FR2845004A1 - Un nouveau produit pour combattre les tiques et le procede pour la preparation dudit produit - Google Patents

Abstract

L' objet de l'invention consiste en un nouveau produit et sa méthode de fabrication destiné au marché vétérinaire mondial, spécialement aux régions infestées de tiques.Son action principale consiste à véhiculer en même temps et par la voie injectable, une lactone macrocyclique de dernière génération et un antigène contre les tiques.Le principal avantage du produit est de diminuer la dose de remède, grâce à la voie injectable, sans être affecté par les problèmes liés à la voie topique. De plus, le remède est libéré avec un effet retard, ce qui permet d'espacer les applications.Enfin, l'usage continu du produit générera une immunité spécifique contre les tiques, en contrôlant l'infestation dans les étables.

Description

TITRE: UN NOUVEAU PRODUIT POUR COMBATTRE LES TIQUES et le PROC D POUR LA

PR PARATION dudit PRODUIT.

La présente invention concerne des compositions pharmaco-biologiques, particulièrement à un nouveau produit et son procédé de fabrication, destiné au secteur vétérinaire pour combattre les tiques dans les troupeaux bovins des régions tropicales et subtropicales du monde, caractérisé parce que sa forme d'activité est fondée sur un nouveau véhicule huileux qui permet de rendre soluble la première Eprinomectine injectable du monde avec des antigènes spécifiques de tiques. Il s'agit d'un endo et ectoparasiticide injectable, avec action biologique contre les infestations de tiques. Tandis que 1' Eprinomectine agit avec tout son potentiel pharmaceutique endecticide, les antigènes spécifiques installent graduellement une immunité contre les tiques. Il s'agit, donc, d'un agent endecticide d'action mixte, pharmaceutique et biologique.

propos des Tiques et de l'Antigène Protecteur.

La tique Boophilus microplus est l'ectoparasite le plus important pour les bovins à cause de sa vaste répartition géographique, agissant dans toutes les régions tropicales et subtropicales du monde, entre le 32ème parallèle Sud et le 40ème parallèle Nord. La morbidité et la mortalité sont causées par l'hématophage et par les agents pathogènes hémotropes qu'elle transmet, étant celui-ci l'un des plus grands problèmes de l'élevage de bovins. (Hernândez, 1997).

La méthode classique pour le contrôle de tiques, préconisant l'utilisation d' acaricides de forme systématique, cause d'autres inconvénients, en outre de l'utilisation de ces produits chimiques qui provoquent l'apparition de souches résistantes. Etant nécessaire un traitement continu, la fréquence avec laquelle on doit réunir les bovins, cause une réduction du rendement productif du troupeau (Montero., pag. 6), sans tenir compte de

la toxicité des acarecides, nuisible pour la santé des animaux, de 1' homme et de la pollution de l'environnement.(Valle, pag.22). Pendant ce temps, l'utilisation de ces produits a été la principale mesure de contrôle du B. Microplus, étant que depuis la décade du 50, l'implantation de contrôles stratégiques avec la simulation de modèles de population a eu comme but l'usage minimum de produits chimiques pour éviter le développement de souches résistantes et maintenir les populations de tiques réduites, sans rompre l'équilibre immunitaire, devant les agents éthologiques de la tristesse parasitaire. (Hernàndez, 1997).

A la fin des années 1930, on a découvert les premiers signes de résistance du Boophilus microplus aux arsenicaux, dans des pays d'Amérique du Sud, Afrique et Australie. Pendant les décades suivantes, on a introduit d'autres principes actifs (organophosphorés, carbamates, piretrodes et amidines) dans le combat contre les tiques et toujours avec l'apparition constante de résistance à ces produits chimiques. Selon la FAO, actuellement dans plus de 24 pays, le B. microplus offre une résistance aux acaricides disponibles. Cuba; la résistance du B. microplus aux organophosphorés a été décrite pour la première fois en 1976 et elle est actuellement également résistante aux amidines. (Mario Valdéz, pag. 9).

Quelques animaux, après plusieurs infestations par des tiques, acquièrent une résistance qui change selon la race bovine, pouvant être considérée comme une méthode de contrôle immunitaire naturel, mais en général insuffisant pour contrôler les infestations.

Les caractéristiques principales du bétail de la province de Rio de Janeiro, constitué par croisements de bétail hollandais et zébu, qui a une résistance naturelle aux tiques intermédiaire entre le bétail européen et asiatique, est favorable pour l'utilisation du vaccin recombiné comme moyen de contrôle des tiques. (Valle 2001).

On a utilisé des méthodes alternatives de contrôle des tiques, telles que l'introduction, dans les pâtures, de légumineuses capables de détruire les larves des tiques; d'autres méthodes, telles que l'utilisation de tiques mâles stériles, obtenues par croisement inter-espèces (OSBURN & KNIPLING,1982) et le contrôle biologique en utilisant des prédateurs et micro-organismes pathogènes (BRUM et al., 1992; BITTENCOURT et al., 1994) mais ces méthodes ont besoin d'une meilleure évaluation technoscientifique pour être ratifiées comme mesures alternatives de contrôle.

On a utilisé des produits chimiques acaricides comme mesure principale pour contrôler le B. microplus. Ceux-ci causent quelques fois une mortalité rapide et efficace pendant les phases o le parasite est sur l'animal. D'autre part, son action sur les larves qui sont dans la pâture est quelques fois limitée (MONTERO et al., 2001).

De telles mesures isolées n'ont pas donné des avantages permettant de diminuer les cots et les pertes dans l'élevage de bovins. Parallèlement, on ne peut pas éviter les problèmes d'agression à l'environnement et la résistance croisée dans des populations de tiques qui a lieu fréquemment à cause de l'usage empirique de ces produits (Hernàndez, 1997).

CARDOZO et al. (1994) en évaluant les traitements acaricides ayant comme base des avermectines, appliqués par voie pour-on, injectable et intraruminant, ont formulé des observations à propos des formes d'utilisation du produit étudié, et ont affirmé que l' usage irrégulier aura pour effet de les rendre inefficaces.

MONTERO et al. (2001) ont confirmé qu'il existe une importante limitation dans l'usage de produits chimiques en raison du développement de souches de B. microplus résistantes. Il existe ainsi un rapport entre le développement de produits chimiques pour le contrôle des tiques et le développement de souches résistantes à celles-ci.

Le début de l'alimentation de la tique sur un animal qui n'a pas été exposé à une infestation par ce parasite, se caractérise par la reconnaissance d' immunogènes salivaires dans des parties des cellules de l'épiderme et du derme qui se concentrent à l'endroit de la morsure. La classe d' immunogène introduite est différente selon la phase du cycle biologique du parasite (Valle 2001). Des protéines et d'autres molécules immunogènes qui se trouvent dans la salive de la tique, peuvent être traitées par des cellules de Langerhans et macrophages, ou par des cellules dendritiques, et sont finalement présentées aux organes lymphatiques secondaires et aux lymphocytes T. Les lymphocytes T reconnaissent les immunogènes de la tique et les complexes d' histocompatibilité, dans les cellules porteuses d'antigènes. Les lymphocytes T (helper 1 et helper 2) activés, libèrent des lymphokines qui agiront comme immunorégulatrices, permettant la génération de la réponse interposée par des cellules et des anticorps.( Mossaman & Coffman, 1989). Les lymphocytes T influencent encore les réactions d'hypersensibilité retardée, comprenant la réponse d'hypersensibilité cutanée par l'infiltration de basophiles qui a lieu pendant l'alimentation de la tique (Willadsen,1980; Dvorack et al., 1970). Les immunogènes, les cellules porteuses d'antigènes, les lymphocytes T et les cytoquines contribuent à l'activation des lymphocytes B, lesquels produiront les anticorps qui agiront contre les tiques. La réponse primaire du parasite est l'inhibition de la réponse d'hypersensibilité et la réaction des anticorps de l'hôte. Il est cependant nécessaire d'avoir plus d'informations pour comprendre l'interaction des défenses d'un hôte avec la tique (Valle, 2001).

Lorsqu'on introduit de la salive de la tique dans la peau d'un hôte peu sensible, on cause la dégranulation des mastocytes et de basophiles, probablement par l' hydrolyse enzymatique, produite par des enzymes salivaires (Allen,1979; Kemp & Bourne, 1980). Les facteurs chimiostatiques et vaso-actifs sont alors libérés et peuvent contribuer au petit influx de leucocytes observé dans les endroits de ligature de la tique

dans les premières expositions de l'animal (Sauer, 1995). La formation de C5a, à partir de la voie alternative du complément, peut contribuer aussi avec les influx cellulaires dans le local (Roberts & Kerr. 1976).

Les tiques peuvent moduler la réponse naturelle et acquise de l'hôte, puisque la salive de ce parasite a des inhibiteurs de la voie alternative du complément, d' anaphylatoxines et de cellules adecines. De plus, la salive réduit la formation de cytoquines par le macrophage, ce qui est important pour la réponse initiale contre la tique.

Les expositions répétées au parasite, font que la tique prend contact avec les éléments de la réponse immunitaire de l'hôte; par la suite, les immunogènes salivaires stimulent la réponse automatique des lynfocytes T et B.

Chez des animaux résistants, les basophiles et les hystamines sont attirés vers 1' endroit de ligature de la tique avec l'hôte, par des médiateurs et des lymphocytes T. Ainsi, le complément est activé par la voie alternative ou classique, par la présence de l'anticorps lié à l'antigène et les basophiles et matocytes dégranulent quand le complexe antigène/anticorps occupe le récepteur cellulaire.

Dans l'immunité acquise, les mécanismes spécifiques qui interrompent l'alimentation et réduisent 1' ovoposition, sont peu connus.

Les antigènes rattachés avec l'immunité acquise (naturelle), sont normalement ceux qui sont présents dans les parties du parasite directement liées à l'hôte. Ce rapport fait que, à cause des adaptations qui ont lieu pendant l'évolution du rapport hôte/parasite, fréquemment l'usage de cet antigène dans l'immunisation artificielle, n'est pas efficace. Au cours des dernières années, on a cherché de nouveaux antigènes pour induire une

forme artificielle l'immunité de l'hôte. Ces antigènes, appelés "cachés", ne participent pas directement à l'interaction hôte/parasite (Valle,2001). Par exemple, Schlein & Lewis (1976) ont vacciné des lapins avec du tissu musculaire de la mouche Stomoxys calcitrans et ils ont observé que ceuxci, après alimentation, présentaient des lésions musculaires.

La première proposition pour l'utilisation de nouveaux antigènes pour l' immunisation d'animaux contre la tique, a été faite par Galun (1975). Les observations de GALUN ont indiqué la possibilité de produire des vaccins contre le B. microplus avec l'emploi des nouveaux antigènes fonctionnels, aussi appelés "cachés", lesquels peuvent être classifiés comme ces molécules d'importance physiologique pour le parasite et qui normalement sont en dehors de l'interaction hôte/parasite.

On a isolé plusieurs antigènes cachés de Boophilus microplus, le plus connu étant le Bm86, une glycoprotéine de surface de membrane des cellules digestives de l'intestin moyen des femelles du B. microplus. La protéine Bm86, a un poids moléculaire déterminé en 89000 D et un point isoélectrique entre 5,1 et 5,6 (Hernàndez, 1997).

RAND et al. (1989), ont isolé de clones de cDNA rattachés à la glycoprotéine Bm86, lesquels ont été purifiés et homogénéisés.

RODRIGUEZ et al. (1994), en employant des techniques de radio-immunoessai et cDNA-PCR, ont aussi isolé et amplifié le gène qui codifie l' antigène Bm86 de B. microplus, et l'ont exprimé en plusieurs systèmes, comprenant le germe meilotrophique P. pastoris. Cette expression a provoqué une augmentation du potentiel immunogène, puisque la molécule est sécrétée sous la forme glycosilée, donnant des particules de 20-30 nm de diamètre, aussi appelées antigènes recombinés

-rBm86. La protéine Bm86 a eu sa capacité immunogène soutenue quand on l'a obtenue par la voie recombinée, ce qui a rendu possible la production de vaccins commerciaux.

On a donc produit le vaccin commercial à grande échelle, en utilisant le germe -P. pastoris- dans lequel on a introduit le gène codifiant pour la protéine Bm86 (Montero, pag. 7).

Le vaccin est capable d'induire une réponse immunologe qui permet de maintenir les parasites sous contrôle, avec la perspective de période de protection plus longue, sans les problèmes environnementaux causés par les acaricides chimiques.

On a étudié hystologiquement l'effet sur les tiques qui parasitent les bovins vaccinés, et on a observé une rupture des cellules digestives, suivie d' une pénétration de cellules de l'hôte dans 1' hémolymphe du parasite, sans observer de lésion dans les tissus salivaires. La vaccination provoque des lésions expressives au parasite pendant l'étape adulte, mais dans les étapes larvaires, les lésions ne sont pas très importantes, en général menant seulement à un retard dans le développement de la nymphe (Valle, 2001).

On sait actuellement, que le système complément a une fonction fondamentale dans la réponse immunitaire qui a lieu contre l'antigène de la muqueuse et qu'il cause certaines des lésions provoquées dans l'intestin des tiques. L'importance de la participation du complément dans les événements dégénératifs dans l'intestin du parasite a été constatée en vérifiant que des tiques alimentées avec du sérum de bovins vaccinés, mais libres du complément, n'ont pas présenté les lésions caractéristiques (Coons et al., 1988). Les cellules intestinales qui ont subi des lésions en raison du vaccin, sont les cellules digestives, dont la fonction essentielle est celle de produire 1'

endocytose et la digestion intracellulaire du sang, qui est la nourriture fondamentale de la tique (Hamilton et al., 1991).

On peut résumer le mécanisme d'action de l'antigène vaccinal Bm86 dans la tique, de la manière suivante: le sang de l'animal vacciné contient de hauts niveaux d'anticorps et d'autres éléments médiateurs de la réponse immune, tel que le complément. Lorsque le sang de ce bovin vacciné est ingéré par la tique, les anticorps spécifiques se fixent à l'antigène, et, dans ce cas à la surface des cellules digestives du parasite, o il cause des lésions morphophysiologiques graves. Les altérations morphologiques plus fréquemment observées chez des tiques engourdies, sur des animaux immunisés sont: les altérations dans la conformation et la coloration, le parasite devient aplati et rougeâtre par la ruture de la glande accessoire des organes reproducteurs. On peut remarquer ces lésions par la réduction du nombre et de la taille des femelles nourries, la réduction de l' ovoposition et de la fertilité des oeufs, ce qui provoque la diminution des populations dans les pâtures (COBON et al., 1995; RODRIGUEZ et al., 1995b).

l'occasion d'une expérience effectuée avec du bétail hollandais et métis en champ, RODRIGUEZ et al. (1995a) ont observé une réduction importante du nombre de téléogines sur les hôtes, pendant 36 semaines d'observations, et ils sont arrivés à la conclusion de que l'antigène recombiné en P. pastoris, nommé GAVAC Ö, peut être indiqué pour contrôler des populations de B. microplus dans des générations successives dans les pâtures.

VANEGAS et al. (1995), ont observé que l'immunisation systématique des bovins, avec des antigènes vaccinaux rBm86, réduit le nombre de traitements acaricides dans le troupeau, ainsi que l'incidence des hémoparasitoses.

RODRIGUEZ et al. (1995a) dans une expérience sous des conditions contrôlées, en utilisant le rBm86 contre deux souches mexicaines de B. microplus, Mora et Tuxpan, résistantes aux insecticides organophosphorés et piretrodes, ont observé la réduction du nombre de tiques sur l'hôte, avec une efficacité de 56% et de 58% respectivement. Les auteurs ont indiqué qu'ils n'ont initialement observé aucune différence entre le nombre de tiques sur les animaux vaccinés et ceux contrôlés, ainsi que dans la morphologie et l'aspect de ceux-ci, mais les ont seulement observées après 48 et 58 jours de la première dose pour la souche Tuxpan et Mora respectivement.

l'occasion d' une expérience en étable, MASSARD et al. (1995a), ont obtenu des résultats de 40% de réduction du nombre de téléogines chez des animaux vaccinés par rapport au groupe de contrôle. D'autres paramètres évalués ont été: la réduction du poids des femelles (6,2%); la réduction dans les pontes (8,0%) et la réduction de la fertilité des oeufs (10,0%). Si l'on tient compte des différents index vérifiés, l'efficacité totale de cet antigène contre la souche brésilienne du B. microplus a atteint 51%.

RODRIGUEZ et al. (1995b), ont observé que le vaccin a réduit les infestations de tiques dans les troupeaux étudiés, il y a cependant eu des variations dans la réponse immune des animaux au chanip, selon la région, la race, les individus et les facteurs climatiques.

l'occasion d' un travail effectué par Valle (2001) à Cuba, on a pu réduire le nombre de bains avec insecticides de 26 par an en 1997 à 2,5 par an en 2000. La même recherche apprend qu'ils ont réduit les cots d'acaricides de 208 litres au cours de la première année (1997) à 22 litres pendant la dernière année d'évaluation (2000).

Un effet important observé au cours de l'ensemble du traitement expérimental est la réduction significative de l'incidence de Babesiose (MONTERO et al., 2001).

propos de 1' Eprinomectine.

L' Eprinomectine, la (42R)-4"-epi (Acetylamine)-4"-deoxyavermectine B1, est un dérivé semi-synthétique de la famille des avermectines; elle procède de la fermentation de souches de Streptomyces avermectilis; la structure de base consiste en une lactone macrocyclique de 16 membres, o le C-17 et le C-25 sont fusionnés avec un groupe spiroacetal, le C-2 et le C-8 sont fusionnés avec une unité hexahydrofurane et dans la position C-13 contient une sucre, un disacàride. (Raymond J. Cvetovich, Dennis H. Kelly, Lisa M. DiMichele, Richard F. Shuman and Edward J. J. Grabowski. Syntesis of 4"-epi-Amino-4"-deoxyavermectins B1. J. Org. Chem. 1994, 59, 7704-7708).

L' Eprinomectine est un mélange de deux homologues, l'éprinomectine Bla (90%) et 1' éprinomectine Blb (10%) avec la différence entre eux d'un groupe méthylène au C-25.

Ces structures ont un vaste spectre d'activité contre les nématodes et anthropodes et leur efficacité contre les deux, endo et ecto, parasites leur a values la dénomination de endectocides. L' Eprinomectine est une molécule endectocide de dernière génération.

La forme d'action pharmaceutique de ces molécules est d'augmenter la perméabilité des cellules musculaires et nerveuses des parasites aux ions chlore, causant leur paralysie et leur mort. La molécule se lie avec les canaux du chlore contrôlés par le glutamate, caractéristiques des cellules des invertébrés. Elles peuvent aussi s'associer avec d'autres canaux de chlore contrôlés par le GABA. Comme les mammifères n'ont pas ce type de canal de chlore contrôlé par le glutamate, ces lactones macrocycliques présentent un haut degré de sécurité, même en doses triples.

Les produits à base d'Eprinomectine disponibles sur le marché, sont d'application externe: une solution d' Eprinomectine au 0,5% p/v (0,5 g par 100 ml), est dispersée sur la peau du dos de l'animal à la dose de 0, 5 mg/Kg de p. v. (0,1 mL/10 Kg de p.v.). Cette forme d'application est connue comme '"pour-on".

La méthode externe ou pour-on présente quelques avantages en ce que concerne la sécurité de l'applicateur, mais elle est aussi considérablement affectée par plusieurs facteurs qui peuvent diminuer son efficacité d à l'imprécision du dosage, telles que: * Le pelage de l'animal, l'état de sa peau, la présence de brlures, escarres et d'autres problèmes peuvent affecter l'absorption cutanée du principe actif et ainsi diminuer

son efficacité comme médicament.

* Les facteurs environnementaux, dans des régions de sécheresse o les animaux ont beaucoup de particules sur le dos (fréquemment dans des régions de sécheresse prolongée) ou le cas o les animaux ont le dos couvert de boue ou de bouse, l'application topique souffre d'effets inverses. Dans les régions tropicales ou subtropicales, avec des changements climatiques très rapides et avec l'éventualité de pluies torrentielles ensuite des applications, l'efficacité d'absorption peut être affectée ainsi que les jours de forte irradiation solaire o le produit peut cristalliser sur le dos de l'animal avant même le commencement du processus d'absorption cutanée. Toutes ces conditions adverses obligent à mettre des quantités de médicament supérieures au double de ce qui serait nécessaire pour combattre le parasite. Cette addition supplémentaire tellement élevée du principe actif a des conséquences il

économiques liées au cot par animal traité et peut avoir quelques répercussions sur l'environnement rural.

Lors de la recherche d'une molécule avec action endectocide et, qui en même temps n'est pas éliminée par les graisses du lait des animaux de production, une série d'études ont été engagées qui ont eu pour aboutissement l'obtention de l'Eprinomectine.

Premièrement, les travaux de Shoop, Demontigny et al., en 1996, ont démontré que les molécules d' avermectine/mibemycine, pouvaient être manipulées pour améliorer leur action ou diminuer le coefficient de partage (lait/plasma) chez les animaux pendant la période de production.

Postérieurement plusieurs molécules qui présentaient le C-22,23 insaturé ont été étudiées puis celles avec le C-4 epi-amine analogique insaturé dans le C-22,23. c'est précisément ce sous-groupe celui qui a montré les ratios les plus bas de lait/plasma. La molécule a donc été, dénommée 4epi-acetylamine, 4-desoxy avermectine B1.

I, s.

Alvinerie et al., en 1999, sont arrivé à la conclusion que seulement 0,1 % du remède appliqué a été éliminé par le lait. C'est à dire, 50 fois moins si l'on compare avec l'ivermectine ou la moxidectine.

L'Eprinomectine, lancée au début sur le marché sous la forme topique à 500ug/kg de poids vivant, elle est maintenant présentée, pour la première fois, sous la forme injectable, subcutanée ou intramusculaire, grâce au développement d'un véhicule nouveau qui en plus d'améliorer la pharmacocinétique et la biodisponibilité de la molécule, permet l'association de deux antigènes spécifiques contre le Boophilus microplus.

L'Eprinomectine agit sous la forme injectable avec plus d'efficacité, présentant une biodisponibilité plus élevée et de cette manière, exprimant toute sa caractéristique endectocide, agissant sur: les vers ronds gastro-intestinaux et pulmonaires; les ures; les poux qui sucent et ceux qui piquent; les acarus corioptères et sarcoptères; les mouche de cornet et les tiques.

L' action mixte pharmaceutique et vaccinale, établit que les animaux restent libres de parasites intérieurs et extérieurs (principalement de tiques) et, au cours du temps, elle crée par les applications successives, une immunité protectrice d'implantation graduelle qui permettra un intervalle plus grand entre les traitements et une diminution drastique des infestations de tiques.

L' espacement des traitements conduira à une diminution importante de la quantité de remède nécessaire, pour garantir le contrôle.

L' addition d'antigènes spécifiques, obtenus à partir de protéines intestinales des tiques et séquencées par génie génétique en souches de germes standarisées, dissoutes dans un véhicule injectable spécial, produira graduellement une immunité contre les tiques, permettant d'obtenir dans un délai de 2 ans un status typique de contrôle, sans leur élimination totale.

Cette situation est la plus souhaitable, puisqu'elle résout les problèmes de cette infestation insidieuse sans que les animaux perdent la preimmunisation contre les maladies (babesiose et anaplasmose) transmises par les tiques. Cela permettra le transport et le déplacement des animaux traités, des secteurs contrôlés vers des secteurs non traités, sans risque de "choc hémolytique".

Le produit est destiné au combat des parasites intérieurs et extérieurs des bovins d'élevage et laitiers des régions tropicales et subtropicales du monde qui sont infestées par des tiques.

L' Eprinomectine, maintenant dissoute dans un véhicule injectable spécial, aura une dose de remède par kilogramme de poids vivant de 50% inférieur par rapport à la formule originale d'utilisation topique.

* Voie injectable: * Voie topique: de 200 à250 ug/kg de poids vivant 500 ug/kg de poids vivant

La molécule permet une période d'élimination zéro du lait et de la viande des animaux traités. Il s'agit de plus d'une molécule qui n'affecte pas l'environnement, puisque le produit se neutralise rapidement dans le sol quand elle se lie aux particules.

Son élimination a lieu fondamentalement dans les bouses (85%) et il est constaté qu'elle n'affecte pas la flore des insectes et coléoptères qui consomment ces bouses dans le sol.

propos du véhicule

Le nouveau produit objet de cette invention; est le résultat du développement d'un nouveau véhicule injectable qui peut, en même temps, solubiliser des doses de 0,5% jusqu'à 3,5% d'Eprinomectine et présenter deux antigènes spécifiques qui finissent avec le temps par procurer à l'animal une immunité active et graduelle contre les tiques.

Le véhicule injectable spécial est une huile associée avec des dérivés d' aminoalcools, d' éthers et de tensioactifs.

Les éthers et les tensioactifs permettent que le mélange dEprinomectine et d'antigènes contre la tique peuvent se mélanger avec l'huile afin d'obtenir une émulsion stable grâce à l'équilibre hydrophile-lipophile des différents composants. L'addition d' amino-alcools donne à l'émulsion une stabilité thermodynamique supplémentaire à une température de conservation ( de +2 C à +4 C) de la composition pharmacobiologique.

Cette invention fournit un véhicule dont la composition possède les ingrédients suivants: a) Matrice huileuse: huile minérale, végétale ou animale, hautement purifiée, ce composant pouvant être présent dans la formulation en proportion de 60 à 75 %

(pourcentages en poids par volume p/v).

b) Un tensioactif ou un mélange de tensioactifs non ioniques tels que les éthers de sorbitan, polyoxyéthylénés ou non, éthers d'alkilo polyoxyéthylénés, les dérivés polyoxyéthylénés de l'huile de ricin, les éthers de polyglycerols, les alcools gras polyoxyéthylénés. On doit ajouter les tensioactifs à l'huile en une telle quantité de façon à s'assurer que lorsque l'émulsion est constituée avec la phase aqueuse, celleci reste stable au cours du temps. On propose que le mélange de tensioactif possède un HLB de 5.3 et soit présent à la formulation avec une concentration comprise

entre 9 et 12% p/v (pourcentages en poids par volume p/v).

c) Additif organique: présent à la formulation pour améliorer la performance de l'émulsion une fois que celle-ci est élaborée. Pour la sélection de cet ingrédient on a conduit des expériences sériées o l'on a utilisé différentes molécules chimiques suivantes: Trietanolamine, Alcool benzilique, Acétone, Dimetilformamide, Monoéthyléther, Propilenglycol à partir desquels on a élaboré les différentes émulsions et l'on a ensuite observé la stabilité de celle-ci à deux températures différentes: 37 C et 56 C. On a preferé l'additif organique trietanolamine avec une

concentration d'entre 0,1 et 0,05% (pourcentages en poids par volume p/v).

d) Un antioxidant ou un mélange de plusieurs de ceux-ci, qui peut être le Butilhydroxianisol ou le Butilhydroxitoluène. Les concentrations avec lesquelles il apparaîtra dans la formulation finale en accord avec les Pharmacopées

pharmaceutiques ou CFR 21.

Le véhicule CARACT RIS dans le paragraphe antérieur donne au produit les caractéristiques immunogènes suivantes:

* L' ACTION DE CORPS QUI R UNIT L'ENDROIT DE L'INOCULATION LES LEMENTS DE D FENSE DE PREMI RE CLASSE (PRINCIPALEMENT

MACROPHAGES)

* LA DISSOLUTION LENTE DES PRINCIPES ACTIFS

* LA MIGRATION PAR VOIE LYMPHATIQUE EN G NERANT D'AUTRES

CENTRES DE R ACTION DANS LE SYSTEME R TICULE-ENDOTH LIAL

Dans la formule, les principes actifs: le remède: l'Eprinomectine et l'agent biologique: les antigènes contre 'la tique, immergés dans le véhicule se dissolvent lentement (action lente) de façon à ce que l'effet anti-parasitaire du remède se prolonge dans le

temps grâce à sa permanence dans le sang à travers le temps (action longue) et l'implantation de l'immunité est graduelle et soutenue.

L'implantation de ce type d'immunité est très complexe et lente; elle est le résultat de l'effet amplificateur de plusieurs applications successives.

Après chaque application du nouveau produit, le bétail augmente progressivement son immunité contre les tiques. L'immunité qui résulte permet d'augmenter l'espace entre les traitements et de réduire chaque fois plus les populations de tiques. En somme, l'administration du nouveau produit diminue la nécessité des traitements et réduit la manipulation agressive du bétail.

Enfin, de manière à éviter la transmission de maladies iatrogéniques, le nouveau produit sera accompagné d'une série d'aiguilles à injection de manière à utiliser une aiguille pour chaque animal.

Ce nouveau produit non seulement présente une Erpinomectine injectable d'efficacité supérieure grâce au binôme dose/effet, beaucoup plus précis que dans l'application "pour-on", mais aussi, en même temps que le produit élimine les tiques chimiquement, il prépare l'animal pour l'immuniser des parasites.

Cette invention fournit un nouveau produit applicable par voie injectable, plus sre. Son application est plus précise et n'est pas affectée par les intempéries (forte irradiation solaire ou des pluies torrentielles) après l'application topique. En même temps que l'éleveur élimine les tiques chimiquement, il permet d'immuniser son troupeau et de la sorte, il génère une situation de "contrôle" o les populations de tiques diminuent progressivement jusqu'à arriver à être inoffensives et sans causer plus de pertes par perte de sang, transmission de maladies ou dépréciation des cuirs.

propos du procédé de formulation du produit En outre, l'invention fait référence à un nouveau procédé pour la fabrication du nouveau produit qui comprend les étapes suivantes: Phase dissolvante- Température de 50OC.

* Filtration de l'huile pour stérilisation.

* L' huile minérale est additionnée aux tensioactifs préalablement thermostatisés à 'C. Tout le mélange est homogénéisé à cette température dans des réservoirs

sanitaires absolument secs et sur atmosphère d' azote.

* On l'injecte par pression d'azote au réservoir de formulation et l'on soumet le produit au procès de filtration par cartouches filtrantes, clarifiantes et stérilisantes

avec un pore de 0.22 milimicres.

* Le filtrat stérile sera reçu dans un réservoir d'acier inoxydable 316, avec

électropolissage sanitaire, préalablement stérilisé, sec et avec atmosphère d'azote.

* Thermostatiser à 4 C- M LANGE 1.

Phase hvdrosoluble - Température de 40 C. * Les antigènes aqueux, formés par les suspensions de matériel recombiné de protéines du système digestif de la tique Boophilus microplus et obtenus par fermentation bactérienne, sont additionnés à la solution d' Eprinomectine. La solution d'Eprinomectine est préparée moyennant la dissolution du remède dans un véhicule hydrosoluble avec une concentration qui peut être comprise entre 0,25 % à 20 % p/v (eprinomectine dans un véhicule hydrosoluble). La concentration d'Eprinomectine dans le produit final doit être de 0,5% - 3, 5% p/v et la dose à administrer du produit final doit être de 200 à 250 ug d' eprinomectine/kg du poids

de l'animal.

Une fois qu'on a obtenu une suspension homogène, celle-ci est lentement placée sous une forte agitation sur le mélange 1 d'huile et de tensioactifs à +4 C.

Le pré-mélange est agité pendant 2 heures pour être ensuite homogénéisé moyennant un passage par des moulins collodaux ou homogénéisateurs à haute pression du type GAULIN.

Le produit obtenu sera maintenu à +4 C pendant une période de vie utile et sera mis en flacons du type ampoule avec un couvercle de gomme nitrilique pour profusion et avec cachet d' aluminium.

R SUM DE L' INVENTION

L'un des buts de la présente invention est la présentation du principe actif Eprinomectine par voie injectable.

L' Eprinomectine ( 4-epi-acetylamine-4-desoxy avermectine B1) est une molécule de dernière génération du type des lactoses macrocycliques.

Cette molécule a été initialement lancée sur le marché seulement sous forme topique avec une dose de 500 ugf/kg de poids vivant. La voie proposée par Eprinovax

détermine une action thérapeutique similaire avec des doses beaucoup plus inférieures: 200-250 ug/kg de poids vivant.

Un autre but de l'invention consiste en en ce que le nouveau véhicule détermine un effet de libération retardée des principes actifs, ce qui déterminera un espace plus grand de temps entre chaque traitement.

Un nouveau but de l'invention consiste en l'obtention d'une diminution graduelle de la quantité de remède insecticide nécessaire pour combattre les tiques, en influant drastiquement sur toutes les conséquences environnementales que ces produits peuvent causer.

R SUM THECNIQUE

L' objet de l'invention consiste en un nouveau produit et sa méthode de fabrication destiné au marché vétérinaire mondial, spécialement aux régions infestées de tiques.

Son action principale consiste à véhiculer en même temps et par la voie injectable, une lactone macrocyclique de dernière génération et un antigène contre les tiques.

Le principal avantage du produit est de diminuer la dose de remède, grâce à la voie injectable, sans être affecté par les problèmes liés à la voie topique. De plus, le remède est libéré avec un effet retard, ce qui permet d'espacer les applications.

Enfin, 1' usage continu du produit générera une immunité spécifique contre les tiques, en contrôlant l'infestation dans les étables.

Claims (11)

REVENDICATIONS

1. Un produit pharmaco biologique ou pharmaco vaccin destiné au marché vétérinaire pour combattre les tiques dans les troupeaux bovins des régions tropicales et subtropicales, caractérisé par sa forme d'action qui se base sur un nouveau véhicule qui permet de solubiliser la première Eprinomectine injectable au monde, en doses de 200-250 ug/kg de poids vivant, avec des antigènes spécifiques de tiques, plus spécifiquement par son action principale qui est de véhiculer en même temps et par la voie injectable, une lactone macrocyclique de dernière génération contre les tiques. 2. Le nouveau produit selon la revendication n0 1, caractérisé parce qu'il est le résultat du développement d'un nouveau véhicule injectable qui peut, en même temps, solubiliser de doses de 0,5% à 3,5% d'Eprinomectine et présenter deux antigènes spécifiques qui finissent par produire chez l'animal une immunité active et

graduelle contre les tiques.

3. Le produit selon les revendications n0 1 et n0 2, selon lesquelles le véhicule

injectable spécial est une huile qui associe de l'éthers et d'autres tensioactifs, o ses tensioactifs permettront que la solution d 'Eprinomectine puisse se mélanger avec la solution aqueuse contre les tiques, devenant une émulsion stable grâce à l'équilibre hydrophilelipophile de l'émulsion à la température de conservation du

pharmaco-biologique (+2 à +40C).

4. Le produit selon l'invention comprend dans sa formulation un véhicule nouveau

caractérisé par: a) Une matrice huileuse constituée par de l'huile très purifiée avec une concentration de 60-75% p/v; b) un tensioactif ou un mélange de deux de ceux-

ci tel qu'il possède un HLB de 5.3 et qui est présent dans la formulation avec une concentration entre 9 et 12% p/v. C) un additif organique, trietanolamine (TEA) avec une concentration de 0.1 à 0.05% p/v. E) un antioxydant ou un mélange de ceux-ci. 5. Le produit selon la revendication n 4 comprend dans sa formulation un véhicule

dont la matrice huileuse a) est une huile d'origine minérale.

6. Le produit selon la revendication n 4 comprend dans sa formulation un véhicule

dont la matrice huileuse a) est une huile d'origine végétale.

7. Le produit selon la revendication n0 4 comprend dans sa formulation un véhicule

dont la matrice huileuse a) est une huile d' origine animal.

8. Le produit selon la revendication n 4 comprend dans sa formulation un véhicule dont le tensioactif b) peut être retenu dans le groupe consistant en: Ethers de sorbitan, polyoxyéthylénés ou non; éthers d'alkilo polyoxyéthylénés; dérivés polyoxyéthylénés d'huile de ricin; éthers de polyglicerols et alcools gras polyoxyéthylénés. 9. Le produit selon la revendication n 4 comprend dans sa formulation un véhicule

dont 1' antioxydant e) est le butilhydroxytoluène.

10. Le produit selon la revendication n 4 comprend dans sa formulation un véhicule

dont 1' antioxydant e) est le butilhydroxyanisol.

1. Le produit selon la revendication n0 4 comprend dans sa formulation un véhicule dont l'antioxydant e) est un mélange de butilhydroxyanisol et de

butilhydroxytoluène avec la proportion (1:2).

12. Un procédé pour la préparation du produit, selon l'une des revendications 1 à 3,

qui comprend deux phases, la première étant une phase à une température de 500 et

la seconde, une phase à une température de +40C.

13. Un procédé pour la préparation du produit, selon la revendication n0 12, o la première phase comprend les étapes suivantes: Filtration de l'huile pour stérilisation; l'huile est additionnée aux agents tensioactifs thermostatisés à 50C, o tout le mélange est homogénéisé à cette température dans des réservoirs sanitaires absolument secs et sur atmosphère d'azote; o, sous atmosphère d'azote au réservoir de formulation, on soumet le produit au procès de filtration moyennant des cartouches filtrantes, clarifiantes et stérilisantes absolues avec un pore de 0,22 millimicrons; dont le filtrat stéril sera reçu dans un réservoir d'acier inoxydable 316, avec électropolissage sanitaire, préalablement stérilisé, sec et avec atmosphère d'azote. 14.Un procédé pour la préparation du produit, selon la revendication n0 12, o la seconde phase comprend les étapes suivantes: Les antigènes aqueux, formés par les suspensions de matériel recombiné de protéines du système digestif de la tique Boophilus microplus et obtenus par fermentation bactérienne, sont additionnés à la solution d'Eprinomectine. La solution diEprinomectine est préparée moyennant la dissolution du remède dans un véhicule hydrosoluble avec une concentration qui peut être de 0,25 % à 20 % p/v (eprinomectine dans un véhicule hydrosoluble). La concentration d'Eprinomectine dans le produit final doit être de 0,5% - 3,5% p/v et la dose à administrer du produit final doit être de 200 à 250 ug d' eprinomectine/kg 23 de poids animal. Une fois qu'on a obtenu une suspension homogène, celle-ci est lentement placée sous une forte agitation sur le mélange 1 d'huile et de tensioactifs

à +40C.

15. Un procédé pour la préparation du produit, selon les revendications n0 12, n0 13 et

n0 14, o le pré-mélange est agité pendant 2 heures pour être après homogénéisé moyennant un passage par des moulins collodaux ou homogénéisateurs de haute pression du type GAULIN, o le produit terminé sera maintenu à +40C pendant une période de vie utile et sera mis en flacons du type ampoule avec un couvercle de

gomme nitrilique pour profusion et avec cachet d'aluminium.