FR2937546A1 - Procede de traitement cosmetique et pharmaceutique destine a reduire a la fois la synthese endogene de sirtuine et de reduire les contractions musculaires et compositions pour sa mise en oeuvre - Google Patents

Abstract

Procédé de traitement cosmétique, pharmaceutique caractérisé en ce qu'il consiste en une composition comportant au moins un extrait de fruit de baobab permettant de diminuer à la fois la synthèse endogène de sirtuine dans les cellules épidermiques et à de réduire les contractions musculaires tout en stimulant l'expression des SPRR ainsi que lesdites compositions.

Description

L'invention a pour objet l'utilisation d'au moins un extrait de fruit de Baobab pour la préparation d'un produit cosmétique ou pharmaceutique caractérisé en ce qu'il est capable à la fois d'inhiber l'expression des siriuines à de très faibles doses de l'ordre de quelques millièmes de % ainsi que la contraction musculaire à des doses de quelques % mais aussi de stimuler l'expression des SPRR (Small proline-rich protein) qui sont de petites protéine riches en proline.. L'invention se rapporte également à tout produit cosmétique ou pharmaceutique comportant un tel extrait de fruit de Baobab capable à la fois d'inhiber les sirtuines et les contractions musculaires mais aussi de stimuler l'expression des SPRR (Small proline-rich protein). petites protéine riches en proline. Il est connu d'après des études sur des organismes simples comme la levure de boulangerie (S. cerer'isiae). les nématodes (C. elegans) ou les Drosophiles (D. melanogaster) que leur longévité peut être augmentée par une restriction calorique et par la stimulation de certains gènes de la famille des Sirtuines (SIR2 pour silent information regulator 2) (voir par exemple Howitz et al. Small molécules activators of sirtuins extend Saccharomyces cerr'isiae lifespan. Nature 423,191-196, 2003) Ces gènes sembleraient avoir été conservés lors de l'évolution et ils sont présents chez les mammifères y compris l'Homme où au moins 8 gènes auraient été identifiés. Le gène Sirtl est l'équivalent du gène Sir2 de la levure. Ils sont exprimés en autres dans la peau par les kératinocytes de l'épiderme et les fibroblastes.

Il semble donc logique de penser que la stimulation de ces gènes et par exemple Sirt 1 puisse améliorer la longévité de la peau et son vieillissement (Sirtuin activators mimic caloric restriction and delay ageing in metazoans JG.Wood et al.,.Vature 2789. 1-4. 2004) et (Composition for manipulating the lifespan and stress response of cells and organisms. patent 20050136537). Cependant les sirtuines agissent en désacétylant diverses molécules qui sont alors inactivées et particulièrement la protéine suppresseur de tumeur p 53 ainsi que les facteurs de transcription FOXO (voir par exemple pour p53 : Langley E.. Human SIR2 deacetylates p53 and antagonizes PML/p53-induced cellular senescence, The t1BO Journal 21, 2383-2396, 2002 et pour FOXO : Brunet A. et al.. Stress-Dependent Regulation of FOXO Transcription Factors b} the SIRT1 Deacetylase Science 303: 2011-2015.20014).

P53 (ou TP 53 pour tumor protein 53) souvent dénommé gardien du génome joue un rôle central dans les réponses cellulaires aux stress génotoxiques. Elle déclenche. en fonction du contexte. l'arrêt du cycle cellulaire ou l'apoptose. On nomme apoptose (ou mort cellulaire programmée. ou suicide cellulaire), le processus par lequel des cellules déclenchent leur auto destruction en réponse à un signal. C'est une mort cellulaire physiologique, génétiquement programmée, nécessaire à la survie des organismes pluricellulaires. Elle est en équilibre constant avec la prolifération cellulaire. Le gène p 53 est muté dans au moins 50% des cancers et lorsqu'il n'y a pas de mutation c'est que les cancers ont réussi de contourner l'effet tumeur suppresseur de cette protéine ce qui montre bien que cette molécule est de tous les combats.40 FOXO (pour Forkhead box sub-group O) est une famille de facteurs de transcription comprenant chez l'Homme 4 membres (FOXOI. FOX03, FOX04 et FOX06). Les fonctions cellulaires des FOXO qui sont l'anTét du cycle cellulaire et l'apoptose sont en faveur d'une fonction de suppresseur de tumeur comme pour p53. Ils participent aussi à la résistance cellulaire face au stress oxydatif, activité qui n'est pas perdue en cas de désacétylation par les sirtuines. Lorsque p53 et FOXO sont inactivés. la formation de tumeurs est accélérée (voir par exemple pour FOXO. Hu MC et al. IkappaB kinase promotes tumorigenesis through inhibition of forkhead FOX03a. Ce/1 117. 225-37, 2004 et voir par exemple pour p53, Larsen Cl The ARF- p53 pathway: a fine of defence against oncogenic signais. Pathnl Mol:48:308-17. 2000). Il est donc trivial que toute activation ou stimulation des sirtuines se traduit par une diminution d'activité de p53 et de FOXO et qu'inversement toute inhibition des sirtuines se traduit par une augmentation d'activité de ces gènes suppresseurs de tumeurs. Tout se passe comme s'il y avait un équilibre entre d'un côté apoptose. arrêt des divisions cellulaires. suppression des tumeurs et de l'autre réparation cellulaire et longévité. Un peu comme si on devait choisir. au moins au niveau cellulaire. entre moins vieillir avec un risque de cancer plus élevé ou moins de risque de cancer niais une longévité plus courte. Ainsi le brevet 20050136537 Composition for manipulating the lifespan and stress response of tells and organisms décrit deux stratégies opposées pour : - soit stimuler par des agents activateurs de sirtuin (STACs pour Sirtuin activating compounds) afin de réduire l'activité de p53. l'apoptose et augmenter la longévité des cellules et des organismes. - soit par des agents inhibiteurs de sirtuine d'augmenter l'activité de p53, et l'apoptose au niveau cellulaire ou des organismes. Le fait que les sirtuines perturbent certaines transcriptions et sensibilisent à certains facteurs provoquant la mort cellulaire comme le facteur tumoral nécrosant alpha (TNF-alpha) font que les inhibiteurs de sirtuines agissent dans certaines situations également comme des facteur de protection cellulaire (voir à ce sujet Yeung. F. et al. Modulation of NF-kappaB-dependent transcription and tell survival by the SIRT1 deacetylase. MIRO J. 23. 2369-2380, 2004) Les STACs activateurs de sirtuines sont des molécules de petite taille dont les plus connues dérivent du stilbène. Les stilbènes sont une classe de molécules ayant un certain nombre de propriétés biologiques et qui sont assez répandus dans les végétaux. Le plus connu et le plus étudié est le resvératrol, qui est le 3.4.5'trihydroxy-stilbène. et que l'on trouve dans un grand nombre de végétaux. Le resvératrol est revendiqué pour de nombreuses activités biologiques: -Vaso-relaxant. "Endothelium-dependant vasodilatator effects of Resveratrol, a natmal phenolic coniponent of red vines. in rat aorte Orallo et Al. Cardirn'ascular pharmncologv PA-56 pp.127. -Anti-oxydant. Action anti-oxydante du resvératrol sur la lipoperoxydation J.P. Blond et Al. Sciences des Aliments. (1995). 347-358 . -Anti-inflammatoire. Molecular and cellular effects of Resveratrol in inflammation J.Schwager et Al, MIS 0002, Rennes, France. mai 2002. Il est également revendiqué dans des brevets de produits de soin de la peau comme le brevet FR 2766176 qui revendique certains esters de resvératrol ou d'oligomères pour leur activité anti-radicalaire. anti-oxydante, vasoprotectrice. Le brevet FR 2777186 (L'Oréal) revendique de 0.001 à 10% d'hydroxystilbènes et dérivés hydroxyalkylés pour stimuler la synthèse de collagène. stimuler la prolifération des fibroblastes. et inhiber l'expression des protéases et des métalloprotéinases de la matrice extracellulaire du derme. L'Oréal revendique les mêmes composés dans les mêmes proportions dans le brevet FR 2777184 pour la réduction de l'adhésion des micro-organismes sur la peau et les muqueuses. et dans le brevet FR 2277183. l'augmentation de la desquamation de la peau et enfin dans le brevet FR 2796278 l'inhibition de la glycation des protéines. Le brevet US 6.085.821 revendique le resvératrol et le picéatannol comme inhibiteur de myéloperoxydase. Le brevet FR 15098000 décrit le resvératrol et ses oligomères comme inhibiteurs de l'enzyme 5alpha-réductase.

Le brevet FR 2867977 décrit le resvératrol et ses dérivés comme inhibiteur des contractions musculaires. L'epsilon-Viniférine est revendiquée dans des brevets (déjà cités) aux côtés du resvératrol. L'epsilon-Viniférine est également revendiquée dans le brevet FR 2844714 comme hormone-litre et dans le brevet FR 2844 714 pour prévenir et/ou lutter contre des affections diverses de la peau et de ses annexes. affections comme la diminution de l'épaisseur. de la souplesse. de l'élasticité. de la fermeté de la peau, ou bien comme des infections microbiennes, comme l'excès de kératine. ou pour lutter contre la pollution ou la glycation. L'epsilon-Viniférine qui est un dimère (oligomère) du resvératrol. est citée dans la littérature scientifique comme ayant un certain nombre d'activités biologiques : -Protection des hépatocytes contre les agressions de CCI4 (Oshima Y. et al. Erperimentia: vol 51: n 1: pp 63-66: 1995) -Activité anti-bactérienne (Sultanbawa et al.. Phvtochernistrv: 26:3:1987; 799-802) -Activité anti-tumorale et hépatoprotectrice (Masayaoshi Ohyama et al.. Rioorganic cY tfedicival Chernistrv Letters: 9:1999:3057-3060) -Anti-fongique (Baia A.E.A et al. Journal of Phvsiopathologv:.2001), vol 148. n 1. pp 29-32). L'inconvénient de l'utilisation de substances ayant des effets intéressants mais provocant en plus une stimulation des sirtuines avec des composés comme les resvératrol . l'epsilonviniférine ou autres (STACs) est une déacétylation. par les sirtuines. de la protéine suppresseur de tumeur p53 et des facteurs de transcription FOXO se traduisant par une augmentation néfaste du maintien de cellules problématiques pouvant générer des tumeurs alors que normalement elles auraient dû être éliminées (apoptose) ou stoppées dans leur multiplication (arrêt du cycle cellulaire). Ce risque est d'autant plus important lorsque les cellules ou les organismes sont soumis à un stress important dépassant ou saturant les limites de réparation de la cellule ou de l'organisme 40 comme cela se passe lorsque la peau est soumise aux irradiations solaires.

Ce danger à d'ailleurs été confirmé dans deux publication récentes : Wenhui Zhao et al.. Negative regulation of the deacetylase SIRTI b} DBCI. _Vature 451, 587-590, 2(108 et Ja-Eun Kim et al.. DBCI is a negative regulator of SIRT1..Vature 451, 583-586.2008 : dans lesquelles il est expliqué que BBCI (Deleted in Breast Cancer 1) inhibe l'activité de SIRTI et que sa carence augmente l'activité de SIRTI et donc la déacéty lation de p53 et une incidence de cancer accrue. Il est donc également trivial que toutes ces substances aux propriétés intéressantes mais qui activent les sirtuines pourraient être avantageusement associées à un ou plusieurs inhibiteurs de sirtuine afin de corriger cet inconvénient tout en bénéficiant des effets bénéfiques de ces substances. De manière tout à fait surprenante l'inventeur a constaté qu'une boisson. le bouix. consommée usuellement en Afrique et plus particulièrement au Sénégal, à la fois pour le plaisir mais aussi pour lutter contre la dysenterie et réalisée à partir du fruit de Baobab pouvait également avoir à des concentrations relativement faibles des effets d'inhibition de la synthèse endogène de sirtuines et particulièrement de la SIRT 1 humaine présente dans la peau et l'épiderme ainsi que des effets inhibiteurs des contraction musculaires tout en stimulant l'expression des SPRR (Small proline-rich protein) qui sont de petites protéine riches en proline. Il a de plus constaté que des traitements topiques réalisés à partir d'extrait de fruit de baobab amélioraient l'état général de la peau et de l'épiderme.

Il a également remarqué qu'un tel traitement topique permettait également de développer le buste. de repulper avantageusement d'autres zones cutanées ainsi traitées et d'en effacer au moins partiellement les marques du vieillissement en comblant les creux du relief cutané. Il a remarqué de plus que l'état général de la peau et de l'épiderme était amélioré par un tel traitement après des agressions comme celles provoquées par une exposition solaire.

La présente invention se rapporte à l'utilisation d'au moins un extrait de fruit de Baobab pour la préparation d'un produit cosmétique ou pharmaceutique caractérisé en ce qu'il est capable à la fois d'inhiber l'expression des sirtuines dans les cellules épidermiques à de très faible dose de l'ordre de quelques millièmes de pourcent ainsi que la contraction musculaire à des doses de quelques pourcents tout en stimulant l'expression des SPRR (Small proline-rich protein). petites protéine riches en proline.. L'invention se rapporte également à tout produit cosmétique ou pharmaceutique pour la peau et les phanères comportant un tel extrait de fruit de baobab capable à la fois d'inhiber la synthèse endogène des sirtuines et les contractions musculaires mais aussi de stimuler l'expression des SPRR (Small proline-rich protein)_ petites protéine riches en proline.

Les SPRR sont incorporées. pendant le développement et la différenciation de l'épiderme. aux enveloppes cornées, structure la plus résistante des cellules du stratum cornéum, et permettant ainsi à ces cellules de bien se rigidifier. Leur synthèse augmente sous UV suggérant un rôle protecteur proche de celui qu'elles procurent au niveau cardiaque contre le stress ischémique ou au niveau des cellules nerveuses où elles favorisent la régénération neuronale.40 L'invention permet également de protéger la peau de la face des effets disgracieux des contractions répétées des muscles du visage appelés muscles peauciers par son action d'inhibition des contractions musculaires.

La composition cosmétique et/ou pharmaceutique selon l'invention peut se présenter dans des contenants adéquats tels que flacons, bouteilles_ pots. boites, gélules. capsules. ampoules. lingettes. crayons. porte-sticks. support non tissé imprégné d'une émulsion lyophilisée ou non La composition cosmétique et/ou pharmaceutique contenant l'extrait de fruit de Baobab de façon préférentielle peut être associée et de manière nullement limitative une ou plusieurs des molécules ou extraits stimulant les sirtuines du groupe constitué par des isoflavones. des flavones. des flavanones . des cathéchines et tannins. des chalcones, des stilbènes. des oligostilbènes. des stibènoïdes et des anthocyanidines comme par exemple le resvératrol, l'epsilon viniférine. le picéatannol. la pinosylvine. l'isoliquirigénine. la butéine. la fisétine et la quercétine. Certains extraits de fenugrec. certaines protéines ou peptides de riz, et en général toutes substances entrant dans la famille des STACs (Sirtuin activating compounds) comme définie dans l'article (Howitz et al.. Small molecule activators of sirtuins extend Saccharomyces cerevisiae lifespan. \atue 425. 191-196. 11 September 2003) ou en général tout autre composé dérivant des molécules précédentes (comme leurs acétates, glucosides ou oligomères) et ayant un effet de stimulation et/ou d'activation des sirtuines pourront également être préférés. Ceci afin de contrebalancer les effets secondaires d'une stimulation de sirtuine tout en pouvant bénéficier des autres propriétés de ces substances telles que décrites ci-dessus. L'effet de stimulation et d'activation des sirtuines pourra être mesuré de la manière connue de l'homme de l'art et comme par exemple par un dosage d'activité histone déacetylase (HDAC) comme décrit dans l'article déjà cité (Howitz et al.. Small molecule activators of sirtuins extend Saccharomyces cerevisiae lifespan. _Nature 425. 191-196. I l September 2003) et adapté aux fibroblastes et/ou aux kératinocytes ou par mesure de l'expression des sirtuines en RT-PCR sur culture de kératinocytes. Les extraits végétaux contenant les flavonoïdes cités ci-dessus et activant les sirtuines seront également à préférer lors de la constitution des formules contenant au moins un extrait de Baobab destiné à contrebalancer les effets de stimulation des sirtuine afin de conserver uniquement les autres avantages de ces composés comme les effets anti-rides. fermeté. éclat du teint suivant la substance considérée. La composition cosmétique. pharmaceutique ou dermo-cosmétique contenant l'extrait de fruit de Baobab de façon préférentielle peut être associée a un autre agent actif et de manière nullement limitative une ou plusieurs des molécules ou extraits inhibant les sirtuines du groupe constitué par nicotinamide. l'acide nicotinique_ la niacine. le N-methyl nicotinamide. les différents nicotinates (ethyl. methyl, tocophéryl). les sphingolipides dont la sphingosine. la phytoshingosine et l'ascorbate de phytosphingosine. l'extrait de fruit de calices et d'épicalices d'Hibiscus. les dérivés de dihydrocoumarine. le sirtinol, la splitomicine, ou de manière générale tout autre composé ayant un effet d'inhibition des sirtuines et/ou dérivant des molécules précédentes.

La composition cosmétique et/ou pharmaceutique selon l'invention peut être réalisée sous différentes formes. en particulier sous la forme d'une émulsion huile dans eau (H/E) ou eau dans huile (E/H)_ d'émulsion multiple (H/E/H. E/H/E). de microémulsion, d'émulsion à phase gémellaires. d'émulsion PfT. de nano-émulsion. de pseudo-émulsion (dispersion stable de deux phases non miscibles au moyen de gélifiant), de gel aqueux, de gel gras, de gel hydro-alcoolique. de phase grasse. de suspension. de savon liquide ou solide, de solution moussante ou non, de gel ou d'émulsion lyophilisée et/ou d'une des formes précédentes contenant des microcapsules. des nanocapsules. des liposomes, des éthosomes.

La composition cosmétique et/ou pharmaceutique selon l'invention peut se présenter sous forme de crèmes. de liquides. de pâtes. de lotions. d'émulsions. de lotions. d'huiles. de gels. de solides, de poudres, de masques, de stick, de sprays, d'aérosol. La composition cosmétique et/ou pharmaceutique selon l'invention peut se présenter. afin d'améliorer l'état de la peau de manière plus globale. sous forme de formule utilisable par voie orale comme par exemple gélules, comprimés, sirops A titre illustratif et non limitatif_ on décrira ci-après différents procédés d'obtention possible d'un extrait de fruit de Baobab ou d'un extrait natif de fruit de Baobab. pouvant être utilisés dans le cadre de la présente invention. Exemple 1 Le fruit du baobab est d'abord cassé pour en extraire la partie interne blanche poudreuse comportant également des graines et des fibres. Le solvant, eau pure, différentes solutions aqueuses. alcool ou mélange de deux de ces solvants, peut ensuite être ajouté directement et après agitation le liquide est séparé. par centrifugation ou simple filtration. des graines et des fibres constituant 2/3 de la masse totale. Ce liquide peut être utilisé tel quel ou bien lyophilisé ou atomisé ou encore déshydraté par tout moyen respectant sa composition comme la zéodratation utilisant la zéolite comme agent déshydratant. Un autre moyen est de piler, mécaniquement ou non, l'intérieur du fruit afin que la poudre blanche se détache des graines et des fibres et puisse être recueilli par tamisage. Cette poudre peut être utilisée directement et se dénommera alors poudre de fruit de Baobab ou être ensuite extraite par de l'eau pure, différentes solutions aqueuses, de l'alcool ou par un mélange des deux comme par exemple un mélange 60% alcool et 40% eau sans que cet exemple soit limitatif. La solution ainsi obtenue est centrifugée afin d'en recueillir le surnageant puis lyophilisée ou atomisée ou encore déshydraté par tout moyen respectant sa composition comme la zéodratation utilisant la zéolite comme agent déshydratant La poudre ainsi obtenu par chacun des procédés sera dénommée extrait natif de fruit de Baobab et pourra être resolubilisée dans un solvant facilitant son incorporation dans une formulation à destination topique comme par exemple et sans que cela soit limitatif à de la glycérine. Dans ce cas l'extrait natif ainsi solubilisé s'appellera extrait de fruit de Baobab. Le fruit du Baobab utilisé proviendra préférentiellement du Sénégal et donc de Adansonia digitata. mais on pourra utiliser indifféremment des fruits d'autres espèces de Baobab (dénommées alors Adansonia sp.) comme par exemple et sans que cela soit limitatif. Adansonia font'. Adansonia madagascariensis. Adansonia gregorii, Adansonia giandidieri. Adansonia za. et Adansonia suarezensis. Exemple 2 Etude des effets inhibiteurs d'un extrait natif de fruit de Baobab sur la synthèse endogène des sirtuines dans les cellules épidermiques que l'on dénommera ci-dessous kératinoc}-tes. Tvpe cellulaire: Normal human epidermal kératinocytes (NHEK) au troisième passage Condition de Culture : 37°C. 5% CO: Milieu de Culture : Kératinocvtes-SFM (Invitrogen 17005-034) supplémentés par Epidermal Growth Factor (EOF) 0.25 ng/ml - Pituitary extract (PE) 25 ug/ml (Invitrogen 3700015) Gentamycine 25 ug/ml (Sigma G1397) Milieu d'étude: Kératinocyte-SFM (Invitrogen 17005-034) supplemented with Gentamycine 25 ug/ml (Sigma G1397) Extrait testé Aspect Solution Dilution Concentration testée Extrait Sec Natif Poudre 1% Milieu 0.004% BAOBAB Fruit d'étude Batch n°20707 lb Culture et traitement: Les cellules sont ensemencées et cultivées dans le milieu de culture décrit ci-dessus jusqu'à confluence et sont ensuite placées dans le milieu d'étude. Les cellules sont ensuite traitées ou non (contrôle) avec l'extrait à tester et cultivées encore 24h. Chaque condition expérimentale est répétée trois fois (triplicate). A la fin du temps d'incubation. les cellules sont lavées avec une solution de PBS (Invitrogen 14190094). 300 ul de TriReagent sont ajoutés et les cellules sont immédiatement congelées à 20 80°C Quantitative RT-PCR : Réverse Transcription : Les ARN totaux sont extraits de chaque échantillon en utilisant le Trireagent suivant les recommandations du fournisseur. Les traces d'ADN potentiellement contaminantes sont éliminées par utilisation du système 25 ADNfree (Ambion ref 1906) La réverse-transcription de l'ARNm est réalisée en présence d'oligo (dT) et de Superscript II reverse transcriptase (Invitrogen). PCR analyse en temps réel : La PCR (Polymerase Chain Reactions) est réalisée en triplicate utilisant le LightCyc1erR' S\ stem (Roche Molecular Systems Inc.) en suivant les 30 recommandations du constructeur et qui fonctionne en 2 étapes faisant intervenir un thermocycler et un fluorimètre (longueur d'onde détectée: 521 nm). Les primers suivants ont été utilisés pour amplifier les fragments correspondant aux marqueurs sélectionnés. 35 Nom du Gene Abréviation Gène Bank ADNc bp 23-kDa highly basic protein_RPL13A RPL13A NM 002423 483 Sirtuin 1 SIRTI NM 012238 202 Dans cette expenence le gène RPL13A (Ribosomal Protein L13A) a été utilisé comme marqueur de référence Résultat de la PCR quantitative : L'incorporation de la fluorescence dans l'ADN est mesurée en continu pendant les cycles PCR.

La courbe de l'intensité de la fluorescence en fonction du cycle de PCR permet de déterminer une expression relative (RE) pour chaque marqueur. La valeur retenue pour le calcul de la RE est le rendement maximum de la réaction. Ainsi pour un marqueur donné plus le nombre de cycle est grand plus faible est la quantité d'ARNm. Traiteu-eutt Concentration RPL13A SIRTI RPL13A SIRTI SIRTI / Control Cycles Cycles RE (AU) RE (AU) RPL13A Contrôle _ 1~ .58 2.235 1.958E-02 9.35E-03 100 18. )~4 25. 94 2565 18.32 25.59 Extrait Sec Natif 17.83 25.93 0.1104% 17.(3 ?591 4.4-16 1.554E-02 3.51E-03 38 BAOBAB Fruit 17.89 25.98 Effets de l'Extrait Sec Natif BAOBAB Fruit sur l'expression des SIRTI après 24h de traitement. Résultats comparés au marqueur RPL13A (gène de référence). Conclusion : L'extrait sec natif du fruit de Baobab à une concentration de 0.004% (quelques millièmes de pourcent) réduit l'expression de la sirtuine 1 (SIRT-1) des cellules épidermiques (kératinocvtes) de 62%.

Exemple 3 Etude de la concentration efficace bloquant complètement la contraction musculaire Méthodologie : L'évaluation de l'effet botox like est faite sur une co-culture nerf-muscle capable de contractions spontanées. Le principe de cette méthode est basé sur la rapacité de l'extrait de bloquer ou de diminuer la fréquence de ces cellules musculaires humaines. Un comptage des contractions est fait à des temps définis avant et après l'application de l'extrait. L'effet du produit est validé s'il a une modification significative des contractions musculaires dans au moins 2 des 3 puits de culture (triplicate) Résultats : Temps d'incubation Produit testé 2h 6h 24h EXTRAIT SEC NATIF bloque bloque bloque BAOBAB FRUIT 2.5% Conclusion : Dans les conditions expérimentales. le produit EXTRAIT SEC NATIF BAOBAB FRUIT. 25 testé à 2.5%. (quelques pourcents) bloque les contractions musculaires dans chacun des 3 puits testés. 2 heures. 6 heures et 24 heures après incubation.

Exemple Selon un premier mode de réalisation de l'invention la composition est composé de : - Am-Tate CIO-30 0.50 g - Resvératrol 0.001g - Ethoxydigl) col 5.00 g - Extrait vin rouge 0.20 g - Alcool 2.00 g - Quercétine 0.01 g - Butylène glycol _0,24 g Carbomère 0.126 g EDTA 0.005 g - Conservateur 0.867 g - Huile de macadamia 0.5 g - Lécithine hydrogénée 0.09 g - C'yclométhicone 0.20 g - IEA 99% 0.62g - Extrait natif de fruit de Baobab 0,00 4g - Colorants 0.0002 g - Eau déminéralisée qsp 100 g Après 4 semaines d'utilisation plus de 80% des utilisateurs perçoivent une atténuation d'au moins une marque de vieillissement comme les rides_ l'éclat du teint_ l'hydratation de la peau et de la fermeté. Selon un second mode de réalisation, la composition cosmétique ou pharmaceutique peut être composée de : Carboxypolyméthylène ou polymère carboxilique 0.40 g Diéthanolamine cét)l phosphate 1.50 g Octyl dodécanol 5.50 g Alcool cétylique 1.00 g Huile minérale _2.00 g Acide stéarique LOO g Alcool stérylique éthoxylé (20 E) 0.30 g Alcool céto-stéarylique 1.80 g Conservateur 0.15 g Huile de macadamia 0.50 g - Triéthano lamine 0,60 g Cyclométhicone 12,00 g Diméthicone copolyol 3.00 g Phényl triméticone 2.00 g Extrait glycolique de fruit de Baobab 00 g Sépigel 305 1.00 g Butylène glycol 6.00 g Mica et oxyde de titane 1.00 g Eau déminéralisée gsp 100 g Après 4 semaines d'utilisation plus de 70% des utilisatrices perçoivent une amélioration d'au moins un paramètre comprenant le volume de la poitrine. la fermeté des seins. ou leur tenue. Quatre autres exemples de réalisation sont également exposés ci-après : 1.) Emulsion H/E : - Paraffine liquide__ 6 g - Lanoline liquide 3 g - Arlacel 165 (commercialisé par Atlas) 6 g - Tween 60 (commercialisé par Atlas) 2 g - Alcool cétylique 1.2 g - Acide stéuique 2.5 g - Rétinyl palmitate 0.5 g - Huile de silicone volatile 10 g - Tliéthanolamine 0.1 g - Conservateur 0.3 g - Antioxydants 0.3 g -Extrait natif de fruit de baobab 2.5 g - Extrait glycolique de fruit de baobab 2.5 g - Eau déminéralisée qsp 100 g Après une semaine d'utilisation au niveau des pommettes plus de 75% des utilisateurs perçoivent un effet de comblement, leurs pommettes sont comme repulpées. 2.) Crème aux liposomes : - Alcool cétylique 4 g - B-si tostérol 4 g - Dicétyl phosphate 0.5 g Conservateur 0.3 g - Carbopol 981 (commercialisé par Goodrich) 0.2 g - Tiiéthanolamine 0.2 g - Phospholipide 0 05 g - Resvératrol 0.001 g - Extrait glycériné de fruit de Baobab 1.5 g - Extrait de sarment de vigne l g - Eau déminéralisée qsp 1(10 g Après 4 semaines d'utilisation la peau est plus radieuse et en meilleur état pour plus de 75% des utilisateurs 3.) Emulsion E/1I : Pour la nuit. - Protégin (commercialisépar Goldschmidt) 19 g - Glycérine 3 g - Huile de vaseline 8 g - Sulfate de Mg 0.5 g - Extrait natif de fruit de Baobab 3 g - Rétinyl palmitate 0.02 g - Conservateur 0.2 g - Eau déminéralisée qsp 100 g

Après 15 jours d'utilisation la nuit la peau est plus ferme et plus lisse pour plus de 70% des utilisateurs 4.) Eimtlsion gel H,E - Carbopol 981 (commercialisé par Goodrich) 0.6 g - Alcool éthylique 15 g - Huile de silicone volatile 3 g - Huile de ptucellin 7 g - Conservateur 0.3 g - Parfum 0.4 g - Nicotinate de tocopherol 0.1 g - Triéthanolamine 0.2 g - Extrait glycériné de fruit de baobab 1 g - Eau déminéralisée qsp 100 g Après une semaine d'utilisation suivant une exposition solaire. plus de la moitié des utilisateurs trouvent leur peau moins agressée. 5.) Poudre de maquillage. 25 De manière non limitative un exemple de poudre non compactée et ayant la composition pondérale suivante est donnée: - 20 à 94% de mica. - 5 à 45% de poudre de polymères. - 1.5 à 5% d'huile. 30 - 0 à 4% de savons métalliques. - 0.05 à 1% de poudre de fruit de baobab - 0.2 à 1% d'ADN hautement polymérisé - t) à 30% d'agents nacrant. - 0 à 5% d'autres ingrédients usuels. 35 - et des quantités suffisantes de parfum et de pigments. la somme des pourcentages des ingrédients cités étant égale à 100. Cette poudre de maquillage peut ètre associée à chacune des formules pour former un renfort d'efficacité à utiliser lorsque la peau est la plus agressée. Exemple 5 40 Evaluation de l'expression du gène codant pour les SPRR par micro-puces à ADN (cDNA-auray) sur cellules épidermiques humaines (kératinocytes).

Type cellulaire: Normal human epidermal kératinocytes (NHEK) au troisième passage Condition de Culture : 37°C. 5% CO: Milieu de Culture : Kératinocvtes-SFM (Invitrogen 17005-034) supplémentés par Epidermal 5 Growth Factor (EOF) 0.25 ng/ntl - Pituitar) extract (PE) 25 ug/ml (Invitrogen 3700015) Gentamycine 25 ug/ml (Sigma G1397) Milieu d'étude: Kératinocyte-SFM (Invitrogen 17005-034) supplemented with Gentamycine 25 ug/ml (Sigma GI397) IO ci-dessus jusqu'à confluence et sont ensuite placées dans le milieu d'étude. Les cellules sont ensuite traitées ou non (contrôle) avec l'extrait à tester et cultivées encore 24h. Chaque condition expérimentale est répétée trois fois (triplicate). A la fin du temps d'incubation. les cellules sont lavées avec une solution de PBS (Invitrogen 15 14190094). 300 ul de TriReagent sont ajoutés et les cellules sont immédiatement congelées à - 80°C Analyse par micro-puce à ADN : L'ARN messager est extrait de chaque culture de kératinocytes (NHEK) et mis en contact avec des sondes ADNc spécifiques fixées de manière covalente sur des micro-puces et des ADNc marqués.

20 L'analyse est réalisée par quantification directe de la radioactivité sur chaque spot après 72 h. Résultats : Dans ces conditions expérimentales et donc au niveau des cellules épidermiques. l'expression du gène SPRR est stimulée de + 189% par l'extrait natif de pulpe de Baobab à 0.004%. Les SPRR sont incorporées. pendant le développement et la différenciation de l'épiderme. aux enveloppes cornées. structure la plus résistante des cellules du stratwn cornéum. et permettant ainsi à ces cellules de 25 bien se rigidifier. Leur synthèse augmente sous UV suggérant un rôle protecteur proche de celui qu'elles procurent au niveau cardiaque contre le stress ischémique ou au niveau des cellules nerveuses où elles favorisent la régénération neuronale. Extrait testé Aspect Solution Dilution Concentration testée Extrait Sec Natif Poudre 1% Milieu 0.004% BAOBAB Fruit d'étude Batch n°20707lb 30

Claims (10)

1. REVENDICATIONS1.) Extrait de fruit de Baobab. dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et pharmaceutique caractérisé en ce qu'il est capable à la fois d'inhiber l'expression des sirtuines dans les cellules épidermiques à de très faibles doses de l'ordre de quelques millièmes de pourcent et à la fois d'inhiber la contraction des fibres musculaires à des doses de quelques pourcents tout en stimulant l'expression des SPRR (Small proline-rich protein) ou petites protéines riches en proline.
2. 2.) Extrait selon la revendication 1. caractérisé en ce que l'extrait est un extrait de plante appartenant à une espèce choisie dans le groupe formé par Adansonia font'. Adansonia madagascariensis_ Adansonia gregorii. Adansonia grandidieri. Adansonia za. Adansonia suarezensis et Adansonia digitata.
3. 3.) Extrait selon l'une des revendications 1 à 2 caractérisé en ce que l'extrait est un extrait d'Adansonia digitata.
4. 4.) Composition cosmétique.et pharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 3 caractérisée en ce qu'elle comprenne en outre un autre agent actif comme par exemple une ou plusieurs substances du groupe constitué par le nicotinamide. l'acide nicotinique. la niacine_ le N-methy 1 nicotinamide. les différents nicotinates (ethyl, methyl. tocophér3l). les sphingolipides dont la sphingosine. la phytoshingosine et l'ascorbate de phytosphingosine. l'extrait de calices et d'épicalices d'Hibiscus. les dérivés de dihydrocoumarine. le sirtinol, la splitomicine, ou de manière générale tout autre composé ayant un effet d'inhibition des sirtuines et/ou dérivant des molécules précédentes.
5. 5.) Composition cosmétique et pharmaceutique selon les revendications 1 à 3 caractérisée en ce qu'elle comprenne en outre un autre agent actif comme par exemple une ou plusieurs substances du groupe constitué par constitué par des isoflavones. des flavones. des flavanones. des cathéchines et tannins, des chalcones. des stilbènes. des oligostilbènes. des stilbènoïdes et des anthocyanidines ayant un effet de stimulation et/ou d'activation des sirtuines .
6. 6.) Composition cosmétique. pharmaceutique et dermo-cosmétique selon les revendications 1 à 5 caractérisés en ce que la compositions est sous la forme d'une émulsion huile dans eau (H/E) ou eau dans huile (E/H). d'émulsion multiple (H/E/H. E/H/E). de microémulsion. d'émulsion à phase gémellaires. d'émulsion PTT. de nano- émulsion, de pseudo-émulsion (dispersion stable de deux phases non miscibles au moyen de gélifiant). de gel aqueux_ de gel gras. de gel hydroalcoolique. de phase grasse. de suspension, de savon liquide ou solide. de solution moussante ou non. de gel ou d'émulsion lyophilisée et/ou d'une des formes précédentes contenant de micro-capsules . des nano-capsules. des liposomes. des éthosomes et pouvant se présenter sans que cela soit limitatif en crèmes. liquides, pâtes. lotions. émulsions. huiles, gels. sirops. solides. poudres. masques. stick. comprimés. sprays. aérosol.gélules. comprimés. sirop.
7. 7.) Utilisation d'une quantité efficace d'un extrait selon l'une des revendication 1 à 4_ pour la préparation d'une composition cosmétique. pharmaceutique et dermocosmétique. la composition étant destinée à augmenter le volume des zones traitées et à combler les creux du relief cutané.
8. 8.) Utilisation d'une quantité efficace d'un extrait selon l'une des revendications 1 à 4. pour la préparation d'une composition cosmétique et pharmaceutique. la composition étant destinée à protéger la peau de l'accumulation de cellules problématiques générées par tous types d'agressions dont l'exposition solaire.
9. 9.) Utilisation d'une quantité efficace d'un extrait selon l'une des revendications 1 à 4. dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et pharmaceutique. la composition étant destinée à protéger la peau de la face des effets disgracieux des contractions répétées des muscles du visage.
10. 10.) Procédé de traitement cosmétique de la peau destiné à diminuer à la fois la synthèse endogène de sirtuine dans les cellules épidermiques et à réduire les contractions musculaires tout en stimulant l'expression des SPRR (Small proline-rich protein). caractérisé par le fait que l'on applique sur la peau une composition contenant comme principe actif, au moins un extrait tel que défini selon l'une des revendications 1 à 3.