EP2780028A1 - Utilisation de la protéine s pour traiter le cancer - Google Patents

Utilisation de la protéine s pour traiter le cancer

Info

Publication number
EP2780028A1
EP2780028A1 EP12813101.8A EP12813101A EP2780028A1 EP 2780028 A1 EP2780028 A1 EP 2780028A1 EP 12813101 A EP12813101 A EP 12813101A EP 2780028 A1 EP2780028 A1 EP 2780028A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
cancer
acid sequence
sequence
amino acid
cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP12813101.8A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Omar BENZAKOUR
Arnaud MONVOISIN
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Universite de Poitiers
Original Assignee
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Universite de Poitiers
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Centre National de la Recherche Scientifique CNRS, Universite de Poitiers filed Critical Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Publication of EP2780028A1 publication Critical patent/EP2780028A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the present invention relates to the pharmaceutical field, and more particularly to the field of oncology.
  • Cancer is a human and animal disease that is mostly fatal, and results in uncontrolled growth of endogenous cells.
  • the term "cancer” is used to refer to the formation of malignant tumors and neoplasms (tumors or carcinomas) or malignant degeneration and disordered maturation of white blood cells (leukemia or blood cancer).
  • cancer growth involves two stages, namely local tumor growth and cancerous spread.
  • Local tumor growth consists of the appearance of a tumor clone, from a "transformed" cell, under the action of carcinogenic initiators and promoters. Cell proliferation results in the constitution of the tumor.
  • the cancerous spread from the initial tumor can be achieved either by regional spread or by development of secondary tumors called metastases. This spread is the gravity of cancer, because it is better to treat the primary tumor than metastases.
  • the object of the present invention is to satisfy these needs.
  • the present invention relates to an isolated amino acid sequence, consisting of SEQ ID NO: 1, a homolog having a homology of at least 80% with said sequence and a similar biological activity, or a fragment active consisting of 280 to 675 contiguous amino acids of said sequence or homologue, for use as an antiproliferative agent of cancer cells to prevent and / or reduce and / or treat cancer.
  • an amino acid sequence consisting of SEQ ID NO: 1, in particular the S protein (S for Seattle), and more particularly the human protein S, has particularly effective antiproliferative properties.
  • the protein S may prove to be a therapeutic asset of particular interest for the prevention, reduction or treatment of cancer.
  • Protein S is a vitamin K-dependent protein that is known to be involved in blood clotting.
  • TAM tyrosine kinase receptor ligands whose members are Axl (also called Ufo or Ark), Tyro3 (also named Rse, Brt or Sky), and Mer (also named c-Eyk) (Stitt et al., Cell, 1995, 80: 661-670).
  • Protein S has growth factor activity for smooth muscle cells (Gasic et al., Proc Natl Acad Sci USA, 1992, 89: 2317-20), and is involved in the regulation of phagocytosis of apoptotic cells (Benzakour et al., Sci Med (Paris), 2007, 23: 826-833, Rankin et al, Cancer Res., 2010, 70: 7570-7579). It has been observed that the S protein and the Tyro-3 receptor are expressed together in lung carcinoma tissues (Wimmel et al., Cancer, 1999, 86: 43-49).
  • KR20090090944 proposes the implementation of activators of the LIGHT gene (TNFSF14) selected from ligands of the Axl receptor to sensitize the tumor cells to NK (Natural Killer) cells.
  • US Pat. No. 6,593,291 describes the ability of protein S to inhibit the proliferation of HUVEC (Human Umbilical Vascular Endothelial Cell) cells.
  • the S protein may prove to be particularly effective for directly inhibiting the proliferation of cancer cells, regardless of its anti-angiogenic effect.
  • antiproliferative agent of cancer cells an agent capable of reducing and / or blocking the proliferation of cancer cells by direct action on these cells, without affecting the growth or proliferation of healthy cells.
  • direct action is meant an action on a constituent element of the cancer cell or an element of one of its metabolic pathways. Such an effect opposes an effect obtained by action on the environment of the cell, such as an anti-angiogenic effect, which is described as an indirect action.
  • the therapeutic effect obtained by an active ingredient of the invention can therefore be exerted independently of a possible anti-angiogenic action.
  • the term "antiproliferative" with respect to a given agent qualifies the property of the latter to exert an inhibitory action directly on the cells whose proliferation is to be stopped. Such a property is therefore necessarily independent of any action on cells other than those whose proliferation is to be stopped.
  • the antiproliferative effect with respect to the cancer cells according to the invention is, for example, independent of an inhibition of the angiogenesis or the activation of immune cells.
  • the term "prevent” means reducing the risk of occurrence or slowing the occurrence of a given phenomenon, namely in the present invention, a cancer or a metastasis.
  • the present invention provides an isolated nucleic acid sequence encoding an amino acid sequence of the invention for use as an antiproliferative therapeutic agent of cancer cells to prevent and / or reduce and / or treat a Cancer.
  • the present invention relates to an expression vector comprising a nucleic acid sequence of the invention for use as an antiproliferative therapeutic agent of cancer cells for preventing and / or reducing and / or treating cancer.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising, in a pharmaceutically acceptable medium, at least one amino acid sequence or at least one nucleic acid sequence of the invention, or at least one vector of Expression of the invention as an antiproliferative agent of cancer cells for preventing and / or reducing and / or treating cancer
  • the present invention relates to a combination product comprising at least one amino acid sequence of the invention, or at least one a nucleic acid sequence of the invention, or at least one expression vector of the invention as antiproliferative agent of cancer cells, and at least one chemotherapeutic agent or at least one immunotherapeutic agent, for simultaneous use , separate or sequential to prevent and / or reduce and / or treat cancer.
  • a therapeutic treatment method comprising administering at least one amino acid sequence of the invention, or at least one nucleic acid sequence of the invention, or at least one expression vector of the invention, as antiproliferative therapeutic agent of cancer cells, for preventing and / or reducing and / or treating cancer.
  • the anticoagulant properties of protein S are only manifested by the action of activated protein C. Its administration to an individual in the absence of active coagulation process does not affect the hemostatic balance. Moreover, as shown by the examples illustrating the invention, the implementation of the protein S as an antiproliferative agent of cancer cells is advantageously devoid of toxicity and side effects. Human protein S does not cause bone marrow depression, gastrointestinal symptoms, hair loss, standard chemotherapy features.
  • the present invention makes it possible to propose a novel treatment for tumors or cancers that are insensitive or have acquired resistance to cancer. anti-angiogenic agents.
  • the present invention makes it possible to propose a new anticancer treatment with little or no side effects and less toxicity with regard to the treatments usually employed.
  • the present invention may be particularly useful with regard to tumors or cancers whose growth and / or dissemination does not involve angiogenesis.
  • the present invention makes it possible to increase the survival of patients presenting one or more metastases, and more particularly one or more lung metastases.
  • An isolated amino acid sequence suitable for the invention may be represented by the sequence SEQ ID NO: 1. Also, an isolated amino acid sequence suitable for the invention may be a homologue of the sequence SEQ ID NO: 1 having a homology of at least 80% with this sequence and a similar biological activity.
  • an isolated amino acid sequence suitable for the invention may be an active fragment consisting of 290 to 670, preferably 300 to 660 amino acids, or even 310 to 650 or 320 to 640 amino acids. and preferably from 330 to 630 contiguous amino acids of said sequence or said homologue.
  • homologue of an amino acid sequence of the invention is intended to denote any amino acid sequence having a sequence identity of at least 80%, preferably at least 85%, or even at least 87% o, still at least 90% o, still at least 93% o, or even at least 97% o, and still more preferably at least 99% o, and still more more preferably 100% with said sequence, and a similar biological activity or of the same nature.
  • a sequence homology may be more particularly determined with regard to the region including amino acids 299 to 666 of SEQ ID NO: 1. This region is presumed to be the domain through which the S protein interacts with and activates. TAM receivers (Tyro-3, Axl, and Mer).
  • sequence homology is determined with regard to the region including amino acids 299 to 666 of SEQ ID NO: 1, this can be at least 87% o, preferably at least 90% o, or even at least less than 93% o, or at least 95% o, or at least 97% o, even 99% o, and preferably 100% o.
  • Sequence homology can be determined by any method known to those skilled in the art, such as visual comparison, or by any computer tool generally used in the field, such as BLAST programs available at www.ncbi.nlm. .nih.gov and used with the default settings.
  • a homologue suitable for the invention may be a homologue of human protein S.
  • a homologue of an amino acid sequence of the invention may result from modifications resulting from mutation or variation in an amino acid sequence according to the invention, originating either from the deletion or the insertion of one or several amino acids, either the substitution of one or more amino acids or alternatively splicing. Many of these changes can be combined.
  • a homologue of an amino acid sequence of the invention may comprise conservative substitutions with respect to this amino acid sequence.
  • mutations which may be considered in the present invention, it may be mentioned, in a non-exhaustive manner, the replacement of one or more amino acid residues by amino acid residues having a subscript. similar hydropathic without substantially affecting the biological properties of the polypeptide.
  • the hydropathic index is an index attributed to amino acids as a function of their hydrophobicity and charge (Kyte et al (1982) J. Mol Biol., 157: 105).
  • homologues of the sequence SEQ ID NO: 1 that are suitable for the invention, mention may be made of the macaque protein S (Macaca mulatta, accession number NP 001038191.1), zebrafish (Danio rerio, accession number NP 001070791.1), xenopus (Xenopus (Silurana) tropicalis, accession number NP 001 1 19539.1), rat (Norwegian rats, accession number NP 1 12348.2), mouse (Mus musculus, accession number NP 035303.1 ), cattle (Bos taurus, accession number NP 776863.1, chimpanzee (Pan troglodytes, accession number XP 003309948.1), orangutan (Pongo abelii, accession number XP 002813442.1), turkey ( Meleagris gallopavo, accession number XP 003202865.1), dog (Canis l
  • homologues of the sequence SEQ ID NO: 1 that is more particularly suitable for the invention, mention may be made of the NP macrophage protein NP 001038191.1, 1 of the NP 001070791.1 zebrafish, the NP 001 1 19539.1 xenopus, and the NP 1 rat. 12348.2, the NP 035303.1 mouse and the NP 776863.1 cattle. These six homologs exhibited sequence homology with SEQ ID NO: 1, respectively, of 93%, 94%, 97%, 98%, 99% and 100% with this sequence.
  • An amino acid sequence, or a homologue thereof, contemplated by the present invention may be an amino acid sequence having undergone one or more post-translational processing (s).
  • post-translational processing is intended to encompass all the modifications that an amino acid sequence is likely to undergo at the end of its synthesis in a cell, such as, for example, a or phosphorylation (s), thiolation (s), acetylation (s), glycosylation (s), lipidation (s), such as farnesylation or palmitoylation.
  • amino acid sequence by “similar biological activity or of the same nature” with respect to an amino acid sequence according to the invention is meant the antiproliferative properties of the S protein with respect to the cancer cells. These properties can in particular be evaluated by means of the experimental protocols described in the examples.
  • the antiproliferative properties of an amino acid sequence of the invention, or a homologue can be determined on tumor cells cultured under appropriate conditions in vitro.
  • the determination of suitable in vitro culture conditions for cancer cells is within the knowledge of those skilled in the art.
  • the tumor cells may be derived from primary cultures of tumors or cell lines.
  • the effect, resulting from the contacting of an amino acid sequence of the invention with tumor cells, on the proliferation of the latter can be compared to an effect obtained under negative control conditions, in which the cancer cells are maintained in their culture medium without a test compound or in the presence of an amino acid sequence having less than 70% homology with SEQ ID NO: 1 and having no effect with regard to the proliferation of cells tumor, and optionally to an effect obtained under positive control conditions, wherein the tumor cells are in contact with an amino acid sequence SEQ ID NO: 1.
  • fragment of an amino acid sequence any portion of an amino acid sequence according to the invention consisting of 290 to 670, preferably 300 to 660 amino acids , or 310 to 650 or 320 to 640, and preferably 330 to 630 consecutive amino acids of said sequence, and having a biological activity of the same kind. More preferably, a fragment suitable for the invention may be derived from the sequence SEQ ID NO: 1.
  • a fragment of protein S which is more particularly suitable for the invention may be wholly or partly derived from the region of the protein of S binding to the TAM receptors. More preferably, a fragment suitable for the invention may be an amino acid sequence derived from a region defined by amino acids 250 to 675, preferably 260 to 670, or even 270 to 665, or 280 to 660, even 290 to 650 or 300 to 640, with regard to the numbering of the amino acid sequence SEQ ID NO: 1, or from any equivalent region derived from a homologue of SEQ ID NO: 1.
  • the biological activity of a fragment of an amino acid sequence of the invention can be determined as indicated above with respect to an amino acid sequence of the invention or a homologue thereof. this.
  • an amino acid sequence that is suitable for the invention may be a human protein S. This protein has been described by Lundwall et al. (Proc Natl Acad Sci, 1986, 83: 6716-6720).
  • an amino acid sequence that is suitable for the invention may be represented by the sequence SEQ ID NO: 1. This sequence has the accession number NCBI NP 000304.2.
  • Human protein S is a secreted glycoprotein, and exhibits anticoagulant factor activity. It is naturally present in the blood and acts as a cofactor for activated protein C (APC). Its anticoagulant activity being dependent on activated protein C (APC), its injection, even at very high doses, does not lead to an inhibition of blood coagulation.
  • APC activated protein C
  • Human protein S is naturally expressed by a wide variety of tissues and cell types such as the liver, brain, heart, ovaries, placenta, spleen, kidneys, endothelial cells, megakaryocytes, osteoblasts, nervous system cells, smooth vascular cells and Leydig cells.
  • Human protein S has a half-life in the human body of about 48 hours, advantageously conferring on it a better bioavailability and an ability to exert a long-term effect, necessary for an effective anticancer treatment.
  • Protein S is an endogenous protein and can be readily purified from blood by conventional precipitation-based and chromatographic purification methods and the implementation of which has been published (Dahlback, Biochem J., 1983, 209 : 837-846).
  • Purified human S protein can also be obtained commercially from various companies such as Merck, Calbiochem, Biogenic, Anaria or Haematologic Technologies.
  • human protein S can be obtained in very large quantities and with a high degree of purity by transfection of its cDNA into eukaryotic cells.
  • the techniques for transfection and expression of nucleic acid sequences in host cells, as well as purification of the proteins obtained are known to those skilled in the art which can refer for example to the manual "Molecular Cloning: A Laboratory Manual "- Sambrook et al., Ed. 2001, Cold Spring Harbor Laboratory, New York.
  • the present invention also relates to a nucleic acid sequence encoding an amino acid sequence of the invention, a homologue or a fragment thereof, for use as an antiproliferative agent of cells. cancerous to prevent and / or reduce and / or treat cancer.
  • nucleic acid sequence fragment means a nucleic acid sequence consisting of 780 to 1980, or even 900 to 1950, or even 930 to 1920, or even 960 to 1890. , and more preferably in 990 to 1860 consecutive base pairs of said sequence, and encoding an amino acid sequence having a biological activity of the same nature as the amino acid sequence encoded by said sequence.
  • nucleic acid sequence analogue means a nucleic acid sequence having a sequence identity of at least 65%, preferably at least 80%, and more. preferably 100% with said sequence, and coding for an amino acid sequence having a biological activity of the same nature as the amino acid sequence encoded by said sequence.
  • analog of a nucleic acid sequence is meant a nucleic acid sequence, possibly resulting from the degeneracy of the nucleic acid code, and coding for an amino acid sequence according to the invention, in particular as defined above.
  • a nucleic acid sequence suitable for the invention may in particular be a sequence consisting of SEQ ID NO: 2, a homologue or a fragment thereof. More preferably still, a nucleic acid sequence that is suitable for the invention may be the sequence SEQ ID NO: 2 coding for the human protein S. This sequence has accession number NCBI NM_000313.3.
  • an expression vector may be implemented to introduce a nucleic acid sequence of the invention into a host cell to produce in vitro a recombinant S protein, as indicated previously, or in a cancer cell or in a cell healthy environment of a cell cancer patient of an individual suffering from cancer or metastases.
  • This last implementation advantageously allows the in situ production of the anticancer active ingredient, and an improvement in its bioavailability.
  • An expression vector suitable for the invention may comprise a transcription cassette comprising a transcription initiation agent, a nucleic acid sequence of the invention and a transcription termination agent, all of which is operably linked.
  • the transcription cassette can be introduced into a variety of expression vectors, such as a plasmid, a retrovirus, e.g. a lentivirus, or an adenovirus.
  • An expression vector may allow stable or transient expression of the amino acid sequence of interest, usually for a period of at least one day, more generally for several days, or even weeks.
  • an expression vector of the invention administered and targeting of an expression vector of the invention to specific cells of an individual suffering from cancer is within the skill of those skilled in the art.
  • the targeting of an expression vector of the invention to cancer cells to be treated may be carried out for example by means of an antibody directed specifically towards an antigen specific for or overexpressed by cancer cells, such as Mage, Bage or Her2-neu, or by means of a ligand of a receptor specific for or overexpressed by cancer cells, such as the folic acid receptor.
  • the invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising, in a pharmaceutically acceptable medium, at least one amino acid sequence of the invention, or at least one nucleic acid sequence of the invention, or at least one expression vector of the invention, as antiproliferative agent of cancer cells for preventing and / or reducing and / or treating cancer.
  • the invention relates to the use of at least one amino acid sequence of the invention, or at least one nucleic acid sequence of the invention, or at least one expression vector of the invention. as an antiproliferative agent of cancer cells for preparing a pharmaceutical composition for preventing and / or reducing and / or treating cancer.
  • a sequence of amino acids or nucleic acids, or an expression vector according to the invention as a medicament for preventing or inhibiting the proliferation of cancer cells to prevent and / or reduce and / or treat cancer.
  • An amino acid or nucleic acid sequence, or an expression vector according to the invention, or a drug or a pharmaceutical composition of the invention may be formulated with any pharmaceutically acceptable medium or vehicle, and can be formulated in any solid, semi-solid, liquid or gaseous form, such as a tablet, capsule, capsule, powder, granule, emulsion, suspension, gel, microsphere , or an inhaled form.
  • an amino acid or nucleic acid sequence, or an expression vector in accordance with the invention, or a pharmaceutical composition of the invention may be formulated for the oral route, in the form of a tablet, capsule or capsule, with extended or controlled release, of a pill, a powder, a solution, a suspension, a syrup or emulsion.
  • an amino acid or nucleic acid sequence, or an expression vector in accordance with the invention, or a pharmaceutical composition of the invention may be prepared in injectable form.
  • An amino acid or nucleic acid sequence of the invention may be formulated with different carriers, such as a liposome or a transfection polymer.
  • a pharmaceutical composition of the invention may preferably comprise a sequence of amino acids or nucleic acids suspended in a pharmaceutically acceptable vehicle, for example an aqueous vehicle.
  • a pharmaceutically acceptable vehicle for example an aqueous vehicle.
  • aqueous vehicles may be used, for example water, saline buffer solution, 0.4% or 0.3% glycine solution, or a solution of hyaluronic acid.
  • a pharmaceutical composition can be sterilized by any known conventional method, such as filtration.
  • the resulting aqueous solution may be packaged for use as it is, or lyophilized.
  • a lyophilized preparation can be combined with a sterile solution before use.
  • a pharmaceutical composition of the invention may comprise any pharmaceutically acceptable excipient required to approximate physiological conditions, such as buffering agents or agents for adjusting pH or isotonicity, wetting agents. Such preparations may also include antioxidants, preservatives, adjuvants, and optionally other therapeutic agents.
  • a pharmaceutical composition of the invention naturally comprises an amino acid or nucleic acid sequence of the invention in an effective amount.
  • An effective amount of an amino acid or nucleic acid sequence of the invention is an amount which, alone or in combination with subsequent doses, induces the desired response, namely an antiproliferative effect on cells. cancerous.
  • An effective amount may depend on a varied set of parameters, such as the route of administration, single or multiple dose administration, patient related parameters including age, fitness, height, weight and the pathological condition. These parameters and their influence are well known to those skilled in the art and can be determined by any known method.
  • An amino acid or nucleic acid sequence of the invention may be administered in an amount of from 0.1 mg / kg to 15 mg / kg, preferably from 1 mg / kg to 5 mg / kg, and even more preferably ranging from 2 mg / kg to 3 mg / kg body weight.
  • a pharmaceutical composition that is suitable for the invention may comprise at least one amino acid or nucleic acid sequence of the invention, or at least one expression vector according to the invention in an amount ranging from 0.1 mg / kg at 15 mg / kg, preferably from 1 mg / kg to 5 mg / kg, and even more preferably from 2 mg / kg to 3 mg / kg of body weight.
  • amino acid or nucleic acid sequence, or an expression vector according to the invention, or a pharmaceutical composition may be administered by any suitable route, such as the oral, buccal, sub-lingual, rectal, parenteral, intraperitoneal, intradermal, transdermal, intratracheal, topical, or ophthalmic.
  • amino acid or nucleic acid sequence or an expression vector according to the invention, or a pharmaceutical composition of the invention may preferably be administered by injection, such as an intravenous route, or by a mucosal route, or a combination of these pathways.
  • Injection administration may be effected, for example, intraperitoneally, intradermally, subcutaneously, intravenously or intramuscularly.
  • Any mucosal route may also be implemented, such as the genitourinary, anorectal, respiratory, oral-nasal, sublingual, or a combination thereof.
  • a therapeutic treatment method comprising administering at least one amino acid sequence of the invention, or at least one nucleic acid sequence of the invention, or at least one expression vector of the invention, as antiproliferative therapeutic agent of cancer cells, for preventing and / or reducing and / or treating cancer.
  • the implementation of a therapeutic treatment method of the invention makes it possible to observe a reduction, or even a disappearance, of the tumor (s) and / or the metastasis (s). Combination with other therapies
  • an amino acid or nucleic acid sequence of the invention may be used alone or in combination with other treatments such as surgery, radiotherapy, chemotherapy, and the like. immunotherapy.
  • the present invention also relates to a combination product comprising at least one amino acid or nucleic acid sequence of the invention or at least one expression vector of the invention, as an antiproliferative agent for cancer cells, and least one chemotherapy agent or at least one immunotherapy agent, for simultaneous, separate or sequential use to prevent and / or reduce and / or treat cancer.
  • a chemotherapeutic agent that is suitable for the invention may be selected from cytostatic agents, antimetabolites, DNA intercalators, topoisomerase I and II inhibiting compounds, tubulin inhibitors, alkylating agents, neocarcinostatin, calichéamicine. , dynemicine or aspiramicin A, ribosome inhibitor compounds, tyrosine phosphokinase inhibitors, cell differentiation inducing compounds, or histone deacetylase inhibitors.
  • a chemotherapeutic agent that is suitable for the invention may be chosen from cytostatics and antimetabolites, such as 5-fluorouracil, 5-fluoro-cytidine, 5-fluorouridine, cytosine arabinoside or methotrexate.
  • cytostatics and antimetabolites such as 5-fluorouracil, 5-fluoro-cytidine, 5-fluorouridine, cytosine arabinoside or methotrexate.
  • intercalating substances of DNA such as doxorubicin, daunomycin, idarubicin, epirubicin or mitoxantrone, among topoisomerase I and II inhibiting compounds, such as camptothecin, etoposide or m -AMSA, among tubulin inhibitors, such as vincristine, vinblastine, vindesine, taxol, nocodazole or colchicine, among alkylating agents, such as cyclophosphamide, mitomycin C, rachelmycin, cisplatin, phosphoramide mustard gas, melphalan, bleomycin, N-bis (2-chloroethyl) -4-hydroxyaniline, or among neocarcinostatin, calichéamicine, dynaptcine or espéramicine A, or among ribosin inhibiting compounds omega, such as verrucarin A, among tyrosine phosphokinase inhibitors, such as quercetin,
  • amino acid or nucleic acid sequence of the invention, or an expression vector of the invention may also be used in combination with a radiotherapy treatment.
  • a radiotherapy treatment that may be suitable for the invention may be external radiotherapy using an external source of X-rays, brachytherapy consisting in bringing the radioactive source into contact with the tumor, or vector-borne metabolic radiotherapy. These methods are known to those skilled in the art.
  • An immunotherapeutic treatment that is suitable for the invention may comprise the administration of at least one immunotherapy agent chosen from cytokines, such as interleukin-2, cells of the immune system, in particular the immune cells of the patient, which have been activated. and reinjected to the latter, or antibodies directed against cancer cells, such as anti-Her2-neu or anti-CD20 antibodies.
  • cytokines such as interleukin-2
  • cells of the immune system in particular the immune cells of the patient, which have been activated. and reinjected to the latter, or antibodies directed against cancer cells, such as anti-Her2-neu or anti-CD20 antibodies.
  • An amino acid or nucleic acid sequence of the invention, or an expression vector of the invention, or a pharmaceutical composition of the invention prove to be particularly advantageous for reducing or inhibiting the proliferation of cancer cells. .
  • an amino acid sequence of the invention inhibits or significantly reduces cancer cell proliferation, tumor growth, and metastasis development.
  • An amino acid or nucleic acid sequence of the invention, or an expression vector of the invention are advantageously used as an antiproliferative agent for cancer cells expressing at least one receptor of the TAM family. (Tyro-3, Axl or Sea).
  • an amino acid or nucleic acid sequence of the invention, or an expression vector of the invention can be used as an antiproliferative agent of cancer cells overexpressing at the same time.
  • least one receiver of the TAM family at the same time.
  • a non-cancer cell that can be used as a reference for determining an average level of expression may be a non-cancer cell derived from the same type of tissue or organ from which the cancer cell is derived.
  • the reference organ or tissue may be from the same individual as that with cancer or metastases, or from a separate individual presumed to have no cancer or metastasis.
  • an amino acid or nucleic acid sequence of the invention, or an expression vector of the invention can be used as an antiproliferative agent for cancer cells. to prevent, reduce or treat cancer having a natural or acquired resistance to chemotherapeutic or immunotherapeutic treatment, such as those usually employed.
  • an amino acid or nucleic acid sequence of the invention, or an expression vector of the invention can be used as antiproliferative agent of cancer cells to prevent, reduce or treat a metastasis, and in particular a metastasis whose cells express or overexpress at least one receptor of the TAM receptor family.
  • an amino acid or nucleic acid sequence of the invention, or an expression vector of the invention may be used as antiproliferative agent of cancer cells selected from cancerous cells for which expression or overexpression of TAM receptors has been observed, and in particular cancer cells of breast cancer, colorectal cancer, esophageal cancer, stomach cancer, digestive stromal tumors ( GIST), brain tumors (astrocytoma), liver cancer, lung cancer, skin cancer, ovarian cancer, osteosarcoma, pancreatic cancer, kidney cancer, prostate cancer thyroid cancer, endometrial cancer, Kaposi's sarcoma, glioma or leukemia (Verma et al., Mol Cancer Ther., 201 1, Sep 20).
  • the invention may be more particularly suitable for preventing and / or reducing and / or treating a melanoma, or metastases associated with melanoma or other metastatic cancers in the lungs such as breast, colon, prostate, pancreatic, kidney, thyroid, stomach, and ovarian cancers, melanomas , sarcomas, gliomas or leukemias.
  • a must be understood, unless otherwise indicated, in the sense of "at least one”.
  • the values of the limits of an interval defined by the expression "between ... and " are included in the interval.
  • Figure 1 illustrates the inhibition of human protein S-induced (control) human growth in vitro, 1 or 10 ⁇ g / ml, applied to skin tumor cells in culture for 24 hours (16F10 B cells) .
  • the proliferation of cells is evaluated by the BrdU incorporation method.
  • melanoma skin cancer cells
  • LLC Lewis Lung Carcinoma
  • the diagram shows the variation of the weight of the mice (in g) treated for 14 consecutive days.
  • the levels of BrdU incorporated by the cancer cells treated with 1 ⁇ g / ml or 10 ⁇ g / ml were reduced, respectively, to approximately 70% and 60% of the control value.
  • mice were euthanized by exsanguination after the animals were rendered unconscious by the injection of an intraperitoneal anesthetic (chloral hydrate, 400 mg / kg) according to the European regulation (European Communities council directive of 24 November 1986 - 86/609 / EEC), and the tumors were removed and weighed.
  • an intraperitoneal anesthetic chloral hydrate, 400 mg / kg
  • European regulation European Communities council directive of 24 November 1986 - 86/609 / EEC
  • the tumor weight for the "placebo” group is between about 1400 mg and 2300 mg while the tumor weight for the "Protein S” group is between about 700 mg and 1500 mg.
  • the treatment of mice with the S protein led to a significant decrease in tumor weight of nearly 40%.
  • LLCs 2x10 5 of pulmonary cancer cells called LLCs initially isolated from mice (Bertram and Janik) in 100 ⁇ l of phosphate buffered saline (PB S, phosphate buffered saline) were injected intravenously into sixteen male C57 / BL / 6 mice. 9- 10 weeks, randomized into two groups.
  • PB S phosphate buffered saline
  • mice were euthanized by exsanguination after the animals were rendered unconscious by the injection of an intraperitoneal anesthetic (chloral hydrate, 400 mg / kg) according to the European regulation (European Communities council directive of 24 November 1986 - 86/609 / EEC), and the lungs were removed and weighed.
  • the total number of metastatic nodules is counted by hand counting using a binocular microscope. As shown in Figure 3, the number of nodules for the "placebo" group is between about 60 and 220 while the number of nodules for the "protein S" group is between about 40 and 110. These results indicate that the number of nodules for the "placebo" group is between about 60 and 110. Pulmonary metastasis was significantly reduced by treatment with protein S.
  • mice 2x10 5 of lung cancer cells called CLL isolated initially from mice (Bertram and Janik, Cancer Lett, 1980, 11: 63-73) in 100 ⁇ l of phosphate buffered saline (PBS, Phosphate-buffered saline) were injected by intravenously in ten male C57 / BL / 6 mice 9-10 weeks, randomized into two groups, each consisting of five mice.
  • PBS phosphate buffered saline
  • Figure 4 shows that after a period of 25 days, none of the mice of the "placebo" group survived, whereas after that same period, 40% of the mice that received the human protein S remained alive. And from 26 th to 32 th day, 20% of mice survived yet. The treatment of mice with lung metastases with human protein S significantly increased their survival in the placebo group.
  • mice Six 9-10 week old male C57 / BL / 6 mice, randomized into two groups, each consisting of three mice, were treated with daily intraperitoneal administration, saline (placebo) or 2.5 mg / kg human protein S (protein
  • mice were weighed every other day using a scale.
  • Figure 5 indicates that the weight of the mice varies substantially in the same way between the "protein S" group and the "placebo" group. No signs of weakening of the body, that is, cachexia, have been observed.
  • mice were euthanized by exsanguination after the animals were rendered unconscious by injection of anesthetic intraperitoneal (chloral hydrate, 400 mg / kg) according to EU regulations (European Communities Council Directive of 24 November 1986 - 86/609 / EEC), and a visual examination of the abdominal cavity was performed to find the presence of fluid in the abdomen. The absence of observation of inflammatory reaction or ascites in the abdominal cavity indicates a good tolerance of the protein S during the treatment.
  • the protein S strongly and reproducibly inhibits proliferation and tumor growth, independently of a possible anti-angiogenic effect. Moreover, the protein S is particularly devoid of toxicity or side effect on cells or healthy organism.
  • Vuoriluoto K Haugen H. Kiviluoto JP S. Mpindi, Nevo J. Gjerdrum C, Tiron C.
  • Neoplasia 12: 116-126.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

L'invention concerne une séquence d'acides aminés isolée, consistant en SEQ ID NO:1, un homologue présentant une homologie d'au moins 80% avec ladite séquence et une activité biologique similaire, ou un fragment actif consistant en 280 à 67 acides aminés contigus de ladite séquence ou dudit homologue, pour une utilisation comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.

Description

UTILISATION DE LA PROTEINE S POUR TRAITER LE CANCER
La présente invention se rapporte au domaine pharmaceutique, et plus particulièrement au domaine de l'oncologie.
Le cancer est une maladie de l'homme et des animaux qui est la plupart du temps mortelle, et qui se traduit par une croissance incontrôlée des cellules endogènes. Le terme « cancer » est utilisé pour désigner la formation de tumeurs malignes et de néoplasmes (tumeurs ou carcinomes) ou la dégénérescence maligne et le dérèglement de la maturation des globules blancs (leucémie ou cancer du sang). Généralement, la croissance des cancers comporte deux étapes, à savoir la croissance tumorale locale et la dissémination cancéreuse. La croissance tumorale locale consiste en l'apparition d'un clone tumoral, à partir d'une cellule "transformée", sous l'action d'agents carcinogènes initiateurs et promoteurs. La prolifération cellulaire aboutit à la constitution de la tumeur. La dissémination cancéreuse, à partir de la tumeur initiale peut s'effectuer soit par dissémination régionale soit par développement de tumeurs secondaires appelées métastases. Cette dissémination fait la gravité du cancer, car on sait mieux traiter la tumeur primitive, que les métastases.
Pour tenter de prévenir et/ou de vaincre le cancer, différentes techniques telles que la chirurgie, la radiothérapie dont la curiethérapie, la chimiothérapie dont l'hormonothérapie, l'immunothérapie et plus récemment la thérapie anti-angiogénique, ont été développées.
Cependant, en dépit de progrès récents, ces techniques ne sont pas toutes efficaces, notamment contre les métastases ou des tumeurs résistantes aux traitements par des agents cytotoxiques, et engendrent, malheureusement fréquemment, une intolérance de la part des patients, ainsi que des effets secondaires sévères tels qu'une dépression médullaire, des vomissements, des nausées, une alopécie, une asthénie, une perte d'appétit, une anémie, une thrombopénie, ou une non préservation des tissus sains.
Ainsi, pour des raisons évidentes, il existe un besoin permanent d'identifier de nouveaux actifs anticancéreux plus efficaces, qui agissent sélectivement sur les cellules cancéreuses à l'exclusion des cellules saines, qui soient non toxiques, et qui entraînent moins, voire pas ou très peu d'effets secondaires.
La présente invention à pour objet de satisfaire à ces besoins.
Selon un de ces premiers aspects, la présente invention concerne une séquence d'acides aminés isolée, consistant en SEQ ID NO: 1, un homologue présentant une homologie d'au moins 80% avec ladite séquence et une activité biologique similaire, ou un fragment actif consistant en 280 à 675 acides aminés contigus de ladite séquence ou dudit homologue, pour une utilisation comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.
De manière inattendue, les inventeurs ont observé qu'une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO: 1, en particulier la protéine S (S pour Seattle), et plus particulièrement la protéine S humaine, est dotée de propriétés antiprolifératives particulièrement efficaces à l'égard de cellules cancéreuses. Ainsi, la protéine S peut s'avérer être un actif thérapeutique particulièrement intéressant pour la prévention, la réduction ou le traitement du cancer.
La protéine S est une protéine vitamine K-dépendante qui est connue pour son implication dans la coagulation du sang.
La protéine S, et son homologue structural Gas6 (growth arrest-specific gene 6), avec lequel elle partage 44% d'homologie de séquence, sont des ligands des récepteurs à activité tyrosine kinase TAM dont les membres sont Axl (nommé également Ufo ou Ark), Tyro3 (nommé également Rse, Brt ou Sky), et Mer (nommé également c-Eyk) (Stitt et al, Cell, 1995, 80:661-670). La protéine S possède une activité de facteur de croissance pour les cellules des muscles lisses (Gasic ét al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992, 89:2317-20), et est impliquée dans la régulation de la phagocytose des cellules apoptotiques (Benzakour et al , Med. Sci. (Paris), 2007, 23:826-833 ; Rankin et al, Cancer Res., 2010, 70:7570-7579). Il a été observé que la protéine S et le récepteur Tyro-3 sont exprimés conjointement dans les tissus du carcinome pulmonaire (Wimmel et al, Cancer, 1999, 86:43-49).
Plusieurs travaux ont montré l'existence d'une relation entre l'activation des récepteurs TAM et la progression tumorale et/ou cancéreuse (Linger et al, Adv. Cancer Res, 2008, 100:35-83 ; He et al, Mol. Carcinog., 2010, 49:882-891 ; Ye et al, Oncogene, 2010, 29:5254-5264).
KR20090090944 quant à lui propose la mise œuvre d'activateurs du gène LIGHT (TNFSF14) choisis parmi des ligands du récepteur Axl pour sensibiliser les cellules tumorales aux cellules NK (Natural Killer).
Enfin, US 6,593,291 fait état de l'aptitude de la protéine S à inhiber la prolifération des cellules HUVEC (Human Umbilical Vascular Endothelial Cell).
Cependant, jusqu'à présent il n'avait jamais été observé que la protéine S peut s'avérer être particulièrement efficace pour inhiber directement la prolifération de cellules cancéreuses, indépendamment de son effet anti-angiogénique. Au sens de l'invention, on entend par « agent antiprolifératif de cellules cancéreuses » un agent capable de réduire et/ou de bloquer la prolifération de cellules cancéreuses par action directe sur ces cellules, sans affecter la croissance ou la prolifération des cellules saines.
Par « action directe », on entend une action sur un élément constitutif de la cellule cancéreuse ou un élément d'une de ses voies métaboliques. Un tel effet s'oppose à un effet obtenu par action sur l'environnement de la cellule, tel qu'un effet anti-angiogénique, qui est qualifiée d'action indirecte. L'effet thérapeutique obtenu par un actif de l'invention peut donc s'exercer indépendamment d'une possible action anti-angiogénique.
Dans la présente invention, le terme « antiprolifératif » à l'égard d'un agent donné qualifie la propriété de ce dernier à exercer une action inhibitrice directement sur les cellules dont la prolifération est à stopper. Une telle propriété s'exerce donc nécessairement indépendamment d'une éventuelle action sur des cellules autres que celles dont la prolifération est à stopper. Ainsi, l'effet antiprolifératif à l'égard des cellules cancéreuses selon l'invention est, par exemple, indépendant d'une inhibition de l'angiogénèse ou de l'activation de cellules immunitaires.
Au sens de l'invention, on entend par « prévenir », le fait de réduire le risque de survenue ou de ralentir la survenue d'un phénomène donné, à savoir dans la présente invention, un cancer ou une métastase.
Selon un autre aspect, la présente invention concerne une séquence d'acides nucléiques isolée codant pour une séquence d'acides aminés de l'invention, pour une utilisation comme agent thérapeutique antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.
Selon un autre aspect encore, la présente invention concerne un vecteur d'expression comprenant une séquence d'acides nucléiques de l'invention, pour une utilisation comme agent thérapeutique antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.
Selon un autre aspect encore, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant, dans un milieu pharmaceutiquement acceptable, au moins une séquence d'acides aminés ou au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou au moins un vecteur d'expression de l'invention comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer
Selon un autre aspect encore, la présente invention concerne un produit de combinaison comprenant au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou au moins un vecteur d'expression de l'invention comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses, et au moins un agent de chimiothérapie ou au moins un agent d'immunothérapie, pour une utilisation simultanée, séparée ou séquentielle pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.
II est également décrit un procédé de traitement thérapeutique comprenant l'administration d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou d'au moins un vecteur d'expression de l'invention, comme agent thérapeutique antiprolifératif de cellules cancéreuses, pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.
Les propriétés anticoagulantes de la protéine S ne se manifestent que sous l'action de la protéine C activée. Son administration à un individu en l'absence de processus de coagulation actif n'affecte donc pas l'équilibre hémostatique. Par ailleurs, comme le montrent les exemples illustrant l'invention, la mise en œuvre de la protéine S à titre d'agent antiprolifératif de cellules cancéreuses se révèlent avantageusement dénuée de toxicité et d'effets secondaires. La protéine S humaine ne cause pas de dépressions médullaires, de symptômes gastro-intestinaux, de perte de cheveux, caractéristiques de chimiothérapie standard.
Les propriétés antiprolifératives de la protéine S à l'égard de cellules cancéreuses s 'exerçant indépendamment d'un effet anti-angiogénique, la présente invention permet de proposer un nouveau traitement à l'égard des tumeurs ou cancers insensibles ou ayant acquis une résistance aux agents anti-angiogéniques.
Avantageusement, la présente invention permet de proposer un nouveau traitement anticancéreux présentant peu ou pas d'effets secondaires et une moindre toxicité au regard des traitements habituellement mis en œuvre.
Avantageusement, la présente invention peut se révéler particulièrement utile à l'égard de tumeurs ou cancers dont la croissance et/ou la dissémination n'implique(nt) pas d'angiogenèse.
Avantageusement encore, la présente invention permet d'augmenter la survie de patients présentant une ou des métastases, et plus particulièrement une ou des métastases pulmonaires.
Protéine S
Une séquence d'acides aminés isolée convenant à l'invention peut être figurée par la séquence SEQ ID NO: 1. Egalement, une séquence d'acides aminés isolée convenant à l'invention peut être un homologue de la séquence SEQ ID NO: 1 présentant une homologie d'au moins 80% avec cette séquence et une activité biologique similaire.
Selon une autre variante de réalisation, une séquence d'acides aminés isolée convenant à l'invention peut être un fragment actif consistant en 290 à 670, de préférence en 300 à 660 acides aminés, voire en 310 à 650 ou encore en 320 à 640, et de préférence en 330 à 630 acides aminés contigus de ladite séquence ou dudit homologue.
Par « homologue » d'une séquence d'acides aminés de l'invention, on entend désigner toute séquence d'acides aminés ayant une identité de séquence d'au moins 80%), de préférence d'au moins 85%o, voire d'au moins 87%o, encore d'au moins 90%o, encore d'au moins 93%o, voire encore d'au moins 97%o, et plus préférentiellement encore d'au moins 99%o, et encore plus préférentiellement de 100% avec ladite séquence, et une activité biologique similaire ou de même nature.
Selon une variante de réalisation, une homologie de séquence peut être plus particulièrement déterminée au regard de la région incluant les acides aminés 299 à 666 de SEQ ID NO: 1. Cette région est présumée figurer le domaine par lequel la protéine S interagit avec et active les récepteurs TAM (Tyro-3, Axl, et Mer).
Lorsque l 'homologie de séquence est déterminée au regard de la région incluant les acides aminés 299 à 666 de SEQ ID NO: 1 , celle-ci peut être au moins de 87%o, de préférence au moins de 90%o, voire au moins de 93%o, ou encore d'au moins 95%o, ou encore d'au moins 97%o, voire de 99%o, et de préférence être de 100%o.
L'homologie de séquence peut être déterminée par toute méthode connue de l'homme du métier, telle que la comparaison visuelle, ou au moyen de tout outil informatique généralement utilisé dans le domaine, tel que les programmes BLAST disponibles sur www.ncbi.nlm.nih.gov et utilisés avec les paramètres configurés par défaut.
Un homologue convenant à l'invention peut être un homologue de la protéine S humaine.
Un homologue d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut résulter de modifications issues de mutation ou de variation dans une séquence d'acides aminées selon l'invention, provenant soit de la délétion ou de l'insertion d'un ou plusieurs acides aminés, soit de la substitution d'un ou plusieurs acides aminés, soit encore d'un épissage alternatif. Plusieurs de ces modifications peuvent être combinées.
Avantageusement, un homologue d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut comprendre des substitutions conservatrices par rapport à cette séquence d'acides aminés. A titre d'exemple de mutations que l'on peut considérer dans la présente invention, il peut être mentionné, de manière non exhaustive, le remplacement d'un ou plusieurs résidus d'acides aminés par des résidus d'acides aminés ayant un indice hydropathique similaire sans pour autant affecter de manière sensible les propriétés biologiques du polypeptide. L'indice hydropathique est un indice attribué aux acides aminés en fonction de leur hydrophobicité et de leur charge (Kyte et al. (1982), J. Mol. Biol., 157 : 105).
Parmi les homologues de la séquence SEQ ID NO: 1 convenant à l'invention, on peut citer la protéine S du macaque (Macaca mulatta, numéro d'accession NP 001038191.1), du poisson-zèbre (Danio rerio, numéro d'accession NP 001070791.1), du xénope (Xenopus (Silurana) tropicalis, numéro d'accession NP 001 1 19539.1), du rat (Rattus norvégiens, numéro d'accession NP 1 12348.2), de la souris (Mus musculus, numéro d'accession NP 035303.1), du bovin (Bos taurus, numéro d'accession NP 776863.1 , du chimpanzé (Pan troglodytes, numéro d'accession XP 003309948.1), de l'orang-outan (Pongo abelii, numéro d'accession XP 002813442.1), du dindon (Meleagris gallopavo, numéro d'accession XP 003202865.1), du chien (Canis lupus familiaris, numéro d'accession XP 535708.3), du diamant mandarin (Taeniopygia guttata, numéro d'accession XP 002190185.1), de l'éléphant de savane d'Afrique (Loxodonta africana, numéro d'accession XP 003410240.1), de l'opossum (Monodelphis domestica, numéro d'accession XP 001380313.2), de l'anole vert (Anolis carolinensis, numéro d'accession XP 003219160.1), du tilapia du Nil (Oreochromis niloticus, numéro d'accession XP 003445823.1), du ouistiti (Callithrix jacchus, numéro d'accession XP 002761331.1), de la poule (Gallus gallus, numéro d'accession XP 0416641.2), du cheval (Equus caballus, numéro d'accession XP 001503040.2), du gibbon (Nomascus leucogenys, numéro d'accession XP 003261735.1), du chimpanzé (Pan troglodytes, numéro d'accession XP 516603.3), du lapin de garenne (Oryctolagus cuniculus, numéro d'accession XP 002716802.1), du panda (Ailuropoda melanoleuca, numéro d'accession XP 002929359.1), et du cochon d'Inde (Cavia porcellus, numéro d'accession XP 003469383.1).
Parmi les homologues de la séquence SEQ ID NO : 1 convenant plus particulièrement à l'invention, on peut citer, la protéine S du macaque NP 001038191.1 , 1 du poisson-zèbre NP 001070791.1 , du xénope NP 001 1 19539.1 , du rat NP 1 12348.2, de la souris NP 035303.1 et du bovin NP 776863.1. Ces six homologues présentant une homologie de séquence avec SEQ ID NO: 1 , respectivement, de 93%, 94%, 97%, 98%, 99% et 100% avec cette séquence. Une séquence d'acides aminés, ou un homologue de celle-ci, visée par la présente invention peut être une séquence d'acides aminés ayant subi une ou plusieurs maturation(s) post-traductionnelle(s).
Par « maturation(s) post-traductionnelle(s) », on entend englober l'ensemble des modifications qu'une séquence d'acides aminés est susceptible de subir à l'issue de sa synthèse dans une cellule, telle que par exemple une ou des phosphorylation(s), une ou des thiolation(s), une ou des acétylation(s), une ou des glycosylation(s), une ou des lipidation(s), telles qu'une farnésylation ou une palmitoylation.
Par « activité biologique similaire ou de même nature » à l'égard d'une séquence d'acides aminés selon l'invention, on entend les propriétés antiprolifératives de la protéine S à l'égard des cellules cancéreuses. Ces propriétés peuvent notamment être évaluées aux moyens des protocoles expérimentaux décrits dans les exemples.
En particulier, les propriétés antiprolifératives d'une séquence d'acides aminées de l'invention, ou d'un homologue, peuvent être déterminées sur des cellules tumorales cultivées dans des conditions appropriées in vitro. La détermination des conditions de culture in vitro adéquates pour des cellules cancéreuses relève des connaissances de l'homme du métier. Les cellules tumorales peuvent être issues de cultures primaires de tumeurs ou de lignées cellulaires. L'effet, résultant de la mise en contact d'une séquence d'acides aminées de l'invention avec des cellules tumorales, sur la prolifération de ces dernières peut être comparé à un effet obtenu en conditions contrôles négatives, dans lesquelles les cellules cancéreuses sont maintenues dans leur milieu de culture sans composé à tester ou en présence d'une séquence d'acides aminées ayant moins de 70% d'homologie avec SEQ ID NO: 1 et dénuée d'effet à l'égard de la prolifération des cellules tumorales, et, éventuellement à un effet obtenu en conditions contrôles positives, dans laquelle les cellules tumorales sont en mises en contact avec une séquence d'acides aminées SEQ ID NO: 1.
Au sens de l'invention, on entend par «fragment d'une séquence d'acides aminés» toute portion d'une séquence d'acides aminés conforme à l'invention consistant en 290 à 670, de préférence en 300 à 660 acides aminés, voire en 310 à 650 ou encore en 320 à 640, et de préférence en 330 à 630 acides aminés consécutifs de ladite séquence, et ayant une activité biologique de même nature. De préférence encore, un fragment convenant à l'invention peut être issu de la séquence SEQ ID NO: 1.
Selon un mode de réalisation, un fragment de protéine S convenant plus particulièrement à l'invention peut être issu en tout ou partie de la région de la protéine de la S se fixant aux récepteurs TAM. De préférence encore, un fragment convenant à l'invention peut être une séquence d'acides aminés issue d'une région définie par les acides aminées 250 à 675, de préférence 260 à 670, voire 270 à 665, ou encore 280 à 660, voire 290 à 650, voire 300 à 640, au regard de la numérotation de la séquence d'acides aminées SEQ ID NO: 1, ou issue de toute région équivalente issue d'un homologue de SEQ ID NO: 1.
L'activité biologique d'un fragment d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut être déterminée comme indiqué précédemment à l'égard d'une séquence d'acides aminés de l'invention ou d'un homologue de celle-ci.
Selon un mode réalisation préféré, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut être une protéine S humaine. Cette protéine a été décrite par Lundwall et al. (Proc. Natl. Acad. Sci., 1986, 83:6716-6720). De préférence, une séquence d'acides aminée convenant à l'invention peut être figurée par la séquence SEQ ID NO: 1. Cette séquence a pour numéro d'accession NCBI NP 000304.2.
La protéine S humaine est une glycoprotéine sécrétée, et présente une activité de facteur anticoagulant. Elle est naturellement présente dans le sang et agit comme cofacteur pour la protéine C activée (APC). Son activité anticoagulante étant dépendant de la protéine C activée (APC), son injection, même à de très fortes doses, ne conduit nullement à une inhibition de la coagulation sanguine.
La protéine S humaine est naturellement exprimée par une grande variété de tissus et de types cellulaires tels que le foie, le cerveau, le cœur, les ovaires, le placenta, la rate, les reins, les cellules endothéliales, les mégacaryocytes, les ostéoblastes, les cellules du système nerveux, les cellules vasculaires lisses et les cellules de Leydig.
La protéine S humaine possède une demi-vie dans le corps humain d'environ 48 heures, lui conférant avantageusement une meilleure biodisponibilité et une aptitude à exercer un effet à long terme, nécessaire à un traitement anticancéreux efficace.
La protéine S est une protéine endogène et peut être facilement purifiée à partir du sang par des procédés de purification classiques basés sur des précipitations et de la chromatographie et dont la mise en oeuvre a été publiée (Dahlback, Biochem. J., 1983, 209:837-846).
La protéine S humaine purifiée peut également être obtenue commercialement auprès de différentes sociétés telles que Merck, Calbiochem, Biogenic, Anaria ou Haematologic Technologies.
La séquence ADNc ainsi que la séquence d'acides aminés correspondante de la protéine S humaine sont connues par l'homme de l'art (Lundwall et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1986, 83:6716-6720). Ainsi, la protéine S humaine peut être obtenue en très grande quantité et avec un haut degré de pureté par transfection de son ADNc dans des cellules eucaryotes. Les techniques de transfection et d'expression de séquences d'acides nucléiques dans des cellules hôtes, ainsi que de purification des protéines obtenues sont connues de l'homme de l'art qui peut se référer par exemple au manuel « Molecular Cloning : A Laboratory Manual » - Sambrook et al., Ed. 2001, Cold Spring Harbor Laboratory, New York.
Ainsi, selon un mode de réalisation, la présente invention concerne également une séquence d'acides nucléiques codant pour une séquence d'acides aminés de l'invention, un homologue ou un fragment de celle-ci, pour une utilisation comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.
Au sens de la présente invention, on entend par « fragment de séquence d'acides nucléiques », une séquence d'acides nucléiques consistant en 780 à 1980, voire en 900 à 1950, voire encore en 930 à 1920, voire en 960 à 1890, et plus préférentiellement en 990 à 1860 paires de bases consécutives de ladite séquence, et codant pour une séquence d'acides aminés ayant une activité biologique de même nature que la séquence d'acides aminés codée par ladite séquence.
Au sens de la présente invention, on entend par « analogue d'une séquence d'acides nucléiques » une séquence d'acides nucléiques ayant une identité de séquence d'au moins 65 %, de préférence d'au moins 80 %, et plus préférentiellement de 100 % avec ladite séquence, et codant pour une séquence d'acides aminés ayant une activité biologique de même nature que la séquence d'acides aminés codée par ladite séquence.
Par « analogue d'une séquence d'acides nucléiques », on entend désigner une séquence d'acides nucléiques, éventuellement résultant de la dégénérescence du code des acides nucléiques, et codant pour une séquence d'acides aminés conforme à l'invention, notamment tel que défini précédemment.
Une séquence d'acides nucléiques convenant à l'invention peut en particulier être une séquence consistant en SEQ ID NO: 2, un homologue ou un fragment de celle-ci. Plus préférentiellement encore, une séquence d'acides nucléiques convenant à l'invention peut être la séquence SEQ ID NO: 2 codant pour la protéine S humaine. Cette séquence a pour numéro d'accession NCBI NM_000313.3.
Selon encore un autre mode de réalisation, un vecteur d'expression peut être mis en œuvre pour introduire une séquence d'acides nucléiques de l'invention dans une cellule hôte pour produire in vitro une protéine S recombinante, comme indiqué précédemment, ou dans une cellule cancéreuse ou dans une cellule saine de l'environnement d'une cellule cancéreuse d'un individu souffrant d'un cancer ou de métastases. Cette dernière mise en œuvre permet avantageusement la production in situ de l'actif anticancéreux, et une amélioration de sa biodisponibilité.
Un vecteur d'expression convenant à l'invention peut comprendre une cassette de transcription comprenant un agent d'initiation de la transcription, une séquence d'acides nucléiques de l'invention et un agent de terminaison de la transcription, l'ensemble étant de lié de manière opérationnelle. La cassette de transcription peut être introduite dans une variété de vecteurs d'expression, tells qu'un plasmide, un rétrovirus, e.g. un lentivirus ou un adénovirus. Un vecteur d'expression peut permettre l'expression stable ou transitoire de la séquence d'acides aminés d'intérêt, habituellement pendant une période d'au moins un jour, plus généralement pendant plusieurs jours, voire plusieurs semaines.
L'administration et le ciblage d'un vecteur d'expression de l'invention vers des cellules spécifiques d'un individu souffrant de cancer relèvent des connaissances de l'homme de l'art. Le ciblage d'un vecteur d'expression de l'invention vers des cellules cancéreuses à traiter peut être effectué par exemple au moyen d'un anticorps dirigé spécifiquement vers un antigène spécifique de ou surexprimé par des cellules cancéreuses, tel que Mage, Bage ou Her2-neu, ou au moyen d'un ligand d'un récepteur spécifique de ou surexprimé par des cellules cancéreuses, tel que le récepteur à l'acide folique. Composition pharmaceutique
Selon un autre de ses aspects, l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant, dans un milieu pharmaceutiquement acceptable, au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou au moins un vecteur d'expression de l'invention, comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.
Egalement, l'invention concerne l'utilisation d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou au moins un vecteur d'expression de l'invention comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour préparer une composition pharmaceutique pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.
Ainsi, est également considérée par l'invention, une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques, ou un vecteur d'expression conformes à l'invention comme médicament pour prévenir ou inhiber la prolifération de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer. Une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques, ou un vecteur d'expression conformes à l'invention, ou un médicament ou une composition pharmaceutique de l'invention peuvent être formulé(e)s avec tout milieu ou véhicule pharmaceutiquement acceptable, et peuvent être formulé(e)s sous toute forme solide, semi-solide, liquide ou gazeuse, telle qu'un comprimé, une capsule, une gélule, une poudre, un granule, une émulsion, une suspension, un gel, une microsphère, ou une forme inhalée.
Selon un mode de réalisation, une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques, ou un vecteur d'expression conformes à l'invention, ou une composition pharmaceutique de l'invention peuvent être formulé(e)s pour la voie orale, sous forme d'un comprimé, d'une capsule ou d'une gélule, à libération prolongé(e) ou contrôlé(e), d'une pilule, d'une poudre, d'une solution, d'une suspension, d'un sirop ou d'une émulsion.
Selon un autre mode de réalisation, une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques, ou un vecteur d'expression conformes à l'invention, ou une composition pharmaceutique de l'invention peuvent être préparé(e)s en forme injectable. Une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention peut être formulée avec différents véhicules, tels qu'un liposome ou un polymère de transfection.
Une composition pharmaceutique de l'invention peut de préférence comprendre une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques en suspension dans un véhicule pharmaceutiquement acceptable, par exemple un véhicule aqueux. Différents véhicules aqueux peuvent être utilises, par exemple de l'eau, une solution tampon saline, une solution de glycine à 0,4% ou 0,3%, ou une solution d'acide hyaluronique.
Une composition pharmaceutique peut être stérilisée par toute méthode conventionnelle connue, telle que la filtration. La solution aqueuse résultante peut être conditionnée pour être utilisée en l'état, ou être lyophilisée. Une préparation lyophilisée peut être combinée avec une solution stérile avant utilisation.
Une composition pharmaceutique de l'invention peut comprendre toute excipient pharmaceutiquement acceptable requis pour s'approcher des conditions physiologiques, tels que des agents tampons ou des agents pour ajuster le pH ou l'isotonicité, des agents mouillants. De telles préparations peuvent également comprendre des agents anti- oxydants, des agents conservateurs, des adjuvants, et éventuellement d'autres agents thérapeutiques.
Une composition pharmaceutique de l'invention comprend naturellement une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention en quantité efficace. Une quantité efficace d'une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention est une quantité qui, seule ou en combinaison avec des doses ultérieures, induit la réponse désirée, à savoir un effet antiprolifératif à l'égard des cellules cancéreuse. Une quantité efficace peut dépendre d'un ensemble varié de paramètres, tel que la voie d'administration, l'administration en dose unique ou multiple, les paramètres liés au patient incluant l'âge, la condition physique, la taille, le poids et la condition pathologique. Ces paramètres et leur influence sont bien connus de l'homme de l'art et peuvent être déterminés par toute méthode connue.
Une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention peut être administrée en une quantité allant de 0,1 mg/kg à 15 mg/kg, de préférence allant de 1 mg/kg à 5 mg/kg, et encore plus préférentiellement allant de 2 mg/kg à 3 mg/kg de poids corporel.
Une composition pharmaceutique convenant à l'invention peut comprendre au moins une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention, ou au moins un vecteur d'expression conforme à l'invention en une quantité allant de 0,1 mg/kg à 15 mg/kg, de préférence allant de 1 mg/kg à 5 mg/kg, et encore plus préférentiellement allant de 2 mg/kg à 3 mg/kg de poids corporel.
Une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques, ou un vecteur d'expression conformes à l'invention, ou une composition pharmaceutique peuvent être administrées par toute voie convenable, telle que la voie orale, buccale, sub-linguale, rectale, parentérale, intrapéritonéale, intradermale, transdermale, intra-trachéale, topique, ou ophtalmique.
Une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques ou un vecteur d'expression conformes à l'invention, ou une composition pharmaceutique de l'invention peuvent être, de préférence, administrées par injection, telle qu'une voie intra-veineuse, ou par une voie muqueuse, ou une combinaison de ces voies.
Une administration par injection peut être effectuée, par exemple, par voie intrapéritonéale, intradermique, sous-cutanée, intraveineuse ou intramusculaire.
Toute voie muqueuse peut également être mise en œuvre, telle que la voie génito- urinaire, ano-rectale, respiratoire, bucco-nasale, sublinguale, ou une combinaison de celles-ci.
Egalement, est décrit un procédé de traitement thérapeutique comprenant l'administration d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou d'au moins un vecteur d'expression de l'invention, comme agent thérapeutique antiprolifératif de cellules cancéreuses, pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer. La mise en œuvre d'un procédé de traitement thérapeutique de l'invention permet d'observer une réduction, voire une disparation, de la ou des tumeur(s) et/ou de la ou des métastase(s). Combinaison avec d'autres thérapies
Selon un autre aspect de l'invention, une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention peut être utilisée seule ou en combinaison avec d'autres traitements tels que la chirurgie, la radiothérapie, la chimiothérapie, et l'immunothérapie.
Ainsi la présente invention concerne également un produit de combinaison comprenant au moins une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention ou au moins un vecteur d'expression de l'invention, comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses, et au moins un agent de chimiothérapie ou au moins un agent d'immunothérapie, pour une utilisation simultanée, séparée ou séquentielle pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.
Un agent de chimiothérapie convenant à l'invention peut être choisi parmi des cytostatiques, des antimétabolites, des substances intercalantes de l'ADN, des composés inhibiteurs des topoisomérases I and II, des inhibiteurs de tubuline, des agents alkylants, la néocarcinostatine, la calichéamicine, la dynémicine or l'espéramicine A, des composés inhibiteurs des ribosomes, des inhibiteurs des tyrosine phosphokinases, des composés induisant la différentiation cellulaire, ou des inhibiteurs de l'histone déacétylase.
Encore plus particulièrement, un agent de chimiothérapie convenant à l'invention peut être choisi parmi des cytostatiques et des antimétabolites, telle que la 5-fluorouracile, la 5-fluoro-cytidine, la 5-fluoro-uridine, la cytosine arabinoside ou le méthotrexate, parmi des substances intercalantes de l'ADN, telle que la doxorubicine, la daunomycin, l'idarubicin, l'épirubicin ou le mitoxantrone, parmi des composes inhibiteurs des topoisomérases I and II, telles que la camptothécine, l'étoposide ou le m-AMSA, parmi des inhibiteurs de tubuline, telle que la vincristine, la vinblastine, la vindésine, le taxol, le nocodazole ou la colchicine, parmi des agents alkylants, telle que la cyclophosphamide, la mitomycin C, la rachelmycine, le cisplatine, le gaz moutarde phosphoramide, le melphalan, la bléomycine, la N-bis(2- chloroethyl)-4-hydroxyaniline, ou parmi la néocarcinostatine, la calichéamicine, la dynémicine or l'espéramicine A, ou parmi des composés inhibiteurs des ribosomes, telle que la verrucarine A, parmi des inhibiteurs des tyrosine phosphokinases, telle que la quercétine, la génistéine, l'erbstatine, la tyrphostine ou la rohitukin et ses dérivés, parmi des composés induisant la différentiation cellulaire, tel que l'acide rétinoïque, l'aide butyrique, les esters de phorbol ou l'aclacinomycine, parmi des inhibiteurs de l'histone déacétylase, tel que CI-994 ou MS275.
Une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention, ou un vecteur d'expression de l'invention peuvent également être mise en œuvre en association avec un traitement de radiothérapie.
Un traitement de radiothérapie susceptible de convenir à l'invention peut être une radiothérapie externe utilisant une source externe de rayons X, une curiethérapie consistant à mettre en contact la source radioactive avec la tumeur, ou une radiothérapie métabolique vectorielle. Ces méthodes sont connues de l'homme de l'art.
Un traitement immunothérapeutique convenant à l'invention peut comprendre l'administration d'au moins un agent d'immunothérapie choisie parmi des cytokines, telle que l'interleukine-2, des cellules du système immunitaire, notamment des cellules immunitaires du patient prélevées, activées et réinjectées à ce dernier, ou des anticorps dirigés contre les cellules cancéreuses, tels que des anticorps anti-Her2-neu ou anti-CD20.
Cancer
Une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention, ou un vecteur d'expression de l'invention, ou une composition pharmaceutique de l'invention s'avèrent être particulièrement avantageux pour réduire ou inhiber la prolifération de cellules cancéreuses.
Comme le montrent les exemples, une séquence d'acides aminés de l'invention inhibe ou réduit significativement la prolifération des cellules cancéreuses, la croissance des tumeurs et le développement des métastases.
Une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention, ou un vecteur d'expression de l'invention, sont avantageusement mis en œuvre à titre d'agent antiprolifératif de cellules cancéreuses exprimant au moins un récepteur de la famille TAM (Tyro-3, Axl ou Mer).
Selon un autre mode de réalisation, une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention, ou un vecteur d'expression de l'invention, peuvent être mis en œuvre à titre d'agent antiprolifératif de cellules cancéreuses surexprimant au moins un récepteur de la famille TAM.
Par « surexpression » d'un récepteur, on entend, au sens de l'invention, désigner un taux d'expression de ce récepteur supérieur à celui observé en moyenne chez des cellules non cancéreuses. Le taux d'expression du récepteur peut être augmenté d'environ plus de 10 fois, de préférence d'environ plus de 100 fois, et de préférence encore d'environ plus de 1000 fois par rapport au taux moyen d'expression chez une cellule non cancéreuse. Une cellule non cancéreuse susceptible d'être utilisée à titre de référence pour déterminer un taux moyen d'expression peut être une cellule non cancéreuse issue du même type de tissu ou d'organe dont est issue la cellule cancéreuse. Les tissu ou organe de référence peuvent être issus du même individu que celui ayant un cancer ou des métastases, ou d'un individu distinct présumé ne pas avoir de cancer ou de métastases.
Il est possible de déterminer l'expression d'au moins un récepteur de la famille des récepteurs TAM au niveau de cellules cancéreuses par des tests classiques de biologie moléculaire tels que l'immunoliistochimie, l'hybridation in situ et la Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction quantitative (RT-qPCR).
Selon un autre mode de réalisation, une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention, ou un vecteur d'expression de l'invention, peuvent être mis en œuvre à titre à titre d'agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir, réduire ou traiter un cancer présentant une résistance naturelle ou acquise à un traitement chimiothérapeutique ou immunothérapeutique, tels que ceux habituellement mis en œuvre.
Selon un autre mode de réalisation, une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention, ou un vecteur d'expression de l'invention peuvent être mis en œuvre à titre d'agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir, réduire ou traiter une métastase, et en particulier une métastase dont les cellules expriment ou surexpriment au moins un récepteur de la famille des récepteurs TAM.
Selon un autre mode de réalisation, une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention, ou un vecteur d'expression de l'invention peuvent être mis en œuvre à titre d'agent antiprolifératif de cellules cancéreuses choisies parmi des cellules cancéreuses pour lesquelles une expression ou une surexpression des récepteurs TAM a été observée, et en particulier de cellules cancéreuses du cancer du sein, du cancer colorectal, du cancer de l'œsophage, du cancer de l'estomac, de tumeurs stromales digestives (GIST), de tumeurs cérébrales (astrocytome), du cancer du foie, du cancer des poumons, du cancer de la peau, du cancer ovarien, de l'ostéosarcome, du cancer du pancréas, du cancer du rein, du cancer de la prostate, du cancer de la thyroïde, du cancer de l'endomètre, du sarcome de Kaposi, d'un gliome ou d'une leucémie (Verma et ah, Mol. Cancer Ther., 201 1 , Sep 20).
Selon un autre mode de réalisation, l'invention peut convenir plus particulièrement pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un mélanome, ou des métastases associées à un mélanome ou à d'autres cancers métastasant dans les poumons comme des cancers du sein, du côlon, de la prostate, du pancréas, du rein, de la thyroïde, de l'estomac, et de l'ovaire, des mélanomes, des sarcomes, des gliomes ou des leucémies. Au sens de la présente invention, « un » doit se comprendre, sauf indication contraire, au sens de « au moins un ». Egalement, au sens de l'invention, les valeurs des bornes d'un intervalle défini par l'expression « entre ... et ... » sont incluses dans l'intervalle.
Les exemples et figures ci-après sont présentés uniquement à titre d'illustration de l'invention.
Légendes des figures
Figure 1 : illustre l'inhibition de la croissance tumorale in vitro induite par la protéine S humaine à 0 (contrôle), 1 ou 10 μg/ml, appliquée sur des cellules tumorales de peau en culture pendant 24 heures (cellules B 16F 10). La prolifération des cellules est évaluée par la méthode d'incorporation du BrdU.
Figure 2 : illustre l'inhibition de la croissance tumorale in vivo par la protéine S humaine, administrée par voie intrapéritonéale, à 0 (placebo, n= 6) ou 2,5 mg/kg (protéine S, n= 6), déterminée sur des souris C57/BL/6 mâles de 9-10 semaines ayant reçu en sous-cutanée lxl 06 de cellules cancéreuses de la peau (mélanome) dénommées B16/F10 et isolées à partir d'un mélanome spontané de souris (source commerciale : American Type Culture Collection/ATCC référence : CRL-6475). Les souris ont été traitées pendant 13 jours consécutifs, puis sacrifiées et les tumeurs ont été prélevées et pesées.
Figure 3 : montre l'inhibition in vivo de la croissance de métastases par la protéine S humaine, administrée par voie intrapéritonéale, à 0 (placebo, n=10) ou 2,5 mg/kg (protéine S, n=6), déterminée sur des souris C57/BL/6 mâles de 9-10 semaines ayant reçu par voie intraveineuse 2xl05 cellules cancéreuses pulmonaires dénommées LLC (Lewis Lung Carcinoma) isolées initialement à partir de souris (Bertram et Janik, Cancer Lett, 1980, 11 :63- 73). Les souris ont été traitées pendant 14 jours consécutifs, puis sacrifiées, et les poumons ont été prélevés et pesés, et le nombre total de nodules métastatiques a été dénombré.
Figure 4 : montre le taux de survie de souris C57/BL/6 mâles de 9-10 semaines porteuses de métastases pulmonaires formées par l'injection de 2xl05 de cellules cancéreuses pulmonaires dénommées LLC isolées à partir de souris (Bertram et Janik, Cancer lett., 1980, 11 :63-73) induite par la protéine S humaine, administrée par voie intrapéritonéale, à 0 (placebo, n=5) ou 2,5 mg/kg (protéine S, n=5). Le diagramme indique le pourcentage de souris vivantes pendant une période de 35 jours.
Figure 5 : illustre l'innocuité de la protéine S humaine administrée par voie intrapéritonéale, à 0 (placebo, n=5) ou 2,5 mg/kg (protéine S, n=5), à des souris C57/BL/6 mâles de 9-10 semaines. Le diagramme montre la variation du poids des souris (en g) traitées pendant 14 jours consécutifs.
EXEMPLES
Exemple 1
Inhibition in vitro de la croissance tumorale par la protéine S humaine Des cellules cancéreuses cutanées B16/F10 (source commerciale : American Type Culture Collection/ATCC référence : CRL-6475) ont été ensemencées dans des plaques 96 puits à 3xl03 cellules/puits/ 100 μΐ de milieu basai RPMI complémenté avec du sérum de veau fœtal à une concentration finale de 10%. Les cellules sont cultivées dans un incubateur à CO2 (5% final) à 37°C. 24 heures plus tard, le milieu est retiré et remplacé par du RPMI sans sérum contenant de la bromodéoxyuridine (BrdU) à une concentration finale de 0,1 mg/ml et deux concentrations de protéine S humaine (Enzyme Research Laboratories ; Royaume-Uni), à savoir 1 μg/ml et 10 μg/ml. Les cellules ont été mises à incuber pendant 24 heures, puis le pourcentage de BrdU incorporé dans les cellules cancéreuses est déterminé selon le protocole fourni par le revendeur (Roche Diagnostics France, France, référence catalogue : 11669915001).
Comme représenté sur la Figure 1, les taux de BrdU incorporés par les cellules cancéreuses traitées avec 1 μg/ml ou 10 μg/ml ont été réduits, respectivement, à environ 70% et 60%) de la valeur contrôle.
Ces résultats montrent que le traitement des cellules cancéreuses avec la protéine S a inhibé leur prolifération et ce, d'autant plus efficacement que la concentration en protéine S est élevée. En outre, l'observation de cet effet sur des cellules en culture démontre qu'il est obtenu indépendamment d'une éventuelle action inhibitrice de l'angiogenèse.
Exemple 2
Inhibition in vivo de la croissance tumorale par la protéine S humaine Des tumeurs sous-cutanées ont été induites chez douze souris C57/BL/6 mâles de 9-10 semaines randomisées en deux groupes de 6 animaux (Griswold, Cancer Chemother Rep, 1972, 3, 315-324).
Ces groupes ont été traités par injection intrapéritonéale quotidienne de protéine S humaine à 2,5 mg/kg (protéine S), ou d'une solution saline (contrôle), pendant treize jours consécutifs.
A l'issu du traitement, les souris ont été euthanasiées par exsanguination après que les animaux aient été rendus inconscients par l'injection d'un anesthésique par voie intrapéritonéale (hydrate de chloral; 400 mg/kg) selon la réglementation européenne (European communities council directive of 24 November 1986 - 86/609/EEC), et les tumeurs ont été prélevées et pesées.
Comme illustré par la Figure 2, le poids des tumeurs pour le groupe « placebo » est compris entre environ 1400 mg et 2300 mg tandis que le poids des tumeurs pour le groupe « Protéine S » est compris entre environ 700 mg et 1500 mg. Ainsi, le traitement des souris avec la protéine S a conduit à une diminution significative du poids des tumeurs de près de 40%.
Exemple 3
Inhibition in vivo de la croissance des métastases pulmonaires par la protéine S humaine
2xl05 de cellules cancéreuses pulmonaires dénommées LLC isolées initialement à partir de souris (Bertram et Janik) dans 100 μΐ de tampon phosphate salin (PB S, Phosphate- buffered Salin) ont été injectées par voie intraveineuse chez seize souris C57/BL/6 mâles de 9- 10 semaines, randomisées en deux groupes.
Ces groupes ont été traités par injection intrapéritonéale quotidienne de protéine S à 2,5 mg/kg (protéine S, n=6), ou d'une solution saline (contrôle, n=10) pendant quatorze jours consécutifs.
A l'issu du traitement, les souris ont été euthanasiées par exsanguination après que les animaux aient été rendus inconscients par l'injection d'un anesthésique par voie intrapéritonéale (hydrate de chloral; 400 mg/kg) selon la réglementation européenne (European communities council directive of 24 November 1986 - 86/609/EEC), et les poumons ont été prélevés et pesés. Le nombre total de nodules métastatiques est dénombré par comptage manuel à l'aide d'un microscope binoculaire. Comme indiqué Figure 3, le nombre de nodules pour le groupe « placebo » est compris entre environ 60 et 220 alors que le nombre de nodules pour le groupe « protéine S » est compris entre environ 40 et 110. Ces résultats indiquent que le nombre de métastases pulmonaires a été signifïcativement réduit par le traitement avec la protéine S.
Exemple 4
Taux de survie de souris porteuses de métastases pulmonaires par la protéine S humaine
2xl05 de cellules cancéreuses pulmonaires dénommées LLC isolées initialement à partir de souris (Bertram et Janik, Cancer lett., 1980, 11 :63-73) dans 100 μΐ de tampon phoshate salin (PBS, Phosphate-buffered Salin) ont été injectées par voie intraveineuse chez dix souris C57/BL/6 mâles de 9-10 semaines, randomisées en deux groupes, constitué chacun de cinq souris.
Un groupe a été traité par injection intrapéritonéale d'une solution saline (« placebo ») et l'autre par une solution de protéine S humaine à 2,5 mg/kg (« protéine S) ». Le traitement est administré tous les deux jours jusqu'à la mort des souris.
La Figure 4 montre qu'après une période de 25 jours, aucune des souris du groupe « placebo » n'a survécu, alors qu'après cette même période, 40 % des souris ayant reçu la protéine S humaine sont demeurées vivantes. Et du 26eme au 32eme jour, 20 % des souris ont encore survécu. Le traitement des souris porteuses de métastases pulmonaires avec la protéine S humaine a permis d'accroître sensiblement leur survie à l'égard du groupe « placebo ».
Exemple 5
Innocuité de la protéine S humaine
Six souris C57/BL/6 mâles de 9-10 semaines, randomisées en deux groupes, constitué chacun de trois souris, ont été traitées par administration intrapéritonéale quotidienne, d'une solution saline (placebo) ou de 2,5 mg/kg de protéine S humaine (protéine
S), pendant quatorze jours consécutifs. Pendant cette période le poids des souris a été mesuré tous les deux jours à l'aide d'une balance.
La Figure 5 indique que le poids des souris varie sensiblement de la même manière entre le groupe « protéine S » et le groupe « placebo ». Aucun signe d'affaiblissement de l'organisme, c'est-à-dire de cachexie n'a été observé.
A l'issu du traitement, les souris ont été euthanasiées par exsanguination après que les animaux aient été rendus inconscients par l'injection d'un anesthésique par voie intrapéritonéale (hydrate de chloral; 400 mg/kg) selon la réglementation européenne (European communities council directive of 24 November 1986 - 86/609/EEC), et un examen visuel de la cavité abdominale a été effectué pour rechercher la présence de liquide dans l'abdomen. L'absence d'observation de réaction inflammatoire ou d'ascite au niveau de la cavité abdominale indique une bonne tolérance de la protéine S pendant le traitement.
Les différents résultats obtenus ci-dessus démontrent que la protéine S inhibe fortement et de façon reproductible la prolifération et la croissance tumorale, indépendamment d'un éventuel effet anti-angiogénique. Par ailleurs, la protéine S se révèle particulièrement dénuée de toxicité ou d'effet secondaire sur les cellules ou organisme sain.
Ainsi, l'ensemble de ces données fait de la protéine S un actif thérapeutique particulièrement intéressant pour le traitement, la prévention ou la réduction de pathologies impliquant la prolifération de cellules cancéreuses, telle que le cancer du poumon, les mélanomes, les gliomes, ou les leucémies, ainsi que les métastases.
BIBLIOGRAPHIE
Wimmel A, Rohner I, Ramaswamy A, Heidtmann HH, Seitz R, Kraus M, Schuermann M. (1999). Synthesis and sécrétion of the anticoagulant protein S and coexpression of the Tyro3 receptor in human lung carcinoma cells. Cancer, 86:43-49.
Benzakour O, Gely A, Lara R, Coronas V. (2007), [Gas-6 and protein S : vitamin K-dependent factors and ligands for the TAM tyrosine kinase receptors family]. Med Sci (Paris), 23:826-833.
Linger RM, Keating AK, Earp HS, Graham DK. (2008). TAM receptor tyrosine kinases: biologie functions, signaling, and potential therapeutic targeting in human cancer. Adv Cancer Res, 100:35-83.
Ou WB, Corson JM, Flynn DL, Lu WP, Wise SC, Bueno R. Sugarbaker DJ, Fletcher JA. (2011). AXL régulâtes mesothelioma prolifération and invasiveness. Oncogene, 30:1643-1652.
Vuoriluoto K, Haugen H. Kiviluoto S. Mpindi JP, Nevo J. Gjerdrum C, Tiron C.
Lorens JB, Ivaska J. (2010). Vimentin régulâtes EMT induction by Slug and oncogenic H-Ras and migration by governing Axl expression in breast cancer. Oncogene, 30:1436-1448.
Song X. Wang H., Logsdon CD, Rashid A., Fleming JB, Abbruzzese JL, Gomez HF, Evans DB, Wang H. (2011). Overexpression of receptor tyrosine kinase Axl promûtes tumor cell invasion and survival in pancreatic ductal adenocarcinoma. Cancer, 117:734-743.
Rankin EB, Fub KC, Taylor TE, Krieg AJ. Musser M. Yuan J. Wei K, Kuo CJ, Longacre TA, Giacca AJ. (2010). AXL is an essential factor and therapeutic target for metastatic ovarian cancer. Cancer Res, 70:7570-7579.
Linger RM, Keating AK, Earp HS, Graham DK. (2010). Taking aim at Mer and Axl receptor tyrosine kinases as novel therapeutic targets in solid tumors. Expert Opin Ther Targets, 14:1073-1090.
HE I, Zhang J, Jiang L, Jin C, Zhao Y, Yang G, Jia I. (2010). Differential expression of Axl in hepatocellular carcinoma and corrélation with tumor lymphatic metastasis. Mol Carcinog, 49:880-891.
Ye X, Li Y, Stawicki S, Couto S, Eastham-Anderson J. Kallop D, Weimer R. Wu
Y, Pei I. (2010). An anti-Axl monoclonal antibody atténuâtes xenograft tumor growth and enhances the effect of multiple anticancer thérapies. Oncogene, 29:5254-5264.
Keating AK, Kim GK, Jones AE, Donson AM, Ware K, Mulcahy JM, Salzberg DB, Foreman NK, Liang X, Thorburn A, Graham DK. (2010). Inhibition of Mer and Axl receptor tyrosine kinases in astrocytoma cells leads to increased apoptosis and improved chemosensitivity. Mol Cancer Ther, 9: 1298-1307.
Shiozawa Y, Pedersen EA. Patel L.R. Ziegler AM, Havens AM, Jung Y, Wang J, Zalucha S. Loberg RD. Pienta KJ, Taichman RS. (2010). GAS6/AXI axis régulâtes prostate cancer invasion, prolifération, and survival in the bone marrow niche. Neoplasia, 12:116-126.
Bertram JS, Janik P. (1980). Establishment of a cloned line of Lewis Lung Carcinoma cells adapted to cell culture. Cancer Lett, 11 :63-73.
Dahlbâck B. (1983). Purification ofhuman vitamin K-dependent protein S and its limited proteolysis by thrombin. Biochem J, 209:837-846.
Verma A, Warner SL, Vankayalapati H, Bearss DJ, Sharma S. (2011). Targeting
Axl and Mer kinases in cancer. Mol Cancer Ther (Epub ahead of print).
Griswold DP. (1972). Considération of the subcutaneously implanted B16 melanoma as a screening model for potential anticancer agents. Cancer Chemother Rep, 3:315-324.
LISTAGE DE SEQUENCES
SEQ ID NO: 1 (NCBI NP 000304.2)
MRVLGGRCGALLACLLLVLPVSEANFLSKQQASQVLVRKRRANSLLEETKQGNLERECIEELCNKEEARE VFENDPETDYFYPKYLVCLRSFQTGLFTAARQSTNAYPDLRSCVNAIPDQCSPLPCNEDGYMSCKDGKAS FTCTCKPGWQGEKCEFDINECKDPSNINGGCSQICDNTPGSYHCSCKNGFVMLSNKKDCKDVDECSLKPS ICGTAVCKNIPGDFECECPEGYRYNLKSKSCEDIDECSENMCAQLCVNYPGGYTCYCDGKKGFKLAQDQK SCEWSVCLPLNLDTKYELLYLAEQFAGWLYLKFRLPEISRFSAEFDFRTYDSEGVILYAESIDHSAWL LIALRGGKIEVQLKNEHTSKITTGGDVINNGLWNMVSVEELEHSISIKIAKEAVMDINKPGPLFKPENGL LETKVYFAGFPRKVESELIKPINPRLDGCIRSWNLMKQGASGIKEI IQEKQNKHCLVTVEKGSYYPGSGI AQFHIDYNNVSSAEGWHVNVTLNIRPSTGTGVMLALVSGNNTVPFAVSLVDSTSEKSQDILLSVENTVIY RIQALSLCSDQQSHLEFRVNRNNLELSTPLKIETISHEDLQRQLAVLDKAMKAKVATYLGGLPDVPFSAT PVNAFYNGCMEVNINGVQLDLDEAISKHNDIRAHSCPSVWKKTKNS
SEQ ID NO: 2 (NCBI NM 000313.3 Région 342-2372)
ATGAGGGTCCTGGGTGGGCGCTGCGGGGCGCTGCTGGCGTGTCTCCTCCTAGTGCTTCCCGTCTCAGAGG CAAACTTTTTGTCAAAGCAACAGGCTTCACAAGTCCTGGTTAGGAAGCGTCGTGCAAATTCTTTACTTGA AGAAACCAAACAGGGTAATCTTGAAAGAGAATGCATCGAAGAACTGTGCAATAAAGAAGAAGCCAGGGAG GTCTTTGAAAATGACCCGGAAACGGATTATTTTTATCCAAAATACTTAGTTTGTCTTCGCTCTTTTCAAA CTGGGTTATTCACTGCTGCACGTCAGTCAACTAATGCTTATCCTGACCTAAGAAGCTGTGTCAATGCCAT TCCAGACCAGTGTAGTCCTCTGCCATGCAATGAAGATGGATATATGAGCTGCAAAGATGGAAAAGCTTCT TTTACTTGCACTTGTAAACCAGGTTGGCAAGGAGAAAAGTGTGAATTTGACATAAATGAATGCAAAGATC CCTCAAATATAAATGGAGGTTGCAGTCAAATTTGTGATAATACACCTGGAAGTTACCACTGTTCCTGTAA AAATGGTTTTGTTATGCTTTCAAATAAGAAAGATTGTAAAGATGTGGATGAATGCTCTTTGAAGCCAAGC ATTTGTGGCACAGCTGTGTGCAAGAACATCCCAGGAGATTTTGAATGTGAATGCCCCGAAGGCTACAGAT ATAATCTCAAATCAAAGTCTTGTGAAGATATAGATGAATGCTCTGAGAACATGTGTGCTCAGCTTTGTGT CAATTACCCTGGAGGTTACACTTGCTATTGTGATGGGAAGAAAGGATTCAAACTTGCCCAAGATCAGAAG AGTTGTGAGGTTGTTTCAGTGTGCCTTCCCTTGAACCTTGACACAAAGTATGAATTACTTTACTTGGCGG AGCAGTTTGCAGGGGTTGTTTTATATTTAAAATTTCGTTTGCCAGAAATCAGCAGATTTTCAGCAGAATT TGATTTCCGGACATATGATTCAGAAGGCGTGATACTGTACGCAGAATCTATCGATCACTCAGCGTGGCTC CTGATTGCACTTCGTGGTGGAAAGATTGAAGTTCAGCTTAAGAATGAACATACATCCAAAATCACAACTG GAGGTGATGTTATTAATAATGGTCTATGGAATATGGTGTCTGTGGAAGAATTAGAACATAGTATTAGCAT TAAAATAGCTAAAGAAGCTGTGATGGATATAAATAAACCTGGACCCCTTTTTAAGCCGGAAAATGGATTG CTGGAAACCAAAGTATACTTTGCAGGATTCCCTCGGAAAGTGGAAAGTGAACTCATTAAACCGATTAACC CTCGTCTAGATGGATGTATACGAAGCTGGAATTTGATGAAGCAAGGAGCTTCTGGAATAAAGGAAATTAT TCAAGAAAAACAAAATAAGCATTGCCTGGTTACTGTGGAGAAGGGCTCCTACTATCCTGGTTCTGGAATT GCTCAATTTCACATAGATTATAATAATGTATCCAGTGCTGAGGGTTGGCATGTAAATGTGACCTTGAATA TTCGTCCATCCACGGGCACTGGTGTTATGCTTGCCTTGGTTTCTGGTAACAACACAGTGCCCTTTGCTGT GTCCTTGGTGGACTCCACCTCTGAAAAATCACAGGATATTCTGTTATCTGTTGAAAATACTGTAATATAT CGGATACAGGCCCTAAGTCTATGTTCCGATCAACAATCTCATCTGGAATTTAGAGTCAACAGAAACAATC TGGAGTTGTCGACACCACTTAAAATAGAAACCATCTCCCATGAAGACCTTCAAAGACAACTTGCCGTCTT GGACAAAGCAATGAAAGCAAAAGTGGCCACATACCTGGGTGGCCTTCCAGATGTTCCATTCAGTGCCACA CCAGTGAATGCCTTTTATAATGGCTGCATGGAAGTGAATATTAATGGTGTACAGTTGGATCTGGATGAAG CCATTTCTAAACATAATGATATTAGAGCTCACTCATGTCCATCAGTTTGGAAAAAGACAAAGAATTCTTA A

Claims

REVENDICATIONS
1. Séquence d'acides aminés isolée, consistant en SEQ ID NO: 1, un homologue de celle-ci présentant une homologie d'au moins 80% avec ladite séquence et une activité biologique similaire, ou un fragment actif consistant en 280 à 675 acides aminés contigus de ladite séquence ou dudit homologue, pour une utilisation comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.
2. Séquence pour une utilisation selon la revendication 1, ladite séquence étant la séquence d'acides aminés de la protéine S humaine.
3. Séquence pour une utilisation selon la revendication 1 ou 2, comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses exprimant au moins un récepteur de la famille TAM.
4. Séquence pour une utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes prévenir, réduire ou traiter un cancer présentant une résistance naturelle ou acquise à un traitement chimiothérapeutique ou immunothérapeutique.
5. Séquence pour une utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter une métastase.
6. Séquence pour une utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses choisies parmi des cellules cancéreuses du cancer du sein, du cancer colorectal, du cancer de l'œsophage, du cancer de l'estomac, de tumeurs stromales digestives, de tumeurs cérébrales, du cancer du foie, du cancer des poumons, du cancer de la peau, du cancer ovarien, de l'ostéosarcome, du cancer du pancréas, du cancer du rein, du cancer de la prostate, du cancer de la thyroïde, du cancer de l'endomètre, et du sarcome de Kaposi.
7. Séquence pour une utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, ladite séquence étant administrée en une quantité allant de 0,1 mg/kg à 15 mg/kg, de préférence allant de 1 mg/kg à 5 mg/kg, et encore plus préférentiellement allant de 2 mg/kg à 3 mg/kg de poids corporel.
8. Séquence d'acides nucléiques isolée codant pour une séquence d'acides aminés telle que définie pour une utilisation selon la revendication 1 ou 2, pour une utilisation comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.
9. Vecteur d'expression comprenant une séquence d'acides nucléiques telle que définie pour une utilisation selon la revendication 8, pour une utilisation comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.
10. Composition pharmaceutique comprenant, dans un milieu pharmaceutiquement acceptable, au moins une séquence d'acides aminés telle que définie selon la revendication 1 ou 2, ou au moins une séquence d'acides nucléiques telle que définie en revendication 8, ou au moins un vecteur d'expression tel que défini en revendication 9 pour une utilisation comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.
11. Produit de combinaison comprenant au moins une séquence d'acides aminés telle que définie selon la revendication 1 ou 2, ou au moins une séquence d'acides nucléiques telle que définie en revendication 8, ou au moins un vecteur d'expression tel que défini en revendication 9, pour une utilisation comme agent antiprolifératif de cellules cancéreuses, et au moins un agent de chimiothérapie ou au moins un agent d'immunothérapie, pour une utilisation simultanée, séparée ou séquentielle pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un cancer.
EP12813101.8A 2011-11-14 2012-11-12 Utilisation de la protéine s pour traiter le cancer Withdrawn EP2780028A1 (fr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1160315A FR2982490A1 (fr) 2011-11-14 2011-11-14 Utilisation de la proteine s pour traiter le cancer.
PCT/IB2012/056351 WO2013072836A1 (fr) 2011-11-14 2012-11-12 Utilisation de la protéine s pour traiter le cancer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EP2780028A1 true EP2780028A1 (fr) 2014-09-24

Family

ID=47522736

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP12813101.8A Withdrawn EP2780028A1 (fr) 2011-11-14 2012-11-12 Utilisation de la protéine s pour traiter le cancer

Country Status (3)

Country Link
EP (1) EP2780028A1 (fr)
FR (1) FR2982490A1 (fr)
WO (1) WO2013072836A1 (fr)

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6593291B1 (en) * 1997-02-06 2003-07-15 Entremed, Inc. Compositions and methods of use of ligands that bind components of the blood coagulation/clotting pathway for the treatment of cancer and angiogenic-based disease
KR20090090944A (ko) * 2008-02-22 2009-08-26 전남대학교산학협력단 Ａｘｌ 신호에 의해 조절되는 ＬＩＧＨＴ의 종양억제 또는치료제의 스크리닝 방법
CA2791841C (fr) * 2010-03-05 2023-01-03 Rigshospitalet Molecules chimeriques inhibitrices d'activation du complement

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NEEDLEMAN S B ET AL: "A general method applicable to the search for similarities in the amino acid sequence of two proteins", JOURNAL OF MOLECULAR BIOLOGY, ACADEMIC PRESS, UNITED KINGDOM, vol. 48, no. 3, 28 March 1970 (1970-03-28), pages 443 - 453, XP024011703, ISSN: 0022-2836, [retrieved on 19700328], DOI: 10.1016/0022-2836(70)90057-4 *
See also references of WO2013072836A1 *

Also Published As

Publication number Publication date
FR2982490A1 (fr) 2013-05-17
WO2013072836A1 (fr) 2013-05-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102308798B1 (ko) 다양한 암의 면역요법 치료에서의 사용을 위한 펩티드, 펩티드의 조합 및 골격
Pandolfi et al. Cooperative integration between HEDGEHOG-GLI signalling and other oncogenic pathways: implications for cancer therapy
EP2476698B1 (fr) Vaccins de peptide pour cancers exprimant les polypeptides DEPDC1
JP5650639B2 (ja) 腫瘍疾患の治療
EA023378B1 (ru) Композиция опухолеассоциированных пептидов и относящаяся к ним противораковая вакцина для лечения глиобластомы (gbm) и других видов рака
EP3089749B1 (fr) Préparations combinées pour le traitement du cancer
ES2796973T3 (es) Métodos y composiciones para reducir el crecimiento, la migración y la invasividad de células madre de cáncer cerebral y mejorar la supervivencia de pacientes con tumores cerebrales
WO2021229221A2 (fr) Protéines chimères et agents thérapeutiques
CN115212309B (zh) 预防癌症复发，抑制或逆转正常组织炎症化和癌化的方法、应用和药物
US11464784B2 (en) Inhibition of aminocylase 3 (AA3) in the treatment of cancer
ES2870909T3 (es) Usos de un compuesto en la preparación de fármacos para el tratamiento del glioma cerebral
Tao et al. Antitumor efficacy of a recombinant EGFR-targeted fusion protein conjugate that induces telomere shortening and telomerase downregulation
EP2780028A1 (fr) Utilisation de la protéine s pour traiter le cancer
KR102574252B1 (ko) 펩티드 핵산 복합체를 유효성분으로 함유하는 췌장암 예방 또는 치료용 조성물
KR102242900B1 (ko) Slc1a5 전사물 변이체를 이용한 항암용 조성물, 항암제 스크리닝 방법 및 암 진단 방법
Löhr et al. Novel treatments and therapies in development for pancreatic cancer
Rahmy Overcoming Resistance to Immune Checkpoint Blockade Therapy
Pirozzi et al. Tumor-Specific Mutations in Gliomas and Their Implications for Immunotherapy
WO2023033189A1 (fr) Amélioration de l'immunogénicité tumorale au moyen d'un composé régulant l'épissage
US20240247031A1 (en) Composition for treating cancer containing telomerase-targeting gnrh antagonist-derived peptide hs1002
Udvorková et al. Antibody-drug conjugates as a novel therapeutic modality to treat recurrent refractory germ cell tumors
Saya MS 26.01 Therapeutic Strategies Targeting Cancer Stem Cells
Lee Identification and Characterization of Tumor Specific Antigens in Pediatric Diffuse Midline Gliomas
CN118843641A (zh) 肾素原受体肽、缀合物及药物组合物
WO2019147658A1 (fr) Méthodes et compositions de peptide alpha il-1 intracellulaire

Legal Events

Date Code Title Description
PUAI Public reference made under article 153(3) epc to a published international application that has entered the european phase

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009012

17P Request for examination filed

Effective date: 20140616

AK Designated contracting states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LI LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR

DAX Request for extension of the european patent (deleted)
17Q First examination report despatched

Effective date: 20160711

STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: EXAMINATION IS IN PROGRESS

STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: THE APPLICATION IS DEEMED TO BE WITHDRAWN

18D Application deemed to be withdrawn

Effective date: 20161222