FR2968994A1 - Procede de preparation de nanoparticules - Google Patents

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Abstract

La présente invention concerne un nouveau procédé de préparation de nanoparticules de diamètre inférieur ou égal à 500 nm, comprenant la mise en présence d'une solution (1) comprenant des nanoparticules d'un premier polyélectrolyte à l'état chargé, porteur de groupements latéraux hydrophobes, avec (2) au moins un second polyélectrolyte de polarité opposée à celle du premier polyélectrolyte, caractérisé en ce que le rapport Z du nombre de groupements cationiques par rapport au nombre de groupements anioniques dans le mélange des deux polyélectrolytes est compris entre 0,1 et 0,75 ou entre 1,3 et 2 ; et la concentration massique totale C en polyélectrolytes est strictement inférieure à 2 mg/g du mélange.

Description

L'invention concerne un nouveau procédé de préparation de nanoparticules, à partir du mélange spécifique de deux polyélectrolytes de polarité opposée, le cas échéant combinées à un actif. Les formulations d'actif doivent répondre à un certain nombre de critères de tolérance, être suffisamment concentrées en actif, tout en possédant une faible viscosité pour permettre une injection aisée au travers d'une aiguille de faible diamètre, par exemple une aiguille de gauge 27 à 31 G. Dans ce domaine, la société déposante est parvenue à mettre au point, comme présenté dans le document WO 2008/135561, des suspensions stables et de faible viscosité, constituées de microparticules chargées en principe actif. Ces microparticules, aptes à libérer le principe actif sur une durée prolongée, sont plus particulièrement formées à partir du mélange, dans des conditions spécifiques, de deux polymères polyélectrolytes (PE1) et (PE2) de polarité opposée, l'un au moins étant porteur de groupements hydrophobes. Ce mélange conduit à des microparticules de taille comprise entre 1 et 100 µm.
Toutefois, les formulations de microparticules ne conviennent pas à une administration intraveineuse et peuvent, dans le cadre d'une administration par voie sous-cutanée, poser des problèmes d'intolérance. Par conséquent, dans la perspective d'une administration de principes actifs par voie parentérale, notamment intraveineuse ou sous-cutanée, il serait préférable de disposer de suspensions de particules de taille encore plus réduite et notamment, à l'échelle nanométrique. Il demeure donc un besoin d'un procédé de préparation de suspensions stables de nanoparticules d'actif, particulièrement adaptées à une administration par voie parentérale, notamment intraveineuse.
La présente invention vise précisément à proposer un nouveau procédé permettant d'obtenir de telles suspensions de nanoparticules. Contre toute attente, les inventeurs ont découvert qu'il est possible d'obtenir des formulations fluides de nanoparticules, le cas échéant chargées en actif, à partir d'un mélange particulier de polyélectrolytes spécifiques.
Plus précisément, la présente invention concerne, selon un premier de ses aspects, un procédé de préparation de nanoparticules de diamètre moyen inférieur ou égal à 500 nm, comprenant au moins les étapes consistant à : (1) disposer d'une solution aqueuse comprenant des nanoparticules d'un premier polyélectrolyte à l'état chargé et porteur de groupements latéraux hydrophobes ; (2) mettre en présence ladite solution (1) avec au moins un second polyélectrolyte de polarité opposée à celle du premier polyélectrolyte, avec le polyélectrolyte cationique étant ajouté à une solution de polyélectrolyte anionique pour former un mélange à excès de charge anionique ; ou le polyélectrolyte anionique étant ajouté à une solution de polyélectrolyte cationique pour former un mélange à excès de charge cationique ; et (3) disposer des nanoparticules ainsi formées ; avec : - lesdits polyélectrolytes anionique et cationique possédant un squelette linéaire de type polyaminoacide, dépourvu de groupements latéraux de type polyalkylène glycol, et présentant un degré de polymérisation inférieur ou égal à 2.000 ; - le rapport molaire Z du nombre de groupements cationiques par rapport au nombre de 15 groupements anioniques du mélange des deux polyélectrolytes étant compris entre 0,1 et 0,75 ou entre 1,3 et 2 ; et - la concentration massique totale C en polyélectrolytes étant strictement inférieure à 2 mg/g dudit mélange. Selon un mode de réalisation particulier, le procédé de l'invention comprend 20 ultérieurement à l'étape (3), une ou plusieurs étapes (4) de concentration, notamment par ultrafiltration tangentielle ou frontale, centrifugation, évaporation ou lyophilisation. Selon une variante de réalisation du procédé de l'invention, dans le cas où Z est compris entre 0,1 et 0,75, autrement dit lorsque le mélange final des polyélectrolytes est en excès de charge anionique, l'étape (1) consiste à préparer une solution aqueuse de 25 nanoparticules d'un polyélectrolyte anionique. L'étape (2) consiste alors à ajouter le polyélectrolyte cationique, notamment sous la forme d'une solution aqueuse, à la solution du premier polyélectrolyte placée préférentiellement sous agitation modérée. Inversement, dans le cas où Z est compris entre 1,3 et 2, autrement dit lorsque le mélange final des polyélectrolytes est en excès de charge cationique, l'étape (1) consiste 30 à préparer une solution aqueuse de nanoparticules d'un polyélectrolyte cationique. L'étape (2) consiste alors à ajouter le polyélectrolyte anionique, notamment sous la forme d'une solution aqueuse, à la solution du premier polyélectrolyte placée préférentiellement sous agitation modérée. Le procédé de l'invention est particulièrement avantageux, au regard des spécificités de son étape (2), pour prévenir la formation de particules non conformes à l'invention, c'est-à-dire de diamètre moyen strictement supérieur à 500 nm. Selon un mode de réalisation particulièrement avantageux, les nanoparticules de la solution aqueuse de l'étape (1) sont associées de manière non covalente à un actif. Une telle solution aqueuse de nanoparticules d'actif est obtenue par ajout de l'actif à une solution colloïdale aqueuse du premier polyélectrolyte, ledit actif s'associant de manière non covalente aux nanoparticules du premier polyélectrolyte. Les formulations de nanoparticules obtenues à l'issue du procédé de l'invention s'avèrent avantageuses à plusieurs titres. Tout d'abord, la taille nanométrique des particules obtenues par le procédé de l'invention est particulièrement bien adaptée à une administration de la formulation d'actifs par voie intraveineuse ou sous-cutanée. La présente invention s'avère ainsi particulièrement avantageuse au regard de l'administration par voie parentérale d'actifs utilisés pour le traitement des cancers. Par ailleurs, les polyélectrolytes mis en oeuvre dans le procédé de l'invention sont biocompatibles. Ils sont parfaitement tolérés et se dégradent rapidement, c'est-à-dire 20 sur une échelle de temps de quelques jours à quelques semaines.
Les nanoparticules obtenues par le procédé de l'invention, associées à des actifs, s'avèrent particulièrement avantageuses pour véhiculer des actifs, en particulier des actifs protéiniques, peptidiques, et/ou solubiliser des actifs de faible masse moléculaire. 25 En particulier, ces nanoparticules sont avantageusement aptes à libérer l'actif sur une durée prolongée. Les nanoparticules chargées en actif obtenues selon le procédé de l'invention présentent, de manière avantageuse, une densité élevée. Une telle densité permet de ralentir la libération par effet de barrière stérique (effet matrice), effet additionnel à l'association 30 non covalente de l'actif aux nanoparticules de polyélectrolytes. Par ailleurs, une suspension de nanoparticules selon l'invention présente avantageusement une excellente stabilité. Le mélange obtenu à l'issue du procédé de l'invention peut subir ultérieurement une ou plusieurs étapes de concentration, notamment par ultrafiltration tangentielle ou frontale, centrifugation, évaporation ou lyophilisation, sans nuire aux propriétés physicochimiques de la suspension, en particulier en termes de viscosité, taille des particules, stabilité colloïdale ou chimique. Il est ainsi possible selon l'invention d'accéder à une suspension stable de nanoparticules, fluide et suffisamment concentrée. Par ailleurs, la suspension de nanoparticules selon l'invention peut être formée extemporanément au moment de l'administration par simple mélange de deux suspensions liquides préparées comme décrit ci-dessus. Ainsi, ces suspensions de nanoparticules peuvent facilement être stockées, permettant d'envisager un coût de production limité à l'échelle industrielle. Enfin, l'actif est mis en oeuvre dans un procédé aqueux ne nécessitant pas de température excessive, de cisaillement important, de tensioactif, ni de solvant organique, ce qui permet avantageusement d'éviter toute dégradation potentielle de l'actif. Une telle caractéristique apparaît particulièrement avantageuse au regard de certains actifs, tels que des peptides et protéines, pouvant potentiellement être dégradés lorsqu'ils sont soumis aux conditions précitées. D'autres caractéristiques, avantages et modes d'application du procédé selon l'invention ressortiront mieux à la lecture de la description qui va suivre.
Dans la suite du texte, les expressions « compris entre ... et ... », « allant de ... à ... » et « variant de ... à ... » sont équivalentes et entendent signifier que les bornes sont incluses, sauf mention contraire.
POLYELECTROLYTES Comme précisé précédemment, le procédé de l'invention met en oeuvre le mélange d'au moins deux polyélectrolytes de polarité opposée, autrement dit, d'au moins un polyélectrolyte anionique et d'au moins un polyélectrolyte cationique. Par «polyélectrolyte », on entend au sens de la présente invention, un polymère porteur de groupements capables de s'ioniser dans l'eau, en particulier à pH allant de 5 à 8, ce qui crée une charge sur le polymère. Ainsi, en solution dans un solvant polaire comme l'eau, un polyélectrolyte se dissocie, faisant apparaître des charges sur son squelette et les contre-ions en solution.
Les polyélectrolytes selon l'invention peuvent comprendre un ensemble de groupes électrolytes identiques ou différents.
Sauf indication contraire, les polyélectrolytes sont décrits dans toute la suite de la description, tels qu'ils se présentent à la valeur de pH de mélange des polyélectrolytes anionique et cationique lors de l'étape (2) du procédé de l'invention. La qualification d'un groupement de « cationique » ou d'« anionique » est par exemple considérée au regard de la charge portée par ce groupement à cette valeur du pH de mélange des polyélectrolytes anionique et cationique. De même, la polarité d'un polyélectrolyte est définie au regard de la charge globale portée par ce polyélectrolyte à cette valeur du pH. Plus particulièrement, on entend par «polyélectrolyte anionique », un polyélectrolyte présentant une charge globale négative à la valeur de pH de mélange des deux polyélectrolytes. De même, on entend par «polyélectrolyte cationique », un polyélectrolyte 15 présentant une charge globale positive à la valeur de pH de mélange des deux polyélectrolytes. Par « charge globale » d'un polyélectrolyte, on entend la somme algébrique de toutes les charges positives et négatives portées par ce polyélectrolyte.
20 De préférence, la valeur du pH de mélange des polyélectrolytes anionique et cationique conduisant à la formation des nanoparticules va de 5 à 8, de préférence de 6 à 7,5. En particulier, selon un mode de réalisation particulièrement préféré, la solution aqueuse (1) possède une valeur de pH allant de 5 à 8, notamment de 6 à 7,5 et plus 25 particulièrement d'environ 7. Selon un mode de réalisation particulier, l'étape (2) du procédé de l'invention comprend au moins : - la préparation d'une solution aqueuse du second polyélectrolyte, en particulier de valeur de pH allant de 5 à 8, et avantageusement de valeur de pH identique à 30 celle de la solution aqueuse (1) ; et - le mélange de ladite solution aqueuse du second polyélectrolyte avec ladite solution aqueuse (1).
Selon un des aspects de l'invention, le premier polyélectrolyte est porteur de groupements latéraux hydrophobes. Ce polyélectrolyte est en particulier apte à former spontanément, lorsqu'il est mis en dispersion dans un milieu aqueux de pH allant de 5 à 8, notamment l'eau, des nanoparticules.
Sans vouloir être lié par la théorie, on peut avancer que l'association supramoléculaire des groupements hydrophobes pour former des domaines hydrophobes, conduit à la formation de nanoparticules. Chaque nanoparticule est ainsi constituée par une ou plusieurs chaînes de polyélectrolytes plus ou moins condensées autour de ces domaines hydrophobes.
De préférence, les nanoparticules formées par le premier polyélectrolyte, porteur de groupements latéraux hydrophobes, présentent un diamètre moyen allant de 10 à 100 nm, en particulier de 10 à 70 nm, et plus particulièrement allant de 10 à 50 nm.
Selon un autre mode de réalisation particulier, le second polyélectrolyte de l'étape (2) du procédé de l'invention est également porteur de groupements hydrophobes. Il peut également être apte à former, lorsqu'il est mis en dispersion dans un milieu aqueux de pH allant de 5 à 8, notamment l'eau, des nanoparticules.
Squelette linéaire de type polyaminoacide Comme évoqué précédemment, les polyélectrolytes considérés selon l'invention possèdent un squelette linéaire de type polyaminoacide, c'est-à-dire comprenant des résidus acide aminé. De manière avantageuse, les polyélectrolytes selon l'invention sont biodégradables.
Au sens de l'invention, le terme «polyaminoacide» couvre aussi bien les polyaminoacides naturels que les polyaminoacides synthétiques. Les polyaminoacides sont des polymères linéaires, composés avantageusement d'alpha-aminoacides liés par des liaisons peptidiques. Il existe de nombreuses techniques synthétiques pour former des polymères à blocs ou statistiques, des polymères à chaînes multiples et des polymères contenant une séquence déterminée d'aminoacides (cf. Encyclopedia of Polymer Science and Engineering, volume 12, page 786 ; John Wiley & Sons).
L'homme de l'art est à même de par ses connaissances de mettre en oeuvre ces techniques pour accéder aux polymères convenant à l'invention. En particulier, il pourra également se référer à l'enseignement des documents WO 96/29991, WO 03/104303, WO 2006/079614 et WO 2008/135563.
Selon une variante de réalisation préférée, la chaîne polyaminoacide est constituée d'un homopolymère d'alpha-L-glutamate ou d'acide alpha-L-glutamique. Selon une autre variante de réalisation, la chaîne polyaminoacide est constituée d'un homopolymère d'alpha-L-aspartate ou d'acide alpha-L-aspartique. Selon une autre variante de réalisation, la chaîne polyaminoacide est constituée 10 d'un copolymère d'alpha-L-aspartate/alpha-L-glutamate ou d'acide alpha-L-aspartique/alpha-L glutamique. De tels polyaminoacides sont notamment décrits dans les documents WO 03/104303, WO 2006/079614 et WO 2008/135563 dont le contenu est incorporé par référence. Ces polyaminoacides peuvent également être du type de ceux décrits dans la 15 demande de brevet WO 00/30618. Ces polymères peuvent être obtenus par des méthodes connues de l'homme de l'art. Un certain nombre de polymères utilisables selon l'invention, par exemple, de type poly(acide alpha-L-glutamique), poly(acide alpha-D-glutamique), poly(alpha-D,L- 20 glutamate) et poly(acide gamma-L-glutamique) de masses variables sont disponibles commercialement. Le poly(acide-L-glutamique) peut être en outre synthétisé selon la voie décrite dans la demande de brevet FR 2 801 226.
25 Selon un mode de réalisation particulièrement avantageux, le polyélectrolyte anionique considéré selon l'invention est de formule (I) suivante ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, 8 OOR O Rb N H O si O~G dans laquelle : - Ra représente un atome d'hydrogène, un groupe acyle linéaire en C2 à Cio, un groupe acyle ramifié en C3 à Cio, un groupe pyroglutamate ou un groupement 5 hydrophobe G tel que défini ci-après ; - Rb représente un groupe -NHR5 ou un résidu acide aminé terminal lié par l'azote et dont le carboxyle est éventuellement substitué par un radical alkylamino -NHR5 ou un alcoxy -OR6, dans lequel : - R5 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire en Ci à 10 Cio, un groupe alkyle ramifié en C3 à Cio, ou un groupe benzyle ; - R6 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire en Ci à Cio, un groupe alkyle ramifié en C3 à Cio, un groupe benzyle ou un groupement G ; - Ri représente un atome d'hydrogène ou un cation métallique monovalent, de 15 préférence un ion sodium ou potassium, - G représente un groupement hydrophobe choisi parmi : octyloxy-, dodécyloxy-, tétradécyloxy-, hexadécyloxy-, octadécyloxy-, 9-octadécényloxy-, tocophéryl- et cholestéryl-, de préférence alpha-tocophéryl-; - si correspond au nombre moyen de monomères de glutamate non 20 greffés, anioniques à pH neutre, - pi correspond au nombre moyen de monomères de glutamate porteurs d'un groupement hydrophobe G, pi pouvant être éventuellement nul, - le degré de polymérisation DP1 = (si + pi) est inférieur ou égal à 2.000, en 25 particulier inférieur à 700, plus particulièrement allant de 40 à 450, en particulier de 40 à 250, et notamment de 40 à 150, a R Pi (I) - l'enchaînement des monomères de ladite formule générale (I) peut être aléatoire, de type monobloc ou multibloc.
Selon un mode de réalisation particulièrement préféré de l'invention, le polyélectrolyte anionique de formule (I) possède une fraction molaire xPi des monomères porteurs de groupements hydrophobes telle que xPi = pi/(si+pi) varie de 2 à 22 %, en particulier de 4 à 12 %.
Selon un mode de réalisation particulièrement avantageux, le polyélectrolyte 10 cationique selon l'invention est de formule (II) suivante ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, OOR1 OR2 Rb O H O N H t 2 15 dans laquelle : - Ra représente un atome d'hydrogène, un groupe acyle linéaire en C2 à Cio, un groupe acyle ramifié en C3 à Cio, un groupe pyroglutamate ou un groupement hydrophobe G tel que défini ci-après ; - Rb représente un groupe -NHR5 ou un résidu acide aminé terminal lié par 20 l'azote et dont le carboxyle est éventuellement substitué par un radical alkylamino -NHR5 ou un alcoxy -OR6, dans lequel : - R5 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire en Ci à Cio, un groupe alkyle ramifié en C3 à Cio, ou un groupe benzyle ; - R6 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire en Ci à 25 Cio, un groupe alkyle ramifié en C3 à Cio, un groupe benzyle ou un groupement G ; - R' représente un atome d'hydrogène ou un cation métallique monovalent, de préférence un ion sodium ou potassium ; - G représente un groupement hydrophobe choisi parmi : octyloxy-, dodécyloxy-, tétradécyloxy-, hexadécyloxy-, octadécyloxy-, 9-octadecenyloxy-, tocophéryl- et cholestéryl-, de préférence alpha-tocophéryl ; - R2 représente un groupement cationique, en particulier l'arginine ; - R3 représente un groupement neutre choisi parmi : hydroxyéthylamino-, dihydroxypropylamino-; - s2 correspond au nombre moyen de monomères de glutamate non greffés, anioniques à pH neutre, - p2 correspond au nombre moyen de monomères de glutamate porteurs d'un groupement hydrophobe G, - r2 correspond au nombre moyen de monomères de glutamate porteurs d'un groupement cationique R2, et - t2 correspond au nombre moyen de monomères de glutamate porteurs d'un groupement neutre R3, s2, pz et t2 pouvant être éventuellement nuls, et - le degré de polymérisation DP2 = (S2 + p2 + r2 + t2) est inférieur ou égal à 2.000, en particulier inférieur à 700, plus particulièrement varie de 40 à 450, en particulier 20 de 40 à 250, et notamment de 40 à 150 ; - l'enchaînement des monomères de ladite formule générale (II) peut être aléatoire, de type monobloc ou multibloc.
Bien entendu, le polyélectrolyte cationique répondant à la formule (II) est tel 25 que la charge globale du polyélectrolyte (r2-s2) est positive.
Selon un mode de réalisation particulièrement préféré de l'invention, le polyélectrolyte cationique de formule (II) possède une fraction molaire Xp2 des monomères porteurs de groupements hydrophobes telle que xPZ = p2 / (s2 + p2 + r2 + t2) varie de 2 à 30 22 %, en particulier de 4 à 12 %.
Bien entendu, la nature des polyélectrolytes anionique et cationique mis en oeuvre dans le procédé de l'invention est telle qu'au moins l'un des deux polyélectrolytes est porteur de groupements latéraux hydrophobes G.
Selon un des aspects de la présente invention, les quantités et la nature des polyélectrolytes anionique et cationique mises en oeuvre dans le procédé de l'invention sont telles que le rapport molaire, noté Z, du nombre de groupements cationiques par rapport au nombre de groupements anioniques dans le mélange des deux polyélectrolytes est compris 0,1 et 0,75 ou entre 1,3 et 2.
De préférence, le rapport molaire Z est compris entre 0,3 et 0,75, plus particulièrement entre 0,5 et 0,75, ou entre 1,3 et 1,5.
Le rapport molaire Z peut être défini au regard des quantités et de la nature des polyélectrolytes introduits lors de la préparation des nanoparticules selon le procédé de l'invention, par la formule suivante : dans laquelle : - mi et m2 représentent respectivement les quantités massiques des solutions avant mélange du polyélectrolyte anionique et du polyélectrolyte cationique de concentrations massiques respectives en polymère (avant mélange) Ci et C2 ; - DP1 et DP2 représentent respectivement les degrés de polymérisation du polyélectrolyte anionique et du polyélectrolyte cationique ; - Mi et M2 représentent respectivement les masses molaires du polyélectrolyte anionique et du polyélectrolyte cationique ; - xc2 représente la fraction molaire en monomères porteurs de groupements cationiques dans le polyélectrolyte cationique ; - xal et xa2 représentent respectivement les fractions molaires en monomères porteurs de groupements anioniques du polyélectrolyte anionique et du polyélectrolyte cationique. (x,2.mz.C2.DP2 /M2) Z= Oal.ini.Ci.DP /Mi )+()caz.YIl2.C2.DP2lM2)30 Selon un autre aspect de la présente invention, les quantités et la nature des polyélectrolytes anionique et cationique mises en oeuvre dans le procédé de l'invention sont telles que la concentration massique totale C en polyélectrolytes est strictement inférieure à 2 mg/g du mélange.
En particulier, la concentration massique totale C en polyélectrolytes est comprise entre 0,5 et 1,8 mg/g, en particulier entre 1 et 1,5 mg/g du mélange. Dans le cadre de la mise en oeuvre des polyélectrolytes en solution aqueuse, la concentration massique totale C en polyélectrolytes selon l'invention est strictement inférieure à 2 mg/g de la solution aqueuse obtenue à l'issue de l'étape (2) du procédé de l'invention. La concentration massique totale C en polyélectrolytes peut être définie par : C = (mi.Ci+m2.C2)/(mi+m2), avec mi, m2, Ci et C2 tels que définis précédemment.
Selon un premier mode de réalisation, les polyélectrolytes anionique et cationique sont tels que : ^ le degré de polymérisation des polyélectrolytes anionique et cationique est compris entre 50 et 220 ; ^ le polyélectrolyte anionique porte de 4 à 12 % molaire de groupements latéraux hydrophobes, répartis de façon statistique.
Selon un deuxième mode de réalisation, les polyélectrolytes anionique et cationique sont tels que : ^ le degré de polymérisation des polyélectrolytes anionique et cationique est compris entre 50 et 220 ; ^ t2 est nul, c'est-à-dire que le polyélectrolyte cationique est dépourvu de groupements neutres ; ^ le polyélectrolyte cationique et le polyélectrolyte anionique portent tous les deux de 4 à 12 % molaire de groupements latéraux hydrophobes, répartis de façon statistique.
Selon un troisième mode de réalisation, les polyélectrolytes anionique et cationique sont tels que : ^ le degré de polymérisation des polyélectrolytes anionique et cationique est compris entre 50 et 220 ; ^ le polyélectrolyte anionique porte de 4 à 12 % molaire de groupements latéraux hydrophobes, répartis de façon statistique ; et ^ le polyélectrolyte cationique porte de 30 à 60 % molaire de groupements latéraux cationiques, en particulier arginine.
Selon un quatrième mode de réalisation, les polyélectrolytes anionique et cationique sont tels que : ^ le degré de polymérisation des polyélectrolytes anionique et cationique est compris entre 50 et 220 ; ^ le polyélectrolyte anionique porte de 18 à 22 % molaire de groupements latéraux hydrophobes, répartis de façon statistique.
NANOPARTICULES Comme précisé précédemment, les nanoparticules formées selon l'invention présentent un diamètre moyen inférieur ou égal à 500 nm.
De préférence, la taille des nanoparticules peut varier de 20 à 300 nm, en particulier de 50 à 200 nm. La taille des nanoparticules peut être mesurée par diffusion quasi-élastique de la lumière.
Test de mesure de la taille des particules par diffusion quasi-élastique de la lumière La taille des particules est caractérisée par le diamètre hydrodynamique moyen en volume, obtenu selon des méthodes de mesure bien connues de l'homme du métier, par exemple à l'aide d'un appareil de type ALV CGS-3.
De manière générale, les mesures sont réalisées avec des solutions de polymères préparées à des concentrations de 1 mg/g en milieu NaCl 0,15 M et laissées sous agitation pendant 24 h. Ces solutions sont ensuite filtrées sur 0,8-0,2 µm, avant de les analyser en diffusion dynamique de la lumière. Dans le cas de l'utilisation d'un appareil de type ALV CGS-3, fonctionnant avec un faisceau laser He-Ne de longueur d'onde 632,8 nm et polarisé verticalement, l'angle de diffusion est de 140° et le temps d'acquisition du signal est de 10 minutes. La mesure est répétée 3 fois sur deux échantillons de solution. Le résultat est la moyenne des 6 mesures.
Au sens de l'invention, on entend par « nanoparticules anioniques », des 10 nanoparticules dont la charge globale à pH neutre est négative ; et par «nanoparticules cationiques », des nanoparticules dont la charge globale à pH neutre est positive.
ACTIFS Comme évoqué précédemment, le procédé de l'invention peut en outre mettre 15 en oeuvre au moins un actif. Les formulations de nanoparticules obtenues par le procédé de l'invention peuvent ainsi être mises en oeuvre à des fins de véhiculer des actifs. Selon un mode réalisation particulièrement préféré, l'actif est mis en oeuvre dans la solution aqueuse de l'étape (1). Avantageusement, l'actif s'associe de manière non 20 covalente aux nanoparticules de la solution aqueuse de l'étape (1). Les termes « association » ou « associé » employés pour qualifier les relations entre un ou plusieurs principes actifs et le(s) polyélectrolyte(s), signifient que le ou les actifs sont associés au(x) polyélectrolyte(s) par des interactions physiques non covalentes, en particulier des interactions hydrophobes, et/ou des interactions électrostatiques et/ou des 25 liaisons hydrogène et/ou via une encapsulation stérique par les polyélectrolytes. Cet actif peut être une molécule d'intérêt thérapeutique, cosmétique, prophylactique ou d'imagerie. Il est de préférence choisi dans le groupe comprenant : les protéines, les glycoprotéines, les protéines liées de façon covalente à une ou plusieurs chaînes 30 polyalkylèneglycol [de préférence polyéthylèneglycol (PEG)], les peptides, les polysaccharides, les liposaccharides, les oligonucléotides, les polynucléotides, les substances pharmaceutiques synthétiques et leurs mélanges.
Plus préférentiellement, l'actif est choisi dans le sous-groupe des érythropoïétines, le raffimère d'hémoglobine, leurs analogues ou leurs dérivés; ocytocine, vasopressine, hormone adrénocorticotropique, facteur de croissance, , les facteurs sanguins, hémoglobine, les cytochromes, les albumines prolactine, lulibérine (hormone libération de l'hormone lutéinisante ou LHRH) ou analogues, tels que leuprolide, goséréline, triptoréline, buséréline, nafaréline; antagonistes de la LHRH, les concurrents de la LHRH, les hormones de croissance (GH) humaine, porcine ou bovine, l'hormone de libération de l'hormone de croissance, l'insuline, la somatostatine, le glucagon, les interleukines ou leurs mélanges, les interférons, tels que l'interféron alpha, alpha-2b, bêta, bêta- la, ou gamma; la gastrine, la tétragastrine, la pentagastrine, l'urogastrone, la sécrétine, la calcitonine, les enképhalines, les endomorphines, les angiotensines, le facteur de libération de la thyrotropine (TRH), le facteur de nécrose tumorale (TNF), le facteur de croissance nerveux (NGF), les facteurs de croissance tels que béclapermine, trafermine, ancestime, le facteur de croissance des kératinocytes, le facteur stimulant les colonies granulocytes (G-CSF), le facteur stimulant les colonies de macrophages granulocytaires (GM-CSF), le facteur stimulant les colonies de macrophages (M-CSF), héparinase, la protéine morphogénique de l'os (BMP), hANP, le peptide ressemblant au glucagon (GLP-I), VEG-F, l'antigène recombinant de l'hépatite B (rHBsAg), la rénine, les cytokines, la bradykinine, les bacitracines, les polymixines, les colistines, la tyrocidine, les gramicidines, l'étanercept, l'imiglucérase, la drotrécogine alpha, les cyclosporines et analogies synthétiques, les modifications et fragments pharmaceutiquement actifs d'enzymes, de cytokines, d'anticorps, d'antigènes et de vaccins, les anticorps tels que rituximab, infliximab, trastuzumab, adalimumab, omalizumab, tositumomab, efalizumab, et cetuximab.
D'autres principes actifs sont les polysaccharides (par exemple, l'héparine) et les oligo- ou polynucléotides, ADN, ARN, iARN, antibiotiques et cellules vivantes, rispéridone, zuclopenthixol, fluphénazine, perphénazine, flupentixol, halopéridol, fluspirilene, quétiapine, clozapine, amisulprid, sulpirid, ziprasidone, etc. Plus particulièrement, l'actif est choisi parmi l'hormone de croissance, 30 l'interféron alpha et la calcitonine.
De manière avantageuse, la suspension de nanoparticules obtenue selon le procédé de l'invention est adaptée à une administration par voie parentérale, en particulier par voie intraveineuse. De préférence, elle présente une viscosité, mesurée à 20 °C et à une vitesse de cisaillement de 10 s-1, allant de 1 à 500, de préférence de 2 à 200 mPa.s. La viscosité peut être mesurée à 20 °C, à l'aide d'un appareillage classique, tel que par exemple un rhéomètre de type contrainte imposée (Gemini, Bohlin) sur lequel a été installée une géométrie de type cône-plan (4 cm et 2° d'angle), ou un viscosimètre Malvern Nanosizer en suivant les consignes du fabricant.
Selon un mode de réalisation particulier, la suspension de nanoparticules obtenue à l'issue de l'étape (2) du procédé selon l'invention décrit ci-dessus, est soumise à une ou plusieurs étapes de concentration, notamment par ultrafiltration tangentielle ou frontale, centrifugation, évaporation ou lyophilisation.
Selon une autre variante de réalisation, le procédé selon l'invention peut comprendre ultérieurement une étape de déshydratation de la suspension des particules obtenues (par exemple par lyophilisation ou atomisation), afin de les obtenir sous forme de poudre sèche. De manière avantageuse, les nanoparticules selon l'invention sont stables sous forme lyophilisée. Par ailleurs, elles sont facilement redispersibles après lyophilisation. Ainsi, la suspension de nanoparticules obtenue selon l'invention peut être lyophilisée puis reconstituée en solution aqueuse, sans affecter les propriétés des nanoparticules obtenues.
Le procédé de l'invention peut permettre la préparation de nouvelles 25 préparations pharmaceutiques, phytosanitaires, alimentaires, cosmétiques ou diététiques élaborées à partir des compositions selon l'invention. La suspension de nanoparticules obtenue à l'issue de l'étape (2) de l'invention peut ainsi subir une ou plusieurs étapes de transformation ultérieures, pour préparer une composition sous la forme d'une poudre, une solution, une suspension, un comprimé ou 30 d'une gélule. La composition obtenue à l'issue du procédé de l'invention peut notamment être destinée à la préparation de médicament.
Elle peut être destinée à une administration par voie orale ou par voie parentérale, en particulier par voie parentérale et plus particulièrement par voie sous-cutanée.
L'invention sera mieux expliquée par les exemples ci-après, donnés uniquement à titre d'illustration.
EXEMPLES Exemple 1 Synthèse des polyélectrolytes anioniques PA : polyglutamates greffés avec de la vitamine E La synthèse de tels polymères est décrite notamment dans la demande internationale WO 03/104303 de la demanderesse. Le tableau 1 suivant décrit les caractéristiques des polyélectrolytes anioniques PA (les notations pi et si font référence à la formule (I) de la description ; les notations xpi, xal, DP1 sont celles définies dans la description).
TABLEAU 1 Caractéristiques DP1 (g mol) xpi (%) xal (0/0) PA1 (1)1=5, si=95) 220 37540 5 95 PA2 (1)1=5, si=95) 100 17064 5 95 PA3 (1)1=2,5, si=47,5) 50 8532 5 95 PA4 (1)1=10, si=90) 100 19017 10 90 PA5 (1)1=20, si=80) 100 22924 20 80 Exemple 2 Synthèse des polyélectrolytes cationiques PC : Polyglutamates greffés avec de la vitamine E et de l'arginine (PC1, PC2 , et PCD La synthèse de ces polymères est décrite notamment dans la demande internationale WO 2008/135563 de la demanderesse.25 Polyglutamates greffés avec de la vitamine E, de l'arginine et de l'éthanolamine (PC4 et PC) La synthèse de ce polymère est similaire à la synthèse des polymères PC1, PC2 et PC3 et comporte en outre une étape de greffage de l'éthanolamine. Cette étape de 5 greffage est décrite dans la demande internationale WO 2006/079614 de la demanderesse.
Le tableau 2 suivant décrit les caractéristiques des polyélectrolytes cationiques PC (les notations pz, r2, sz et t2 font référence à la formule (II) de la description ; les notations DP2, M2, Xp2, Xa2 et Xc2 sont celles définies précédemment dans la description).
TABLEAU 2 Caractéristiques DP2 M2 Xp2 Xa2 Xc2 (g/mol) (°/U) (°/U) (°/U) PC1 (P2-5, r2=80, s2=15, tz=0) 100 30640 5 15 80 PC2 (p2=5, r2=30, s2=15, tz=0) 50 14600 10 30 60 PC3 (p2=6, r2=90, s2=4, tz=0) 25 8182 6 4 90 PC4 (p2=10, r2=40, s2=10, t2=40)(a) 100 26649 10 10 40 PC5 (pz=5, r2=40, s2=10, t2=40)(a) 100 24696 5 15 40 Exemple 3 15 Préparation de particules à base des deux polyélectrolytes PA et PCpour différentes valeurs de Z. Le polyélectrolyte anionique PA est dilué dans une solution de NaCl 10 mM pour obtenir une solution à la concentration C1. Le polyélectrolyte cationique PC est dilué dans une solution de NaCl 10 mM 20 pour obtenir une solution à la concentration C2. Le procédé diffère ensuite dans l'ordre d'ajout selon que le mélange final visé est en excès de charge anionique ou en excès de charge cationique : - pour des mélanges visés avec un excès de charge anionique (essais e 1.1 à e 1.9 dans le tableau ci-dessous), une masse m1 de polyélectrolyte anionique PA à la 25 concentration C1 est placée dans un bécher sous agitation modérée et une masse m2 de polyélectrolyte cationique PC à la concentration C2 est alors ajoutée. 10 (a) - pour des mélanges visés avec un excès de charge cationique (essais e 1.10 et e 1.11 dans le tableau ci-dessous), une masse m2 de polyélectrolyte cationique PC à la concentration C2 est placée dans un bécher sous agitation modérée et une masse mi du polyélectrolyte anionique PA à la concentration Ci est alors ajoutée.
Le diamètre des nanoparticules obtenues est mesuré par diffusion quasi-élastique de la lumière, tel que décrit précédemment. La charge globale Zêta est mesurée par la mesure du potentiel Zêta à pH neutre.
Les différentes valeurs du rapport Z (rapport molaire groupements cationiques/ groupements anioniques), de la concentration massique totale C en polyélectrolytes dans le mélange, du diamètre et du potentiel Zêta des nanoparticules formées pour différents mélanges des solutions des deux polyélectrolytes PA et PC sont rassemblées dans le tableau 3 suivant.
TABLEAU 3 Essais Polymères (g) (mg/g) (g) (mg/g) C Z Diamètre Zéta (mV) (mg/g) en volume (nm) e 1,1 PAi/PCi 79,97 0,51 8,90 8,04 1,26 0,73 95 -53 e 1,2 PA1/PC4 85,00 0,53 9,67 8,00 1,29 0,41 249 -46 e 1,3 PAz/PCi 79,95 0,50 8,52 8,04 1,23 0,70 64 -56 e 1,4 PAz/PCi 2,40 1,32 2,70 2,01 1,69 0,70 150 -55 e 1,5 PA2/PC2 9,00 0,86 16,95 1,21 1,09 0,66 178 -48 e 1,6 PA2/PC4 84,95 0,50 10,78 8,00 1,34 0,48 134 -45 e 1,7 PA4/PC5 3,00 1,03 5,40 1,01 1,02 0,49 46 -32 e 1,8 PA5/PC5 3,01 1,03 3,30 1,05 1,04 0,43 20 -35 e 1,9 PA1/PC5 79,04 0,50 14,34 8,02 1,65 0,64 251 -34 e 1,10 PA3/PC1 10,08 0,95 40,05 1,00 0,98 1,43 82 +38 e 1,11 PA4/PC5 2,01 1,00 17,20 1,01 1,01 1,41 290 +32 Les résultats montrent qu'il est possible d'obtenir, à partir du mélange des polyélectrolytes anionique PA et cationique PC conformes à l'invention, des nanoparticules de taille inférieure ou égale à 500 nm, conformément à l'invention.
Exemple 4 (comparatif) Formulations ayant une concentration en polymère totale après mélange supérieure à 2 mg/g ou ayant un rapport molaire de charge Z strictement supérieur à o,75 et strictement inférieur à 1,3 Les polyélectrolytes anioniques et cationiques utilisés sont choisis parmi les polyélectrolytes décrits précédemment. On ajoute une quantité mi d'une solution du polyélectrolyte anionique PA décrit dans l'exemple 1, à la concentration Ci dans une solution de NaCl à 10 mm à une quantité m2 d'une solution du polyélectrolyte cationique PC décrit dans l'exemple 2 préalablement diluée à une concentration C2 dans une solution de NaCl à 10 mm. TABLEAU 4 Essais Polymères (g) (mg/g) (g) (mg/g) C Z Diamètre (mg/g) en volume (nm) e 2.1 PA2/PC1 2,40 11,06 3,52 12,96 12,19 0,70 Floculation (taille >1 µm) e 2.2 PA4/PC5 2,01 1,03 9,30 1,01 1,01 0,98 Floculation (taille > 1µm) Les résultats montrent clairement que les nanoparticules obtenues après 20 mélange des polyélectrolytes dans un rapport Z ou une concentration C non conformes à l'invention, ont des tailles supérieures à 500 nm, non conformes à l'invention.
Exemple 5 Formulations selon l'invention concentrée par ultrafiltration 25 La formulation e 1.9 de l'exemple 3 ayant une concentration totale en polymère de 1,65 mg/g est concentrée d'un facteur 8 environ par ultrafiltration frontale sur une membrane ayant un seuil de coupure de 10 kDa. La concentration finale en polymère obtenue (mesurée par extrait sec) est de 13,4 mg/g. La taille des particules (diamètre moyen en volume) après concentration est de 332 nm et le potentiel Zêta de -37 mV. Cet exemple montre donc qu'il est possible de concentrer par ultrafiltration la formulation obtenue sans modifier notablement la taille et le potentiel Zêta des particules constituant cette formulation.
Exemple 6 Formulations selon l'invention incorporant comme actif la calcitonine du saumon (sCT), La sCT est mélangée dans un premier temps avec le polyélectrolyte anionique PA et le complexe PA/sCT ainsi obtenu est mélangé dans un deuxième temps avec le polyélectrolyte cationique PC.
Plus précisément, le polyélectrolyte anionique PA est dilué dans une solution de tampon phosphate à 10 mm et mélangé à une solution contenant 10 mg/g de sCT (Polypeptide Laboratories AB) de façon à obtenir un mélange PA/sCT ayant une concentration C1 en polyélectrolyte anionique PA et une concentration Cpi en protéine sCT. Le mélange est agité pendant 1 h à température ambiante sous agitation modérée.
A une masse mi du mélange précédent PA/sCT maintenu sous agitation modérée, on ajoute une masse m2 de polyélectrolyte cationique PC préalablement dilué à la concentration C2. Le mélange final a une concentration C en polymère total et une concentration Cp en protéine.
La concentration en actif non associé aux polyélectrolytes est déterminée après séparation par ultracentrifugation sur des ultrafiltres ayant un seuil de coupure de 30 kDa et par dosage des filtrats par HPLC. Elle est dans tous les cas strictement inférieure à 5 %. Les caractéristiques des polyélectrolytes anioniques et cationiques utilisés pour cet exemple sont décrites dans les exemples 1 et 2.30 TABLEAU 5 Essais Polymères mi CI Cpt m2 C2 Cp C Z Diamètre Zéta (g) (mg/g) (mg/g) (g) (mg/g) (mg/g) (mg/g) en (mV) (sCT) (sCT) volume (nm) e 3.1 PA1/PC3 14,97 1,03 0,10 1,95 7,98 0,09 1,83 0,49 118 -46 e 3.2 PA3/PC5 4,99 1,00 0,49 10,02 1,00 0,16 1,00 0,48 136 -35 Les résultats montrent que les formulations selon l'invention incorporant de la calcitonine du saumon et des polyélectrolytes selon l'invention sont composées de 5 nanoparticules de taille inférieure à 500 nm. Exemple 7 Formulation selon l'invention incorporant comme actif l'interféron a-2b (IFNa). 10 L'IFNa est mélangé dans un premier temps avec le polyélectrolyte anionique PA et le complexe PA/IFNa ainsi obtenu est mélangé dans un deuxième temps avec le polyélectrolyte cationique PC. Plus précisément : Le polyélectrolyte anionique PA est dilué dans une solution de NaCl à 10 mM. Puis une solution contenant 2.3 mg/g d'IFNa (Biosidus) est ajoutée de façon à avoir un 15 mélange PA/IFNa ayant une concentration C1 en polyélectrolyte anionique PA et une concentration Cpi en protéine IFNa. Le mélange est maintenu sous agitation modérée pendant 14 h à température ambiante. A une masse mi du mélange précédent PA/IFNa maintenu sous agitation, on ajoute une masse m2 de polyélectrolyte cationique PC préalablement dilué à la 20 concentration C2 dans une solution de NaCl 10 mM. Le mélange est ensuite agité pendant 1 heure. Le mélange final a une concentration en polymère total C et une concentration en protéine Cp. Les caractéristiques des polyélectrolytes anionique et cationique utilisés pour 25 cet exemple sont décrites dans les exemples 1 et 2.
TABLEAU 6 Essais Polymères mi CI Cpt m2 C2 Cp C Z Diamètre Zéta (g) (mg/g) (mg/g) (g) (mg/g) (mg/g) (mg/g) en (mV) (IFNa) (IFNa) volume (nm) e 4.1 PA2/PC1 9,47 1,04 0,27 15,50 1,16 0,10 1,11 0,74 174 -46 e 4.2 PA2/PC2 8,97 0,89 0,30 17,05 1,38 0,10 1,21 0,70 194 -43,5 Les résultats montrent que les formulations selon l'invention incorporant de l'IFNa et des polyélectrolytes selon l'invention sont composées de nanoparticules de taille 5 inférieure à 200 nm.

Claims (14)

  1. REVENDICATIONS1. Procédé de préparation de nanoparticules de diamètre moyen inférieur ou égal à 500 nm, comprenant au moins les étapes consistant à : (1) disposer d'une solution aqueuse comprenant des nanoparticules d'un premier polyélectrolyte à l'état chargé et porteur de groupements latéraux hydrophobes ; (2) mettre en présence ladite solution (1) avec au moins un second polyélectrolyte de polarité opposée à celle du premier polyélectrolyte, avec le polyélectrolyte cationique étant ajouté à une solution de polyélectrolyte anionique pour former un mélange à excès de charge anionique ; ou le polyélectrolyte anionique étant ajouté à une solution de polyélectrolyte cationique pour former un mélange à excès de charge cationique ; et (3) disposer des nanoparticules ainsi formées ; avec : - lesdits polyélectrolytes anionique et cationique possédant un squelette linéaire de type 15 polyaminoacide, dépourvu de groupements latéraux de type polyalkylène glycol, et présentant un degré de polymérisation inférieur ou égal à
  2. 2.000 ; - le rapport molaire Z du nombre de groupements cationiques par rapport au nombre de groupements anioniques du mélange des deux polyélectrolytes étant compris entre 0,1 et 0,75 ou entre 1,3 et 2 ; et 20 - la concentration massique totale C en polyélectrolytes étant strictement inférieure à 2 mg/g dudit mélange. 2. Procédé selon la revendication précédente, caractérisée en ce que le rapport molaire Z du nombre de groupements cationiques par rapport au nombre de groupements anioniques du mélange desdits polyélectrolytes anionique et cationique est 25 compris entre 0,3 et 0,75, plus particulièrement entre 0,5 et 0,75, ou entre 1,3 et 1,5.
  3. 3. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la concentration massique totale C en polyélectrolytes dans le mélange est comprise entre 0,5 et 1,8 mg/g, en particulier entre 1 et 1,5 mg/g.
  4. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, 30 caractérisé en ce que le mélange est réalisé à pH allant de 5 à 8, en particulier de 6 à 7,5.
  5. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'étape (2) comprend au moins : - la préparation d'une solution aqueuse du second polyélectrolyte, en particulier de valeur de pH allant de 5 à 8, et avantageusement de valeur de pH identique à celle de la solution aqueuse de l'étape (1) ; et - le mélange de ladite solution aqueuse du second polyélectrolyte avec ladite solution aqueuse de l'étape (1).
  6. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la taille des nanoparticules varie de 20 à 300 nm, de préférence de 10 50 à 200 nm.
  7. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ledit polyélectrolyte porteur de groupements latéraux hydrophobes est apte à former spontanément, lorsqu'il est mis en dispersion dans un milieu aqueux de pH allant de 5 à 8, notamment l'eau, des nanoparticules. 15
  8. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ledit polyélectrolyte anionique est de formule (I) suivante ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, OOR si O~G dans laquelle : 20 - Ra représente un atome d'hydrogène, un groupe acyle linéaire en C2 à C10, un groupe acyle ramifié en C3 à C10, un groupe pyroglutamate ou un groupement hydrophobe G tel que défini ci-après ; - Rb représente un groupe -NHR5 ou un résidu acide aminé terminal lié par l'azote et dont le carboxyle est éventuellement substitué par un radical alkylamino -NHR5 25 ou un alcoxy -OR6, dans lequel : Rb O H N a R P1 (I)- R5 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire en C, à Cio, un groupe alkyle ramifié en C3 à Cio, ou un groupe benzyle ; - R6 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire en C, à Cio, un groupe alkyle ramifié en C3 à Cio, un groupe benzyle ou un groupement G ; - Ri représente un atome d'hydrogène ou un cation métallique monovalent, de préférence un ion sodium ou potassium, - G représente un groupement hydrophobe choisi parmi : octyloxy-, dodécyloxy-, tétradécyloxy-, hexadécyloxy-, octadécyloxy-,
  9. 9-octadécényloxy-, tocophéryl- et cholestéryl-, de préférence alpha-tocophéryl- ; - si correspond au nombre moyen de monomères de glutamate non greffés, anioniques à pH neutre, - pi correspond au nombre moyen de monomères de glutamate porteurs d'un groupement hydrophobe G, pi pouvant être éventuellement nul, - le degré de polymérisation DPi = (si + pi) est inférieur ou égal à 2.000, en particulier inférieur à 700, plus particulièrement allant de 40 à 450, en particulier de 40 à 250, et notamment de 40 à 150, - l'enchaînement des monomères de ladite formule générale (I) peut être 20 aléatoire, de type monobloc ou multibloc. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ledit polyélectrolyte cationique est de formule (II) suivante ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptable, OOR1 OR2 Rb O O H N H O N H P2 r 2 t 2 s2 OG O R3 25 dans laquelle :- Ra représente un atome d'hydrogène, un groupe acyle linéaire en C2 à Cio, un groupe acyle ramifié en C3 à Cio, un groupe pyroglutamate ou un groupement hydrophobe G tel que défini ci-après ; - Rb représente un groupe -NHR5 ou un résidu acide aminé terminal lié par 5 l'azote et dont le carboxyle est éventuellement substitué par un radical alkylamino -NHR5 ou un alcoxy -OR6, dans lequel : - R5 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire en Ci à Cio, un groupe alkyle ramifié en C3 à Cio, ou un groupe benzyle ; - R6 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire en Ci à 10 Cio, un groupe alkyle ramifié en C3 à Cio, un groupe benzyle ou un groupement G ; - Ri représente un atome d'hydrogène ou un cation métallique monovalent, de préférence un ion sodium ou potassium ; - G représente un groupement hydrophobe choisi parmi : octyloxy-, 15 dodécyloxy-, tétradécyloxy-, hexadécyloxy-, octadécyloxy-, 9-octadecenyloxy-, tocophéryl- et cholestéryl-, de préférence alpha-tocophéryl- ; - R2 représente un groupement cationique, en particulier l'arginine ; - R3 représente un groupement neutre choisi parmi : hydroxyéthylamino-, dihydroxypropylamino-; 20 - s2 correspond au nombre moyen de monomères de glutamate non greffés, anioniques à pH neutre, - p2 correspond au nombre moyen de monomères de glutamate porteurs d'un groupement hydrophobe G, et - r2 correspond au nombre moyen de monomères de glutamate porteurs 25 d'un groupement cationique R2, - t2 correspond au nombre moyen de monomères de glutamate porteurs d'un groupement neutre R3, s2, pz et t2 pouvant être éventuellement nuls, et - le degré de polymérisation DP2 = (s2 + p2 + r2 + t2) est inférieur ou égal à 30 2.000, en particulier inférieur à 700, plus particulièrement varie de 40 à 450, en particulier de 40 à 250, et notamment de 40 à 150 ;- l'enchaînement des monomères de ladite formule générale (II) peut être aléatoire, de type monobloc ou multibloc.
  10. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que lesdites nanoparticules du premier polyélectrolyte de la solution aqueuse (1) sont associées de manière non covalente à un actif.
  11. 11. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé en ce que ledit actif est une molécule d'intérêt thérapeutique, cosmétique, prophylactique ou d'imagerie.
  12. 12. Procédé selon l'une quelconque des revendications 10 et 11, caractérisé en ce que la solution aqueuse (1) est obtenue par ajout de l'actif à une solution colloïdale aqueuse du premier polyélectrolyte, possédant en particulier une valeur de pH allant de 5 à 8, ledit actif s'associant de manière non covalente aux nanoparticules dudit premier polyélectrolyte.
  13. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend, ultérieurement à l'étape (3), une ou plusieurs étapes de concentration, notamment par ultrafiltration tangentielle ou frontale, centrifugation, évaporation ou lyophilisation.
  14. 14. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend, ultérieurement à l'étape (3), une étape de déshydratation de la suspension des particules obtenues, notamment par lyophilisation ou atomisation.
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