FR2978044A1 - Use of Echinacea meristematic cells for stimulating and improving cell renewal, in cosmetic composition, which is useful to prevent and/or fight against effects of UV, and improving radiance of the skin and skin tone - Google Patents
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Abstract
Description
UTILISATION COSMETIQUE DE CELLULES MERISTEMATIQUES D'ECHINACEE Domaine technique La présente invention se rapporte à l'utilisation cosmétique de cellules méristématiques d'échinacée pour la stimulation et l'amélioration du renouvellement cellulaire, ainsi qu'à un procédé cosmétique de stimulation et d'amélioration du renouvellement cellulaire comprenant une application sur la peau de cellules méristématiques d'échinacée. i o Elle trouve des applications, notamment dans le domaine de la cosmétique ou dermatologique. Dans la description ci-dessous, les références entre crochets ([]) renvoient à la liste des références présentée à la fin des exemples. TECHNICAL FIELD The present invention relates to the cosmetic use of meristematic echinacea cells for the stimulation and the improvement of cell renewal, as well as to a cosmetic process for stimulating and ameliorating cell renewal comprising an application on the skin of meristematic echinacea cells. It has applications, particularly in the field of cosmetics or dermatology. In the description below, references in brackets ([]) refer to the list of references at the end of the examples.
15 État de la technique La peau est un organe vital à part entière qui se compose de trois tissus distincts, assumant chacun différents rôles grâce à différents types cellulaires et structures. L'hypoderme, situé en profondeur et constitué en majeure partie de 20 lobules graisseux (adipocytes), assure une fonction de support primaire, de stockage des réserves énergétiques et un rôle de protection mécanique et thermique. L'épiderme est le tissu le plus superficiel du corps humain. C'est un épithélium pluristratifié (Malpighien) qui est kératinisant. Il se compose de 25 différentes cellules associées essentiellement à de nombreuses fonctions de barrière de protection. Entre l'hypoderme et le derme, se positionne le derme qui confère à la peau ses qualités biomécaniques d'extensibilité et de compressibilité. Le derme est constitué de deux régions, le derme superficiel ou papillaire 30 et le derme profond ou réticulaire. Il est investi majoritairement de fibroblastes qui synthétisent les différentes protéines de ce tissu conjonctif. State of the art The skin is a vital organ in its own right which consists of three distinct tissues, each assuming different roles through different cell types and structures. The hypodermis, located in depth and consisting for the most part of 20 fat lobules (adipocytes), provides a primary support function, storage of energy reserves and a role of mechanical and thermal protection. The epidermis is the most superficial tissue of the human body. It is a pluristratified epithelium (Malpighian) which is keratinizing. It consists of 25 different cells essentially associated with many protective barrier functions. Between the hypodermis and the dermis, the dermis is positioned which confers on the skin its biomechanical qualities of extensibility and compressibility. The dermis consists of two regions, the superficial or papillary dermis and the deep or reticular dermis. It is mainly invested with fibroblasts that synthesize the different proteins of this connective tissue.
Les éléments fibrillaires, de type élastine ou collagène, de la matrice extracellulaire confèrent au derme ses qualités de compressibilité et d'élasticité. Au sein de la trame conjonctive, s'intercalent aussi d'autres cellules et structures, tels un important réseau circulatoire et nutritif, constitué des vaisseaux sanguins et des capillaires lymphatiques, et un réseau nerveux responsable de la sensibilité cutanée. Le tissu conjonctif dermique joue un rôle essentiel dans le support et le maintien de l'architecture cutanée. Les modifications de sa texture et de sa composition sont largement responsables des altérations de la peau survenant au cours du vieillissement. En surface, le relief de la couche cornée est directement conditionné par la qualité du derme qui sous-tend l'épiderme et ses annexes. Plus que l'épiderme, dont le renouvellement est rapide et constant, le derme subit les troubles liés à l'âge, par le vieillissement de ses cellules et de sa matière. Ce sont ces mêmes troubles qui apparaissent de façon chronique lors d'expositions aux radiations ultra-violettes. On parle alors de photovieillissement. Suivant sa localisation, le derme peut présenter deux types de modifications en fonction du temps. Le derme réticulaire et le derme papillaire voient tous deux se manifester les effets du vieillissement. D'une manière générale, les fibroblastes sont de moins en moins réactifs et de moins en moins prolifératifs. De plus, les macromolécules constitutives du derme telles que les fibres de collagène, les fibres élastiques, les protéoglycanes et les glycosaminoglycanes ont tendance à dégénérer et à se fragmenter. Leurs réseaux se désorganisent et se désorientent. Au sein du derme, la cellule qui assure la biosynthèse des macromolécules formant le tissu conjonctif est le fibrocyte ou fibroblaste. Les cellules du derme papillaire sont différentes de celles du derme réticulaire par l'expression de divers caractères phénotypiques. Outre l'organisation du cytosquelette et l'expression des capacités biosynthétiques, la différence majeure entre ces cellules est que les premières se multiplient alors que les secondes, bien que dispersées dans le derme, ne se multiplient pratiquement pas dans la peau adulte ou sénescente. Cette différence semble être liée au contrôle exercé par le réseau fibrillaire qui affecte également l'activité de synthèse des cellules; d'où son importance. Comme toute cellule, le fibroblaste détient un potentiel limité de multiplication. Le nombre de doublements est donc influencé par l'âge du donneur et se réduit lorsque la cellule est prélevée dans un organisme âgé. Un fibroblaste embryonnaire détient donc une capacité de division i 0 plus importante. Le parallèle entre les capacités de division du fibroblaste in vitro et celles in vivo est tout de même possible. Comme pour toutes les cellules, la multiplication des fibroblastes, également appelée mitose fibroblastique, est régit par de nombreux mécanismes interdépendants. La famille des cyclines est fortement impliquée dans le contrôle du 15 bon déroulement de la mitose. A chaque enchainement des phases mitotiques (S, G1, G2, M), des cyclines interviennent, contrôle et permettent le passage à la phase suivante. Certaines contraintes extérieures, telles que les irradiations UV, inhibent l'expression des cyclines ce qui engendre des mitoses aberrantes ou de mauvaises qualités 20 non détectables, pouvant ainsi aboutir à des cancers. En outre, le renouvellement cellulaire est aussi fortement lié à un bon contrôle de l'apoptose. Ce phénomène de mort cellulaire est déclenché par la cellule elle-même (suicide) lorsque celle-ci est fortement endommagée par un stress, notamment un stress par UV ou un stress 25 radicalaire, et que les dégâts engendrés ne sont pas "réparables". L'apoptose est nécessaire car il empêche la propagation de dommages aux cellules voisines. Si l'apoptose est bloquée, une cellule lésée risque de transmettre ses lésions à ses cellules filles, ou même à tout le tissu dans lequel est la cellule lésée est présente. L'incapacité à déclencher 30 l'apoptose est une des caractéristiques des cellules cancéreuses. L'apoptose comporte plusieurs qualificatifs : l'apoptose précoce et l'apoptose tardive. Les molécules impliquées lors de l'apoptose précoce et tardive, ainsi que les conséquences sur la cellule, ne sont pas les mêmes. Le renouvellement cellulaire apparaît comme étant une voie potentielle d'activité pour les principes actifs cosmétiques. The fibrillary elements, of elastin or collagen type, of the extracellular matrix give the dermis its qualities of compressibility and elasticity. Within the conjunctive framework, other cells and structures are inserted, such as an important circulatory and nutritive network, consisting of blood vessels and lymphatic capillaries, and a nervous network responsible for cutaneous sensitivity. The dermal connective tissue plays an essential role in the support and maintenance of the cutaneous architecture. The changes in its texture and composition are largely responsible for the alterations of the skin occurring during aging. On the surface, the relief of the stratum corneum is directly conditioned by the quality of the dermis underlying the epidermis and its appendages. More than the epidermis, whose renewal is rapid and constant, the dermis undergoes age-related disorders, by the aging of its cells and its material. These are the same disorders that appear chronically during exposure to ultraviolet radiation. We are talking about photoaging. Depending on its location, the dermis may present two types of modifications as a function of time. The reticular dermis and the papillary dermis both show the effects of aging. In general, the fibroblasts are less and less reactive and less and less proliferative. In addition, the constituent macromolecules of the dermis such as collagen fibers, elastic fibers, proteoglycans and glycosaminoglycans tend to degenerate and fragment. Their networks are disorganized and disoriented. In the dermis, the cell that ensures the biosynthesis of macromolecules forming the connective tissue is the fibrocyte or fibroblast. The cells of the papillary dermis are different from those of the reticular dermis by the expression of various phenotypic characters. Besides the organization of the cytoskeleton and the expression of the biosynthetic capacities, the major difference between these cells is that the first ones multiply while the second ones, although dispersed in the dermis, do not multiply practically in adult or senescent skin. This difference seems to be related to the control exerted by the fibrillar network which also affects the cell synthesis activity; hence its importance. Like any cell, the fibroblast has limited potential for multiplication. The number of doublings is therefore influenced by the age of the donor and is reduced when the cell is removed from an old organism. An embryonic fibroblast therefore has a greater capacity for division. The parallel between the in vitro and in vivo fibroblast division capabilities is still possible. As with all cells, the multiplication of fibroblasts, also called fibroblastic mitosis, is governed by many interdependent mechanisms. The cyclin family is strongly involved in controlling the smooth progress of mitosis. At each sequence of mitotic phases (S, G1, G2, M), cyclins intervene, control and allow the passage to the next phase. Some external constraints, such as UV irradiation, inhibit the expression of cyclins which leads to aberrant mitoses or poor non-detectable qualities, thus leading to cancers. In addition, cell turnover is also strongly related to good control of apoptosis. This phenomenon of cell death is triggered by the cell itself (suicide) when it is strongly damaged by stress, in particular UV stress or radical stress, and the damage generated is not "repairable". Apoptosis is necessary because it prevents the spread of damage to neighboring cells. If the apoptosis is blocked, an injured cell risks transmitting its lesions to its daughter cells, or even to all the tissue in which the injured cell is present. The inability to trigger apoptosis is one of the hallmarks of cancer cells. Apoptosis has several qualifiers: early apoptosis and late apoptosis. The molecules involved in early and late apoptosis, as well as the consequences on the cell, are not the same. Cell renewal appears to be a potential route of activity for cosmetic active ingredients.
Cependant, l'art antérieur fournit peu de moyen permettant de stimuler le renouvellement cellulaire. En outre, ces moyens ne sont pas toujours ou peu efficaces. Il existe donc de réels besoins de fournir des moyens alternatifs permettant notamment de stimuler le renouvellement cellulaire et/ou 1 o d'améliorer la qualité du renouvellement cellulaire. However, the prior art provides little means to stimulate cell renewal. In addition, these means are not always or little effective. There is therefore a real need to provide alternative means including to stimulate cell renewal and / or 1 o improve the quality of cell renewal.
Description de l'invention La présente invention a précisément pour but de répondre à ces besoins et inconvénients de l'art antérieur en fournissant un moyen 15 permettant de stimuler et d'améliorer le renouvellement cellulaire de l'épiderme. Les inventeurs sont les tous premiers à avoir démontré que les cellules méristématiques d'échinacée permettent d'améliorer quantitativement et qualitativement le renouvellement cellulaire au niveau 20 du derme et/ou de l'épiderme. Les inventeurs sont également les tous premiers à avoir mis en évidence qu'une composition comprenant des cellules méristématiques d'échinacée permet d'améliorer le taux de renouvellement cellulaire et/ou d'améliorer l'expression des protéines impliquées dans le déroulement des 25 mitoses. En particulier, il s'avère qu'une composition comprenant des cellules méristématiques d'échinacée permet d'augmenter le nombre de mitoses et leur qualité en stimulant la cycline D1. La présente invention a donc notamment pour objet l'utilisation cosmétique de cellules méristématiques d'échinacée pour la stimulation et 30 l'amélioration du renouvellement cellulaire. DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention is specifically intended to meet these needs and disadvantages of the prior art by providing a means 15 for stimulating and improving the cellular renewal of the epidermis. The inventors are the first to have demonstrated that meristematic echinacea cells make it possible to improve quantitatively and qualitatively the cellular renewal at the level of the dermis and / or the epidermis. The inventors are also the first to have demonstrated that a composition comprising meristematic cells of echinacea makes it possible to improve the rate of cell renewal and / or to improve the expression of the proteins involved in the course of mitoses. . In particular, it turns out that a composition comprising meristematic echinacea cells makes it possible to increase the number of mitoses and their quality by stimulating cyclin D1. The subject of the present invention is therefore the cosmetic use of meristematic echinacea cells for stimulating and improving cell renewal.
La présente invention permet notamment de stimuler et d'améliorer le renouvellement cellulaire de l'épiderme. La présente invention permet également de stimuler et d'améliorer le renouvellement cellulaire du derme. The present invention makes it possible in particular to stimulate and improve the cellular renewal of the epidermis. The present invention also makes it possible to stimulate and improve cell renewal of the dermis.
Dans la présente, par « cellules méristématiques d'échinacée» on entend des cellules obtenues à partir de culture in vitro de cellules d'échinacée. La culture végétale in vitro a débuté en 1939 avec la démonstration de l'obtention de cals, c'est-à-dire des amas de cellules 1 o indifférenciés, à partir de culture de tissus de carotte. Mais les technologies de culture cellulaires végétales n'ont réellement pris leur essor à un niveau industriel, que dans les années 1990. L'industrie cosmétique s'intéresse de plus en plus aux avantages de ce mode de production désormais abouti avec des outils de productions commercialement disponibles. Le principe 15 consiste, à partir d'un échantillon végétal, à dédifférencier les cellules constitutives de l'échantillon puis induire ensuite la multiplication cellulaire de ces cellules souches. Le but est alors d'accroitre la biomasse afin que les cellules soient récupérées avec une concentration élevée en composés d'intérêt (Verpoorte et al., Biotechnology for the production of plant 20 secondary metabolites. Phytochemistry reviews 1: 13-25, 2002 [1]). La culture cellulaire végétale permet théoriquement, grâce à des élicitations de différentes natures possibles, d'orienter le métabolisme pour concentrer certains types de molécules. Il est ensuite possible de récupérer les cellules ou le milieu cellulaire, d'extraire et récupérer ces molécules sous 25 forme plus ou moins purifiée. Il est également possible, de façon plus simple d'utiliser directement les cellules en tant qu'actifs cosmétiques, dans une formule adéquate. Par exemple, les cellules méristématiques d'échinacée peuvent être obtenues, mises en culture et conservées selon les méthodes décrites 3o dans EP2319914 [2] ou EP2324840 [3]. As used herein, "meristematic echinacea cells" means cells obtained from in vitro culture of echinacea cells. In vitro plant culture began in 1939 with the demonstration of callus production, i.e., undifferentiated cell clusters, from carrot tissue culture. But plant cell culture technologies did not really take off at an industrial level until the 1990s. The cosmetics industry is increasingly interested in the advantages of this mode of production, which has now been achieved with production tools. commercially available. The principle consists, from a plant sample, in dedifferentiating the constituent cells of the sample and then inducing the cell multiplication of these stem cells. The aim is then to increase the biomass so that the cells are recovered with a high concentration of compounds of interest (Verpoorte et al., Biotechnology for the production of plant secondary metabolites.) Phytochemistry reviews 1: 13-25, 2002 [ 1]). The plant cell culture theoretically allows, thanks to elicitations of various possible natures, to direct the metabolism to concentrate certain types of molecules. It is then possible to recover the cells or the cell medium, to extract and recover these molecules in more or less purified form. It is also possible, in a simpler way to directly use the cells as cosmetic actives, in a suitable formula. For example, meristematic echinacea cells can be obtained, cultured and stored according to the methods described in EP2319914 [2] or EP2324840 [3].
Les cellules méristématiques d'échinacée peuvent être toute cellule méristématique d'une plante appartenant au genre Echinacea. Par exemple, la plante appartenant au genre Echinacea peut être une plante choisie dans le groupe comprenant Echinacea angustifolia, Echinacea purpurea et Echinacea pallida. Avantageusement, les cellules méristématiques d'échinacée sont des cellules méristématiques d'Echinacea angustifolia. Echinacea angustifolia est une plante médicinale native des Etats-Unis utilisée initialement par les indiens d'Amérique. La plupart des 1 o utilisations concernent l'usage d'extraits de racine et de sommités fleuries dont les propriétés immunostimulantes non spécifiques ont été largement décrites et caractérisées (Blumenthal et al., The complete german commission E, Therapeutic guide to herbal medicine. p.122-123, Blumenthal et al. 1989 [4]). 15 Les cellules méristématiques d'échinacée peuvent avantageusement être des cellules appartenant à la lignée cellulaire Echinacea angustifolia IRBEA66, déposée le 18 mai 2005 à la DSMZ (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und zellkulturen, Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunscheid, Allemange) sous le numéro DSM 17522. Il peut 20 s'agir par exemple des cellules « Echinacea angustifolia stems G (marque de commerce) (EASGX) » commercialisées par la société IRB (Instituto di Ricerche Biotechnologiche S.p.A., Italie). Dans la présente, on entend par « stimulation du renouvellement cellulaire », notamment l'amélioration quantitative du renouvellement 25 cellulaire, c'est-à-dire notamment l'amélioration de la quantité des mitoses cellulaires. On entend par « amélioration de la quantité de mitoses », l'augmentation du nombre de mitoses effectuées par une ou plusieurs cellules. Dans la présente, on entend par « amélioration du renouvellement 30 cellulaire », notamment l'amélioration qualitative du renouvellement cellulaire, c'est-à-dire notamment l'amélioration de la qualité des mitoses cellulaires. On entend par « amélioration de la qualité de mitoses », la limitation des erreurs pouvant survenir lors des divisions cellulaires, notamment lors de la duplication chromosomale. En d'autres termes, la présente invention a notamment pour objet l'utilisation cosmétique de cellules méristématiques d'échinacée pour améliorer quantitativement et qualitativement le renouvellement cellulaire. La présente invention permet notamment d'améliorer quantitativement et qualitativement le renouvellement cellulaire de l'épiderme. i o La présente invention permet également d'améliorer quantitativement et qualitativement le renouvellement cellulaire du derme. Selon l'invention, la stimulation du renouvellement cellulaire peut être provoquée par la stimulation de la cycline D1. En d'autres termes, la présente invention a notamment pour objet l'utilisation cosmétique de 15 cellules méristématiques d'échinacée pour stimuler la cycline D1, par exemple dans les cellules de l'épiderme et ou du derme. La stimulation de la cycline D1 se traduit par l'augmentation de la production de cycline D1 au niveau génique et au niveau de son expression protéique. 20 Selon l'invention, les cellules méristématiques d'échinacée peuvent être utilisées dans une composition cosmétique ou dermatologique. La composition cosmétique ou dermatologique peut par exemple être destinée à prévenir et/ou lutter contre les effets des 25 rayonnements ultraviolets (UV) et/ou améliorer l'éclat de la peau et/ou améliorer le teint de la peau. Selon l'invention, les cellules méristématiques d'échinacée peuvent être sous toute forme appropriée pour une utilisation cosmétique ou dermatologique. Par exemple, les cellules méristématiques d'échinacée 30 peuvent être entières ou lysées. The meristematic cells of Echinacea can be any meristematic cell of a plant belonging to the genus Echinacea. For example, the plant belonging to the genus Echinacea may be a plant selected from the group consisting of Echinacea angustifolia, Echinacea purpurea and Echinacea pallida. Advantageously, the meristematic cells of Echinacea are meristematic cells of Echinacea angustifolia. Echinacea angustifolia is a medicinal plant native to the United States originally used by Native Americans. Most of the uses concern the use of root extracts and flowering tops whose nonspecific immunostimulatory properties have been widely described and characterized (Blumenthal et al., The Complete German E Commission, Therapeutic Guide to Herbal Medicine. .122-123, Blumenthal et al., 1989 [4]). The meristematic cells of echinacea may advantageously be cells belonging to the cell line Echinacea angustifolia IRBEA66, deposited on May 18, 2005 at the DSMZ (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und zellkulturen, Inhoffenstrasse 7B, D-38124 Braunscheid, Germany) under the name number DSM 17522. This may be for example cells "Echinacea angustifolia stems G (trademark) (EASGX)" marketed by the company IRB (Instituto di Ricerche Biotechnologiche SpA, Italy). As used herein, the term "cell renewal stimulation" is intended to mean, in particular, the quantitative improvement of cell turnover, that is to say in particular the improvement of the amount of cellular mitosis. The term "improvement of the quantity of mitoses" means the increase in the number of mitoses carried out by one or more cells. As used herein, the term "cell renewal enhancement" is intended to mean, in particular, the qualitative improvement of cell renewal, that is, in particular, the improvement of the quality of cellular mitoses. The term "improvement of the quality of mitoses" means the limitation of errors that may occur during cell divisions, especially during chromosomal duplication. In other words, the present invention particularly relates to the cosmetic use of meristematic echinacea cells to improve quantitatively and qualitatively the cell renewal. The present invention makes it possible in particular to improve quantitatively and qualitatively the cellular renewal of the epidermis. The present invention also makes it possible to improve quantitatively and qualitatively the cellular renewal of the dermis. According to the invention, stimulation of cell renewal can be caused by stimulation of cyclin D1. In other words, the subject of the present invention is in particular the cosmetic use of meristematic echinacea cells for stimulating cyclin D1, for example in the cells of the epidermis and or of the dermis. Stimulation of cyclin D1 results in increased production of cyclin D1 at the gene level and at the level of its protein expression. According to the invention, meristematic echinacea cells can be used in a cosmetic or dermatological composition. The cosmetic or dermatological composition may for example be intended to prevent and / or fight against the effects of ultraviolet (UV) radiation and / or to improve the radiance of the skin and / or to improve the complexion of the skin. According to the invention, the meristematic echinacea cells may be in any form suitable for cosmetic or dermatological use. For example, meristematic echinacea cells may be whole or lysed.
Par exemple les cellules méristématiques d'échinacée peuvent être utilisées en tant que tel ou dans une composition cosmétique ou dermatologique. Lorsque les cellules méristématiques d'échinacée sont utilisées dans une composition cosmétique ou dermatologique, elles peuvent être par exemple en suspension dans la composition. Elles peuvent également être sous la forme d'un extrait de cellules méristématiques d'échinacée plus ou moins homogénéisé dans la composition cosmétique. En d'autres termes, des cellules méristématiques d'échinacée i o peuvent être utilisées seules ou dans une composition cosmétique ou dermatologique pour prévenir et/ou lutter contre les effets des rayonnements ultraviolets (UV) et/ou améliorer l'éclat de la peau et/ou améliorer le teint de la peau. Dans la présente par « composition cosmétique » on entend toute 15 composition à visée cosmétique c'est à dire une composition pouvant être mise en contact avec les parties superficielles du corps humain, par exemple l'épiderme, les systèmes pileux et capillaires, les organes externes, les dents et les muqueuses. Dans la présente par « composition dermatologique » on entend 20 toute composition à visée dermatologique c'est à dire une composition pouvant être mise en contact avec les parties superficielles du corps humain, par exemple l'épiderme, les systèmes pileux et capillaires, les organes externes, les dents et les muqueuses. Les cellules méristématiques d'échinacée peuvent être utilisées 25 dans la composition cosmétique à toute concentration efficace pour permettre de stimuler et/ou d'améliorer la régénération cellulaire. Par exemple, les cellules méristématiques d'échinacée peuvent, par exemple, être présentes dans la composition à une teneur d'au moins 0,010/0 en masse, par exemple au moins 0,050/0, par exemple au moins 0,10/0 en 30 masse, par exemple au moins 10/0, par exemple au moins 30/0 en poids par rapport au poids total de la composition. For example, meristematic echinacea cells can be used as such or in a cosmetic or dermatological composition. When the meristematic echinacea cells are used in a cosmetic or dermatological composition, they may for example be suspended in the composition. They may also be in the form of an extract of meristematic cells of echinacea more or less homogenized in the cosmetic composition. In other words, meristematic echinacea cells can be used alone or in a cosmetic or dermatological composition to prevent and / or fight against the effects of ultraviolet (UV) radiation and / or improve the radiance of the skin and / or improve the complexion of the skin. As used herein, the term "cosmetic composition" is intended to mean any cosmetic composition, ie a composition that can be put into contact with the superficial parts of the human body, for example the epidermis, hair and hair systems, organs external organs, teeth and mucous membranes. As used herein, "dermatological composition" means any composition for dermatological purposes, ie a composition which can be brought into contact with the superficial parts of the human body, for example the epidermis, hair and hair systems, organs external organs, teeth and mucous membranes. Meristematic echinacea cells can be used in the cosmetic composition at any effective concentration to help stimulate and / or enhance cellular regeneration. For example, meristematic echinacea cells may, for example, be present in the composition at a content of at least 0.010 wt.%, For example at least 0.050 wt., For example at least 0.10 wt. Mass, for example at least 10/0, for example at least 30/0 by weight relative to the total weight of the composition.
La composition cosmétique peut comprendre des cellules méristématiques d'échinacée à une concentration de, par exemple, 0,010/0 à 40/0 en poids par rapport au poids total de la composition. Par exemple, la concentration de cellules méristématiques d'échinacée dans la composition cosmétique peut être de 0,010/0 à 30/0, par exemple de 0,01 à 10/0, par exemple de 0,050/0 à 10/0, par exemple de 0,1 à 10/0 en poids par rapport au poids total de la composition. Elle peut également être de 0,010/0 à 0,050/0 ou de 0,050/0 à 0,50/0 en poids par rapport au poids total de la composition. i o La composition cosmétique peut être de toute forme connue de l'homme du métier. Par exemple, la composition cosmétique est choisie dans le groupe comprenant une émulsion huile-dans-l'eau, une émulsion eau-dans-l'huile, une émulsion eau dans silicone, une émulsion multiple, d'une mini-émulsion, une microémulsion, une nano-émulsion, une 15 émulsion solide, un gel aqueux ou un gel hydro-alcoolique, une poudre, une huile, d'une lotion aqueuse, une lotion hydro-alcoolique, une lotion biphasique et une cire. La composition cosmétique peut, par exemple, se présenter sous toute forme galénique connue de l'homme du métier. Par exemple, la 20 composition cosmétique peut être sous la forme d'une crème, d'un lait, d'une lotion, d'un gel, d'une pommade, d'une huile, d'une poudre, d'un stick, d'une solution, d'un tampon imbibé, d'un patch transdermique, d'un spray ou d'une suspension. Les compositions selon la présente invention peuvent être, par 25 exemple des compositions de soin du visage, des lèvres, du contour des yeux, du corps, du cuir chevelu, des cheveux, des compositions solaires, après-solaires, et/ou des compositions de massage, par exemple des compositions pour le visage et/ou le corps. La composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention 3o peut comprendre un ou plusieurs adjuvants connus de l'homme du métier. Il peut s'agir par exemple d'un ou plusieurs adjuvant(s) choisi(s) parmi des agents de type esters, des agents hydratants, des agents émollients, des agents épaississants minéraux, des agents épaississants organiques, associatifs ou non, des filtres solaires organiques hydrosolubles et liposolubles, des filtres solaires minéraux, des composés siliconés, des parfums, des conservateurs, des céramides, et pseudo-céramides, des vitamines et les provitamines, des protéines, des agents séquestrants, des agents alcanisants, des agents acidifiants, des agents réducteurs, des agents oxydants, des charges minérales, des colorants ou tout autre adjuvant pouvant être cité dans le dictionnaire INCI (International Nomenclature Cosmetic Ingredients) publié par le CTFA (Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association). La composition de l'invention peut être obtenue par tout procédé approprié connu de l'homme du métier pour la fabrication d'une composition cosmétique ou dermatologique. Il peut s'agir, par exemple d'un simple mélange. Il peut s'agir également, par exemple, d'un procédé comprenant une étape d'incorporation d'une phase interne dans une phase externe au moyen d'un émulseur, par exemple d'une turbine de type rotor-stator. Il peut s'agir également par exemple d'un procédé utilisant la Température d'Inversion de Phase (TIP), procédé classiquement utilisé par l'homme de l'art pour obtenir des émulsions huile dans eau dont les gouttelettes dispersées sont particulièrement fines, par exemple avec un diamètre de 0,1 à 1 pm. La présente invention a donc également pour objet l'utilisation de cellules méristématiques d'échinacée pour la fabrication d'une composition cosmétique. La présente invention a également pour objet l'utilisation cellules méristématiques d'échinacée pour la fabrication d'une composition dermatologique. The cosmetic composition may comprise meristematic echinacea cells at a concentration of, for example, 0.010% to 40% by weight relative to the total weight of the composition. For example, the meristematic cell concentration of echinacea in the cosmetic composition may be from 0.010 / 0 to 30/0, for example from 0.01 to 10/0, for example from 0.050 / 0 to 10/0, for example from 0.1 to 10% by weight relative to the total weight of the composition. It can also be from 0.010% to 0.050% or from 0.050% to 0.50% by weight relative to the total weight of the composition. The cosmetic composition may be of any form known to those skilled in the art. For example, the cosmetic composition is chosen from the group comprising an oil-in-water emulsion, a water-in-oil emulsion, a water-in-silicone emulsion, a multiple emulsion, a mini-emulsion, a microemulsion, nanoemulsion, solid emulsion, aqueous gel or hydroalcoholic gel, powder, oil, aqueous lotion, hydroalcoholic lotion, biphasic lotion and wax. The cosmetic composition may, for example, be in any galenic form known to those skilled in the art. For example, the cosmetic composition may be in the form of a cream, a milk, a lotion, a gel, an ointment, an oil, a powder, a stick, solution, impregnated buffer, transdermal patch, spray or suspension. The compositions according to the present invention may be, for example, compositions for the care of the face, lips, eye contour, body, scalp, hair, sun compositions, after-sun, and / or compositions. massage, for example compositions for the face and / or the body. The cosmetic or dermatological composition according to the invention may comprise one or more adjuvants known to those skilled in the art. This may be, for example, one or more adjuvants chosen from among ester-type agents, moisturizing agents, emollient agents, mineral thickeners, organic thickeners, associative or non-associative, water-soluble and fat-soluble organic sunscreens, mineral sunscreens, silicone compounds, perfumes, preservatives, ceramides, and pseudo-ceramides, vitamins and provitamins, proteins, sequestering agents, alkanizing agents, acidifying agents , reducing agents, oxidizing agents, mineral fillers, dyes or any other adjuvant which may be cited in the INCI (International Nomenclature Cosmetic Ingredients) dictionary published by the CTFA (Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association). The composition of the invention may be obtained by any suitable method known to those skilled in the art for the manufacture of a cosmetic or dermatological composition. It may be, for example a simple mixture. It may also be, for example, a method comprising a step of incorporating an internal phase into an external phase by means of an emulsifier, for example a rotor-stator type turbine. It may also be for example a method using the Phase Inversion Temperature (TIP) method conventionally used by those skilled in the art to obtain oil-in-water emulsions whose dispersed droplets are particularly fine, for example with a diameter of 0.1 to 1 μm. The present invention therefore also relates to the use of meristematic echinacea cells for the manufacture of a cosmetic composition. The present invention also relates to the use of meristematic echinacea cells for the manufacture of a dermatological composition.
La présente invention a également pour objet un procédé de traitement cosmétique de stimulation et d'amélioration du renouvellement cellulaire comprenant l'application sur la peau de cellules méristématiques d'échinacée. Pour cette application, on peut, par exemple, utiliser la composition cosmétique ou dermatologique décrite ci-dessus. L'application sur la peau peut donc être réalisée en fonction de la forme galénique utilisée. Cette application peut avantageusement être accompagnée d'un massage. L'application peut être, par exemple une application journalière quotidienne, hebdomadaire. Il peut s'agir par exemple d'une application une fois par jour, deux fois par jour ou plusieurs fois par jour. i o Avantageusement, la présente invention permet de stimuler et d'améliorer le renouvellement cellulaire du derme et/ou de l'épiderme. Avantageusement, la présente invention permet de stimuler la cycline D1. Avantageusement, la présente invention peut être utilisée, par 15 exemple, pour prévenir et/ou lutter contre les effets des UV et/ou améliorer l'éclat de la peau et/ou améliorer le teint de la peau. The subject of the present invention is also a method of cosmetic treatment for stimulating and improving cell renewal, comprising the application on the skin of meristematic cells of Echinacea. For this application, it is possible, for example, to use the cosmetic or dermatological composition described above. The application to the skin can therefore be carried out according to the dosage form used. This application can advantageously be accompanied by a massage. The application can be, for example a daily daily application, weekly. It may be for example an application once a day, twice a day or several times a day. Advantageously, the present invention makes it possible to stimulate and improve cell renewal of the dermis and / or the epidermis. Advantageously, the present invention makes it possible to stimulate cyclin D1. Advantageously, the present invention may be used, for example, to prevent and / or combat the effects of UV and / or improve skin luster and / or improve skin tone.
D'autres avantages pourront encore apparaître à l'homme du métier à la lecture des exemples ci-dessous, illustrés par les figures 20 annexées, donnés à titre illustratif et non limitatif. Other advantages may still appear to those skilled in the art on reading the examples below, illustrated by the appended figures, given for illustrative and non-limiting purposes.
Exemple 1 : Activité des cellules méristématiques d'échinacée sur la 25 prolifération des fibroblastes Différentes études ont été réalisées sur des fibroblastes dermiques humains normaux, obtenus à partir de plasties abdominales, ensemencés en monocouche dans les conditions de culture adéquates, à savoir dans un milieu DMEM (« Dulbecco's Modified Eagle Medium ») supplémenté à 30 10/0 de sérum de veau foetal (SVF), à une température de 37°C, sous atmosphère à 50/0 de CO2 et saturée en humidité. Après 24h et 3 jours de culture, les cellules ont été traitées avec des cellules méristématiques d'échinacée (OSE) « Echinacea angustifolia stems G (marque de commerce) (EASGX) » à 0,1 %, p/v obtenue auprès la société IRB (Instituto di Ricerche Biotechnologiche S.p.A., Italie). EXAMPLE 1 Activity of Meristematic Echinacea Cells on the Proliferation of Fibroblasts Various studies were carried out on normal human dermal fibroblasts obtained from abdominal plasties, seeded in a monolayer under the appropriate culture conditions, namely in a medium. DMEM ("Dulbecco's Modified Eagle Medium") supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) at a temperature of 37 ° C under 50% CO 2 atmosphere and saturated with moisture. After 24h and 3 days of culture, the cells were treated with meristematic Echinacea cells (OSE) "Echinacea angustifolia stems G (trademark) (EASGX)" at 0.1%, p / v obtained from the company IRB (Instituto di Ricerche Biotechnologiche SpA, Italy).
A terme de chaque point de cinétique, selon le test en quadruplicate à 1, 3 et 6 jours (tests en quadruplate et reproduit 2 fois), la viabilité cellulaire a été évaluée par quantification de l'activité métabolique des déshydrogénases mitochondriales, par mesure d'hydrolyse du MTT (« MethylThiazoleTetrazolium »). i o Les données du tableau 1 ci-dessous concernent le pourcentage de viabilité des fibroblastes, ayant subi différents traitements. La référence positive est le milieu DMEM supplémenté à 5% de SVF At the end of each kinetic point, according to the quadruplicate test at 1, 3 and 6 days (quadruplate tests and reproduced twice), the cell viability was evaluated by quantification of the metabolic activity of the mitochondrial dehydrogenases, by measurement of hydrolysis of MTT ("MethylThiazoleTetrazolium"). The data in Table 1 below relate to the percentage of viability of fibroblasts undergoing different treatments. The positive reference is DMEM supplemented with 5% FCS
15 Tableau 1 : Activité des cellules méristématiques d'échinacée sur la prolifération des fibroblastes Fibroblastes Humains Normaux Cinétique d'étude Témoin Témoin positif CSE 0,1% négatif DMEM + 5 /° sérum DMEM J1 0% 32% 9% J3 0% 32% 11 0/0 J6 0% 67% 25% Cet exemple montre que l'adjonction de CSE dans le milieu de culture permet aux fibroblastes de proliférer d'avantage jusqu'à 25 % en fin 2 o de traitement. Table 1: Activity of Meristematic Echinacea Cells on Fibroblast Proliferation Fibroblasts Humans Normal Study Kinetics Control Positive Control CSE 0.1% Negative DMEM + 5 / ° Serum DMEM J1 0% 32% 9% J3 0% 32 % This example shows that the addition of CSE in the culture medium allows the fibroblasts to proliferate by up to 25% at the end of treatment.
Exemple 2 : Activité des cellules méristématiques d'échinacée sur la prolifération des kératinocytes Différentes études ont été réalisées sur des kératinocytes humains 25 normaux, obtenus à partir de plasties abdominales, ensemencés en monocouche dans les conditions de culture adéquates, à savoir dans un milieu HAMF12 complémenté avec 10% d'extrait de glande pituitaire bovine (BPE) et d'EGF (« epidermal growth factor » en anglais), à une température de 37°C, sous atmosphère à 5% de CO2 et saturée en humidité Après 24h et 3 jours de culture, les cellules ont été traitées avec les cellules méristématiques d'échinacée (OSE) « Echinacea angustifolia stems G (marque de commerce) (EASGX) » à 0,1 %, p/v obtenue auprès la société IRB (Instituto di Ricerche Biotechnologiche S.p.A., Italie). A terme de l'expérience, à J6 (test en quadruplicate), la viabilité cellulaire a été évaluée par quantification de l'activité métabolique des déshydrogénases mitochondriales, par mesure d'hydrolyse du MTT (« MethylThiazoleTetrazolium »). Les données du tableau 2 ci-dessous concernent le pourcentage de viabilité des kératinocytes ayant subi différents traitements. La référence positive est le milieu KSFM supplémenté d'EGF et de BPE. Tableau 2 : Activité des cellules méristématiques d'échinacée sur la prolifération des fibroblastes Cinétique Kératinocytes Humains Normaux d'étude Témoin négatif Témoin positif CSE 0,1 0/0 HAMF12 KSFM compl. J6 0% 25% 33% Cet exemple montre que l'adjonction de CSE dans le milieu de culture permet aux kératinocytes de proliférer d'avantage jusqu'à 33 % en fin de traitement. EXAMPLE 2 Activity of Meristematic Echinacea Cells on the Proliferation of Keratinocytes Various studies were carried out on normal human keratinocytes, obtained from abdominal plasties, seeded in a monolayer under the appropriate culture conditions, namely in a HAMF12 medium. supplemented with 10% bovine pituitary gland extract (BPE) and EGF ("epidermal growth factor" in English), at a temperature of 37 ° C, under an atmosphere at 5% CO2 and saturated with moisture After 24 hours and After 3 days of culture, the cells were treated with meristematic Echinacea cells (OSE) "Echinacea angustifolia stems G (trademark) (EASGX)" at 0.1%, w / v obtained from the company IRB (Instituto di Ricerche Biotechnologiche SpA, Italy). At the end of the experiment, on day 6 (quadruplicate test), the cell viability was evaluated by quantification of the metabolic activity of the mitochondrial dehydrogenases, by measurement of hydrolysis of MTT ("MethylThiazoleTetrazolium"). The data in Table 2 below relate to the percentage of viability of keratinocytes undergoing different treatments. The positive reference is KSFM medium supplemented with EGF and BPE. Table 2: Meristematic Echinacea Cell Activity on Fibroblast Proliferation Kinetics Human Keratinocytes Normal Study Negative Control Positive Control CSE 0.1% HAMF12 KSFM compl. J6 0% 25% 33% This example shows that the addition of CSE in the culture medium allows the keratinocytes to proliferate more up to 33% at the end of treatment.
25 Exemple 3 : Activité des cellules méristématiques d'échinacée sur la qualité du cycle cellulaire des fibroblastes (expression de la cycline D1)20 Différentes études ont été réalisées sur des fibroblastes dermiques humains normaux provenant de la société Bioalternatives en génomique (PCR-array) et en protéomique (cytométrie en flux) pour vérifier la transcription protéique de la cycline D1. EXAMPLE 3 Activity of Meristematic Echinacea Cells on the Quality of the Fibroblast Cell Cycle (Expression of Cyclin D1) Various studies were performed on normal human dermal fibroblasts from Bioalternatives in genomics (PCR-array) and in proteomics (flow cytometry) to verify the protein transcription of cyclin D1.
Les tests ont été réalisés sur des cultures de fibroblastes humains normaux avec du DMEM complémenté à 10/0 de sérum, en condition normales ou en condition de stress UVA, et traités par la suspension de cellules méristématiques d'échinacée « Echinacea angustifolia stems G (marque de commerce) (EASGX) » à 0,5 %, p/v obtenue auprès la société IRB (Instituto di Ricerche Biotechnologiche S.p.A., Italie), ou non (témoin milieu). Le stress aux UVA a été appliqué par un simulateur à hauteur de 30J/cm2. L'expression de la cycline D1 a été mesurée par cytométrie en flux (BD FACSarray, Beckton Dickinson) sur 10 000 cellules, Le traitement ne modifie pas l'expression de la Cycline D1 en condition normale (00/0 de stimulation) mais il induit une réponse plus forte en condition de stress (220/0 de stimulation). Le traitement permet d'inhiber les effets des UV et dons de renforcer les contrôles biochimiques au niveau du cycle cellulaire. The tests were carried out on normal human fibroblast cultures with DMEM supplemented with 10% serum, under normal conditions or under UVA stress conditions, and treated with the suspension of meristematic Echinacea cells Echinacea angustifolia stems G ( trade mark) (EASGX) "at 0.5%, p / v obtained from IRB (Instituto di Ricerche Biotechnologiche SpA, Italy), or not (middle witness). UVA stress was applied by a simulator at 30J / cm2. The expression of cyclin D1 was measured by flow cytometry (BD FACSarray, Beckton Dickinson) on 10,000 cells. The treatment does not modify the expression of cyclin D1 under normal conditions (00/0 of stimulation), but induces a stronger response under stress conditions (220/0 stimulation). The treatment helps to inhibit the effects of UV and donations to strengthen biochemical controls at the cell cycle level.
Exemple 4 : Exemples de compositions cosmétiques comprenant une suspension de cellules méristématiques d'échinacée selon l'invention Dans les compositions ci-dessous, la suspension de cellules méristématiques d'échinacée sont des cellules « Echinacea angustifolia stems G (marque de commerce) (EASGX) » commercialisées par la société IRB (Instituto di Ricerche Biotechnologiche S.p.A., Italie). Des exemples de compositions selon l'invention sont présentés ci-dessous. Les pourcentages sont donnés en masse par rapport à la masse totale de la composition.30 Exemple 4.1 : Composition de soin du visage de type sérum : Composants Pourcentage (/o en poids) Eau 68,326 Glycérine 5,000 Jus de feuilles d'Aloe barbadensis 4,000 Sorbitol 4,000 Huile de noix de coco hydrogéné 3,000 Alcool 2,800 Polymère croisé de Polydimethylsiloxane (PDMS) et 2,400 Polydimethylsiloxane (PDMS) Sel de sodium d'acide carbonique pyrrolidone 2,000 Stéarate de sorbitane 1,700 Extrait d'Acer saccharum 1,400 Beurre de Butyrospermum parkii 1,100 Extrait de feuille d'Agave tequilana 1,000 Ceteth-20 0,700 Alcool stéarylique (Octadécanol) 0,700 Suspension de cellules méristématiques d'échinacée 0,500 Parphum 0,400 Acide salicylique 0,300 Gomme de xanthane 0,300 Acide sorbique 0,150 Soude 0,120 Acétate de tocophérol 0,100 Mangiférine 0,004 Exemple 4.2 : Composition de soin du visage de type soin de jour: Composants Pourcentage (/o en poids) Eau 62,691 Glycérine 5,000 Cocoate d'ethylhexyle 5,000 Méthylpropanediol 4,000 Alcool cétylique 3,500 Stéarate de glycérol et stéarate de poly éthylène glycol- 3,500 100 Huile de Cocotier 3,000 Huile de graines de Helianthus annuus 3,000 Myristate de myristyle 2,000 Huile de graines de sésame 2,000 Acide stéarique 1,500 Eau d'Hamamelis virginiana 1,100 Stéarate de glycérol AE 1,000 2-phénoxyéthanol 0,600 Suspension de cellules méristématiques d'échinacée 0,500 Parfum 0,500 Eau et glycérine et alcool et extrait de fleur de 0,500 Calendula officinalis Gomme de xanthane 0,150 Polymère croisé d'Acrylates / acrylate d'alkyle C10-30 0,100 Acide sorbique 0,100 AI ne 0,100 Acétate de tocophérol 0,100 Soude 0,030 EDTA tétrasodique 0,025 Mangiférine 0,004 Exemple 4.3 : Composition de soin du visage de type soin de nuit : Composants Pourcentage (/o en poids) Eau 53,566 Glycérine 6,000 Alcool cétéarylique et Ceteareth-33 4,200 Méthylpropanediol 4,000 Cocoate d'ethylhexyle 4,000 Huile de soja 4,000 Myristate de myristyle 3,000 Alcool cétylique 3,000 Huile de noix de coco hydrogéné 3,000 Polydimethylsiloxane (PDMS) 3,000 Mannuronate de méthylsilanol 3,000 Polyacyladipate-2 de bis-diglycéryle 2,000 Lactate de sodium méthylsilanol 2,000 Stéarate de sorbitane 1,000 Beurre de Butyrospermum parkii 1,000 2-phénoxyéthanol 0,700 Suspension de cellules méristématiques d'échinacée 0,500 Copolymère d'ammonium acryloyldimethyltaurate / VP 0,500 Parfum 0,400 Linoléate d'éthyle 0,300 Gomme de xanthane 0,150 Acide sorbique 0,150 AI lantoï ne 0,100 EDTA tétrasodique 0,100 Acétate de tocophérol 0,100 Palmitate de rétinol 0,100 Extrait d'Hippophaé rhamnoides 0,070 Soude 0,060 Mangiférine 0,004 EXAMPLE 4 Examples of Cosmetic Compositions Comprising a Meristematic Echinacea Cell Suspension According to the Invention In the compositions below, the suspension of meristematic echinacea cells are "Echinacea angustifolia stems G" (trademark) (EASGX) cells. ) "Marketed by IRB (Instituto di Ricerche Biotechnologiche SpA, Italy). Examples of compositions according to the invention are presented below. The percentages are given by weight relative to the total mass of the composition. Example 4.1: Serum-type facial care composition: Components Percentage (% by weight) Water 68,326 Glycerin 5,000 Aloe barbadensis leaf juice 4,000 Sorbitol 4,000 Hydrogenated coconut oil 3,000 Alcohol 2,800 Polydimethylsiloxane cross polymer (PDMS) and 2,400 Polydimethylsiloxane (PDMS) Sodium salt of carbonic acid pyrrolidone 2,000 Sorbitan stearate 1,700 Acer saccharum extract 1,400 Butyrospermum parkii butter 1,100 Leaf extract of Agave tequilana 1,000 Ceteth-20 0.700 Stearyl alcohol (Octadecanol) 0.700 Meristematic cell suspension of Echinacea 0.500 Parfum 0.400 Salicylic acid 0.300 Xanthan gum 0.300 Sorbic acid 0.150 Soda 0.120 Tocopherol acetate 0.100 Mangiferin 0.004 Example 4.2: Care composition of day care type face: Components Percentage (/ o by weight) Water 62,691 Glycerine 5,000 Coconut ethylhexylate 5,000 Methylpropanediol 4,000 Cetyl alcohol 3,500 Glycerol stearate and polyethylene glycol stearate 3,500 100 Coconut oil 3,000 Helianthus annuus seed oil 3,000 Myristyl myristate 2,000 Sesame seed oil 2,000 Stearic acid 1,500 Hamamelis water virginiana 1,100 Glycerol stearate AE 1,000 2-phenoxyethanol 0.600 Meristem cell suspension of Echinacea 0.500 Perfume 0.500 Water and glycerine and alcohol and flower extract of 0.500 Calendula officinalis Xanthan gum 0.150 Acrylate cross polymer / C10 alkyl acrylate 0.100 Sorbic Acid 0.100 AI 0.100 Tocopherol Acetate 0.100 Soda 0.030 Tetrasodium EDTA 0.025 Mangiferine 0.004 Example 4.3: Night Care Facial Composition: Components Percentage (wt.%) Water 53.566 Glycerin 6,000 Cetearyl Alcohol and Ceteareth- 33 4,200 Methylpropanediol 4,000 Ethylhexyl Cocoate 4,000 Soy Oil 4,000 My myristyl ristate 3,000 Cetyl alcohol 3,000 Hydrogenated coconut oil 3,000 Polydimethylsiloxane (PDMS) 3,000 Methylsilanol Mannuronate 3,000 Bis-Diglyceryl 2 Polyacyladipate 2,000 Sodium Lactate Methylsilanol 2,000 Sorbitan Stearate 1,000 Butyrospermum Parkii 1,000 1,000 2-Phenoxyethanol 0.700 Suspension of merinematic cells of Echinacea 0.500 Copolymer ammonium acryloyldimethyltaurate / VP 0.500 Perfume 0.400 Ethyl linoleate 0.300 Xanthan gum 0.150 Sorbic acid 0.150 AI lantoin 0.100 Tetrasodium tetrasodium 0.100 Tocopherol acetate 0.100 Retinol palmitate 0.100 Hippophae extract rhamnoides 0.070 Soda 0.060 Mangiferin 0.004
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