CA3218197A1 - Compositions de conjugues poly-lysine et de micelles et/ou de copolymeres de poly-lysine - Google Patents

Compositions de conjugues poly-lysine et de micelles et/ou de copolymeres de poly-lysine Download PDF

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Abstract

La présente invention concerne une composition comprenant : - au moins une molécule conjuguée de façon covalente à une poly-lysine, et - au moins une molécule hydrophobe et non conjugable de façon covalente à une poly-lysine, ladite molécule étant encapsulée dans une micelle, et/ou au moins une molécule conjuguée à une poly- lysine par polymérisation, ladite molécule et la poly-lysine formant un copolymère. L'invention a également pour objet son procédé de fabrication et ses utilisations.

Description

COMPOSITIONS DE CONJUGUES POLY-LYSINE ET DE MICELLES
ET/OU DE COPOLYMERES DE POLY-LYSINE
Domaine technique L'invention concerne des compositions de molécules, certains étant conjuguées à des polymères spécifiques et d'autres, non conjugables directement à ces polymères, sont sous forme de copolymères ou encapsulées dans des micelles.
Etat de l'art Pour augmenter l'efficacité et la biodisponibilité de certaines molécules dans des compositions thérapeutiques, nutritionnelles ou cosmétiques, il est connu de conjuguer lesdites molécules à des polymères spécifiques, comme la poly-lysine, et en particulier la poly-L-lysine.
La poly-lysine est un homopolypeptide, qui peut être linéaire, appartenant au groupe des polymères cationiques. A pH neutre, la poly-lysine contient un groupe amino hydrophile chargé positivement.
L'acide aminé précurseur, la lysine, contient deux groupes amino, l'un sur le carbone a et l'autre sur le carbone E. Au cours du développement du projet PNOS, PTS a produit iPr-PLys.HBr, où le contre-ion de l'ammonium terminal est un ion bromure.
La poly-lysine renforce l'interaction électrostatique entre les ions à charge négative de la membrane cellulaire et les ions à charge positive des facteurs de fixation à la surface de la culture. Lorsqu'elle est adsorbée à la surface de la culture, elle augmente le nombre de sites à
charge positive disponibles pour la fixation des cellules. La poly-lysine présente une densité
de charge positive élevée qui lui permet de former des complexes solubles avec des macromolécules chargées négativement (Park, Tae Gwan; Jeong, Ji Hoon; Kim, Sung Wan (2006-07-07).
''Current status of polymeric gene delivery systems". Advanced Drug Delivery Reviews. 58 (4): 467-486.
doi:10.1016/baddr.2006.03.007. ISSN 0169-409X. PMID 16781003). Les homopolymères ou les copolymères séquencés de poly-lysine ont été largement utilisés pour la délivrance d'ADN
(Kadlecova, Zuzana; Rajendra, Yashas; Matasci, Mattia; Baldi, Lucia; Hacker, David L.; Wurm, Florian M.; Klok, Harm-Anton (2013-08-10). "DNA delivery with hyperbranched poly-lysine: a comparative study with linear and dendritic poly-lysine". Journal of Controlled Release.
169 (3): 276-288.
doi:10.1016/j.jconre1.2013.01.019. ISSN 1873-4995. PMI D 23379996) et de protéines (Jiang, Yuhang;
Arounleut, Phonepasong; Rheiner, Steven; Bae, Younsoo; Kabanov, Alexander V.;
Milligan, Carol;
Manickam, Devika S. (2016-06-10). "SOD1 nanozyme with reduced toxicity and MPS
accumulation".
Journal of Controlled Release. 231: 38 ¨49. doi:10.1016/Hconre1.2016.02.038.
ISSN 1873-4995.
PMI D 26928528).
La poly-lysine, en tant que macromolécule fortement cationique, est efficacement transportée dans les cellules par endocytose (H uguesJ.-P. Ryser, lain Drummond, Wei-Chiang Shen. The cellular uptake of horseradish peroxidase and its poly(lysine) conjugate by cultured fibroblasts is qualitatively similar despite a 900-fold difference in rate,1982, https://doi.org/10.1002/jcp.1041130126). Cette
2 absorption est précédée d'une forte adsorption à la surface des cellules, qui est due à une interaction non spécifique des charges positives du polymère avec les charges négatives présentes à la surface de la plupart des cellules mammaliennes. Le transport mem branaire de la poly-lysine peut donc être décrit comme une endocytose absorptive non spécifique, par opposition à
l'endocytose en phase liquide ou à l'endocytose médiée par les récepteurs.
Étant donné sa nature polypeptidique, la poly-lysine est censée se biodégrader physiologi-quement sous l'action hydrolytique de plusieurs enzymes protéolytiques, comme l'endopeptidase tripsin, la chi motripsine ou les exopeptidases a mino peptidases (H udecz F, Kutassi-Kovàcs S, Mezii G, Szekerke M. Biodegradability of synthetic branched polypeptide with poly(L-lysine) back-bone. Biol Chem Hoppe Seyler. 1989;370(9)1019-1026. doi:10.1515/bchm3.1989.370.2.1019 ; Quong D, Yeo JN, Neufeld Ri. Stability of chitosan and poly-L-lysine membranes coating DNA-alginate beads when exposed to hydrolytic enzymes. J Microencapsu I. 1999;16(1):73-82.
doi:10.1080/026520499289329 ;
The Action of Trypsin on Poly-lysine BY S. G. WALEY Aim J. WAT-SON, 1953.
Avantageusement, la poly-lysine augmentation la demi-vie des molécules auxquelles elle est associée. De plus, du fait de son caractères amphiphile elle permet le passage de la Barrière Hémato Encéphalique.
une molécule peut être conjuguée à la poly-lysine si des groupes fonctionnels appropriés sont présents dans la structure de ladite molécule de telle sorte que la conjugaison à la poly--lysine puisse être réalisée d'une manière orthogonale. En particulier il convient que les molécules comportent des groupes fonctionnels appropriés pour la conjugaison à des résidus de groupe amino au sein de la poly-L-lysine (amine primaire disponible dans les poly-lysine), tels que par exemple un groupe alcool, acide carboxylique, aldéhyde, amine, etc, et qu'elles ne comportent pas de groupes fonctionnels incompatibles pour une conjugaison à la poly-lysine.
Toutefois, certaines molécules n'incluent pas de groupes fonctionnels appropriés pour permettre la conjugaison orthogonale au squelette poly-lysine et/ou comportent des groupes fonctionnels incompatibles pour effectuer une conjugaison de façon covalente avec la poly-lysine. C'est le cas notamment de certaines molécules très hydrophobes, comme par exemple le cholestérol, ou c'est le cas également des acides aminés. Ces molécules ne peuvent pas être conjuguées à la poly-lysine, et lorsqu'elles sont intégrées dans des compositions avec de la poly-lysine, lesdites molécules restent libres, ne sont pas transportées par la poly-lysine, si bien que leur biodisponibilité est faible et identique à celle qu'elles présentent lorsqu'elles sont administrées seules.
Résumé de l'invention Pour répondre à cette problématique, l'invention propose :
- d'encapsuler dans des micelles les molécules hydrophobes non conjugables à la poly-lysine, en particulier de les encapsuler, de les piéger, dans des structures micellaires préférentiellement formées par des conjugués poly-lysine, et - d'intégrer au squelette poly-lysine les autres molécules non conjugables de façon covalente comme
3 les acides aminés, via une copolymérisation des monomères Ncarboxyanhydrides (NCA).
Ainsi l'invention a pour objet une composition sous forme liquide comprenant :
- au moins une molécule (i) conjuguée de façon covalente à une poly-lysine, et - au moins une molécule (ii) hydrophobe et non conjugable de façon covalente à une poly-lysine, ladite molécule (ii) étant encapsulée dans une micelle, et/ou au moins une molécule (iii) conjuguée à une poly-lysine par polymérisation, ladite molécule (iii) et la poly-lysine formant un copolymère.
Avantageusement, l'invention permet ainsi que bénéficier des avantages de la poly-lysine pour toutes les molécules, y compris celles qui ne sont chimiquement pas conjugables à la poly-lysine par les méthodes connues de l'homme du métier. Ainsi l'efficacité, la solubilité
et la biodisponibilité de toutes les molécules sont améliorée.
Cette configuration permet en particulier :
- d'augmenter la demi-vie des molécules actives de la composition dans l'organisme, - de cibler les tissus ou les cellules sur lesquelles les molécules de composition doivent agir, - de permettre aux molécules actives de la composition de passer la Barrière Hémato Encéphalique et de pénétrer dans les cellules, notamment dans les neurones et les motoneurones, - d'augmenter la stabilité et la biodisponibilité de l'actif.
L'efficacité de la composition est donc plus importante et il est possible d'administrer des doses plus faibles et de réduire la toxicité aigüe ou chronique des molécules actives contenues dans la composition.
L'invention a également pour objet un procédé de fabrication des compositions selon l'invention.
Les compositions selon l'invention peuvent être utilisées comme médicament seules ou combinées à l'utilisation d'au moins une autre composition, et l'invention vise aussi les compositions pour leur utilisation comme médicament.
Enfin, les compositions selon l'invention peuvent être utilisées comme complément alimentaire ou composition cosmétique, seules ou combinées à l'utilisation d'une autre composition, et l'invention vise aussi l'utilisation de ces compositions comme complément alimentaire ou composition cosmétique.
D'autres caractéristiques et avantages ressortiront de la description détaillée de l'invention, des exemples et des figures qui vont suivre.
Brève description des Figures [Fig. la] représente un schéma de polymérisation : Le L-Met NCA et le L-Lys NCA (trifluoroacétate) sont mélangés et polymérisés pour obtenir le copolymère (Poly-(L-Lysine-co-methionine). (DMF -dimethylformamide).
[Fig. lb] représente un schéma de déprotection : le copolymère de la figure la est déprotégé pour
4 obtenir un Poly-(L-Lysine-co-methionine) sous forme rie sel de bromure.
[Fig. 2a] représente un schéma de polymérisation Le L-Cys NCA (trityle) et le L-Lys NCA
(trifluoroacétate) sont mélangés et polymérisés pour obtenir le copolymère Poly-(L-lysine-co-L-cystéi ne).
[Fig2 b] représente un schéma de déprotection : le copolymère de la figure la est déprotégé pour obtenir un Poly-(L-lysine-co-L-cystéine) sous forme de sel de bromure. (DMF =
dimethylformamide).
[Fig3] représente un schéma de formations de micelles selon un mode de réalisation de l'invention :
= micelles ; 12= poly-lysine ; 14 = molécules conjuguées de façon covalente (notamment acides gras); 16 = molécules hautement hydrophobes non conjugables à la poly-lysine (par exemple 10 cholestérol, farnésyl-cystéine, co-enzyme Q10, curcumine).
Description détaillée de l'invention Définitions Par animal au sens de l'invention, on entend tout animal à l'exception de l'être humain.
Par conjugué amphiphile au sens de l'invention on entend un conjugué formé
par une molécule X hydrophobe et un polymère Y hydrophile, en particulier une poly-lysine, le conjugué présentant ainsi une caractéristique amphiphile.
Par molécule X conjuguée à une poly-lysine au sens de l'invention, on entend une molécule X lié
par une liaison covalente à une poly-lysine, ladite liaison pouvant être préférentiellement une liaison amide, urée ou carbamate en fonction de la nature chimique de la molécule X.
Compositions selon l'invention La présente invention a donc pour objet une composition sous forme liquide comprenant :
- au moins une molécule (i) conjuguée de façon covalente à une poly-lysine, et - au moins une molécule (ii) hydrophobe et non conjugable de façon covalente à une poly-lysine, ladite molécule (ii) étant encapsulée dans une micelle, et/ou au moins une molécule (iii) conjuguée à une poly-lysine par polymérisation, ladite molécule (iii) et la poly-lysine formant un copolymère.
Ainsi la composition selon l'invention peut comprendre :
- au moins une molécule (i) conjuguée de façon covalente à une poly-lysine, et au moins une molécule (ii) hydrophobe et non conjugable de façon covalente à une poly-lysine, ladite molécule (ii) étant encapsulée dans une micelle, ou - au moins une molécule (i) conjuguée de façon covalente à une poly-lysine, et au moins une molécule (iii) conjuguée à une poly-lysine par polymérisation, ladite molécule (iii) et la poly-lysine formant un copolymère, ou - au moins une molécule (i) conjuguée de façon covalente à une poly-lysine, et au moins une molécule (ii) hydrophobe et non conjugable de façon covalente à une poly-lysine, ladite molécule (ii) étant encapsulée dans une micelle et au moins une molécule (iii) conjuguée à
une poly-lysine par polymérisation, ladite molécule (iii) et la poly-lysine formant un copolymère.
Pour toutes les molécules actives présentes dans les compositions selon l'invention, il peut s'agir des molécules en tant que telles (exemple acide ascorbique) et/ou d'un sel de ces molécules (exemple :
5 ascorbate) et/ou d'un ester de ces molécules (exemple : ester d'acide ascorbique) et/ou d'un anhydride (exemple : anhydride d'acide ascorbique).
La composition selon l'invention comprend donc une ou plusieurs molécule(s) conjuguées de façon covalente à la poly -lysine. Ce type de conjugués est connu de l'homme du métier, les liaisons entre une molécule et la poly-lysine étant notamment des liaisons amide, urée ou carbamate en fonction de la nature et de la structure chimique de la molécule concernée. Des exemples de réalisation de liaisons amides, urée et carbamates sont décrits par exemple dans :
- Ryser Hi, Shen WC. Conjugation of methotrexate to poly (L-lysine) as a potential vvay to overcome drug resistance. Cancer. 1980 Mar 15;45(5 Su ppl):1207-11 (liaisons amide), - Zhuxian Z, Jianbin T, Qihang S, William J. A multifunctional PEG¨PLL drug conjugate fornning redox-responsive nanoparticles for intracellular drug delivery Issue 38, 2015.
Journal of Materials Chemistry B (liaisons amide), - Scheper V, Wolf M, Scholl M, Kadlecova Z, Perrier T, Klok HA, Saulnier P, Lenarz T, Stiiver T. Potentia I
novel drug carriers for inner ear treatment: hyperbranched poly-lysine and lipid nanocapsules.
Nanomedicine (Lond). 2009 Aug;4(6):623-35 (liaisons urée), - Stéphanie Gac-Breton, Jean Couda ne, Mahfoud Boustta & Michel Vert (2004) Norfloxacin-Poly(I-Lysine Citramide Imide) Conjugates and Structure-dependence of the Drug Release, Journal of Drug Targeting, 12:5, 297-307, (liaisons carbamate), - Elmore, W. M. (2013). Nanoparticles Stabilized vvith MPEG-Poly-lysine Carbamate: Synthesis and Characterization, (liaisons carbamate), - Ning-Ping Huang, Ja nos Vôrôs, Susan M. De Paul, Marcus Textor, and Nicholas D. Spencer. Biotin-Derivatized Poly(1-lysine)-g-poly(éthylene glycol): A Novel Polymeric Interface for Bioaffinity Sensing.
Langmuir 2002 18 (1), 220-230 (liaisons carbamate).
Préférentiellement, la ou les molécule(s) conjuguée(s) de façon covalente à
une poly-lysine sont choisies parmi les acides gras, les antioxydants, les vitamines et leurs mélanges. Elles peuvent être choisies notamment parmi l'acide myristique, l'acide linoléique, l'acide palmitique, l'acide palmitoléique, l'acide laurique, l'acide oléique, l'acide orotique, la spermine, la taurine, l'acide patothénique, l'acide azélaïque, GABA, la biotine, l'acide thioctique, l'acide ascorbique, acide acétique, acide propionique, acide butyrique, acide pyruvique, acide lactique, l'alpha-tocophérol, l'acide pantothénique, le glutathion, l'acide rétinoïque et leurs mélanges.
La composition selon l'invention, en plus de ces conjugués poly-lysine, peut comprendre des molécules hydrophobes non conjugables à la poly-lysine encapsulées dans des micelles. Les
6 molécules hydrophobes non conjugables à la poly-lysine sont chimiquement non appropriées pour une conjugaison covalente, soit en raison de l'absence de groupes fonctionnels réactifs, soit en raison d'incompatibilités chimiques. Ces molécules sont hautement hydrophobes, préférentiellement, selon l'invention il s'agit de molécules présentant des valeurs LogP supérieures à 1, en particulier supérieures à 2 et préférentiellement supérieures à 3. Il peut s'agir par exemple le cholestérol, le farnésyl-cystéine, le co-enzyme Q10 ou la curcumine.
Préférentiellement, la ou les molécule(s) hydrophobe(s) et non conjugable(s) de façon covalente à une poly-lysine sont choisies parmi le cholestérol, le co-enzyme 010, le farnésyl cystéine, la curcumine et leurs mélanges.
Selon un mode de réalisation préféré et particulièrement adapté, tel que représenté sur la figure 3, la ou les molécules hydrophobes et non conjugables de façon covalente à une poly-lysine sont encapsulée(s) dans au moins une micelle 10 formée par des conjugués amphiphiles constitués chacun par au moins une molécule hydrophobe 14 conjuguée de façon covalente à
une poly-lysine 12, encapsulant la ou les molécule(s) 16 hydrophobe(s) et non conjugable(s) de façon covalente à
une poly-lysine.
En effet, considérant à la fois le caractère hydrophile de la poly-lysine et le caractère hydrophobe de la plupart de certaines molécules convenant à la conjugaison covalente (notamment l'alpha-tocophérol ou l'acide rétinoïque ou des acides gras comme l'acide oléique, l'acide palmitique, l'acide laurique, l'acide linoléique, l'acide azélaïque, l'acide palmitoléïque, l'acide thioctique, l'acide myristique, l'acide orotique, l'acide acétique, l'acide butyrique, l'acide lactique, l'acide propionique), selon l'invention ces conjugués particuliers se comportent comme des surfactants en solution aqueuse. De cette manière, certains de ces conjugués (amphiphiles) agissent comme des micelles polymères en milieu aqueux, générant une poche hydrophobe, capable d'encapsuler des molécules hydrophobes non conjugables à la poly-lysine (comme le cholestérol, le farnésyl cystéine, etc.), améliorant ainsi considérablement leur solubilité et leur stabilité en solution aqueuse.
Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, la ou les micelle(s) encapsulant les molécules hydrophobes non conjugables à la poly-lysine, sont formées au moins par un ou plusieurs conjugués d'alpha-tocophérol conjugué de façon covalente à une poly-lysine et/ou par un ou plusieurs conjugués d'acide rétinoïque conjugué de façon covalente à une poly-lysine.
Selon un autre mode de réalisation particulier de l'invention, la ou les micelle(s) encapsulant les molécules hydrophobes non conjugables à la poly-lysine, sont formées au moins par un ou plusieurs conjugués d'acide(s) gras conjugué(s) de façon covalente à une poly-lysine. Le ou les acides gras sont préférentiellement choisis parmi l'acide oléique, l'acide palmitique, l'acide laurique, l'acide linoléique, l'acide azélaique, l'acide palmitoléique, l'acide thioctique, l'acide myristique, l'acide orotique, l'acide acétique, l'acide butyrique, l'acide lactique, l'acide propionique.
La composition selon l'invention, en plus de ces conjugués poly-lysine, et éventuellement en plus des molécules hydrophobes non conjugables à la poly-lysine encapsulées dans des micelles, peut comprendre au moins une molécule conjuguée à une poly-lysine par polymérisation, c'est-à-dire des copolymères de ladite molécule et de poly-lysine. Il s'agit en particulier d'une molécule choisie parmi
7 les acides aminés, telle que par exemple la cystéine ou la méthionine. En effet, les acides aminés, qu'ils soient naturels ou non, ne sont pas conjugables à la poly-lysine par une liaison covalent. Selon l'invention, ces molécules peuvent être intégrées au squelette poly-L-lysine via une copolymérisation appropriée des monomères NCA (Ncarboxyanhydrides) pour former un copolymère. Préférentiellement, les molécules non conjugables à la poly-lysine, en particulier les acides aminés, sont incluses dans l'épine dorsale polypeptidique du polymère pour former un copolymère.
Préférentiellement, les copolymères ont entre 5 et 20% de molécules non conjugables de façon covalent à la poly-lysine (en particulier des acides aminés) et entre 80 et 95% de poly-lysine. Selon une variante préférée, les copolymères ont 10% de molécules non conjugables de façon covalent à
la poly-lysine (en particulier des acides aminés) et 90% de poly-lysine (rapport de 1 pour 10).
La copolymérisation peut être réalisée notamment par la mise en oeuvre d'une étape de polymérisation (par exemple L-Met NCA ou L-Cys NCA et L-Lys NCA sont mélangés et polymérisés pour obtenir un copolymère) puis une étape de déprotection du copolymère obtenu après polymérisation. Des exemples illustratifs sont présentés sur les figures la, lb (Poly-(L-Lysine-co-méthionine), 2a et 2b (Poly-(L-lysine-co-L-cystéine) :
- la : Polymérisation : Le L-Met NCA et le L-Lys NCA (trifluornacétate) sont mélangés et polymérisés dans le rapport approprié pour obtenir le copolymère aléatoire approprié, - lb : Déprotection du PLys-TFA : Le copolymère précédent est déprotégé
pour obtenir du PLys sous forme de sel de bromure.
- 2a : Polymérisation : Le L-Cys NCA (trityle) et le L-Lys NCA
(trifluoroacétate) sont mélangés dans le rapport approprié pour obtenir le copolymère aléatoire approprié.
2b: Déprotection de Lys-TFA : Le copolymère précédent est déprotégé pour obtenir L-Lys sous forme de sel de bromure et L-Cys sous sa forme déprotégée.
La poly-lysine utilisée dans les compositions selon l'invention est préférentiellement une poly-L-lysine. La poly-lysine est préférentiellement linéaire. En particulier la poly-lysine utilisée peut-être une epsilon poly-L-lysine, préférentiellement un poly-L-lysine de poids moléculaire compris entre 12 000 et 20 000 Da. La poly-lysine utilisée dans les compositions selon l'invention peut être une poly-lysine présentant un contre ion bromure, ou chlore ou TFA acide trifluoroacétique.
Les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous forme liquide ou sous forme solide.
Lorsqu'elle est sous forme liquide la composition comprend au moins de l'eau et les constituants ci-avant mentionnés.
La forme solide est préférentiellement obtenue à partir de la forme liquide, de façon préférée par lyophilisation. Ainsi, lorsque la composition selon l'invention sous forme liquide comprend des micelles et qu'elle est lyophilisée sous forme solide, les micelles se reforment lorsque la composition sous forme solide est de nouveau mise dans une solution aqueuse.
8 Ainsi l'invention a également pour objet une composition sous forme solide, obtenue par lyophilisation ou atomisation ou une déshydratation lente d'une composition selon l'invention sous forme liquide.
La composition selon l'invention peut également comprendre des excipients pharmaceutiquement ou cosmétiquement acceptables. Ces excipients peuvent être choisis en particulier pour répondre aux pH et osmolarité de solution injectables chez l'homme ou l'animal. Il peut s'agir par exemple d'acides ou de bases pour ajuster le pH ou des solutions pour ajuster l'osmolarité, tels que NaCI, le PBS ou un tampon phosphate salin.
La composition selon l'invention est destinée notamment à être administrée à
l'être humain, ou à
un animal et se présente par conséquent sous une forme adaptée à une telle administration.
Lorsqu'elle se présente sous forme liquide, elle est préférentiellement adaptée à une administration par voie sous-cutanée ou par voie intraveineuse, notamment par voie intraveineuse en perfusion, et elle est conditionnée dans des contenants adaptés et connus de l'homme du métier pour conditionner ce type de produits. La composition selon l'invention peut être aussi administrée sous forme liquide via une pompe, du type des pompes à insuline.
Lorsqu'elle se présente sous forme solide, elle est préférentiellement adaptée à une administration :
- par voie transcutanée et elle est préférentiellement formulée et conditionnée sous forme d'un patch, ou - par voie nasale sous forme de poudre, ou - par voie sublinguale sous forme de poudre ou de comprimé, ou - par voie transmucosa le et elle est préférentiellement formulée et conditionnée sous forme d'un comprimé muco-adhésif.
Un exemple non limitatif de composition selon l'invention est une composition Cl comprenant au moins :
- A. les conjugués suivants, chaque conjugué étant constitué par une molécule liée de façon covalente à une poly-lysine :
- un ou plusieurs conjugués Oléyl-Poly-L-Lysine - un ou plusieurs conjugués Pa lmitic-Poly-L-Lysine - un ou plusieurs conjugués Lau ryl-Poly-L-Lysine - un ou plusieurs conjugués Azélayl-Poly-L-Lysine - un ou plusieurs conjugués Pa Imitoléyl-Poly-L-Lysine - un ou plusieurs conjugués Thioctyl-Poly-L-Lysine - un ou plusieurs conjugués Myristyl-Poly-L-Lysine - un ou plusieurs conjugués Orotyl-Poly-L-Lysine
9 - un ou plusieurs conjugués Acétate-Poly-L-Lysine - un ou plusieurs conjugués Butyrate-Poly-L-Lysine - un ou plusieurs conjugués Lactate-Poly-L-Lysine - un ou plusieurs conjugués Propionate-Poly-L-Lysine - un ou plusieurs conjugués Linoléyl-Poly-L-Lysine, et - B. du farnésyl cystéine et du cholestérol, et/ou un ester de ces molécules, encapsulées dans des micelles, préférentiellement dans des micelles formées par un ou plusieurs des conjugués listés au point A.
Préférentiellement :
- la quantité d'acide butyrique dans la composition Cl est supérieure à celle de chacune des autres molécules prises individuellement, et/ou - la quantité d'acide thioctique dans la composition Cl est supérieure à
celle de chacune des autres molécules prises individuellement, sauf de l'acide butyrique, et/ou - la quantité d'acide laurique dans la composition Cl est supérieure à
celle de de chacune des molécules suivantes prises individuellement :, l'acide palmitique, l'acide linoléique, l'acide azélaïque, farnésyl cystéine, l'acide palmitoléïque, le cholestérol, l'acide nnyristique, l'acide orotique, - la quantité d'acide oléique d'une part et d'acide lactique d'autre part dans la composition Cl est supérieure à celle de chacune des molécules suivantes prises individuellement : l'acide palmitique, l'acide laurique, l'acide linoléique, l'acide azélaïque, farnésyl cystéine, l'acide palmitoléïque, le cholestérol, l'acide myristique, l'acide orotique, l'acide acétique.
Préférentiellement, chacune des molécules actives dans la composition Cl représente entre 0,5 E-05 M et 10 E-05 M.
Un autre exemple non limitatif de composition selon l'invention est la composition C2 comprenant au moins :
- A. les conjugués suivants, chaque conjugué étant constitué par une molécule liée de façon covalente à une poly-lysine :
- un ou plusieurs conjugués Taurine-Poly-L-Lysine - un ou plusieurs conjugués Spermine-Poly-L-Lysine - un ou plusieurs conjugués Pantothényl-Poly-L-Lysine - un ou plusieurs conjugués Alpha tocophérol-Poly-L-Lysine - un ou plusieurs conjugués Biotinyl-Poly-L-Lysine - un ou plusieurs conjugués Glutathion-Poly-L-Lysine - un ou plusieurs conjugués Ascorbyl-Poly-L-Lysine - un ou plusieurs conjugués GABA-Poly-L-Lysine, - un ou plusieurs conjugués Rétinoyl-Poly-L-Lysine, et B. Co-enzyme Q10, et/ou un ester et/ou un sel de Co-enzyme Q10, encapsulées dans des micelles, préférentiellement dans des micelles formées par un ou plusieurs des conjugués listés au point A, et 5 C. des copolymères méthionine-Poly-L-Lysine et des copolymères cystéine-Poly-L-Lysine, la méthionine et/ou la cystéine pouvant être remplacé par un ester ou un sel ou un anhydride de ces molécules.
Préférentiellement :
- la quantité d'acide rétinoïque dans la composition C2 est supérieure à
celle de chacune des autres
10 molécules prises individuellement, et/ou - la quantité de taurine, la quantité de méthionine et la quantité de GABA
sont équivalentes dans la composition C2 et sont chacune supérieures à celle de chacune des autres molécules prises individuellement, sauf de l'acide rétinoïque et du coenzyme Q10.
Préférentiellement, chacune des molécules actives dans la composition C2 représente entre 6 E-05 M et 18 E-05 M.
Procédé de fabrication de compositions selon l'invention Les compositions selon l'invention peuvent être fabriquées par tout procédé
adapté.
Un procédé de fabrication particulièrement adapté comprend les étapes suivantes :
- a. créer un premix (pré-mélange) amphiphile : mélanger dans une solution aqueuse (préférentiellement de l'eau) un ou plusieurs conjugués de molécule conjugable à la poly-lysine, - b. ajouter dans le premix amphiphile au moins une molécule hydrophobe non conjugable à la poly-lysine (par exemple cholestérol, farnésyl-cystéi ne, co-enzyme Q10, etc.), et mettre sous agitation de façon à former des micelles formées par un ou plusieurs des conjugués du premix amphiphile encapsulant cette ou ces molécule(s) hydrophobe(s) non conjugable(s) à la poly-lysine, et/ou - c. ajouter dans le mélange des co-polymères de poly-lysine et de molécules non conjugables de façon covalente à la poly-lysine, en particulier des copolymères acide aminé-Poly-L-Lysine.
Ainsi un procédé de fabrication d'une composition selon l'invention comprend au moins une molécule hydrophobe et non conjugable de façon covalente à une poly-lysine, encapsulée dans une micelle formée par des conjugués amphiphiles constitués chacun par au moins une molécule hydrophobe conjuguée de façon covalente à une poly-lysine, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes :
- a. créer un premix ampliphile : mélanger des conjugués de molécules hydrophobes conjuguées de façon covalente à une poly-lysine dans une solution aqueuse, - b. ajouter dans le premix amphiphile, une ou plusieurs molécule(s) hydrophobe(s) non conjugable(s)
11 à une poly-lysine, et mettre sous agitation de façon à former une micelle de molécules hydrophobes conjuguées de façon covalente à une poly-lysine encapsulant le ou les molécules hydrophobe(s).
En effet, une variante de l'invention consiste à tirer parti de la nature amphiphile de certains conjugués poly-lysine (en particulier les conjugués acides-gras poly-lysine), pour créer un prémélange amphiphile qui permet la solubilisation contrôlée de molécules hautement hydrophobes non conjugables à la poly-lysine. Le processus de solubilisation selon un mode de réalisation préféré consiste en une addition contrôlée des molécules hydrophobes au prémélange amphiphile et à laisser le temps nécessaire à leur dissolution sous agitation.
Préférentiellement, l'agitation à l'étape b. est réalisée pendant au moins 5 minutes, encore plus préférentiellement entre 5 et 20 minutes, et de façon préférée à une vitesse d'agitation inférieure ou égale à 900 tours par minute, en particulier à une vitesse d'agitation comprise entre 50 et 800 tours par minute.
Préférentiellement, les conjugués poly-lysine et autres molécules doivent être dissous et formulés dans l'eau. Il est possible en suite d'ajouter des sels appropriés comme le PBS/NaCl, mais ceux-ci ne doivent pas être utilisés avant. En effet, l'utilisation de sels comme le PBS
ou le NaCI au niveau des étapes a.et/ou b. empêche la formation de micelles ne permet pas d'obtenir une solution claire et la solubilisation n'est pas optimisée. Si du PBS ou Nacl est utilisé il doit préférentiellement l'être après formation des micelles et une fois que la solution est limpide.
Selon un mode de réalisation préféré, le procédé de fabrication selon l'invention comprend également une étape d. de séparation des phases soluble et insoluble, pour récupérer la phase soluble. Dans ce cas la phase insoluble est éliminée et la phase soluble constitue la composition selon l'invention. En effet, un processus de séparation physique (filtration, ultrafiltration) est préférentiellement réalisé pour assurer l'isolement de la fraction soluble, contenant à la fois le prémélange amphiphile, les copolymères et/ou les molécules hydrophobes encapsulées solubilisées.
Selon un mode de réalisation, le premix de l'étape a. comprend également un ou plusieurs copolymère(s) de molécule conjuguée à une poly-lysine par polymérisation et/ou à une étape c. qui est mise en uvre après l'étape b. ou après l'étape d., un ou plusieurs copolymère(s) de molécule conjuguée à une poly-lysine sont ajouté(s) dans le mélange.
De même, le premix de l'étape a. peut comprendre également une ou plusieurs autres molécules conjuguées de façon covalente à une poly-lysine et/ou qu'après l'étape b. ou d., une ou plusieurs autres molécules conjuguées de façon covalente à une poly-lysine sont ajoutée(s) dans le mélange.
Selon une variante, si la composition ne comprend pas de micelles, le procédé
de fabrication d'une composition selon l'invention comprend au moins une molécule conjuguée à une poly-lysine par polymérisation, ladite au moins une molécule et la poly-lysine formant un copolymère, caractérisé
en ce qu'il comprend le mélange dudit au moins un copolymère avec au moins une molécule conjuguée de façon covalente à une poly-lysine.
La composition sous forme liquide peut ensuite être lyophilisée ou déshydratée pour être sous forme
12 solide. Le procédé selon l'invention peut en effet comprendre une étape de lyophilisation ou d'atomisation ou de déshydratation lente de la composition liquide obtenue préalablement pour obtenir une composition solide, puis une étape de solubilisation de cette composition solide.
Préférentiellement l'étape de séchage est réalisée par lyophilisation lente par exemple entre 12 et 36 heures.
Par ailleurs si des conjugués de poly-lysine et/ou des co-polymères de la composition ne sont pas intégrés dans le premix de l'étape a ou c, ceux-ci peuvent être ajoutés dans le mélange après l'étape b. c'est-à-dire après la formation des micelles et l'encapsulation du co-enzyme Q10.
Les conjugués molécule active-polymère peuvent être fabriqués par tout moyen connu de l'homme du métier pour conjuguer une molécule de façon covalente à un polymère en fonction de leur nature chimique. A titre d'exemple:
- l'acide ascorbique est conjugué à la poly-lysine par une liaison carbamate, - la spermine et la taurine sont conjugués à la poly-lysine par une liaison urée.
- le glutathion, l'acide pantothénique, l'acide aminobutyrique, la biotine, l'alpha tocophérol, le GABA, l'acide laurique, l'acide myristique, l'acide palmitique, l'acide oléique, l'acide linoléique, l'acide orotique, l'acide azélaïque, l'acide thioctique, l'acide acétique, l'acide palmitoléique, l'acide butyrique, l'acide lactique, l'acide propionique, l'acide rétinoïque et l'acide oléique sont conjugués à
la poly-lysine par une liaison amide.
Les copolymères peuvent être fabriqués par tout moyen connu de l'homme du métier. Les molécules, en particulier les molécules d'acides aminés, sont incorporées dans la structure du polymère préférentiellement en présence d'un solvant anhydre et selon un mode de réalisation dans un rapport de 1 molécule de cystéine ou méthionine pour 10 monomères du polymère.
Utilisations Les compositions selon l'invention peuvent être utilisées en particulier comme médicament, pour prévenir et/ou traiter des pathologies notamment chez l'Homme ou l'animal c'est-à-dire pour un sujet Humain ou animal, en fonction des molécules qu'elles contiennent.
De même les compositions selon l'invention peuvent être utilisées comme complément alimentaire ou encore comme composition cosmétique.
L'exemple de composition Cl est une formulation générique particulièrement adaptée pour prévenir et/ou traiter les maladies multifactorielles, notamment les maladies chroniques multifactorielles, et en particulier les maladies impliquant une perméabilité intestinale.
Elle est capable d'agir de façon combinée :
- comme immuno-modulateur et régulateur de l'auto-immunité, en particulier grâce à la présence d'acide oléique, de l'acide palmitique, de l'acide palmitoléique, - comme anti-inflammatoire, en particulier grâce à la présence de l'acide palmitique, de l'acide
13 azélaïque, du farnésyl cystéine, de l'acide palmitoléique, de l'acide myristique, - comme antibactérien, en particulier grâce à la présence de l'acide laurique, de l'acide azélaïque, - comme antifongique, en particulier grâce à la présence de l'acide laurique, - comme anti-radicalaire, en particulier grâce à la présence du farnésyl cystéine, - comme antagoniste des protéines isoprénylées, en particulier grâce à la présence du farnésyl cystéi ne, - sur la stabilisation des membranes cellulaires, en particulier grâce à la présence de cholestérol, - comme piégeur de radicaux libres et de métaux, en particulier grâce à la présence d'acide thioctique.
- comme anti-viral, en particulier grâce à la présence d'acide myristique, - comme substrat synergique cellulaire, en particulier grâce à la présence de butyrate, - pour favoriser le développement de la flore intestinale, en particulier grâce à la présence d'acide orotique, - pour réguler les muqueuses et la flore intestinale, en particulier grâce à la présence d'acétate, de lactate, de propionate et de Butyrate.
Les différentes molécules présentes agissent en synergie et permettent notamment de rétablir la fonction de la perméabilité intestinale.
Ainsi, la composition Cl peut être utilisée pour rétablir la fonction de la membrane intestinale et/ou pour maintenir la perméabilité intestinale et/ou prévenir ou lutter contre une hyperperméabilité de la muqueuse intestinale.
Selon une variante, la composition Cl peut être utilisée comme complément alimentaire chez une personne saine ou un animal sain, en particulier pour diminuer la perméabilité
intestinale de la personne ou de l'animal à qui elle est destinée.
L'intestin joue un rôle clef d'initiateur, de régulateur sur la chronicité des maladies. Ainsi, la composition Cl peut notamment être administrée à l'Homme ou l'animal pour prévenir ou lutter contre des maladies dans lesquelles l'intestin joue un rôle important, notamment des maladies chroniques, et en particulier des maladies chroniques dégénératives, telles que des maladies neurodégénératives telles que par exemple la maladie de Charcot. La composition Cl peut aussi être utilisée comme activateur du système immunitaire pour prévenir ou lutter contre des maladies auto immunes et infectieuses.
La composition peut être utilisée en particulier pour diminuer la chronicité
des maladies chroniques.
Préférentiellement, la composition Cl est utilisée en prévention ou en traitement dès les premiers symptômes d'une hyperperméabilité intestinale ou d'une maladie chronique, de façon à empêcher le développement de la chronicité de ladite maladie et ainsi éviter l'orage inflammatoire qui découle
14 d'une hyperperméabilité intestinale prolongée.
De façon spécifique, la composition Cl est particulièrement utile pour au moins :
- réduire le processus inflammatoire, et/ou - réduire le processus auto-immun, et/ou - diminuer la perméabilité intestinale, et/ou - un effet anti-oxydant, et/ou - un effet anti-radicalaire, et/ou - un effet antibactérien et/ou antiviral/ou et antifongique.
L'invention a donc également pour objet une composition Cl selon l'invention pour son utilisation comme médicament, notamment chez l'Homme ou l'animal c'est-à-dire pour un sujet Humain ou animal.
En particulier la composition Cl peut être utilisée dans la prévention et/ou le traitement d'une pathologie multifactorielle, en particulier une pathologie multifactorielle chronique, notamment une pathologie choisie parmi les maladies inflammatoires, les maladies neurodégénératives, les maladies bactériennes, les maladies virales, les maladies auto-immunes, les allergies et intolérances alimentaires. Notamment la composition Cl peut être utilisée dans la prévention et/ou le traitement d'une pathologie choisie parmi l'eczéma, le psoriasis, les maladies inflammatoires chroniques intestinales (notamment maladie de Crohn et Coeliaque), la maladie d'Alzheimer, la maladie de Parkinson, la sclérose en plaque, la maladie de Charcot.
La composition C2 est une formulation particulièrement adaptée pour prévenir et/ou traiter les maladies multifactorielles, notamment les maladies chroniques multifactorielles. La composition C2 est particulièrement utile pour la prévention et le traitement des maladies neurodégénératives, auto-immunes, infectieuses ou des cancers. En particulier, elle présente une grande efficacité dans la prévention et le traitement de la maladie de Charcot. La composition C2 intervient sur les processus classiques et connus pour diminuer la chronicité des maladies. Son action est tout particulièrement adaptée aux maladies neurodégénératives, auto-immunes, cancer et infectieuse.
Elle est notamment capable d'agir de façon combinée :
- comme immuno-modulateur et régulateur de l'auto-immunité, en particulier grâce à la présence d'acide rétinoïque et de GABA, - comme neuroprotecteur, en particulier grâce à la présence de taurine, co-enzyme Q10, GABA
- comme anti-inflammatoire, en particulier grâce à la présence de spermine, - comme protecteur cellulaire, en particulier grâce à la présence d'acide pantothénique, co-enzyme 010 (protection en particulier au niveau de la chaine mitochondria le) - comme protecteur des membranes cellulaires, en particulier grâce à la présence de l'alpha-tocophérol, - comme anti-oxydant, en particulier grâce à la présence de taurine, de cystéine, de méthionine, spermine, acide pantothénique, alpha-tocophérol, co-enzyme Q10, glutathion, acide ascorbique, - comme régulateur du métabolisme cellulaire piégeur des dérivés oxygénés, en particulier grâce à
5 l'acide ascorbique, - comme précurseur du glutathion, en particulier grâce à la présence de cystéine, - sur la stabilisation des membranes cellulaires, - comme piégeur de radicaux libres et de métaux, en particulier grâce à la présence de taurine, de cystéine, de méthionine, spermine, acide pantothénique, co-enzyme Q10, glutathion.
tu Les différentes molécules présentes agissent en synergie et permettent notamment de prévenir ou lutter contre les facteurs à l'origine des maladies chroniques et en particulier de la maladie de Cha rcot.
Ainsi, la composition C2 peut être utilisée pour prévenir et/ou lutter contre les maladies chroniques notamment pour agir sur les métabolismes spécifiques de la pathologie. La composition C2 peut
15 être utilisée en particulier pour diminuer la chronicité des maladies chroniques.
Préférentiellement, la composition C2 est utilisée en prévention ou en traitement dès les premiers symptômes d'une maladie chronique, en particulier une maladie neurodégénérative et spécifiquement la maladie de Charcot.
La composition C2 selon l'invention peut être utilisée comme médicament, notamment chez l'Homme ou l'animal c'est-à-dire pour un sujet Humain ou animal.
En particulier la composition C2 peut être utilisée dans la prévention et/ou le traitement d'une pathologie multifactorielle, en particulier une pathologie multifactorielle chronique, notamment une pathologie choisie parmi les maladies inflammatoires, les maladies neurodégénératives, les maladies bactériennes, les maladies virales, les maladies auto-immunes, les allergies et intolérances alimentaires, et en particulier la maladie de Charcot.
La composition C2 peut être utilisée avec la composition Cl, simultanée ou séquencée dans le temps.
En particulier, il est préférable d'administrer la composition Cl d'abord, puis la composition C2, les deux administrations étant préférentiellement séparées d'au moins 1 heure, encore plus préférentiellement d'au moins 4 heures, idéalement une le matin et une le soir.
L'invention est à présent décrite par des exemples et des résultats d'essais.
Exemples Exemple 1: composition Cl Un exemple de composition Cl adaptée pour des tests sur des souris est présenté ci-après.
Les quantités suivantes de conjugués ont été pesées selon le tableau 1 pour préparer un stock de
16 300 ml de composition Cl 10x. Tous les conjugués ont été pesés avec une balance analytique dans une hotte à flux laminaire.
[Tableau 1]
Conjugué PLL (PLL = Poly-L-Lysine) Quantité (mg) Oléyl-PLL 201 Palmitic-PLL 78 Lauryl-PLL 189 Lynoléyl-PLL 78 Azélayl-PLL 75 Plamitoleyl-PLL 156 Thioctyl-PLL 225 Myristyl-PLL 78 Orothyl-PLL 72 Acetate-PLL 174 Butyrate-PLL 285 Lactate-PLL 177 Propionate-PLL 177 Chaque conjugué a été pesé dans un tube à centrifuger stérile de 50 ml, et a été dissous dans 30 ml d'eau, à l'aide d'un vortex. Chaque conjugué a été agité pendant une durée comprise entre 10 et 20 minutes en fonction de la solubilité du conjugué.
En parallèle des molécules de cholestérol et de farnésylcystéine ont été
dissous séparément à la concentration approximative de 50 mg/mi dans de l'éthanol absolu et filtrés sur un filtre filtrant de 0,22 'lm. Le solvant a été évaporé par un rotavaporateur. Les quantités nécessaires de solides secs ont été pesées dans une hotte à flux laminaire, telles que présentées dans le tableau 2.
[Tableau 2]
Molécule Quantité (mg) Cholestérol 12 Farnésylcystéine 12 Dans un flacon stérile de 500 ml et muni d'une barre magnétique, 23,8 ml de chaque solution conjuguée précédemment préparée ont été ajoutés sous agitation magnétique (700 tours par minute). Les quantités correspondantes de sels (préalablement lyophilisés) à
300 de PBS ont été
ajoutées à la solution de conjugués sous agitation magnétique (700 tours par minute).
17 Le cholestérol et la farnésylcystéine ont été ajoutés et le mélange et laissés sous agitation pendant 25 heures (700 tours par minute).
30 ml de formulation Cl 10 x ont été prélevés dans une hotte à flux laminaire et ajoutés à un nouveau flacon stérile de 500 ml.
270 ml de PBS stérile ont été ajoutés afin d'obtenir la formulation Cl lx. La formulation a été agitée pendant 30 minutes.
Les flacons ont été préparés selon le plan suivant en utilisant une pipette stérile et calibrée de 5 ml:
Cl 1X = 83 flacons, 2 ml chacun.
Cl 10X = 83 flacons de 2 ml chacun.
Les 166 flacons ont été placés dans un bac de lyophilisation en acier et un cycle de lyophilisation d'une journée a été lancé.
Exemple 2 : composition C2 Un exemple de composition C2 adaptée pour des tests sur souris est présenté ci-après.
Les quantités suivantes de conjugués ont été pesées selon le tableau 3 pour préparer un stock de 300 ml de composition C2 10x. Tous les conjugués ont été pesés avec une balance analytique dans une hotte à flux laminaire.
[Tableau 3]
Conjugué PLL (PLL = Poly-L-Lysine) Quantité (mg) Alpha-tocophérol-PLL 210 Ascorbyl-PLL 189 Biotinyl-PLL 204 Glutathion-PLL 222 Pa nthotényl-PLL 204 Retynoil-PLL 606 Spermine-PLL 198 Taurine-PLL 330 PLL/Cystéine (copolymère) 180 PLL/Méthionine (copolymère) 303 Chaque conjugué a été pesé dans un tube à centrifuger stérile de 50 ml, et a été conservé au congélateur à -20 C jusqu'à son utilisation.
18 En parallèle le coenzymeQ10 a été dissous à la concentration approximative de 50 mg/m1 dans de l'éthanol absolu et filtré à travers un filtre de 0,22 m. Le solvant a été
évaporé par un rotavaporateur.
Les quantités nécessaires de solides secs ont été pesées dans une hotte à flux laminaire, telles que présentées dans le tableau 4.
[Tableau 4]
Molécule Quantité (mg) Co-enzyme Q10 156 Le solide a été conservé dans un tube à centrifuger stérile à -20 C jusqu'à
son utilisation.
Les tubes de centrifugation de 50 ml précédemment préparés avec les conjugués et copolymères ont été pris et laissés se réchauffer à température ambiante. Après ce temps, 30 ml d'eau ont été
ajoutés à chaque tube de centrifugation.
Les conjugués et copolymères ont été dissous à l'aide d'un vortex, en agitant pendant un temps compris entre 10 et 20 minutes, selon la solubilité des conjugués et copolymères.
Le tube de centrifugation contenant la coenzyme Q10 a également été sorti du congélateur et laissé
se réchauffer à température ambiante.
Un flacon stérile de 500 ml a été pris et muni d'une barre magnétique. 27,3 ml de chaque solution conjuguée précédemment préparée ont été ajoutés au flacon sous agitation magnétique (700 tours par minute).
Les quantités correspondantes de sels (préalablement lyophilisés) à 300 de PBS
ont été ajoutées à
la solution de conjugués sous agitation magnétique (700 tours par minute).
Le coenzymeQ10 a été ajouté et le mélange a été laissé sous agitation pendant 2 heures (700 tours par minute).
Après 2 heures, 30 ml de formulation C2 10 x ont été prélevés dans une hotte à
flux laminaire et ajoutés à un nouveau flacon stérile de 500 ml.
270 ml de PBS stérile ont été ajoutés afin d'obtenir la formulation C2 xl. La formulation a été agitée pendant 30 minutes.
Les flacons ont été préparés selon le plan suivant en utilisant une pipette stérile et calibrée de 5 ml:
C2 1X = 83 flacons, 2 ml chacun.
C2 10X = 83 flacons de 2 ml chacun.
Les 166 flacons ont été placés dans le bac de lyophilisation en acier et un cycle de lyophilisation d'une journée a été lancé.
Exemple 3 : composition Cl Un exemple de composition Cl adaptée pour des tests sur des rats est présenté
ci-après.
19 Le procédé de fabrication de la composition est similaire à celui présenté à
l'exemple 1. Les concentrations de chacun des constituants sont différentes et présentés dans le tableau 5.
[Tableau 5]
Concentration Cl 10XConcentration Cl 1X
Composés (mg/mL) (mg/mL) Acetate PLL 1,16 0,12 Azélayl-PLL 0,50 0,05 Butyrate-PLL 1,88 0,19 Lauryl-PLL 1,26 0,13 Lactate-PLL 1,18 0,12 Linoléyl-PLL 0,52 0,05 Myristyl-PLL 0,51 0,05 Oléyl-PLL 1,33 0,13 Orotyl-PLL 0,48 0,05 Palmitic-PLL 0,52 0,05 Palmitoléyl-PLL 1,04 0,10 Propionate-PLL 1,17 0,12 Thioctyl-PLL 1,49 0,15 Cholesterol 0,09 0,01 FarCys 0,07 0,01 La somme des concentrations en conjugués PLL + cholestérol + Farnésylcystéine pour Cl 10X est de 13,2 mg/mL.
La somme des concentrations des conjugués PLL + cholestérol + Fa rnésylcystéine pour Cl 1X est de 1,32 mg/mi.
Exemple 4 : composition Cl Un exemple de composition Cl adaptée pour l'Homme est présenté ci-après.
Le procédé de fabrication de la composition est similaire à celui présenté à
l'exemple 1. Les concentrations de chacun des constituants sont différentes et présentés dans le tableau 6.
[Tableau 6]
Concentration Cl 10XConcentration Cl 1X

Composés (mg/mL) (mg/mL) Acetate PLL 7,192 0,744 Azélayl-PLL 3,1 0,31 Butyrate-PLL 11,656 1,178 Lauryl-PLL 7,812 0,806 Lactate-PLL 7,316 0,744 Linoléyl-PLL 3,224 0,31 Myristyl-PLL 3,162 0,31 Oléyl-PLL 8,246 0,806 Orotyl-PLL 2,976 0,31 Palmitic-PLL 3,224 0,31 Palmitoléyl-PLL 6,448 0,62 Propionate-PLL 7,254 0,744 Thioctyl-PLL 9,238 0,93 Cholesterol 0,558 0,062 FarCys 7,192 0,744 Exemple 5 : composition C2 Un exemple de composition C2 adaptée pour l'Homme est présenté ci-après.
Le procédé de fabrication de la composition est similaire à celui présenté à
l'exemple 2. Les concentrations de chacun des constituants sont différentes et présentés dans le tableau 7.
5 [Tableau 7]
Concentration Cl 10X Concentration Cl 1X
Composés (mg/mL) (mg/mL) Alpha-tocophérol-PLL 8,61 0,861 Ascorbyl-PLL 7,749 0,7749 Biotinyl-PLL 8,364 0,8364 GABA-PLL 15,498 1,5498 Glutathion-PLL 9,102 0,9102 Panthotényl-PLL 8,364 0,8364 Retynoil-PLL 24,846 2,4846 Spermine-PLL 8,118 0,8118 Taurine-PLL 13,53 1,353 PLL/Cystéine (copolymère) 7,38 0,738 PLL/Méthionine (copolymère)12,423 1,2423 Coenzyme 010 6,396 0,6396 Résultats d'essais Etude de l'effet de la composition Cl selon l'invention pour restaurer la perméabilité intestinale Le but de cette étude est d'évaluer l'efficacité d'une formulation injectable selon l'invention sur la restauration de la perméabilité intestinale suite à l'induction d'une inflammation intestinale induite par du dextran sulfate de sodium (DSS) chez le rat.
L'épithélium intestinal est une barrière dynamique qui limite l'accès des bactéries, des parasites, des virus mais aussi de certaines molécules chimiques aux tissus de l'hôte. Il est composé de différents types de cellules ayant chacune un rôle bien défini, tels que les entérocytes responsables de la fonction d'absorption des nutriments, les cellules caliciformes sécrétant le mucus dont l'épaisseur lo maintient les bactéries et autres microorganismes à distance des entérocytes, des cellules de Paneth, situées au fond des cryptes de l'intestin grêle, participant au maintien de l'homéostasie et au rôle de défense de la muqueuse intestinale via la sécrétion d'agents antimicrobiens de type défensines et les cellules microfold dites cellules M, spécialisées dans l'endocytose d'antigènes, de molécules ou encore de microorganismes présents dans le lumen intestinale. Elles jouent le rôle de cellules présentatrices d'antigène puisqu'elles présentent au système immunitaire sous-jacent les antigènes endocytés. La barrière physique épithéliale assurée par les entérocytes est renforcée par une couche de glycocalyx et de mucus épaisse (couche plus fine au niveau des cellules M
pour accéder plus facilement au microbiome du lumen intestinal) et la sécrétion IgA par transcytose entérocytaire produits par les plasmocytes sous-jacents. Les cellules épithéliales forment une monocouche de cellules polarisées reposant sur la lamina propria via leur pôle basolatéral et étroitement liées entre elles par des jonctions serrées. Dans cette lamina propria, se situe les plaques de Peyer, constituées de follicules riches en lymphocytes, site initiateur de des réponses pro ou anti-inflammatoires. De nombreuses pathologies sont associées à une altération de la perméabilité
intestinale telles que les maladies inflammatoires chroniques de l'intestin, l'obésité, la sclérose en plaques, la maladie de Charcot et Alzheimer. Cette altération conduit à une augmentation de la perméabilité intestinale aboutissant le plus souvent par une inflammation de la paroi de l'intestin.
La composition testée dans cette étude est la composition Cl de l'exemple 3.
L'épithélium intestinale est une barrière dynamique qui limite l'accès des bactéries, des parasites, des virus mais aussi de certaines molécules chimiques aux tissus de l'hôte. Il est composé de différents types de cellules ayant chacune un rôle bien défini, tels que les entérocytes responsables de la fonction d'absorption de l'intestin, les cellules caliciformes sécrétant le mucus, les cellules M
responsables du passage de macromolécules et des Antigènes de la lumière intestinale (Lamina Propria) vers les cellules immunitaires sous-jacentes ainsi que des cellules neuroendocrines. La barrière physique épithéliale assurée par les entérocytes est renforcée par une couche de glycocalyx et de mucus épaisse. Les cellules épithéliales forment une monocouche de cellules polarisées reposant sur la lamina propria via leur pôle basolatéral et étroitement liées entre elles par des jonctions serrées. De nombreuses pathologies sont associées à une altération de la perméabilité
intestinale telles que les maladies inflammatoires chroniques de l'intestin, l'obésité, la sclérose en plaques, la maladie de Charcot et Alzheimer. Cette altération conduit à une augmentation de la perméabilité intestinale aboutissant le plus souvent par une inflammation de la paroi de l'intestin.
. L'objectif principal de l'étude est de mettre en évidence l'efficacité de l'invention sur la remédiation de la perméabilité intestinale suite à l'induction d'une inflammation intestinale chronique.
Pour tester ces hypothèses, des rats ont reçu différentes doses de la composition Cl. de l'exemple 3, administrées par injection sous cutanée après induction de l'inflammation intestinale.
Le protocole opératoire est décrit en suivant.
1- Mise en place du modèle d'inflammation chronique Après leur arrivée, les animaux (rats VVistar, 280-300g) ont été élevés dans des cages de 900 crn2 (3 animaux par cages). Durant cette période d'acclimatation, les animaux ont eu libre accès à l'eau et la nourriture. Après cette période, les animaux (n = 9) ont reçu ad libitum la nourriture et une solution de 2% (m/v) de Dextran Sulfate de Sodium (DSS) dans l'eau de boisson.
L'induction de l'inflammation intestinale a été suivie 3, 5 et 7 jours après le début de l'ajout de DSS. Un groupe témoin (n = 3) a reçu de la nourriture et de l'eau ad libitum. Si des signes de douleur sont observés, l'animal concerné a été isolé et du paracétamol (200 mg/kg) lui a été
administré par gavage 2 fois par jours. Ces animaux ont été sortis du schéma expérimental. Si une perte de poids importante a été observée, les animaux ont été sacrifiés lorsqu'ils avaient atteint 80% de leur poids initial. Enfin, les animaux ont été sacrifiés s'ils présentaient une attitude inhabituelle traduisant un mal-être.
Les conditions d'hébergement ont été les suivantes : température 20-24 C, hygrométrie 60 plus ou moins 10%, cycle 12h/12h.
Les animaux ont été observés quotidiennement pour repérer des signes de stress ou de douleur. Des pesées journalières des animaux, de la nourriture et de l'eau ont été
réalisées. L'apparition des signes cliniques de l'inflammation est basée sur la perte de poids corporel, la consistance des selles (normale-0, molle-2, diarrhée-4) et les saignements rectaux (0 - 4). Les résultats ont permis de déterminer un index de sévérité de l'inflammation qui représente la moyenne des scores obtenus pour la consistance des selles et des saignements rectaux. La perte de poids représente le pourcentage de différence de poids des rats à J1 (ajout DSS) à J7.
2- Détermination de la dose efficace)) Après leur arrivée, les animaux (rats Wistar, 280-300g) ont été élevés dans des cages de 900 crn2 (5 animaux par cages). Durant cette période d'acclimatation, les animaux ont eu libre accès à l'eau et la nourriture. Après cette période, les animaux (n = 30) ont été répartis en 4 groupes (Témoin - n =
5, DSS + composition Cl 10X ¨ n = 10). Le groupe Témoin a reçu de la nourriture et de l'eau ad libitum durant toute l'expérimentation. Les rats ont reçu de la nourriture et une solution de DSS de 2% dans l'eau de boisson ad libitum pendant 3, 5 ou 7 jours (durée déterminée lors de la première expérimentation). Après l'induction de l'inflammation intestinale chaque rat a reçu une injection intra-péritonéale de lmLde composition Cl. Les administrations de composition Cl ont été réalisées en 1 fois par jour. Si des signes de douleur ont été observés, l'animal concerné a été isolé et du paracétamol (200 mg/kg) lui a été administré par gavage 2 fois par jours. Ces animaux ont été sortis du schéma expérimental. Si une perte de poids importante a été observée, les animaux ont été
sacrifiés lorsqu'ils ont atteint 80% de leur poids initial. Enfin, les animaux ont été sacrifiés s'ils présentaient une attitude inhabituelle traduisant un mal-être.
Les conditions d'hébergement ont été les suivantes : température 20-24 C, hygrométrie 60 plus ou moins 10%, cycle 12h/12h.
Les animaux ont été observés quotidiennement pour repérer des signes de stress ou de douleur. Des pesées journalières des animaux, de la nourriture et de l'eau ont été
réalisées.
L'apparition des signes cliniques de l'inflammation est basée sur la perte de poids corporel, la consistance des selles (normale-0, molle-2, diarrhée-4) et les saignements rectaux (0 -4).
Les résultats permettent de déterminer un index de sévérité de l'inflammation qui représente la moyenne des scores obtenus pour la consistance des selles et des saignements rectaux. La perte de poids représente le pourcentage de différence de poids des rats ((1X x J0)/.10)*100). A la fin de l'expérimentation, les animaux ont été anesthésiés (cf. prélèvement organes) et différents prélèvements ont été réalisés : sang, intestin grêle, c cum, côlon, foie, rate et plusieurs paramètres évalués : taille du c cum, poids du foie, de la rate, et du c cum.
Etude de perméabilité
Une étude de perméabilité a été réalisée sur organe isolé (jéjunum ou côlon) pour déterminer l'efficacité de la dose de composition Cl sur le rétablissement de la perméabilité intestinale.
Prélèvement des fragments digestifs Cette approche ex vivo utilise un fragment de jéjunum ou de côlon issu du tractus digestif de rat. Les rats ont été anesthésiés par inhalation d'isoflurane (1000mg/g) avec une induction à 3% et un entretien au cours de l'opération de 1,5%. Après laparotomie et ligature de l'artère coeliaque accolée à l'oesophage, un fragment de 10 cm de jéjunum ou de côlon a été prélevé. Le prélèvement a été
pesé. Les rats ont été ensuite sacrifiés par injection de pentoba rbita I
sodique (12 mg/100g).
Préparation de l'organe éversé et prélèvement Les compartiments séreux et muqueux de l'organe ont été rapidement rincés avec du sérum physiologique (37 C) et l'organe a été éversé. Une ligature a été réalisée à
l'une des extrémités. La seconde extrémité permet l'introduction de 1 mL de milieu Krebs-Henseleit.
Cette extrémité a ensuite été ligaturée, l'organe a été pesé puis placé dans une cuve contenant 10 mL de milieu de survie Krebs-Henseleit additionnés à 250 mg de FITC-dextran de 4 Kda (compartiment muqueux).
Durant toute l'expérimentation, les organes éversés ont été maintenus à 37 C
et oxygénés avec un mélange 02/CO2 (95%/5%). Toutes les 30 minutes, le milieu du compartiment muqueux a été agité
en réalisant 3 cycles d'aspiration-refoulement à l'aide d'une micropipette de 1mL. Après 2 h d'incubation, un prélèvement de 1 mL a été réalisé côté muqueux.
Les organes ont été retirés de la cuve en verre et une des extrémités a été
coupée. Le milieu séreux a été prélevé dans un tube préalablement pesé. Après prélèvement, le tube a été à nouveau pesé
afin d'évaluer le transfert de milieu de survie au cours de l'expérimentation.
Après la pesée, le FITC-Dextran a été dosé par fluorométrie en duplicat (excitation, 490 nnn ;
émission, 530 nm).
Après avoir pesé l'organe, une coupe longitudinale de ce dernier a été
réalisée et ce dernier a été
rapidement congelé dans de l'azote liquide. L'organe congelé a été ensuite introduit dans un sachet zip et a été congelé dans l'azote liquide puis conservé à -80 C.
Etude des paramètres de l'inflammation L'étude a été faite par le comportement des animaux traités. En effet une inflammation provoque une agitation exacerbée chez les animaux.
Résultats Les résultats sur l'observation des symptômes de l'inflammation sont présentés dans les tableaux 8 à 10 (avant injection de la composition Cl) et sur les tableaux 11 à 15 (après injection de la composition Cl). Sur ces tableaux :
- la variation de poids en pourcent est calculé comme suit : ((_IX x J0)/J0)*100) - La consistance des selles est évaluée comme suit : 0 = normale ; 2 =
molle ; 3 = diarrhée - Les saignements rectaux sont évalués comme suit : 0 = rien ; 1 = légers ; 2 = modérés ; 3=
importants ; 4 = abondants.

[Tableau 8]
Jours J3 J4 Variation Consistance Variation Consistance Saignement Saignement du poids des selles du poids des selles (0 (0 - 4) (0 -4) (%) (0/2/4) (%) /2/4) Rat 1 10,7 0 0 12,14 0 0 Rat 2 11,1 0 0 13,02 0 0 Témoin Rat 3 9,5 0 0 16,07 0 0 Moyenne 10,4 0 0 13,7 0 0 Rat 4 5,2 0 0 8,52 0 0 Rat 5 8,7 0 0 11,00 0 0 DSS 2%
Rat 6 4,8 0 0 9,52 0 0 Moyenne 6,2 0 0 9,7 0 0 Rat 7 7,1 2 0 7,12 2 0 Rat 8 3,6 2 0 5,57 2 0 DSS4%
Rat 9 6,2 2 0 6,49 2 0 Moyenne 5,6 2 0 6,4 2 0 [Tableau 9]
Jours J5 J6 Variation Consistance Variation Consistance Saignement Saignement du poids des selles du poids des selles (0 (0 - 4) (0 -4) ( A) (0/2/4) (%) /2/4) Rat 1 11,07 0 0 14,04 0 0 Rat 2 13,65 0 0 16,51 0 0 Témoin Rat 3 14,75 0 0 17,74 0 0 Moyenne 13,2 0 0 16,1 0 0 Rat 4 8,52 0 0 10,03 0 0 Rat 5 10,33 0 0 15,07 0 0 DSS 2%
Re6 7,94 0 0 10,54 0 0 Moyenne 8,9 0 0 11,9 0 0 Rat 7 6,44 2 0 8,14 2 0 Rat 8 8,20 2 0 9,64 2 0 D554%
Rat 9 5,84 2 0 7,40 2 0 Moyenne 6,8 2 0 8,4 2 0 [Tableau 10]
Jours J7 Variation Consistance Saignement du poids des selles (0 - 4) (%) (0/2/4) Rat 1 7,25 0 0 Rat 2 9,46 0 0 Témoin Rat 3 9,31 0 0 Moyenne 8,67 0 0 Rat 4 4,59 2 0 Rat 5 6,50 2 0 DSS 2%
Rat 6 4,06 2 0 Moyenne 5,05 2 0 Rat 7 5,08 2 0 Rat 8 4,62 2 0 DS54%
Rat 9 3,90 2 2 Moyenne 4,53 2 1 [Tableau 11]
Jours J8 J9 Variation Consistance Variation Consistance Saignement Saignement du poids des selles du poids des selles (0 (0 - 4) (0 -4) (A) (0/2/4) (%) /2/4) Rat 1 9,75 0 0 10,64 0 0 Témoin Moyenne 6,53 2 0 3,13 2 0 Rat 5 4,22 2 0 2,48 2 0 DSS 2% Rat 6 5,38 2 0 2,80 2 0 Moyenne 6,92 4 0 3,67 4 0 Rat 8 1,36 4 2 -1,10 4 4 DSS4% Rat 9 4,14 4 1 1,28 4 2 Moyenne 9,75 0 0 10,64 0 0 FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26) [Tableau 12]
Jours J10 J11 Variation Consistance Variation Consistance Saignement Saignement du poids des selles du poids des selles (0 (0 - 4) (0 -4) (%) (0/2/4) (%) /2/4) Rat 1 18,64 0 0 20,11 0 0 Témoin Moyenne 3,17 2 0 5,87 2 0 Rat 5 5,21 2 0 3,27 2 0 DSS 2% Rat 6 4,19 2 0 4,57 2 0 Moyenne 4,00 4 0 4,43 4 0 Rat 8 -0,88 4 4 -0,36 4 0 DSS4% Rat 9 1,56 4 2 2,03 4 0 Moyenne 18,64 0 0 20,11 0 0 [Tableau 13]
Jours J12 J13 Variation Consistance Variation Consistance Saignement Saignement du poids des selles du poids des selles (0 (0 - 4) (0 -4) (%) (0/2/4) (%) /2/4) Rat 1 17,50 0 0 20,18 0 0 Témoin Moyenne 3,73 2 0 3,63 2 0 Rat 5 0,00 2 0 -2,35 2 0 DSS 2% Rat 6 1,87 2 0 0,64 2 0 Moyenne 4,26 4 0 3,44 4 0 Rat 8 -1,30 4 0 -2,18 4 0 DSS4% Rat 9 1,48 4 0 0,63 4 0 Moyenne 17,50 0 0 20,18 0 0 FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26) [Tableau 14]
Jours J14 J15 Variation Consistance Variation Consistance Saignement Saignement du poids des selles du poids des selles (0 (0 - 4) (0 -4) (%) (0/2/4) (%) /2/4) Rat 1 23,79 0 0 22,89 0 0 Témoin Moyenne 6,53 0 0 2,87 0 0 Rat 5 4,22 0 0 -2,41 0 0 DSS 2% Rat 6 5,38 0 0 0,23 0 0 Moyenne 6,92 4 0 2,66 4 2 Rat 8 1,36 4 2 -2,31 4 2 DSS4% Rat 9 4,14 4 1 0,18 4 2 Moyenne 23,79 0 0 22,89 0 0 [Tableau 15]
Jours 116 J17 Variation Consistance Variation Consistance Saignement Saignement du poids des selles du poids des selles (0 (0 - 4) (0 -4) (%) (0/2/4) (%) /2/4) Rat 1 24,57 0 0 19,64 0 0 Témoin Moyenne 3,20 0 0 0,93 0 0 Rat 5 -3,02 0 0 -5,02 0 0 DSS 2% Rat 6 0,09 0 0 -2,04 0 0 Moyenne 2,46 2 2 -0,75 2 2 Rat 8 -3,31 2 2 -2,95 2 2 DSS4% Rat 9 -0,43 2 2 -1,85 2 2 Moyenne 24,57 0 0 19,64 0 0 On constate que la variation de poids a été stabilisée à J12 pour les rats avec DSS 2% et DSS4%.
Concernant la consistance des selles, elle redevient normale après 6 jours de traitement avec la composition selon l'invention pour les rats DSS 2% et après 8 jours de traitement avec la composition selon l'invention pour les rates DSS 4%.
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26) Concernant les saignements rectaux, ils sont absents des rats DSS 2% ce qui signifie qu'il y a eu un rétablissement de la fonction intestinale.
Concernant l'analyse de la perméabilité de la membrane intestinale, les résultats des tests in vivo 10 jours après l'injection de la composition Cl aux rats DSS 2%, par mesure du FITC-dextran, sont 5 présentés dans le tableau 16.
[Tableau 16]
Témoin (FITC) DSS 2% FITC DSS 2% FITC
- Rat 1 (Rat 5) (Rat 6) Plasma 0,6519 0,6024 0,7431 On constate que le dosage du FITC Dextran 4KDa dans le plasma permet de bien discriminer l'impact de la composition Cl selon l'invention sur les rats ayant reçu 2% de DSS, la fluorescence retrouvée dans le sang est identique à celle du témoin.
10 Concernant l'analyse de la perméabilité de la membrane intestinale, les résultats des tests ex vivo 10 jours après l'injection de la composition Cl aux rats DSS 2%, sur organes isolés (la perméabilité
sur organes isolés a été réalisée sur un fragment de jéjunum distal (5 cm) et sur l'iléon (5 cm) par mesure du FITC-dextran, sont présentés dans le tableau 17.
[Tableau 17]
Organes isolés 30 min 60 min 90 min 120 min 150 min Témoin (FITC) -34,4 103,6 254,6 526,9 861,5 Rat 1 DSS 2% FITC
30,7 137,9 457,2 841,4 1101,0 (Rat 5) DSS 2% FITC
27,4 85,3 293,0 659,6 1030,0 (Rat 6) 15 On constate que pour les rats traités avec la composition Cl selon l'invention ayant reçu 2% de DSS, les valeurs sont proches de celles observées chez le témoin.
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26)

Claims

Revendications [Revendication 1] Composition sous forme liquide comprenant :
- au moins une molécule conjuguée de façon covalente à une poly-lysine, et - au moins une molécule hydrophobe et non conjugable de façon covalente à
une poly-lysine, ladite molécule étant encapsulée dans une micelle formée par des conjugués amphiphiles constitués chacun par au moins une molécule hydrophobe conjuguée de façon covalente à une poly-lysine.
[Revendication 2] Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend également :
- au moins une molécule conjuguée à une poly-lysine par polymérisation, ladite molécule et la poly-lysine formant un copolymère.
[Revendication 3] Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que la ou les molécule(s) hydrophobe(s) et non conjugable(s) de façon covalente à
une poly-lysine sont choisies parmi le cholestérol, le co-enzyme Q10, le farnésyl cystéine, la curcumine, et leurs rnélanges.
[Revendication 4] Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que la ou les molécule(s) conjuguée(s) de façon covalente à une poly-lysine sont choisies parmi les acides gras, les antioxydants, les vitamines et leurs mélanges.
[Revendication 5] Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que la ou les molécule(s) conjuguée(s) de façon covalente à une poly-lysine sont choisies parmi l'acide myristique, l'acide linoléique, l'acide palmitique, l'acide palmitoléique, l'acide laurique, l'acide oléique, l'acide orotique, la spermine, la taurine, l'acide patothénique, l'acide azélaïque, GABA, la biotine, l'acide thioctique, l'acide ascorbique, acide acétique, acide propionique, acide butyrique, acide pyruvique, acide lactique, l'alpha-tocophérol, l'acide pantothénique, le glutathion et leurs mélanges.
[Revendication 6] Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que la ou les micelle(s) sont formées au moins par un ou plusieurs conjugués d'alpha-tocophérol conjugué de façon covalente à une poly-lysine et/ou par un ou plusieurs conjugués d'acide rétinoïque conjugué de façon covalente à une poly-lysine.
[Revendication 7] Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que la ou les micelle(s) sont formées au moins par un ou plusieurs conjugués d'acide(s) gras conjugué(s) de façon covalente à une poly-lysine.
[Revendication 8] Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un acide aminé conjugué à une poly-lysine par polymérisation, ledit acide aminé et la poly-lysi ne formant un copolymère.
[Revendication 9] Composition selon la précédente revendication, caractérisée en ce l'acide aminé
conjugué à une poly-lysine par polymérisation est choisie parmi la cystéine et la méthionine.

[Revendication 10] Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que la poly-lysine est la poly-L-lysine.
[Revendication 11] Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que la poly-lysine est linéaire et a un poids moléculaire compris entre 12 000 à
20 000 Da.
[Revendication 12] Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que la poly-lysine a un contre ion bromure, ou chlore ou TFA acide trifluoroacétique.
[Revendication 13] Procédé de fabrication d'une composition selon l'une des précédentes revendications comprenant au moins une molécule hydrophobe et non conjugable de façon covalente à une poly-lysine, encapsulée dans une micelle formée par des conjugués amphiphiles constitués chacun par au moins une molécule hydrophobe conjuguée de façon covalente à une poly-lysine, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes :
- a. créer un premix ampliphile : mélanger des conjugués de molécules hydrophobes conjuguées de façon covalente à une poly-lysine dans une solution aqueuse, - b. ajouter dans le premix amphiphile, une ou plusieurs molécule(s) hydrophobe(s) non conjugable(s) à une poly-lysine, et mettre sous agitation de façon à former une micelle de molécules hydrophobes conjuguées de façon covalente à une poly-lysine encapsulant le ou les molécules hydrophobe(s).
[Revendication 14] Procédé de fabrication selon la précédente revendication, caractérisé en ce que l'agitation à l'étape b. est réalisée pendant entre 5 et 20 minutes à une vitesse d'agitation comprise entre 50 et 800 tours par minute.
[Revendication 15] Procédé de fabrication selon l'une des revendications 13 ou 14, caractérisé en ce qu'il comprend également une étape de d. de séparation des phases soluble et insoluble, pour récupérer la phase soluble.
[Revendication 16] Procédé de fabrication selon la revendication 13 à 15, caractérisé en ce que le premix de l'étape a. comprend également un ou plusieurs copolymère(s) de molécule conjuguée à
une poly-lysi ne par polymérisation et/ou à une étape c. qui est mise en uvre après l'étape b. ou après l'étape d., un ou plusieurs copolymère(s) de molécule conjuguée à une poly-lysine sont ajouté(s) dans le mélange.
[Revendication 17] Procédé de fabrication selon l'une des revendications 13 à
16, caractérisé en ce que le premix de l'étape a. comprend également une ou plusieurs autres molécules conjuguées de façon covalente à une poly-lysine et/ou qu'après l'étape b. ou c., une ou plusieurs autres molécules conjuguées de façon covalente à une poly-lysine sont ajoutée(s) dans le mélange_ [Revendication 18] Procédé de fabrication selon l'une des revendications 13 à
17, caractérisé en ce qu'il comprend une étape de lyophilisation ou d'atomisation ou de déshydratation lente de la composition liquide obtenue préalablement pour obtenir une composition solide, puis une étape de solubilisation dans une solution aqueuse de cette composition solide.

[Revendication 19] Composition sous forme solide, caractérisée en ce qu'elle est obtenue par lyophilisation ou atomisation ou une déshydratation lente d'une composition selon l'une des revendications 1 à 12.
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