UTILISATION D'UN EXTRAIT DE SCUTELLAIRE DANS LES COMPOSITIONS POUR LEUSE OF SCUTELLARY EXTRACT IN COMPOSITIONS FOR
CORPS La présente invention concerne l'utilisation de la Scutellaire dans des compositions cosmétiques pour le corps visant à maintenir un état de surface de la peau au niveau des zones localisées de stockage des graisses. L'hypoderme, ou tissu adipeux, joue un rôle central dans le métabolisme des graisses : il se localise sous l'épiderme et le derme. Ce tissu adipeux est formé de cellules adipeuses ou adipocytes (environ 50 à 80 milliards) et d'une matrice conjonctive composée de fibroblastes spécialisés ou préadipocytes. Selon le sexe et l'âge, l'importance et la répartition du tissu adipeux sont différentes. Ainsi, s'il représente de 20 à 30% du poids corporel chez la femme, il n'en représente que 10 à 15% chez l'homme ; lesquelles proportions augmentent avec l'âge. Chez la femme, le tissu adipeux présente une épaisseur deux fois plus importante et se localise essentiellement au-dessous de la ceinture (région gluteofémorale, répartition gynoïde). L'une des caractéristiques de cette graisse accumulée en bas du corps est d'être particulièrement peu mobilisable. Si la fonction essentielle du stockage de cette graisse est d'assurer les besoins énergétiques liés à la reproduction (grossesse, allaitement), il peut toutefois évoluer en formes plus sévères et anarchiques : peau d'orange, cellulite. L'apparition de la cellulite résulte généralement d'un dysfonctionnement au niveau de l'hypoderme : la lipohydrodystrophie. Cette lipohydrodystrophie se traduit d'une part par une accumulation des graisses dans les cellules et d'autre part par une mauvaise circulation sanguine conduisant à une vasoconstriction des vaisseaux sanguins. Deux mécanismes distincts sont impliqués dans la formation de la cellulite : • un stockage des triglycérides (esters d'acides gras et de glycérol) dans les adipocytes qui peuvent voir leur volume augmenter de façon considérable (facteur 100). Cette accumulation explique l'augmentation des lobules graisseux et l'aspect qualifié de "peau d'orange". • une augmentation de la viscosité de la substance fondamentale du derme qui se traduit par de la rétention d'eau et une diminution des échanges cellulaires. Ces deux mécanismes ont pour conséquence la compression 10 des vaisseaux sanguins et lymphatiques et une congestion du tissu conjonctif. Souvent inesthétiques et mal vécus, la cellulite, autant que les processus de stockage des triglycérides, a fait l'objet de nombreuses études visant à mieux comprendre les 15 mécanismes impliqués. Il ressort de ces différentes études que l'apparition de la cellulite résulte avant tout d'un déséquilibre entre la lipogenèse, qui regroupe les processus métaboliques concourant à la biosynthèse des lipides, et la lipolyse, 20 regroupant les processus d'hydrolyse des graisses. L'augmentation plus ou moins rapide du volume du tissu adipeux et la cellulite qui s'ensuit, sollicitent aussi les éléments du tissu conjonctif dermique. Les cellules et la matière sont physiquement et biologiquement endommagées. Ce 25 qui se traduit par une altération globale des qualités biomécaniques de la peau: perte de fermeté, de densité, d'élasticité, de compressibilité, de réactivité ... En plus de limiter le métabolisme des adipocytes, un produit cosmétique à visée amincissante se doit aussi 30 d'améliorer la qualité et la densité du derme. Il existe donc aujourd'hui un besoin important de nouveaux agents (activateurs de la lipolyse et/ou inhibiteurs de la lipogenèse et/ou agents améliorant la densité dermique) afin de lutter contre la cellulite, limiter l'épaisseur de la couche adipeuse sous-cutanée, améliorer la ferme-lé de la peau et atténuer l'aspect peau d'orange. Le genre Scutellaria fait partie de la famille des Lamiacées (Labiées). Il contient plus d'une centaine d'espèces qui poussent de la Sibérie jusqu'au Sri Lanka. Certaines espèces ont des profils phytochimiques intéressants dont l'espèce Scutellaria baicalensis Georgi, communément appelée Scutellaire du lac Baïkal. The present invention relates to the use of skullcap in cosmetic compositions for the body to maintain a surface state of the skin at the localized areas of fat storage. The hypodermis, or adipose tissue, plays a central role in the metabolism of fats: it is localized under the epidermis and the dermis. This adipose tissue is composed of adipose cells or adipocytes (about 50 to 80 billion) and a conjunctive matrix composed of specialized fibroblasts or preadipocytes. Depending on sex and age, the importance and distribution of adipose tissue are different. Thus, if it represents 20 to 30% of body weight in women, it represents only 10 to 15% in men; which proportions increase with age. In women, the adipose tissue has a thickness twice as large and is located mainly below the belt (gluteofemoral region, gynoid distribution). One of the characteristics of this fat accumulated at the bottom of the body is to be particularly little mobilizable. If the essential function of storage of this fat is to ensure the energy needs related to reproduction (pregnancy, breastfeeding), it can however evolve into more severe and anarchic forms: orange peel, cellulite. The appearance of cellulitis generally results from a dysfunction in the hypodermis: lipohydrodystrophy. This lipohydrodystrophy results on the one hand by an accumulation of fats in the cells and on the other hand by a bad blood circulation leading to a vasoconstriction of the blood vessels. Two distinct mechanisms are involved in the formation of cellulite: • Storage of triglycerides (esters of fatty acids and glycerol) in adipocytes which can see their volume increase considerably (factor 100). This accumulation explains the increase in fat lobules and the aspect described as "orange peel". • an increase in the viscosity of the dermal substance, which results in water retention and a decrease in cellular exchanges. Both of these mechanisms result in compression of the blood and lymphatic vessels and congestion of the connective tissue. Often unsightly and badly experienced, cellulite, as well as triglyceride storage processes, has been the subject of numerous studies to better understand the mechanisms involved. It emerges from these different studies that the appearance of cellulite results above all from an imbalance between lipogenesis, which groups together the metabolic processes contributing to the biosynthesis of lipids, and lipolysis, grouping the processes of hydrolysis of fats. The more or less rapid increase in the volume of the adipose tissue and the consequent cellulitis, also solicit the elements of the dermal connective tissue. The cells and the material are physically and biologically damaged. This results in an overall alteration of the biomechanical qualities of the skin: loss of firmness, density, elasticity, compressibility, reactivity ... In addition to limiting the metabolism of adipocytes, a cosmetic product for slimming purposes It is also important to improve the quality and density of the dermis. There is therefore today an important need for new agents (lipolysis activators and / or lipogenesis inhibitors and / or agents for improving the dermal density) in order to fight against cellulite, to limit the thickness of the subcutaneous fat layer. dermal, improve the firmness of the skin and reduce the appearance of orange peel. The genus Scutellaria is part of the family Lamiaceae (Labiatae). It contains over a hundred species that grow from Siberia to Sri Lanka. Some species have interesting phytochemical profiles, including the species Scutellaria baicalensis Georgi, commonly known as Lake Baikal Skullcap.
Les racines de Scutellaria baicalensis sont traditionnellement utilisées dans les médecines asiatiques et notamment en médecine chinoise. De manière générale, la Scutellaire est connue pour posséder des propriétés anti-inflammatoires (WO 2004/089392, WO 2004/058279), sédatives, anti-histaminiques (ce qui permet une aide au traitement de certaines allergies, notamment les rhinites allergiques). La scutellaire est également utilisée dans la médecine chinoise pour la prévention de certains cancers (WO 2004/058279). The roots of Scutellaria baicalensis are traditionally used in Asian medicines and especially in Chinese medicine. In general, skullcap is known to have anti-inflammatory properties (WO 2004/089392, WO 2004/058279), sedative, antihistamines (which allows an aid to the treatment of certain allergies, especially allergic rhinitis). Skullcap is also used in Chinese medicine for the prevention of certain cancers (WO 2004/058279).
La Scutellaire est utilisée comme agent inh__biteur de la lipase gastrique : elle permet d'inhiber la dégradation des triglycérides en acides gras et glycérol. Ceci permet de limiter l'absorption des graisses alimentaires __ngérées : la Scutellaire entre ainsi dans des compositions orales améliorant l'hyperlipémie (lipides circulant dans le sang), des compositions à administration orale aidant au traitement de l'obésité (JP 2005008572). Enfin, la scutellaire est également connue comme plante traditionnelle dans le traitement du diabète (US 2005/0048144). En cosmétique, la Scutellaire est intégrée dans des compositions apaisantes (utilisation liée à ses propriétés anti-inflammatoires). Elle est également utilisée pour son effet comme inhibiteur de la 5-alpharéductase qui permet de lutter contre la production de sébum (peaux grasses), limiter la pousse des poils ou, au contraire, favoriser la pousse des cheveux. Elle montre également des effets anti-radicalaires et anti-oxydants elle est ainsi utilisée dans des compositions de prévention du vieillissement (JP 02036113, JP 2003212749). La Demanderesse a maintenant mis en évidence que des extraits de scutellaire présentent une activité inhibitrice de la conversion adipocytaire des fibroblastes de l'hypoderme, une activité lipolytique des adipocytes ainsi qu'une activité favorisant la contraction des fibroblastes du derme. L'invention consiste donc en l'utilisation cosmétique 15 d'un extrait de scutellaire en tant qu'actif amincissant d'application topique. Avantageusement, ledit actif amincissant d'application topique permet de prévenir et/ou de traiter une dégradation de l'état de surface de la peau principalement sur les zones 20 localisées de stockage des graisses. Lesdits extraits permettent de lutter contre la cellulite ou la peau d'orange, contre l'augmentation et/ou l'accumulation de tissu adipeux sous-cutané et contre le relâchement de la peau. 25 Par extrait de scutellaire, on entend un extrait obtenu à partir de différentes parties de plantes de scutellaires comme des extraits de plantes entières, des extraits des parties aériennes ou des extraits des parties racinaires, de préférence un extrait de racines de scutellaire. 30 Par extrait de scutellaire, on entend également un extrait de scutellaire obtenu à l'aide d'une extraction avec des solvants appropriés que l'homme du métier pourra déterminer simplement à l'aide de ses connaissances générales. À titre d'exemple de solvant approprié, on peut citer les solvants polaires à moyennement polaires, notamment l'eau, l'éthanol, le méthanol, l'acétone, l'acétate d'éthyl, le butylène glycol, le propylène glycol et leurs mélanges, de préférence un mélange eau/éthanol. Avantageusement, la concentration en extrait de scutellaire dans une composition cosmétique d'application topique est comprise dans l'intervalle allant de 0,005% à 10% en poids du poids total de la composition, de préférence de 0,01 à 5%, préférentiellement de 0,02 à 1%, notamment de 0,05 à 1% ou de 0,05 à 0,5% et de manière particulièrement préférée de 0,05 à 0,2%. Selon un premier mode de réalisation préféré, ledit actif amincissant est un actif amincissant activateur de la 15 lipolyse. Par actif amincissant activateur de la lipolyse, on entend un agent capable d'activer la dégradation des triglycérides intracellulaires. Avantageusement, ledit actif amincissant activateur de la 20 lipolyse est un actif stimulateur de la dédifférenciation adipocytaire. Par actif stimulateur de la dédifférenciation adipocytaire, on entend un agent capable d'initier et de stimuler le passage de cellules d'un phénotype adipocytaire 25 vers un phénotype préadipocytaire, lequel correspond à un phénotype plus immature. Selon un second mode de réalisation préféré, ledit actif amincissant est un actif amincissant inhibiteur de la lipogenèse. 30 Par actif amincissant inhibiteur de la lipogenèse, on entend un agent capable d'inhiber la synthèse et donc l'accumulation des triglycérides intracellulaires. Skullcap is used as an inhibitor of gastric lipase: it inhibits the degradation of triglycerides into fatty acids and glycerol. This makes it possible to limit the absorption of unhealthy dietary fats: the skullcap thus enters into oral compositions that improve hyperlipemia (lipids circulating in the blood), orally administered compositions that assist in the treatment of obesity (JP 2005008572). Finally, skullcap is also known as a traditional plant in the treatment of diabetes (US 2005/0048144). In cosmetics, Skullcap is integrated into soothing compositions (use related to its anti-inflammatory properties). It is also used for its effect as a 5-alphareductase inhibitor which makes it possible to fight against the production of sebum (oily skin), to limit the growth of the hairs or, on the contrary, to promote the growth of the hair. It also exhibits anti-radical and anti-oxidant effects and is thus used in aging prevention compositions (JP 02036113, JP 2003212749). The Applicant has now demonstrated that skullcap extracts have an inhibitory activity of adipocyte conversion of hypoderm fibroblasts, a lipolytic activity of adipocytes as well as an activity promoting the contraction of fibroblasts of the dermis. The invention therefore consists in the cosmetic use of a skullcap extract as a slimming agent for topical application. Advantageously, said slimming active agent for topical application makes it possible to prevent and / or treat a degradation of the surface state of the skin, mainly on the localized areas of fat storage. Said extracts make it possible to fight against cellulite or orange peel, against the increase and / or the accumulation of subcutaneous adipose tissue and against the relaxation of the skin. By skullcap extract is meant an extract obtained from different parts of skullcap plants such as extracts of whole plants, extracts of the aerial parts or extracts of the root parts, preferably a scutellar root extract. By skullcap extract is also meant a skullcap extract obtained by extraction with suitable solvents which a person skilled in the art can simply determine with the aid of his general knowledge. By way of an example of a suitable solvent, mention may be made of polar to medium polar solvents, in particular water, ethanol, methanol, acetone, ethyl acetate, butylene glycol and propylene glycol. mixtures thereof, preferably a water / ethanol mixture. Advantageously, the concentration of scutellar extract in a cosmetic composition for topical application is in the range of 0.005% to 10% by weight of the total weight of the composition, preferably 0.01 to 5%, preferably 0.02 to 1%, especially 0.05 to 1% or 0.05 to 0.5% and particularly preferably 0.05 to 0.2%. According to a first preferred embodiment, said slimming active ingredient is a lipolysis activating slimming activator. By lipolysis activating slimming activator is meant an agent capable of activating the degradation of intracellular triglycerides. Advantageously, said slimming activating active agent for lipolysis is a stimulating active agent for adipocyte dedifferentiation. By activator of adipocyte dedifferentiation is meant an agent capable of initiating and stimulating the passage of cells from an adipocyte phenotype to a pre-adipocyte phenotype, which corresponds to a more immature phenotype. According to a second preferred embodiment, said slimming active ingredient is a lipogenesis inhibiting slimming active ingredient. By slimming active lipogenesis inhibitor is meant an agent capable of inhibiting the synthesis and therefore the accumulation of intracellular triglycerides.
Avantageusement, ledit actif amincissant inhibiteur de la lipogenèse est un actif inhibiteur de la conversion adipocytaire. Par actif inhibiteur de la conversion adipocytaire, on 5 entend un agent capable d'inhiber la différenciation des préadipocytes en adipocytes. Selon un troisième mode de réalisation préféré, ledit actif amincissant est un actif amincissant raffermissant. Par actif raffermissant, on entend un agent permettant 10 d'augmenter la densité du derme. Par actif permettant d'augmenter la densité du derme, on entend un agent stimulant la contraction des cellules du derme. Des compositions cosmétiques d'application topique sont bien connues de l'homme du métier. À titre d'exemple de 15 telles compositions, on peut citer, à titre non-limitatif, les crèmes, les gels, les baumes, les huiles, les laits, les lotions, les gels, les masques, sans aucune restriction gallénique particulière autre que celles pour l'application sur la peau. 20 Ledit extrait de scutellaire peut en outre être associé dans de telles compositions à des substances couramment utilisées dans les produits cosmétiques pour la peau. À titre d'exemple de telles substances, on peut citer, à titre non-limitatif, les conservateurs, les huiles, les charges, 25 les tensioactifs, les humectants, les filtres UV, les anti-inflammatoires, les glycols, les bactéricides, les antiseptiques, les pigments, les vasodilatateurs, les parfums et les extraits végétaux. Un deuxième objet de l'invention consiste en un procédé 30 cosmétique destiné à prévenir et/ou à traiter une dégradation de l'état de surface de la peau, principalement sur les zones d'accumulation des graisses de stockage, comprenant une étape d'application topique d'une composition cosmétique comprenant un extrait de scutellaire tel que défini précédemment. Le procédé selon l'invention permet de lutter contre la cellulite ou la peau d'orange, contre l'augmentation et/ou 5 l'accumulation de tissu adipeux sous-cutané et contre le relâchement de la peau. L'homme du métier pourra déterminer simplement et sans difficulté la quantité de composition à appliquer sur la peau pour obtenir le résultat souhaité. 10 D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront dans les exemples qui suivent, sans pour autant que ceux-ci ne constituent une quelconque limitation de l'invention. EXEMPLES 15 Exemple 1 - Inhibition de la conversion adipocytaire (inhibition de la lipogenèse) 1. Principe du dosage des triglycérides La différenciation de cellules isolées du tissu adipeux humain est induite par la mise en présence desdites cellules 20 avec un milieu comprenant de l'insuline, de la dexaméthasone, de l'indométhacine et du 3-Isobutyl-l-methyl.xanthine (IBMX). Cette différenciation cellulaire s'accompagne de la formation de gouttelettes lipidiques et d'une accumulation de triglycérides intracellulaires visibles en microscopie 25 optique. La caractérisation de cette transformation s'opère en effectuant une quantification des gouttelettes lipidiques formées grâce à un colorant, le Nile Red. 2. Déroulement du test (traitement au moment de la différenciation) 30 Trois plaques noires 96 puits (CORNING, 3603) ont été ensemencées avec des préadipocytes humains (CAMBREX, PT-5020) à raison de 10 000 cellules/puits/100pL de milieu prolifération (milieu A). Les plaques ont ensuite été incubées à 37 C / 5% de CO2. Après trois jours de culture (JO), alors que les cellules sont à confluence, le milieu de culture a été éliminé et remplacé par du milieu de différenciation (milieu B) contenant ou non 20pM de baïcaléine (Extrasynthèse 1171) ou différentes concentrations (2.10-3ô et 2.10-'4 p/v) d'extrait de racines de scutellaire (extrait aqueux séché). À titre de contrôle négatif, du milieu de culture (milieu A) a été utilisé au lieu du milieu de différenciation (milieu B). Du fait de l'action de certains solvants sur la conversion, le milieu de différenciation additionné de la solution de dilution de la baïcaléine, mais en l'absence de celle-ci, a également été testé. Chaque condition de culture a été testée en quadruplate sauf pour le (ou les) témoin(s) solvant qui ont été testés en duplicate. Les plaques de culture ont ensuite été incubées à 37 C / 5% de CO2. Parallèlement et à titre de contrôle, l'action des mêmes actifs a été testée en utilisant non pas du milieu de différenciation (milieu B), mais du milieu de culture (milieu A). Cette expérience contrôle a permis de tester l'action desdits actifs sur les cellules en l'absence de différenciation. À différents jours de culture (J11, J14 et J18), un dosage de triglycérides a été effectué à l'aide du réactif AdipoRedTM (CAMBREX, PT-7009). La lecture a été réalisée avec le lecteur de fluorescence FL-600c BIOTEK relié au logiciel KC4. L'interprétation du test est effectuée en calculant dans un premier temps le taux de triglycérides en effectuant le ratio suivant : RFU à 485/590nm (actif X) taux de triglycérides = moyenne RFU à 485/590nm (témoin négatif) Dans un second temps, le taux de conversion adipocytaire a été calculé (versus taux d'inhibition) en prenant comme référence 100% de conversion le témoin positif (milieu B seul). 2. Résultats Les résultats montrent que le traitement des cellules pré-adipocytaires par l'extrait de scutellaire inhibe très fortement le processus de conversion en triglycérides (cf. tableau I). Tableau I Nombre de % de triglycérides stockés dans les jours de adipocytes traité par un extrait de différenciation scutellaire (2.10"3% p/v) par rapport au témoin (adipocytes en milieu de différenciation seul) J11 -66% J14 -60% J18 % En conclusion, l'extrait de scutellaire permet d'inhiber la conversion adipocytaire et la lipogénèse. Exemple 2 - Stimulation de l'inversion adipocytaire (stimulation de la lipolyse) 1. Principe du dosage des triglycérides La différenciation de cellules isolées du tissu adipeux 20 humain est induite par la mise en présence desdites cellules15 U avec un milieu comprenant de l'insuline, de la dexaméthasone, de l'indométhacine et du 3-Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX). Cette différenciation provoque comme précédemment la formation de gouttelettes lipidiques et l'accumulation de triglycérides intracellulaires visibles en microscopie optique. À ce stade, la dédifférenciation cellulaire et le retour au stade pré- adipocyte s'accompagnent de la disparition des gouttelettes lipidiques et de la disparition des triglycérides intracellulaires. La caractérisation de cette dédifférenciation s'opère comme précédemment en effectuant une quantification des gouttelettes lipidiques formées grâce à un colorant, le Nile Red. 2. Déroulement du test (traitement après la différenciation) Des préadipocytes humains (CAMBREX, PT-5020) sont mis en culture comme décrit à l'exemple 1. Après trois jours de culture (JO), alors que les préadipocytes sont à confluence, le milieu de culture a été éliminé et remplacé par du milieu de différenciation (milieu B) Après trois jours de culture (J3), les préadipocytes se sont différenciés en adipocytes et leur contenu en triglycérides a atteint un palier. Le milieu de différenciation (B) a alors été éliminé et remplacé par du milieu de différenciation frais contenant ou non 20pM de baïcaléine (Extrasynthèse 1171) ou différentes concentrations (2.10-3ô et 2.10-4ô p/v) d'extrait de racines de scutellaire (extrait aqueux séché). Comme précédemment, chaque condition de culture a été testée en quadruplate mis à part pour les témoins solvant qui ont été testés en duplicate. Les plaques de culture ont ensuite été incubées à 37 C / 5% de CO2. À différents jours de culture (J8, J12 et J20), un dosage de triglycérides selon le protocole décrit dans l'exemple 1. Advantageously, said lipogenesis inhibiting slimming active ingredient is an active agent that inhibits adipocyte conversion. Active inhibitor of adipocyte conversion is an agent capable of inhibiting the differentiation of preadipocytes into adipocytes. According to a third preferred embodiment, said slimming active ingredient is a firming slimming active ingredient. By firming active agent is meant an agent for increasing the density of the dermis. By active to increase the density of the dermis is meant an agent stimulating the contraction of the cells of the dermis. Topical cosmetic compositions are well known to those skilled in the art. By way of example of such compositions, mention may be made, without limitation, of creams, gels, balms, oils, milks, lotions, gels, masks, without any particular gallenic restriction other than those for application on the skin. Said skullcap extract may be further combined in such compositions with substances commonly used in skin cosmetics. By way of example of such substances, mention may be made, without limitation, of preservatives, oils, fillers, surfactants, humectants, UV filters, anti-inflammatories, glycols, bactericides, antiseptics, pigments, vasodilators, perfumes and plant extracts. A second object of the invention is a cosmetic process for preventing and / or treating a degradation of the surface condition of the skin, mainly on storage fat storage areas, comprising a step of topical application of a cosmetic composition comprising a skullcap extract as defined above. The process according to the invention makes it possible to fight against cellulite or orange peel, against the increase and / or the accumulation of subcutaneous adipose tissue and against the relaxation of the skin. Those skilled in the art can easily and easily determine the amount of composition to be applied to the skin to obtain the desired result. Other advantages and features of the invention will become apparent in the following examples, without these constituting any limitation of the invention. EXAMPLES Example 1 - Inhibition of Adipocyte Conversion (Inhibition of Lipogenesis) 1. Principle of Triglyceride Assay The differentiation of cells isolated from human adipose tissue is induced by bringing said cells into contact with a medium comprising insulin. , dexamethasone, indomethacin and 3-Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX). This cell differentiation is accompanied by the formation of lipid droplets and an accumulation of intracellular triglycerides visible in optical microscopy. The characterization of this transformation is carried out by carrying out a quantification of the lipid droplets formed thanks to a dye, the Nile Red. 2. Procedure of the test (treatment at the time of differentiation) Three 96-well black plates (CORNING, 3603) were inoculated with human preadipocytes (CAMBREX, PT-5020) at 10,000 cells / well / 100 μL of medium. proliferation (medium A). The plates were then incubated at 37 ° C / 5% CO 2. After three days of culture (OJ), while the cells are at confluence, the culture medium was removed and replaced by differentiation medium (medium B) containing or not 20 pM Baalacein (Extrasynthesis 1171) or different concentrations (2.10 30 and 2.10 -4 w / v) skull root extract (dried aqueous extract). As a negative control, culture medium (medium A) was used instead of the differentiation medium (medium B). Due to the effect of certain solvents on the conversion, the differentiation medium supplemented with, but not in the absence of, the Baçalein dilution solution was also tested. Each culture condition was tested in quadruplate except for the solvent control (s) that were tested in duplicate. The culture plates were then incubated at 37 ° C / 5% CO 2. In parallel and as a control, the action of the same active agents was tested using not differentiation medium (medium B), but culture medium (medium A). This control experiment made it possible to test the action of said active agents on the cells in the absence of differentiation. At different days of culture (D11, D14 and D18), a triglyceride assay was performed using the AdipoRedTM reagent (CAMBREX, PT-7009). The reading was performed with the FL-600c BIOTEK fluorescence reader connected to the KC4 software. The interpretation of the test is performed by first calculating the triglyceride level by performing the following ratio: RFU at 485 / 590nm (active X) triglyceride level = average RFU at 485 / 590nm (negative control) In a second step the adipocyte conversion rate was calculated (versus inhibition rate) using 100% conversion as the positive control (medium B alone). 2. Results The results show that the treatment of pre-adipocyte cells with scutellar extract very strongly inhibits the conversion process into triglycerides (see Table I). Table I Number of% of triglycerides stored in the days of adipocytes treated with a scutellar differentiation extract (2.10 "3% w / v) relative to the control (adipocytes in differentiation medium alone) J11 -66% J14 -60% J18 In conclusion, skullcap extract makes it possible to inhibit adipocyte conversion and lipogenesis Example 2 Stimulation of Adipocyte Inversion (Stimulation of Lipolysis) 1. Principle of Determination of Triglycerides Differentiation of Cells Isolated from Adipose Tissue The human is induced by bringing said U cells into contact with a medium comprising insulin, dexamethasone, indomethacin and 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX). lipid droplets and the accumulation of intracellular triglycerides visible by optical microscopy At this stage, cell dedifferentiation and return to the pre-adipocyte stage are accompanied by e disappearance of lipid droplets and disappearance of intracellular triglycerides. The characterization of this dedifferentiation is carried out as previously by carrying out a quantification of the lipid droplets formed thanks to a dye, the Nile Red. 2. Procedure of the test (treatment after differentiation) Human preadipocytes (CAMBREX, PT-5020) are cultured as described in Example 1. After three days of culture (JO), while the preadipocytes are at confluence, the culture medium was removed and replaced with differentiation medium (medium B). After three days of culture (J3), the preadipocytes differentiated into adipocytes and their triglyceride content reached a plateau. The differentiation medium (B) was then removed and replaced by fresh differentiation medium containing or not containing 20 μM of Baaleine (Extrasynthesis 1171) or different concentrations (2.10-3δ and 2.10-4δ p / v) of the root extract. skullcap (dried aqueous extract). As before, each culture condition was tested in quadruplate except for the solvent controls that were tested in duplicate. The culture plates were then incubated at 37 ° C / 5% CO 2. At different days of culture (D8, D12 and D20), a triglyceride assay according to the protocol described in Example 1.
Le taux de conversion adipocytaire a été calculé en prenant comme référence 0% de dédifférenciation le témoin négatif (milieu B seul). Ce protocole permet ainsi de mesurer la capacité de l'adipocyte mature à induire la lyse de ses triglycérides pour se rapprocher (de nouveau) d'un stade "plus immature". 2. Résultats Les résultats montrent que le traitement des cellules 10 adipocytaires (matures) par l'extrait de scutellaire active le processus d'hydrolyse des triglycérides (cf. tableau II). Tableau II Nb de jours de de triglycérides stockés dans les différenciation adipocytes traité par un extrait de scutellaire 30 (2.10-/o p/v) par rapport au témoin (adipocytes en milieu de différenciation seul) J8 -34% J12 -44% J20 -41 % En conclusion, l'extrait de scutellaire permet de 15 stimuler la dédifférenciation adipocytaire et la lipolyse. The adipocyte conversion rate was calculated by taking as reference 0% dedifferentiation the negative control (medium B alone). This protocol thus makes it possible to measure the capacity of the mature adipocyte to induce the lysis of its triglycerides to approach (again) a "more immature" stage. 2. Results The results show that the treatment of mature (adipocyte) cells with skullcap extract activates the process of triglyceride hydrolysis (see Table II). TABLE II Number of days of triglycerides stored in differentiation of adipocytes treated with skullcap extract (2.10- / op / v) relative to control (adipocytes in differentiation medium alone) J8 -34% J12 -44% J20 - In conclusion, skullcap extract stimulates adipocyte dedifferentiation and lipolysis.
Exemple 3 - Contraction des dermes équivalents (action fermeté) 1. Principe du test Lorsque les fibroblastes sont cultivés dans des 5 conditions classiques, à savoir en monocouche, ces derniers acquièrent un phénotype différent de la réalité dermique. Des techniques particulières ont été développées : elles permettent de les cultiver en trois dimensions dans un espace défini contenant du collagène. 10 Dans ces conditions particulières, les fibroblastes s'arrondissent et développent des interactions tridimensionnelles avec la matrice. Dans ces conditions de culture, il est ainsi possible de déterminer le pouvoir contractile des cellules s'approchant d'une maturation en 15 myofibroblastes . l'augmentation du pouvoir contractile est associée in vivo à une densification du derme. 2. Déroulement du test Les fibroblastes ont été ensemencés à raison de 4 x 105 cellules par flasque de 75 cm2 (GREINER, réf.658175), puis 20 cultivés dans un milieu nutritif DMEM sans rouge de phénol (INVITROGEN, réf. 31053028) contenant 10% de sérum de veau nouveau-né (SVNN, INVITROGEN, réf. 16010159, lot 40F1420D), 1% d'une solution d'acides aminés non essentiels (INVITROGEN, réf. 11140035), 100pg/ml de pénicilline, 100U/ml de 25 streptomycine, 2mM de L-glutamine et 1% d'une solution de pyruvate de sodium (INVITROGEN, réf. 11360039). En fonction des cultures, le milieu de culture contenait ou non un extrait de scutellaire. À titre de contrôle positif, une culture en présence de TGF(3 (SIGMA, T7039) à 30 5ng/ml a été utilisée. EXAMPLE 3 Contraction of Equivalent Dermes (Firming Action) 1. Principle of the Test When the fibroblasts are cultured under conventional conditions, namely in monolayer, they acquire a phenotype different from the dermal reality. Specific techniques have been developed: they allow to cultivate them in three dimensions in a defined space containing collagen. Under these particular conditions, the fibroblasts round out and develop three-dimensional interactions with the matrix. Under these conditions of culture, it is thus possible to determine the contractile capacity of the cells approaching a maturation in myofibroblasts. the increase in contractile power is associated in vivo with densification of the dermis. 2. Conduct of the test The fibroblasts were inoculated at a rate of 4 × 10 5 cells per flask of 75 cm 2 (GREINER, ref.658175) and then grown in a nutrient medium DMEM without phenol red (INVITROGEN, ref 31053028) containing 10% newborn calf serum (SVNN, INVITROGEN, P / N 16010159, lot 40F1420D), 1% non-essential amino acid solution (INVITROGEN, P / N 11140035), 100 pg / ml penicillin, 100 U / ml streptomycin, 2mM L-glutamine and 1% sodium pyruvate solution (INVITROGEN, ref 11360039). Depending on the cultures, the culture medium contained or not a skullcap extract. As a positive control, culture in the presence of TGF (3 (SIGMA, T7039) at 5ng / ml was used.
Les cellules, ont alors été placées dans un incubateur à 37 C, 5% de CO2 et à saturation en humidité, pendant 7 jours avec un changement de milieu tous les 2 jours. Après 7 jours de culture, les fibroblastes ont été trypsinés et ensemencés dans des lattices à raison de 360 000 cellules ml composée de 2,75m1 de milieu, 1,5m1 d'une solution de collagène type I à 3,6mg/ml (Becton Dickinson, réf 4236) et de 0,25m1 d'une solution NaOH à 0,02N. L'ensemble a été ensemencé dans une boite de pétri de 35mm de diamètre (boite pour la bactériologie, non traitée pour la culture cellulaire). Chacune des boîtes ensemencées a été déposée dans un incubateur à 37 C, 5% CO2 et 95% d'humidité, pendant 30 minutes. Après 30 minutes, le gel a été décollé des bords des boites et celles-ci ont été replacées à l'étuve. La contraction des lattices de collagène a été évaluée en observant une cinétique (après 15H - 20,5H - 24H - 29,5H - 39H et 48H) au moyen de deux résultats bruts: d'une part la mesure du diamètre des lattices concernées et d'autre part le dénombrement des fibroblastes de ces mêmes lattices. Le diamètre des lattices a été mesuré à l'aide d'une règle graduée. Le comptage cellulaire a été réalisé comme suit : les lattices de collagène ont été digérées par 2ml d'une solution de collagénase (SIGMA, C9891) à 2mg/ml, incubée à 37 C pendant 15min et agitée régulièrement. Une fois la lattice complètement solubilisée, cette solution a été centrifugée à 1200 tours/min. Le culot a ensuite été repris dans lml d'une solution tampon HBSS et le dénombrement cellulaire a été effectué à l'aide d'une cellule de Malassez. À partir des résultats bruts des mesures de diamètres et des comptages cellulaires des lattices de collagène, le rapport R ci-après a été calculé pour chaque condition: Contraction de la lattice (mm) R = Nombre de cellules dans la lattice À partir de ces différents rapports, les droites d'étalonnage pour le témoin négatif, le témoin positif (TGF(3) et l'actif ont été validées et ont permis ce déterminer l'efficacité de l'actif par comparaison des coefficients directeurs et des ordonnées à l'origine. Ce type de protocole a permis d'évaluer la capacité de l'actif à stimuler les fibroblastes, à augmenter leur pouvoir contractile et à les orienter vers un phénotype de myofibroblastes. Ce phénotype de myoblastes est associé à un réseau collagénique plus dense en périphérie de chaque cellule d'où résulte un effet densifiant. 3. Résultats Les résultats ont montré que le traitement préalable des fibroblastes avec un extrait de scutellaire permet d'augmenter leur pouvoir contractile avec une efficacité comparable au témoin positif (TGF(3). En conclusion, l'extrait de scutellaire permet d'augmenter la densité du derme. Exemple 4 ù Compositions cosmétiques • Composition 1 Ingrédients Proportion en % de poids total de la composition Scutellaria baicalensis 0.1% Agents hydratants 10% Alcool 14. 3 % 15 Alcool cétéarylique 3% Allantoïne 10% Aminométhyl propanol 0.3% Cocoate d'éthylhexyle 3% Diméthicone 5% Distéarate de glycol 1% Eau qsp 100 % EDTA tetrasodique 0.1% Gomme Xanthane 0.1% Parfum 0.5% PEG-2 stearate 0.1%, Sodium lactate méthysilanol 2% Sodium mannuronate 4% méthylsilanol 1% Squalane Tocophéryl acétate 0.10/0 Transpolymère d'acrylates et 0.1% d'acrylates d'alkyle en C10-30 2% Triglycéride caprylique/caprique Cette composition peut comprendre d'autres d'origine végétale tels que de la caféine ou an extrait de Vitis vinifera. • Composition 2 Ingrédients The cells were then placed in a 37 C, 5% CO2 and saturated humidity incubator for 7 days with a change of medium every 2 days. After 7 days of culture, the fibroblasts were trypsinized and seeded in lattices at a rate of 360,000 ml cells composed of 2.75 ml of medium, 1.5 ml of a type I collagen solution at 3.6 mg / ml (Becton Dickinson, ref. 4236) and 0.25m1 of a 0.02N NaOH solution. The whole was seeded in a petri dish of 35mm diameter (box for bacteriology, not treated for cell culture). Each of the inoculated dishes was placed in a 37 C, 5% CO2 and 95% humidity incubator for 30 minutes. After 30 minutes, the gel was removed from the edges of the boxes and they were returned to the oven. The contraction of collagen lattices was evaluated by observing kinetics (after 15H - 20.5H - 24H - 29.5H - 39H and 48H) by means of two raw results: on the one hand the measurement of the diameter of the lattices concerned and on the other hand the enumeration of the fibroblasts of these same lattices. The diameter of the lattices was measured using a graduated ruler. The cell count was performed as follows: the collagen lattices were digested with 2ml of a collagenase solution (SIGMA, C9891) at 2 mg / ml, incubated at 37 ° C. for 15 min and stirred regularly. Once the lattice completely solubilized, this solution was centrifuged at 1200 revolutions / min. The pellet was then taken up in 1 ml of HBSS buffer solution and the cell count was performed using a Malassez cell. From the raw results of cell diameter measurements and cell counts of collagen lattices, the ratio R below was calculated for each condition: Lattice contraction (mm) R = Number of cells in the lattice From these different ratios, the calibration lines for the negative control, the positive control (TGF (3) and the asset were validated and allowed this to determine the effectiveness of the asset by comparing the guiding coefficients and the ordinates to the This type of protocol has been used to evaluate the ability of the active ingredient to stimulate fibroblasts, to increase their contractile power and to direct them towards a myofibroblast phenotype.This phenotype of myoblasts is associated with a denser collagenous network. at the periphery of each cell resulting in a densifying effect 3. Results The results showed that pre-treatment of fibroblasts with skullcap extract their contractile power with an efficiency comparable to the positive control (TGF (3). In conclusion, scutellar extract increases the density of the dermis. Example 4 - Cosmetic compositions - Composition 1 Ingredients Proportion in% of total weight of the composition Scutellaria baicalensis 0.1% Moisturizing agents 10% Alcohol 14. 3% 15 Cetearyl alcohol 3% Allantoin 10% Aminomethyl propanol 0.3% Ethylhexyl cocoate 3% Dimethicone 5% Glycol Distearate 1% Water qs 100% Tetrasodium EDTA 0.1% Xanthan gum 0.1% Perfume 0.5% PEG-2 stearate 0.1%, Sodium lactate Methysilanol 2% Sodium mannuronate 4% Methylsilanol 1% Squalane Tocopheryl acetate 0.10 / 0 Transpolymer acrylates and 0.1% of C10-30 alkyl acrylates 2% caprylic / capric triglyceride This composition may comprise other of plant origin such as caffeine or an extract of Vitis vinifera. • Composition 2 Ingredients
Acide stéarique Scutellaria baicalensis Agents hydratants Alcool Alcool cétéarylique et Ceteareth-33 ingrédients Proportion en % de poids total de la composition 0.5% 0.2% 9% 14% 1%5 16 Allantoïne 0.1% Carbomère 0.3% Diméthicone 9% Eau qsp 100 % EDTA tetrasodique 0.02% Gomme Xanthane 0.1% Hydroxyde de sodium 0.02% Parfum 0.6% Steareth-50 2% Tocophéryl acétate 0.1% Cette composition peut comprendre d'autres ingrédients d'origine végétale comme des extraits de Ruscus aculeatus, d'Aesculus hyppocastanum, ou de Macadamia ternifolia. • Composition 3 Ingrédients Alcool Carbomère Eau Eau florale Escine Glycerine Glycols Scutellaria baicalensis Silanols Proportion en % de poids total de la composition 25% 0.4 % qsp 100% 8.1 % 0.3 2.8 0/0 8% 0.2 % 14% Cette composition peut comprendre d'autres ingrédients d'origine végétale comme de la caféine, des extraits de 10 Carapa guianensis, Copaifera officinalis, Cola nitida, Coffea robusta. Stearic acid Scutellaria baicalensis Moisturizing agents Alcohol Cetearyl alcohol and Ceteareth-33 ingredients Proportion in% of total weight of the composition 0.5% 0.2% 9% 14% 1% 5 16 Allantoin 0.1% Carbomer 0.3% Dimethicone 9% Water qs 100% Tetrasodium EDTA 0.02% Xanthan Gum 0.1% Sodium Hydroxide 0.02% Perfume 0.6% Steareth-50 2% Tocopheryl Acetate 0.1% This composition may include other plant-based ingredients such as extracts of Ruscus aculeatus, Aesculus hyppocastanum, or Macadamia. ternifolia. • Composition 3 Ingredients Alcohol Carbomer Water Floral water Escine Glycerine Glycols Scutellaria baicalensis Silanols Proportion as a% of the total weight of the composition 25% 0.4% qsp 100% 8.1% 0.3 2.8 0/0 8% 0.2% 14% This composition may comprise of other plant-based ingredients such as caffeine, extracts of Carapa guianensis, Copaifera officinalis, Cola nitida, Coffea robusta.