Sigma, A9418), dans du tampon PBS. Après une incubation de 1 heure à 37°C, le substrat glycolaldéhyde est ajouté au mélange réactionnel (50 pL à 0.025 M, Sigma, G6805). Une cinétique de 40 min est alors démarrée, avec une lecture de l’absorbance à 325 nm toutes les 5 min. Après une incubation de 24 à 48h à 37°C, l’émission à 460 nm d’une excitation à 360 nm est mesurée. Résultats L’extrait selon l’invention présente une activité inhibitrice de la glycation. En effet, l’extrait selon l’invention à 5 % présente une activité inhibitrice de la glycation de 87 %. L’extrait de l’invention présente donc une activité inhibitrice de la glycation significative.
Exemple 8 : Activité d’inhibition de l’amylase
Principe
Ce test permet de déterminer l’action d’un ingrédient sur l’activité enzymatique de Γα-amylase, enzyme intervenant dans la dégradation de l’amidon et la libération du glucose. Le substrat utilisé pour tester l’activité de cette enzyme est 2-Chloro-4-nitrophenyl-a-D-maltotrioside. Lorsque ce substrat est dégradé, on observe une coloration jaune absorbant à 405 nm. L’inhibiteur de référence utilisé dans ce test est l’acarbose à 5 pg/mL.
Protocole
Une solution équivalente à une préparation contenant 10 % de phase aqueuse est constituée. La quantité de lyophilisât à dissoudre dans le tampon est calculée sur la base de la matière sèche. Par la suite des dilutions en cascade sont réalisées. La valeur de l’IC 50 est calculée à partir des résultats obtenus.
Un mélange est réalisé avec 50 pL d’échantillon ou tampon (témoin), 25 pL d’enzyme a-amylase (5 unités/mL dans du tampon phosphate). Ce mélange est incubé pendant 10 min à 37°C. Un volume de 25 pL de p-NPG (5 mM dans du tampon phosphate) est ensuite rajouté et le mélange obtenu est incubé pendant 20 min à 37°C. Une lecture à 405 nm est réalisée à la suite de cette incubation. L’IC50 sur Γα-amylase est ensuite calculée pour chaque échantillon. Résultats L’extrait selon l’invention présente une activité inhibitrice de Γα-amylase. En effet, l’extrait selon l’invention à une dose de 1,5 % présente une activité inhibitrice de Γα-amylase comprise entre 50 et 60 %. L’extrait de l’invention présente un IC50 compris 0,1 et 0,2 %. L’extrait de l’invention présente donc une activité inhibitrice de Γα-amylase significative.
Exemple 9 : Activité d’inhibition de la glucosidase
Principe
Ce test permet de déterminer l’action d’un ingrédient sur l’activité enzymatique de la glucosidase, enzyme intervenant dans la dégradation de l’amidon et la libération du glucose. Le substrat utilisé pour tester l’activité de cette enzyme est p-nitrophenyl-alpha-D-glucopyranoside. Lorsque ce substrat est dégradé, on observe une coloration jaune absorbant à 405 nm. L’inhibiteur de référence utilisé dans ce test est l’acarbose à 10 pg/mL.
Protocole
Une solution équivalente à une préparation contenant 10 % de phase aqueuse est constituée. La quantité de lyophilisât à dissoudre dans le tampon est calculée sur la base de la matière sèche. Par la suite des dilutions en cascade sont réalisées. La valeur de l’IC50 est calculée à partir des résultats obtenus.
Un mélange est réalisé avec 60 pL d’échantillon ou tampon (témoin), 50 pL d’enzyme a-glucosidase (0,2 unités/mL dans du tampon phosphate). Ce mélange est incubé pendant 10 min à 37°C. Un volume de 50 pL de substrat p-NPG (5 mM dans du tampon phosphate) est ensuite rajouté et le mélange obtenu est incubé pendant 20 min à 37°C. Une lecture à 405 nm est réalisée à la suite de cette incubation. L’IC50 sur Ι’α-glucosidase est ensuite calculée pour chaque échantillon. Résultats L’extrait selon l’invention présente une activité inhibitrice de Ι’α-glucosidase. En effet, l’extrait selon l’invention à une dose de 0,78 % présente une activité inhibitrice de Ι’α-glucosidase d’environ 100 %. L’extrait de l’invention présente un IC50 inférieur à 0.06 %. L’extrait de l’invention à faible concentration présente donc une activité inhibitrice de Ι’α-glucosidase très significative.
Exemple 10 : Activité d’inhibition de la lipase
Principe
Le test se base sur la dégradation par la lipase de son substrat. Le produit de la dégradation du substrat est excité à 520 nm et émet une fluorescence à 600 nm. Une diminution de la fluorescence est associée à une non dégradation du substrat. L’inhibiteur de référence utilisé dans ce test est l’orlistat à 100 pM.
Protocole
Le substrat est préparé en solubilisant 3,75 mg du substrat dans 50 mL de tampon acétate à 50 mM pH 5.
Une solution équivalente à une préparation contenant 10 % de phase aqueuse est constituée. La quantité de lyophilisât à dissoudre dans le tampon est calculée sur la base de la matière sèche. Par la suite des dilutions en cascade sont réalisées. La valeur de l’IC50 est calculée à partir des résultats obtenus.
Dans une microplaque noire, un mélange est réalisé avec 50 pL d’échantillon ou tampon (témoin), 50 pL de substrat (à 0,1 mM dans du tampon phosphate) et 50 pL d’enzyme lipase pancréatique (1 mg/mL). Ce mélange est incubé pendant 45 min à 40°C. Une lecture de l’émission à 610 nm après excitation à 520 nm est réalisée au cours de l’incubation (toutes les 2 min). L’IC50 sur Γα-glucosidase est ensuite calculée pour chaque échantillon. Résultats L’extrait selon l’invention présente une activité inhibitrice de la lipase pancréatique. En effet, l’extrait selon l’invention à une dose de 0,78 % présente une activité inhibitrice de la lipase d’environ 100 %. L’extrait de l’invention présente un IC50 inférieur à 0,03 %. L’extrait de l’invention présente donc une activité inhibitrice de la lipase très significative à faible concentration.
Exemple 11 : Activité d’inhibition de l’acide γ-aminobutyrique transaminase
Principe
Ce test permet de déterminer l’action d’un ingrédient sur l’activité enzymatique de l'acide γ-aminobutyrique transaminase (GABAT) intervenant dans la dégradation du neurotransmetteur GABA. Lorsque le GABA est catabolisé par le GABAT le NAD est transformé en NADH. La production de ce dernier est suivie à 340 nm. L’inhibiteur de référence utilisé dans ce test est le gamma vinyl GABA (GVG).
Protocole
Le test est réalisé en plaque 96 puits. Un tampon de 190 pL composé de potassium pyrophosphate, α-kétroglutarate, Pyridoxal-5’-phosphate etNAD+ est réalisé. Un volume de 20 pL d’homogénat de cerveau de rat contenant le GABAT et un volume de 10 pL d’extrait ou de vigabatrine (1 mmol, Y0001400) sont ajoutés. La microplaque est ensuite incubée à 37°C pendant 15 minutes. Le substrat (20 pL de GABA, 115 mM, Sigma A2129) est ensuite ajouté. La lecture de l’absorbance s’effectue à une longueur d’onde de 340 nm, à une température de 37°C, avec à un pas de 30 secondes. Résultats
Les résultats sont présentés dans le Tableau L
Tableau 1 : Évaluation de l’effet de l’extrait de l’invention sur l’activité de l'acide γ-aminobutyrique transaminase
Les résultats montrent un effet d’inhibition de l’activité de l'acide γ-aminobutyrique transaminase significatif, et cet effet est dose-dépendant.
Exemple 12 : Effets de l’extrait de l’invention in vivo
Protocole
Des rates Winstar de deux mois au début de l’expérience (170-180 g) ont été élevées dans des cages individuelles. Elles ont été acclimatées pendant une durée de 2 semaines avant le au début de l’expérience, avec une prise alimentaire d’environ 20 g par jour.
Un groupe contrôle de 3 individus ont ensuite été soumis à un régime standard A04 comprenant 3339 kcal par kg de pellet (soit 16 % de protéines, 3 % de lipides, et 60 % de carbohydrates). Deux autres groupes de 3 individus ont été soumis à un régime gras 206HF comprenant 5505,3 kcal par kg de pellet (soit 20 % de protéines, 36 % de lipides et 36,7 % de carbohydrates). Parmi ces 2 groupes, un groupe a reçu l’extrait de l’invention
à une dose de 100 mg par jour dès le début du régime gras ; l’autre a reçu un placebo (eau). L’extrait de l’invention a été obtenu selon le protocole d’extraction avec huile décrit dans l’Exemple 1, lyophilisé puis conservé à température ambiante jusqu’à utilisation. Avant administration, l’extrait a été préparé à 10 % (soit 10 g d’extrait lyophilisé pour 100 mL d’eau) et stocké à 4°C. L’extrait a été administré aux rates par gavage de 1,0 mL/jour (soit 100 mg/jour), du lundi au vendredi (soit un total de 700 mg en une semaine). L’expérience a été réalisée sur une période de 8 semaines, les individus ayant été pesés 2 fois par semaine et la prise alimentaire mesurée 1 fois par semaine. Au terme de la période de 8 semaines, les rates ont été soumises à un jeûne d’un jour puis sacrifiées. Les individus ont été pesés ; leurs organes ont été prélevés, pesés puis stockés à -80°C. Un prélèvement de sang a également été réalisé, ainsi qu’un bilan lipidique et glycémique. Résultats
Les résultats du poids des organes en fonction du régime alimentaire et de l’administration d’un extrait selon l’invention sont présentés dans la Figure 1. Le poids de la graisse sous-cutanée et du foie des animaux soumis à un régime gras et traités avec un extrait de l’invention est similaire à celui du groupe contrôle soumis à un régime normal et non traités. Au contraire, le groupe contrôle soumis à un régime gras mais non traités par l’extrait de l’invention présente un poids élevé de ces deux organes.
Le poids des autres organes, pancréas, reins, gastrocnemius et plantaris, reste stable quel que soit le régime alimentaire. L’administration in vivo d’un extrait selon l’invention permet donc de réduire le poids de certains organes, et plus spécifiquement de réduire le poids de la graisse sous-cutanée et du foie.
Les résultats du poids des animaux en fonction du régime alimentaire et de l’administration d’un extrait selon l’invention sont présentés dans la Figure 2. La courbe de poids des animaux soumis à un régime gras et traités avec un extrait de l’invention est similaire à celle du groupe contrôle soumis à un régime normal et non traités, contrairement au groupe soumis à un régime gras et non traités. L’administration d’un extrait selon l’invention permet donc de limiter la prise de poids.
En outre, il a été observé une diminution des triglycérides, tandis que le taux de cholestérol HDL reste stable (Figure 3). D’après l’ensemble de ces résultats, l’extrait de l’invention peut donc être utilisé pour réduire la masse corporelle d’un individu, et également limiter et/ou réduire la prise de poids chez un individu.
Exemple 13 : Analyses phytochimiques des extraits de l’invention
Des extraits aqueux selon l’invention ont été préparés selon les protocoles d’extraction 1 et 2 décrits dans l’Exemple 1. Une analyse phytochimique a ensuite été réalisée. L’extrait 1 comprend 9,09 mg de manganèse pour 100 g d’extrait, et l’extrait 2 en comprend 9,49 mg.

Claims (12)

  1. REVENDICATIONS
    1. Extrait aqueux d’aiguilles de sapin, caractérisée en ce qu’il comprend de 5 à 50 % de composés polyphénoliques en poids par rapport au poids total de l’extrait sec ; de 0 à 40 % de sucres en poids par rapport au poids total de l’extrait sec ; de 0 à 30 % de protéines en poids de protéines par rapport au poids total de l’extrait sec ; et de 2 à 30 % de masse sèche en poids par rapport au poids total de l’extrait.
  2. 2. Composition comprenant un extrait aqueux d’aiguilles de sapin selon la revendication 1 en association avec au moins un excipient acceptable.
  3. 3. Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que l’excipient est cosmétiquement acceptable et que la composition est sous forme de gel, lait, crème, lotion, émulsion, huile, baume ou onguent.
  4. 4. Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que l’excipient est nutraceutiquement acceptable et que la composition est sous forme solide, liquide ou gel, notamment sous forme poudre, comprimé sécable ou non, pelliculé ou non, sous forme orodispersible, ou encore sous forme de granule, de capsule, de gélule, d’ampoule.
  5. 5. Actif cosmétique ou dermocosmétique caractérisé en ce qu’il comprend un extrait aqueux d’aiguilles de sapin selon la revendication 1 ou une composition selon l’une quelconque des revendications 2 à 4.
  6. 6. Actif nutraceutique, caractérisé en ce qu’il comprend un extrait aqueux d’aiguilles de sapin selon la revendication 1 ou une composition selon l’une quelconque des revendications 2 à 4.
  7. 7. Utilisation d’un extrait aqueux d’aiguilles de sapin selon la revendication 1, d’une composition selon l’une quelconque des revendications 2 à 4 ou d’un actif selon l’une des revendications 5 ou 6, en tant qu’agent amincissant, notamment pour limiter et/ou réduire la prise de poids ; et/ou réduire, maintenir et/ou améliorer le poids corporel chez un individu.
  8. 8. Utilisation d’un extrait aqueux d’aiguilles de sapin selon la revendication 1, d’une composition selon l’une quelconque des revendications 2 à 4 ou d’un actif selon l’une des revendications 5 ou 6, en tant qu’agent antiâge et/ou agent lissant de la peau, notamment pour prévenir et/ou atténuer le vieillissement de la peau et/ou l'apparition des signes de vieillissement de la peau.
  9. 9. Utilisation d’un extrait aqueux d’aiguilles de sapin selon la revendication 1, d’une composition selon l’une quelconque des revendications 2 à 4 ou d’un actif selon l’une des revendications 5 ou 6, pour la préparation d’une composition antioxydante et/ou cicatrisante.
  10. 10. Utilisation d’un extrait aqueux d’aiguilles de sapin selon la revendication 1, d’une composition selon l’une quelconque des revendications 2 à 4 ou d’un actif selon l’une des revendications 5 ou 6, en tant qu’agent éclaircissant de la peau, notamment des peaux ethniques, ou pour lutter contre l’hyperpigmentation de zones de la peau, en particulier contre les tâches de pigmentation liées à l’âge.
  11. 11. Utilisation d’un extrait aqueux d’aiguilles de sapin selon la revendication 1, d’une composition selon l’une quelconque des revendications 2 à 4 ou d’un actif selon l’une des revendications 5 ou 6, en tant qu’agent hydratant de la peau, pour protéger l’hydratation de la peau et/ou pour hydrater la peau.
  12. 12. Méthode de soin cosmétique, non thérapeutique, comprenant l’administration d’un extrait aqueux d’aiguilles de sapin selon la revendication 1, d’une composition selon l’une quelconque des revendications 2 à 4 ou d’un actif selon l’une des revendications 5 ou 6.
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