FR2982490A1 - Utilisation de la proteine s pour traiter le cancer. - Google Patents

Abstract

L'invention concerne une séquence d'acides aminés isolée, consistant en SEQ ID NO: 1, un homologue présentant une homologie d'au moins 80% avec ladite séquence et une activité biologique similaire, ou un fragment actif consistant en 280 à 675 acides aminés contigus de ladite séquence ou dudit homologue, pour une utilisation comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.

Description

Utilisation de la protéine S pour traiter le cancer La présente invention se rapporte au domaine pharmaceutique, particulièrement au domaine de l'oncologie.

Le cancer est une maladie de l'homme et des animaux qui est la plupart du temps mortelle, et qui se traduit par une croissance incontrôlée des cellules endogènes. Le terme « cancer » est utilisé pour désigner la formation de tumeurs malignes et de néoplasmes (tumeurs ou carcinomes) ou la dégénérescence maligne et le dérèglement de la maturation des globules blancs (leucémie ou cancer du sang). Généralement, la croissance des cancers comporte deux étapes, à savoir la croissance tumorale locale et la dissémination cancéreuse. La croissance tumorale locale consiste en l'apparition d'un clone tumoral, à partir d'une cellule "transformée", sous l'action d'agents carcinogènes initiateurs et promoteurs. La prolifération cellulaire aboutit à la constitution de la tumeur. La dissémination cancéreuse, à partir de la tumeur initiale peut s'effectuer soit par dissémination régionale soit par développement de tumeurs secondaires appelées métastases. Cette dissémination fait la gravité du cancer, car on sait mieux traiter la tumeur primitive, que les métastases. Pour tenter de prévenir et/ou de vaincre le cancer, différentes techniques telles que la chirurgie, la radiothérapie dont la curiethérapie, la chimiothérapie dont l'hormonothérapie, l'immunothérapie et plus récemment la thérapie anti-angiogénique, ont été développées.

Cependant, en dépit de progrès récents, ces techniques ne sont pas toutes efficaces, notamment contre les métastases ou des tumeurs résistantes aux traitements par des agents cytotoxiques, et engendrent, malheureusement fréquemment, une intolérance de la part des patients, ainsi que des effets secondaires sévères tels qu'une dépression médullaire, des vomissements, des nausées, une alopécie, une asthénie, une perte d'appétit, une anémie, une thrombopénie, ou une non préservation des tissus sains. Ainsi, pour des raisons évidentes, il existe un besoin permanent d'identifier de nouveaux actifs, anticancéreux plus efficaces, qui agissent sélectivement sur les cellules cancéreuses à l'exclusion des cellules. saines, qui soient non toxiques, et qui entraînent moins, voire pas ou très peu d'effets secondaires.

La présente invention à pour objet de satisfaire à ces besoins. Selon un de ces premiers aspects, la présente invention concerne une séquence d'acides aminés isolé; consistant en SEQ ID NO: 1, un homologue présentant une homologie d'au moins 80% avec ladite séquence et une activité biologique similaire, ou un fragment actif consistant en 280 à 675 acides aminés contigus de ladite séquence ou dudit homologue, pour une utilisation comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer. De manière inattendue, les inventeurs ont observé qu'une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO: 1, en particulier la protéine S (S pour Seattle), et plus particulièrement la protéine S humaine, est dotée de propriétés antiprolifératives particulièrement efficaces à l'égard de cellules cancéreuses. Ainsi, la protéine S peut s'avérer être un actif thérapeutique particulièrement intéressant pour la prévention, la réduction ou le traitement du cancer. La protéine S est une protéine vitamine K-dépendante qui est connue pour son implication dans la coagulation du sang. La protéine S, et son homologue structural Gas6 (growth arrest-specific gene 6), avec lequel elle partage 44% d'homologie de séquence, sont des ligands des récepteurs à activité tyrosine kinase TAM dont les membres sont Axl (nommé également Ufo ou Ark), Tyro3 (nommé également Rse, Brt ou Sky), et Mer (nommé également c-Eyk) (Stitt et al., Cell, 1995, 80:661-670). La protéine S possède une activité de facteur de croissance pour les cellules des muscles lisses (Gasic et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992, 89:2317-20), et est impliquée dans la régulation de la phagocytose des cellules apoptotiques (Benzakour et aL, Med. Sci. (Paris), 2007, 23:826-833 ; kin et al., Cancer Res., 2010, 70:7570-7579). Il a été observé que la protéine S et le récepteur Tyro-3 sont exprimés conjointement dans les tissus du carcinome pulmonaire (Witnrnel et al., Cancer, 1999, 86:43-49). Plusieurs travaux ont montré l'existence d'une relation entre l'activation des récepteurs TAM et la progression tumorale et/ou cancéreuse (Linger et al., Adv. Cancer Res, 2008, 100:35-83 ; He et al., Mol. Carcinog., 2010, 49:882-891 ; Ye et al., Oncogene, 2010, 29:5254-5264).

KR20090090944 quant à lui propose la mise oeuvre d'activateurs du gène LIGHT (TNFSF14) choisis parmi des ligands du récepteur Axl pour sensibiliser les cellules tumorales aux cellules NK (Natural Killer). Enfin, US 6,593,291 fait état de l'aptitude de la protéine S à inhiber la prolifération des cellules HUVEC (Human Umbilical Vascular Endothelial Cell).

Cependant, jusqu'à présent il n'avait jamais été observé que la protéine S peut s'avérer être particulièrement efficace pour inhiber directement la prolifération de cellules cancéreuses, indépent ment de son effet anti-angiogénique. Au sens de l'invention, on entend par « agent antiprolifératif de cellules cancéreuses » un agent capable de réduire et/ou de bloquer la prolifération de cellules cancéreuses par action directe sur ces cellules, sans affecter la croissance ou la prolifération des cellules saines. Par « action directe », on entend une action sur un élément constitutif de la cellule cancéreuse ou un élément d'une de ses voies métaboliques. Un tel effet s'oppose à un effet obtenu par action sur l'environnement de la cellule, tel qu'un effet anti-angiogénique, qui est qualifiée d'action indirecte. L'effet thérapeutique obtenu par un actif de l'invention peut donc s'exercer indépendamment d'une possible action anti-angiogénique. Au sens de l'invention, on entend par « prévenir », le fait de réduire le risque de survenue ou de ralentir la survenue d'un phénomène donné, à savoir dans la présente invention, un cancer ou une métastase. Selon un autre aspect, la présente invention concerne une séquence d'acides nucléiques isolée codant pour une séquence d'acides aminés de l'invention, pour une utilisation comme agent thérapeutique antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.

Selon un autre aspect encore, la présente invention concerne un vecteur d'expression comprenant une séquence d'acides nucléiques de l'invention, pour une utilisation comme agent thérapeutique antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer. Selon un autre aspect encore, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant, dans un milieu pharmaceutiquement acceptable, au moins une séquence d'acides aminés ou au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou au moins un vecteur d'expression de l'invention comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer Selon un autre aspect encore, la présente invention concerne un produit de combinaison comprenant au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou au moins un vecteur d'expression de l'invention comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses, et au moins un agent de chimiothérapie ou au moins un agent d'immunothérapie, pour une utilisation simultanée, séparée ou séquentielle pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.

Il est également décrit un procédé de traitement thérapeutique comprenant l'administration d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou d'au moins un vecteur d'expression de l'invention, comme agent thérapeutique antiprolifératif de cellules cancéreuses, pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.

Les propriétés anticoagulantes de la protéine S ne se manifestent que sous l'action de la protéine C activée. Son administration à un individu en l'absence de processus de coagulation actif n'affecte donc pas l'équilibre hémostatique. Par ailleurs, comme le montrent les exemples illustrant l'invention, la mise en oeuvre de la protéine S à titre d'agent antiprolifératif de cellules cancéreuses se révèlent avantageusement dénuée de toxicité et d'effets secondaires. La protéine S humaine ne cause pas de dépressions médullaires, de symptômes gastro-intestinaux, de perte de cheveux, caractéristiques de chimiothérapie standard. Les propriétés antiprolifératives de la protéine S à l'égard de cellules cancéreuses s'exerçant indépen4. ment d'un effet anti-angiogénique, la présente invention permet de proposer un nouveau traitement à l'égard des tumeurs ou cancers insensibles ou ayant acquis une résistance aux agents anti-angiogéniques. Avantageusement, la présente invention permet de proposer un nouveau traitement anticancéreux présentant peu ou pas d'effets secondaires et une moindre toxicité au regard des traitements habituellement mis en oeuvre. Avantageusement, la présente invention peut se révéler particulièrement utile à l'égard de tumeurs ou cancers dont la croissance et/ou .1a dissémination n'implique(nt) pas d'angiogenèse. Avantageusement encore, la présente invention permet d'augmenter la survie de patients présentant une ou des métastases, et plus particulièrement une ou des métastases pulmonaires. Protéine S Une séquence d'acides aminés isolée convenant à l'invention peut être figurée par 25 la séquence SEQ ID NO: 1. Egalement, une séquence d'acides aminés isolée convenant à l'invention peut être un homologue de la séquence SEQ ID NO: 1 présentant une homologie d'au moins 80% avec cette séquence et une activité biologique similaire. Selon une autre variante de réalisation, une séquence d'acides aminés isolée 30 convenant à l'invention peut être un fragment actif consistant en 290 à 670, de préférence en 300 à 660 acides aminés, voire en 310 à 650 ou encore en 320 à 640, et de préférence en 330 à 630 acides aminés contigus de ladite séquence ou di°,l't homologue. Par « homologue » d'une séquence d'acides aminés de l'invention, on entend désigner toute séquence d'acides aminés ayant une identité de séquence d'au moins 80%, de préférence d'au moins 85%, voire d'au moins 87%, encore d'au moins 90%, encore d'au moins 93%, voire encore d'au moins 97%, et plus préférentiellement encore d'au moins 99%, et encore plus préférentiellement de 100% avec ladite séquence, et une activité biologique similaire ou de même nature.

Selon une variante de réalisation, une homologie de séquence peut être plus particulièrement déterminée au regard de la région incluant les acides aminés 299 à 666 de SEQ ID NO: 1. Cette région est présumée figurer le domaine par lequel la protéine S interagit avec et active les récepteurs TAM (Tyro-3, Axl, et Mer). Lorsque l'homologie de séquence est déterminée au regard de la région incluant 10 les acides aminés 299 à 666 de SEQ ID NO: 1, celle-ci peut être au moins de 87%, de préférence au moins de 90%, voire au moins de 93%, ou encore d'au moins 95%, ou encore d'au moins 97%, voire de 99%, et de préférence être de 100%. L'homologie de séquence peut être déterminée par toute méthode connue de l'homme du métier, telle que la comparaison visuelle, ou au moyen de tout outil informatique 15 généralement utilisé dans le domaine, tel que les programmes BLAST disponibles sur www.ncbi.nlm.nih.gov et utilisés avec les paramètres configurés par défaut. Un homologue convenant à l'invention peut être un homologue de la protéine S humaine. Un homologue d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut résulter de 20 modifications issues de mutation ou de variation dans une séquence d'acides aminées selon l'invention, provenant soit de la délétion ou de l'insertion d'un ou plusieurs acides aminés, soit de la substitution d'un ou plusieurs acides aminés, soit encore d'un épissage alternatif. Plusieurs de ces modifications peuvent être combinées. Avantageusement, un homologue d'une séquence d'acides aminés de l'invention 25 peut comprendre des substitutions conservatrices par rapport à cette séquence d'acides aminés. A titre d'exemple de mutations que l'on peut considérer dans la présente invention, il p être mentionné, de manière non exhaustive, le remplacement d'un ou plusieurs résidus d'acides aminés par des résidus d'acides aminés ayant un indice hydropathique similaire sans pour autant affecter de manière sensible les propriétés .30 biologiques du polypeptide. L'indice hydropathique est un indice attribué aux acides aminés en fonction de leur hydrophobicité et de leur charge (Kyte et al. (1982), J. Mol. Biol., 157 : 105). Parmi les homologues de la séquence SEQ ID NO: 1 convenant à l'invention, on peut citer le protéine S du macaque (Macaca mulatta, numéro d'accession NP 001038191.1), poisson-zèbre (Danio rerio, numéro d'accession NP 001070791.1), du xénope (Xenopus (Silurana) tropicalis, numéro d'accession NP 001119539.1), du rat (Rattus nôrvegicus, numéro d'accession NP 112348.2), de la souris (Mus .musculus, numéro d'accession NP 035303.1), du bovin (Bos taurus, numéro d'accession NP 776863.1, du chimpanzé (Pan troglodytes, numéro d'accession XP 003309948.1), de l'orang-outan (Pongo abelii, numéro d'accession XP 002813442.1), du dindon (Meleagris gallopavo, numéro d'accession XP 003202865.1), du chien (Canis lupus familiaris, numéro d'accession XP 535708.3), du diamant mandarin (Taeniopygia guttata, numéro d'accession XP 002190185.1), de l'éléphant de savane d'Afrique (Loxodonta africana, numéro d'accession XP 003410240.1), de l'opossum (Monodelphis domestica, numéro d'accession XP 001380313.2), de l'anole vert (Anolis carolinensis, numéro d'accession XP 003219160.1), du tilapia du Nil (Oreochromis niloticus, numéro d'accession XP 003445823.1), du ouistiti (Callithrix jacchus, numéro d'accession XP 002761331.1), de la poule (Gallus gallus, numéro d'accession XP 0416641.2), du cheval (Equus caballus, numéro d'accession XP 001503040.2), du gibbon (Nomascus leucogenys, numéro d'accession XP 003261735.1), du chimpanzé (Pan troglodytes, numéro d'accession XP 516603.3), du lapin de garenne (Oryctolagus cuniculus, numéro d'accession XP 002716802.1), du panda (Ailuropoda melanoleuca, numéro d'accession XP 002929359.1), et du cochon d'Inde (Gaula porcellus, numéro d'accession XP 003469383.1). Parmi les homologues de la séquence SEQ ID NO :1 convenant plus particulièrement à l'invention, on peut citer, la protéine S du macaque NP 001038191.1, 1 du poisson-zèbre NP 001070791.1, du xénope NP 001119539.1, du rat NP 112348.2, de la souris NP 035303.1 et du bovin NP 776863.1. Ces six homologues présentant une homologie de séquence avec SEQ ID NO: 1, respectivement, de 93%, 94%, 97%, 98%, 99% et 100% avec cette séquence.

Une séquence d'acides aminés, ou un homologue de celle-ci, visée par la présente invention peut être une séquence d'acides aminés ayant subi une ou plusieurs maturation(s) post-traductionnelle(s). Par « maturation(s) post-traductionnelle(s) », on entend englober l'ensemble des modifications qu'une séquence d'acides aminés est susceptible de subir à l'issue de sa synthèse dans une cellule, telle que par exemple une ou des phosphorylation(s), une ou des thiolation(s), une ou des acétylation(s), une ou des glycosylation(s), une ou des lipidation(s), telles qu'une farnésylation ou une palmitoylation. Par « activité biologique similaire ou de même nature » à l'égard d'une séquence d'acides aminés selon l'invention, on entend les propriétés antiprolifératives de la protéine S à l'égard des cellules cancéreuses. Ces propriétés peuvent notamment être évaluées aux moyens des protocoles expérimentaux décrits dans les exemples. En particulier, les propriétés antiprolifératives d'une séquence d'acides aminées de l'invention, ou d'un homologue, peuvent être déterminées sur des cellules tumorales cultivées dans des conditions appropriées in vitro. La détermination des conditions de culture in vitro adéquates pour des cellules cancéreuses relève des connaissances de l'homme du métier. Les cellules tumorales peuvent être issues de cultures primaires de tumeurs ou de lignées cellulaires. L'effet, résultant de la mise en contact d'une séquence d'acides aminées de l'invention avec des cellules tumorales, sur la prolifération de ces dernières peut être comparé à un effet obtenu en conditions contrôles négatives, dans lesquelles les cellules cancéreuses sont maintenues dans leur milieu de culture sans composé à tester ou en présence d'une séquence d'acides aminées ayant moins de 70% d'homologie avec SEQ ID NO: 1 et dénuée d'effet à l'égard de la prolifération des cellules tumorales, et, éventuellement à un effet obtenu en conditions contrôles positives, dans laquelle les cellules tumorales sont en mises en contact avec une séquence d'acides aminées SEQ ID NO: I . Au sens de l'invention, on entend par «fragment d'une séquence d'acides aminés» toute portion d'une séquence d'acides aminés conforme à l'invention consistant en 290 à 670, de préférence en 300 à 660 acides aminés, voire en 310 à 650 ou encore en 320 à 640, et de préférence en 330 à 630 acides aminés consécutifs de ladite séquence, et ayant une activité biologique de même nature. De préférence encore, un fragment convenant à l'invention peut être issu de la séquence SEQ ID NO: 1. Selon un mode de réalisation, un fragment de protéine S convenant plus particulièrement à l'invention peut être issu en tout ou partie de la région de la protéine de la S se fixant aux récepteurs TAM.

De préférence encore, un fragment convenant à l'invention peut être une séquence d'acides aminés issue d'une région définie par les acides aminées 250 à 675, de préférence 260 à 670, voire 270 à 665, ou encore 280 à 660, voire 290 à 650, voire 300 à 640, au regard de la numérotation de la séquence d'acides aminées SEQ ID NO: 1, ou issue de toute région équivalente issue d'un homologue de SEQ ID NO: 1.

L'activité biologique d'un fragment d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut être déterminée comme indiqué précédemment à l'égard d'une séquence d'acides aminés de l'invention ou d'un homologue de celle-ci. Selon un mode réalisation préféré, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut être une protéine S humaine. Cette protéine a été décrite par Lundwall et al. (Proc. Natl. Acad. Sci., 1986, 83:6716-6720). De préférence, une séquence d'acides aminée convenant à l'invention peut être figurée par la séquence SEQ ID NO: 1. Cette séquence a pour numéro d'accession NCBI NP_000304.2. La protéine S humaine est une glycoprotéine sécrétée, et présente une activité de facteur anticoagulant. Elle est naturellement présente dans le sang et agit comme cofacteur pour la protéine C activée (APC). Son activité anticoagulante étant dépens t de la protéine C activée (APC), son injection, même à de très fortes doses, ne conduit nullement à une inhibition de la coagulation sanguine. La protéine S humaine est naturellement exprimée par une grande variété de tissus et de types cellulaires tels que le foie, le cerveau, le coeur, les ovaires, le placenta, la rate, les reins, les cellules endothéliales, les mégacaryocytes, les ostéoblastes, les cellules du système nerveux, les cellules vasculaires lisses et les cellules de Leydig. La protéine S humaine possède une demi-vie dans le corps humain d'environ 48 heures, lui conférant avantageusement une meilleure biodisponibilité et une aptitude à exercer un effet à long terme, nécessaire à un traitement anticancéreux efficace. La protéine S est une protéine endogène et peut être facilement purifiée à partir du sang par des procédés de purification classiques basés sur des précipitations et de la chromatographie et dont la mise en oeuvre a été publiée (Dahlback, Biochem. J., 1983, 209:837-846).

La protéine S INw:iitx purifiée peut également être obtenue commercialement auprès de différentes sociétés telles que Merck, Calbiochem, Biogenic, Maria ou Haematologic Technologies. La séquence ADNc ainsi que la séquence d'acides aminés correspondante de la protéine S humaine sont connues par l'homme de l'art (Lundwall et al., Proc. Natl. Acad. Sci.

USA, 1986, 83:6716-6720). Ainsi, la protéine S humaine peut être obtenue en très grande quantité et avec un haut degré de pureté par transfection de son ADNc dans des cellules eucaryotes. Les techniques de transfection et d'expression de séquences d'acides nucléiques dans des cellules hôtes, ainsi que de purification des protéines obtenues sont connues de l'homme de l'art qui peut se référer par exemple au manuel « Molecular Cloning : A 30 Laboratory Manual » Sambrook et al., Ed. 2001, Cold Spring Harbor Laboratory, New York. Ainsi, selon un mode de réalisation, la présente invention concerne également une séquence d'acides nucléiques codant pour une séquence d'acides aminés de l'invention, un homologue ou un fragment de celle-ci, pour une utilisation comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.

Au sens de la présente invention, on entend par « fragment de séquence d'acides nucléiques », une séquence d'acides nucléiques consistant en 780 à 1980, voire en 900 à 1950, voire encore en 930 à 1920, voire en 960 à 1890, et plus préférentiellement en 990 à 1860 paires de bases consécutives de ladite séquence, et codant pour une séquence d'acides aminés ayant une activité biologique de même nature que la séquence d'acides aminés codée par ladite séquence. Au sens de la présente invention, on entend par « analogue d'une séquence d'acides nucléiques » une séquence d'acides nucléiques ayant une identité de séquence d'au moins 65 %, de préférence d'au moins 80 %, et plus préférentiellement de 100 % avec ladite séquence, et codant pour une séquence d'acides aminés ayant une activité biologique de même nature que la séquence d'acides aminés codée par ladite séquence. Par « analogue d'une séquence d'acides nucléiques », on entend désigner une séquence d'acides nucléiques, éventuellement résultant de la dégénérescence du code des acides nucléiques, et codant pour une séquence d'acides aminés conforme à l'invention, 15 notamment tel que défini précédemment. Une séquence d'acides nucléiques convenant à l'invention peut en particulier être une séquence consistant en SEQ ID NO: 2, un homologue ou un fragment de celle-ci. Plus préférentiellement encore, une séquence d'acides nucléiques convenant à l'invention peut être la séquence SEQ ID NO: 2 codant pour la protéine S humaine. Cette séquence a pour numéro 20 d'accession NCBI NM 000313.3. Selon encore un autre mode de réalisation, un vecteur d'expression peut être mis en oeuvre pour introduire une séquence d'acides nucléiques de l'invention dans une cellule hôte pour produire in vitro une protéine S recombinante, comme indiqué précédemment, ou dans une cellule cancéreuse ou dans une cellule saine de l'environnement d'une cellule 25 cancéreuse d'un individu souffrant d'un cancer ou de métastases. Cette dernière mise en oeuvre permet avantageusement la production in situ de l'actif anticancéreux, et une amélioration de sa biodisponibilité. Un vecteur d'expression convenant à l'invention peut comprendre une cassette de transcription comprenant un agent d'initiation de la transcription, une séquence d'acides 30 nucléiques de l'invention et un agent de terminaison de la transcription, l'ensemble étant de lié de manière opérationnelle. La cassette de transcription peut être introduite dans une variété de vecteurs d'expression, tells qu'un plasmide, un rétrovirus, e.g. un lentivirus ou un adénovirus. Un vecteur d'expression peut permettre l'expression stable ou transitoire de la séquence d'acides aminés d'intérêt, habituellement pendant une période d'au moins ..... jour, plus généralement pendant plusieurs jours, voire plusieurs semaines. L'administration et le ciblage d'un vecteur d'expression de l'invention vers des cellules spécifiques d'un individu souffrant de cancer relèvent des connaissances de l'homme de l'art. Le ciblage d'un vecteur d'expression de l'invention vers des cellules cancéreuses à traiter peut être effectué par exemple au moyen d'un anticorps dirigé spécifiquement vers un antigène spécifique de ou surexprimé par des cellules cancéreuses, tel que Mage, Bage ou Her2-neu, ou au moyen d'un ligand d'un récepteur spécifique de ou surexprimé par des cellules cancéreuses, tel que le récepteur à l'acide folique.

Composition pharmaceutique Selon un autre de ses aspects, l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant, dans un milieu pharmaceutiquement acceptable, au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou au moins un vecteur d'expression de l'invention, comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer. Egalement, l'invention concerne l'utilisation d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou au moins un vecteur d'expression de l'invention commé agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour préparer une composition pharmaceutique pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer. Ainsi, est également considérée par l'invention, une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques, ou un vecteur d'expression conformes à l'invention comme médicament pour prévenir ou inhiber la prolifération de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer. Une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques, ou un vecteur d'expression conformes à l'invention, ou un médicament ou une composition pharmaceutique de l'invention peuvent être formulé(e)s avec tout milieu ou véhicule pharmaceutiquement acceptable, et peuvent être formulé(e)s sous toute forme solide, semi-solide, liquide ou gazeuse, telle qu'un comprimé, une capsule, une gélule, une poudre, un granule, une émulsion, une suspension, un gel, une microsphère, ou une forme inhalée. Selon un mode de réalisation, une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques, ou un vecteur d'expression conformes à l'invention, ou une composition pharmaceutique de l'invention peuvent être formulé(e)s pour !a voie orale, sous forme d'un comprimé, d'une capsule ou d'une gélule, à libération prolongé(e) ou contrôlé(e), d'une pilule, d'une poudre, d'une solution, d'une suspension, d'un sirop ou d'une émulsion. Selon un autre mode de réalisation, une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques, ou un vecteur d'expression conformes à l'invention, ou une composition pharmaceutique de l'invention peuvent être préparé(e)s en forme injectable. Une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention peut être formulée avec différents véhicules, tels qu'un liposome ou un polymère de transfection. Une composition p aceutique de l'invention peut de préférence comprendre -10 une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques en suspension dans un véhicule pharmaceutiquement acceptable, par exemple un véhicule aqueux. Différents véhicules aqueux peuvent être utilises, par exemple de l'eau, une solution tampon saline, une solution de glycine à 0,4% ou 0,3%, ou une solution d'acide hyaluronique. Une composition pharmaceutique peut être stérilisée par toute méthode 15 conventionnelle connue, telle que la filtration. La solution aqueuse résultante peut être conditionnée pour être utilisée en l'état, ou être lyophilisée. Une préparation lyophilisée peut être combinée avec une solution stérile avant utilisation. Une composition pharmaceutique de l'invention peut comprendre toute excipient pharmaceutiquement acceptable requis pour s'approcher des conditions physiologiques, tels 20 que des agents tampons ou des agents pour ajuster le pH ou l'isotonicité, des agents mouillants. De telles préparations peuvent également comprendre des agents anti-oxydants, des agents conservateurs, des adjuvants, et éventuellement d'autres agents thérapeutiques. Une composition pharmaceutique de l'invention comprend naturellement une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention en quantité efficace. 25 Une quantité efficace d'une séquence d'acides amines ou d'acides nucléiques de l'invention est une quantité qui, seule ou en combinaison avec des doses ultérieures, induit la réponse désirée, à savoir un effet antiprolifératif à l'égard des cellules cancéreuse. Une quantité efficace peut dépendre d'un ensemble varié de paramètres, tel que la voie d'administration, l'administration en dose unique ou multiple, les paramètres liés au patient 30 incluant l'âge, la condition physique, la taille, le poids et la condition pathologique. Ces paramètres et leur influence sont bien connus de l'homme de l'art et peuvent être déterminés par toute méthode connue.

Une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention peut être administrée en une quantité allant de 0,1 mg/kg à 15 mg/kg, de préférence allant de 1 mg/kg à 5 mg/kg, et encore plus préférentiellement allant de 2 mg/kg à 3 mg/kg de poids cotporel. Une composition pharmaceutique convenant à l'invention peut comprendre au moins une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention, ou au moins un vecteur d'expression conforme à l'invention en une quantité allant de 0,1 mg/kg à 15 mg/kg, de préférence allant de 1 mg/kg à 5 mg/kg, et encore plus préférentiellement allant de 2 mg/kg à 3 mg/kg de poids corporel. Une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques, ou un vecteur d'expression 10 conformes à l'invention, ou une composition pharmaceutique peuvent être administré(e)s par toute voie convenable, telle que la voie orale, buccale, sub-linguale, rectale, parentérale, intrapéritonéale, intradermale, transdermale, infra-trachéale, topique, ou ophtalmique. Une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques ou un vecteur d'expression conformes à l'invention, ou une composition pharmaceutique de l'invention peuvent être, de 15 préférence, administré(e)s par injection, telle qu'une voie infra-veineuse, ou par une voie muqueuse, ou une combinaison de ces voies. Une administration par injection peut être effectuée, par exemple, par voie intrapéritonéale, intradermique, sous-cutanée, intraveineuse ou intramusculaire. Toute voie muqueuse peut également être mise en oeuvre, telle que la voie génito- 20 urinaire, ano-rectale, respiratoire, bucco-nasale, sublinguale, ou une combinaison de celles-ci. Egalement, est décrit un procédé de traitement thérapeutique comprenant l'administration d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou d'au moins un vecteur d'expression de l'invention, comme agent thérapeutique antiprolifératif de cellules cancéreuses, pour prévenir 25 et/ou réduire et/ou traiter un cancer. La mise en oeuvre d'un procédé de traitement thérapeutique de l'invention permet d'observer une réduction, voire une disparation, de la ou des tumeur(s) et/ou de la ou des métastase(s). 30 Combinaison avec d'autres thérapies Selon un autre aspect de l'invention, une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention peut être utilisée seule ou en combinaison avec d'autres traitements tels que la chirurgie, la radiothérapie, la chimiothérapie, lmunothérapie.

Ainsi la présente invention concerne également un - ,:un de combinaison comprenant au moins une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention ou au moins un vecteur d'expression de l'invention, comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses, et au moins un agent de chimiothérapie ou au moins un agent d'immunothérapie, pour une utilisation simultanée, séparée ou séquentielle pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer. Un agent de chimiothérapie convenant à l'invention peut être choisi parmi des cytostatiques, des antimétabolites, des substances intercalantes de l'ADN, des composés inhibiteurs des topoisomérases I and, II, des inhibiteurs de tubuline, des agents alkylants, la néocarcinostatine, la calichéamicine, la dynémicine or l'espéramicine A, des composés inLibjrs des ribosomes, des inhibiteurs des tyrosine phosphokinases, des composés induisant la différentiation cellulaire, ou des inhibiteurs de l'histone déacétylase. Encore plus particulièrement, un agent de chimiothérapie convenant à l'invention peut être choisi parmi des cytostatiques et des antimétabolites, telle que la 5-fluorouracile, la 5-fluoro-cytidine, la 5-fluoro-uridine, la cytosine arabinoside ou le méthotrexate, parmi des substances intercalantes de l'ADN, telle que la doxorubicine, la daunomycin, l'idarubicin, l'épirubicin ou le mitoxantrone, parmi des composes inhibiteurs des topoisomérases I and II, telles que la camptothécine, l'étoposide ou le m-AMSA, parmi des inhibiteurs de tubuline, telle que la vincristine, la vinblastine, la vindésine, le taxol, le nocodazole ou la colchicine, parmi des agents alkylants, telle que la cyclophosphamide, la mitomycin C, la rachelmycine, le cisplatine, le gaz moutarde phosphoramide, le melphalan, la bléomycine, la N-bis(2- chloroethyl)-4-hydroxyaniline, ou parmi la néocarcinostatine, la calichéamicine, la dynémicine or l'espéramicine A, ou parmi des composés inhibiteurs des ribosomes, telle que la verrucarine A, parmi des inhibiteurs des tyrosine phosphokinases, telle que la quercétine, la génistéine, l'erbstatine, la tyrphostine ou la rohitukin et ses dérivés, parmi des composés induisant la différentiation cellulaire, tel que l'acide rétinoïque, l'aide butyrique, les esters de phorbol ou l'aclacinomycine, parmi des inhibiteurs de l'histone déacétylase, tel que CI-994 ou MS275. Une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention, ou un vecteur d'expression de l'invention peuvent également être mise en oeuvre en association avec un traitement de radiothérapie. Un traitement de radiothérapie susceptible de convenir à l'invention peut être une radiothérapie externe utilisant une source externe de rayons X, une curiethérapie consistant à mettre en contact la source radioactive avec la tumeur, ou une radiothérapie métabolique vectorielle. Ces méthodes sont connues de l'homme de l'art. Un traitement immunothérapeutique convenant à l'invention peut comprendre l'administration d'au moins un agent d'immunothérapie choisie parmi des cytokines, telle que 1' interleukine-2, des cellules du système immunitaire, notamment des cellules immunitaires du patient prélevées, activées et réinjectées à ce dernier, ou des anticorps dirigés contre les cellules cancéreuses, tels que des anticorps anti-Her2-neu ou anti-CD20. Cancer Une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention, ou un vecteur d'expression de l'invention, ou une composition pharmaceutique de l'invention s'avèrent être particulièrement avantageux pour réduire ou inhiber la prolifération de cellules cancéreuses. Comme le montrent les exemples, une séquence d'acides aminés de l'invention inhibe ou réduit significativement la prolifération des cellules cancéreuses, la croissance des tumeurs et le développement des métastases. Une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention, ou un vecteur d'expression de l'invention, sont avantageusement mis en oeuvre à titre d'agent antiprolifératif de cellules cancéreuses exprimant au moins un récepteur de la famille TAM 20 (Tyro-3, Axl ou Mer). Selon un autre mode de réalisation, une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention, ou un vecteur d'expression de l'invention, peuvent être mis en oeuvre à titre d'agent antiprolifératif de cellules cancéreuses surexprimant au moins un récepteur de la famille TAM. 25 Par « surexpression » d'un récepteur, on entend, au sens de l'invention, désigner un taux d'expression de ce récepteur supérieur à celui observé en moyenne chez des cellules non cancéreuses. Le taux d'expression du récepteur peut être augmenté d'environ plus de 10 fois, de préférence d'environ plus de 100 fois, et de préférence encore d'environ plus de 1000 fois par rapport au taux moyen d'expression chez une cellule non cancéreuse. Une cellule non 30 cancéreuse susceptible d'être utilisée à titre de référence pour déterminer un taux moyen d'expression peut être une cellule non cancéreuse issue du même type de tissu ou d'organe dont est issue la cellule cancéreuse. Les tissu ou organe de référence peuvent être issus du même individu que celui ayant un cancer ou des métastases, ou d'un individu distinct présumé ne pas avoir de cancer ou de métastases.

Il est possible de déterminer l'expres.sion d'au moins un récepteur de la famille des récepteurs TAM au niveau de cellules cancéreuses par des tests classiques de biologie moléculaire tels que l'immunohistochimie, l'hybridation in situ et la Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction quantitative (RT-qPCR).

Selon un autre mode de réalisation, une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention, ou un vecteur d'expression de l'invention, peuvent être mis en oeuvre à titre à titre d'agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir, réduire ou traiter un cancer présentant une résistance naturelle ou acquise à un traitement chimiothérapeutique ou immunothérapeutique, tels que ceux habituellement mis en oeuvre.

Selon un autre mode de réalisation, une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention, ou un vecteur d'expression de l'invention peuvent être mis en oeuvre à titre d'agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir, réduire ou traiter une métastase, et en particulier une métastase dont les cellules expriment ou surexpriment au moins un récepteur de la famille des récepteurs TAM.

Selon un autre mode de réalisation, une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention, ou un vecteur d'expression de l'invention peuvent être mis en oeuvre à titre d'agent antiprolifératif de cellules cancéreuses choisies parmi des cellules cancéreuses pour lesquelles une expression ou une surexpression des récepteurs TAM a été observée, et en particulier de cellules cancéreuses du cancer du sein, du cancer colorectal, du cancer de l'oesophage, du cancer de l'estomac, de tumeurs stromales digestives (GIST), de tumeurs cérébrales (astrocytome), du cancer du foie, du cancer des poumons, du cancer de la peau, du cancer ovarien, de l'ostéosarcome, du cancer du pancréas, du cancer du rein, du cancer de la prostate, du cancer de la thyroïde, du cancer de l'endomètre, du sarcome de Kaposi, d'un gliome ou d'une leucémie (Verma et al., Mol. Cancer Ther., 2011, Sep 20).

Selon un autre mode de réalisation, l'invention peut convenir plus particulièrement pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un mélanome, ou des métastases associées à un mélanome ou à d'autres cancers métastasant t. s les poumons comme des cancers du sein, du côlon, de la prostate, du pancréas, du rein, de la thyroïde, de l'estomac, et de l'ovaire, des mélanomes, des sarcomes, des gliomes ou des leucémies. Au sens de la présente invention, « un » doit se comprendre, sauf indication contraire, au sens de « au moins un ». Egalement, au sens de l'invention, les valeurs des bornes d'un intervalle défini par l'expression « entre ... et ... » sont incluses dans l'intervalle.

Les exemples et figures ci-après sont présentés uniquement à titre d'illustration de l'invention. Légendes des figures Figure 1 : illustre l'inhibition de la croissance tumorale in vitro induite par la protéine S humaine à 0 (contrôle), 1 ou 10 gent, appliquée sur des cellules tumorales de peau en culture pendant 24 heures (cellules. B16F10). La prolifération des cellules est évaluée par la méthode d'incorporation du BrdU. Figure 2 : illustre l'inhibition de la croissance tumorale in vivo par la protéine S humaine, administrée par voie intrapéritonéale, à 0 (placebo, n= 6) ou 2,5 mg/kg (protéine S, n= 6), déterminée sur des souris C57/BL/6 mâles de 9-10 semaines ayant reçu en sous-cutanée 1x106 de cellules cancéreuses de la peau (mélanome) dénommées B16/F10 et isolées à partir d'un mélanome spontané de souris (source commerciale American Type Culture Collection/ATCC référence : CRL-6475). Les souris ont été traitées pendant 13 jours consécutifs, puis sacrifiées et les tumeurs ont été prélevées et pesées. Figure 3: montre l'inhibition in vivo de la croissance de métastases par la protéine S humaine, administrée par voie intrapéritonéale, à 0 (placebo, n-10) ou 2,5 mg/kg (protéine S, n=6), déterminée sur des souris C57/BL/6 mâles de 9-10 semaines ayant reçu par voie intraveineuse 2x105 cellules cancéreuses pulmonaires dénommées LLC (Lewis Lung Carcinoma) isolées initialement à partir de souris (Bertram et Janik, Cancer Lett., 1980, 11:63- 73). Les souris ont été traitées pendant 14 jours consécutifs, puis sacrifiées, et les poumons ont été prélevés et pesés, et le nombre total de nodules métastatiques a été dénombré. Figure 4: montre le taux de survie de souris C57/BL/6 mâles de 9-10 semaines porteuses de métastases pulmonaires formées par l'injection de 2x105 de cellules cancéreuses pulmonaires dénommées LLC isolées à partir de souris (Bertram et Janik, Cancer lett., 1980, 11:63-73) induite par la protéine S humaine, administrée par voie intrapéritonéale, à 0 (placebo, n=5) ou 2,5 mg/kg (protéine S, n=5). Le diagramme indique le pourcentage de souris vivantes pendant une période de 35 jours. Figure 5: illustre l'innocuité de la protéine S humaine administrée par voie intrapéritonéale, à 0 (placebo, n=5) ou 2,5 mg/kg (protéine S, n=5), â des souris C57/BL/6 mâles de 9-10 semaines. Le diagramme montre la variation du poids des souris (en g) traitées pendant 14 jours consécutifs.

EXEMPLES Exemple I. Inhibition in vitro de la croissance tumorale par la protéine S humaine Des cellules cancéreuses cutanées B16/F10 (source commerciale : American Type Culture Collection/ATCC référence : CRL-6475) ont été ensemencées dans des plaques 96 puits à 3x103 cellules/puits/ 100 pl de milieu basal RPMI complémenté avec du sérum de veau foetal à une concentration finale de 10%. Les cellules sont cultivées dans un incubateur à CO2 (5% final) à 37°C. 24 heures plus tard, le milieu est retiré et remplacé par du RPMI sans sérum contenant de la bromodéoxyuridine (BrdU) à une concentration finale de 0,1 mg/ml et deux concentrations de protéine S humaine (Enzyme Research Laboratories ; Royaume-Uni), à savoir 1 pg/m1 et 10 ;lent. Les cellules ont été mises à incuber pendant 24 heures, puis le pourcentage de BrdU incorporé dans les cellules cancéreuses est déterminé selon le protocole fourni par le revendeur (Roche Diagnostics France, France, référence catalogue : 11669915001). Comme représenté sur la Figure 1, les taux de BrdU incorporés par les cellules cancéreuses traitées avec 1 pg/nal ou 10 pg/m1 ont été réduits, respectivement, à environ 70% et 60% de la valeur contrôle. Ces résultats montrent que le traitement des cellules cancéreuses avec la protéine S a inhibé leur prolifération et ce, d'autant plus efficacement que la concentration en protéine S est élevée. En outre, l'observation de cet effet sur des cellules en culture démontre qu'il est obtenu indépendamment d'une éventuelle action inhibitrice de l'angiogenèse. Exemple 2 Inhibition in vivo de la croissance tumorale par la protéine S humaine Des tumeurs sous-cutanées ont été induites chez douze souris C57/BL/6 mâles de 9-10 semaines randomisées en deux groupes de 6 animaux (Griswold, Cancer Chemother Rep, 1972, 3, 315-324). Ces groupes ont été traités par injection intrapéritonéale quotidienne de protéine S humaine à 2,5 mg/kg (protéine S), ou d'une solution saline (contrôle), pendant treize jours consécutifs. A l'issu du traitement, les souris ont été euthanasiées par exsanguination après que les animaux aient été rendus inconscients par l'injection d'un anesthésique par voie intrapéritonéale (hydrate de chloral; 400 mg/kg) selon la réglementation européenne (European communities council directive of 24 November 1986 - 86/609/EEC), et les tumeurs ont été prélevées et pesées. Comme illustré par la Figure 2, le poids des eurs pour le groupe « placebo » est compris entre environ 1400 mg et 2300 mg tandis que le poids des tumeurs pour le groupe « Protéine S » est compris entre environ 700 mg et 1500 mg. Ainsi, le traitement des souris avec la protéine S a conduit à une diminution significative du poids des tumeurs de près de 40%. Exemple 3 Inhibition in vivo de la croissance des métastases pulmonaires par la protéine S humaine 2x105 de cellules cancéreuses pulmonaires dénommées LLC isolées initialement à partir de souris (Bertram et Janik) s 100 pi de tampon phosphate salin (PBS, Phosphate- buffered Salin) ont été injectées par voie intraveineuse chez seize souris C57/BL/6 mâles de 9- 10 semaines, randomisées en deux groupes. Ces groupes ont été traités par injection intrapéritonéale quotidienne de protéine S à 2,5 mg/kg (protéine S, n=6), ou d'une solution saline (contrôle, n=10) pendant quatorze jours consécutifs. A l'issu du traitement, les souris ont été euthanasiées par exsanguination après que les animaux aient été rendus inconscients par l'injection d'un anesthésique par voie intrapéritonéale (hydrate de chloral; 400 mg/kg) selon la réglementation européenne (European communities council directive of 24 November 1986 - 86/609/BEC), et les poumons ont été prélevés et pesés. Le nombre total de nodules métastatiques est dénombré par comptage manuel à l'aide d'un microscope binoculaire.

Comme indiqué Figure 3, le nombre de nodules pour le groupe « placebo » est compris entre environ 60 et 220 alors que le nombre de nodules pour le groupe « protéine S» est compris entre environ 40 et 110. Ces résultats indiquent que le nombre de métastases pulmonaires a été significativement réduit par le traitement avec la protéine S.

Exemple 4 Taux de survie de souris porteuses de métastases pulmonaires par la protéine S humaine 2x105 de cellules cancéreuses pulmonaires dénommées LLC isolées initialement à partir de souris (Bertram et Janik, Cancer lett., 1980, 11:63-73) dans "j'' de tampon phoshate salin (PBS, Phosphate-buffered Salin) ont été injectées par voie intraveineuse chez dix souris C57/BL/6 mâles de 9-10 semaines, randomisées en deux groupes, constitué chacun de cinq souris. Un groupe a été traité par injection intrapéritonéale d'une solution saline (« placebo ») et l'autre par une solution de protéine S humaine à 2,5 mg/kg (« protéine S) ». Le traitement est administré tous les deux jours jusqu'à la mort des souris. La Figure 4 montre qu'après une période de 25 jours, aucune des souris du groupe « placebo » n'a survécu, alors qu'après cette même période, 40 % des souris ayant reçu la protéine S humaine sont demeurées vivantes. Et du 26e" au 32e" jour, 20 % des souris ont encore survécu. Le traitement des souris porteuses de métastases pulmonaires avec la protéine S humaine a permis d'accroître sensiblement leur survie à l'égard du groupe « placebo ». Exemple 5 Innocuité de la protéine S humaine Six souris C57/BL/6 mâles de 9-10 semaines, randomisées en deux groupes, constitué chacun de trois souris, ont été traitées par administration intrapéritonéale quotidienne, d'une solution saline (placebo) ou de 2,5 mg/kg de protéine S humaine (protéine S), pendant quatorze jours consécutifs. Pendant cette période le poids des souris a été mesuré tous les deux jours à l'aide d'une balance.

La Figure 5 indique que le poids des souris varie sensiblement de la même manière entre le groupe « protéine S » et le groupe « placebo ». Aucun signe d'affaiblissement de l'organisme, c'est-à-dire de cachexie n'a été observé. A riss' , traitement, les souris ont été euthanasiées par exsanguination après que les animaux aient été rendus inconscients par l'injection d'un anesthésique par voie intrapéritonéale (hydrate de chloral; 400 mg/kg) selon la réglementation européenne (European communities council directive of 24 November 1986 - 86/609/EEC), et un examen visuel de la cavité abdominale a été effectué pour rechercher la présence de liquide dans l'abdomen. L'absence d'observation de réaction inflammatoire ou d'ascite au niveau de la cavité abdominale indique une bonne tolérance de la protéine S pendant le traitement.

Les différents résultats obtenus ci-dessus démontrent que la protéine S inhibe fortement et de façon reproductible la prolifération et la croissance tumorale, indépendamment d'un éventuel effet anti-angiogéniquê. Par ailleurs, la protéine S se révèle particulièrement dénuée de toxicité ou d'effet secondaire sur les cellules ou organisme sain.

Ainsi, l'ensemble de ces données fait de la protéine S un actif thérapeutique particulièrement intéressant pour le traitement, la prévention ou la réduction de pathologies impliquant la prolifération de cellules cancéreuses, telle que le cancer du poumon, les mélanomes, les gliomes, ou les leucémies, ainsi que les métastases. 2 982 490 21 BIBLIOGRAPHIE Wimmel A, Rohner I, Ramaswamy A, Heidtmann HH, Seitz R, Kraus M, Schuermann M. (1999). Synthesis and secretion of the anticoagulant prote in S and 5 coexpression of the Tyro3 receptor in human lung carcinoma cells. Cancer, 86:43-49. Benzakour O, Gely A, Lara R, Coronas V. (2007), [Gas-6 and protein S: vitamin K-dependent factors and ligands for the TAM tyrosine kinase receptors family]. Med Sci (Paris), 23:826-833. Linger RM, Keating AK, Earp HS, Graham DK. (2008). TAM receptor tyrosine kinases: biologie functions, signaling, and potential therapeutic targeting in human cancer. Adv Cancer Res, 100:35-83. Ou WB, Corson JM, Flynn DL, Lu WP, Wise SC, Bueno R. Sugarbaker DJ, Fletcher JA. (2011). AXL regulates mesothelioma proliferation and invasiveness. Oncogene, 30:1643-1652.

Vuoriluoto K, Haugen H. Kiviluoto S. Mpindi W, Nevo J. Gjerdrum C, Tiron C. Lorens JB, Ivaska J. (2010). Vimentin regulates EMT induction by Slug and oncogenic H-Ras and migration by governing Axl expression in breast cancer. Oncogene, 30:1436-1448. Song X. Wang H., Logsdon CD, Rashid A., Fleming JB, Abbruzzese JL, Gomez HF, Evans DB, Wang H. (2011). Overexpression of receptor tyrosine kinase Axl promotes 20 tumor cell invasion and survival in pancreatic ductal adenocarcinoma. Cancer, 117:734-743. Rankin EB, Fub KC, Taylor TE, Krieg A.T. Musser M. Yuan J. Wei K, Kuo CJ, Longacre TA, Giacca AJ. (2010). AXL is an essential factor and therapeutic target for metastatic ovarian cancer. Cancer Res, 70:7570-7579. Linger RM, Keating AK, Earp HS, Graham DK. (2010). Taking aim at Mer and 25 Axl receptor tyrosine kinases as navel therapeutic targets in solid tumors. Expert Opin Ther Targets, 14:1073-1090. HE I, Zhang J, Jiang L, Jin C, Zhao Y, Yang G, Jia I. (2010). Différentiai expression of Axl in hepatocellular carcinoma and correlation with tumor lymphatic metastasis. Mol Carcinog, 49:880-891. 30 Ye X, Li Y, Stawicki S, Couto S, Eastham-Anderson J. Kallop D, Weimer R. Wu Y, Pei I. (2010). An anti-Axl monoclonal antibody attenuates xenograft tumor growth and enhances the effect of multiple anticancer therapies. Oncogene, 29:5254-5264. Keating AK, Kim GK, Jones AE, Donson AM, Ware K, Mulcahy JM, Salzberg DB, Foreman NK, Liang X, Thorburn A, Graham DK. (2010). Inhibition of Mer and Axl receptor tyrosine kinases in astrocytoma cells leads to increased apoptosis and improved chemosensitivity. Mol Cancer Ther, 9:1298-1307. Shiozawa Y, Pedersen EA. Patel L.R. Ziegler AM, Havens AM, Jung Y, Wang J, Zalucha S. Loberg RD. Pienta KJ, Taichman RS. (2010). GAS6/AXI axis regulates prostate cancer invasion, proliferation, and survival in the bone marrow niche. Neoplasia, 12:116-126. Bertram JS, Janik P. (1980). Establishment of a cloned line of Lewis Lung Carcinoma cells adapted to cell culture. Cancer Lett, 11:63-73. Dahlbâck B. (1983). Purification of human vitamin K-dependent protein S and its limited proteolysis by thrombin. Biochem J, 209:837-846.

Verma A, Warner SL, Vankayalapati 1-1, Bearss DJ, Shama S. (2011). Targeting Axl and Mer kinases in cancer. Mol Cancer Ther (Epub ahead of print). Griswold DP. (1972). Consideration of the subcutaneously implanted B16 melanoma as a screening model for potential anticancer agents. Cancer Chemother Rep, 3:315-324.15

Claims (11)

1. REVENDICATIONS1. Séquence d'acides aminés isolée, consistant en SEQ ID NO: 1, un homologue de celle-ci présentant une homologie d'au moins 80% avec ladite séquence et une activité biologique similaire, ou un fragment actif consistant en 280 à 675 acides aminés contigus de ladite séquence ou dudit homologue, pour une utilisation comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir etiou réduire et/ou traiter un cancer.
2. 2. Séquence selon la revendication 1, ladite séquence étant la séquence d'acides aminés de la protéine S humaine.
3. 3. Séquence selon la revendication 1 ou 2, comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses exprimant au moins un récepteur de la famille TAM.
4. 4. Séquence selon l'une quelconque des revendications précédentes prévenir, réduire ou traiter un cancer présentant une résistance naturelle ou acquise à un traitement chimiothérapeutique ou immunothérapeutique.
5. 5. Séquence selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter une métastase.
6. 6. Séquence selon l'une quelconque des revendications précédentes, comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses choisies parmi des cellules cancéreuses du cancer du sein, du cancer colorectal, du cancer de l'oesophage, du cancer de l'estomac, de tumeurs stromales digestives, de tumeurs cérébrales, du cancer du foie, du cancer des poumons, du cancer de la peau, du cancer ovarien, de l'ostéosarcome, du cancer du pancréas, du cancer du rein, du cancer de la prostate, du cancer de la thyroïde, du cancer de l'endomètre, et du sarcome de Kaposi.
7. 7. Séquence selon l'une quelconque des revendications précédentes, ladite séquence étant administrée en une quantité allant de 0,1 mg/kg à 15 mg/kg, de préférence allant de 1 mg/kg à 5 mg/kg, et encore plus préférentiellement allant de 2 mg/kg à 3 mg/kg de poids corporel.
8. 8. Séquence d'acides nucléiques isolée codant pour une séquence d'acides aminés telle que définie selon la revendication 1 ou 2, pour une utilisation comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.
9. 9. Vecteur d'expression comprenant une séquence d'acides nucléiques telle que définie en revendication 8, pour uneutilisation comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.
10. 10. Composition pharmaceutique comprenant, dans un milieu pharmaceutiquement acceptable, au moins une séquence d'acides aminés telle que définie selon la revendication 1 ou 2, ou au moins une séquence d'acides nucléiques telle que définie en revendication 8, ou au moins un vecteur d'expression tel que défini en revendication 9 comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour ;1 évenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.
11. 11. Produit de combinaison comprenant au moins une séquence d'acides aminés telle que définie selon la revendication 1 ou 2, ou au moins une séquence d'acides nucléiques telle que définie en revendication 8, ou au moins un vecteur d'expression tel que défini en revendication 9, comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses, et au moins un agent de chimiothérapie ou au moins un agent d'immunothérapie, pour une utilisation simultanée, séparée ou séquentielle pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.