FR2891842A1

FR2891842A1 - Systemes et procedes de regeneration cellulaire et utilisations de telles cellules regenerees.

Info

Publication number: FR2891842A1
Application number: FR0553058A
Authority: FR
Inventors: Fred Zacouto
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2005-05-04
Filing date: 2005-10-07
Publication date: 2007-04-13
Also published as: WO2007000523A3; EP1885846A2; IL186988A0; AU2006263797B2; CA2606292A1; WO2007000523A8; US20140087469A1; FR2893630A1; US20060252062A1; FR2885368A1; AU2006263797A1; IL186988A; WO2007000523A2

Abstract

Système de régénération génétique de cellules différenciées, caractérisé en ce qu'il comprend au moins une cellule différenciée, un milieu de reprogrammation génétique (MRG), comprenant au moins du cytoplasme d'au moins une cellule ovocytaire, embryonnaire ou foetale, et des moyens pour mettre en contact au moins le noyau d'une cellule différenciée avec ledit MRG pour régénérer ladite cellule.

Description

La présente invention concerne des systèmes et des procédés destinés à

génétiquement et épigénétiquement régénérer des cellules. De tels systèmes et de tels procédés sont particulièrement utiles dans le domaine de la thérapie cellulaire, notamment pour la réalisation d'autogreffes à partir de cellules différenciées ou souches embryonnaires ou foetales. Les thérapies cellulaires, et en particulier les autogreffes, sont à ce jour pratiquées dans l'optique de réparer un tissu endommagé souffrant d'une maladie, d'un déficit cellulaire ou d'une nécrose. Cette technique consiste généralement à prélever quelques cellules saines du tissu concerné, à mettre en culture de multiplication cellulaire ces cellules afin de constituer un stock ou tissu de cellules et de réimplanter ces cellules dans le tissu à traiter. Ces cellules reprogrammées peuvent permettre alors au tissu concerné de recouvrir ses capacités morphologiques et fonctionnelles d'origine. Par exemple, cette technique est employée pour la réparation du cartilage articulaire. Le cartilage articulaire présente un potentiel de réparation limité et les lésions d'un certain volume ne cicatrisent que rarement. Afin de réparer de telles lésions et prévenir l'apparition de l'arthrose chez les malades, des chondrocytes, baignant dans une matrice extracellulaire, sont prélevés, débarrassés de la matrice par exemple par digestion enzymatique puis mis en culture, généralement sur des sérums de veau foetal ou de préférence dans du sérum du patient, et dans des matrices tridimensionnelles (par exemple une matrice d'agarose ou de collagène). Une telle mise en culture permet alors aux cellules prélevées de se multiplier par division mitotique et aboutit alors à l'obtention de millions de chondrocytes. Ces chondrocytes peuvent ensuite être réimplantés dans le tissu cartilagineux afin de restaurer les cellules et le cartilage déficitaire. Toutefois, l'inconvénient de ces techniques de multiplication est que généralement les cellules prélevées sont des cellules ayant déjà subi de nombreuses divisions mitotiques. Or, la culture de cellules pour leur multiplication provoque une diminution légère des télomères à chaque mitose et cette multiplication se fait souvent sur des cellules déjà vieillies, proches de leur fin de vie et de leur fin de fonctions, et dont l'ADN est en outre susceptible d'être altéré. Notamment, il est connu que le vieillissement cellulaire se traduit par un rongement progressif des télomères (extrémité des chromosomes). Or, ces télomères conditionnent le nombre restant de divisions mitotiques. Ainsi, le fait de cultiver des cellules mères ayant déjà subi de nombreuses mitoses peut donner lieu à une importante colonie de cellules filles vieillies et à survie raccourcie pouvant présenter par ailleurs des altérations de fonctionnalité génique. Le but de la présente invention est de fournir des systèmes et des procédés de thérapies cellulaires surmontant les inconvénients susmentionnés.

En particulier, la présente invention a pour but de fournir des systèmes et des procédés de manipulations cellulaires permettant une production rapide et de masse de cellules saines et régénérées présentant des fonctionnalités géniques capables d'être rajeunies à un degré désiré. La présente invention a encore pour but de fournir des systèmes et des procédés de traitement cellulaire aboutissant à la fois a une reconstitution d'un tissu autologue manquant et à un rajeunissement génétique du tissu dans lequel les cellules ont été implantées. La présente invention a donc pour objet un système de régénération génétique de cellules différenciées, notamment pour leur rajeunissement génétique, comprenant : - au moins une cellule différenciée, - un milieu de reprogrammation génétique (MRG), comprenant au moins du cytoplasme d'au moins une cellule ovocytaire, embryonnaire ou foetale, et - des moyens pour mettre en contact au moins le noyau d'une cellule différenciée avec ledit MRG pour régénérer ladite cellule. Selon un premier aspect avantageux de l'invention, le système comprend en outre : - des moyens pour séparer dudit MRG au moins le noyau de la cellule différenciée avant la fin de sa première mitose, - des moyens pour introduire le noyau de la cellule différenciée ainsi séparé dans une cellule réceptrice différenciée, de préférence vidée de son noyau, de préférence autologue, ladite cellule réceptrice étant alors une cellule génétiquement rajeunie apte à se multiplier. Avantageusement, lesdits moyens pour mettre en contact au moins le noyau d'une cellule différenciée avec ledit MRG comprennent des moyens pour prélever et transférer au moins ledit noyau à partir de ladite cellule différenciée dans ledit MRG. Avantageusement, lesdits moyens pour prélever et transférer au moins ledit noyau dans ledit MRG sont adaptés à prélever et transférer ledit noyau de la cellule différenciée ensemble avec au moins une partie de son cytoplasme afin de io retrouver dans le MRG quelques composants cytoplasmiques initialement présentés dans la cellule différenciée, tels que le réticulum endoplasmique, l'appareil de golgy, les ribosomes et/ou les mitochondries. Avantageusement, le noyau de la cellule différenciée à transférer dans le MRG est prélevé à un stade précoce de sa première mitose, tel que la prophase, 15 la pro-métaphase ou la métaphase. Avantageusement, le noyau de la cellule différenciée transféré dans le MRG est séparé du MRG au stade de la métaphase, de l'anaphase ou au cours de la télophase. Selon un second aspect avantageux de l'invention, lesdits moyens pour 20 mettre en contact au moins le noyau d'une cellule différenciée avec ledit MRG comprennent des moyens pour transférer du MRG dans la cellule différenciée. Avantageusement, lesdits moyens pour transférer du MRG dans une cellule différenciée comprennent des moyens pour créer au moins une fente ou ouverture dans la membrane de ladite cellule différenciée, et des moyens, tels 25 qu'une pipette, pour transférer du MRG dans ladite cellule différenciée à travers ladite au moins une fente ou ouverture. Avantageusement, lesdits moyens pour transférer du MRG dans une cellule différenciée comprennent des moyens pour séparer au moins partiellement ledit MRG de ladite cellule différenciée.

Avantageusement, ledit système comprend des moyens pour refermer définitivement la cellule différenciée avec au moins une partie du MRG restant inclus en elle. Avantageusement, lesdits moyens pour transférer du MRG dans une cellule différenciée comprennent des moyens pour ouvrir la membrane d'une cellule ovocytaire, embryonnaire ou foetale, des moyens pour ouvrir la membrane d'une cellule différenciée, des moyens pour mettre lesdites ouvertures en contact, des moyens pour comprimer ladite cellule ovocytaire, embryonnaire ou foetale pour transférer au moins partiellement son cytoplasme dans la cellule io différenciée. Avantageusement, lesdits moyens pour transférer du MRG dans une cellule différenciée comprennent en outre des moyens pour renvoyer au moins partiellement ledit cytoplasme transféré dans sa cellule d'origine après un laps de temps prédéterminable, notamment par décompression de ladite cellule 15 ovocytaire, embryonnaire ou foetale. Avantageusement, ledit MRG comprend au moins de l'extrait de cytoplasme d'au moins une cellule ovocytaire, embryonnaire ou foetale, ledit extrait étant obtenu par traitement du cytoplasme. Avantageusement, ledit MRG comprend au moins une cellule de 20 reprogrammation génétique (CRG), pouvant être une cellule embryonnaire, ovocytaire ou foetale, dont le noyau a de préférence été extrait. Avantageusement, ledit MRG comprend en outre des substances capables d'activer le métabolisme nucléaire, telles que des cellules ou extraits de cellules apparaissant au cours d'une cicatrisation et/ou des protéines de signalisation 25 et/ou des facteurs de croissance et de stimulation. Avantageusement, ledit système comprend des moyens d'injection et/ou d'implantation, tels que par endoscopie, des cellules régénérées, aptes à distribuer lesdites cellules au sein, à proximité ou à distance d'un tissu à régénérer. 30 Avantageusement, le système est adapté à la régénération de cellules différenciées telles que des cellules cardiaques, rénales, osseuses, dentaires, desmodontales, cartilagineuses, pancréatiques, hépatiques, nerveuses, prostatiques, hématopoïétiques, immunitaires, pulmonaires, artérielles, intestinales, rétiniennes, dermiques, épidermiques et/ou glandulaires. Avantageusement, une pluralité de cellules représentant une unité fonctionnelle organique sont régénérées ensemble et/ou ré-assemblées après rajeunissement génétique isolé pour former une unité fonctionnelle organique génétiquement rajeunie. D'autres avantages, caractéristiques et applications de l'invention apparaîtront plus clairement au cours de la description détaillée suivante, de plusieurs modes de réalisation et variantes de l'invention. La présente invention concerne notamment des systèmes et des procédés s'appliquant au domaine de la thérapie et/ou réparation et/ou amélioration cellulaire destinés à ouvrir de nombreuses perspectives pour la lutte contre un grand nombre de maladies mais également contre la sénescence des tissus dûe dans une très large mesure à la perte de leur capacité fonctionnelle et morphologique de prolifération et de régénération. En particulier, la présente invention a pour objet un système et des procédés aptes à régénérer des cellules d'un tissu c'est-à-dire à entraîner un véritable rajeunissement de ces cellules. Les cellules sont ensuite cultivées dans un milieu adéquat de manière à créer un stock ou tissu de cellules génétiquement rajeunies capables d'être implantées dans le tissu considéré, ou à distance de celui-ci, où ces cellules pourront émettre des protéines de signalisation et de stimulation spécifiques pour le tissu considéré. Plus précisément, les systèmes et les procédés selon l'invention consistent à mettre en contact au moins un noyau d'une cellule différenciée avec un milieu de reprogrammation génétique (MRG). Ce MRG comprend au moins du cytoplasme d'au moins une cellule de reprogrammation génétique (CRG) (ovocyte, cellule souche telle qu'une cellule embryonnaire ou cellule foetale, ou un récipient cellulaire reconstitué à partir de ces cellules, etc.). Il est aussi envisageable de réaliser un MRG sous la forme d'une bouillie de CRG, avec ou sans noyaux. Il est aussi possible d'ajouter des extraits de cellules ou de cytoplasme et/ou des substances apparaissant au cours d'une cicatrisation et/ou d'autres substances connues pour leur capacité d'activation du métabolisme nucléaire, tels que des facteurs de croissance et de stimulation. Les extraits de cellules ou de cytoplasme peuvent être obtenus par des traitements physiques ou chimiques bien connus. Selon un premier aspect de l'invention, le noyau est laissé dans le MRG pendant un temps n'excédant pas la télophase du noyau, c'est-à-dire que le noyau est extrait du MRG avant sa division en deux cellules, autrement dit avant la fin de sa première mitose. L'inventeur a observé que cette introduction temporaire d'un noyau dans un MRG, notamment dans une CRG, aboutit à un allongement rapide et important des télomères, souvent synonyme de rajeunissement du matériel chromosomique. Le noyau régénéré est alors introduit dans une cellule réceptrice différenciée, souche ou embryonnaire, de préférence énuclée, de préférence autologue, de préférence de tissu identique, dans laquelle la division mitotique pourra se poursuivre et ainsi aboutir à la naissance de deux cellules filles dont le matériel nucléique est régénéré. Ensuite, ces cellules pourront être soumises à une culture de multiplication et atteindre des quantités telles qu'au moins des millions de cellules différenciées aptes à être implantées au niveau du tissu d'origine concerné.

Il est à noter que dans le cadre de ce premier aspect de l'invention, il peut être souhaitable d'ouvrir ou de retirer au moins partiellement la membrane de la CRG, pour éviter tout risque de division cellulaire de celle-ci. En effet, la membrane est nécessaire au phénomène de division cellulaire, alors que c'est le cytoplasme qui est le lieu de la reprogrammation génétique. La présente invention n'utilisant pas de division cellulaire de la CRG, puisque le noyau est retiré de la CRG avant la fin de sa première mitose, il est possible de rendre cette CRG inapte à toute division cellulaire. Le cytoplasme de la CRG est capable de survivre le temps nécessaire à la reprogrammation génétique, éventuellement avec l'assistance de cellules environnantes (naturelles ou artificielles).

Selon un aspect avantageux de l'invention, l'étape de prélèvement et de transfert du noyau de la cellule différenciée comprend de prélever, outre le noyau, au moins une partie du cytoplasme contenu dans la cellule différenciée, afin de retrouver dans le MRG, notamment dans la CRG, quelques composants cytoplasmiques initialement présents dans la cellule différenciée, tels que le réticulum endoplasmique, l'appareil de golgy, les ribosomes et/ou les mitochondries. Selon un second aspect de l'invention, la mise en contact d'au moins le noyau d'une cellule différenciée avec ledit MRG peut consister à transférer du MRG dans une cellule différenciée, par exemple au moyen d'une pipette ou par transfert provoqué par une différence de pression. Ceci peut être réalisé en créant io au moins une fente ou ouverture dans la membrane de la cellule différenciée, et de transférer du MRG dans ladite cellule différenciée à travers ladite au moins une fente ou ouverture. Avantageusement, on prévoit de pouvoir séparer ou retirer ledit MRG transféré après un certain laps de temps prédéterminable, suffisant pour reprogrammer génétiquement le noyau de la cellule différenciée. 15 Par exemple, il est envisageable de disposer côte à côte une CRG et une cellule différenciée, de réaliser une ouverture dans la membrane de la CRG et une ouverture dans la membrane de la cellule différenciée, puis de comprimer la CRG pour transférer au moins partiellement le cytoplasme de la CRG dans la cellule différenciée. Cette compression peut être obtenue en plaçant une pipette 20 ou similaire au dessus de la membrane de la cellule à comprimer, et en exerçant une pression adaptée. On pourrait aussi exercer cette pression au moyen d'un fluide, de préférence visqueux, pouvant déborder de la pipette sans s'en détacher. Cette compression est maintenue le temps nécessaire à la reprogrammation génétique du noyau de la cellule différenciée, puis la compression sur la CRG est 25 supprimée, avec pour effet que le cytoplasme de la CRG transféré dans la cellule différenciée est au moins partiellement ré-aspiré dans la CRG. Il est à noter que le MRG peut être retiré avant ou après la première mitose du noyau de la cellule différenciée. En variante, on peut prévoir des moyens pour refermer la cellule différenciée avec au moins une partie du MRG restant inclus en elle. 30 Les exemples d'applications décrits ci-après font référence plus généralement au premier aspect de l'invention décrit ci-dessus (transfert temporaire d'un noyau de cellule différenciée dans un MRG, notamment dans une CRG), mais il est entendu qu'ils pourraient tous être mis également en oeuvre avec le second aspect de l'invention décrit précédemment (transfert de MRG dans une cellule différenciée). Par ailleurs, la plupart des exemples font référence à l'utilisation d'ovocyte, mais toute CRG, et plus généralement tout MRG peut aussi être utilisé pour mettre en oeuvre ces exemples. Tout d'abord, il est à noter que l'ovocyte utilisé peut possiblement être un ovocyte d'animal. Par exemple, un ovocyte de lapin ou de mouton pourrait être utilisé. En outre, étant donné la rareté des ovocytes humains ou mammifères, on peut envisager de rendre un ovocyte multipare en lui introduisant un nouveau noyau après avoir retiré délicatement le premier noyau en mitose partielle. Cette multiparité par inoculation intra ovocytaire consécutive peut avoir sur le matériel nucléaire un effet de dédifférenciation différent de celui obtenu lors de la première introduction du noyau ou des chromosomes ou gènes de ce même ovocyte. On peut également introduire dans l'ovocyte, un noyau, qui soit par exemple en mitose débutante, spontanée ou provoquée, ou par ailleurs des chromosomes ou gènes ou parties de noyaux à traiter dans une cellule de type embryonnaire. On peut aussi utiliser des cellules de type embryonnaires qui sont artificiellement activées par des protéines ou des peptides de signalisation génétique ou d'activation ou régulation cellulaire, constituant un environnement capable d'induire une certaine reprogrammation génétique de voisinage. Ainsi, le retrait du noyau de la cellule différenciée peut se faire de façon avantageuse en anaphase ou en cours de télophase selon le degré de rajeunissement génétique souhaité. Afin d'observer la période mitotique en cours, des moyens optiques, tels qu'un microscope, peuvent êtres utilisés. Si une CRG est ensuite utilisée, elle proviendra alors de préférence du même tissu, par exemple, cartilagineuse, myocardique, etc., de préférence partiellement dénoyautée et cultivable in vitro, in vivo ou in situ. Cette ou ces cellule(s) seront cultivées pour multiplication de préférence un temps suffisant in vivo dans des tissus embryonnaires pour obtenir une dédifférenciation partielle. Les noyaux ainsi traités peuvent être laissés, soit dans les cellules de type embryonnaire pour constituer un tissu greffable dans l'organisme de provenance du noyau, soit extrait de leurs cellules réceptrices pour devenir inducteur de régénération cellulaire locale intra ou transmembranaire au niveau d'un tissu différencié, de préférence autologue et identique. L'implantation du noyau ou partie nucléaire peut également se faire à l'intérieur d'une cellule souche, de préférence de type embryonnaire ou foetal. De telles cellules partiellement et sélectivement dédifférenciées peuvent ensuite être introduites dans des cellules différenciées, tels que des chondrocytes, des cellules à fonction immunitaires, endocriniennes, des cellules cardiaques, des cellules issues de tissus ayant subit un traitement anti-cancéreux, des cellules R et io a des îlots de Langerhans, des cellules de même origine qu'un greffon à transplanter, des hépatocytes, etc., afin de régénérer le tissu correspondant. Une telle invention peut ainsi être appliquée sans limitation à la régénération de toute cellule assez différenciée, telle que des cellules cardiaques, rénales, osseuses, cartilagineuses, cutanées, dermiques, épidermiques, pancréatiques, hépatiques, 15 nerveuses, prostatiques, glandulaires, hématopoïétiques, nerveuses, vasculaires, rétiniennes, dentaires, desmodontales etc. A partir d'un certain degré de dédifférenciation, ces cellules perdent leur pouvoir immunogène et peuvent parfois être utilisées pour régénérer des tissus non autologues. Cette fonction comporte aussi la capacité de ces cellules génétiquement activées d'agir à 20 distance par sécrétion, libération ou induction de peptides et/ou protéines de signalisation génétique, notamment, par molécules biochimiques spécifiques. Cette activation génétique trans-membranaire et/ou trans-humorale donne la capacité à ces cellules de stimuler activement et continuellement d'autres cellules plus âgées. 25 Le système selon le premier aspect de l'invention et les procédés de régénération cellulaires mis en oeuvre comportent de préférence trois stades successifs, à savoir une préparation du matériel nucléaire, une reprogrammation génétique et une multiplication en culture. La préparation du matériel nucléaire consiste à prélever le noyau de la 30 cellule assez différenciée de préférence avec plus ou moins de cytoplasme afin de conserver si possible les composants cytoplasmiques, tels que les mitochondries, i0 les ribosomes, le réticulum endoplasmique, l'appareil de Golgi, les lysosomes, les péroxysomes, etc., de la cellule différenciée initiale au niveau de l'ovocyte accueillant ce prélèvement. Cette étape permet d'assurer une reprogramation synchrone des diverses structures vitales autour du noyau et une conservation probable du champ morphogénétique cellulaire. Par ailleurs, il est possible que certains constituants du matériel nucléaire tels que les chromosomes, un ensemble de gènes, un ou plusieurs gènes isolés (naturels, recombinés, semi synthétiques ou synthétiques) aient été préalablement soumis à un tel procédé de régénération. De cette façon, certains éléments de la préparation auront un âge biologique différent. En outre, il peut être prévu d'accoler un segment d'ADN végétal, codant par exemple pour la vitamine C, E, l'acide folique, etc. à un gène ou un chromosome par exemple lors de la métaphase, ou à la membrane nucléaire à l'anaphase, à la télophase ou à une interphase correspondante. Le récipient membrano-cytoplasmique (ovocyte) pour traiter les éléments cytoplasmiques de reprogrammation peut se révéler parfois trop petit pour les éléments cellulaires que l'on désire traiter. A titre d'exemple, on peut penser au traitement simultané d'un noyau avec une partie de son cytoplasme, ou de plusieurs noyaux tels que dans un néphron, une cellule musculaire, une cellule autorythmique myocardique, un follicule pileux, une unité épidermique de mélanisation, une unité épiderme-derme, une unité glandulaire, une unité hépatobiliaire, une unité fonctionnelle rétinienne (tel qu'un épithélium pigmenté : cônes, bâtonnets, cellules bipolaires, cellules horizontales et cellules de Müller), une unité vasculaire (cellule endothéliale et myoartérielle), une unité hématopoïétique, une unité neuro-glio-dendritique, une unité ovarienne de follicules de Graaf, etc. Afin de régénérer une unité à plusieurs noyaux par un système ou un procédé de régénération selon l'invention, il peut être nécessaire de disposer d'un récipient membrano-cytoplasmique agrandi à fonction ovocytaire préservé (RAF). Un tel RAF peut être réalisé par collage des membranes respectives de plusieurs ovocytes de préférence homo ou autologue de mammifères, par exemple par micromanipulations manuelles ou robotiques, en préservant chaque cytoplasme respectif au sein de leur membrane respective et en créant un volume du type sphérique, ovoïde ou cylindrique. Une telle manipulation exige de préserver l'environnement vital pour chaque ovocyte. Cet accolement membranaire peut par exemple être réalisé au moyen d'un rayon laser d'un diamètre inférieur à environ 0,01 mm, de préférence de l'ordre de 0,001 mm, d'un petit rayon lumineux chauffant, d'un collant biologique, etc. La multiplication in vitro est précédée par l'introduction du matériel nucléo-cytoplasmique dans une cellule énuclée et à vitalité au moins récupérable. Les techniques actuelles de multiplication permettent, par exemple, en deux semaines d'obtenir un demi milliard de cellules à partir d'une dizaine. Dans le cas présent, l'inventeur a observé que le procédé de régénération selon l'invention assure un accroissement rapide et important de la longueur des télomères en moins d'une journée permettant ainsi de contrebalancer leur irrémédiable raccourcissement résultant des si nombreuses réplications successives. Cette multiplication peut également se faire in vivo mais est généralement beaucoup plus lente et nécessite souvent un amorçage suffisant in vitro. Ceci diminue la quantité de cellules nécessaires ainsi que le rongement important des télomères et permet probablement une meilleure adaptation fonctionnelle ainsi qu'une plus grande influence génétique à distance. Il peut être souhaitable de régénérer ensemble une pluralité de cellules représentant une unité fonctionnelle organique, telle que par exemple un néphron, des cellules rétiniennes pigmentaires des différentes catégories ou des alvéoles pulmonaires, pour former une unité fonctionnelle organique génétiquement rajeunie. Par exemple, on peut envisager une micromanipulation cellulaire pour réaliser une enceinte agrandie à fonction de reprogrammation génétique et épigénétique capable d'inverser temporairement l'évolution de l'âge biologique des noyaux et/ou cytoplasmes multiples qui y sont introduits. A cette fin, les cellules à fonction ovocytaire sont, par exemple, coupées en deux parties, de préférence par un micro-rayon laser à lumière froide. Ces deux parties sont ouvertes, et leurs membranes peuvent être fixées sur une couche protéique, tel que de la globine, laquelle a de préférence été appliquée sur une surface flexible. Ce tapis de membranes ovocytaires ou embryonnaires présente les cytoplasmes vers le haut. Lorsqu'une surface suffisante d'un tel velours cytoplasmique (VC) est constitué, on peut y poser plusieurs noyaux de cellules différenciées, avec ou sans leur cytoplasme, et rouler ensuite le VC autour d'eux le plus près possible. Ce sandwich cellulaire interactif restera, de préférence, dans le liquide nutritif classique de culture cellulaire le temps choisi pour obtenir la phase de mitose désirée. On peut ainsi obtenir simultanément le rajeunissement de plusieurs noyaux appartenant à une unité fonctionnelle organique qui pourra être multipliée soit à l'état de cellules isolées, ce qui exige un réarrangement des cellules multipliées selon leur ordre fonctionnel, soit à l'état d'un ensemble de cellules déjà placées dans leur ordre fonctionnel. Le procédé de régénération selon l'invention est notamment approprié pour les maladies caractérisées par un déficit cellulaire (diabète, infarctus du myocarde, hépatite, ou encore maladies génétiques responsable d'une déficience immunologique) ainsi que pour les cancers survenant après un certain age, tel que celui de la prostate et des seins. Cette régénération cellulaire est applicable à de nombreux types cellulaires et peut donc créer des tissus de régénération contrôlée permettant de soigner de nombreuses lésions organiques et tissulaires. Ainsi, par exemple, en prélevant, sous contrôle échographique, par une aiguille trans-rectale ou transdermique, ou par une sonde endoscopique, des cellules prostatiques qui seront totalement ou partiellement clonées et en les réimplantant par exemple dans la prostate, ce rajeunissement cellulaire inducteur par des protéines de signalisations pourra, dans certains cas, s'opposer au développement d'un cancer local, freiner son extension ou même détruire toutes les métastases. Ainsi également, une rétine ophtalmique autologue, voire homologue, dont une unité cellulaire fonctionnelle, par exemple constituée de quelques cellules de l'épithélium pigmenté, de cônes, de bâtonnets, de cellules bi-polaires et/ou de cellules de Muller, qui a été prélevée et régénérée, pourra avoir un grand intérêt en cas de DMLA. L'insuffisance rénale grave pourra être combattue par l'implantation de cellules partiellement dédifférenciées obtenues, après transfert dans puis hors d'ovocytes, de noyaux de différentes cellules de néphron.

L'arthrose peut être soulagée par l'implantation de chondrocytes provenant d'une régénération cellulaire. Il en va de même pour des surfaces cutanées et les follicules pileux, et notamment pour régénérer et/ou colorer une chevelure normale, par exemple en transférant dans un ou plusieurs ovocyte(s) de préférence un ou des noyaux ou parties de noyaux de cellules de follicule pileux, de mélanocytes et de kératinocytes, pour une régénération de la chevelure et/ou de sa couleur. Encore une autreapplication de l'invention peut consister à renforcer ou recréer les fonctions thymiques par rajeunissement génétique de cellules thymiques homologues ou si possible autologues suffisamment dédifférenciées pour réanimer activement les fonctions protectrices du corps. Diverses applications du système et du procédé selon l'invention vont maintenant être décrites de façon plus détaillée. L'ensemble des étapes nécessaires à la régénération cellulaire ne sera par la suite pas répété, le principe d'ensemble restant le même et pouvant être adapté à chaque cas par l'homme du métier. Il est rappelé aussi que les deux aspects de l'invention, à savoir d'une part le transfert provisoire d'un noyau de cellule différenciée dans un MRG (notamment une CRG), et d'autre part le transfert de MRG dans une cellule différenciée, sont utilisables. Une application biomédicale particulièrement préférée pour ce procédé de régénération de cellules concerne de manière générale les maladies dégénératives des articulations (arthrose). Les chondrocytes des cartilages, qui souvent dégénèrent avec l'âge, peuvent être prélevés par biopsie, endoscopie, intervention chirurgicale locale ou arthroscopie et séparés de leur cartilage environnant. Leur noyau peut être alors soumis au procédé de régénération selon l'invention. Après multiplication, la réimplantation des cellules régénérées dans l'articulation d'origine doit se faire de préférence à proximité, mais en dehors des surfaces de la cavité articulaire mobile qui supporte les charges mécaniques afin d'éviter toute anfractuosité au niveau de ses surfaces mobiles. Parfois, un défaut d'alimentation sanguine indirecte des chondrocytes, qui se fait majoritairement par imbibition, doit être corrigé. On peut alors envisager la greffe autour ou pénétrant dans le cartilage périphérique par rapport à la cavité articulaire, d'un tissu fonctionnel vasculaire autologue comprenant petite artère ù artériole ù capillaire ù veinule - et petite veine, ces unités fonctionnelles vasculaires, peuvent avantageusement provenir d'une culture cellulaire autologue post-procédé de régénération selon l'invention. Les chondrocytes post- procédé de régénération vont progressivement reconstituer un cartilage plus épais, lisse et bien lubrifié. L'ostéoporose est une maladie dégénérative du tissu osseux survenant avec l'âge. Pour lutter contre cette maladie, il convient de procéder à la régénération d'ostéoblastes autologues et de les réimplanter, de préférence, à plusieurs niveaux de l'os. Les ostéoblastes sont de préférence multipliés en culture avec des sollicitations géométriques artificielles, en particulier en imposant des contraintes mécaniques, par exemple à l'aide d'un cadre support. Ce cadre support peut comporter au moins un côté mobile pour des mouvements dans un plan. Avantageusement, on utilise deux côtés mobiles dans le cadre de support de culture et/ou la possibilité de réaliser des rotations motrices tridimensionnelles. Au niveau du col du fémur, par exemple, on peut effectuer aisément, sous anesthésie locale, des biopsies espacées en introduisant un trocart à travers le massif trochantérien du fémur qui se trouve proche de la peau. Le traitement des ostéoblastes ainsi recueillis suite au procédé de régénération de cellules et la réimplantation de ces cellules rajeunies, par exemple, par la même voie transtrochantérienne, pourra permettre la création locale d'un remodelage osseux qui réalise ainsi alors un renforcement fondamental des travées osseuses de sustentation dans la direction des contraintes mécaniques du col et de la tête fémorale vers le haut ainsi que vers le bas en direction du corps du fémur. Au niveau des vertèbres, principales victimes de l'ostéoporose par fracture et aplatissement, un procédé équivalent de régénération des cellules à celui du fémur peut être mis en oeuvre, notamment en association avec des fixateurs et articulations artificielles développés par l'inventeur dans les brevets US-6,835,207 et US-6,692,495. La présente invention peut également être appliquée à des sujets ayant subi des inflammations graves, notamment par affaiblissements réactionnels des différents lymphocytes producteurs d'anticorps et de cytokines pro et anti- inflammatoires. Le procédé de régénération selon l'invention peut alors permettre de raviver ces lymphocytes en nombre et en fonction. Pour se faire, ces lymphocytes peuvent être soumis au procédé selon l'invention en plaçant un noyau lymphocytaire dans un ovocyte en présence ou non de traces d'antigènes crées par l'infection dans le cytoplasme ovocytaire. En présence de traces d'antigènes crées par l'infection placés dans le cytoplasme ovocytaire, les lymphocytes seront rajeunis et multipliés et ensuite réimplantés dans l'organisme où ils auront déjà mémorisé les antigènes dangereux et produire ou faire produire ensuite les anticorps correspondant en quantité importante. Dans le cas où des antigènes sont placés dans le cytoplasme de la CRG, la présence d'antigènes spécifiques lors du procédé de régénération cellulaire peut permettre de mémoriser ou extérioriser les antigènes sur les membranes cellulaires et d'optimiser la réaction de production des anticorps par leur apparition immédiate au fur et à mesure de la réapparition des fonctions lymphocytaires rajeunies. La présente invention peut également être appliquée aux ulcères. Les ulcères chroniques, notamment au niveau des jambes, mettent souvent très longtemps avant de cicatriser, et cette cicatrisation laisse bien souvent une séquelle cutanée et sous-cutanée importante. D'autres ulcères ne cicatrisent même jamais. Dans ce cas, il convient de traiter par le procédé de régénération selon l'invention au moins une unité fonctionnelle épidermo-dermique du patient prélevée au niveau de la peau saine et, après multiplication, de les implanter au niveau de l'ulcère. L'implantation peut se faire directement au niveau de l'ulcère lorsqu'une irrigation sanguine locale suffisante existe sans infection grave soit, dans la négative, être réalisée autour de l'ulcère en région cutanée saine. Afin de réaliser par exemple une telle unité fonctionnelle épidermo-dermique en reprogrammation simultanée, la (ou les) CRG destiné à accueillir cette unité peut être assez volumineux et donc peut être par exemple agrandie artificiellement via la méthode précédemment décrite. Au niveau épidermique, la cellule peut par exemple être choisie parmi une cellule de kératinocyte, de Langerhans, de Merkel et/ou de mélanocyte, prise seule ou en combinaison tandis qu'au niveau dermique, des fibroblastes cutanés peuvent être prélevés. Les cellules de l'épiderme et du derme peuvent être placées dans des ovocytes distincts. Les cellules épidermo-dermiques recueillies après régénération devront dans la mesure du possible être positionnées et fixées dans le bain de culture dans une conformation réciproque proche de celle naturellement observée, de façon à simplifier l'implantation de la couche tissulaire régénérée sur la peau réceptrice. Lors de la culture des cellules régénérées, il peut être possible de réarranger la position respective des différentes catégories de cellules, voire même de cultiver plusieurs variantes d'assemblage destinées à des greffes à des emplacements distincts. Il est aussi connu qu'avec Page, les défauts de recopiage de l'ADN deviennent plus importants et que les mécanismes naturels de réparation de ces défauts deviennent moins efficaces. Afin de parer à cette insuffisance, un dispositif de l'invention peut prévoir de prélever localement de l'épiderme et/ou du derme lésé, de le traiter par la régénération selon l'invention, et ensuite de fabriquer à partir de ce tissu régénéré génétiquement un extrait de ces cellules, qui pourra être fixé par exemple dans une crème (ou similaire) pour une application externe cutanée. Cet extrait pourra aussi être utilisé pour créer une solution injectable en sous-cutané, intradermique ou intra épidermique. Il devient ainsi possible de rétablir les fonctions de réparation de l'ADN épidermique et/ou dermique. Par ailleurs, dans une application épidermique, l'invention permet de lutter génétiquement contre la sénescence de la peau, en modifiant les collagènes, notamment en les rajeunissant, pour redonner de l'élasticité à la peau.

La régénération de zones tissulaires nécrosées, fibrosées ou inactives constitue également une application de la présente invention. De telles zones tissulaires lésées apparaissent par exemple, au niveau d'un myocarde suite à un infarctus ou par exemple au niveau d'un organe ayant développé une tumeur visée par un traitement anti-cancéreux destructeur. L'invention s'applique aussi aux valves cardiaques. Celles-ci peuvent être biologiques, avec une durée de vie limitée (environ 10 ans). Elles peuvent aussi être artificielles, avec une durée de vie plus importante (environ 30 ans), mais dans ce cas le sujet est soumis à une thérapie d'anticoagulant à vie, très contraignante. L'invention permet de créer une valve cardiaque à substrat biologique, artificiel, mixte, ou réparé par plastie, et de revêtir la surface de ce substrat qui est en contact avec le sang d'au moins une couche cellulaire autologue régénérée. Ce revêtement peut être réalisé à partir d'un traitement de cellules autologues endothéliales cardiovasculaires prélevées antérieurement par cathétérisme cardiaque, traitées selon la présente invention, puis implantées sur la valve. Dans le cas d'une plastie, cette implantation peut se faire en peropératoire, c'est-à-dire pendant l'opération, en io recouvrant au moins une partie de la valve et de l'anneau valvulaire. De cette manière, la thérapie d'anticoagulant devient inutile. La présente invention peut également aider à la détermination du mécanisme responsable d'un trouble de l'état de santé d'un mammifère. En effet, la cause première d'une atteinte de l'équilibre vital est parfois difficile à trouver. 15 Il est alors possible d'effectuer une régénération cellulaire d'au moins une cellule des tissus suspects et si les tissus reprogrammés résultants diffèrent du tissu normal dans sa composition intracellulaire ou dans ses sécrétions de protéines et de peptides d'une manière critique ou spécifique la responsabilité causale intrinsèque de ce tissu est démontrable. A titre d'exemple on peut citer chez 20 certains diabétiques dont la pathologie a un âge avancé qu'une régénération cellulaire d'une cellule pancréatique de Langerhans, prélevée par exemple par endoscope, va montrer une sécrétion provoquée d'insuline ou de glucagon normale contrairement aux cellules équivalentes non soumises à la régénération cellulaire. L'origine des états pathologiques apparaissant après un certain âge est 25 susceptible d'être révélée par la comparaison fonctionnelle du tissu suspect existant ou présent par rapport à son ancêtre tissulaire artificiellement reconstitué par une régénération cellulaire. La présente invention est également utile pour des maladies se caractérisant par un déficit cellulaire. En particulier, la présente invention peut 30 permettre une régénération et multiplication de cellules R et a d'îlots de Langerhans qui peuvent être réimplantées dans le pancréas ou ailleurs de is manière à rétablir la sécrétion d'insuline ou de glucagon au niveau d'un organisme d'un sujet. Dans certains cas de destruction du tissu hépatique (tel que cancer ou cirrhose), l'implantation d'hépatocytes régénérés au niveau du foie peut assurer une guérison de troubles hépatiques.

Encore une autre application de la présente invention est, par exemple, le maintien d'un implant dans un os à l'aide d'une enveloppe de cellules régénérées. Cette application comprend de régénérer des cellules osseuses, en particulier des ostéoblastes, de préférence prélevées à un stade précoce de leur mitose spontanée ou provoquée dans une CRG puis de placer ces ostéoblastes io régénérés avant la fin de leur mitose dans une cellule réceptrice de préférence d'ostéoblaste, de cultiver les ostéoblastes dans un milieu de culture adéquat afin d'en obtenir un nombre et un comportement mécanique appropriés puis de répartir les ostéoblastes sous forme de manchon ou d'enveloppe entre un implant osseux artificiel et l'os. La couche d'ostéoblastes génétiquement rajeunie assure 15 alors une bonne solidarisation de l'implant osseux et de l'os par la poussée ostéoblastique, et renforce ainsi le maintien de l'implant dans l'os. De plus, l'utilisation de telles cellules régénérées assure le maintien à long terme de l'implant dans l'os et présente une efficacité durable et accrue par rapport aux crèmes protéiques à base de différents BMP (Bone Morphogenic Proteins) 20 habituellement mises en oeuvre. Une autre utilisation possible de la présente invention est d'assurer une bonne histocompatibilité entre un greffon d'un donneur et le système immunitaire d'un receveur. Pour ce faire, une cellule saine de l'organe à greffer du receveur peut être prélevée et régénérée selon le processus décrit puis être 25 transférée dans une cellule réceptrice adéquate de manière à entraîner la prolifération de ces cellules. Ces cellules peuvent alors ensuite être placées autour du greffon du donneur de manière à ce que le système immunitaire du receveur reconnaisse les molécules critiques portées à la surface du greffon comme molécules du soi et n'engendre ainsi pas de forte réaction immunitaire en 30 présence du greffon. La création d'histocompatibilité peut notamment être réalisée des manières suivantes : 1) Echange de chromosomes ou de segments de chromosomes par micromanipulation génétique durant une phase choisie de la mitose, ce qui est à ce jour difficile à réaliser car leur micromanipulation n'est pas encore suffisamment précise ; la nanomécanique permet actuellement de réaliser des instruments à l'échelle chromosomique pour réaliser par exemple des ponctions, des greffes, des aspirations et des rotations ; un progrès à ce niveau est tout à fait envisageable dans un futur proche. 2) Destruction sélective d'un segment de chromosome porteur des gènes responsables de l'incompatibilité tissulaire, par exemple durant une phase ou interphase de mitose, par exemple à l'aide d'un rayon laser de diamètre d'environ 0,0001 mm, entouré d'un cylindre de rayons plus larges de lumière visible permettant de guider le rayon laser par simple contrôle optique microscopique, qui peut être avantageusement robotisé ; cette destruction segmentaire de chromosome peut toutefois parfois être mal tolérée par certaines cellules résultantes. La présente invention présente également un intérêt tout particulier dans le domaine de la stomatologie dentaire. L'absence dentaire doit souvent être compensée par des implants métalliques céramiques, plastiques etc. Ces implants exigent une base de soutien osseux maxillaire suffisante afin d'assurer la fixation solide de l'implant. En cas d'insuffisance de la quantité ou de la qualité de la région sollicitée du maxillaire il est avantageux de prélever, par exemple par voie buccale, quelques cellules de ce lieu de l'os, de les soumettre à une régénération cellulaire et à une multiplication adéquate afin de disposer d'une petite greffe osseuse locale qui non seulement va fournir un socle osseux solide mais qui pourra par exemple, par la voie des protéines de signalisations, des cytokines locales et des molécules de régulation de l'activité cellulaire et celles des expressions génétiques, renforcer progressivement l'ensemble de l'arcade maxillaire. Avantageusement, on combine à cette régénération osseuse de l'os maxillaire, qui peut se faire par injections locales de cellules régénérées dans ou près de l'os, un revêtement de l'implant avec une couche de cellules osseuses et/ou desmodontales régénérées, qui vont améliorer la fixation, la tenue viscoélastique et la solidité correspondante de l'implant dans l'os. Un autre exemple d'application du procédé de régénération cellulaire selon l'invention concerne les fractures et la chirurgie osseuse. Certaines fractures et malformations osseuses exigent une intervention chirurgicale nécessitant parfois de disposer d'une masse osseuse supplémentaire greffable et solide. Ceci peut être obtenu par régénération cellulaire des cellules locales avec multiplication chaque fois que la chirurgie peut être retardée d'au moins deux semaines. Cela est notamment le cas des interventions de pseudarthroses, io déformations osseuses vertébrales des enfants ou dégénératives, arthrites ou arthroses déformantes. La multiplication cellulaire in vitro des cellules d'ostéoblastes est à réaliser de préférence en tenant compte, dès leur culture, des contraintes mécaniques qu'elles doivent supporter, par exemple après leur implantation dans le fémur, le maxillaire, les vertèbres, etc. En pratique, il s'agit 15 d'organiser cette culture cellulaire si possible confluente dans un bain nourricier classique, mais à l'intérieur d'un cadre support dont au moins un côté est mobile dans un plan, ou dans deux plans simultanément, ce qui rend une rotation motrice possible. Les mouvements et forces mécaniques périodiquement imposés au tissu en croissance dans sa solution nourricière adaptée seront d'une 20 amplitude, soudaineté et force progressivement croissante, mais toujours dans une orientation principale similaire afin de provoquer des structures minérales et trabiculaires dans la bonne direction. Les lignes de forces et de résistances mécaniques de ces structures, dans une ou plusieurs directions, correspondent aux forces, amortissements et viscoélasticités que le tissu osseux régénéré devra 25 supporter après son implantation. L'inventeur a développé un fixateur vertébral ajustable original (US-6,835,207) et un disque vertébral ajustable original (US-6,692,495) qui, tous les deux peuvent avantageusement être combinés avec du tissu vertébral résultant d'une régénération cellulaire, et par exemple servir de socle pour les vis pédiculaires de fixation.

30 Bien que la présente invention ait été décrite en référence à divers aspects de celle-ci, et aux moyens de divers exemples d'application, il est entendu qu'elle n'y est pas limitée, le cadre de l'invention étant donné par les revendications annexées.

Claims

Revendications

1.- Système de régénération génétique de cellules différenciées, notamment pour leur rajeunissement génétique, caractérisé en ce qu'il comprend : -au moins une cellule différenciée, - un milieu de reprogrammation génétique (MRG), comprenant au moins du cytoplasme d'au moins une cellule ovocytaire, embryonnaire ou foetale, et - des moyens pour mettre en contact au moins le noyau d'une cellule différenciée avec ledit MRG pour régénérer ladite cellule. i0

2.- Système selon la revendication 1, comprenant en outre : - des moyens pour séparer dudit MRG au moins le noyau de la cellule différenciée avant la fin de sa première mitose, - des moyens pour introduire le noyau de la cellule différenciée ainsi 15 séparé dans une cellule réceptrice différenciée, de préférence vidée de son noyau, de préférence autologue, ladite cellule réceptrice étant alors une cellule génétiquement rajeunie apte à se multiplier.

3.- Système selon la revendication 2, dans lequel lesdits moyens pour 20 mettre en contact au moins le noyau d'une cellule différenciée avec ledit MRG comprennent des moyens pour prélever et transférer au moins ledit noyau à partir de ladite cellule différenciée dans ledit MRG.

4.- Système selon la revendication 3, dans lequel lesdits moyens pour 25 prélever et transférer au moins ledit noyau dans ledit MRG sont adaptés à prélever et transférer ledit noyau de la cellule différenciée ensemble avec au moins une partie de son cytoplasme afin de retrouver dans le MRG quelques composants cytoplasmiques initialement présentés dans la cellule différenciée, tels que le réticulum endoplasmique, l'appareil de golgy, les 30 ribosomes et/ou les mitochondries. 22

5.- Système selon la revendication 3 ou 4, dans lequel le noyau de la cellule différenciée à transférer dans le MRG est prélevé à un stade précoce de sa première mitose, tel que la prophase, la pro-métaphase ou la métaphase.

6.- Système selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, dans lequel le noyau de la cellule différenciée transféré dans le MRG est séparé du MRG au stade de la métaphase, de l'anaphase ou au cours de la io télophase.

7.- Système selon la revendication 1, dans lequel lesdits moyens pour mettre en contact au moins le noyau d'une cellule différenciée avec ledit MRG comprennent des moyens pour transférer du MRG dans la cellule 15 différenciée.

8.- Système selon la revendication 7, dans lequel lesdits moyens pour transférer du MRG dans une cellule différenciée comprennent des moyens pour créer au moins une fente ou ouverture dans la membrane de ladite 20 cellule différenciée, et des moyens, tels qu'une pipette, pour transférer du MRG dans ladite cellule différenciée à travers ladite au moins une fente ou ouverture.

9.- Système selon la revendication 7 ou 8, dans lequel lesdits moyens 25 pour transférer du MRG dans une cellule différenciée comprennent des moyens pour séparer au moins partiellement ledit MRG de ladite cellule différenciée.

10.- Système selon la revendication 7, 8 ou 9, comprenant des 30 moyens pour refermer définitivement la cellule différenciée avec au moins une partie du MRG restant inclus en elle.

11.- Système selon la revendication 9 ou 10, dans lequel lesdits moyens pour transférer du MRG dans une cellule différenciée comprennent des moyens pour ouvrir la membrane d'une cellule ovocytaire, embryonnaire ou foetale, des moyens pour ouvrir la membrane d'une cellule différenciée, des moyens pour mettre lesdites ouvertures en contact, des moyens pour comprimer ladite cellule ovocytaire, embryonnaire ou foetale pour transférer au moins partiellement son cytoplasme dans la cellule différenciée. io

12.- Système selon la revendication 11, dans lequel lesdits moyens pour transférer du MRG dans une cellule différenciée comprennent en outre des moyens pour renvoyer au moins partiellement ledit cytoplasme transféré dans sa cellule d'origine après un laps de temps prédéterminable, 15 notamment par décompression de ladite cellule ovocytaire, embryonnaire ou foetale.

13.- Système selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel ledit MRG comprend au moins de l'extrait de cytoplasme d'au 20 moins une cellule ovocytaire, embryonnaire ou foetale, ledit extrait étant obtenu par traitement du cytoplasme.

14.- Système selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel ledit MRG comprend au moins une cellule de 25 reprogrammation génétique (CRG), pouvant être une cellule embryonnaire, ovocytaire ou foetale, dont le noyau a de préférence été extrait.

15.- Système selon l'une quelconque des revendications précédentes, 30 dans lequel ledit MRG comprend en outre des substances capables d'activer le métabolisme nucléaire, telles que des cellules ou extraits decellules apparaissant au cours d'une cicatrisation et/ou des protéines de signalisation et/ou des facteurs de croissance et de stimulation.

16.- Système selon l'une quelconque des revendications précédentes, comprenant des moyens d'injection et/ou d'implantation, tels que par endoscopie, des cellules régénérées, aptes à distribuer lesdites cellules au sein, à proximité ou à distance d'un tissu à régénérer.

17.- Système selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le système est adapté à la régénération de cellules différenciées telles que des cellules cardiaques, rénales, osseuses, dentaires, desmodontales, cartilagineuses, pancréatiques, hépatiques, nerveuses, prostatiques, hématopoïétiques, immunitaires, pulmonaires, artérielles, intestinales, rétiniennes, dermiques, épidermiques et/ou glandulaires.

18.- Système selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel une pluralité de cellules représentant une unité fonctionnelle organique sont régénérées ensemble et/ou ré-assemblées après rajeunissement génétique isolé pour former une unité fonctionnelle organique génétiquement rajeunie.

19.- Utilisation d'un système selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour revêtir au moins partiellement une valve cardiaque biologique, artificielle ou réparée par plastie d'au moins une couche cellulaire autologue régénérée.

20.- Utilisation d'un système selon l'une quelconque des revendications 1 à 18, pour régénérer au moins partiellement la partie d'un os maxillaire et les tissus desmodontaux destinés à recevoir un implant dentaire.

21.- Utilisation d'un système selon l'une quelconque des revendications 1 à 18, pour régénérer au moins partiellement l'épiderme par régénération de fibroblastes, provoquant une modification des collagènes.5