FR2893630A1

FR2893630A1 - Systeme et procede de traitement genetique et epigenetique

Info

Publication number: FR2893630A1
Application number: FR0553533A
Authority: FR
Inventors: Fred Zacouto
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2005-05-04
Filing date: 2005-11-21
Publication date: 2007-05-25
Also published as: US20060252062A1; EP1885846A2; AU2006263797A1; FR2885368A1; CA2606292A1; IL186988A; WO2007000523A2; WO2007000523A3; AU2006263797B2; IL186988A0; FR2891842A1; WO2007000523A8; US20140087469A1

Abstract

L'invention concerne en particulier la modification de l'environnement d'un noyau cellulaire avec ou sans transfert extracellulaire ou intra-ovocytaire, de manière à mettre le noyau sous l'influence d'un milieu induisant sa reprogrammation génétique partielle, mais sans provoquer un retour du noyau au développement de cellules embryonnaires. Ce milieu provoquera une meilleure réparation de l'ADN cellulaire lors des divisions et agressions et/ou un rajeunissement génétique par l'action d'un milieu inverseur du temps biologique, tel qu'un ovocyte.

Description

La présente invention concerne des systèmes et des procédés destinés à

génétiquement et épigénétiquement traiter des cellules. De tels systèmes et de tels procédés sont notamment utiles dans le domaine des traitements cellulaires, notamment pour la réalisation d'autogreffes s à partir de cellules différenciées ou souches embryonnaires ou foetales. Les traitements cellulaires, et en particulier les autogreffes, sont à ce jour pratiquées dans l'optique de réparer un tissu endommagé souffrant d'une maladie, d'un déficit cellulaire ou d'une nécrose. Cette technique consiste généralement à prélever quelques cellules saines du tissu concerné, à mettre en 10 culture de multiplication cellulaire ces cellules afin de constituer un stock ou tissu de cellules et de réimplanter ces cellules dans le tissu à traiter. Ces cellules reprogrammées peuvent permettre alors au tissu concerné de recouvrir ses capacités morphologiques et fonctionnelles d'origine. Par exemple, cette technique est employée pour la réparation du cartilage 15 articulaire. Le cartilage articulaire présente un potentiel de réparation limité et les lésions d'un certain volume ne cicatrisent bien que rarement. Afin de réparer de telles lésions et prévenir l'apparition de l'arthrose chez les malades, des chondrocytes, baignant dans une matrice extracellulaire, sont prélevés, débarrassés de la matrice par exemple par digestion enzymatique puis mis en 20 culture, généralement sur des sérums de veau foetal ou de préférence dans du sérum du patient, et dans des matrices tridimensionnelles (par exemple une matrice d'agarose, de collagène ou de globine). Une telle mise en culture permet alors aux cellules prélevées de se multiplier par division mitotique et aboutit alors à l'obtention de millions de chondrocytes. Ces chondrocytes peuvent ensuite être 25 réimplantés dans le tissu cartilagineux afin de restaurer les cellules et le cartilage déficitaire. Toutefois, l'inconvénient de ces techniques de multiplication est que généralement les cellules prélevées sont des cellules ayant déjà subi de nombreuses divisions mitotiques. Or, la culture de cellules pour leur 30 multiplication provoque une légère diminution des télomères à chaque mitose et cette multiplication se fait souvent sur des cellules déjà vieillies, proches de leur fin de vie et de leur fin de fonctions, et dont l'ADN est en outre susceptible d'être altéré. Notamment, il est connu que le vieillissement cellulaire se traduit par un rongement progressif des télomères (extrémité des chromosomes). Or, ces télomères conditionnent le nombre restant de divisions mitotiques. Ainsi, le fait de cultiver des cellules mères ayant déjà subi de nombreuses mitoses peut donner lieu à une importante colonie de cellules filles vieillies et à survie raccourcie pouvant présenter par ailleurs des altérations de fonctionnalité génique. Le but de la présente invention est de fournir des systèmes et des procédés de traitement génétique et épigénétique surmontant les inconvénients susmentionnés. En particulier, la présente invention a pour but de fournir des systèmes et des procédés de traitement cellulaire permettant une production rapide et de masse de cellules saines présentant des fonctionnalités géniques améliorées et/ou capables d'être génétiquement et épigénétiquement rajeunies, vieillies et/ou réparées à un degré désiré. La présente invention a encore pour but de fournir des systèmes et des procédés de traitement cellulaire aboutissant à la fois à une reconstitution d'un tissu autologue manquant, défaillant, à renforcer ou à modifier, et à un rajeunissement génétique du tissu dans lequel les cellules ont été implantées.

La présente invention a donc pour objet un système de traitement génétique et épigénétique de cellules à traiter, comprenant : - au moins une cellule à traiter, - un milieu de reprogrammation génétique (MRG), comprenant au moins du cytoplasme naturel d'au moins une cellule de reprogrammation génétique (CRG) et/ou du cytoplasme synthétique, et - des moyens pour mettre en contact au moins une partie d'au moins un noyau d'au moins une cellule à traiter avec ledit MRG pour modifier l'âge biologique et/ou réparer ladite au moins une cellule à traiter. La présente invention à aussi pour objet un procédé de traitement génétique et épigénétique de cellules à traiter, comprenant les étapes suivantes : - fournir au moins une cellule à traiter, - fournir un milieu de reprogrammation génétique (MRG), comprenant au moins du cytoplasme naturel d'au moins une cellule de reprogrammation génétique (CRG) et/ou du cytoplasme synthétique, et -mettre en contact au moins une partie d'au moins un noyau d'au moins une cellule à traiter avec ledit MRG pour modifier l'âge biologique et/ou réparer ladite au moins une cellule à traiter. Divers modes de réalisation sont décrits dans les revendications dépendantes. Des avantages, caractéristiques et applications de l'invention apparaîtront io plus clairement au cours de la description détaillée suivante, de plusieurs modes de réalisation et variantes de l'invention. L'invention concerne en particulier la modification de l'environnement d'un noyau cellulaire avec ou sans transfert extracellulaire ou intra-ovocytaire, de manière à mettre le noyau sous l'influence d'un milieu induisant sa 15 reprogrammation génétique partielle, mais sans provoquer un retour du noyau au développement de cellules embryonnaires. Ce milieu provoquera une meilleure réparation de l'ADN cellulaire lors des divisions et agressions et/ou un rajeunissement génétique par l'action d'un milieu inverseur du temps biologique, tel qu'un ovocyte. 20 La présente invention concerne notamment des systèmes et des procédés s'appliquant au domaine du traitement et/ou réparation et/ou amélioration cellulaire fonctionnelle et/ou morphologique destinés à ouvrir de nombreuses perspectives pour la lutte contre un grand nombre de maladies mais également contre la sénescence des tissus due dans une très large mesure à la perte de leur 25 capacité fonctionnelle et morphologique de prolifération, de régénération et de réparation. En particulier, la présente invention a pour objet un système et des procédés aptes à traiter des cellules d'un tissu, notamment pour rajeunir, vieillir et/ou réparer ces cellules. Les cellules sont ensuite cultivées dans un milieu adéquat de manière à créer un stock ou tissu de cellules génétiquement et 30 épigénétiquement traitées capables d'être implantées dans le tissu considéré, ou à distance de celui-ci, où ces cellules pourront émettre notamment des protéines et/ou peptides de signalisation et/ou de stimulation du métabolisme, et/ou des enzymes de réparation de l'ADN, pour le tissu considéré. Plus précisément, les systèmes et les procédés selon l'invention consistent à mettre en contact au moins une partie d'un noyau d'au moins une cellule à traiter avec un milieu de reprogrammation génétique (MRG). Ce MRG comprend au moins du cytoplasme naturel d'au moins une cellule de reprogrammation génétique (CRG) et/ou du cytoplasme synthétique. Un cytoplasme reconstitué et/ou synthétique peut être notamment composé d'extraits de sérums embryonnaires, de cicatrisation et/ou de cellules soumises à une activation métabolique. Un cytoplasme totalement synthétique, par exemple réalisé par reconstitution physique et chimique de substances actives, est possible. Il est aussi envisageable de réaliser un MRG sous la forme d'une bouillie de CRG, avec ou sans noyaux. Il est aussi possible d'ajouter des extraits de cellules ou de cytoplasme et/ou d'autres substances connues pour leur capacité d'activation du métabolisme nucléaire, telles que des cellules ou extraits de cellules apparaissant au cours d'une cicatrisation et/ou des protéines ou peptides de signalisation ou de stimulation du métabolisme et/ou des facteurs de croissance et/ou des cellules ou extraits de cellules cancéreuses. Les extraits de cellules ou de cytoplasme peuvent être obtenus par des traitements physiques ou chimiques bien connus. L'intérêt d'utiliser des cellules ou extraits de cellules cancéreuses s'explique par le fait que les facteurs d'activation métabolique, de signalisation et de mitoses y sont particulièrement intenses et susceptibles d'induire temporairement une réactivation métabolique ou nucléaire d'une cellule à traiter. Un risque de contagion cancéreuse est improbable car les cancers ne sont en général pas transmissibles à un tissu différent. L'usage de cellules cancéreuses sélectionnées est possible pour traiter temporairement des cellules adultes ou non qui sont insuffisamment capables de se diviser spontanément ou en culture, de réparer leur ADN mal recopié, ou qui sont fonctionnellement déficientes. On sait qu'une cellule cancéreuse agrandit rapidement ses télomères, accélère et prolonge indéfiniment ses mitoses, accroît ses enzymes de réparation de son ADN et augmente ses performance paracrines et endocrines. Il s'agit donc de transférer sélectivement un fonctionnement choisi de la cellule cancéreuse sur la cellule à traiter, sans risquer une contamination néoplasique tératogène. Le cancer n'étant pas directement contagieux pour des cellules non cancéreuses, même malades, l'application sélective régénératrice de cellules cancéreuses peut se faire par exemple de deux façons : traitement intracellulaire : un noyau est prélevé d'une cellule cancéreuse et introduit dans le cytoplasme d'une cellule du tissu à traiter ; ce noyau reste de préférence séparé du noyau normal par une languette ou membrane d'un tissu biocompatible poreux éventuellement imprégné d'anticorps, ledit tissu laissant passer les protéines de signalisation mais empêchant tout passage de gènes ou de chromosomes. Dans ces conditions, les protéines de signalisation émises par le noyau cancéreux vont provoquer une reprogrammation génétique partielle du noyau cellulaire à traiter, spécialement dans ses fonctions défaillantes. Après une ou plusieurs mitoses, le noyau cancéreux sera enlevé, et la cellule reprogrammée pourra être multipliée dans une culture cellulaire adaptée. traitement extracellulaire : des cellules cancéreuses choisies sont rapprochées de quelques cellules à traiter dans un bain de culture cellulaire adapté de façon à comporter au moins un facteur capable d'augmenter la perméabilité des membranes cellulaires, notamment aux protéines de signalisation. Ceci peut se faire jusqu'à ce que l'observation ou des tests génétiques, protéomiques, biochimiques ou biophysiques permettent de constater l'induction d'une réactivation fonctionnelle de la ou des déficience(s) nucléaire(s) à corriger. Le progrès, notamment des protéolyses et peptidolyses sélectives notamment par anticorps spécifiques va rendre possible de cibler les protéines de signalisation émises du noyau cancéreux et de reprogrammer sélectivement le noyau à traiter dans ses fonctions voulues et programmées.

Trois types de traitement principaux peuvent notamment être envisagés, à savoir le rajeunissement de l'âge biologique d'une cellule, le vieillissement de l'âge biologique d'une cellule et la réparation d'une cellule. Le rajeunissement de l'âge biologique d'une cellule favorise également la capacité d'auto-réparation de cette cellule, notamment au niveau de son ADN. Dans le cadre d'un traitement génétique et épigénétique pour rajeunir une cellule, le MRG comprend tout ou partie d'une ou plusieurs CRG. Dans ce cas, une telle CRG est avantageusement un ovocyte, une cellule embryonnaire, une cellule souche embryonnaire ou adulte, une cellule foetale, ou un récipient cellulaire reconstitué à partir de ces cellules, ou synthétisé. Les systèmes, procédés et applications pour réaliser un tel rajeunissement seront décrits plus en détail ci-après. Le vieillissement d'une cellule est notamment envisageable pour traiter des maladies foetales ou chez le nouveau-né, dues notamment à des cancers d'origine embryonnaire, tel que le glioblastome. Pour reprogrammer ces cellules cancéreuses, on peut les vieillir artificiellement en remplaçant le noyau cancéreux par un noyau sain du même tissu autologue ou homologue mais plus âgé, de préférence HLA (Human Lymphocyte Antigen) compatible. Ainsi, l'interaction entre le noyau plus âgé et le cytoplasme jeune favorise un certain vieillissement temporairement accéléré au moins du cytoplasme de la cellule jeune. Ce vieillissement peut alors être réalisé par multiplication de cellules dans un bain de culture, le cytoplasme jeune provoquant des mitoses accélérées du noyau plus âgé, induisant une diminution des télomères. Après culture, un tri des cellules saines est possible pour réimplanter un tissu sain à la place du tissu malade d'origine. Une autre application possible consiste à réparer une cellule, notamment dans sa constitution chromosomique, en traitant seulement une partie d'un noyau, par exemple un chromosome. Par exemple dans le cadre d'une leucémie, le chromosome malade, notamment le chromosome Philadelphie , peut, lors de la métaphase où les chromosomes sont déployés, être détruit, par exemple au moyen d'un rayon laser ultramince, de préférence de diamètre égal ou inférieur à 1 micron. Ensuite, on prélève un chromosome sain équivalent lors de la métaphase d'une cellule équivalente du patient ou d'un donneur HLA compatible, et on l'implante dans la cellule cancéreuse, notamment durant sa mitose. Le traitement pourrait être envisagé notamment pour un grand nombre de cancers, par exemple le glioblastome, le cancer du sein ou du rectum. Une autre application possible est de réparer seulement une partie du chromosome. Ainsi, on peut supprimer une partie spécifique d'un chromosome, par exemple la partie dont les gènes sont responsables du rejet des greffes. Ceci peut se faire au moyen d'un rayon laser ultramince. Ensuite on prend la partie io équivalente du chromosome équivalent chez le receveur de la greffe, ce qui peut également se faire par découpe laser au moyen d'un rayon laser ultramince. On réintroduit ensuite cette partie de chromosome dans le chromosome d'origine, ce qui peut se faire au moyen de plasmides ou de micromanipulations en nanotechnologies. De manière plus générale, ce type de réparation est 15 envisageable pour réparer toute déficience ou dysfonctionnement d'une partie de cellule, notamment due à l'âge. Divers modes de réalisation et applications du rajeunissement cellulaire vont maintenant être décrits plus en détails. Selon un premier aspect de l'invention, pour rajeunir ou régénérer une 20 cellule différenciée, on prélève son noyau (avec ou sans son cytoplasme attaché) et on le transfère dans le MRG, avantageusement dans une CRG du type cellule ovocytaire, embryonnaire ou foetale. Ce noyau est laissé dans le MRG pendant un temps prédéterminé, puis retiré. Selon une première variante, le noyau est retiré avant la fin de la télophase du noyau, c'est-à-dire que le noyau est extrait 25 du MRG avant sa division en deux cellules, autrement dit avant la fin de sa première mitose. L'inventeur a observé que cette introduction temporaire d'un noyau dans un MRG, notamment dans une CRG, aboutit à un allongement rapide et important des télomères, souvent synonyme de rajeunissement du matériel chromosomique. Le noyau régénéré peut alors être introduit dans une 30 cellule réceptrice différenciée, souche ou embryonnaire, de préférence énuclée, de préférence autologue, de préférence de tissu identique, dans laquelle la division mitotique pourra se poursuivre et ainsi aboutir à la naissance de deux cellules filles dont le matériel nucléique est régénéré. Ensuite, ces cellules pourront être soumises à une culture de multiplication et atteindre des quantités telles qu'au moins des millions de cellules assez différenciées pour être fonctionnellement et morphologiquement aptes à être implantées au niveau du tissu d'origine concerné. En variante, le noyau peut être retiré du MRG après une ou plusieurs mitoses, puis un (ou plusieurs) des noyaux rajeunis ainsi obtenu(s) est (sont) réintroduit(s) dans une cellule réceptrice différenciée, avantageusement autologue, de préférence dans la cellule d'origine du noyau.

Il est à noter que dans le cadre de ce premier aspect de l'invention, il peut être souhaitable d'ouvrir ou de retirer au moins partiellement la membrane de la CRG, pour éviter tout risque de division cellulaire de celle-ci. En effet, la membrane est nécessaire au phénomène de division cellulaire, alors que c'est le cytoplasme qui est le lieu privilégié de la reprogrammation génétique.

Selon un aspect avantageux de l'invention, l'étape de prélèvement et de transfert du noyau de la cellule différenciée comprend de prélever, outre le noyau, au moins une partie du cytoplasme contenu dans la cellule différenciée, afin de retrouver dans le MRG, notamment dans la CRG, quelques composants cytoplasmiques initialement présents dans la cellule différenciée, tels que le réticulum endoplasmique, l'appareil de golgy, les ribosomes et/ou les mitochondries. Selon un second aspect de l'invention, la mise en contact d'au moins le noyau d'une cellule différenciée avec ledit MRG peut consister à transférer du MRG dans une cellule différenciée, par exemple au moyen d'une pipette ou par transfert provoqué par une différence de pression. Ceci peut être réalisé en créant au moins une fente ou ouverture dans la membrane de la cellule différenciée, et de transférer du MRG dans ladite cellule différenciée à travers ladite au moins une fente ou ouverture. Avantageusement, on prévoit de pouvoir séparer ou retirer ledit MRG transféré après un certain laps de temps prédéterminable ou observable, suffisant pour reprogrammer génétiquement le noyau de la cellule différenciée. Par exemple, il est envisageable de disposer côte à côte une CRG et une cellule différenciée, de réaliser une ouverture dans la membrane de la CRG et une ouverture dans la membrane de la cellule différenciée, puis de comprimer la CRG pour transférer au moins partiellement le cytoplasme de la CRG dans la cellule différenciée. Cette compression peut être obtenue en plaçant une pipette ou similaire au dessus de la membrane de la cellule à comprimer de préférence bloquée contre une paroi, et en exerçant une pression adaptée. On pourrait aussi exercer cette pression au moyen d'un fluide, de préférence visqueux, pouvant déborder de la pipette sans s'en détacher. Cette compression est maintenue le temps nécessaire à la reprogrammation génétique du noyau de la cellule io différenciée, puis la compression sur la CRG est supprimée, avec pour effet que le cytoplasme de la CRG transféré dans la cellule différenciée est au moins partiellement ré-aspiré dans la CRG. Il est à noter que le MRG peut être retiré avant ou après la première mitose du noyau de la cellule différenciée. En variante, on peut prévoir des moyens pour refermer la cellule différenciée avec 15 au moins une partie du MRG restant inclus en elle. Les exemples d'applications décrits ci-après font référence plus généralement au premier aspect de l'invention décrit ci-dessus (transfert temporaire d'un noyau de cellule différenciée dans un MRG, notamment dans une CRG), mais il est entendu qu'ils pourraient tous être mis également en 20 oeuvre avec le second aspect de l'invention décrit précédemment (transfert de MRG dans une cellule différenciée). Par ailleurs, la plupart des exemples font référence à l'utilisation d'ovocyte, mais toute CRG, et plus généralement tout MRG peut être utilisé pour mettre en oeuvre ces exemples. Tout d'abord, il est à noter que l'ovocyte utilisé peut possiblement être un 25 ovocyte de mammifère. Par exemple, un ovocyte de lapin ou de mouton pourrait être utilisé. On peut aussi créer in vitro des ovocytes provenant d'une différenciation induite à partir de cellules souches embryonnaires (OPCE). Ces OPCE, par exemple obtenus par clonage, peuvent provenir du receveur des greffes et les noyaux traités devenir ainsi particulièrement autologues car le 30 cytoplasme des OPCE ne comportera plus qu'une partie de son ADN et/ou ARN étranger, notamment dans les mitochondries et les ribosomes. On peut également introduire dans l'ovocyte, un noyau, qui soit par exemple en mitose débutante, spontanée ou provoquée, ou par ailleurs des chromosomes ou gènes ou parties de noyaux à traiter dans une cellule de type embryonnaire. On peut aussi utiliser des cellules de type embryonnaires qui peuvent être artificiellement activées par des protéines ou des peptides de signalisation génétique ou d'activation ou régulation cellulaire, constituant un environnement capable d'induire une certaine reprogrammation génétique de voisinage. Ainsi, le retrait du noyau de la cellule différenciée peut se faire de façon avantageuse en anaphase ou en cours de télophase selon le degré de rajeunissement génétique souhaité. Afin d'observer la période mitotique en cours, des moyens optiques, tels qu'un microscope, peuvent êtres utilisés. Si une CRG est ensuite utilisée, elle proviendra alors de préférence du même tissu, par exemple, cartilagineuse, myocardique, etc., de préférence partiellement dénoyautée et cultivable in vitro, in vivo ou in situ. Cette ou ces cellule(s) seront cultivées pour multiplication de préférence un temps suffisant in vivo dans des tissus embryonnaires pour obtenir une dédifférenciation partielle. Les noyaux ainsi traités peuvent être laissés, soit dans les cellules de type embryonnaire pour constituer un tissu greffable dans l'organisme de provenance du noyau, soit extrait de leurs cellules réceptrices pour devenir inducteur de régénération cellulaire locale intra ou trans- membranaire au niveau d'un tissu différencié, de préférence autologue et identique. L'implantation du noyau ou partie nucléaire peut également se faire à l'intérieur d'une cellule souche, de préférence de type embryonnaire ou foetal. De telles cellules partiellement et sélectivement dédifférenciées peuvent ensuite être introduites dans des cellules différenciées, tels que des chondrocytes, des cellules à fonction immunitaires, endocriniennes, des cellules cardiaques, des cellules issues de tissus ayant subit un traitement anti-cancéreux, des cellules R et a des îlots de Langerhans, des cellules de même origine qu'un greffon à transplanter, des hépatocytes, etc., afin de régénérer le tissu correspondant. Une telle invention peut ainsi être appliquée sans limitation à la régénération de toute cellule assez différenciée, telle que des cellules cardiaques, rénales, osseuses, tendineuses, cartilagineuses, cutanées, dermiques, épidermiques, pancréatiques, hépatiques, nerveuses, prostatiques, glandulaires, hématopoïétiques, nerveuses, vasculaires, rétiniennes, dentaires, desmodontales etc. A partir d'un certain degré de dédifférenciation, ces cellules perdent leur pouvoir immunogène et peuvent parfois être utilisées pour régénérer des tissus non autologues. Cette fonction comporte aussi la capacité de ces cellules génétiquement activées d'agir à distance par sécrétion, libération ou induction de peptides et/ou protéines de signalisation génétique, notamment, par molécules biochimiques spécifiques. Cette activation génétique trans-membranaire et/ou trans-humorale donne la capacité à ces cellules de stimuler activement et continuellement d'autres cellules déficientes sénescentes ou d'inhiber des facteurs cancérigènes. Le système selon l'invention et les procédés de régénération cellulaires mis en oeuvre comportent de préférence quatre stades successifs, à savoir une préparation du matériel nucléaire, une reprogrammation génétique, une multiplication en culture et une réimplantation dans l'organisme de provenance du noyau. La préparation du matériel nucléaire consiste à prélever le noyau de la cellule assez différenciée de préférence avec plus ou moins de cytoplasme afin de conserver si possible les composants cytoplasmiques, tels que les mitochondries, les ribosomes, le réticulum endoplasmique, l'appareil de Golgi, les lysosomes, les péroxysomes, etc., de la cellule différenciée initiale au niveau de l'ovocyte accueillant ce prélèvement. L'inventeur suppose que cette étape permet d'assurer une reprogrammation synchrone des diverses structures vitales autour du noyau et une conservation probable du champ morpho-temporel cellulaire. Par ailleurs, il est possible que certains constituants du matériel nucléaire tels que les chromosomes, un ensemble de gènes, un ou plusieurs gènes isolés (naturels, recombinés, semi synthétiques ou synthétiques) aient été préalablement soumis à un tel procédé de régénération. De cette façon, certains éléments de la préparation auront un âge biologique différent. En outre, il peut être prévu d'accoler un segment d'ADN végétal, codant par exemple pour la vitamine C, E, l'acide folique, etc. à un gène ou un chromosome, exprimant par exemple l'érythropoïétine ou diverses albumines par exemple lors de la métaphase, ou à la membrane nucléaire à l'anaphase, à la télophase ou à une interphase correspondante. Le récipient membrano-cytoplasmique (ovocyte) pour traiter les éléments cytoplasmiques de reprogrammation peut se révéler parfois trop petit pour les éléments cellulaires que l'on désire traiter. A titre d'exemple, on peut penser au traitement simultané d'un noyau avec une partie de son cytoplasme, ou de plusieurs noyaux parfois différents tels que dans un néphron, une cellule musculaire, une cellule autorythmique myocardique, un follicule pileux, une unité épidermique de mélanisation, une unité épiderme-derme, une unité glandulaire, une unité hépatobiliaire, une unité fonctionnelle rétinienne (tel qu'un épithélium pigmenté : cônes, bâtonnets, cellules bipolaires, cellules horizontales et cellules de Müller), une unité vasculaire (cellule endothéliale et myoartérielle), une unité hématopoïétique, une unité neuro-glio-dendritique, une unité ovarienne de follicules de Graaf, etc. Afin de traiter une unité à plusieurs noyaux par un système ou un procédé de régénération selon l'invention, il peut être nécessaire de disposer d'un récipient membrano-cytoplasmique agrandi à fonction ovocytaire préservé (RAF). Un tel RAF peut être réalisé par collage des membranes respectives de plusieurs ovocytes de préférence homo ou autologue de mammifères, par exemple par micromanipulations manuelles ou robotiques, en préservant de préférence chaque cytoplasme respectif au sein de leur membrane respective et en créant un volume du type sphérique, ovoïde ou cylindrique. Une telle manipulation exige de préserver l'environnement vital pour chaque ovocyte. Cet accolement membranaire peut par exemple être réalisé au moyen d'un micro rayon laser, d'un petit rayon lumineux chauffant, d'un collant biologique, etc. La multiplication in vitro est précédée par l'introduction du matériel nucléo-cytoplasmique dans une cellule de préférence énuclée et à vitalité au moins récupérable. Les techniques actuelles de multiplication permettent, par exemple, en deux semaines d'obtenir environ un demi milliard de cellules à partir de dizaines. Dans le cas présent, l'inventeur a observé que le procédé de régénération selon l'invention assure un accroissement rapide et important de la longueur des télomères en moins d'une journée permettant ainsi de contrebalancer leur irrémédiable raccourcissement résultant des si nombreuses réplications successives. Cette multiplication peut également se faire in vivo mais est généralement beaucoup plus lente et nécessite souvent un amorçage suffisant in vitro. Ceci diminue la quantité de cellules nécessaires ainsi que le rongement important destélomères et permet probablement une meilleure adaptation fonctionnelle ainsi qu'une plus grande influence génétique à distance. Il peut être souhaitable de régénérer ensemble une pluralité de cellules représentant une unité fonctionnelle organique, telle que par exemple un néphron, des cellules rétiniennes pigmentaires des différentes catégories ou des alvéoles pulmonaires, pour former une unité fonctionnelle organique génétiquement rajeunie. Par exemple, on peut envisager une micromanipulation cellulaire pour réaliser une enceinte agrandie à fonction de reprogrammation génétique et épigénétique capable d'inverser temporellement l'évolution de l'âge biologique des noyaux et/ou cytoplasmes multiples qui y sont introduits. A cette fin, les cellules à fonction ovocytaire sont, par exemple, coupées en deux parties, de préférence par un micro-rayon laser à lumière froide. Ces deux parties sont ouvertes, et leurs membranes peuvent être fixées sur une couche protéique, tel que de la globine, laquelle a de préférence été appliquée sur une surface flexible.

Ce tapis de membranes ovocytaires ou embryonnaires présente les cytoplasmes vers le haut. Lorsqu'une surface suffisante d'un tel velours cytoplasmique (VC) est constituée, on peut y poser plusieurs noyaux de cellules différenciées, avec ou sans leur cytoplasme, et rouler ensuite le VC autour d'eux le plus près possible. Ce sandwich cellulaire interactif restera, de préférence, dans le liquide nutritif classique de culture cellulaire le temps choisi pour obtenir la phase de mitose désirée. On peut ainsi obtenir le rajeunissement simultané de plusieurs noyaux appartenant à une unité fonctionnelle organique qui pourra être multipliée soit à l'état de cellules isolées, ce qui exige un réarrangement des cellules multipliées selon leur ordre fonctionnel, soit à l'état d'un ensemble de cellules déjà placées dans leur ordre fonctionnel.

Le procédé de régénération selon l'invention est notamment approprié pour les maladies caractérisées par un déficit ou une défaillance cellulaire (diabète, infarctus du myocarde, hépatite, insuffisance rénale, baisse de vision, ou encore maladies génétiques responsable d'une déficience immunologique) ainsi que pour les cancers survenant après un certain âge, tel que celui de la prostate, des seins et du colon. Cette régénération cellulaire est applicable à de nombreux types cellulaires et peut donc créer des tissus de régénération contrôlée permettant de soigner de nombreuses lésions organiques et tissulaires. Ainsi, par exemple, en prélevant, sous contrôle échographique, par une aiguille trans-rectale ou transdermique, ou par une sonde endoscopique, des cellules prostatiques qui seront totalement ou partiellement traitées et en les réimplantant par exemple dans la prostate, ce rajeunissement cellulaire inducteur à distance, notamment par des protéines de signalisations, pourra, dans certains cas, s'opposer au développement d'un cancer local, freiner son extension ou même détruire toutes les métastases. Ainsi également, une rétine ophtalmique autologue, voire homologue, dont une unité cellulaire fonctionnelle, par exemple constituée de quelques cellules de l'épithélium pigmenté, de cônes, de bâtonnets, de cellules bipolaires et/ou de cellules de Muller, qui a été prélevée et régénérée, pourra avoir un grand intérêt en cas de DMLA. L'insuffisance rénale grave pourra être combattue par l'implantation de cellules partiellement dédifférenciées obtenues, par exemple après transfert dans puis hors d'ovocytes, de noyaux de différentes cellules de néphron. L'arthrose peut être traitée par l'implantation de chondrocytes provenant d'une régénération cellulaire. Il en va de même pour des surfaces cutanées et les follicules pileux, et notamment pour régénérer et/ou colorer une chevelure blanchie, par exemple en transférant dans un ou plusieurs ovocyte(s) de préférence un ou des noyaux ou parties de noyaux de cellules de follicule pileux, de mélanocytes et de kératinocytes, pour une régénération de la chevelure et/ou de sa couleur. Encore une autre application de l'invention peut consister à renforcer ou recréer les fonctions thymiques par rajeunissement génétique de cellules thymiques homologues ou si possible autologues suffisamment dédifférenciées pour réanimer activement les fonctions immunoprotectrices du corps. Diverses applications du système et du procédé selon l'invention vont maintenant être décrites de façon plus détaillée. L'ensemble des étapes nécessaires à la régénération cellulaire ne sera par la suite pas répété, le principe d'ensemble restant le même et pouvant être adapté à chaque cas par l'homme du métier. Il est rappelé aussi que les deux aspects de l'invention, à savoir d'une part le transfert provisoire d'un noyau de cellule différenciée dans un MRG (notamment une CRG), et d'autre part le transfert de MRG dans une cellule différenciée, sont utilisables. Une application biomédicale particulièrement préférée pour ce procédé de régénération de cellules concerne de manière générale les maladies dégénératives des articulations (arthrose). Les chondrocytes des cartilages, qui souvent dégénèrent avec l'âge, peuvent être prélevés par biopsie, endoscopie, intervention chirurgicale locale ou arthroscopie et séparés de leur cartilage environnant. Leur noyau peut être alors soumis au procédé de régénération selon l'invention. Après multiplication, la réimplantation des cellules régénérées dans l'articulation d'origine doit se faire de préférence à proximité, mais en dehors des surfaces de la cavité articulaire mobile qui supporte les charges mécaniques afin d'éviter toute anfractuosité au niveau de ses surfaces mobiles. Parfois, un défaut d'alimentation sanguine indirecte des chondrocytes, qui se fait majoritairement par imbibition, doit être corrigé. On peut alors envisager la greffe autour ou pénétrant dans le cartilage périphérique par rapport à la cavité articulaire, d'un tissu fonctionnel vasculaire autologue comprenant petites artères û artérioles û capillaires û veinules - et petites veines, ces unités fonctionnelles vasculaires peuvent avantageusement provenir d'une culture cellulaire autologue post-procédé de régénération selon l'invention. Cette implantation de cellules rajeunies peut se faire sous forme de couches de lamelles préformées en trois dimensions selon la géométrie locale de la cavité articulaire préalablement mesurée, ou sous forme d'un essaimage afin de provoquer l'émission durable notamment de protéines de signalisation. Les chondrocytes post- procédé de régénération vont progressivement reconstituer un cartilage plus épais, lisse et bien lubrifié. L'ostéoporose est une maladie dégénérative du tissu osseux survenant avec l'âge. Pour lutter contre cette maladie, il convient de procéder à la régénération d'ostéoblastes (et éventuellement d'ostéocytes) autologues et de les réimplanter, de préférence, à plusieurs niveaux de l'os. Les ostéoblastes sont de préférence multipliés en culture avec des sollicitations géométriques artificielles, en particulier en imposant des contraintes mécaniques, par exemple à l'aide d'un cadre support. Ce cadre support peut comporter au moins un côté mobile pour des mouvements dans un plan. Avantageusement, on utilise deux côtés mobiles dans le cadre de support de culture et/ou la possibilité de réaliser des rotations motrices tridimensionnelles. Au niveau du col du fémur, par exemple, on peut effectuer aisément, sous anesthésie locale, des biopsies espacées en introduisant un trocart à travers le massif trochantérien du fémur qui se trouve proche de la peau. Le traitement des ostéoblastes et ostéocytes locaux ainsi recueillis suite au procédé de régénération de cellules et la réimplantation de ces cellules rajeunies, par exemple, par la même voie transtrochantérienne, pourra permettre la création locale d'un remodelage osseux qui réalise ainsi alors un renforcement fondamental des travées osseuses de sustentation dans la direction des contraintes mécaniques du col et de la tête fémorale vers le haut ainsi que vers le bas en direction du corps du fémur. Au niveau des vertèbres, principales victimes de l'ostéoporose par fractures et aplatissements, un procédé équivalent de régénération des cellules à celui du fémur peut être mis en oeuvre, notamment en association avec des fixateurs et articulations artificielles développés par l'inventeur dans les brevets US-6,835,207 et US-6,692,495. La présente invention peut également être appliquée à des sujets ayant subi des inflammations graves, notamment par affaiblissements réactionnels des différents lymphocytes producteurs d'anticorps et de cytokines pro et anti-inflammatoires. Le procédé de régénération selon l'invention peut alors permettre de raviver ces lymphocytes en nombre et en fonction. Pour se faire, ces lymphocytes peuvent être soumis au procédé selon l'invention en plaçant un noyau lymphocytaire dans un ovocyte en présence ou non de traces d'antigènes crées par l'infection en cause dans le cytoplasme ovocytaire. En présence de traces d'antigènes crées par l'infection placés dans le cytoplasme ovocytaire, les lymphocytes seront rajeunis et multipliés et ensuite réimplantés dans l'organisme où ils auront déjà mémorisé les antigènes dangereux et produire ou faire produire ensuite les anticorps correspondant en quantité importante. Dans le cas où des antigènes sont placés dans le cytoplasme de la CRG, la présence d'antigènes spécifiques lors du procédé de régénération cellulaire peut permettre de mémoriser ou extérioriser les antigènes sur les membranes cellulaires et Io d'optimiser la réaction de production des anticorps par leur apparition immédiate au fur et à mesure de la réapparition des fonctions lymphocytaires rajeunies. La présente invention peut avantageusement aussi être appliquée aux ulcères. Les ulcères chroniques, notamment au niveau des jambes, mettent 15 souvent très longtemps avant de cicatriser, et cette cicatrisation laisse bien souvent une séquelle cutanée et sous-cutanée importante. D'autres ulcères ne cicatrisent même jamais. Dans ce cas, il convient de traiter par le procédé de régénération selon l'invention au moins une unité fonctionnelle épidermodermique du patient prélevée de préférence au niveau de la peau saine proche de 20 l'ulcère et, après multiplication, de l'implanter au niveau de l'ulcère. L'implantation peut se faire directement au niveau de l'ulcère lorsqu'une irrigation sanguine locale suffisante existe sans infection grave, ou dans la négative, être réalisée autour de l'ulcère en région cutanée saine. Afin de réaliser par exemple une telle unité fonctionnelle épidermo-dermique en 25 reprogrammation simultanée, la (ou les) CRG destiné à accueillir cette unité peut être assez volumineux et donc peut être par exemple agrandie artificiellement via la méthode précédemment décrite. Au niveau épidermique, la cellule peut par exemple être choisie parmi une cellule de kératinocyte, de Langerhans, de Merkel et/ou de mélanocyte, prise seule ou en combinaison 30 tandis qu'au niveau dermique, des fibroblastes cutanés peuvent être prélevés. Les cellules de l'épiderme et du derme peuvent être placées dans des ovocytes 2893630 is distincts. Les cellules épidermo-dermiques recueillies après régénération devront dans la mesure du possible être positionnées et fixées dans le bain de culture dans une conformation réciproque proche de celle naturellement observée, de façon à favoriser une croissance cellulaire fonctionnelle et à simplifier l'implantation de 5 la couche tissulaire régénérée sur la peau réceptrice. Lors de la culture des cellules régénérées, il peut être possible de réarranger la position respective des différentes catégories de cellules, voire même de cultiver plusieurs variantes d'assemblage destinées à des greffes à des emplacements distincts ou ayant une morphologie ou fonction différente. io Il est aussi connu qu'avec l'âge, les défauts de recopiage de l'ADN deviennent plus importants et que les mécanismes naturels de réparation de ces défauts deviennent moins efficaces. Afin de parer à cette insuffisance, un dispositif de l'invention peut prévoir de prélever localement de l'épiderme et/ou du derme lésé, de le traiter par la régénération selon l'invention, et ensuite de 15 fabriquer à partir de ce tissu régénéré génétiquement un extrait de ces cellules, qui pourra être fixé par exemple dans une crème, solution ou similaire pour une application externe cutanée. Cet extrait pourra aussi être utilisé pour créer une solution injectable en sous-cutané, intradermique ou intra épidermique. Il devient ainsi possible de rétablir rapidement et temporairement les fonctions de 20 réparation de l'ADN épidermique et/ou dermique. Par ailleurs, dans une application épidermique, l'invention permet de lutter génétiquement contre la sénescence de la peau, en modifiant les collagènes, notamment en les rajeunissant, pour redonner de l'élasticité à la peau. La régénération de zones tissulaires nécrosées, fibrosées ou inactives 25 constitue également une application de la présente invention. De telles zones tissulaires lésées apparaissent par exemple, au niveau d'un myocarde suite à un infarctus ou par exemple au niveau d'un organe ayant développé une tumeur visée par un traitement anti-cancéreux destructeur. L'invention s'applique aussi aux valves cardiaques. Celles-ci peuvent être biologiques, avec une durée de vie 30 limitée (environ 10 ans). Elles peuvent aussi être artificielles, avec une durée de vie plus importante (environ 30 ans), mais dans ce cas le sujet est soumis à une thérapie d'anticoagulant à vie, très contraignante. L'invention permet de créer une valve cardiaque à substrat biologique, artificiel, mixte, ou réparé par plastie, et de revêtir la surface de ce substrat qui est en contact avec le sang d'au moins une couche cellulaire autologue régénérée. Ce revêtement peut être réalisé à partir d'un traitement de cellules autologues endothéliales cardiovasculaires prélevées antérieurement par cathétérisme cardiaque ou vasculaire, traitées selon la présente invention, puis implantées sur la valve. Dans le cas d'une plastie, cette implantation peut se faire en peropératoire, c'est-à-dire pendant l'opération, en recouvrant au moins une partie de la valve et de l'anneau valvulaire. De cette manière, la thérapie d'anticoagulant pourra devenir inutile. La présente invention peut également aider à la détermination du mécanisme responsable d'un trouble de l'état de santé d'un mammifère. En effet, la cause première d'une atteinte de l'équilibre vital est parfois difficile à trouver. Il est alors possible d'effectuer une régénération cellulaire d'au moins une cellule des tissus suspects et si les tissus reprogrammés résultants diffèrent du tissu normal dans sa composition intracellulaire ou dans ses sécrétions de protéines et de peptides d'une manière critique ou spécifique la responsabilité causale intrinsèque de ce tissu est démontrable. A titre d'exemple on peut citer chez certains diabétiques dont la pathologie a un âge avancé qu'une régénération cellulaire d'une cellule pancréatique de Langerhans, prélevée par exemple par endoscope, va montrer une sécrétion provoquée d'insuline ou de glucagon normale contrairement aux cellules équivalentes non soumises à la régénération cellulaire. L'origine des états pathologiques apparaissant après un certain âge est susceptible d'être révélée par la comparaison fonctionnelle du tissu suspect existant ou présent par rapport à son ancêtre tissulaire maintenant génétiquement rajeuni à un âge biologique déterminé. La présente invention est également utile pour des maladies se caractérisant par un déficit cellulaire. En particulier, la présente invention peut permettre une régénération et multiplication de cellules R et a d'îlots de Langerhans qui peuvent être réimplantées dans le pancréas ou ailleurs de manière à rétablir la sécrétion d'insuline ou de glucagon au niveau d'un organisme d'un sujet. Dans certains cas de destruction du tissu hépatique (tel que cancers, intoxications ou cirrhose), l'implantation d'hépatocytes régénérés peut assurer une guérison de troubles hépatiques. Encore une autre application de la présente invention est, par exemple, le maintien d'un implant dans un os à l'aide d'une enveloppe ou charpente simple ou de soutien de cellules régénérées. Cette application comprend de régénérer des cellules osseuses, en particulier des ostéoblastes, de préférence prélevées à un stade précoce de leur mitose spontanée ou provoquée dans une CRG puis de placer ces ostéoblastes régénérés avant la fin de leur mitose dans une cellule réceptrice de préférence d'ostéoblaste, de cultiver les ostéoblastes dans un milieu de culture adéquat afin d'en obtenir un nombre et un comportement mécanique appropriés puis de répartir les ostéoblastes sous forme de manchon, de socle, de charpente, ou d'enveloppe entre un implant osseux artificiel et l'os. La couche d'ostéoblastes génétiquement rajeunie assure alors une bonne solidarisation de l'implant osseux et de l'os par la poussée ostéoblastique, et renforce ainsi le maintien de l'implant dans l'os et renforce la structure osseuse elle-même. De plus, l'utilisation de telles cellules régénérées assure le maintien à long terme de l'implant dans l'os et peut présenter une efficacité durable, accrue et curative par rapport aux crèmes protéiques à base de différents BMP (Bone Morphogenic Proteins) habituellement mises en oeuvre. Une autre utilisation possible de la présente invention est d'assurer une bonne histocompatibilité entre un greffon d'un donneur et le système immunitaire d'un receveur. Pour ce faire, une cellule saine de l'organe à greffer du receveur peut être prélevée et régénérée selon le processus décrit puis être transférée dans une cellule réceptrice adéquate de manière à entraîner la prolifération de ces cellules. Ces cellules peuvent alors ensuite être placées autour du greffon du donneur de manière à ce que le système immunitaire du receveur reconnaisse les molécules critiques portées à la surface du greffon comme molécules du soi et n'engendre ainsi pas de forte réaction immunitaire en présence du greffon. La création d'histocompatibilité peut notamment être réalisée des manières suivantes : 1) Echange de chromosomes ou de segments de chromosomes par micromanipulation génétique durant une phase choisie de la mitose, ce qui est à ce jour difficile à réaliser car leur micromanipulation n'est pas encore suffisamment précise ; la nanomécanique permet actuellement de réaliser des instruments à l'échelle chromosomique pour réaliser par exemple des ponctions, des greffes, des aspirations, des transferts, des coupes et des rotations ; un progrès à ce niveau est attendu et envisageable dans un futur proche. 2) Destruction sélective d'un segment de chromosome porteur des gènes responsables de l'incompatibilité tissulaire, par exemple durant une phase ou interphase de mitose, par exemple à l'aide d'un micro rayon laser de diamètre égal ou inférieur à 1 micron, entouré d'un cylindre de rayons plus larges de lumière visible permettant de guider le rayon laser par simple contrôle optique microscopique, qui peut être avantageusement robotisé. La présente invention présente également un intérêt tout particulier dans le domaine de la stomatologie dentaire. L'absence dentaire doit souvent être compensée par des implants métalliques céramiques, plastiques etc. Ces implants exigent une base de soutien osseux maxillaire suffisante afin d'assurer la fixation solide de l'implant. En cas d'insuffisance du volume ou de la qualité de la région sollicitée du maxillaire il est avantageux de prélever, par exemple par voie buccale, quelques cellules de ce lieu de l'os, de les soumettre à une régénération cellulaire et à une multiplication adéquate afin de disposer d'une petite greffe osseuse locale qui non seulement va fournir un socle osseux solide mais qui pourra par exemple, par la voie des protéines de signalisations, des cytokines locales et des molécules de régulation de l'activité cellulaire et celles des expressions génétiques, renforcer progressivement l'ensemble de l'arcade maxillaire. Avantageusement, on combine à cette régénération osseuse de l'os maxillaire, qui peut se faire par injections locales de cellules régénérées dans, en contact, ou près de l'os, un revêtement de l'implant avec au moins une couche de cellules osseuses et/ou desmodontales régénérées, qui vont améliorer la fixation, la tenue viscoélastique et la solidité correspondante de l'implant dans l'os, ainsi que la solidité de l'os lui-même.

Un autre exemple d'application du procédé de régénération cellulaire selon l'invention concerne les fractures et la chirurgie osseuse. Certaines fractures et malformations osseuses exigent une intervention chirurgicale nécessitant parfois de disposer d'une masse osseuse supplémentaire greffable et solide. Ceci peut être obtenu par rajeunissement génétique des cellules locales avec multiplication chaque fois que la chirurgie définitive peut être retardée d'au moins deux semaines. Cela est notamment le cas des interventions pour des pseudarthroses, déformations osseuses vertébrales des enfants ou dégénératives, arthrites ou arthroses déformantes. La multiplication cellulaire in vitro des cellules d'ostéoblastes est à réaliser de préférence en tenant compte, dès leur culture, des contraintes mécaniques qu'elles doivent supporter, par exemple après leur implantation dans le fémur, le maxillaire, les vertèbres, etc. En pratique, il s'agit d'organiser cette culture cellulaire si possible physiologiquement confluente et dans un bain nourricier adapté, mais à l'intérieur d'un cadre support dont au moins un côté est mobile dans un plan, ou dans deux plans simultanément, ce qui rend une rotation motrice possible. Les mouvements et forces mécaniques périodiquement imposés au tissu en croissance dans sa solution nourricière adaptée seront d'une amplitude, soudaineté et force progressivement croissante, mais toujours dans une orientation principale similaire afin de provoquer des structures minérales et trabiculaires dans la bonne direction. Les lignes de forces et de résistances mécaniques de ces structures, dans une ou plusieurs directions, correspondent aux forces, amortissements et viscoélasticités que le tissu osseux régénéré devra supporter après son implantation. L'inventeur a développé un fixateur vertébral ajustable original (US-6,835,207) et un disque vertébral ajustable original (US-6,692,495) qui, tous les deux peuvent avantageusement être combinés avec du tissu vertébral résultant d'une telle régénération cellulaire, et par exemple servir de socle pour les vis pédiculaires de fixation ou servir au remplissage de vertèbres tassées ou fracturées, ou servir de charpente de soutien.

Une autre application de l'invention concerne les greffes non autologues. En effet, un problème majeur concerne le rejet des greffes par le receveur. Or, on sait que les cellules foetales ou proches embryonnaires sont moins rejetées. Des cellules suffisamment rajeunies, par exemple par plusieurs traitements successifs selon l'invention, permettraient d'atténuer le problème des rejets des greffes non autologues.

Il est à noter que la modification de l'âge biologique d'une cellule (rajeunissement ou vieillissement) peut être mesurée par différents procédés. Ainsi, les temps ou vitesses que met une cellule pour récupérer son potentiel de membrane et son potentiel d'action après avoir été soumise à une contrainte (telle qu'un manque d'oxygène ou un excès de potassium) peuvent être comparés io avant et après traitement. Si le temps de récupération est plus court, alors la cellule est fonctionnellement rajeunie. D'autres procédés consistent à comparer, avant et après traitement, les vitesses de répétition des mitoses ou des mitoses elles-mêmes, les vitesses de cicatrisation, ou les modifications des dimensions (volume) des télomères.

15 Bien que la présente invention ait été décrite en référence à divers aspects de celle-ci, et aux moyens de divers exemples d'application, il est entendu qu'elle n'y est pas limitée, le cadre de l'invention étant donné par les revendications annexées.

Claims

Revendications

1.- Système de traitement génétique et épigénétique de cellules à traiter, caractérisé en ce qu'il comprend : au moins une cellule à traiter, un milieu de reprogrammation génétique (MRG), comprenant au moins du cytoplasme naturel d'au moins une cellule de reprogrammation génétique (CRG) et/ou du cytoplasme synthétique, et - des moyens pour mettre en contact au moins une partie d'au moins un noyau d'au moins une cellule à traiter avec ledit MRG pour modifier l'âge biologique et/ou réparer ladite au moins une cellule à traiter.

2.- Procédé de traitement génétique et épigénétique de cellules à traiter, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : - fournir au moins une cellule à traiter, fournir un milieu de reprogrammation génétique (MRG), comprenant au moins du cytoplasme naturel d'au moins une cellule de reprogrammation génétique (CRG) et/ou du cytoplasme synthétique, et -mettre en contact au moins une partie d'au moins un noyau d'au moins une cellule à traiter avec ledit MRG pour modifier l'âge biologique et/ou réparer ladite au moins une cellule à traiter.

3.- Procédé selon la revendication 2, comprenant en outre les étapes de : - séparer dudit MRG au moins ladite partie d'au moins un noyau de la cellule à traiter, - introduire au moins ladite partie d'au moins un noyau de la cellule à traiter ainsi séparé dans une cellule réceptrice, de préférence vidée de son noyau, de préférence autologue, ladite cellule réceptrice pouvant alors se multiplier. 24 i0

4.- Procédé selon la revendication 3, dans lequel ladite étape de mettre en contact au moins une partie d'au moins un noyau d'au moins une cellule à traiter avec ledit MRG comprend de prélever et transférer au moins ladite partie dudit au moins un noyau à partir de ladite au moins une cellule à traiter dans ledit MRG.

5.- Procédé selon la revendication 3 ou 4, dans lequel ladite étape de séparer dudit MRG au moins le noyau de la cellule à traiter est réalisée avant la fin de la première mitose dudit noyau.

6.- Procédé selon la revendication 3 ou 4, dans lequel ladite étape de séparer dudit MRG au moins le noyau de la cellule à traiter est réalisée après une ou plusieurs mitoses dudit noyau. 15

7.- Procédé selon l'une quelconque des revendications 2 à 6, dans lequel ladite au moins une partie d'au moins un noyau d'au moins une cellule à traiter comprend au moins un chromosome.

8.- Procédé selon l'une quelconque des revendications 2 à 7, dans 20 lequel l'âge biologique de ladite au moins une cellule à traiter est modifié.

9.- Procédé selon la revendication 8, dans lequel ladite au moins une cellule à traiter est rajeunie. 25

10.- Procédé selon la revendication 9, dans lequel ladite au moins une cellule à traiter est rajeunie plusieurs fois de manière successive, de sorte que son âge biologique est ramené à un âge très jeune, notamment foetal ou proche embryonnaire. 30

11.- Procédé selon la revendication 9 ou 10, dans lequel après rajeunissement de l'âge biologique d'une cellule, le noyau rajeuni est enlevéet remplacé par un noyau du tissu d'origine non rajeuni, de sorte que ledit noyau non rajeuni est en contact d'un cytoplasme rajeuni, l'interaction entre eux provoquant un rajeunissement dudit noyau non rajeuni.

12.- Procédé selon la revendication 8, dans lequel ladite au moins une cellule à traiter est vieillie.

13.- Procédé selon la revendication 12, dans lequel on supprime au moins une partie d'un noyau d'une cellule jeune, notamment foetale ou embryonnaire, malade, tel qu'un chromosome, et on la remplace par au moins une partie équivalente d'un noyau sain plus âgé du même tissu, de préférence HLA compatible, l'interaction entre le cytoplasme jeune avec au moins la partie du noyau plus âgé favorisant une accélération temporaire du vieillissement au moins du cytoplasme de la cellule jeune.

14.- Procédé selon la revendication 13, dans lequel le vieillissement est réalisé par multiplication de cellules dans une culture cellulaire.

15.- Procédé selon la revendication 13 ou 14, dans lequel, lors du déploiement de chromosomes en métaphase, au moins une partie d'un chromosome malade est détruite, au moins une partie équivalente d'un chromosome équivalent d'une cellule saine plus âgée, de préférence HLA compatible, étant prélevée et implantée dans la cellule malade.

16.- Procédé selon la revendication 15, dans lequel la destruction d'au moins une partie d'un chromosome malade est réalisée avec un rayon laser ultramince, de préférence de diamètre égal ou inférieur à 1 micron.

17.- Procédé selon l'une quelconque des revendications 8 à 16, dans lequel la modification de l'âge biologique d'une cellule est mesurable par la comparaison avant et après traitement de la vitesse que met une cellule àrécupérer son potentiel de membrane et son potentiel d'action après avoir été soumise à une contrainte, telle qu'un manque d'oxygène ou un excès de potassium, et/ou par comparaison avant et après traitement de la vitesse de répétition des mitoses ou des mitoses elles-mêmes, et/ou par comparaison avant et après traitement de la vitesse de cicatrisation et/ou par comparaison avant et après traitement du volume des télomères.

18.- Procédé selon l'une quelconque des revendications 2 à 9, dans lequel ladite au moins une cellule à traiter est réparée, notamment dans sa constitution chromosomique.

19.- Procédé selon la revendication 18, dans lequel une partie d'un chromosome à traiter est supprimée, notamment au moyen d'un rayon laser ultramince, puis une partie saine équivalente d'un chromosome équivalent est prélevée, notamment par découpe au laser, et réintroduite dans le chromosome à traiter, notamment au moyen de plasmides ou de micromanipulations, pour réparer ledit chromosome à traiter.

20.- Procédé selon la revendication 19, dans lequel ladite partie supprimée du chromosome à traiter est la partie dont les gènes sont responsables du rejet des greffes non autologues.

21.- Procédé selon l'une quelconque des revendications 2 à 20, dans lequel ledit MRG comprend en outre des substances capables d'activer le métabolisme nucléaire, telles que des cellules ou extraits de cellules apparaissant au cours d'une cicatrisation et/ou des protéines ou peptides de signalisation ou de stimulation du métabolisme et/ou des facteurs de croissance et/ou des cellules ou extraits de cellules cancéreuses.

22.- Procédé selon l'une quelconque des revendications 2 à 21, dans lequel au moins une cellule à traiter est soumise à un traitement temporairepar cellules cancéreuses sélectionnées, par voie intracellulaire ou extracellulaire. * * *