FR2837103A1

FR2837103A1 - Compositions pour le traitement de pathologies fonctionelles digestives

Info

Publication number: FR2837103A1
Application number: FR0203207A
Authority: FR
Inventors: Lionel Bueno
Original assignee: Rytek Sarl
Current assignee: Rytek Sarl
Priority date: 2002-03-15
Filing date: 2002-03-15
Publication date: 2003-09-19
Anticipated expiration: 2022-03-15
Also published as: FR2837103B1

Abstract

La présente demande concerne des compositions et méthodes pour le traitement de pathologies intestinales. Elle concerne également des compositions et méthodes permettant de réguler la perméabilité paracellulaire de l'épithélium intestinal. Les compositions et méthodes de l'invention reposent notamment sur l'utilisation d'agents ou de conditions modulant la tension du cytosquelette des cellules épithéliales intestinales, notamment des entérocytes. L'invention est utilisable pour le traitement préventif ou curatif de pathologies variées, telles que les troubles fonctionnels intestinaux (TFI) entraînant une hyperalgésie et notamment le syndrome de l'intestin irritable (SII), chez les mammifères, notamment les humains.

Description

caracterise en ce que l'on regle le pH de la composition entre 5 et 6.

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COMPOSITIONS POUR LE TRAITEMENT DE PATHOLOGIES

FONCTIONNELLES DIGESTIVES

La presente demande concerne des compositions et methodes pour le traitement de pathologies intestinales. Wile concerne egalement des compositions et methodes permettant de reguler la permeabilite paracellulaire de l'epithelium intestinal. Les compositions et methodes de ['invention reposent notamment sur l'utilisation d' agents ou de conditions modulant la tension du cytosquelette des cellules epitheliales intestinales, notamment des enterocytes. L'invention est utilisable pour le traitement preventif ou curatif de pathologies variees, telles que les troubles fonctionnels digestifs (TFD), plus particulierement les troubles fonctionnels intestinaux (TFI), et notamment le syndrome de l'intestin irritable (SII encore appele << Irritable Bowel Syndrome>>, IBS), les hyperalgesies et

autres douleurs abdominales, etc., chez les mammiferes, notamment les humains.

L' epithelium intestinal est le centre d' echanges tres importants entre le milieu exterieur et ltorganisme. Ces echanges peuvent s'effectuer soit a travers les cellules de l' epithelium, soit par des reseaux paralleles. Ainsi, le transport d' eau ou d' electrolytes, ou encore ['absorption de petites molecules (poids moleculaire generalement inferieur a 1000 Da environ) au niveau de la muqueuse gastrique, intestinale ou colique, s'effectue par vole transcellulaire, a travers les cellules epitheliales ou enterocytes. Par contre, ['absorption de grosses molecules et le passage d'antigenes, de toxines ou de cellules immunitaires se fait principalement par vole paracellulaire, au niveau de << jonctions serrees >>, qui

vent disposees entre les cellules epitheliales.

Les jonctions serrees (<< JS >>) epitheliales (ou << tight junction >>, << TJ >>) vent des structures de liaison entre les cellules bordant les epitheliums muqueux (tube digestif, poumons). Ces structures assurent et controlent le transport trans epithelial paracellulaire, de l'exterieur vers la sous-muqueuse, de - <

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macromolecules variees (allergenes, irritants, toxines, microorganismes). Ces structures permettent egalement la migration de cellules immunitaires (e.g., immunocytes) vers ltexterieur (tube digestif). Les jonctions serrees vent des structures souples constituees d'un assemblage complexe de proteines transmembranaires (occludines, claudines) et de proteines cytoplasmiques (proteines zone ocludens ZO-1, Z0-2, ZO-3, proteines AF7, cinguline ou 7H6, etc.), qui vent associees a des elements du cytosquelette (filaments de myosine,

d'actine, etc.).

Parmi les troubles fonctionnels digestifs, on distingue les douleurs abdominales sans trouble de ['elimination et les troubles fonctionnels intestinaux. Les douleurs abdominales sans trouble de ['elimination peuvent etre provoquees par des allergies ou des intolerances alimentaires ou se manifester dans le cadre de la maladie caeliaque par exemple. Les troubles fonctionnels intestinaux affectent 15 a 20% de la population et se traduisent par des symptomes dyspeptiques et/ou intestinaux pour lesquels aucune cause organique nta jusqu'ici ete identifiee et qui necessitent un traitement specifique. La caracteristique commune des troubles fonctionnels digestifs repondant aux criteres de ROME est la douleur abdominale, presente en periode postprandiale, qu'elle soit localisee en partie haute (dyspepsia) ou en partie basse de ['abdomen. Un trouble particulier qui

affecte la partie basse de ['abdomen est le Syndrome de l'Intestin Irritable (SII).

La douleur des troubles fonctionnels intestinaux est le plus souvent soulagee par

la defecation.

La physiopathologie des troubles fonctionnels digestifs (TFD) est mal connue mais les recenses investigations cliniques montrent ltexistence chez ces patients d'un abaissement du seuil de perception douloureuse a la distension (hyperalgesie viscerale) traduisant un etat dthypersensibilite digestive. Celui-ci semble relever en premier lieu d'une sensibilisation de mecanorecepteurs parietaux par des mediateurs pro-inflammatoires. En effet ['existence de modifications de structure ou de densite de certaines cellules du systeme immunitaire au niveau de la sous

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muqueuse en particulier du colon plaice en faveur d'une alteration de l'equilibre immunitaire avec la microflore residente. Cet etat microinflammatoire digestif favorise la sensibilisation des terminaisons des neurones afferents primaires et cette sensibilisation pourrait conduire a une facilitation secondaire de la transmission, vers le cerveau, des messages a caractere nociceptif. Un tel processus de sensibilisation de l'intestin a la douleur peut etre induit par des facteurs tels que le stress, des pathogenes, des allergenes, des enzymes de type trypsine ou tryptase par exemple, des sels biliaires, des xenobiotiques, des molecules chimiques de type glycerol, TNBS ou taurocholate par exemple et/ou

lo des sequelles resultant d'une infection ou d'une operation chirurgicale.

Toutefois, les mecanismes par lesquels ces facteurs vent capables d'initier le

phenomene de sensibilisation ne vent pas clairement documentes in vivo.

Lorsque des allergenes, des pathogenes et/ou des molecules chimiques par exemple vent absorbes, ils entrent en contact avec la paroi epitheliale intestinale qui empeche leur introduction dans ltorganisme et leur mise en contact avec les cellules de l'immunite. Toutefois, pour qu'une sensibilite se developpe, cela implique que certains allergenes, pathogenes et/ou molecule chimique vent

capables de traverser cet epithelium pour interagir avec les cellules immunitaires.

Les conditions dans lesquelles ce transfert est possible demeurent peu documentees in vivo. Ainsi, bien que certains rapports suggerent, sur des cultures de cellules in vitro, un role des jonctions serrees dans ce processus, aucune demonstration nta ete apportee de ['implication de ces jonctions in vivo dans le developpement d'une sensibilisation. De meme, si Coremans et al (Ital J Gastroenterol 1991 (8) S 1:39-40) suggerent un lien entre les sels biliaires, perfuses par vole intra-colique, et les douleurs abdominales d'un sujet presentant un intestin irritable, aucun resultat presente n'etablit de correlation entre les jonctions serrees et un processus de sensibilisation a la douleur de l'epithelium intestinal. Si la malabsorption des sels biliaires n'est observee que dans une faible proportion des sujets presentant un intestin irritable, des alterations de la

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permeabilite trans-epitheliale vent decrites chez les sujets developpant un SII apres gastro-enterite (SPILLER et al. Gut 2000; 47: 804-11) mais sans qu'il soit fait mention de modifcations de la permeabilite paracellulaire laquelle n'est pas etudiee. Une correlation entre le syndrome de l'intestin irritable et la presence accrue de microorganismes au niveau de la sous-muqueuse a ete mise en evidence au travers d'etudes experimentales (AGA. 1999), de meme qu'un lien a pu etre constate entre les maladies inflammatoire chroniques de l'intestin ou les troubles fonctionnels intestinaux et des modifications du degre d' activation immunitaire lO (inflammation) de la paroi intestinale. Cependant, ces observations preliminaires n'ont pas ete confirmees ou n'ont pas donne lieu a de nouvelles approches therapeutiques. La presente invention resulte de la mise en evidence d'un r81e in vivo des jonctions serrees de l'epithelium intestinal dans le processus de sensibilisation a la douleur. L"'ouverture" des jonctions serrees de l'epithelium du colon par differentes molecules ou par le stress entrane une hyperalgesie spontanee ou une hypersensibilite a la distension (etat caracteristique de 1'IBS). Les resultats obtenus dans le cadre de la presente invention etablissent ainsi pour la premiere fois et de facon surprenante que l'ouverture des jonctions serrees provoque un etat d'hyperalgesie retarde durable. La presente invention decoule egalement de la mise au point de nouvelles strategies therapeutiques pour le traitement de

pathologies intestinales, basees sur une modulation de la permeabilite para-

cellulaire de l'epithelium intestinal. En particulier, la presente invention propose, pour la premiere fois, une approche therapeutique des pathologies intestinales basee sur l'emploi de composes ou conditions permettant de moduler la tension du cytosquelette des cellules epitheliales intestinales. Cette approche permet notamment de controler l'ouverture et la fermeture des jonctions serrees de l'epithelium intestinal, sans necessairement recourir a une synthese proteique de novo et/ou a des degradations proteiques et/ou structurales importantes au niveau

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de l' epithelium. Cette strategic permet de reguler la permeabilite de l' epithelium intestinal de maniere specifique, fine et reactive, et ainsi d'agir sur le transfert d'allergenes, de pathogenes et/ou de molecules chimiques vers les cellules de l'immunite. Cette strategic est particulierement adaptee a l'obtention d'un effet biologique rapide et contrdlable dans le temps (reversible). A cet egard, les resultats presentes ci-dessous montrent qu'une substance susceptible de relacher les jonctions serrees epitheliales (peptides activateurs du recepteur PAR- 2) declenche une hyperalgesie retard et une hypersensibilite a la distension. De meme la perfusion intracolique de sels biliaires (taurocholate par exemple) augmente le passage des macromolecules en ouvrant les jonctions serrees et s'accompagne du meme etat d'hyperalgesie retard. Enfin le stress de contrainte augmente la permeabilite des jonctions serrees et entrane un etat d'hyperalgesie rectale. Les resultats presentes dans les exemples montrent egalement que dans tous les cas (peptide activateur du PAR-2, taurocholate ou stress) la suppression de cette augmentation de la permeabilite paracellulaire par un agent chimique (TAP par exemple) ou par des molecules relachant le cytosquelette des cellules epitheliales (ML-7, PD98059) supprime ou reduit cette

hyperalgesie caracteristique des TFD et en particulier des SII.

Un premier objet de ['invention reside done plus particulierement dans l'utilisation d'un compose modulant la tension du cytosquelette de cellules epitheliales intestinales, pour la preparation d'un medicament destine au traitement preventif ou curatif des pathologies intestinales caracterisees par un

etat d'hyperalgesie.

Un autre objet de ['invention reside dans une methode de traitement preventif ou curatif de pathologies intestinales caracterisees par un etat d'hyperalgesie, comprenant ['administration a un sujet d'une quantite efficace d'un compose

modulant la tension du cytosquelette de cellules epitheliales intestinales.

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L'invention repose ainsi sur l'utilisation de composes modulant la tension et

l' etat de contraction du cytosquelette des cellules de l' epithelium intestinal.

Comme indique plus avant, cette approche permet de controler l'ouverture et la fermeture des jonctions serrees de l'epithelium intestinal, sans necessairement recourir a une synthese proteique de rovo etlou a des degradations proteiques

et/ou structurales importantes au niveau de l'epithelium.

Les proteines composant les jonctions serrees vent associees au cytosquelette des cellules qu'elles relient. I1 est propose dans le cadre de ['invention que la tension du cytosquelette puisse etre modulee chez des sujets atteints de maladies ou desordres intestinaux pour agir de maniere non destructrice et transitoire sur la permeabilite de leur epithelium intestinal. Ainsi, la contraction du cytosquelette doit favoriser l'ouverture des jonctions serrees, tandis qu'un relachement du cytosquelette (ou qutune inhibition de la contraction) doit favoriser la fermeture

des jonctions.

On utilise done preferentiellement dans le cadre de ['invention des composes (ou conditions) qui modulent la contraction du cytosquelette de cellules epitheliales intestinales (notamment humaines). Selon la condition a traiter, on utilise des composes qui inhibent la contraction du cytosquelette de cellules epitheliales

intestinales, ou qui activent ou favorisent celle-ci.

L'activite du compose sur la tension du cytosquelette peut etre directe ou indirecte, c'est-a-dire dirigee sur les constituents memes du cytosquelette ou sur des regulateurs de sa tension. Bien que non limitatif, on prefere les composes agissant de maniere directe sur la tension du cytosquelette. En outre, on prefere egalement des composes presentant une activite selective sur la tension du cytosquelette, c'esta-dire typiquement des composes qui n'affectent pas

directement la structure des proteines constitutives des jonctions serrees.

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Un compose est considere comme modulant la tension du cytosquelette lorsqu'il module l'ouverture des jonctions serrees. Un effet inhibiteur de la contraction ou de la tension des filaments d'actine et/ou de myosine ne doit pas necessairement etre complet ou total, mais il suffit qu'il diminue la contraction ou la tension du cytosquelette suffisamment pour reduire l'ouverture des jonctions serrees. Cette reduction correspond a une diminution minimale d'environ 25%, preferentiellement d' environ 30%, de facon encore plus preferee d'environ 50% de la permeabilite paracellulaire de l'epithelium intestinal. La permeabilite lO paracellulaire peut etre mesuree a ['aide d'un marqueur tel que le 5CrEDTA lequel apres son passage dans le sang est mesure dans les urines pendant 24

heures (cf.: exemple l).

Differents types de composes peuvent etre utilises dans le cadre de la presente l5 demande. Ainsi, au sens de ['invention, le terme << compose >> doit etre pris dans un sens large, c'est-a-dire comme designant tout agent, substance, composition, condition, traitement ou procede permettant de moduler la tension du cytosquelette. Il s'agit avantageusement d'un agent (e.g., d'une molecule) ou

d'une combinaison ou association d'agents.

Selon un premier mode de realisation prefere, on utilise des composes inhibiteurs (ou modulateurs) de la contraction ou de la tension de la chame legere de la myosine et/ou de l'actine, ou des composes inhibiteurs (ou modulateurs) de la

degradation de l'actine.

Des exemples de tels composes vent notamment des inhibiteurs de la kinase de la chane legere de la myosine (MLCK). Il est a noter que les travaux rapportes dans l' art anterieur portent plutot sur l'utilisation de composes destines a ouvrir les jonctions serrees au niveau intestinal, pour favoriser le passage de grosses

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molecules, alors que la presente invention vise plus preferentiellement a exercer

une activite opposee, destinee a diminuer la permeabilite des jonctions.

Un exemple particulier d'inhibiteurs selectif de MLCK est le compose ML-7 { 1 (5-iodonaphtalene-1-sulfonyl)-lH-hexahydro-1,4-diazepine} (Makishima M. et al. FEBS Lett. 1991; 287:175). D'autres exemples de tels inhibiteurs vent notamment le compose ML-9 (Wilson DP.et al. J Biol Chem. 2001;13: 165) ou d'autres non selectifs: Wortmannin (Warashina A. Life Sci 2000;13: 2587-93), H-7 (Piao Zf et al. Mol Cell Biol Res Commun 2001; 4: 307-12) et KT 7692

(Warashina A. Life Sci 2000;13: 2587-93).

D'autres cibles agissant sur la tension du cytosquelette vent notamment les proteines de liaison a la myosine, telles que par exemple la cinguline, ou les molecules de jonction, telles que la cadherine-E, la catenine-x ou les desmosomes. La modulation de l'activite ou de ['expression de ces proteines permet de reguler la tension du cytosquelette, dans le cadre de la presente invention. Un objet particulier de l' invention reside done dans l'utilisation d'un modulateur (notamment d' un inhibiteur) de l' activite ou de la structure ou de ['expression des molecules du cytosquelette. Le compose peut etre par exemple un acide nucleique antigens, une molecule synthetique, un fragment d'anticorps, etc. Selon un autre mode de realisation, on peut utiliser des composes inhibiteurs de la synthese de proteines ou autres molecules assurant la liaison entre les proteines du cytosquelette et les proteines des jonctions serrees. Parmi les proteines des jonctions serrees, on peut citer notamment les proteines occludines, claudines, ZO- 1, Z0-2, ZO-3, AF7 et 7H6. Un moyen selon ['invention de moduler ltouverture ou la fermeture des jonctions serrees reside done dans la regulation de la synthese des proteines de liaison entre le cytosquelette et les proteines des i

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jonctions serrees. En stimulant cette synthese, il est attendu un renforcement des liaisons entre les jonctions serrees et le cytosquelette, conduisant a une plus

faible permeabilite de ltepithelium.

D'autres composes utilisables dans le cadre de ['invention vent par exemple des inhibiteurs de kineses activees par les mitogenes (MAPKK), notamment de la

kinase MEK1 ou de la kinase-PI3, tels que les composes PD098,059 {2(Amino-

3-methoxyphenyl)-4H- 1 -benzopyran-4-one) (Alessi et al. J.Biol.Chem. 1 995; 270, 27589) ou LY294002 {2-(4-Morpholinyl)-8-phenyl-1(4H)-benzopyran4-one}

(Vlahos et al.J.Biol.Chem 1994;269: 5241).

D'autres molecules utilisables pour reguler, de maniere indirecte, la tension du cytosquelette, vent des facteurs de croissance, tels que le facteur de croissance hepatique (HGF), le facteur de croissance endothelial (EGF) ou certaines cytokines susceptibles d'etre liberees par les immunocytes, telles que les

interleukines-l, -4, -13, ou les facteurs tels que IGF-1 ou l' interferon gamma.

Une autre approche permettant de reguler de maniere indirecte la tension du cytosquelette repose sur l'utilisation du peptide GLP2 (<< glucagonlike peptide 2 >>) ou de ses derives, qui peuvent modifier la permeabilite de l'epithelium intestinal par un effet indirect sur la contraction du cytosquelette. De meme, certaines molecules agissant sur des recepteurs situes au pole apical des cellules epitheliales (ex: recepteurs aux proteinases; PAR-2) peuvent agir indirectement

sur le cytosquelette.

Un mode prefere de mise en aeuvre de [ ' invention comprend l 'utilisation d' agents agissant de maniere directe sur la tension du cytosquelette, notamment de molecules inhibitrices de la contraction du cytosquelette, en particulier de molecules inhibitrices de la contraction ou de la tension des chanes legeres de

myosine et/ou d'actine, ou inhibitrices de la degradation de l'actine.

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Comme indique ci-avant, les composes utilises vent avantageusement des molecules, qui peuvent etre sous forme isolee ou sous forme de combinaison, d'extraits biologiques, etc. Ces molecules peuvent etre synthetiques, semi synthetiques ou biologiques, notamment d'origine animale, virale, vegetale ou bacterienne. La presente invention peut etre utilisee pour le traitement ou la prise en charge de pathologies ou desordres du systeme digestif caracterises par un etat d'hyperalgesie, notamment de troubles fonctionnels intestinaux, de maladies inflammatoires chroniques de l'intestin (MICI), d'intolerances alimentaires (allergies, conditionnements, etc.) caracterisees par une douleur viscerale chronique. Wile est particulierement adaptee au traitement preventif ou curatif des hyperalgesies et en particulier du syndrome de l'intestin irritable (SII) quelque soit sa forme (constipation, diarrhee ou une combinaison des deux), mais egalement de douleurs viscerales chroniques n'entrant pas dans le cadre du SII, telles que les douleurs abdominales fonctionnelles sans trouble de ['elimination fecale (FAPS: Functional Abdominal Pain) et les douleurs liees aux intolerances alimentaires et a la maladie caeliaque. Wile est utilisable de maniere preventive chez des sojets presentant des predispositions ou une sensibilite a ce type de desordres, ou de maniere curative, par exemple lors de crises ou sur des periodes plus longues. Les compositions et methodes de ['invention permettent de reduire

la souffrance des sujets, d'attenuer les symptomes ou la cause de ces desordres.

La presente invention demontre en effet de facon surprenante que la suppression de ['augmentation de la permeabilite paracellulaire associee a l'ouverture des

jonctions serrees empeche ['apparition de l'hyperalgie viscerale.

Un objet particulier de ['invention reside dans l'utilisation d'un compose tel que 3 0 defini ci- avant pour la preparation d' un medicament destine a contr61er, notamment a reduire, la permeabilite paracellulaire de l'epithelium intestinal chez des sujets atteints de maladies intestinales caracterisees par un etat d'hyperalgesie, notamment de maladies inflammatoires chroniques caracterisees par une accumulation, dans la couche sous-muqueuse, d'immunocytes (par exemple de mastocytes et/ou de cellules enterochromaffines), par une sensibilite accrue des mecanorecepteurs parietaux et eventuellement par une infiltration de bacteries du colon dans la couche sous-muqueuse, par exemple les hyperalgesies

et notamment le syndrome de l'intestin irritable.

Un autre objet particulier de ['invention reside dans l'utilisation d'un compose tel que defini ci-avant pour la preparation d'un medicament destine a reduire la sensibilisation aux allergenes, pathogenes et/ou molecules chimiques chez des sujets atteints ou sensibles aux maladies fonctionnelles intestinales, notamment aux affections intestinales caracterisees par une accumulation, dans la couche sous-muqueuse, d'immunocytes, notamment par exemple de mastocytes et/ou de cellules enterochromaffines, par une sensibilite accrue des mecanorecepteurs parietaux et eventuellement par une infiltration de bacteries du colon dans la couche sous-muqueuse, par exemple les hyperalgesies et notamment le syndrome

de l'intestin irritable.

Un autre objet particulier de ['invention reside dans l'utilisation d'un compose tel que defini ci-avant pour la preparation d'un medicament destine a reduire la migration transepitheliale d'immunocytes et ['accumulation d'immunocytes dans la couche sous-muqueuse de sujets atteints d'une pathologic fonctionnelle intestinale, notamment d'une affection intestinale induisant une hyperalgesie viscerale, par exemple le syndrome de l'intestin irritable, caracterisee par une accumulation, dans la couche sous-muqueuse d'immunocytes, notamment de mastocytes et/ou de cellules enterochromaffines, par une sensibilite accrue des mecanorecepteurs parietaux et eventuellement par une infiltration de bacteries du

colon dans la couche sous-muqueuse.

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L' invention est egalement relative a des methodes de traitement des conditions indiquees ci-dessus, comprenant ['administration a un sujet atteint d'une pathologic intestinale ou sensible aux pathologies intestinales, d'un compose ou traitement tel que defini ci-avant. De preference, le compose ou traitement est administre dans une dose efficace pour reduire la permeabilite paracellulaire de l'epithelium intestinal et/ou pour reduire la sensibilite a la douleur et/ou pour reduire la migration transepitheliale d' allergenes, de toxines, d' irritants ou de microorganismes et ainsi ['accumulation dtimmunocytes dans la couche sous

muqueuse de l'intestin.

Le compose peut etre administre par differentes voies et sous differentes formes.

Ainsi, le compose peut etre sous forme liquide ou solide, typiquement sous forme de comprime, gelule, ampoule ou solute buyable, solution injectable, etc. On prefere des composes formules sous une forme administrable par vole vale (solutes bovables, comprimes, ampoules, strops, etc.) ou rectale. Le conditionnement en suppositoire est particulierement prefere, lorsque cela est possible. Bien entendu, d' autres formes d' administration vent possibles, comme des injections (intraperitoneale, intradermique, sous-cutanee, intramusculaire, intraveineuse, intra-arterielle, etc.), des pates, gels, etc. Les composes peuvent etre utilises seuls ou en combinaisons et/ou en association avec d'autres agents actifs, comme par exemple d'autres substances actives utilisees dans le traitement du syndrome de l'intestin irritable. On peut citer par

exemple les composes anti-cholinergiques, les prokinetiques, les anti-

diarrheiques, les modificateurs de la motricite digestive, etc. Ces differents agents peuvent etre utilis es en combinais on therapeutique, et administres sous

forme separee, combinee, etalee dans le temps ou concomitante.

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Un auke objet de ['invention reside dans un produit ou une association pharmaceutique comprenant au moins un compose modulateur de la tension du cytosquelette de cellules epitheliales intestinales et au moins un autre agent actif selectionne parmi les composes anti-cholinergiques, les substances prokinetiques, les anti-diarrheiques, les laxatifs ou les modificateurs de la motricite, de la viscero-sensibilite (ou de la sensibilite digestive), en vue d'une

utilisation combinee, separee ou espacee dans le temps.

Un autre objet de ['invention reside dans une composition pharmaceutique comprenant au moins un compose modulateur de la tension du cytosquelette de cellules epitheliales intestinales et un excipient acceptable sur le plan pharmaceutique, ladite composition etant formulee preferentiellement pour une administration par vole vale ou rectale. De preference, la composition se

presente sous forme de suppositoire, ou sous forme de solution buyable.

D'autres aspects et avantages de la presente invention apparatront a la lecture des exemples qui suivent, qui doivent etre consideres comme illustratifs et non limitatifs.

LEGENDES DES FIGURES

Figure 1: Influence de doses croissantes d'un peptide activateur des recepteurs PAR-2 (SLIGRL) sur ['absorption d'une macromolecule (5Cr-EDTA) evaluee par le pourcentage retrouve au niveau des urines collectees pendant 24h chez le rat. Figure 2: Influence de ['administration concomitante d'un bloqueur de << JS >>

(TAP-100 mM) sur ['augmentation de la permeabilite paracellulaire au 5'Cr-

EDTA induite par ['injection intracolique de SLIGRL (0,5 mg/rat). Cette

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augmentation est supprimee par la perfusion (lOh) d'une solution de 2, 4, 6

triaminopyrimidine (TAP) qui bloque les jonctions serrees (JS).

Figure 3: Suppression, grace a un bloqueur des << JS >> (TAP-100 mM), de lthypersensibilite rectale a la distension induite par le SLIGRL (0,2 mg). Figure 4: Influence de la perfusion intracolique d'un bloqueur de << JS > > sur l'hyperalgesie rectale a la distension induite par un stress de contrainte chez le rat femelle. Figure 5: Effets de ['administration repetee d'un inhibiteur de la MLCK sur l'hyperalgesie rectale induite par ['administration intracolique de SLIGRL (200 g) chez le rat. En ce qui concerne l'hyperalgesie induite par le SLIGRL, seules les administrations repetees de ML-7 (3 doses lmg/kg a 12h d'intervalle)

reduisent l'hyperalgesie pour tous les volumes de distension.

Figure 6: Effets de ['administration repetee d'un inhibiteur de la MLCK sur l'hyperalgesie rectale induite par ['administration intracolique de SLIGRL (200 ug) chez le rat. En ce qui concerne l'hyperalgesie induite par le SLIGRL, seule ['administration de PD 098 059(1 dose de 3mg/kg) reduit l'hyperalgesie pour

tous les volumes de distension.

Figure 7: Comparaison des effete du ML-7 et du PD 98059 sur ['augmentation de la permeabilite des jonctions serrees epitheliales induite par un activateur des recepteurs PAR-2 (SLIGRL) chez le rat. Des mesures de permeabilite colique realisees selon la technique et dans les conditions decrites dans ltexemple 1, ont montre, sur 6 lots de rats, qu'aux doses reduisant la douleur viscerale, les inhibiteurs de MLCK direct (ML-7) ou indirect (PD 98059) suppriment

['augmentation de la permeabilite des jonctions serrees induites par le SLIGRL.

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Figure 8: Influence d'une administration unique d' un MLCK inhibiteur (ML7) sur ['augmentation de la reponse nociceptive induite par le taurocholate administre par vole colique chez le rat.

Figure 9: Effet du ML-7 sur ['augmentation de la permeabilite des jonctions serrees epitheliales induite par le taurocholate chez le rat. Des mesures de permeabilite colique realisees selon la technique et dans les conditions decrites dans l'exemple 1, ont montre, sur 6 lots de rats, qu'aux doses reduisant la douleur viscerale, ML-7 (inhibiteur de MLCK direct) supprime ['augmentation de la

permeabilite des jonctions serrees induite par le taurocholate.

Figure 10: Influence d'un inhibiteur de la contraction du cytosquelette des cellules epitheliales coliques agissant sur la MLCK (ML-7) sur l'hypersensibilite colique a la distension induite par un stress de contrainte chez le rat (moyenne

sem, n=8).

Figure 11: La kinase de la chane legere de la myosine (MLCK) et la myosine phosphatase (MP) agissent dans une direction opposee pour permettre la contraction puis la relaxation de la chane legere de la myosine du cytosquelette

des cellules epitheliales (Fukata et al 2001).

Figure 12: Cibles moleculaires permettant de reduire la contraction de la chane

legere de la myosine (MLC) des cellules epitheliales (Fukata et al 2001).

CPI: Proteine inhibitrice a l'etat phosphoryle de la myosine phosphatase.

MBS: Sous-unite de liaison de la myosine.

MP: Myosine phosphatase.

M20: Sous-unite de 20 Kda

Cat: Sous-unite catalytique de la myosine phosphatase.

GEFs: Facteurs d'echange des nucleotides guanine.

AA: Acide arachidonique.

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Ins (1,4,5) P3: Inositol (1,4,5) triphosphate.

PLC: Phospholipase C.

SR: Reticulum sarcoplasmique.

EXEMPLES

Exemple 1: Reduction de lthyperalgesie rectale a ['aide d'un bloqueur des

jonctions serrees.

L'epithelium intestinal possede des structures de liaison des cellules epitheliales

qui assurent un passage controle des immunocytes dans la couche sous-

muqueuse de l'intestin. Cet exemple montre que certaines molecules connues pour leur effet d' augmentation de la permeabilite paracellulaire au niveau intestinal tel que le SLIGRL favorisent ['accumulation d'immunocytes dans la sous-muqueuse intestinale (mastocytes, cellules enterochromaffines) et que cet effet peut etre prevenu (e.g., inhibe, reduit) par un traitement intracolique

impliquant un bloqueur des jonctions serrees.

Pour realiser cette etude, six lots de 8 rats males Wistar (200-250 g) ont ete utilises. Les animaux ont ete munis d'un catheter intracolique place a demeure au niveau du colon proximal (a 3 cm de la jonction caecocolique). Au cours de ces essais, 4 lots de rats ont ete perfuses par vole intracolique durant lOh avec une solution de 5'Cr- EDTA (0.5,uc/h). Les animaux etant places dans des cages individuelles, ['urine totale de 24h a ete collectee et la mesure de sa radioactivite a permit d'evaluer la permeabilite de la muqueuse colique au 5'Cr -EDTA. Des doses croissantes d'un peptide activateur du PAR-2 (SLIGRL) ont ete injectees dans la lumiere colique (lots 2, 3 et 4) au temps t = 0 (debut de perfusion du 5Cr - EDTA) aux doses de 0,05, 0,2 et 0,5 mg/rat, le lot 1 recevant le solvent. La figure n l montre ['augmentation dose-dependante de la permeabilite au 5'Cr

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EDTA induite par le SLIGRL montrant son effet d' augmentation de la

permeabilite paracellulaire.

Exemple 2: Reduction de l'hyperalgesie rectale a ['aide de TAP. Un stress de contrainte exerce pendant deux heures chez le rat femelle entra^ne une hypersensibilite rectale a la distension. Il est egalement connu qutun meme stress de contrainte augmente la permeabilite colique aux macromolecules

(permeabilite paracellulaire).

Cette etude a ete realisee sur 3 lots de 8 rats femelles Wistar (225-250 g) equipes d'electrodes implantees dans les muscles stries de ['abdomen permettant l'enregistrement graphique des crampes abdominales. En outre les animaux ont ete equipes de catheters intracoliques. Au temps t= 0 les animaux vent soumis a un stress de contrainte de 2h et a la perfusion intracolique pendant cette meme periode soit du solvent du TAP (tris - lot 1) soit du TAP (100 mM) (lot 2), soit de

tris avec un stress fictif (lot 3).

Les resultats montrent que le stress de contrainte (stress) augmente significativement le nombre de crampes abdominales (hyperalgesie) a tous les volumes de distension (0,4, 0,8 et 1,2 ml) et que cet effet est supprime par la

perfusion intracolique concomitante de TAP (figure 4).

Exemple 3: Reduction de l'hyperalgesie rectale a ['aide de ML-7.

Le protocole applique est le meme que celui decrit dans ltexemple 1 et porte sur 3x3 lots de 7-8 rats recevant une administration intracolique de SLIGRL (200 ug) ou de taurocholate (5 mM) mais traites au prealable par le ML-7 (MLCK inhibiteur) administre par vole intramusculaire. Les resultats presentes dans les figures 8 et 9 montrent qutun traitement unique par le ML-7 a la dose de lmg/kg

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reduit l'hyparalgesie consecutive a ['administration intracolique de taurocholate.

Les resultats presentes dans les fgures 5 et 7 montrent qu'un traitement unique par le ML-7 a la dose de lmg/kg reduit l'hyparalgesie consecutive a

['administration intracolique de SLIGRL.

Exemple 4: Reduction de lthyperalgesie rectale a ['aide de PD 98059.

Le protocole applique est le meme que celui decrit dans l'exemple 1 et porte sur 3x3 lots de 7-8 rats recevant une administration intracolique de SLIGRL (200 ,ug) ou de taurocholate (5 mM) mais traites au prealable par le PD 98059 (MEK inhibiteur) administre par vole intramusculaire. Les resultats presentes dans la figure 6 montrent qutun traitement unique par le PD 98059 a la dose de 3 mg/kg

reduit l'hyparalgesie consecutive a ['administration intracolique de SLIGRL.

Exemple S: Reduction de lthyperalgesie induite par le stress a ['aide de ML-

7. L' exemple 2 concerne les effete d'un bloqueur chimique des jonctions serrees epitheliales sur lthyperalgesie rectale consecutive a un stress. Dans l'exemple 5, un protocole identique a celui de l'exemple 2 a ete utilise mais les animaux ont ete traites avec un inhibiteur de MLCK, le ML-7, reduisant la contraction du cytosquelette. Le ML-7 a ete administre, comme dans ltexemple precedent, en 3

traitements (lmg/kgIP) separes de 12 heures, dans les 36h. precedent le stress.

Nos resultats montrent que le ML-7 supprime l'hyperalgesie induite par le stress ce qui confirme l'interet de cibler ['enzyme MLCK pour traiter l'hypersensibilite

colique chez l'homme (figure 11).

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Claims

REVENDICATIONS

1. Utilisation d'un compose modulant la tension du cytosquelette de cellules epitheliales intestinales, pour la preparation d'un medicament destine au traitement preventif ou curatif de pathologies intestinales caracterisees par un etat d'hyperalgesie.

2. Utilisation selon la revendication l, caracterisee en ce que le compose module

la contraction du cytosquelette des cellules epitheliales intestinales.

3. Utilisation selon la revendication l ou 2, caracterisee en ce que le compose

inhibe la contraction du cytosquelette des cellules epitheliales intestinales.

4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications precedentes, caracterisee

l 5 en ce que le compose n'affecte pas directement la structure des proteines

constitutives des jonctions serrees.

5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications precedentes, caracterisee

en ce que le compose est un inhibiteur de la contraction ou de la tension des chanes legeres de myosine et/ou d'actine, ou un inhibiteur de la degradation de l'actine.

6. Utilisation selon la revendication 5, caracterisee en ce que le compose est un

inhibiteur de MLCK.

7. Utilisation selon l'une quelconque des revendications l a 5, caracterisee en ce

que le compose est un inhibiteur de l'activite ou de ['expression des proteines de

liaison a la myosine ou des molecules de jonction.

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8. Utilisation selon l'une quelconque des revendications precedentes, pour la

preparation d'un medicament destine a controler la permeabilite paracellulaire de ltepithelium intestinal chez des sujets atteints de maladies fonctionnelles

intestinales caracterisees par un etat d'hyperalgesie.

9. Utilisation selon la revendication 8, pour la preparation d'un medicament destine a reduire la permeabilite paracellulaire de ltepithelium intestinal chez des sujets atteints de maladies fonctionnelles intestinales caracterisees par un etat d'hyperalgesie.

10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications precedentes, pour la

preparation d'un medicament destine a reduire la sensibilite a la douleur chez des sujets atteints ou sensibles aux maladies fonctionnelles intestinales caracterisees

par un etat d'hyperalgesie.

11. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 a 7, pour la

preparation d'un medicament destine au traitement preventif ou curatif des

troubles fonctionnels intestinaux (TFI).

12. Utilisation selon la revendication 11, caracterisee en ce que les troubles fonctionnels intestinaux vent choisis parmi le syndrome de l'intestin irritable (SII), les douleurs abdominales fonctionnelles sans trouble de ['elimination fecale et les

douleurs liees aux intolerances alimentaires.

13. Utilisation selon l'une quelconque des revendications precedentes, caracterisee

en ce que le compose est administre par vole vale ou rectale.

14. Produit pharmaceutique comprenant au moins un compose modulateur de la tension du cytosquelette de cellules epitheliales intestinales et au moins un autre agent actif selectionne parmi les composes anti- cholinergiques, les prokinetiques,

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les anti-diarrheiques, les laxatifs, les modifcateurs de la motricite ou de la viscero-sensibilite, en vue d'une utilisation combinee, separee ou espacee dans le temps.

15. Composition pharmaceutique comprenant au moins un compose modulateur de la tension du cytosquelette de cellules epitheliales intestinales et un excipient acceptable sur le plan pharmaceutique, ladite composition etant formulee pour une