JP2022552510A - 胃腸の健康組成物 - Google Patents

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Abstract

本発明は、一般に、胃腸の健康を改善するための組成物、胃腸の健康を改善するために処方された栄養補給剤、及び／又は栄養補助食品、並びに胃腸のリプログラミングのためのそのような組成物、及び／又は補助剤の使用に関する。

Description

本発明は、一般に、胃腸の健康を改善するための組成物、そのような使用のために処方された栄養補給剤、及び／又は栄養補助食品、並びに胃腸のリプログラミングのためのそのような組成物、及び／又は補助剤の使用に関する。
胃腸疾患
過敏性腸症候群（ＩＢＳ）や炎症性腸疾患（ＩＢＤ）などの胃腸疾患や障害は、微生物、免疫、遺伝、環境の要因を含むいくつかの異なる要因の相互作用によって引き起こされる（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ ＣＮ、２０１０）。胃腸細菌の腸内毒素症は、粘膜の炎症、免疫の破壊、及び粘膜の損傷といった下流効果を及ぼす（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ ＣＮ、２０１０）。ＩＢＤとＩＢＳの胃腸障害は、ミクロビオームの変化、腸機能障害、粘膜損傷などの共通の疾患特性を共有する。これら２つの疾患を区別する要因は、観察される炎症のレベルである。慢性炎症を特徴とするＩＢＤとは対照的に、ＩＢＳは軽度の炎症である。ＩＢＤに対する現在の治療アプローチは、寛解の誘導及び維持を目的として炎症を抑制することである。対照的に、ＩＢＳを治療する胃腸科医は、腹痛、腹部膨満、及び、便秘と下痢を交互に繰り返す症状を主に治療する。ＩＢＤとＩＢＳの両方を治療するために現在採用されている治療的アプローチは、治療失敗率が高い。
従って、現在観察されている高い治療失敗率に苦しむことなく、ＩＢＤ及びＩＢＳの患者からこれらの状態、及びそれらの症状を首尾よく治療する、及び／又は緩和する、若しくは排除することができる製品のための当技術分野における医学的必要性は未だ満たされていない。
よって、本発明の目的は、この満たされていない必要性に対処するために少なくとも役立つことができる、及び／又は少なくとも有用な選択を公衆に提供する胃腸栄養補助食品を提供することである。
特許明細書、他の外部文書、又は他の情報源について参照している本明細書において、これは一般に、本発明の特徴を議論するための文脈を提供することを目的としている。具体的に他の意味を示さない限り、そのような外部文書への言及は、そのような文書、又はそのような情報源が、いかなる法域においても、先行技術であること、又は当技術分野における技術常識の一部を形成することを承認するものとして解釈されるべきではない。
１つの態様において、本発明は、以下の成分を含む組成物に関する。
（ａ）ブロメライン、
（ｂ）１つ以上のＳＣＦＡ又はそのエステル、
（ｃ）Ｌ－スレオニン、及び
（ｄ）ビタミンＤ又はその代謝物
別の態様において、本発明は、約１から約１０ｇの本発明の組成物を含む経口剤形に関する。
別の態様において、本発明は、組成物の少なくとも２つの成分が遅延放出製剤に含まれる、本質的に本発明の組成物からなる経口剤形に関する。
別の態様において、本発明は、治療上有効量の本発明の組成物又は経口剤形を、必要とする対象に投与することを含む、ＩＢＤ、又はＩＢＳを予防する、治療する、又は管理する方法に関する。
別の態様において、本発明は、治療上有効量の本発明の組成物又は経口剤形を、必要とする対象に投与することを含む、ＩＢＤ、又はＩＢＳの少なくとも１つの症状を少なくとも部分的に軽減する方法に関する。
別の態様において、本発明は、治療上有効量の本発明の組成物又は経口剤形を、必要とする対象に投与することを含む、ＩＢＤ、又はＩＢＳに関連する少なくとも１つのパラメータを改善する方法に関する。
別の態様において、本発明は、細菌を有効量の本発明の組成物又は経口剤形と接触させることを含む、必要とする対象の胃腸管の細胞への細菌の付着を低減する方法に関する。
別の態様において、本発明は、細菌を有効量の本発明の組成物、又は経口剤形と接触させることを含む、必要とする対象の胃腸管の細胞への細菌の侵入を低減する方法に関する。
別の態様において、本発明は、治療上有効量の本発明の組成物、又は経口剤形を対象に投与することを含む、必要とする対象の胃腸粘膜層を増加させる方法に関する。
別の態様において、本発明は、治療上有効量の本発明の組成物を対象に投与することを含む、必要とする対象における胃腸バリア完全性を改善する方法に関する。
別の態様において、本発明は、治療上有効量の本発明の組成物を対象に投与することを含む、必要とする対象のミクロビオームの恒常性を回復する方法に関する。
別の態様において、本発明は、治療上有効量の本発明の組成物を対象に投与することを含む、必要とする対象における胃腸の炎症を治療する方法に関する。
本発明の他の態様は、例示的なものに過ぎず、添付の図面を参照して与えられる以下の説明から明らかになってよい。
本発明は、例示的なものとして、以下の図面を参照して次に説明される。
図１―トランズウェルプレートアッセイの描写 トランズウェルプレートアッセイは、Ｃａｃｏ－２－ＢＢｅ１細胞を２４ウェルトランズウェルインサートプレート（４．６７ｃｍ２、孔径０．４μｍ）に５×１０５細胞／ウェルで播種することにより確立された。細胞が完全に分化するまで［経上皮抵抗（ＴＥＲ）値≧１１００／ｃｍ２］、細胞培養培地は３日ごとに交換された。細菌のトランスロケーション、又はサイトカイン放出に対する処置の効果を試験するために、頂端区画において、細菌が配置される、又は処置がなされた。 図２―ＴＨＰ－１マクロファージからのＴＮＦ－αの放出に対するＧａＲＰとブロメラインの効果 ＴＨＰ－１細胞を１×１０６細胞／ｃｍ２で２４ウェルプレートに播種した。マクロファージを２００ｎＭＰＭＡで４８時間処理することによって分化させた。４８時間後、実験を開始する前に、マクロファージを洗浄し、ＰＭＡ、及び抗生物質を含まない培地で２４時間増殖させた。マクロファージを、ＧａＲＰ±０～８０μｇ／ｍｌのブロメライン（０～１０７ｐｇ／マクロファージ）の添加直前に、５０ｎｇ／ｍｌのＬＰＳで刺激した。刺激されていないウェルを比較対照として使用して、ＬＰＳ刺激の有効性を確認した。８時間後、培地を除去し、ＥＬＩＳＡを使用してＴＮＦ－αを定量した。各データポイントは、５～１０個の独立した実験値の平均値±ＳＤである。 図３―ＬＰＳで刺激されたＴＨＰ－１マクロファージと共培養された極性化Ｃａｃｏ－２単層からのＩＬ－８の放出に対するＧａＲＰとブロメラインの効果 トランズウェルプレートアッセイは、Ｃａｃｏ－２－ＢＢｅ１細胞を２４ウェルトランズウェルインサートプレート（４．６７ｃｍ２、孔径０．４μｍ）に５×１０５細胞／ウェルで播種することにより確立された。細胞が完全に分化するまで（ＴＥＲ値≧１１００／ｃｍ２）、細胞培養培地は３日ごとに交換された。別の２４ウェルプレートに、ＴＨＰ－１単球細胞を１×１０６細胞／ウェルで播種し、２００ｎＭＰＭＡで４８時間分化させた後、実験前に通常培地で２４時間培養した。全ての培地をＲＰＭＩ１６４０に交換した後、分化したＣａｃｏ－２の単層を含む全てのトランズウェルインサートを、分化したＴＨＰ－１細胞を含むウェルに充填した。様々なブロメライン製剤の抗炎症効果を評価するための実験において、試験サンプル０．２５ｍｌを頂端側に２４時間適用し、同時にこのモデルの基底外側に５０ｎｇ／ｍｌのＬＰＳを加えた。２４時間の培養後、ＩＬ－８ ＥＬＩＳＡを使用したＩＬ－８測定用に、頂端側の培養上清を回収した。各データポイントは、５個の独立した実験値の平均値±ＳＤである。 図４―ＧａＲＰ（ブロメライン無し）は、細菌によって誘発されるＴＥＲの損失を防ぐ Ｍ細胞モデルは、マトリゲル基底膜マトリックスでプレコートされた１２ｍｍトランズウェル細胞培養インサートの頂端面に、５×１０５のＣａｃｏ－２細胞を播種することによって確立された。ＴＥＲがトランズウェルあたり６００Ω（３００Ωｃｍ２組織単層に相当）を超えるまで、細胞を１４～１８日間維持した。共培養当日、ＲａｊｉＢ細胞を回収し、完全ＤＭＥＭに再懸濁し、５×１０５細胞を基底トランズウェルコンパートメントに追加した。Ｍ細胞が生成されるまで、共培養を４～６日間維持した。Ｍ細胞モデルは、細菌をトランズウェルインサートの頂端ウェルに加えることによって、４時間、３０のＭＯＩでＡＩＥＣＨＭ６０５に感染させた。４時間後、細胞を洗浄し、１００μｇ／ｍｌのゲンタマイシン存在下で培養し、残っている細菌を殺した。その時点で、ブロメライン無しのＧａＲＰを細胞上に配置し、全ての単層のＴＥＲを２時間間隔で１２時間まで測定し、基底ウェル内の細菌を１時間ごとに最大４時間まで計数した。 ＡＩＥＣＨＭ６０５を通常培地（○－○）又はＧａＲＰ（ブロメライン無し、▼－▼）に懸濁し、Ｍ細胞モデルに適用した際、ＧａＲＰ製剤は細胞層の完全性に保護効果をもたらした。ＧａＲＰにおいて細胞単層に適用された細菌は、ＤＭＥＭ／細菌無しの対照（●－●）と同様の効果を細胞層の完全性にもたらした。各データポイントは、４個の独立した測定値の平均値±ＳＤである。 図５―ゲル形成ムチン遺伝子の発現に対するＧａＲＰ中のブロメラインの効果の滴定 ７５：２５のＣａｃｏ－２／ＨＴ－２９共培養は、組み合わせた細胞（６．４×１０４細胞／ｍｌ）を、フラスコあたり合計５ｍｌを２５ｃｍ２で播種することによって確立された。播種後１５日目に、共培養単層を試験溶液５ｍｌで２４時間処理した。ブロメライン、スレオニン、酪酸ナトリウム、ビタミンＤ３、及び２つの異なるＧａＲＰ製剤に２４時間曝露した後、ｑＰＣＲを使用してＭＵＣ遺伝子の発現を調べた。データポイントは、１２（ＤＭＥＭ）、又は６個の独立した測定値の平均値±ＳＥＭである。 図６―膜結合型ムチンの発現に対するＧａＲＰ中のブロメラインの効果の滴定 ７５：２５のＣａｃｏ－２／ＨＴ－２９共培養は、組み合わせた細胞（６．４×１０４細胞／ｍｌ）を、フラスコあたり合計５ｍｌを２５ｃｍ２で播種することによって確立された。播種後１５日目に、共培養単層を試験溶液５ｍｌで２４時間処理した。ブロメライン、スレオニン、酪酸ナトリウム、ビタミンＤ３、及び２つの異なるＧａＲＰ製剤に２４時間曝露した後、ｑＰＣＲを使用してＭＵＣ遺伝子の発現を調べた。データポイントは、１２（ＤＭＥＭ）、又は６個の独立した測定値の平均値±ＳＥＭである。 同上。 図７―分泌型ムチンの発現に対するＧａＲＰ中のブロメラインの効果の滴定 ７５：２５のＣａｃｏ－２／ＨＴ－２９共培養は、組み合わせた細胞（６．４×１０４細胞／ｍｌ）を、フラスコあたり合計５ｍｌを２５ｃｍ２で播種することによって確立された。播種後１５日目に、共培養単層を試験溶液５ｍｌで２４時間処理した。ブロメライン、スレオニン、酪酸ナトリウム、ビタミンＤ３、及び２つの異なるＧａＲＰ製剤に２４時間曝露した後、ｑＰＣＲを使用してＭＵＣ遺伝子の発現を調べた。データポイントは、１２（ＤＭＥＭ）、又は６個の独立した測定値の平均値±ＳＥＭである。 図８―ムチン遺伝子の発現に対するビタミンＤ３とＬ－スレオニンの効果 ７５：２５のＣａｃｏ－２／ＨＴ－２９共培養は、組み合わせた細胞（６．４×１０４細胞／ｍｌ）を、フラスコあたり合計５ｍｌを２５ｃｍ２で播種することによって確立された。播種後１５日目に、共培養単層を試験溶液５ｍｌで２４時間処理した。スレオニン、及びビタミンＤ３に２４時間曝露した後、ｑＰＣＲを使用してＭＵＣ遺伝子の発現を調べた。データポイントは平均値±ＳＥＭを表す（ここでｎ＝６）。 図９―図９Ａ：ＭＵＣ２、及びＭＵＣ７の発現に対するＬ－スレオニンの効果 ７５：２５のＣａｃｏ－２／ＨＴ－２９共培養は、組み合わせた細胞（６．４×１０４細胞／ｍｌ）を、フラスコあたり合計５ｍｌを２５ｃｍ２で播種することによって確立された。播種後１５日目に、共培養単層を試験溶液５ｍｌで２４時間処理した。Ｌ－スレオニンに２４時間曝露した後、ｑＰＣＲを使用してＭＵＣ遺伝子の発現を調べた。データポイントは、１２（ＤＭＥＭ）、又は６個の独立した測定値の平均値±ＳＥＭである。図９Ｂ：ＭＵＣ２、及びＭＵＣ７の発現に対するビタミンＤ３の効果 データポイントは平均値±ＳＥＭを表す（ここでｎ＝６）。 同上。 図１０―図１０Ａ：ＭＵＣ２の発現に対する様々な濃度のビタミンＤ３及びスレオニンの効果；図１０Ｂ：ＭＵＣ７の発現に対する様々な濃度のビタミンＤ３及びスレオニンの効果。データポイントは平均値±ＳＥＭ（ｎ＝６）を表し、ここにおいて、全てのデータポイントは無治療対照（ｐ＜０．０５、スチューデントのｔ－検定）と有意に異なった。 同上。 図１１―２，４，６－トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）マウスモデルにおけるＧａＲＰの評価 ２，４，６－トリニトロベンゼンスルホン酸溶液（ＴＮＢＳ）大腸炎は、５０％エタノール中のＴＮＢＳ（５ｗ／ｖ％）を直腸導入することによって、５週齢のＣ５６／ＢＬ／６マウスで誘発された。治療スケジュール及び実験過程の概要を図１１に示す。 図１２―実験終点での体重の変化の比較 大腸炎はＣ５６／ＢＬ／６マウスで誘発され、疾患誘発の４日後から毎日の治療が開始されました。マウスにブロメライン（７５ｍｇ／ｋｇ）±１５ｍｇ／ｋｇのメントールを経口投与、及び／又はＧａＲＰを直腸投与した。体重は毎日測定され、ここにおいて、実験終点での体重の変化は、終点重量をベースラインの４日目の重量（治療開始直前）と比較することによって決定された。各点は、５～９個の動物の平均値±ＳＤを表す。 図１３―７５ｍｇ／ｋｇのブロメライン、及び１５ｍｇ／ｋｇのメントールを含む製剤の効果のビヒクル対照との比較大腸炎はＣ５６／ＢＬ／６マウスで誘発され、疾患誘発の４日後から毎日の治療が開始された。治療は、経口ビヒクル（●－●）、水中の７５ｍｇ／ｋｇのブロメライン（○－－○）、経口ビヒクル中の７５ｍｇ／ｋｇのブロメライン＋１５ｍｇ／ｋｇのメントール（▼－－▼）、又は経口ビヒクル中の７５ｍｇ／ｋｇのブロメライン＋１５ｍｇ／ｋｇのメントール、及び直腸投与されたＧａＲＰ（△－－－△）であった。各点は、８～９個の動物の平均値±ＳＤを表す。 図１４―内視鏡スコアの低下に対するＧａＲＰ製剤とビヒクル対照の効果の比較 大腸炎はＣ５６／ＢＬ／６マウスで誘発され、疾患誘発の４日後から毎日の治療が開始された。各点は、５～９個の動物の平均値±ＳＤを表す。＊は、経口ビヒクル対照又は経直腸ビヒクル対照と比較した際の統計的有意性を示す。 図１５―実験的大腸炎における疾患活動性（Ａ）結腸の長さ、（Ｂ）結腸の重量、（Ｃ）結腸の重量／長さの比 大腸炎はＣ５６／ＢＬ／６マウスで誘発され、疾患誘発の４日後から毎日の治療が開始された。実験終点で、動物を安楽死させ、結腸を取り出し、秤量し、測定した。平均値±ＳＥＭとして表されたデータ（ｎ＝５～９個の動物）。 図１６―内視鏡スコア 大腸炎はＣ５６／ＢＬ／６マウスで誘発され、疾患誘発の３日後から毎日の治療が開始された。各バーは、治療群の１１日目の内視鏡スコアの改善平均値を表す。動物数、平均、標準偏差、及びプラセボと比較した統計的有意性の値は括弧内に示され、当該平均値は各バーの上部に示されている。示された治療法は、経口、及び経直腸経口ビヒクルの組み合わせ（ｎ＝３４、ｘ-＝３．００、σ＝２．００）、水中の１５０ｍｇ／ｋｇのブロメライン（ｎ＝８、ｘ-＝５．００、σ＝１．４１、ｐ＝０．００３６）、経口ビヒクル中の１５０ｍｇ／ｋｇのブロメライン＋１５ｍｇ／ｋｇのメントール、及び直腸投与されたＧａＲＰ（ｎ＝１１、ｘ-＝４．７３、σ＝２．４２、ｐ＝０．０２９４）、経口ビヒクル中の１５０ｍｇ／ｋｇブロメライン＋１５ｍｇ／ｋｇのメントール、並びに直腸投与された２ｍｇ／ｋｇのプレドニゾロン及びＧａＲＰ（ｎ＝７、ｘ-＝４．８６、σ＝１．３６、ｐ＝０．００８０）、直腸投与された２ｍｇ／ｋｇのプレドニゾロン（ｎ＝１２、ｘ-＝４．２５、σ＝２．３８、ｐ＝０．０４４５）、並びに直腸投与されたＧａＲＰ（ｎ＝１９、ｘ-＝４．４２、σ＝２．３２、ｐ＝０．０１６７）である。 図１７―ブロメライン及びメントールを含む腸溶コーティングＡ型錠剤の溶解プロファイル 実施例１３の方法によって調製されたブロメライン／メントールミニ錠剤は、ＵＳＰ溶解試験条件に供され、胃排出後と同等のｐＨで開始して３時間以上継続する持続放出の前の、酸段階での許容可能な安定性を示した。 図１８―酪酸ナトリウム、スレオニン、及びビタミンＤ３を含む腸溶コーティングＢ型錠剤の溶解プロファイル 実施例１３の方法によって調製されたミニ錠剤は、修正されたＵＳＰ溶解試験条件に供され、ここにおいて、組成物が酸（１ＮのＨＣｌ）に１時間、ｐＨ６．２の緩衝液（１時間）、及びｐＨ７．４の緩衝液（５時間）に曝露された。この図は、下部小腸、及び大腸に見られるｐＨと同等のｐＨ７．４で開始する持続放出の前の、酸段階、及びｐＨ６．２の段階での許容可能な安定性を示している。 図１９―組織学的スコア 大腸炎の誘発、及び治療が行われた実施例１１、及び１２からのＣ５６／ＢＬ／６マウスを、治療後に安楽死させ、組織病理学的分析のために結腸を切片化した。各バーは、治療群の平均組織病理学的スコアを表す。動物数、平均、標準偏差、及びプラセボと比較した統計的有意性の値を、括弧内に示した。示された治療法は、プラセボ（ｎ＝１６、ｘ-＝４．４、σ＝２．２）、ＧａＲＰ（ｎ＝１０、ｘ-＝２．５、σ＝２．４、ｐ＝０．０３４）、プレドニゾロン（ｎ＝１０、ｘ-＝３．５、σ＝２．５、ｐ＝０．１９６）、１５０ｍｇ／ｋｇのブロメライン＋ＧａＲＰ（ｎ＝１０、ｘ-＝１．８、σ＝２．６、ｐ＝０．０１２）、１５０ｍｇ／ｋｇのブロメライン＋ＧａＲＰ＋プレドニゾロン（ｎ＝７、ｘ-＝２．０、σ＝１．５、ｐ＝０．００５）、７５ｍｇ／ｋｇのブロメライン＋ＧａＲＰ（ｎ＝８、ｘ-＝２．１、σ＝２．８、ｐ＝０．０４５）である。
定義
以下の定義は、本発明をよりよく定義するために、本発明の実施における当業者の参考として提示される。
特に明記しない限り、本明細書で使用される全ての技術的及び科学的用語は、本開示が関係する関連技術分野の通常の技術者の１人によって理解されるのと同じ意味を有すると理解されるべきである。
本発明の実施は、当技術分野で公知の、且つ、例えば本開示が関係する当分野に関連した通常に利用可能な多数の参考資料で記されるような、標準的な細胞生物学、微生物学、分子生物学、薬理学、及び生化学のプロトコル及び手順を使用し行われることができるとも考えられる。
「食品」という用語は、加工、半加工、生を問わず、ヒトを含む動物による消費を目的としたあらゆる物質を意味し、固形及び半固形の食品類、酒類、飲料類、並びにチューインガムを含むが、これらに限定されない。本発明の食品組成物は、食品と組み合わせて本明細書に記載の組成物を含む。
「栄養補助食品」という用語は、１つ以上の次の成分を含む、食事を補うことを目的とした製品を意味する：酵素類、ビタミン類、ミネラル類、ハーブ類、代謝物類、及び抽出物類など。栄養補助食品は、通常、食事の単独品目として使用されることを目的としておらず、食品とは無関係に摂取され得る。本発明の栄養補助食品は、１つ以上の栄養補助食品と組み合わせて本明細書に記載の組成物を含む。
「医療食品」という用語は、医師の監督下で経腸的に（例えば、栄養チューブ、又は経鼻胃チューブを介して）摂取、又は投与されるように処方された食品を意味する。医療食品は、特有の栄養要求がある状態の食事管理を目的とする。医療食品の例としては、単独供給源の栄養製品、経口補水液、及び代謝障害の食事管理における使用を目的とした製品が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で企図される医療食品は、医療食品として処方される本明細書に記載の組成物を含む。
１つ以上の摂取可能な賦形剤は、本明細書に記載の栄養補助製剤、食品組成物、栄養補助食品、又は医療食品中に存在してよい。そのような摂取可能な賦形剤は、当業者に明らかであるように、担体、希釈剤、結合剤、接着剤、潤滑剤、可塑剤、崩壊剤、着色剤、増量剤、香味剤、甘味料、緩衝剤、吸収剤などを含んでよい。
本明細書に記載の組成物及び経口投与量において使用されてよい結合剤の例としては、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、又はヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのセルロース誘導体、ポビドン、クロスポビドン、医薬用釉薬、ゴム類、乳清及びカゼインなどの乳誘導体、デンプン、並びにデンプン誘導体が挙げられる。甘味剤は、ジペプチド甘味料、水溶性天然甘味料、及び人工甘味料を含んでよい。香味剤は、ペパーミントオイル、スペアミントオイル、シナモンオイル、ウィンターグリーンオイルを含む合成、及び天然のフレーバーオイル類；レモン、ライム、グレープフルーツ、及びオレンジを含む柑橘系オイル類などの天然、及び人工のフルーツフレーバー類、並びにチェリー、パイナップル、ストロベリー、ラズベリー、アップルなどを含むフルーツエッセンス類を含んでよい。増量物質は、グルコース、スクロース、ラクトース、デンプン、ゼラチン、及び二酸化ケイ素を含んでよい。上記の結合剤、甘味剤、香味剤、及び増量物質は、全て例示されたものであり、これらに限定されない。
本明細書で使用される「異なるタイプの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子」という術語、及びそれらの文法的変形は、「タイプ」（本明細書に記載のタイプＡ、タイプＢ、及びタイプＣを含む）として本明細書で記載される所与の丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子が、各タイプに含まれ、そして腸の異なる部分へ送達され、且つ腸の異なる部分で活性である、異なる成分を含む、又は主成分とするように処方されていることを意味する。１つの実施形態において、腸の異なる部分は十二指腸及び結腸である。
本明細書で使用されるように、「治療する」、「治療すること」、及び「治療」という用語は、ＩＢＤ、及び／又はＩＢＳに関連する、又は関係する症状を含む、ＩＢＤ、及び／又はＩＢＳによって引き起こされる、又は関連する症状を、軽減する、緩和する、改善する、管理する、予防する、抑制する、止める、又は反転させる治療手段を意味する。対象は、改善を示すものとして、当業界で知られているように、ＩＢＤ、及び／又はＩＢＳに関連する、又は関係する１つ以上の症状において、観察可能な、又は測定可能な（統計的に有意な）減少を示し得る。
本明細書で使用される「有効量」という用語は、当技術分野で知られている、及び／又は本明細書に記載されているＩＢＤ、及び／又はＩＢＳの少なくとも１つの症状を、防ぐ、遅延させる、軽減する、安定化する、改善する、又は治療するのに有効な量を意味する。いくつかの実施形態において、有効量は、未治療の対照又はプラセボ治療の対照に比べて、統計的に異なる結果を達成するのに十分な量のことである。
本明細書に記載の組成物の「治療上有効量」は、治療中又は治療される予定の、又は達成するのに十分な、ＩＢＤ、及び／又はＩＢＳに関連する少なくとも１つの症状の少なくとも低減を達成するのに十分な量、或いは治療的に有益な効果を持つその症状の変化を達成するのに十分な量である。本明細書で企図される症状の変化の例としては、胃腸の炎症の減少、胃腸粘膜層の厚さの増加、及び／又は胃腸バリア完全性の改善が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用されるように、対象への治療適用に関する文脈における「管理する」、「管理すること」及び「管理」という用語は、状態の治癒という結果にはならないが、対象が治療から得る有益な効果を意味する。例えば、状態の管理には、状態の悪化を防ぐことが含まれる。
本明細書で使用されるように、対象への治療適用に関する文脈における「予防する」、「予防すること」、及び「予防」という用語は、治療適用に起因して、状態の再発、発症、又は発現を予防する、又は阻害することを意味する。
参照数値表示に関連して使用される際の「約」という用語は、その参照数値表示のプラスマイナス１０％までの参照数値表示を意味する。例えば、「約１００」は９０～１１０を意味し、「約６」は５．４～６．６を意味する。
本明細書で使用される「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「少なくとも一部からなること」を意味する。その用語を含む本明細書中の記述を解釈する際、各記述中のその用語が前提とする特徴は、全て存在する必要があるが、他の特徴も存在することができる。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」や「含んだ（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」などの関連用語も同様に解釈される。
本明細書で使用される「本質的に～からなる」という用語は、特定の材料又はステップ、及び特許請求される発明の基本的、且つ新規の特性に実質的に影響を及ぼさないものを意味する。
本明細書で使用される「からなる」という用語は、特許請求の範囲において特定して記載されていない要素、ステップ、又は成分を除いて、特許請求される発明において特定して記載された材料、又はステップを意味する。
本明細書に開示される数値の範囲（例えば、１～１０）への言及は、その範囲内の全ての有理数（例えば、１、１．１、２、３、３．９、４、５、６、６．５、７、８、９、及び１０）、及びその範囲内における有理数の任意の範囲（例えば、２～８、１．５～５．５、及び３．１～４．７）への言及も組み込み、従って、本明細書に明示的に開示される全ての範囲の全ての部分範囲は、本明細書によって明示的に開示されることを目的とする。これらは具体的に意図されているものの例に過ぎず、列挙される最小値と最大値の間の数値の全ての可能な組み合わせは、同様に本出願に明示的に記載されていると見なされるべきである。
説明
過敏性腸症候群（ＩＢＳ）や炎症性腸疾患（ＩＢＤ）などの胃腸疾患や障害は、微生物、免疫、遺伝、環境の要因などを含む、個々におけるいくつかの異なる要因によって引き起こされる。
以下の３つの要因は、ＩＢＤ、ＩＢＳ、並びに排便習慣の変化（即ち、下痢、便秘、又はそれらの混合）、腹痛、及び腹部膨満などの関連症状の開始と慢性的な持続に寄与する。
－胃腸の微生物恒常性の喪失
－粘膜損傷
－炎症。
現在、胃腸ミクロビオームの恒常性を首尾よく再確立し、炎症を軽減し、粘膜の治癒を促進できる、栄養補助食品を含む、市場で入手可能な製品はほとんど無い。ミクロビオームの恒常性を再確立することは、下痢、炎症、肥満、糖尿病、心血管疾患に関連する病気の影響を軽減するのに有益であると考えられている（Ｖａｍａｎｕ、２０１８）。
しかしながら、本発明者は、これらの３つの原因因子全てに作用するように共に働く薬剤の組成物を発見し、これは、ＩＢＤ、及びＩＢＳなどの慢性的な腸状態の効果的な管理を提供する。
本明細書に開示されているものは、胃腸リプログラミング製品（ＧａＲＰ）である。ＧａＲＰは、胃腸の健康をサポート及び維持するために発明者によって特に開発された、全てが天然のダイエット製品である。本明細書に記載のＧａＲＰは、胃腸障害に関連する主要な根本的要因に対処するための栄養補助食品、医療食品又は医薬品として処方されるか、或いはそれらに含められ得る。理論に縛られることを望むものではないが、発明者は、ＧａＲＰが個々の胃腸内微生物叢をサポートし、正常な微生物の腸内機能を回復することで作用すると考えている。さらに、製剤成分は炎症を軽減し、これは胃腸管の正常な機能を回復するために重要である。
よって、１つの態様において、本発明は、以下の成分を含む組成物に関する：
（ａ）ブロメライン、
（ｂ）１つ以上のＳＣＦＡ又はそのエステル、
（ｃ）Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、及びＬ－メチオニン、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸、及び
（ｄ）ビタミンＤ、又はその代謝物。
１つの実施形態において、組成物は本質的に以下の成分からなる：
（ａ）ブロメライン、
（ｂ）１つ以上のＳＣＦＡ又はそのエステル、
（ｃ）Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、及びＬ－メチオニン、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸、及び
（ｄ）ビタミンＤ、又はその代謝物。
１つの実施形態において、（ｃ）は、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、及びＬ－メチオニン、並びにそれらの組み合わせから選択される１つ以上のアミノ酸を含む、又は本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、（ｃ）は、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、及びＬ－メチオニンを含む、又は本質的にそれらからなる。１つの実施形態において、（ｃ）は、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、及びＬ－メチオニンを含む、又は本質的にそれらからなる。１つの実施形態において、（ｃ）は、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、及びＬ－メチオニンを含む、又は本質的にそれらからなる。１つの実施形態において、（ｃ）は、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－アルギニン、及びＬ－メチオニンを含む、又は本質的にそれらからなる。１つの実施形態において、（ｃ）は、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－アルギニン、及びＬ－グルタミンを含む、又は本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、（ｃ）は、Ｌ－トリプトファン及びＬ－アルギニンを含む、又は本質的にそれらからなる。１つの実施形態において、（ｃ）は、Ｌ－トリプトファン及びＬ－グルタミンを含む、又は本質的にそれらからなる。１つの実施形態において、（ｃ）は、Ｌ－トリプトファン及びＬ－メチオニンを含む、又は本質的にそれらからなる。１つの実施形態において、（ｃ）は、Ｌ－アルギニン及びＬ－グルタミンを含む、又は本質的にそれらからなる。１つの実施形態において、（ｃ）は、Ｌ－アルギニン及びＬ－メチオニンを含む、又は本質的にそれらからなる。１つの実施形態において、（ｃ）は、Ｌ－グルタミン及びＬ－メチオニンを含む、又は本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、（ｃ）は、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、又はＬ－メチオニンを含む、又は本質的にそれらからなる。
別の態様において、本発明は、以下の成分を含む組成物に関する：
（ａ）ブロメライン、
（ｂ）１つ以上のＳＣＦＡ又はそのエステル、
（ｃ）Ｌ－スレオニン、及び
（ｄ）ビタミンＤ、又はその代謝物。
１つの実施形態において、組成物は本質的に以下の成分からなる：
（ａ）ブロメライン、
（ｂ）１つ以上のＳＣＦＡ又はそのエステル、
（ｃ）Ｌ－スレオニン、及び
（ｄ）ビタミンＤ、又はその代謝物。
１つの実施形態において、（ｃ）のＬ－スレオニンは、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、及びＬ－メチオニンからなる群から選択される１つ以上の異なるアミノ酸の代わりに用いられる。１つの実施形態において、組成物は、次の少なくとも１つの追加のアミノ酸成分を含む：Ｌ－トリプトファン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－メチオニン、又はそれらの任意の組み合わせ。
１つの実施形態において、組成物は、本質的に次の成分からなる：ブロメライン、ＳＣＦＡ、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤ、或いはそれらの代謝物。
１つの実施形態において、１つ以上のＳＣＦＡ又はそのエステルは、酪酸、プロピオン酸、酢酸、又は生理学的に許容されるそれらの塩である。当該ＳＣＦＡは、好ましくは酪酸ナトリウム、酪酸カルシウム、プロピオン酸ナトリウム、又は酢酸ナトリウムであり、より好ましくは酪酸ナトリウムである。
１つの実施形態において、組成物は本質的に次の成分からなる：ブロメライン、好ましくは酪酸ナトリウムである、酪酸塩、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤ、或いはそれらの代謝物。
１つの実施形態において、組成物は、成分としてメントールを含む。
１つの実施形態において、組成物は、栄養補助食品、栄養補助剤、又は食品である。１つの実施形態において、食品は医療食品である。
１つの実施形態において、組成物は、摂取可能な賦形剤である１つ以上の追加の成分を含む。
コンポーネント
本発明者は、驚くべきことに、本発明の組成物の様々な成分が相乗的に作用して正常な胃腸の機能を回復し、ＩＢＤ、及びＩＢＳの症状、特に下痢を軽減することを確認した。
ブロメラインは、パイナップル（アナナス・コモサス）の茎から得られるタンパク質分解抽出物の総称である。「ブロメライン」という用語は、パイナップルに存在する２つの主要なタンパク質分解酵素である、ステムブロメラインプロテアーゼ（ＣＡＳ３７１８９－３４－７／ＥＣ３．４．２２．３２）と果実ブロメラインプロテアーゼ（ＥＣ３．４．２２．３３）の言及にも使用される。名前が植物における主要な位置を表しているが、両酵素は茎のブロメラインの抽出物中に存在する。ステムブロメラインプロテアーゼ、及び果実ブロメラインプロテアーゼは勿論、ブロメラインは、アナナイン、コスモサイン、及びカナザインといったプロテアーゼ、並びに少量の他の化合物を含んでよい。
ブロメライン抽出物は、パイナップルの皮、茎、葉、及びその他の非食用部分を混ぜ合わせ、混合物を濾過して可溶性ブロメライン酵素を含む液体を得ることによって調製され、後に、精製、分画、濃縮、及び／又は乾燥され得る。ブロメラインは、イオン交換クロマトグラフィーを用いて分画できる。主要な吸光度ピークに相当する画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥに供して、個々の酵素を単離及び同定できる。
本明細書で使用されるように、「ブロメライン」という用語は、パイナップルの茎から得られるタンパク質分解酵素の抽出物を指し、粗抽出物、精製抽出物、或いは、任意の画分、又はそれら画分の組み合わせを含む。
ブロメラインは、胃腸障害の治療用に米国食品医薬品局によって承認されていないが、消化補助剤及び一般的な抗炎症剤として有用であると示唆されている、よく知られた栄養補助食品である。関節痛、副鼻腔感染症、アレルギー、喘息、癌、静脈瘤、痔核、尿路感染症、気管支炎、痛風、発熱、及び手根管症候群の治療と同様に、ストレスに対する体の反応のサポート、タンパク質の消化補助、鼻及び副鼻腔の腫れの軽減、火傷後の死組織及び損傷組織の除去、筋肉の弛緩、肺水腫の予防、筋肉収縮の刺激、分娩の短縮にも有用であると示唆されている。
本発明の組成物は、ブロメラインを、炎症性胃腸疾患であるＩＢＤ、及びＩＢＳの３つの原因因子を組み合わせて低減する特定の薬剤と結合する。
１つの実施形態において、組成物は、約５０ｍｇ～約２５００ｍｇ、好ましくは約２５０～約２２５０ｍｇ、約５００～約２０００ｍｇ、約７５０～約１７５０ｍｇ、約１０００～約１６００ｍｇ、約１３００～約１５５０ｍｇ、約１４００～約１５００ｍｇ、約１４２０～約１４６０ｍｇ、より好ましくは約１４４０ｍｇのブロメラインを含む単位剤形である。１つの実施形態において、組成物は、約１４４０ｍｇ、好ましくは約１０３０ｍｇ、より好ましくは約７２０ｍｇのブロメラインを含む。
１つの実施形態において、組成物は、約４６０ｍｇ～約５００ｍｇのブロメライン、好ましくは約４８０ｍｇのブロメラインを含む単位剤形である。
１つの実施形態において、組成物は、４６０ｍｇ～５００ｍｇのブロメライン、好ましくは４８０ｍｇのブロメラインを含む単位剤形である。
１つの実施形態において、組成物は、５０ｍｇ～２５００ｍｇ、好ましくは２５０～２２５０ｍｇ、５００～２０００ｍｇ、７５０～１７５０ｍｇ、１０００～１６００ｍｇ、１３００～１５５０ｍｇ、１４００～１５００ｍｇ、１４２０～１４６０ｍｇ、より好ましくは１４４０ｍｇ、１０３０ｍｇ、さらに好ましくは７２０ｍｇのブロメラインを含む単位剤形である。１つの実施形態において、組成物は、１４４０ｍｇ、好ましくは１０３０ｍｇ、より好ましくは７２０ｍｇのブロメラインを含む。
短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）は、必要とするグリコシドヒドロラーゼ類と多糖リアーゼ類が不足しているヒトにおいては消化できない植物多糖類などの主要栄養素の微生物発酵の最終産物である。ミクロビオームは欠失した酵素を供給し、腸上皮バリア完全性を促進し得るＳＣＦＡを生成する。酪酸などのＳＣＦＡも、腸内微生物の恒常性の回復を助け得る。
ＳＣＦＡの濃度が高くなると、ＮＦ－κＢの阻害と炎症促進性サイトカインの減少を介して炎症を軽減する有益な細菌の再増殖が促進される。
「短鎖脂肪酸」及び「ＳＣＦＡ」という用語は、２～７個の炭素原子を含む弱酸を指すが、特定の塩基酸の陰イオン、及び塩の形態も含む。陰イオンに関して、ＳＣＦＡは、酢酸塩、酪酸塩、プロピオン酸塩、吉草酸塩、カプロン酸塩、イソ酪酸塩、２－メチル－イソ酪酸塩、及びイソ吉草酸塩が含まれる。本発明の組成物に使用するためのＳＣＦＡ塩は、アルカリ金属類（例えば、Ｎａ、及びＫ）、及びアルカリ土類金属類（例えば、Ｍｇ、及びＣａ）を含む。
「そのＳＣＦＡエステル」という用語は、ＳＣＦＡのエステルを指す。本発明の組成物に使用するためのＳＣＦＡエステルは、メチル、エチルなどを含む。
本発明の組成物中に存在するＳＣＦＡ及び選択されたアミノ酸は、腸粘膜の再生を促進し、これは、胃腸管及び腸内ミクロビオームの完全性を取り戻す。
１つの実施形態において、組成物は、約４５～１８００ｍｇのＳＣＦＡ、好ましくは約７５～約１６５０ｍｇ、約２５０～約１５００ｍｇ、約５００～約１４００ｍｇ、約７５０～約１５００ｍｇ、約１０００～約１４００ｍｇ、約１１００～約１３００ｍｇ、より好ましくは約１２００ｍｇのＳＣＦＡを含む単位剤形である。１つの実施形態において、組成物は、約１２００ｍｇ、好ましくは約６００ｍｇ、より好ましくは約３００ｍｇのＳＣＦＡを含む。
１つの実施形態において、組成物は、４５～１８００ｍｇのＳＣＦＡ、好ましくは７５～１６５０ｍｇ、２５０～１５００、５００～１４００、７５０～１５００、１０００～１４００、１１００～１３００ｍｇ、より好ましくは１２００ｍｇのＳＣＦＡを含む単位剤形である。１つの実施形態において、組成物は、１２００ｍｇ、好ましくは６００ｍｇ、より好ましくは３００ｍｇのＳＣＦＡを含む。
１つの実施形態において、組成物は、約４５～１８００ｍｇの酪酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム又は酢酸ナトリウム、好ましくは約７５～約１６５０ｍｇ、約２５０～約１５００ｍｇ、約５００～約１４００ｍｇ、約７５０～約１５００ｍｇ、約１０００～約１４００ｍｇ、約１１００～約１３００ｍｇ、より好ましくは約１２００ｍｇの酪酸ナトリウムを含む単位剤形である。１つの実施形態において、組成物は、約１２００ｍｇ、好ましくは約６００ｍｇ、より好ましくは約３００ｍｇの酪酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム又は酢酸ナトリウム、好ましくは酪酸ナトリウムを含む。
１つの実施形態において、組成物は、４５～１８００ｍｇの酪酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム又は酢酸ナトリウム、好ましくは７５～１６５０ｍｇ、２５０～１５００、５００～１４００、７５０～１５００、１０００～１４００、１１００～１３００ｍｇ、より好ましくは１２００ｍｇの酪酸ナトリウムを含む単位剤形である。１つの実施形態において、組成物は、１２００ｍｇ、好ましくは６００ｍｇ、より好ましくは３００ｍｇの酪酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム又は酢酸ナトリウム、好ましくは酪酸ナトリウムを含む。
１つの実施形態において、組成物は、約６００ｍｇの酪酸ナトリウムを含む単位剤形である。１つの実施形態において、組成物は、６００ｍｇの酪酸ナトリウムを含む単位剤形である。
Ｌ－スレオニンは、本明細書に記載される組成物の成分として含まれる。スレオニンはタンパク質の生合成に使用される必須アミノ酸であり、コラーゲンを生成し、免疫の健康に役立ち得る。
追加のアミノ酸も、本明細書に記載される組成物に含まれてよい。いくつかの実施形態において、Ｌ－スレオニンは、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、及びＬ－メチオニンからなる群から選択される別のアミノ酸によって組成物中で置換されてよい。理論に縛られることを望むものではないが、本発明者は、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、及びＬ－メチオニンから選択される各アミノ酸、並びに組成物中のそれらの任意の組み合わせが炎症を軽減し、及び／又は粘膜の治癒を促進し得ると考えている。好ましいアミノ酸は、Ｌ－スレオニンである。ブロメラインとともに、これらのアミノ酸もまた、炎症促進性サイトカインを減少させるように作用し、これは、ミクロビオームの復帰を促進し、炎症を軽減し得る。
１つの実施形態において、組成物は、約６７．５～約２７００ｍｇ、好ましくは約１１２．５～約２２５０ｍｇ、約２５０～約２０００ｍｇ、約５００～約１９００ｍｇ、約９００～約１８００ｍｇ、より好ましくは約１８００ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせを含む単位剤形である。１つの実施形態において、組成物は、約１８００ｍｇ、好ましくは約９００ｍｇ、より好ましくは約４５０ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせを含む。
１つの実施形態において、組成物は、約６７．５～約２７００ｍｇ、好ましくは約１１２．５～約２２５０ｍｇ、約２５０～約２０００ｍｇ、約５００～約１９００ｍｇ、約９００～約１８００ｍｇ、より好ましくは約１８００ｍｇのＬ－スレオニンを含む単位剤形である。１つの実施形態において、組成物は、約１８００ｍｇ、好ましくは約９００ｍｇ、より好ましくは約４５０ｍｇのＬ－スレオニンを含む。
１つの実施形態において、組成物は、６７．５～２７００ｍｇ、好ましくは１１２．５～２２５０ｍｇ、２５０～２０００ｍｇ、５００～１９００ｍｇ、９００～１８００ｍｇ、より好ましくは１８００ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせを含む単位剤形である。１つの実施形態において、組成物は、１８００ｍｇ、好ましくは９００ｍｇ、より好ましくは４５０ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせを含む。
１つの実施形態において、組成物は、６７．５～２７００ｍｇ、好ましくは１１２．５～２２５０ｍｇ、２５０～２０００ｍｇ、５００～１９００ｍｇ、９００～１８００ｍｇ、より好ましくは１８００ｍｇのＬ－スレオニンを含む単位剤形である。１つの実施形態において、組成物は、１８００ｍｇ、好ましくは９００ｍｇ、より好ましくは４５０ｍｇのＬ－スレオニンを含む。
ビタミンＤは、本明細書に記載の組成物の成分として含まれる。ビタミンＤには抗炎症作用があり、胃腸管のＬ細胞間のギャップ結合を固くして腸透過性を低下させるのと同様に、ミクロビオームを恒常性に戻すのにも役立つ。
「ビタミンＤ」という用語は、ビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）、及びビタミンＤ３である１，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３（コレカルシフェロール）を含む脂溶性セコステロイド群を指し、下付き文字のないビタミンＤは、Ｄ２、Ｄ３、又はその両方を指す。両形態のビタミンＤは、まとめてカルシフェロールとして知られている。アルファカルシジオールとして知られるビタミンＤの活性代謝物は、腎臓での２番目の水酸化ステップを必要としない。
１つの実施形態において、組成物は、約４～約１５０μｇ、約６．５～約１４０μｇ、約１３～約１３０μｇ、約２５～約１２０μｇ、約３５～約１１０μｇ、約５０～約１０５μｇ、好ましくは約１００μｇ、より好ましくは約５０μｇ、さらに好ましくは約２５μｇ、さらに好ましくは約１２．５μｇのビタミンＤを含む単位剤形である。
１つの実施形態において、組成物は、約４～１５０μｇ、６．５～１４０μｇ、１３～１３０μｇ、２５～１２０μｇ、３５～１１０μｇ、５０～１０５μｇ、好ましくは１００μｇ、より好ましくは５０μｇ、さらに好ましくは２５μｇ、さらに好ましくは１２．５μｇのビタミンＤを含む単位剤形である。
１つの実施形態において、ビタミンＤはコレカルシフェロール（ビタミンＤ３）である。
メントールは、本明細書に記載される組成物の成分として含まれ得るが、人工的に作られた、又はペパーミントなどのミント油から得られた有機化合物であってよい。ペパーミントの葉、及びペパーミントのエッセンシャルオイルの両方が健康目的で使用されている。
１つの実施形態において、組成物は、約３～約１５０ｍｇ、好ましくは約６～約１４５ｍｇ、約１２～約１４０ｍｇ、約２４～約１３５ｍｇ、４８～約１３０ｍｇ、約６０～約１２５ｍｇ、約８０～約１２０ｍｇ、約９０～約１１０ｍｇ、約１００ｍｇ、より好ましくは約９６ｍｇのメントールを含む単位剤形である。１つの実施形態において、組成物は、約１００、好ましくは約９６、より好ましくは約５０ｍｇ、さらに好ましくは約４８ｍｇのメントールを含む。
１つの実施形態において、組成物は、３～２００ｍｇ、好ましくは６～１５０ｍｇ、１２～１４５ｍｇ、２４～１４０ｍｇ、４８～１３５ｍｇ、６０～１３０ｍｇ、８０～１２０ｍｇ、９０～１１０ｍｇ、１００ｍｇ、より好ましくは９６ｍｇのメントールを含む単位剤形である。１つの実施形態において、組成物は、１００、好ましくは９６、より好ましくは５０ｍｇ、さらに好ましくは４８ｍｇのメントールを含む。
１つの実施形態において、メントールはＬ－メントールである。１つの実施形態において、メントールはＤ－メントールである。
本明細書に開示される組成物は、単位剤形で提示されてよく、製剤、及び薬局の分野において周知の方法のいずれかによって調製され得る。「単位剤形」という用語は、単一の用量が単一の容器、又はパッケージで利用可能であり、「単位剤形」全体がそれに含まれる、適切な系において全ての活性剤、及び不活性成分が結合されて患者に与えられる単一の用量を意味する。「単位剤形」は、２つ以上の容器、又はパッケージからの各成分の混合を含まない。
単位剤形の典型的な例としては、本明細書に記載の組成物の経口投与用の丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、及び／又は微粒子（すなわち、経口剤形）、或いは本明細書に記載の組成物の単位用量を含む経皮パッチ（すなわち、局所剤形）が挙げられる。これらの単位剤形の例は、決して限定することを意図するものではなく、単に単位剤形の薬局技術における典型的な例表を意図するに過ぎない。
よって、別の態様において、本発明は、約１～約１０ｇの本発明の組成物を含む、ＩＢＤ、又はＩＢＳの治療、又は予防のための単位剤形に関する。１つの実施形態において、単位剤形は経口剤形である。
１つの実施形態において、経口剤形は、約１～約８ｇ、約１～約７ｇ、約１～約６ｇ、約１～約５ｇ、約１～約４ｇ、約１～３ｇの組成物を含む。１つの実施形態において、経口剤形は、１～８ｇ、１～７ｇ、１～６ｇ、１～５ｇ、１～４ｇ、１～３ｇの組成物を含む。
１つの実施形態において、経口剤形は、約４ｇ～約４．５ｇの組成物、好ましくは約４．２２ｇの組成物を含む。
１つの実施形態において、経口剤形は、４ｇ～４．５ｇの組成物、好ましくは４．２２ｇの組成物を含む。
１つの実施形態において、経口剤形は、約２ｇ～約２．５ｇの組成物、好ましくは約２．２１ｇの組成物を含む。
１つの実施形態において、経口剤形は、２ｇ～２．５ｇの組成物、好ましくは２．２１ｇの組成物を含む。
１つの実施形態において、経口剤形は、本質的に、約１～約８ｇ、約１～約７ｇ、約１～約６ｇ、約１～約５ｇ、約１～約４ｇ、約１～３ｇの組成物からなる。１つの実施形態において、経口剤形は、本質的に、１～８ｇ、１～７ｇ、１～６ｇ、１～５ｇ、１～４ｇ、１～３ｇの組成物からなる。
１つの実施形態において、経口剤形は、本質的に、約１～約１０ｇの組成物、約１．２５～約８ｇ、好ましくは約１．５～約６ｇの組成物からなる。１つの実施形態において、経口剤形は、本質的に、１～１０ｇの組成物、１～８ｇ、好ましくは１．５～６ｇの組成物からなる。
１つの実施形態において、経口剤形は、本質的に、約４ｇ～約４．５ｇの組成物、好ましくは約４．２２ｇの組成物からなる。
１つの実施形態において、経口剤形は、本質的に、４ｇ～４．５ｇの組成物、好ましくは４．２２ｇの組成物からなる。
１つの実施形態において、経口剤形は、本質的に、約２ｇ～約２．５ｇの組成物、好ましくは約２．２１ｇの組成物からなる。
１つの実施形態において、経口剤形は、本質的に、２ｇ～２．５ｇの組成物、好ましくは２．２１ｇの組成物からなる。
１つの実施形態において、経口剤形は、５０～２５００ｍｇのブロメライン、好ましくは７２０ｍｇのブロメライン、４５～１８００ｍｇの酪酸ナトリウム、好ましくは３００ｍｇの酪酸ナトリウム、６７．５～２７００ｍｇのＬ－スレオニン、好ましくは４５０ｍｇのＬ－スレオニン、４～１５０μｇのビタミンＤ、好ましくは２５μｇのビタミンＤ、及び任意で３～１５０ｍｇのメントール、好ましくは４８ｍｇのメントールを含む。
１つの実施形態において、経口剤形は、約４６０ｍｇ～約５００ｍｇのブロメライン、好ましくは約４８０ｍｇのブロメライン、約５５０ｍｇ～約６５０ｍｇの酪酸ナトリウム、好ましくは約６００ｍｇの酪酸ナトリウム、約８５０ｍｇ～約９５０ｍｇのＬ－スレオニン、好ましくは約９００ｍｇのＬ－スレオニン、約１０μｇ～約１５μｇのビタミンＤ、好ましくは約１２．５μｇのビタミンＤ、及び任意で約６５ｍｇ～約７５ｍｇのメントール、好ましくは約７０ｍｇのメントールを含む。
１つの実施形態において、経口剤形は、４６０ｍｇ～５００ｍｇのブロメライン、好ましくは４８０ｍｇのブロメライン、５５０ｍｇ～６５０ｍｇの酪酸ナトリウム、好ましくは６００ｍｇの酪酸ナトリウム、８５０ｍｇ～９５０ｍｇのＬ－スレオニン、好ましくは９００ｍｇのＬ－スレオニン、１０μｇ～１５μｇのビタミンＤ、好ましくは１２．５μｇのビタミンＤ、及び任意で６５ｍｇ～７５ｍｇのメントール、好ましくは約７０ｍｇのメントールを含む。
１つの実施形態において、経口剤形は、本質的に、約４６０ｍｇ～約５００ｍｇのブロメライン、好ましくは約４８０ｍｇのブロメライン、約５５０ｍｇ～約６５０ｍｇの酪酸ナトリウム、好ましくは約６００ｍｇの酪酸ナトリウム、約８５０ｍｇ～約９５０ｍｇのＬ－スレオニン、好ましくは約９００ｍｇのＬ－スレオニン、約１０μｇ～約１５μｇのビタミンＤ、好ましくは約１２．５μｇのビタミンＤ、及び任意で約６５ｍｇ～約７５ｍｇのメントール、好ましくは約７０ｍｇメントールからなる。
１つの実施形態において、経口剤形は、本質的に、４６０ｍｇ～５００ｍｇのブロメライン、好ましくは４８０ｍｇのブロメライン、５５０ｍｇ～６５０ｍｇの酪酸ナトリウム、好ましくは６００ｍｇの酪酸ナトリウム、８５０ｍｇ～９５０ｍｇのＬ－スレオニン、好ましくは９００ｍｇのＬ－スレオニン、１０μｇ～１５μｇのビタミンＤ、好ましくは１２．５μｇのビタミンＤ、及び任意で６５ｍｇ～７５ｍｇのメントール、好ましくは約７０ｍｇメントールからなる。
１つの実施形態において、経口剤形は、約７００ｍｇ～約７４０ｍｇのブロメライン、好ましくは約７２０ｍｇのブロメライン、約５５０ｍｇ～約６５０ｍｇの酪酸ナトリウム、好ましくは約６００ｍｇの酪酸ナトリウム、約８５０ｍｇ～約９５０ｍｇのＬ－スレオニン、好ましくは約９００ｍｇのＬ－スレオニン、約１０μｇ～約１５μｇのビタミンＤ、好ましくは約１２．５μｇのビタミンＤ、及び任意で約１００ｍｇ～約１１０ｍｇのメントール、好ましくは約１０５ｍｇのメントールを含む。
１つの実施形態において、経口剤形は、７００ｍｇ～７４０ｍｇのブロメライン、好ましくは７２０ｍｇのブロメライン、５５０ｍｇ～６５０ｍｇの酪酸ナトリウム、好ましくは６００ｍｇの酪酸ナトリウム、８５０ｍｇ～９５０ｍｇのＬ－スレオニン、好ましくは９００ｍｇのＬ－スレオニン、１０μｇ～１５μｇのビタミンＤ、好ましくは１２．５μｇのビタミンＤ、及び任意で１００ｍｇ～１１０ｍｇのメントール、好ましくは１０５ｍｇのメントールを含む。
１つの実施形態において、経口剤形は、本質的に、約７００ｍｇ～約７４０ｍｇのブロメライン、好ましくは約７２０ｍｇのブロメライン、約５５０ｍｇ～約６５０ｍｇの酪酸ナトリウム、好ましくは約６００ｍｇの酪酸ナトリウム、約８５０ｍｇ～約９５０ｍｇのＬ－スレオニン、好ましくは約９００ｍｇのＬ－スレオニン、約１０μｇ～約１５μｇのビタミンＤ、好ましくは約１２．５μｇのビタミンＤ、及び任意で約１００ｍｇ～約１１０ｍｇのメントール、好ましくは約１０５ｍｇのメントールからなる。
１つの実施形態において、経口剤形は、本質的に、７００ｍｇ～７４０ｍｇのブロメライン、好ましくは７２０ｍｇのブロメライン、５５０ｍｇ～６５０ｍｇの酪酸ナトリウム、好ましくは６００ｍｇの酪酸ナトリウム、８５０ｍｇ～９５０ｍｇのＬ－スレオニン、好ましくは９００ｍｇのＬ－スレオニン、１０μｇ～１５μｇのビタミンＤ、好ましくは１２．５μｇのビタミンＤ、及び任意で１００ｍｇ～１１０ｍｇのメントール、好ましくは１０５ｍｇのメントールからなる。
１つの実施形態において、経口剤形は、被験者あたり１日２回、４．２２ｇの剤形を投与するように処方される。この実施形態において、経口剤形は、合計１日用量であるメントール１４０ｍｇ、ブロメライン９６０ｍｇ、スレオニン１８００ｍｇ、酪酸ナトリウム１２００ｍｇ、及びコレカルシフェロール２５μｇを提供する。
別の実施形態において、経口剤形は、被験者あたり１日２回、２．２１ｇを投与するように処方される。この実施形態において、経口剤形は、合計１日量であるメントール７０ｍｇ、ブロメライン４８０ｍｇ、スレオニン９００ｍｇ、酪酸ナトリウム６００ｍｇ、及びコレカルシフェロール１２．５μｇを提供する。
１つの実施形態において、経口剤形は、小腸を標的とする１４４０ｍｇのブロメライン、及び２８８ｍｇのメントールを含む少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせと、結腸を標的とした用量の１２００ｍｇの酪酸（ナトリウム塩）、１８００ｍｇのＬ－スレオニン、及び０．０２５ｍｇのビタミンＤ３を含む少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせとを含む。
１つの実施形態において、経口剤形は、小腸を標的とする約４８０ｍｇのブロメライン、及び約７０ｍｇのメントールを含む少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせと、結腸を標的とした用量の約６００ｍｇの酪酸（ナトリウム塩）、約９００ｍｇのＬ－スレオニン、及び約０．０１２５ｍｇのビタミンＤ３を含む少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせとを含む。
１つの実施形態において、経口剤形は、小腸を標的とする４８０ｍｇのブロメライン、及び７０ｍｇのメントールを含む少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせと、結腸を標的とした用量の６００ｍｇの酪酸（ナトリウム塩）、９００ｍｇのＬ－スレオニン、及び０．０１２５ｍｇのビタミンＤ３を含む少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせとを含む。
１つの実施形態において、経口剤形は、本質的に、小腸を標的とする約４８０ｍｇのブロメライン、及び約７０ｍｇのメントールを含む少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせと、結腸を標的とした用量の約６００ｍｇの酪酸（ナトリウム塩）、約９００ｍｇのＬ－スレオニン、及び約０．０１２５ｍｇのビタミンＤ３を含む少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせとからなる。
１つの実施形態において、経口剤形は、本質的に、小腸を標的とする４８０ｍｇのブロメライン、及び７０ｍｇのメントールを含む少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせと、結腸を標的とした用量の６００ｍｇの酪酸（ナトリウム塩）、９００ｍｇのＬ－スレオニン、及び０．０１２５ｍｇのビタミンＤ３を含む少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせとからなる。
１つの実施形態において、経口剤形は、小腸を標的とする約９６０ｍｇのブロメライン、及び約１４０ｍｇのメントールを含む少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせと、結腸を標的とした用量の約１２００ｍｇの酪酸（ナトリウム塩）、約１８００ｍｇのＬ－スレオニン、及び約０．０２５ｍｇのビタミンＤ３を含む少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせとを含む。
１つの実施形態において、経口剤形は、小腸を標的とする９６０ｍｇのブロメライン、及び１４０ｍｇのメントールを含む少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせと、結腸を標的とした用量の１２００ｍｇの酪酸（ナトリウム塩）、１８００ｍｇのＬ－スレオニン、及び０．０２５ｍｇのビタミンＤ３を含む少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせとを含む。
１つの実施形態において、経口剤形は、本質的に、小腸を標的とする約９６０ｍｇのブロメライン、及び約１４０ｍｇのメントールを含む少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、それらの任意の組み合わせと、結腸を標的とした用量の約１２００ｍｇの酪酸（ナトリウム塩）、約１８００ｍｇのＬ－スレオニン、及び約０．０２５ｍｇのビタミンＤ３を含む少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせとからなる。
１つの実施形態において、経口剤形は、本質的に、小腸を標的とする９６０ｍｇのブロメライン、及び１４０ｍｇのメントールを含む少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせと、結腸を標的とした用量の１２００ｍｇの酪酸（ナトリウム塩）、１８００ｍｇのＬ－スレオニン、及び０．０２５ｍｇのビタミンＤ３を含む少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせとからなる。
１つの実施形態において、経口剤形は、表１に示されるように、腸内ミクロビオーム内に含まれる腸細胞及び細菌あたりの成分の濃度を提供する。
１つの実施形態において、経口剤形は、１つ以上の丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせを含む。
１つの実施形態において、経口剤形は、２つの異なるタイプの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子を含む、或いは本質的にそれらからなる組成物を含み、ここにおいて、それぞれの異なるタイプは、その内容物を胃腸管の異なる部分に放出するように処方される。１つの実施形態において、胃腸管の異なる部分は、十二指腸（本明細書では「上部腸」とも呼ばれる）、及び結腸（本明細書では「下部腸」とも呼ばれる）である。
出願人は、驚くべきことに、組成物の成分が２つの異なるタイプの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子（本明細書ではタイプＡ、及びタイプＢと呼ばれる）に処方される場合、本発明の組成物の有効性が増加することを見出した。ここにおいて、各タイプは、それらに含まれる成分を腸の特定部分に送達するために処方される。
１つの例において、組成物の成分が共に働いて、上部腸（タイプＡ）における炎症の痛みを軽減し、下部腸（タイプＢ）における密着結合の機能とムチン生成を回復するように、上部、及び下部腸（タイプＡ）の至る所で同時に作用することで、ＩＢＤ、及び／又はＩＢＳの症状は軽減される。出願人によって考案されたこのアプローチの予想外の恩恵は、マウスで得られた内視鏡結果（実施例１１及び１２）、及びその組織病理学（実施例１４）における改善にはっきりと見ることができる。
１つの実施形態において、２つの異なるタイプの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子は、タイプＡ、及びタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子であり、ここにおいて、タイプＡ及びタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子はそれぞれ、本明細書に記載の組成物の少なくとも１つの成分、好ましくは少なくとも２つの成分を含む。
１つの実施形態において、タイプＡ、及びタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子はそれぞれ、組成物の少なくとも１つの異なる成分、好ましくは組成物の少なくとも２つの互いに異なる成分を含む。
１つの実施形態において、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子は、ブロメラインを含む、又は本質的にブロメラインからなる。１つの実施形態において、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子は、メントールを含む。
１つの実施形態において、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子は、対象の回腸／小腸における約１０～４０ｆｇ／細菌、約１５～３５ｆｇ／細菌、約２０～３０ｆｇ／細菌、好ましくは約２８ｆｇ／細菌、より好ましくは約２５ｆｇ／細菌、さらに好ましくは約２０ｆｇ／細菌のブロメラインの用量を提供する、ブロメライン量を含む。１つの実施形態において、用量は有効量である。
１つの実施形態において、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子は、対象の回腸／小腸における１０～４０ｆｇ／細菌、１５～３５ｆｇ／細菌、２０～３０ｆｇ／細菌、好ましくは２８ｆｇ／細菌、より好ましくは２５ｆｇ／細菌、さらに好ましくは２０ｆｇ／細菌のブロメラインの用量を提供する、ブロメライン量を含む。１つの実施形態において、用量は有効量である。
１つの実施形態において、有効量は、対象の回腸／小腸における約１０～４０ｆｇ／細菌、約１５～３５ｆｇ／細菌、約２０～３０ｆｇ／細菌、好ましくは約２８ｆｇ／細菌、より好ましくは約２５ｆｇ／細菌、さらに好ましくは約２０ｆｇ／のブロメラインである。
１つの実施形態において、有効量は、対象の回腸／小腸における１０～４０ｆｇ／細菌、１５～３５ｆｇ／細菌、２０～３０ｆｇ／細菌、好ましくは２８ｆｇ／細菌、より好ましくは２５ｆｇ／細菌、さらに好ましくは２０ｆｇ／のブロメラインである。
１つの実施形態において、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、対象の回腸／小腸における約２５～１２５ｐｇ／回腸腸細胞（ｐｇ／ｉｅ）、約５０～１００ｐｇ／ｉｅ、約６０～約９０ｐｇ／ｉｅ、約７０～８０ｐｇ／ｉｅ、好ましくは約７５ｐｇ／ｉｅのブロメラインの用量を提供する、ブロメライン量を含む。１つの実施形態において、用量は有効量である。
１つの実施形態において、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、対象の回腸／小腸における２５～１２５ｐｇ／回腸腸細胞（ｐｇ／ｉｅ）、５０～１００ｐｇ／ｉｅ、６０～９０ｐｇ／ｉｅ、７０～８０ｐｇ／ｉｅ、好ましくは７５ｐｇ／ｉｅのブロメラインの用量を提供する、ブロメライン量を含む。１つの実施形態において、用量は有効量である。
１つの実施形態において、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、約４００ｍｇ～１１００ｍｇのブロメライン、約６００ｍｇ～１０００ｍｇ、約７００ｍｇ～９００ｍｇ、約７５０ｍｇ～８５０ｍｇ、好ましくは約８００ｍｇのブロメラインを含む、又は本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、４００ｍｇ～１１００ｍｇのブロメライン、６００ｍｇ～１０００ｍｇ、７００ｍｇ～９００ｍｇ、７５０ｍｇ～８５０ｍｇ、好ましくは８００ｍｇのブロメラインを含む、又は本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、約４６０ｍｇ～約５００ｍｇのブロメライン、約４７０ｍｇ～約４９０ｍｇ、約４７５ｍｇ～約４８５ｍｇ、好ましくは約４８０ｍｇのブロメラインを含む、又は本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、４６０ｍｇ～５００ｍｇのブロメライン、４７０ｍｇ～４９０ｍｇ、４７５ｍｇ～４８５ｍｇ、好ましくは４８０ｍｇのブロメラインを含む、又は本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、約７００ｍｇ～約７４０ｍｇのブロメライン、約７１０ｍｇ～約７３０ｍｇ、約７１５ｍｇ～約７２５ｍｇ、好ましくは約７２０ｍｇのブロメラインを含む、又は本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、７００ｍｇ～７４０ｍｇのブロメライン、７１０ｍｇ～７３０ｍｇ、７１５ｍｇ～７２５ｍｇ、好ましくは７２０ｍｇのブロメラインを含む、又は本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、メントールを含む。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子は、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－メチオニン又はそれらの任意の組み合わせと、酪酸ナトリウムと、ビタミンＤとを含む。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子は、Ｌ－スレオニン、酪酸ナトリウム、及びビタミンＤを含む。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子は、本質的に、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－メチオニン又はそれらの任意の組み合わせと、酪酸ナトリウムと、ビタミンＤとからなる。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子は、本質的に、Ｌ－スレオニン、酪酸ナトリウム、及びビタミンＤからなる。１つの実施形態において、ビタミンＤはビタミンＤ３である。
１つの実施形態において、ビタミンＤはビタミンＤ３である。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、約６７．５～約２７００ｍｇ、好ましくは約１１２．５～約２２５０ｍｇ、約２５０～約２０００ｍｇ、約５００～約１９００ｍｇ、約９００～約１８００ｍｇ、より好ましくは約１８００ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせを含む、若しくは本質的にそれらからなる。１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、約１８００ｍｇ、好ましくは約９００ｍｇ、より好ましくは約４５０ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせを含む、若しくは本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、約６７．５～約２７００ｍｇ、好ましくは約１１２．５～約２２５０ｍｇ、約２５０～約２０００ｍｇ、約５００～約１９００ｍｇ、約９００～約１８００ｍｇ、より好ましくは約１８００ｍｇのＬ－スレオニンを含む、又は本質的にそれらからなる。１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、約１８００ｍｇ、好ましくは約９００ｍｇ、より好ましくは約４５０ｍｇのＬ－スレオニンを含む、又は本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、６７．５～２７００ｍｇ、好ましくは１１２．５～２２５０ｍｇ、２５０～２０００ｍｇ、５００～１９００ｍｇ、９００～１８００ｍｇ、より好ましくは、１８００ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせを含む、若しくは本質的にそれらからなる。１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、１８００ｍｇ、好ましくは９００ｍｇ、より好ましくは４５０ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせを含む、若しくは本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、６７．５～２７００ｍｇ、好ましくは１１２．５～２２５０ｍｇ、２５０～２０００ｍｇ、５００～１９００ｍｇ、９００～１８００ｍｇ、より好ましくは１８００ｍｇのＬ－スレオニンを含む、又は本質的にそれらからなる。１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、１８００ｍｇ、好ましくは９００ｍｇ、より好ましくは４５０ｍｇのＬ－スレオニンを含む、又は本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、約４５～１８００ｍｇの酪酸ナトリウム、好ましくは約７５～約１６５０ｍｇ、約２５０～約１５００ｍｇ、約５００～約１４００ｍｇ、約７５０～約１５００ｍｇ、約１０００～約１４００ｍｇ、約１１００～約１３００ｍｇ、より好ましくは約１２００ｍｇの酪酸ナトリウムを含む、又は本質的にそれらからなる。１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、約１２００ｍｇ、好ましくは約６００ｍｇ、より好ましくは約３００ｍｇの酪酸ナトリウムを含む。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、４５～１８００ｍｇの酪酸ナトリウム、好ましくは７５～１６５０ｍｇ、２５０～１５００、５００～１４００、７５０～１５００、１０００～１４００、１１００～１３００ｍｇ、より好ましくは１２００ｍｇの酪酸ナトリウムを含む、又は本質的にそれらからなる。１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、１２００ｍｇ、好ましくは６００ｍｇ、より好ましくは３００ｍｇの酪酸ナトリウムを含む、又は本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、約４～約１５０μｇ、約６．５～約１４０μｇ、約１３～約１３０μｇ、約２５～約１２０μｇ、約３５～約１１０μｇ、約５０～約１０５μｇ、好ましくは約１００μｇのビタミンＤを含む、又は本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、４～１５０μｇ、６．５～１４０μｇ、１３～１３０μｇ、２５～１２０μｇ、３５～１１０μｇ、５０～１０５μｇ、好ましくは１００μｇのビタミンＤを含む、又は本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、約１～約５０μｇのビタミンＤ、好ましくは約１０～約４０μｇ、約２０～約３０μｇ、より好ましくは約２５μｇのビタミンＤを含む、又は本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、１～５０μｇのビタミンＤ、好ましくは１０～４０μｇ、２０～３０μｇ、より好ましくは２５μｇのビタミンＤを含む、又は本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、約５～約３０μｇのビタミンＤ、好ましくは約１０～約２５μｇ、約１２～約１３μｇ、より好ましくは約１２．５μｇのビタミンＤを含む、又は本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、５～３０μｇのビタミンＤ、好ましくは１０～２５μｇ、１２～１３μｇ、より好ましくは１２．５μｇのビタミンＤを含む、又は本質的にそれらからなる。
１つの実施形態において、ビタミンＤはコレカルシフェロール（ビタミンＤ３）である。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、タイプＢ１及びＢ２といったサブタイプの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子である、サブタイプの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子を含み得る。
１つの実施形態において、タイプＢ１の丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子に含まれるＬ－スレオニン、及び酪酸ナトリウム成分を含み、タイプＢ２の丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子に含まれるビタミンＤ成分を含む。
サブタイプＢ１、及びＢ２の丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子を含む、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子という追加の実施形態は、本明細書に記載の全ての特定の実施形態のオプションとして本明細書において具体的に企図され、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子として提示される。
いくつかの実施形態において、タイプＡ、及び／又はタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子は、持続放出、及び遅延放出を含む、１つ以上の成分の時差放出のために改変され得る。当業者は、当技術分野で知られ、記載されている徐放性剤形のいずれかに従って経口剤形を設計できる（例えば、参照により本明細書に組み込まれた、米国特許第７１０８８６５号の開示を参照。）。
いくつかの実施形態では、丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子は、水溶性、水不溶性、又は腸溶性のコーティングを含む。
胃のｐＨでは比較的不溶性で不浸透性であるが、小腸及び結腸のｐＨではより可溶性で透過性である腸溶性及びその他のｐＨ感受性ポリマーとしては、ポリアクリルアミド；炭水化物の酸フタレート、酢酸アミロースフタレート、酢酸セルロースフタレート、その他のフタル酸セルロースエステル、フタル酸セルロースエーテル、ヒドロキシプロピルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルエチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メチルセルロースフタレート、フタル酸ポリ酢酸ビニル、フタル酸水素ポリ酢酸ビニル、酢酸セルロースフタレートナトリウム、デンプン酸フタレート、スチレン－マレイン酸ジブチルフタレートコポリマー、スチレン－マレイン酸ポリ酢酸ビニルフタレートコポリマーなどのフタル酸誘導体；スチレン、及びマレイン酸コポリマー；アクリル酸、及びアクリル酸エステルコポリマー、ポリメタクリル酸、及びそのエステル、ポリアクリル酸メタクリル酸コポリマーなどのポリアクリル酸誘導体；シェラック；並びに酢酸ビニル、及びクロトン酸コポリマーが含まれる。好ましいｐＨ感受性ポリマーとしては、シェラック；フタル酸誘導体、特に酢酸セルロースフタレート、フタル酸ポリ酢酸ビニル、及びヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート；ポリアクリル酸誘導体、特にアクリル酸、及びアクリル酸エステルコポリマーと混合したポリメタクリル酸メチル；並びに酢酸ビニル及びクロトン酸コポリマーが含まれる。
１つの実施形態において、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子は、腸溶コーティングを含む。１つの実施形態において、腸溶コーティングは、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子上に外層を形成する。いくつかの実施形態において、腸溶コーティングは、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子内の内層内に含まれる。
１つの実施形態において、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子は、それに含まれる成分を小腸の上部で放出する賦形剤と共に処方される。１つの実施形態において、賦形剤は、１つ以上の希釈剤、結合剤、潤滑剤、及び崩壊剤を含む。
１つの実施形態において、希釈剤は、微結晶セルロース、リン酸二カルシウム二水和物、又はそれらの組み合わせである。１つの実施形態において、崩壊剤は、クロスポビドン、クロスカルメロースナトリウム、又はそれらの組み合わせである。１つの実施形態において、ポリマーは、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートＨＰ５５、又はＥｕｄｒａｇｉｔＬ１００－５５である。１つの実施形態において、潤滑剤は、ステアリン酸マグネシウム、タルク、又はそれらの組み合わせである。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子は、小腸の下部に含まれる成分を放出する賦形剤とともに処方される。１つの実施形態において、賦形剤は、１つ以上の希釈剤、結合剤、潤滑剤、及び崩壊剤を含む。
１つの実施形態において、希釈剤は、微結晶セルロース、リン酸二カルシウム二水和物、又はそれらの組み合わせである。１つの実施形態において、崩壊剤は、クロスポビドン、クロスカルメロースナトリウム、又はそれらの組み合わせである。１つの実施形態において、ポリマーは、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ＥｕｄｒａｇｉｔＳ１００、シェラック、又はＥｕｄｒａｇｕａｒｄ ｂｉｏｔｅｃである。１つの実施形態において、潤滑剤は、ステアリン酸マグネシウム、タルク、又はそれらの組み合わせである。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子は、腸溶コーティングを含む。１つの実施形態において、腸溶コーティングは、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子上に外層を形成する。いくつかの実施形態では、腸溶コーティングは、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子内の内層内に含まれる。
重要なのは、腸溶コーティングが、対象の胃腸（ＧＩ）管の領域において、丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子から、それに含まれる組成物の成分をＧＩ管に放出するために発明者によって特定された最適な場所で溶解するように設計されていることである。
１つの実施形態において、腸溶コーティングは、約ｐＨ６．０で、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子から溶解する。１つの実施形態において、ｐＨは６．０未満である。
１つの実施形態において、腸溶コーティングは、所定のｐＨでタイプＡの微粒子から溶解する。１つの実施形態において、所定のｐＨは約ｐＨ６．０である。１つの実施形態において、所定のｐＨは６．０を超えている。
１つの実施形態において、腸溶コーティングは、対象の回腸／小腸で、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子から、ブロメライン及びメントールを放出するように処方される。
１つの実施形態において、腸溶コーティングは、対象の回腸／小腸内で、ブロメライン及びメントールを放出しながら、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子から溶解する。
１つの実施形態において、腸溶コーティングは、中性ｐＨで、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子から溶解する。１つの実施形態において、ｐＨは６．５を超える。１つの実施形態において、ｐＨは約７．０である。
１つの実施形態において、腸溶コーティングは、所定のｐＨでタイプＢの微粒子から溶解する。１つの実施形態において、所定のｐＨは中性ｐＨである。１つの実施形態において、ｐＨは６．５を超える。１つの実施形態において、ｐＨは約７．０である。
１つの実施形態において、腸溶コーティングは、対象の結腸付近、及び／又は結腸内で、丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子から、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、酪酸ナトリウムと、ビタミンＤとを放出するように処方される。
１つの実施形態において、腸溶コーティングは、対象の結腸付近、及び／又は結腸内で、丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子から、Ｌ－スレオニン、酪酸ナトリウム、及びビタミンＤを放出するように処方される。
１つの実施形態において、腸溶コーティングは、対象の結腸付近、及び／又は結腸内で、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、酪酸ナトリウムと、ビタミンＤとを放出しながら、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子から溶解する。
１つの実施形態において、腸溶コーティングは、対象の結腸付近、及び／又は結腸内で、Ｌ－スレオニン、酪酸ナトリウム、及びビタミンＤを放出しながら、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子から溶解する。
いくつかの実施形態において、腸溶コーティングは、組成物の成分をＧＩ管の所定の領域に送達するように設計されている。いくつかの実施形態において、腸溶コーティングは、組成物の成分をＧＩ管の所定の領域に送達する。
いくつかの実施形態において、腸溶コーティングは、対象のＧＩ管内の所定のｐＨで、丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子から溶解して、そこに含まれる組成物の成分を放出するように設計される。いくつかの実施形態において、腸溶コーティングは、対象のＧＩ管内の所定のｐＨで溶解する。
いくつかの実施形態において、タイプＡ、及び／又はタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子又は微粒子は、対象のＧＩ管内の細菌に、組成物の少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらに好ましくは少なくとも４つ、さらに好ましくは５つの成分の有効量を送達するように処方される。
いくつかの実施形態において、異なるタイプの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子は、腸溶コーティング溶解時、対象のＧＩ管内の細菌に、組成物の少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらに好ましくは少なくとも４つ、さらに好ましくは５つの成分の有効量を送達する。
いくつかの実施形態において、有効量の送達は、対象の回腸／小腸への送達を含む。いくつかの実施形態において、有効量は、対象の回腸／小腸における１０～４０ｆｇ／細菌、１５～３５ｆｇ／細菌、２０～３０ｆｇ／細菌、好ましくは２８ｆｇ／細菌、より好ましくは２５ｆｇ／細菌のブロメラインである。
１つの実施形態において、有効量は、対象の回腸／小腸における１０～４０ｆｇ／細菌、１５～３５ｆｇ／細菌、２０～３０ｆｇ／細菌、好ましくは２８ｆｇ／細菌、より好ましくは２５ｆｇ／細菌、さらに好ましくは２０ｆｇ／細菌のブロメラインである。
いくつかの実施形態において、有効量の送達は、対象の結腸への送達を含む。いくつかの実施形態において、有効量は、対象の回腸／小腸における２５～１２５ｐｇ／回腸腸細胞（ｐｇ／ｉｅ）、５０～１００ｐｇ／ｉｅ、６０～９０ｐｇ／ｉｅ、７０～８０ｐｇ／ｉｅ、好ましくは７５ｐｇ／ｉｅのブロメラインである。
１つの実施形態において、少なくとも第１の１つの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子又は微粒子は、対象の回腸／小腸における２５～１２５ｐｇ／回腸腸細胞（ｐｇ／ｉｅ）、５０～１００ｐｇ／ｉｅ、６０～９０ｐｇ／ｉｅ、７０～８０ｐｇ／ｉｅ、好ましくは７５ｐｇ／ｉｅの有効量を提供するのに十分なブロメライン量を含む。
当業者によって理解されるように、ＧＩ管内の所定の位置で溶解するいくつかの異なるタイプの腸溶コーティングは、例えば、参照により本明細書に組み込まれている（Ａｌｌｅｎ）及び（Ｅｎｃｙｃｌｏｐａｅｄｉａ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）等、従来の製剤慣行による腸溶コーティングのガイドラインに従うことによって、製薬技術の当業者によって調製されることができる。そのような腸溶コーティングの調製は当業界の範囲内であると考えられる。例えば、本明細書に記載の組成物は、ブロマリンの結腸を標的とした送達を容易にするように処方される。結腸を標的とした経口創薬システムは、当技術分野でよく理解されている（Ａｍｉｄｏｎ、２０１６）。
本出願は、本発明の組成物の成分が対象のＧＩ管のどこに放出されるかに関して、実質的な開示を提供する。よって、当業者は、共通の一般知識と組み合わせて、本出願の開示で提供される指示に従って、適切な腸溶コーティングを処方し、対象の回腸／小腸にブロメライン、及びメントール成分を放出させることができると考えられる。
例えば、組成物の成分は、即時放出又は徐放性の担体であってよい、任意の薬学的に許容可能な担体に分散させることができる。担体としては、当技術分野で知られた、微結晶セルロース（ＭＣＣ）、デキストラン、コーンスターチ、小麦粉、タルク、スクロース、マンニトール、ラクトース、炭酸カルシウム、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリエチレンオキシド、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）等を含んでよい。
１つの非限定的な例において、担体は、固体又は半固体に圧縮され、次いで、ポリマーコーティングでコーティングされて、成分の放出プロファイルを変更し得る。コーティングは、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリビニルポリピロリドン（クロスポビドン）、又はポリエチレングリコールを含む水溶性ポリマー、或いはセルロースのエーテル類、セルロースのエステル類、酢酸セルロース、エチルセルロース、ポリ酢酸ビニル、エチルアクリレート、及びメチルメタクリレートに基づく中性コポリマー、第４級アンモニウム基を有するアクリル酸、及びメタクリル酸エステルのコポリマー、ｐＨ非感受性のアンモニオメタクリル酸コポリマーを含む水不溶性ポリマーのいずれか、及びそれらの混合物を含み得る。コーティングは、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、又はそのような天然ポリマーの組み合わせも含み得る。例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）と組み合わせたメチルセルロースの使用はよく知られている。
様々な経口剤形の標準的な成分及び調製方法は、参照により本明細書に組み込まれた「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」に記載されている。追加の賦形剤としては、潤滑剤、崩壊剤などが含まれるが、これらに限定されない。
１つの実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に記載のタイプＡ、及びタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子の混合物を含んだ本明細書に記載の単位剤形、好ましくは本明細書に記載の経口剤形を単一の容器に含み得る。
１つの実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に記載のタイプＡ、又はタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子を含んだ本明細書に記載の単位剤形、好ましくは本明細書に記載の経口剤形を単一の容器に含み得る。
１つの実施形態において、容器は小袋である。１つの実施形態において、混合物は担体に懸濁される。１つの実施形態において、担体は、水、ジュース、人工のジュース、人工的に風味付けした飲料、動物性ミルク、乳清、乳清ベースの飲料、野菜ミルク、及びナッツミルクからなる群から選択される摂取可能な水性液体である。１つの実施形態において、担体は摂取可能なゲルである。１つの実施形態において、摂取可能なゲルはヨーグルトである。
１つの実施形態において、経口剤形は、タイプＡ及びタイプＢの粒子、又は微粒子、好ましくは微粒子を含む。
１つの実施形態において、経口剤形は、タイプＡ又はタイプＢの粒子、又は微粒子、好ましくは微粒子を含む。
１つの実施形態において、経口用量は、懸濁された微粒子を含む。１つの実施形態において、懸濁された微粒子は、液体又はゲルに懸濁される。
１つの実施形態において、経口用量は、分散した微粒子を含む。１つの実施形態において、分散した微粒子は、粉末に分散している。
１つの実施形態において、経口用量は、タイプＡ及びタイプＢの微粒子の混合物を単一の容器に含む。１つの実施形態において、混合物は担体に懸濁される。１つの実施形態において、担体は、水、ジュース、人工のジュース、人工的に風味付けした飲料、動物性ミルク、野菜ミルク、ナッツミルク、乳清、及び乳清ベースの飲料からなる群から選択される摂取可能な液体である。１つの実施形態において、担体は摂取可能なゲルである。１つの実施形態において、摂取可能なゲルはヨーグルトである。
１つの実施形態において、対象は哺乳動物である。１つの実施形態において、対象はヒトである。対象は、男性、女性、成人、老年、又は小児の対象を含む、任意の対象であってよい。いくつかの実施形態では、対象は、ＩＢＤ、特に潰瘍性大腸炎、又はクローン病の臨床診断を受けている。哺乳動物における獣医用途も、本明細書で企図されている。よって、いくつかの実施形態において、対象は、非ヒト哺乳動物である。１つの実施形態において、非ヒト哺乳動物は、猫又は犬である。
別の態様において、本発明は、組成物の少なくとも２つの成分が遅延放出製剤に含まれる、本質的に本発明の組成物からなる経口剤形に関する。
組成物の少なくとも２つの成分が遅延放出製剤に含まれる、本質的に本発明の組成物からなる本発明の経口剤形の実施形態としてここに具体的に企図されたものは、（ａ）～（ｄ）を含む組成物、及び約１～約６ｇの本発明の組成物を含む経口剤形である、ここに開示された本発明の態様内で企図された全ての実施形態である。
別の態様において、本発明は、単位剤形、好ましくは、総用量／８０ｋｇの人（ｍｇ／日）として示される、おおよその量、より好ましくはその量で、表１に記載の成分を含む、又は本質的にそれらからなる経口剤形に関し、ここにおいて、成分は、示されているタイプ、Ａ又はタイプＢのいずれかに含まれ、タイプＡ、及びタイプＢは、それぞれ小腸、及び大腸を標的とする、又はそれぞれ小腸、及び大腸に示される成分の放出のために処方される。
Figure 2022552510000001
別の態様において、本発明は、タイプＡ及びタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子を個別の部分として含む単位剤形に関し、ここにおいて、
タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、ブロメラインを含み、対象の小腸にブロメラインを放出するために処方され、ここにおいて、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、任意でメントールを含み、
タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、本質的に、酪酸ナトリウムと、１つ以上のＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニンと、ビタミンＤとからなり、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、対象の下部腸での放出のために処方されている。
別の態様において、本発明は、タイプＡ及びタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子を個別の部分として含む単位剤形に関し、ここにおいて、
タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、本質的に、７２０ｍｇのブロメラインからなり、対象の小腸にブロメラインを放出するために処方され、ここにおいて、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、任意で１４４ｍｇのメントールを含み、
タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、本質的に、６００ｍｇの酪酸ナトリウムと、９００ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、０．０１２５ｍｇのビタミンＤとからなり、酪酸ナトリウムと、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、ビタミンＤとを対象の下部腸に放出するために処方されている。
別の態様において、本発明は、タイプＡ及びタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子を個別の部分として含む単位剤形に関し、ここにおいて、
タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、本質的に、７２０ｍｇのブロメラインからなり、対象の小腸にブロメラインを放出するために処方され、ここにおいて、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、任意で１０５ｍｇのメントールを含み、
タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、本質的に、６００ｍｇの酪酸ナトリウムと、９００ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、０．０１２５ｍｇのビタミンＤとからなり、酪酸ナトリウムと、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、ビタミンＤとを対象の下部腸に放出するために処方されている。
別の態様において、本発明は、タイプＡ及びタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子を個別の部分として含む単位剤形に関し、ここにおいて、
タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、本質的に、４８０ｍｇのブロメラインからなり、対象の小腸にブロメラインを放出するために処方され、ここにおいて、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、任意で７０ｍｇのメントールを含み、
タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、本質的に、６００ｍｇの酪酸ナトリウムと、９００ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、０．０１２５ｍｇのビタミンＤとからなり、酪酸ナトリウムと、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、ビタミンＤとを対象の下部腸に放出するために処方されている。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、本質的に、６００ｍｇの酪酸ナトリウム、９００ｍｇのＬ－スレオニン、及び０．０１２５ｍｇのビタミンＤからなる。
別の態様において、本発明は、タイプＡ及びタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子を個別の部分として含む単位剤形に関し、ここにおいて、
タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、本質的に、１４４０ｍｇのブロメラインからなり、対象の小腸にブロメラインを放出するために処方され、ここにおいて、タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、任意で２８８ｍｇのメントールを含み、
タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、本質的に、１２００ｍｇの酪酸ナトリウムと、１８００ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、０．０２５ｍｇのビタミンＤとからなり、酪酸ナトリウムと、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、ビタミンＤとを対象の下部腸に放出するために処方されている。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、本質的に、１２００ｍｇの酪酸ナトリウム、１８００ｍｇのＬ－スレオニン、及び０．０２５ｍｇのビタミンＤからなる。
１つの実施形態において、タイプＡ、及びタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、互いに類似のサイズ、及び特性であり、治療される状態の段階に応じて任意の有用な比率で混合されてよい。
１つの実施形態において、タイプＡ、及びタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、１．９４（パートＡ）対２．２８（パートＢ）の比率（ｍｇでｗ／ｗ）で混合され、７０（メントール）：４８０（ブロメライン）：９００（スレオニン）：６００（酪酸ナトリウム）：０．０１２５（コレカルシフェロール）の成分比を提供する。
別の実施形態において、タイプＡ、及びタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、２．９１（パートＡ）対２．２８（パートＢ）の比率（ｍｇでｗ／ｗ）で混合され、１０５（メントール）：７２０（ブロメライン）：９００（スレオニン）：６００（酪酸ナトリウム）：０．０１２５（コレカルシフェロール）の成分比を提供する。
本発明者らはまた、驚くべきことに、酪酸ナトリウム、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤを含む組成物が、胃腸機能障害に関連する病変の治癒を促進することにより、ＩＢＤ／ＩＢＳの症状の治療に驚くほど効果的であることも見出した。それらの成分を本明細書に記載のように一緒に使用した際、酪酸ナトリウム、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤは、相乗的に作用して、腸の完全性に関与するいくつかのムチン遺伝子の発現を増加させ、腸内ミクロビオームの多様性を維持し、炎症を防ぐ。この効果は、実施例１０に示された結果において見ることができる。これらの同じ遺伝子は、成分が個々に服用された際に影響を受けなかった。酪酸ナトリウム、スレオニン、及びビタミンＤ３の組み合わせがマウスモデルにおける大腸炎の治療に有効であるというさらなる実証は、実施例１１に見出される。記載された実験におけるマウスでは、ＴＮＢＳによる誘導の７日後に測定された際、１３５％の有意な病変スコアの減少を示した。実施例１２から得られた結果は、酪酸ナトリウム、スレオニン、及びビタミンＤ３の組み合わせが、ＴＮＢＳで誘発された病変の治療において２ｍｇ／ｋｇのプレドニゾロンと同様の有効性を有することをさらに示している。
したがって、別の態様において、本発明は、酪酸ナトリウムと、１つ以上のＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン又はＬ－メチオニンと、ビタミンＤとを含む組成物に関する。
１つの実施形態において、組成物は、本質的に、酪酸ナトリウムと、１つ以上のＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン又はＬ－メチオニンと、ビタミンＤとからなる。
１つの実施形態において、組成物は、酪酸ナトリウムと、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、ビタミンＤとを対象の下部腸に放出するために処方される。
１つの実施形態において、組成物は、投与される際、酪酸ナトリウムと、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、ビタミンＤとを対象の下部腸に投与する。
１つの実施形態において、組成物は、酪酸ナトリウム、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤを含む。
１つの実施形態において、組成物は、本質的に、酪酸ナトリウム、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤからなる。
別の態様において、本発明は、６００ｍｇの酪酸ナトリウムと、９００ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、０．０１２５ｍｇのビタミンＤとを含む組成物に関する。
１つの実施形態において、組成物は、６００ｍｇの酪酸ナトリウム、９００ｍｇのＬ－スレオニン、及び０．０１２５ｍｇのビタミンＤを含む。
１つの実施形態において、組成物は、本質的に、６００ｍｇの酪酸ナトリウム、９００ｍｇのＬ－スレオニン、及び０．０１２５ｍｇのビタミンＤからなる。
１つの実施形態において、組成物は、酪酸ナトリウム、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤを対象の下部腸に放出するために処方される。
１つの実施形態において、組成物は、投与される際、酪酸ナトリウム、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤを対象の下部腸に投与する。
別の態様において、本発明は、１２００ｍｇの酪酸ナトリウムと、１８００ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、０．０２５ｍｇのビタミンＤとを含む組成物に関する。
１つの実施形態において、組成物は、１２００ｍｇの酪酸ナトリウム、１８００ｍｇのＬ－スレオニン、及び０．０２５ｍｇのビタミンＤを含む。
１つの実施形態において、組成物は、本質的に、１２００ｍｇの酪酸ナトリウム、１８００ｍｇのＬ－スレオニン、及び０．０２５ｍｇのビタミンＤからなる。
１つの実施形態において、組成物は、酪酸ナトリウム、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤを対象の下部腸に放出するために処方される。
１つの実施形態において、組成物は、投与される際、酪酸ナトリウム、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤを対象の下部腸に投与する。
酪酸ナトリウムと、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、ビタミンＤとを含む、及び／又は本質的にそれらからなる組成物に関する、本発明の各態様の実施形態として本明細書で具体的に企図されるものは、その決定、製剤、及び投与を含む、単位剤形、及び経口剤形に関する、本明細書に記載の全ての実施形態である。
別の態様において、本発明は、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子を含む単位剤形に関し、ここにおいて、
タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、酪酸ナトリウムと、１つ以上のＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニンと、ビタミンＤとを含む。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子又は微粒子は、本質的に、酪酸ナトリウムと、１つ以上のＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニンと、ビタミンＤとからなる。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子又は微粒子は、酪酸ナトリウムと、１つ以上のＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニンと、ビタミンＤとを対象の下部腸に放出するために処方される。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子又は微粒子は、酪酸ナトリウムと、１つ以上のＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニンと、ビタミンＤとを対象の下部腸に放出するために処方される。
１つの実施形態において、単位剤形は、投与される際、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子を対象の下部腸に投与する。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、酪酸ナトリウム、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤを含む。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、本質的に、酪酸ナトリウム、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤからなる。
１つの実施形態において、単位剤形は、本明細書に記載の経口剤形である。
別の態様において、本発明は、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子を含む単位剤形に関し、ここにおいて、
タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、本質的に、６００ｍｇの酪酸ナトリウムと、９００ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、０．０１２５ｍｇのビタミンＤとからなる。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、６００ｍｇの酪酸ナトリウム、９００ｍｇのＬ－スレオニン、及び０．０１２５ｍｇのビタミンＤを含む。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、本質的に、６００ｍｇの酪酸ナトリウム、９００ｍｇのＬ－スレオニン、及び０．０１２５ｍｇのビタミンＤからなる。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、酪酸ナトリウム、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤを対象の下部腸に放出するために処方される。
１つの実施形態において、単位剤形は、投与される際、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子を対象の下部腸に投与する。
１つの実施形態において、単位剤形は、本明細書に記載の経口剤形である。
別の態様において、本発明は、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子を含む単位剤形に関し、ここにおいて、
タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、本質的に、１２００ｍｇの酪酸ナトリウムと、１８００ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、０．０２５ｍｇのビタミンＤとからなる。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、１２００ｍｇの酪酸ナトリウム、１８００ｍｇのＬ－スレオニン、及び０．０２５ｍｇのビタミンＤを含む。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、本質的に、１２００ｍｇの酪酸ナトリウム、１８００ｍｇのＬ－スレオニン、及び０．０２５ｍｇのビタミンＤからなる。
１つの実施形態において、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、酪酸ナトリウム、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤを対象の下部腸に放出するために処方される。
１つの実施形態において、単位剤形は、投与される際、タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子を対象の下部腸に投与する。
酪酸ナトリウムと、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、ビタミンＤとを含む、及び／又は本質的にそれらからなる、組成物、並びにタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子に関する、上記の本発明の態様の実施形態として本明細書で具体的に企図されるものは、本明細書に記載のこのような形態の投与量、製剤、及び投与を含む、単位剤形、及び経口剤形に関する本明細書に明示された全ての実施形態である。
方法
別の態様において、本発明は、細菌を本発明の有効量の組成物、単位剤形、又は経口剤形と接触させることを含む、対象の胃腸管の細胞への細菌の付着を減少させる方法に関する。
別の態様において、本発明は、細菌を本発明の有効量の組成物、単位剤形、又は経口剤形と接触させることを含む、対象の胃腸管の細胞への細菌の侵入を減少させる方法に関する。
別の態様において、本発明は、治療上有効量の組成物、単位剤形、又は経口剤形を、必要とする対象に投与することを含む、対象における胃腸バリア完全性を改善する方法に関する。
１つの態様において、本発明は、治療上有効量の本発明の組成物、単位剤形、又は経口剤形を、必要とする対象に投与することを含む、ＩＢＤ又は、ＩＢＳを予防する、治療する、又は管理する方法に関する。
別の態様において、本発明は、治療上有効量の組成物、単位剤形、又は経口剤形を、必要とする対象に投与することを含む、ＩＢＤ、又はＩＢＳの少なくとも１つの症状を少なくとも部分的に軽減する方法に関する。
１つの実施形態において、少なくとも１つの症状は、下痢、腹痛、腹部けいれん、発熱、疲労、むかつき、鼓腸、腹部膨満、体重の減少、食欲減退、及び血便を含む群から選択される。
別の態様において、本発明は、治療上有効量の組成物、単位剤形、又は経口剤形を、必要とする対象に投与することを含む、ＩＢＤ、又はＩＢＳに関連する少なくとも１つのパラメータを改善する方法に関する。
１つの実施形態において、ＩＢＤ、又はＩＢＳに関連する少なくとも１つのパラメータは、以下を含む群から選択される。
・ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１７Ｆ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＴＬ１Ａ、ＴＧＦ－β、ＩＣＡＭ－１、ＩＦＮ－ガンマ、ＭＡＤＣＡＭ－１、及びＥ－セレクチンなどの炎症性マーカーの循環血清レベル
・カルプロテクチン、ラクトフェリン、リゾチームなどの炎症の糞便マーカー
・酸化ＬＤＬ、血清の被酸化性、Ｆ２－イソプロスタンなどの血清酸化ストレスマーカーの循環レベル
・プロテオバクテリア門腸内細菌科大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、プロテオバクテリア門腸内細菌科クレブシエラ属種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｓｐｐ．）、プロテオバクテリア門シュードモナス科シュードモナス属種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｐ．）、プロテオバクテリア門腸内細菌科サルモネラ属種（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｐｐ．）、プロテオバクテリア門デスルフォビブリオ科ビロフィラ・ワーズワーシア（Ｂｉｌｏｐｈｉｌｉａ ｗａｄｓｗｏｒｔｈｉａ）、プロテオバクテリア門デスルフォビブリオ科デスルフォビブリオ属種（Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏ ｓｐｐ．）、プロテオバクテリア門デスルフロモナス科デスルフロモナス属（Ｄｅｓｕｌｆｕｒｏｍｏｎａｓ ｓｐｐ．）、プロテオバクテリア門カンピロバクター科カンピロバクター・コンサイサス（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｃｏｎｃｉｓｕｓ）、プロテオバクテリア門カンピロバクター科カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）、バクテロイデス門バクテロイデス科腸内毒素原性バクテロイデス・フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ）、放線細菌門コリオバクテリウム科アトポビウム・パルブルム（Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ ｐａｒｖｕｌｕｍ）、及びフィルミクテス門クロストリジウム科クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に属する細菌など糞便試料中の生物学的病原体。
上記の態様において：
１つの実施形態において、対象は潰瘍性大腸炎に罹っている。１つの実施形態において、対象はクローン病に罹っている。１つの実施形態において、対象はＩＢＳに罹っている。１つの実施形態において、投与は経口投与である。
１つの実施形態において、投与は、食前約２０～９０分、好ましくは約３０～６０分、より好ましくは約４５分である。１つの実施形態において、投与は、食前２０～９０分、好ましくは３０～６０分、より好ましくは４５分である。
１つの実施形態において、投与は、食前１日１回～５回、好ましくは食前１日３回、より好ましくは食前１日２回である。１つの実施形態において、投与は朝食及び昼食の前である。１つの実施形態において、投与は朝食及び夕食の前である。
１つの実施形態において、投与は、食後約２０～９０分、好ましくは約３０～６０分、より好ましくは約４５分である。１つの実施形態において、投与は、食後２０～９０分、好ましくは３０～６０分、より好ましくは４５分である。
１つの実施形態において、投与は、食後１日１回～５回、好ましくは食後１日３回、より好ましくは食後１日２回である。１つの実施形態において、投与は朝食、及び昼食の後である。１つの実施形態において、投与は朝食、及び夕食の後である。
ＩＢＤ又はＩＢＳの予防、治療、又は管理を必要とする対象は、そのような状態と診断された、そのような状態の素因、及び／又はリスクを有する、或いはそのような状態から回復した、又は寛解にある対象である。対象は、遺伝的、及び／又は環境的要因のため、その状態の素因、及び／又はリスクを有し得る。
前記状態の予防、治療、又は管理に有効である、本明細書に記載の組成物、単位剤形、又は経口剤形の量は、年齢、体重、性別、過去の病歴など対象に固有の要因と同様、状態の性質、及び重症度、並びに抽出物が投与される経路によって異なる。
一般に、急性の状態の治療に用いられる組成物、又は剤形は、慢性の状態の治療に用いられるよりも多量の本発明のブロメライン組成物、単位投与量、又は経口投与量を含むであろう。急性、又は慢性状態のいずれかに対処するための特定の剤形の製剤は、本発明の開示と組み合わせて、薬局の当業者によって達成可能であると考えられる。
いくつかの実施形態において、対象は、非ヒト哺乳動物である。
１つの実施形態において、非ヒト哺乳動物への投与は、本明細書に記載の経口剤形を含む、又は本質的にそれからなる、本明細書に記載の組成物、又は単位剤形の投与を含む。
１つの実施形態において、非ヒト哺乳動物に投与される経口剤形は、対象１ｋｇあたりで約１～約５０ｍｇのブロメライン、好ましくは約５～約２５ｍｇ、約７～約２０ｍｇ、約９～約１８ｍｇ、約１０～約１５ｍｇ、約１３ｍｇのブロメラインを含む。
１つの実施形態において、非ヒト哺乳動物に投与される経口剤形は、対象１ｋｇあたり約９ｍｇ／ｋｇ、約１３ｍｇ又は約１８ｍｇのブロメラインを含む。
１つの実施形態において、非ヒト哺乳動物に投与される経口剤形は、対象１ｋｇあたり１～５０ｍｇのブロメライン、好ましくは５～２５ｍｇ、７～２０ｍｇ、９～１８ｍｇ、１０～１５ｍｇ、又は１３ｍｇのブロメラインを含む。
１つの実施形態において、非ヒト哺乳動物に投与される経口剤形は、対象１ｋｇあたり９ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ又は１８ｍｇのブロメラインを含む。
１つの実施形態において、経口剤形は、２００５年７月に米国保健福祉省食品医薬品局の医薬品評価研究センター（ＣＤＥＲ）が発行した業界向けガイダンス「成人健常ボランティアでの治療薬の初期臨床試験における最大安全開始用量の推定」（その全体は参照により本明細書に組み込まれている）を使用して、本明細書で企図されるヒト投与量から当技術分野で容認された変換に基づいて決定された初期用量である。
１つの実施形態において、ｍｇ／ｋｇでのヒト用量は１．８に乗算されて、ｍｇ／ｋｇでの犬の用量を提供する。
１つの実施形態において、非ヒト哺乳動物は家庭用ペットである。１つの実施形態において、家庭用ペットは、犬、猫、ラット、マウス、ハムスター、モルモット、フェレット、及びスナネズミからなる群から選択される。１つの実施形態において、家庭用ペットは犬である。１つの実施形態において、家庭用ペットは猫である。
特許明細書、他の外部文書、又は他の情報源について参照している本明細書において、これは一般に、本発明の特徴を議論するための文脈を提供することを目的としている。具体的に他の意味を示さない限り、そのような外部文書への言及は、そのような文書、又はそのような情報源が、いかなる法域においても、先行技術であること、又は当技術分野における技術常識の一部を形成することを承認するものとして解釈されるべきではない。
ここで、本発明は、以下の実施例を参照することにより、非限定的な方法で説明される。
１．実施例
一般的方法論
マクロファージ細胞の培養：ヒト単球ＴＨＰ－１細胞を、２－ｍＭＬ－グルタミン、１０ｍＭＨＥＰＥＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、４５００ｍｇ／Ｌグルコース、及び１５００ｍｇ／Ｌ重炭酸ナトリウムを含むように改変され、１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン、及び５ｍＭβ－メルカプトエタノールを添加したＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。細胞密度は、１×１０６／ｍｌを超えない。分化を誘導するために、ＴＨＰ－１細胞を５～１０×１０５細胞／ｃｍ２で２４ウェルプレートに播種し、２００ｎＭＰＭＡで４８時間処理した。４８時間後、実験を開始する前に、マクロファージを洗浄し、ＰＭＡ、及び抗生物質を含まない培地で２４時間増殖させた。細胞培養物を加湿した５％ＣＯ２インキュベーター内で３７℃で培養した。全ての実験は、継代数１０～３０以内の細胞で実施された。
Ｃａｃｏ－２細胞の培養：ヒト結腸直腸腺癌細胞株Ｃａｃｏ－２－ＢＢｅ１を、１０％ｖ／ｖウシ胎児血清（ＦＢＳ）、４ｍＭＬ－グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、及び１００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシンを添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で増殖、及び維持させた。全ての実験は、解凍後、継代数１２以内のＣａｃｏ－２－ＢＢｅ１細胞で実施された。細胞培養物を加湿した５％ＣＯ２インキュベーター内で３７℃で培養した。
Ｃａｃｏ－２：ＨＴ－２９－ＭＴＸ（７５：２５）共培養：この共培養モデルを使用して、ヒトの結腸上皮をシミュレートした（Ｈｉｌｇｅｎｄｏｒｈ Ｃ、２０００）。Ｃａｃｏ－２細胞（継代数８）とＨＴ－２９－ＭＴＸ細胞（継代数９）とを、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ中で７５：２５の比率で合わせた。合わせた細胞（６．４×１０４細胞／ｍｌ）を２５ｃｍ２に、フラスコあたり合計５ｍｌに播種した。共培養物は、４８時間ごとに培地を新しくしながら、５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で培養した。播種後１５日目に、共培養物の単層をＤＭＥＭで３回洗浄し、培地を５ｍｌの予熱した試験溶液に交換し、２４時間温置した。
細菌株及び増殖条件：ＨＭ９５、ＨＭ６０５、ＨＭ６１５、及びＨＭ４８４のＡＩＥＣ株をＬＢ培地で培養した。全ての細菌を空気中、３７℃で一晩増殖させた後、新鮮な培地中に１：１００で希釈してから、さらに２時間培養した。細菌は、Ａｂ６００ｎｍで０．８を測定することによって確認された中期対数期での実験で使用されました。
経上皮電気抵抗（ＴＥＲ）測定：Ｃａｃｏ－２の単層の完全性は、ＴＥＲ値を測定することによって決定された。密着結合は、傍細胞拡散に対する障壁として機能し、ここで、ＴＥＲは上皮細胞間の完全性のレベルを示す（Ｍｙｎｏｔｔ ＴＬ、１９９９）。ＴＥＲを測定する前に、細胞培養物を３０分間、室温に平衡化しました。ミリセル－ＥＲＳ装置（ミリポア、エシュボルン、ドイツ）を使用して、ＴＥＲを測定した。
サイトカイン及びＴＮＦ－αの定量：市販のＥＬＩＳＡキットを使用して、ＩＬ－８、ＩＬ－６及びＴＮＦ－αの濃度を決定した。培養の終了時、頂端及び基底外側の培地を回収し、４００ｇａｖで５分間遠心分離し、分析まで上清を－８０℃で凍結させた。凍結した上清を使用して、繰り返し解凍せずに行われた。全てのＥＬＩＳＡは、製造元の指示書に従って行われた。
Ｃａｃｏ－２／ＴＨＰ－１マクロファージ共培養システムの炎症モデル：Ｃａｃｏ－２－ＢＢｅ１細胞を、５×１０５細胞／ウェルで２４ウェルトランズウェルインサートプレート（４．６７ｃｍ２、孔径０．４μｍ）に播種した。細胞が完全に分化するまで（ＴＥＲ値＞１２００／ｃｍ２）、細胞培養培地を３日ごとに交換した。別の２４ウェルプレートに、ＴＨＰ－１単球細胞を１×１０６細胞／ウェルで播種し、２００ｎＭＰＭＡで４８時間分化させた後、実験前に通常培地で２４時間培養した。全ての培地をＲＰＭＩ１６４０に交換した後、分化したＣａｃｏ－２の単層を含む全てのトランズウェルインサートを、分化したＴＨＰ－１細胞を含むウェルに充填した。様々なブロメライン製剤の抗炎症効果を評価するための実験において、試験サンプル０．２５ｍｌを頂端側に２４時間適用し、同時にこのモデルの基底外側に５０ｎｇ／ｍｌのＬＰＳを加えた。２４時間の培養後、頂端側からの培養上清をＩＬ－８測定のために回収した。
炎症性メディエーターであるＬＰＳ、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－βで刺激されたＣａｃｏ－２分極単層の炎症モデル：分極化Ｃａｃｏ－２モデルは、前述したように生成された。細胞培養が＞１０００／ｃｍ２のＴＥＲベースラインに達した際に、５０ｎｇ／ｍｌＩＦＮ－β、１０μｇ／ｍｌＬＰＳ、及び５ｎｇ／ｍｌＴＮＦ－αを含む０．６ｍｌを基底外側の区画に添加することによって、単層を刺激した。刺激カクテルの添加直後に、０．２５ｍｌのＧａＲＰ±０～８０μｇ／ｍｌのブロメラインを頂端区画に適用した。２４時間の培養後、ＩＬ－８の定量用に頂端側から培養上清を回収した。
ゲンタマイシン保護アッセイ－細菌の取り込み、生存、複製の測定：ＴＨＰ－１細胞は、マクロファージあたり３０の細菌といった感染多重度（ＭＯＩ）で感染した。３時間の培養後、培地を除去し、１００μｇ／ｍｌゲンタマイシンを含む新鮮な細胞培養培地を添加して細胞外細菌を死滅させた。細胞内細菌の数を判定するために、１時間及び３時間で、培地を除去し、０．５ｍｌの１％Ｔｒｉｔｏｎ－１００（脱イオン水中）を各ウェルに５分間添加してＴＨＰ－１細胞を溶解した。この濃度のＴｒｉｔｏｎ－１００は、少なくとも３０分間は細菌の生存率に影響を与えなかった。試料を混合し、希釈し、ＬＢ寒天プレートに播種して、溶解した単層から回収されたコロニー形成単位（ｃｆｕ）数を測定しました。１時間における細胞内細菌の数をＲＰＭＩ無処理対照と比較し、これらを付着細菌と見なした。ゲンタマイシン処理の１時間後に回収された細菌の数を１００％として定義し、それと比較して、感染後４時間で回収された細菌の平均割合として、細菌の複製を表した。
遺伝子発現の定量ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）分析
ＲＮＡ抽出の前に、５０００ｇで５分間、４℃での遠心分離によって細胞を回収し、細胞ペレットを氷冷ＰＢＳで３回洗浄した後、５００μｌの氷冷ＰＢＳに再懸濁した。ＰｕｒｅＬｉｎｋ ＲＮＡミニキットを用いて、サンプルあたり２×１０６の細胞の総ＲＮＡを抽出し、１．５μｇのＲＮＡ（Ａ２６０／Ａ２８０比が２．００と２．２０の間）が高容量ｃＤＮＡ逆転写キットを用いてｃＤＮＡに逆転写された。目的の遺伝子の発現を、パワーアップＳＹＢＲグリーンマスターミックスを用いて定量化した。簡単に説明すると、Ｂｉｏｍｅｋ－４０００自動液体取扱器（ベックマン・コールター、ブレア、カリフォルニア、米国）を使用して、ＭｉｃｒｏＡｍｐ光学３８４ウェル反応プレートにて、２０ｎｇのｃＤＮＡ及び５００ｎＭプライマーを用いて、３組のｑＰＣＲ反応を設定した。増幅は、ＶｉｉＡ７リアルタイムＰＣＲシステム（サーモフィッシャーサイエンティフィック）において、次の条件：９５℃で２０秒間、続いて９５℃で１秒間、及び６０℃で２０秒間を４０サイクル、並びに融解曲線段階：９５℃で１５秒間；６０℃で６０秒間で実行された。ｑＰＣＲの結果は、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏソフトウェアＶ１．３（アプライドバイオシステムズ）を使用して、前述したように２－ΔΔＣＴ法で分析した。ＧＡＰＤＨ及び１８Ｓを複数の内因性参照遺伝子として用いることによって、相対的な遺伝子発現値を標準化した。
統計分析 結果は、特に明記されていない限り、３つの技術的複製を使用した３つの独立した実験（ｎ＝３）から生成された。データ分析は、マイクロソフトのエクセルで実行された。結果は、ＳｉｇｍａＰｌｏｔ ｖ１１を使用して説明され、結果間の変動は標準偏差（ＳＤ）として表された。データは、特に明記されていない限り、ＳｉｇｍａＰｌｏｔ ｖ１１を使用して、一元配置分散分析及びポストホックダネット検定によって統計的に分析された。ｐ≦０．０５の値を統計的に有意であると認めた。０．０５～０．００１のｐ値ではグラフでの差異は見られなかった。
実施例１：成分、及び投与量のモデリング
本明細書に記載の本発明の組成物の成分は、それらの供給源を含めて、以下の表２に提示される。いくつかの実施形態では、組成物は、表２ａ又は２ｂに示された量のブロメライン、及び残りの成分を混合することによって調製された。
Figure 2022552510000002
Figure 2022552510000003
ＧａＲＰの投与後に回腸、及び結腸に到達する本発明の成分の潜在的用量のモデリング
用量正当化モデリング
概念実証生体外研究で試されるブロメラインの用量範囲を判定するために、以下の胃腸分布モデルが開発された。
仮定：
・１％未満の経口のバイオアベイラビリティ
・ブロメライン錠は回腸液に迅速、かつ均一に溶解する
・ブロメラインは結腸に入る際、生物学的活性を完全に維持している
・結腸におけるブロメラインの混合は均一であり、勾配混合として生じない
Figure 2022552510000004
回腸の腸細胞：回腸の表面を計算するために、長さ３ｍ、直径２ｃｍの円柱を検討した（Ｓｅｎｄｅｒ、２０１６）。次に、小腸粘膜襞を考慮すると、総表面積は３倍に増加する（Ｍｕｄｉｅ ＤＭ、２０１４）。ＣａｔｔａｎｅｏとＢａｒａｔｔａ（Ｂｏｒｌｅｙ、２００５）は、絨毛あたり１０００±３．４の細胞と推定した。１３±１絨毛／ｍｍ２であるので、それらを覆う細胞の総数は１．３５×１０１０と推定される。陰窩を覆う細胞の総数は、それらが各絨毛を覆う陰窩の１２／５０を表し（Ｓｅｎｄｅｒ、２０１６）（Ｔｅｏｄｏｒｉ、１９８７）、陰窩と絨毛の推定数がおおよそ同じ（Ｓｅｎｄｅｒ、２０１６）であるとみなすならば、３．２４±０．１４×１０９である。したがって、総腸細胞数は、回腸３ｍあたり１×１０１０と計算された。
結腸の腸細胞：結腸の表面を計算するために、長さ１．５ｍ、直径７．５ｃｍの円柱を検討し（Ｃａｔｔａｎｅｏ Ｌ、１９８９）、絨毛がないため小腸の１／３０である（Ｗｅｉｓｓ Ｌ、１９８１）。したがって、結腸１．５ｍあたりの総腸細胞数は３．３×１０８である。
回腸におけるブロメラインの濃度：６０ｋｇの人に１．５ｇの回腸／結腸を標的としたブロメラインをコップ１杯の水とともに経口投与した場合、ブロメラインは９４±２４ｍｌ（Ｗｅｉｓｓ Ｌ、１９８１）、又は１６ｍｇ／ｍｌで分布する。この濃度では、ブロメラインの錠剤が回腸において完全に溶解すると仮定すると、細菌あたりの最大曝露量は１７０ｆｇ／細菌となる。
結腸内のブロメラインの濃度：６０ｋｇの人に１．５ｇの回腸／結腸を標的としたブロメラインを経口投与した場合、ブロメラインは４００ｍｌの結腸液、又は４０μｇ／ｍｌで分布する。この濃度では、ブロメラインが結腸液と完全に混合していると仮定すると、細菌あたりの最大曝露量は３８ｆｇ／細菌となる。
回腸腸細胞あたりのブロメラインの濃度：６０ｋｇの人に１．５ｇの回腸／結腸を標的としたブロメラインをコップ１杯の水とともに経口投与した場合、ブロメラインは９４±２４ｍｌ（Ｗｅｉｓｓ Ｌ、１９８１）、又は１６ｍｇ／ｍｌで分布する。この濃度では、ブロメラインの錠剤が回腸において完全に溶解すると仮定すると、腸細胞あたりの最大曝露量は１５０ｐｇ／腸細胞となる。
結腸腸細胞あたりのブロメラインの濃度：６０ｋｇの人に１．５ｇの回腸／結腸を標的としたブロメラインを経口投与した場合、ブロメラインは４００ｍｌの結腸液、又は４０μｇ／ｍｌで分布する。この濃度では、ブロメラインが結腸液と完全に混合していると仮定すると、細菌あたりの最大曝露量は４．５ｎｇ／腸細胞となる。
上述のモデルを使用して、８０ｋｇの人が、小腸を標的とした１４４０ｍｇのブロメライン、及び２８８ｍｇのメントールの腸内コーティングされた合計１日用量と、結腸を標的とした１２００ｍｇの酪酸（ナトリウム塩）、１８００ｍｇのＬ－スレオニン、及び０．０２５ｍｇのビタミンＤ３の用量とを投与された場合、腸内ミクロビオーム内に含まれる腸細胞、及び細菌あたりで次の濃度が達成される（表３）。
Figure 2022552510000005
観察された治療上有効量は、本明細書に記載の生体外実験で判定された。
表４は、各ＧａＲＰ製剤成分についての観察された治療上有効量をまとめたものである。
Figure 2022552510000006
注記：関連性無しは、特定の製剤成分が、ＩＢＤ及びＩＢＳの患者から得たＡＩＥＣに対して、抗付着、又は抗侵入効果を発揮しなかったことを意味する。理論に縛られることを望むものではなく、発明者は、＊が生体外で試されなかったことを認めるが、発表された文献では、１９０～２４０ｍｇ／日（腸溶コーティングされた５４０ｍｇ／日のペパーミント油の３５％）が上記の回腸、及び結腸における達成濃度であることを示唆している。
結論として、本発明者は、回腸で達成される必要があるモデル化でのメントール用量を除いて、本明細書に記載のＧａＲＰ製剤が、回腸、及び結腸の両方で治療上用量を首尾よく達成すると考えている。
実施例２：ＴＨＰ－１マクロファージにおける接着性侵入性大腸菌（ＡＩＥＣ）の侵入、及び細胞内増殖に対するブロメライン前処理の効果の評価
これらの研究において、細菌は、ブロメラインによって前処理された。
マクロファージ培養
ヒト単球ＴＨＰ－１細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－２０２）は、２－ｍＭＬ－グルタミン、１０ｍＭＨＥＰＥＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、４５００ｍｇ／Ｌグルコース、及び１５００ｍｇ／Ｌ重炭酸ナトリウムを含むように改変され、１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン、及び５ｍＭβ－メルカプトエタノールを添加したＲＰＭＩ１６４０培地で培養された。細胞密度は、１×１０６／ｍｌを超えない。分化を誘導するために、ＴＨＰ－１細胞を１～１０×１０５細胞／ｃｍ２で２４ウェルプレートに播種し、２００ｎＭＰＭＡで４８時間処理した。４８時間後、実験を開始する前に、マクロファージを洗浄し、ＰＭＡ、及び抗生物質を含まない培地で２４時間増殖させた。
菌株及び増殖条件
ＡＩＥＣＨＭ６０５（ＣＤ患者から）、ＡＩＥＣＨＭ６１５（ＣＤ患者から）、及び大腸菌ＨＭ４８４（ＩＢＳ患者から単離）を栄養寒天上で一晩増殖させ、滅菌生理食塩水に懸濁し、室温で２４時間放置した。これは、線毛の発現を最大化することがわかっているためである（ＨＭ Ｍａｒｔｉｎ、２００４）。実験当日、細菌を３００ｇａｖで１５分間、室温で遠心分離し、処理培地、又は対照培地にて１．４×１０７細菌／ｍｌに再懸濁した。処理は表５に要約されている。
Figure 2022552510000007
細菌を３７℃で２時間、常に振盪しながら培養した。培養の終了時、細菌をＲＰＭＩで３回洗浄し、ＴＨＰ－１培地に再懸濁して最終濃度を１．４×１０７細菌／ｍｌにした。
細菌の取り込み、生存、及び複製のアッセイは、ゲンタマイシン保護アッセイによって測定された
ＴＨＰ－１細胞は、マクロファージあたり３０の細菌といった感染多重度（ＭＯＩ）で感染した。３時間の培養後、培地を除去し、１００μｇ／ｍｌゲンタマイシンを含む新鮮な細胞培養培地を添加して細胞外細菌を死滅させた。細胞内細菌の数を判定するために、１時間及び３時間で、培地を除去し、０．５ｍｌの１％Ｔｒｉｔｏｎ－１００（脱イオン水中）を各ウェルに５分間添加してＴＨＰ－１細胞を溶解した。この濃度のＴｒｉｔｏｎ－１００は、少なくとも３０分間は細菌の生存率に影響を与えなかった。試料を混合し、希釈し、ＬＢ寒天プレートに播種して、溶解した単層から回収されたコロニー形成単位（ｃｆｕ）数を測定しました。１時間における細胞内細菌の数をＲＰＭＩ無処理対照と比較し、これらを付着細菌と見なした。ゲンタマイシン処理の１時間後に回収された細菌の数を１００％として定義し、それと比較して、感染後４時間で回収された細菌の平均割合として、細菌の複製を表した。
結果／考察：
ＨＭ６０５及びＨＭ４８４細菌の場合、２０ｆｇ／細菌以上のブロメライン濃度において、ＴＨＰ－１マクロファージへの細菌の侵入を阻害することができた（表６）。ブロメラインによる細菌の前処理は、細胞内増殖の阻害において効果が低かった。
Figure 2022552510000008
表５のデータを、腸細胞／ｃｍ２、及び細菌／腸細胞に基づく本明細書に記載の胃腸分布モデルに挿入することで、本発明者らは、２０ｆｇ／細菌の有効用量を達成するためには、ヒトが８６７ｍｇ／８０ｋｇの回腸を標的（小腸を標的？）としたブロメラインを必要とすると考えている。１つの実施形態において、本明細書に記載の組成物は、合計１日量１４４０ｍｇの回腸を標的とするブロメラインを提供する。
実施例３：ＡＩＥＣのブロメライン前処理、及びＣａｃｏ－２腸細胞におけるＡＩＥＣの侵入及び細胞内増殖への影響
細胞培養
Ｃａｃｏ－２－ＢＢｅ１腸細胞を２×１０５細胞／ｃｍ２で２４ウェルプレートに播種し、コンフルエントになるまで増殖させた。実験を開始する前に、抗生物質を含まない培地で細胞を２４時間増殖させた。実験当日、ＨＭ６０５、及びＨＭ４８４大腸菌を３００ｇａｖで１５分間、室温で遠心分離し、Ｃａｃｏ－２培地±２０～６４０μｇ／ｍｌブロメラインにて１．４×１０７細菌／ｍｌに再懸濁した細菌を３７℃で２時間、常に振盪しながら培養した。培養期間の終了時、細菌をＤＭＥＭで３回洗浄し、Ｃａｃｏ－２培地に再懸濁して最終濃度を１．４×１０７細菌／ｍｌにした。次に、ゲンタマイシン保護アッセイを前述のように実施した。腸内環境をシミュレートするために、２０～６４０μｇ／ｍｌブロメラインを含む絶食状態にシミュレートされた腸液（Ｒｉｅｄｅｒ Ｆ、２０１２）に細菌を再懸濁する一連の実験を実施した。
結果／考察：
ＨＭ６０５、及びＨＭ４８４細菌の場合、２０ｆｇ／細菌以上のブロメライン濃度において、腸細胞への細菌の侵入、及び細菌の細胞内増殖を阻害することができた（表７）。
シミュレートされた腸液中の細菌の前処理によって、細菌の侵入と細胞内増殖の同レベルの抑制を達成するために必要なブロメラインの濃度を増加させた（２０ｆｇが２８ｆｇに増加した）。したがって、本明細書に記載の胃腸曝露モデルを使用する際、細菌あたり２０ｆｇのブロメラインを達成するためには、適切な患者投与量は８００ｍｇ／６０ｋｇ／日である。
Figure 2022552510000009
表７のデータを、本明細書に記載の腸細胞／ｃｍ２及び細菌／腸細胞に基づく胃腸分布モデルに挿入することで、本発明者は、２８ｆｇ／細菌の有効用量を達成するためには、適切な患者投与量が、１０６７ｍｇ／８０ｋｇ／日の小腸を標的としたブロメラインであると考えている。
実施例４－ブロメラインを含むＧａＲＰは、ＬＰＳで刺激されたＴＨＰ－１マクロファージからのＴＮＦ－αの放出の阻害に効果的である
マクロファージ培養
ヒト単球ＴＨＰ－１細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－２０２）は、２－ｍＭＬ－グルタミン、１０ｍＭＨＥＰＥＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、４５００ｍｇ／Ｌグルコース、及び１５００ｍｇ／Ｌ重炭酸ナトリウムを含むように改変され、１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン、及び５ｍＭβ－メルカプトエタノールを添加したＲＰＭＩ１６４０培地で培養された。細胞密度は、１×１０６／ｍｌを超えない。分化を誘導するために、ＴＨＰ－１細胞を５×１０５細胞／ｃｍ２で９６ウェルプレートに播種し、２００ｎＭＰＭＡで４８時間処理した。４８時間後、実験を開始する前に、マクロファージを洗浄し、ＰＭＡ及び抗生物質を含まない培地で２４時間増殖させた。トランズウェルを図１に示す。処理を表８に示す。
Figure 2022552510000010
試験化合物、及び対照としては、刺激されていない培養物を対照として用いて、マクロファージが５０ｎｇ／ｍｌＬＰＳで刺激された細胞を適用した。８時間後、培地を除去し、ＥＬＩＳＡを使用してＴＮＦ－αを定量した。
結果／考察：
図２に見られるように、ブロメラインは、ＬＰＳで刺激されたＴＨＰ－１マクロファージからのＴＮＦ－αの放出を阻害することができた。ＲＰＭＩ対照と比較した際、１３ｐｇ／マクロファージより高いブロメライン濃度では、ＴＮＦ－αの放出において有意な阻害が見られた（ｐ＜０．００１、マンホイットニーの順位和検定）。
結論：
理論に縛られることを望むものではないが、発明者は、胃腸分布モデルを使用した彼らのモデリングは、人が腸内コーティングされた８００ｍｇのブロメラインを投与された場合、曝露は回腸腸細胞あたり７５ｐｇ／細胞、及び結腸中で４５００ｐｇ／細胞であることを示していると考えている。
実施例５－ブロメラインを含むＧａＲＰは、ＬＰＳで刺激されたＴＨＰ－１マクロファージと共培養された分極Ｃａｃｏ－２単層からのＩＬ－８の放出を阻害する
食品や医薬品の評価に最も一般的に使用されている業界標準モデルを使用して、ＩＬ－８の放出におけるブロメラインの影響を研究した。頂端区画は、内腔（ＧＩＴの液体、及び粘膜）を表す
共培養細胞培養
Ｃａｃｏ－２細胞を、１×１０６細胞／ウェルでトランズウェルインサートプレート（１．１２ｃｍ２、孔径０．４μｍ）に播種した。細胞が完全に分化するまで（ＴＥＲ値＞１２００／ｃｍ２）、細胞培養培地は３日ごとに交換され、細胞は、解凍後、継代数１２以内で使用された。
別の１２ウェルプレートに、ＴＨＰ－１単球細胞を８．５×１０５細胞／ウェルで播種し、２００ｎＭＰＭＡで４８時間分化させた後、実験前に通常培地で２４時間培養した。全ての培地をＲＰＭＩ１６４０に交換した後、Ｃａｃｏ－２細胞を上に載せたトランズウェルインサートをＴＨＰ－１細胞を含むウェルに充填した。細胞培養が＞１０００／ｃｍ２のＴＥＲベースラインに達した際に、５０ｎｇ／ｍｌＩＦＮ－β、１０μｇ／ｍｌＬＰＳ、及び５ｎｇ／ｍｌＴＮＦ－αを含む０．６ｍｌを基底外側の区画に添加することによって、単層を刺激した。刺激カクテルの添加直後に、０．２５ｍｌのＧａＲＰ±０～８０μｇ／ｍｌのブロメライン（０～２０ｐｇ／腸細胞）を頂端区画に適用した。２４時間の培養後、頂端側、及び基底外側からの培養上清をＩＬ－８測定のために回収した。
結果／考察：
図３に見られるように、ブロメラインは、ＬＰＳで刺激されたＴＨＰ－１マクロファージと共培養されたＣａｃｏ－２細胞からのＩＬ－８の放出を阻害することができる。ブロメラインを含まないＧａＲＰｖ１は、ＩＬ－８の放出を、１８±６だけ阻害することができた。
実施例６－経上皮電気抵抗（ＴＥＲ）によって測定された腸の完全性の回復における、ブロメラインを含むＧａＲＰｖ１の効果の評価
前臨床試験では、ビタミンＤ３と酪酸ナトリウムが固いギャップ結合の調節に効果的であることが示されており（Ｋｏｎｇ Ｊ、２００８）（Ｍａ Ｘ、２０１２）、これは、ＧａＲＰ製剤の一部としての選択において役割を担っているという発見であった。ＧａＲＰｖ１が腸の完全性を回復するかを判断するため、Ｍ細胞／Ｃａｃｏ－２トランズウェルモデルをＡＩＥＣＨＭ６０５±ＧａＲＰに感染させ、感染後２日間、ＴＥＲを監視した。
Ｍ細胞／Ｃａｃｏ－２モデル
Ｃａｃｏ２－ｃｌ１細胞は、前述のように増殖及び維持された。ヒトバーキットリンパ腫細胞株ＲａｊｉＢは、１０％ＦＢＳ、８ｍＭＬ－グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、及び１００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ１６４０培地で維持された。ＲａｊｉＢ細胞を３×１０５／ｍｌで播種し、３日ごとに細胞懸濁液を沈降させた。培地の３分の２を新鮮な培地に交換した。９日ごとに、細胞は１：３に分割された。全てのセルは、加湿雰囲気下、５％ＣＯ２、３７℃で維持された。
Ｍ細胞は、マトリゲル基底膜マトリックスでプレコートされた１２ｍｍトランズウェル細胞培養インサートの頂端面に、５×１０５のＣａｃｏ－２細胞を播種し、ＤＭＥＭ培地を基底外側区画に配置することによって生成された。ＴＥＲがトランズウェル６００Ω（３００Ω・ｃｍ２組織単層に相当）を超えるまで、細胞を１４～１８日間維持しました。共培養当日、ＲａｊｉＢ細胞を回収し、完全ＤＭＥＭに再懸濁し、５×１０５細胞を基底トランズウェルコンパートメントに追加した。重要なこととして、共培養の後、ＲａｊｉＢ細胞を乱さないように注意しながら、頂端培地と基底培地の両方を毎日交換した。Ｍ細胞が生成されるまで、共培養を４～６日間維持した。並行してＣａｃｏ２－ｃｌ１の単一培養物（基底区画にＲａｊｉＢ細胞無し）もトランズウェルインサート上で生成され、Ｍ細胞により維持された。首尾よい単層生成を監視するため、終始、ＴＥＲを測定した。
Ｍ細胞モデルのＡＩＥＣＨＭ６０５による感染
ＡＩＥＣＨＭ６１５が、Ｃａｃｏ－２及びＴ８４単層における固い細胞結合の破壊を引き起こし、細胞死を誘発することは、以前に報告されている（Ｂａｉｌｅｙ ＪＲ、２０１１）。この効果を再現するために、Ｍ細胞モデルが生成された際（ＴＥＲに付随する低下があった時期に応じて２０～２４日目）、培地を抗生物質を含まないものに変更し、細菌をトランズウェルインサートの頂端ウェルに、４時間、３０のＭＯＩで加えた。４時間後、細胞を洗浄し、１００μｇ／ｍｌのゲンタマイシン存在下で培養し、残っている細菌を殺した。その時点で、ブロメライン無しのＧａＲＰを細胞上に配置し、全ての単層のＴＥＲを２時間間隔で１２時間まで測定し、基底ウェル内の細菌を１時間ごとに最大４時間まで計数した。
結果／考察：
ＡＩＥＣ感染後の胃腸細胞層の回復
ＡＩＥＣＨＭ６０５を通常培地（無治療対照）又はＧａＲＰ（ブロメライン無し）に懸濁し、Ｍ細胞モデルに適用した際、ＧａＲＰ製剤は細胞層の完全性への保護効果を提供した（図４）。
実施例７－ブロメラインを含まない様々な胃腸リプログラミング組成物における抗炎症活性の比較
ヒト結腸直腸腺癌細胞株Ｃａｃｏ－２－ＢＢｅ１を、１０％ｖ／ｖウシ胎児血清（ＦＢＳ）、４ｍＭＬ－グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、及び１００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシンを添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で増殖、及び維持させた。全ての実験は、解凍後、継代数１２以内のＣ２ＢＢｅ１細胞で実施された。Ｃａｃｏ－２細胞を、５×１０５細胞／ウェルでトランズウェルインサートプレート（０．３３ｃｍ２、孔径０．４μｍ）に播種した。細胞が完全に分化するまで（開始平均ＴＥＲが１１２１±１９６ｃｍ２；平均±ＳＤ）、細胞培養培地は３日ごとに交換され、細胞は、解凍後、継代数１２以内で使用された。
ブロメライン又は様々なＧａＲＰ製剤の抗炎症効果を評価する実験において、５０ｎｇ／ｍｌＩＦＮ＋１０μｇ／ｍｌＬＰＳ＋５ｎｇ／ｍｌＴＮＦを含む０．６ｍｌのカクテルをこのモデルにおける基底外側に適用すると同時に、０．２５ｍｌの試料を頂端側に２４時間適用した。２４時間の培養後、頂端側から培養上清を回収し、ＥＬＩＳＡによってＩＬ－８を定量した。
表９は、本明細書で前述したように、ＬＰＳ、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－βで刺激された分極Ｃａｃｏ－２単層からのＩＬ－８の放出を阻害する能力について試された製剤成分の、様々な置換及び組み合わせの概要を示す。
Figure 2022552510000011
結果／考察：
表１０に示されたデータは、ブロメラインを含まないＧａＲＰが、標準的な増殖培地（ＤＭＥＭ）と比較してＩＬ－８の放出を有意に減少させられることを確認している（ｐ＜０．００１）。全てのＧａＲＰ製剤を元々のＧａＲＰｖ１と比較した場合、統計的に有意な差は無かったが、抗炎症活性を最高から最低までランク付けした場合、表１１に示されるような一般的に明確な観察を行うことができているようだ。
Figure 2022552510000012
Figure 2022552510000013
全てのＧａＲＰ製剤を最高から最低まで抗炎症活性についてランク付けした場合、発明者はいくつかの明確な観察がなされ得ると考えている（表１１）。すなわち、酪酸ナトリウム、Ｌ－スレオニン及びコレカルシフェロールはすべて、より優れた抗炎症効果と相関しており、一般に、Ｌ－グルタミン及びＬ－トリプトファンを含む製剤を使用すると、より高い抗炎症効果が観察される。
本明細書で提供される実施例で、ブロメラインが、本明細書に記載のＧａＲＰ栄養補助食品の重要な抗炎症成分であり、唯一の薬剤として、ブロメラインがＩＬ－８の分泌を７０±７（平均±ＳＥＭ）阻害したことを確認する。理論に縛られることを望むものではないが、本発明者らは、本明細書に記載のＧａＲＰ製剤の追加の成分（酪酸ナトリウム、アミノ酸及びビタミンＤ３）が、ブロメラインの抗炎症活性を促進する、細胞エネルギー及びムチン合成前駆体の供給源として作用すると考えている。これらの実験は、各製剤成分自体が低レベルの抗炎症活性を示すという、以前に発表された研究を確認している。１つの実施形態において、本明細書に記載のＧａＲＰ製剤は、８０μｇ／ｍｌブロメライン、４００μｇ／ｍｌ酪酸ナトリウム、４００μｇ／ｍｌＬ－スレオニン、及び０．４８μｇ／ｍｌビタミンＤ３を含む、又は本質的にそれらからなる。
実施例８- ８０μｇ／ｍｌ（４０ｐｇ／細胞相当）のブロメラインを含んだ様々な胃腸リプログラミング組成物の抗炎症活性の比較
ＧａＲＰ製剤のいずれかがブロメラインの抗炎症活性に相加効果又は相乗効果を発揮したかどうかを判断するために、８０μｇ／ｍｌブロメライン（２０ｐｇ／細胞相当）を加えた後、各製剤を再試験した。
方法論
ヒト結腸直腸腺癌細胞株Ｃａｃｏ－２－ＢＢｅ１を、１０％ｖ／ｖウシ胎児血清（ＦＢＳ）、４ｍＭＬ－グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、及び１００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシンを添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で増殖、及び維持させた。全ての実験は、解凍後、継代数１２以内のＣ２ＢＢｅ１細胞で実施された。Ｃａｃｏ－２細胞を、５×１０５細胞／ウェルでトランズウェルインサートプレート（０．３３ｃｍ２、孔径０．４μｍ）に播種した。細胞が完全に分化するまで（開始平均ＴＥＲが１１２１±１９６ｃｍ２；平均±ＳＤ）、細胞培養培地は３日ごとに交換され、細胞は、解凍後、継代数１２以内で使用された。
ブロメライン又は様々なＧａＲＰ製剤の抗炎症効果を評価する実験において、５０ｎｇ／ｍｌＩＦＮ＋１０μｇ／ｍｌＬＰＳ＋５ｎｇ／ｍｌＴＮＦを含む０．６ｍｌのカクテルをこのモデルにおける基底外側に適用すると同時に、０．２５ｍｌの試料を頂端側に２４時間適用した。２４時間の培養後、頂端側から培養上清を回収し、ＥＬＩＳＡによってＩＬ－８を定量した。
結果／考察：
表１２は、実施例７で試された製剤に、８０μｇ／ｍｌのブロメライン（４０ｐｇ／細胞相当）を加えた結果を示す。加えられたブロメラインは、ＩＬ－８分泌を抑制する能力を３０～７０％増加させた。
Figure 2022552510000014
Figure 2022552510000015
表１３に示すように、ブロメラインを含む製剤をランク付けした場合、最高の抗炎症効果が観察された。
Figure 2022552510000016
実施例９－ムチントール様受容体、及び炎症誘発性遺伝子の発現におけるＧａＲＰ及びその個々の製剤成分の効果の定量化
７５：２５のＣａｃｏ－２／ＨＴ－２９共培養は、本明細書で前述したように確立され、ブロメライン、スレオニン、酪酸ナトリウム、ビタミンＤ３、及び２つの異なるＧａＲＰ製剤への２４時間の曝露が、以下のＭＵＣ遺伝子の発現に及ぼす影響をｑＰＣＲを使用して研究した。２４時間の処理の終了時に、２５ｃｍ２フラスコ中の上清を回収し、そして共培養単層を、本明細書に以前に記載されたようにトリプシン処理した。
Figure 2022552510000017
遺伝子発現データを解釈する際、ＭＵＣ遺伝子とそれに関連するムチンは次のように分類された：
・分泌型ムチン
・膜結合型ムチン
・非ゲル形成ムチン
分泌型ムチン
ＭＵＣ２、ＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ５Ｂ、ＭＵＣ６、及びＭＵＣ１９は、分泌された細胞外粘性分泌物として作用する。酪酸ナトリウム、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤ３の結腸を標的としたＧａＲＰ製剤成分に溶解したさまざまな濃度のブロメラインの効果の概要については、図５を参照せよ。
表１４は、各ムチンと、ＩＢＳ、又はＩＢＤとの関連をまとめたものである。
Figure 2022552510000018
ＭＵＣ２遺伝子、及びタンパク質の発現は、ＩＢＤ及びＩＢＳで有意に減少されることがわかっており、粘膜バリアを維持するための極めて重要なムチンと見なされている。ムチンＭＵＣ２に結合したグリカンの含有物は、細菌の栄養素としてだけでなく、結合部位としても機能し、完全性、恒常性、腸機能の維持に不可欠な特定の微生物種の選択を誘導する。図６に見られるように、ＧａＲＰ中の２０、及び４０μｇ／ｍｌブロメラインは、遺伝子発現を５～２５倍に増加させることができた。
ＭＵＣ６はＩＢＤ、及びＩＢＳにおいて減少されている。ブロメライン濃度が１０μｇ／ｍｌ以上において、ＧａＲＰ製剤成分は、ブロメラインと相乗的ではないにしても相加的に働き（ＧａＲＰｖ１）、ＭＵＣ６の発現を最大３０倍まで有意に増加させるように見えた。
ＭＵＣ１９の発現はＩＢＳ、又はＩＢＤでは特徴づけられていない。ブロメラインが１０μｇ／ｍｌ以上では、ＧａＲＰｖ１製剤の成分が、ブロメラインの活性に相加効果を及ぼすように見えた。
膜結合型ムチン
ＭＵＣ１～４、ＭＵＣ１２、ＭＵＣ１５～１７、及びＭＵＣ２０は、糖衣内の膜結合型ムチンと見なされる。酪酸ナトリウム、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤ３の結腸を標的としたＧａＲＰ製剤成分に溶解したさまざまな濃度のブロメラインの効果の概要については、図６を参照せよ。
表１５は、各ムチンと、ＩＢＳ、又はＩＢＤとの関連をまとめたものである。
Figure 2022552510000019
ＭＵＣ１遺伝子の発現を除いて、ブロメライン濃度が１０μｇ／ｍｌ以上では、ＧａＲＰ／ブロメライン製剤はＭＵＣ３、ＭＵＣ４、及びＭＵＣ１５の発現を有意に増加させるようだ。これらのムチンがＩＢＤで減少し、場合によってはＩＢＳで減少することを考慮すると、これらのデータは、ＧａＲＰ製品がムチンの産生を刺激して腸の恒常性を再確立できる可能性があることを示唆している。一般に、結腸を標的としたＧａＲＰｖ１製剤は、ＧａＲＰｖ２よりも優れた性能を示し、タンパク質研究及びムチン定量化研究が現在進行中であり、この観察を確認している。
ＭＵＣ１３、ＭＵＣ１６、及びＭＵＣ１７の発現はＩＢＤで増加する。ブロメライン濃度が２０μｇ／ｍｌ以上では、ＧａＲＰｖ２／ブロメライン製剤は遺伝子発現を有意に低下させることができた。
非ゲル形成ムチン
ＭＵＣ７及びＭＵＣ８は、ＩＢＤ又はＩＢＳであまり特徴付けられていない非ゲル形成ムチンである。図７を参照すると、ブロメライン濃度が１０μｇ／ｍｌ以上では、遺伝子発現を有意に増加させることができた。
理論に縛られることを望むものではないが、本発明者らは、本明細書で提供されるＭＵＣ遺伝子発現データが、ＧａＲＰ栄養補助食品で使用されるブロメライン及び結腸を標的とする製剤成分の濃度が、順番に、粘膜の治癒を促進すると期待されるムチン遺伝子の発現を刺激するのに十分であることを示すと考えている。
実施例１０－ＧａＲＰ製品の粘膜治癒能力：Ｌ－スレオニンとビタミンＤ３との間の相乗的関係を示している
細胞株とＣａｃｏ－２：ＨＴ－２９－ＭＴＸ（７５：２５）共培養の確立（結腸のシミュレーション）
ヒト結腸直腸腺癌細胞株Ｃａｃｏ－２－ＢＢｅ１（リバプール大学のＢａｒｒｙ Ｃａｍｐｂｅｌｌ教授から入手した）を、１０％ｖ／ｖウシ胎児血清（ＦＢＳ）、４ｍＭＬ－グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、及び１００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシンを添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で増殖、及び維持させた。全ての実験は、解凍後、継代数１２以内のＣａｃｏ－２－ＢＢｅ１細胞で実施された。細胞培養物を加湿した５％ＣＯ２インキュベーター内で３７℃で培養した。細胞は、３７℃のインキュベーター内、５％ＣＯ２雰囲気で維持され、４８時間ごとに培地が交換された。８０％のコンフルエンスで、細胞を１０ｍｌの１％トリプシン－ＥＤＴＡ（シグマアルドリッチ）で５分間剥離した後、１０％ＦＢＳを含む４０ｍｌのＤＭＥＭを添加して、トリプシン処理を終了しました。細胞懸濁液を遠心分離（２００ｇ、５分）でペレット化し、１０％ＦＢＳを含む新しいＤＭＥＭに再懸濁し、１：４希釈で新しいフラスコに継代培養した。
この共培養モデルを使用して、ヒトの結腸上皮をシミュレートした。Ｃａｃｏ－２細胞（継代数８）とＨＴ－２９－ＭＴＸ細胞（継代数９）とを、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ中で７５：２５の比率で合わせた。合わせた細胞（６．４×１０４細胞／ｍｌ）を２５ｃｍ２に、フラスコあたり合計５ｍｌに播種した。共培養物は、４８時間ごとに培地を新しくしながら、５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で培養した。播種後１５日目に、共培養物の単層をＤＭＥＭで３回洗浄し、培地を５ｍｌの予熱した試験溶液に交換し、２４時間温置した。
Ｃａｃｏ－２：ＨＴ－２９－ＭＴＸ（７５：２５）共培養の処理
培養培地中のコレカルシフェロール（ＶＤ３）とＬ－スレオニン（Ｌ－Ｔｈｒ）（シグマアルドリッチ）の試験溶液は、処理の１日前に調製した。播種後１５日目に、共培養単層を１時間間隔で３回、培養培地で洗浄し、培地を５ｍｌの予熱した試験溶液と交換し、２４時間培養した。
遺伝子発現の定量ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）分析
２４時間の処理の終了時に、２５ｃｍ２フラスコ中の上清を回収し、そして共培養単層を、以前に記載されたようにトリプシン処理した。５０００ｇで５分間、４℃で遠心分離することにより細胞を回収した。氷冷ＰＢＳで３回洗浄した後、細胞を５００μｌの氷冷ＰＢＳに再懸濁した。ＰｕｒｅＬｉｎｋ ＲＮＡミニキット（インビトロジェン）を使用して、サンプルあたり２×１０６細胞の総ＲＮＡを抽出した。リアルタイムＰＣＲ分析では、１．５μｇのＲＮＡ（Ａ２６０／Ａ２８０比が２．００と２．２０の間）を、高容量ｃＤＮＡ逆転写キット（アプライドバイオシステムズ、フォスターシティ、カルフォルニア、米国）を使用して、ｃＤＮＡに逆転写した。
Ｃａｃｏ－２：ＨＴ－２９－ＭＴＸ（７５：２５）共培養におけるヒトＭＵＣ２及びＭＵＣ７遺伝子の発現は、パワーアップＳＹＢＲグリーンマスターミックス（アプライドバイオシステムズ）を用いて定量化されました。ＭＵＣ２の発現を検出するためのプライマー（フォワード、５’－ＣＧＡＡＡＣＣＡＣＧＧＣＣＡＣＡＡＣＧＴ－３’（配列番号：３）；リバース、５’－ＧＡＣＣＡＣＧＧＣＣＣＣＧＴＴＡＡＧＣＡ－３’（配列番号：４））、及びＭＵＣ７の発現を検出するためのプライマー（フォワード、５’－ＧＣＡＡＣＴＡＣＣＣＴＡＧＡＣＣＣＡＴＣＡ－３’（配列番号：１５）；リバース、５’－ＴＡＧＧＴＧＴＧＧＴＡＡＴＴＧＧＧＧＣＡＧ－３’（配列番号：１６））は、シグマアルドリッチから購入した。１０μｌのｑＰＣＲ反応は、Ｂｉｏｍｅｋ－４０００自動液体取扱器（ベックマン・コールター、ブレア、カリフォルニア、米国）を使用して、ＭｉｃｒｏＡｍｐ光学３８４ウェル反応プレート（アプライドバイオシステムズ）上に、２０ｎｇのｃＤＮＡ、及び５００ｎＭプライマーを３組分設定した。増幅は、ＶｉｉＡ７リアルタイムＰＣＲシステム（サーモフィッシャーサイエンティフィック）において、次の条件：９５℃で２０秒間、続いて９５℃で１秒間、及び６０℃で２０秒間を４０サイクル、並びに融解曲線段階：９５℃で１５秒間；６０℃で６０秒間で実行された。ｑＰＣＲの結果は、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏソフトウェアＶ１．３（アプライドバイオシステムズ）を使用して、前述したように２－ΔΔＣＴ法で分析した。ＧＡＰＤＨ及び１８Ｓを複数の内因性参照遺伝子として用いることによって、相対的な遺伝子発現値を標準化した。
結果
遺伝子発現データを解釈する際、ＭＵＣ遺伝子とそれに関連するムチンは３つのクラスに分類された：
・分泌型ムチン
・膜結合型ムチン
・非ゲル形成ムチン
分泌型ムチン
ＭＵＣ２、ＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ５Ｂ、ＭＵＣ６、及びＭＵＣ１９は、分泌された細胞外粘性分泌物として作用する。表１６は、各ムチンと、ＩＢＳ、又はＩＢＤとの関連をまとめたものである。
Figure 2022552510000020
膜結合型ムチン
ＭＵＣ１～４、ＭＵＣ１２、ＭＵＣ１５～１７、及びＭＵＣ２０は、糖衣内の膜結合型ムチンと見なされる。表１７は、各ムチンと、ＩＢＳ、又はＩＢＤとの関連をまとめたものである。
Figure 2022552510000021
非ゲル形成ムチン
ＭＵＣ７及びＭＵＣ８は、ＩＢＤ又はＩＢＳであまり特徴付けられていない非ゲル形成ムチンである。上記のＭＵＣ遺伝子に対するＬ－スレオニン、及びビタミンＤ３の組み合わせによる相乗効果を示した以下の図８を参照せよ。
唯一の薬剤としてのＬ－スレオニン（４００μｇ／ｍｌ）は、試されたいずれのＭＵＣ遺伝子の発現にも統計的に有意な影響を及ぼさなかった。ｉ）ビタミンＤ３及びｉｉ）０．４８μｇ／ｍｌビタミンＤ３と４００μｇ／ｍｌＬ－スレオニンとの組み合わせが、ＭＵＣ遺伝子の発現に及ぼす影響を表１８にまとめている。
Figure 2022552510000022
Figure 2022552510000023
相乗効果は太字で強調表示されている。
Ｌ－スレオニンとビタミンＤ３がＭＵＣ１５、ＭＵＣ２、ＭＵＣ６、ＭＵＣ１９、ＭＵＣ７、及びＭＵＣ８の発現を増加させることにより、予期せず相乗効果を発揮したという証拠は、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤ３の力価測定によってさらに調査された。ＭＵＣ２、及びＭＵＣ７の発現は、典型的なムチン遺伝子として使用された。
図９Ａ、及び９Ｂに見られるように、個別に、Ｌ－スレオニンとビタミンＤ３の両方は、ＭＵＣ２（胃腸管で主に分泌されるゲル形成ムチン）、又はＭＵＣ７（非ゲル形成ムチン）の発現に大きな影響を及ぼさなかった。
ＩＢＳとＩＢＤの両方において、全身性炎症につながる要因である、腸内完全性の変化、及び腸内毒素症ミクロビオームという結果になる、ＭＵＣ２遺伝子、タンパク質、及びムチンの発現を減少すると示された。
０～８００μｇ／ｍｌＬ－スレオニンと組み合わせて０～０．４８μｇ／ｍｌビタミンＤ３の滴定を行うと、０．０５３μｇ／ｍｌ以上のビタミンＤ３では、Ｌ－スレオニンの濃度が、ＭＵＣ２、及びＭＵＣ７遺伝子発現の増加に影響を与えた主要な要因であることが明らかになった（図１０Ａ、及び１０Ｂ）。
実施例１１－ブロメラインとＧａＲＰは、ＴＮＢＳ大腸炎モデルの内視鏡疾患を軽減できる
ＴＮＢＳマウスモデルでのＧａＲＰの評価
２，４，６－トリニトロベンゼンスルホン酸溶液（ＴＮＢＳ）大腸炎は、５０％エタノール中のＴＮＢＳ（５ｗ／ｖ％）を直腸導入することによって、５週齢のＣ５６／ＢＬ／６マウスで誘発された。動物をランダムに治療群に分け、図１１に概説されているように治療した。
８つの治療群（健康な対照群ではｎ＝４、８～９匹の動物／ＴＮＢＳ群）が完成した。治療群の詳細な説明を表１９に示す。
Figure 2022552510000024
次の内視鏡スコアリングシステムが使用された：ｉ）スコア５～７＝軽度の疾患、ｉｉ）スコア８～１１＝中等度の疾患、ｉｉｉ）スコア１２～１５＝重度の疾患。人口ベースラインの疾患の重症度は次のとおりである。
・軽度：３４％（２１／６２動物）
・中度：６２％（３８／６２動物）
・重度：４％（３／６２動物）
８．１：安全性
研究で無作為化された元の７２匹の動物のうち、１０匹は麻酔による合併症で死亡したか、治療開始前に体の２０％を超えて失ったため、分析から除外された。研究による死亡は表２０に要約されています。
Figure 2022552510000025
体重減少のために安楽死させられた動物は見栄えがよく、正常に機能していたが、倫理ガイドラインのために動物は安楽死させられた。治療０日目から実験終点（７日目）までの体重の変化を比較する図１２を参照せよ。
実験終点の体重に有意差を示した唯一のグループは次のとおりである。
・ＴＮＢＳ－経口ビヒクル中の７５ｍｇ／ｋｇブロメライン／１５ｍｇ／ｋｇメントール：水又は経口ビヒクル中の７５ｍｇ／ｋｇブロメラインと比較した場合、経口ビヒクル中の７５ｍｇ／ｋｇブロメライン／１５ｍｇ／ｋｇメントールは終点での重量を９％減少させた（ｐ＝０．０２４）。
・ＴＮＢＳ－経口ビヒクル中の７５ｍｇ／ｋｇブロメライン／１５ｍｇ／ｋｇメントール、及び経直腸ビヒクル中のＧａＲＰ：水中、経口又は経直腸ビヒクル中の７５ｍｇ／ｋｇブロメラインと比較した場合、７５ｍｇ／ｋｇブロメライン／１５ｍｇ／ｋｇメントール／直腸ＧａＲＰは、終点での重量を５～１２％減少させた（ｐ＝０．００１）。
治療期間にわたってこれらのグループを比較した場合、図１３に示すように、動物は元の体重を維持していた。
発表された研究では、１０ｍｇ／ｋｇＬ－メントールをマウスに投与すると、コア温度が上昇し、褐色脂肪組織でのタンパク質１の発現が切り離され、震えのない熱発生活性とインスリン感受性が体重増加の減弱につながることがわかった。ＧａＲＰ製品では、マウスは毎日１５ｍｇ／ｋｇを摂取するが、これは体重増加の観察された欠如を説明している可能性がある。毒性は認められなかった。
有効性
０日目（治療前）から７日目（実験終点）までの内視鏡スコアの変化を比較した図１４を参照せよ。以下の治療群で統計的に有意な差が認められた。
・ＧａＲＰ製品の結腸を標的とした成分（経直腸で投与された酪酸ナトリウム／Ｌ－スレオニン／ビタミンＤ３）：内視鏡スコアによって定量化されるように、大腸炎が大幅に減少しました。経直腸ビヒクル対照と比較した場合、ＧａＲＰは内視鏡スコアを１３５％改善した（ｐ＝０．０１８、ｎ＝８）。
・ＧａＲＰ製品の結腸を標的とした成分（経直腸で投与された酪酸ナトリウム／Ｌ－スレオニン／ビタミンＤ３）と組み合わせた、経口投与されたブロメライン／ペパーミントオイル：経口、及び経直腸ビヒクル対照と比較した場合、この製剤は内視鏡スコアを１４８％改善した（ｐ＝０．０１２、ｎ＝９）。
・経口投与された水中のブロメライン：経口ビヒクル対照と比較した場合、ブロメラインは内視鏡スコアを６５％改善した（ｐ＝０．０３８、ｎ＝８）。
便の硬さ、関与する領域の広さ、粘膜表面の粒度、血管パターンの変化、結腸壁の肥厚などの個々のパラメーターを比較した場合、治療群間に有意差はなかった。
結腸の長さ、結腸の重量、及び結腸の重量／長さの比率に対する様々な治療及び対照ビヒクルの効果を比較する図１５を参照せよ。治療群間で有意差は認められなかった。
結論：
ブロメラインを含まないＧａＲＰ製品の結腸標的成分（経直腸で投与された酪酸ナトリウム／Ｌ－スレオニン／ビタミンＤ３）は、実験的大腸炎を有意に改善した。経口投与されたブロメライン／メントールの添加は、大腸炎モデルにおいてわずかな相加効果を発揮しましたが、これはＧａＲＰ単独よりも有意に優れていなかった。経口ビヒクル中のブロメラインは、水中のブロメラインほどには機能しなかったことが注目され、経口ビヒクルのいくつかの成分が小腸及び大腸の両方でのブロメラインの放出を妨害しているかもしれないと発明者が考え、示唆している。ブロメライン、及び／又は本明細書に記載の組成物及び製剤の成分のいずれかの放出を提供する特定の製剤は、本明細書の他の箇所にも記載されているように、胃腸系に送達するための医薬製剤の当業界の技術の範囲内であると考えられる。
実施例１２－ブロメライン、及びＧａＲＰは、プレドニゾロンとの負の薬物相互作用を否定することなく、ＴＮＢＳ大腸炎モデルの内視鏡疾患を軽減できる
プレドニゾロンには、５５の主要な、３９０の中程度の、３９の軽微な薬物相互作用があることが知られている。既知の悪影響の中には、プレドニゾロンの吸収を損ない得る緩衝剤などのいくつかの一般的な成分との相互作用があります。生薬は人気のある治療法であり、通常は臨床医に併用を勧めない患者が増えることで、利用されている。したがって、医師、及び臨床医は、既知、又は潜在的な薬草相互作用が存在し、スクリーニングするべきであることを認識しています。この概念は、当然、非ハーブベースの栄養剤に拡張され得る。過敏性腸症候群、及び炎症性腸疾患に特に関連するのは、炎症を制御するためのコルチコステロイドの一般的な使用である。Ｍｉｌｌｅｒによると［Ｍｉｌｌｅｒ ＬＧ「生薬：既知又は潜在的な薬草相互作用に焦点を当てた選択された臨床的考察」，Ａｒｃｈ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ、１５８（１９９８）：２２００～１１］、この薬草相互作用の根底にある理論的懸念は、免疫刺激薬草がコルチコステロイドの免疫抑制効果を相殺する、又は最小化することである。これらの懸念に照らして、本発明者らは、本明細書に記載の製剤の存在下、及び非存在下のおけるプレドニゾロンの効果を調べた。
実施例１１と同じ方法でＴＮＢＳを投与することにより、マウスを大腸炎で誘発した。３日後、病変を内視鏡検査によって記録し、動物を、ｉ）水中の１５０ｍｇ／ｋｇブロメライン、ｉｉ）１５０ｍｇのブロメライン、及び直腸投与されたスレオニン／酪酸ナトリウム／ビタミンＤ３、ｉｉｉ）２ｍｇ／ｋｇ経口プレドニゾロン、又はｉｖ）１５０ｍｇのブロメラインと直腸投与されたスレオニン／酪酸ナトリウム／ビタミンＤ３と２ｍｇ／ｋｇ経口プレドニゾロンによって治療した。１１日目に内視鏡スコアを測定し、３日目から１１日目までの内視鏡スコアの変化を計算した（図１６）。表２１は、上記のグループの内視鏡スコアの変化、及びプラセボと比較した統計的有意性を示している。
Figure 2022552510000026
グループは、ｉ）プラセボ、ｉｉ）経口で１５０ｍｇの水中のブロメライン、ｉｉｉ）経口で１５０ｍｇのブロメライン、及び１５ｍｇ／ｋｇメントールと、経直腸でＧａＲＰ、ｉｖ）１５０ｍｇのブロメライン及び１５ｍｇ／ｋｇメントールと、経直腸でＧａＲＰ及び２ｍｇ／ｋｇプレドニゾロン、ｖ）経直腸で２ｍｇ／ｋｇプレドニゾロン、並びにｖｉ）経直腸でＧａＲＰである。ＧａＲＰは、１８５ｍｇ／ｋｇ酪酸ナトリウム、２８０ｍｇ／ｋｇスレオニン、３．８４μｇ／ｍｌビタミンＤ３である。ヒト等価用量としては、ブロメライン９６０ｍｇ／ヒト８０ｋｇ；メントール１００ｍｇ／ヒト８０ｋｇ；スレオニン１８００ｍｇ／ヒト８０ｋｇ；酪酸ナトリウム１２００ｍｇ／ヒト８０ｋｇ；及びビタミンＤ３２５μｇ／ヒト８０ｋｇである。スレオニン、酪酸ナトリウム、及びビタミンＤ３は、結腸で放出される製剤をシミュレートするため、すなわち、下部腸への投与を達成するため、結腸の上部で経直腸強制投与として製剤化及び投与された。マウス結腸のｐＨがヒトのそれよりも低く、通過時間が短いため、本明細書に記載の組成物のヒト製剤は使用できなかった。これは、製剤がマウスのＧＩ管を通って素早く移動し、放出に必要な保護コーティングを失わせるのに必要なｐＨが達成されないため、標的化されたヒト製剤が動物研究において内容物を放出しないことを意味する。
ここに提示された結果から、本発明者らは、酪酸ナトリウム、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤを含む製剤がプレドニゾロンの有効性を妨害しないこと、並びに１）ブロメラインのみ、２）スレオニン／酪酸／ビタミンＤ３のみ、及び３）経口でのブロメライン／メントールと経直腸のスレオニン／酪酸／ビタミンＤ３の組み合わせが、この実験における２ｍｇ／ｋｇプレドニゾロンと同じくらい効果的であると考える。
実施例１３-剤形の製剤
パートＡ 錠剤／ミニタブ／カプセル／成分：
目的は、６．８：１（±３０％、すなわち４．７５：１～８．８５：１の範囲）の比率でブロメライン及びメントールを含む安定した腸溶コーティングされたミニ錠剤製剤を開発することであった。開発された製剤は、直接圧縮方法によって調製される。
Figure 2022552510000027
製造手順：
１．メントールプレミックス：メントールは７０℃での加熱下で溶融した。溶融メントールにフジシルを加え、加熱攪拌した。自由流動性の粉末を形成するまで、撹拌を続けた。
２．エーロシル２００、フジカリン、及びメントールプレミックスは、１０Ｌのオクタゴナルブレンダで１５ｒｐｍで１５分間混ぜ合わせる必要がある。
３．ブロメライン、アビセルＳＭＣＣ９０、クルーセルＥＸＦ、及びクロスポビドンを、機械式ふるいに取り付けられた＃４０ＡＳＴＭでふるいにかけ、３０Ｌのオクタゴナルブレンダでステップ２の材料と共に１５ｒｐｍで１５分間混ぜ合わせた。
４．ステアリン酸マグネシウムを＃６０ＡＳＴＭでふるいにかけた。
５．潤滑：ステップ４の材料をステップ３の材料に加え、３０Ｌのオクタゴナルブレンダで１５ｒｐｍで５分間混ぜ合わせた。
６．圧縮：潤滑された混合物は、２．５０×２．５０ｍｍの丸い両凸形状のマルチチップパンチを使用してミニタブレットに圧縮された。
７．シールコーティング：Ｅｕｄｒａｇｕａｒｄ Ｃｏｎｔｒｏｌに、必要量の精製水が追加された。メトセルＥ５プレミアムＬＶ、及びタルクを攪拌しながら加えた。攪拌は、コーティング操作の間、常に続けられた。自動タブレットコーターのコア錠剤床に懸濁液を噴霧した。
８．腸溶コーティング：グリセリンを攪拌しながらＥｕｄｒａｇｕａｒｄ Ｃｏｎｔｒｏｌに加えた。必要量の精製水を、撹拌しながらＥｕｄｒａｇｕａｒｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ、及びグリセリン混合物に加えた。アルギン酸ナトリウム、及びタルクをポリ袋に入れて混合し、塊を形成することなく上記の混合物にゆっくりと加えた。必要量のレーキ染料を少量の水で均質化し、攪拌しながら懸濁液に添加した。コーティング操作の前に、攪拌を３時間続けた。
Figure 2022552510000028
ブロメラインの安定性プロファイルに基づいて、直接圧縮戦略が選択された。メントールをミグロイルに溶解する、ワックスに埋め込む、又はメントールのミセルをビタミンＥに組み込むなどの代替方法が検討されたが、メントールは低温で昇華する傾向があるため、吸着技術を採用した。
ミニタブレットは、タイプII装置ＵＳＰ２９ＮＦ２４＜７１１＞を使用した標準ＵＳＰ法に従って溶解試験にかけられた。ミニタブレットを０．１Ｎ塩酸中で１時間撹拌した後、ｐＨ６．８に５時間調整した。サンプルは、ｐＨ調整時（０）、ｐＨ調整前３０分、６０分、調整後＋３０分、＋６０分、及びその後１時間ごとに採取された。図１７に示すように、ブロメラインを分析し、力価を時間に対してプロットしました。
パートＢ 錠剤／ミニタブ／カプセル／成分：
医薬品は、小腸及び結腸領域の下部に薬物を送達するためのミニタブレットとして設計された。この製品は、物理的、及び化学的に安定しており、貯蔵寿命の間、効力を発揮するように設計されている。品質の全ての基準を満たす一貫した製品を確保するために、製剤、及び方法が開発されました。スレオニンと酪酸ナトリウムの比率は、１．５：１±３０％である（１．０５：１～１．９５：１）。
Figure 2022552510000029
Figure 2022552510000030
製造方法：
１．ふるい分け：酪酸ナトリウム、Ｌ－スレオニン、微結晶セルロース、無水リン酸二カルシウム（Ａタブ）、クロスポビドン（コリドンＣＬ）を＃２４ＡＳＴＭメッシュに通した。
２．結合剤溶液：ブチル化ヒドロキシトルエン、ビタミンＤ３、及びポビドンＫ９０Ｆをイソプロピルアルコールに加え、透明な溶液が形成されるまで攪拌を続けた。
３．上記の材料は、湿式造粒によって組み合わされ、生成物は流動床乾燥機で乾燥され、そして粉砕され、ステアリン酸マグネシウムでふるいにかけられる。
４．圧縮：混合物は、２．５０×２．５０ｍｍの丸い両凸形状のマルチチップパンチを使用してミニタブレットに圧縮された。
５．シールコーティング：イソプロピルアルコール／塩化メチレンシールコート中のヒドロキシプロピルメチルセルロースを適用した。
６．Ｅｕｄｒａｇｕａｒｄ ｂｉｏｔｅｃ分散：Ｅｕｄｒａｇｕａｒｄ ｂｉｏｔｅｃ、水、及びＰｌａｓＡＣＲＹＬＴ２０分散液を密封されたミニタブレットに噴霧した。
７．Ｅｕｄｒａｇｕａｒｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ分散液：グリセリン、Ｅｕｄｒａｇｕａｒｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ、アルギン酸ナトリウム、及びタルクを混合して分散液を形成し、これをミニタブレットにコーティングした。
Figure 2022552510000031
ミニタブレットは、タイプII装置ＵＳＰ２９ＮＦ２４＜７１１＞を使用した標準ＵＳＰ法に従って溶解試験にかけられた。ミニタブレットを０．１Ｎ塩酸中で１時間撹拌した後、ｐＨ６．２に１時間、最後にｐＨ７．４に４時間調整した。サンプルは、ｐＨ調整時（０）、ｐＨ調整前６０分、調整後＋６０分（２回目のｐＨ調整前）、２回目の調整後＋３０分、＋６０分、その後１時間ごとに採取された。図１８に示すように、酪酸を分析し、力価を時間に対してプロットしました。
完成した製剤：
パートＡ、及びパートＢのミニタブは、類似のサイズと特性であり、治療される状態の段階に応じて任意の有用な比率で混合されてよい。現行の臨床試験において、それらは１．９４：２．２８ｗ／ｗの比率で混合され、７０（メントール）：４８０（ブロメライン）：９００（スレオニン）：６００（酪酸ナトリウム）：０．０１２５（コレカルシフェロール）の成分比を提供する。２．９１ｗ／ｗ（パートＡ）対２．２８ｗ／ｗ（パートＢ）というオルタナティブの比率は、１０５（メントール）：７２０（ブロメライン）：９００（スレオニン）：６００（酪酸ナトリウム）：０．０１２５（コレカルシフェロール）の成分比、及び比率を提供する。
現在の臨床試験で患者に提供される用量としては、１日２回の４．２２ｇで、メントール１４０ｍｇ、ブロメライン９６０ｍｇ、スレオニン１８００ｍｇ、酪酸ナトリウム１２００ｍｇ、及びコレカルシフェロール２５μｇの合計１日用量を提供する、或いは１日２回の２．２１ｇで、メントール７０ｍｇ、ブロメライン４８０ｍｇ、スレオニン９００ｍｇ、酪酸ナトリウム６００ｍｇ、及びコレカルシフェロール１２．５μｇの合計１日用量を提供する。投与量の充填公差は±１５％である。
実施例１４-実施例１１、及び１２における治療後の切片の組織学的スコアリング
ＴＮＢＳマウスモデルでのＧａＲＰの評価
実施例１１、及び１２は、マウスモデルにおけるＴＮＢＳ誘発性大腸炎でのＧａＲＰ性能の態様を評価した。３日目と比較した１１日目の内視鏡スコア、並びに安楽死させた動物の切除された結腸の重量、長さ、及び重量対長さの比率に対する様々な治療群の効果が報告された。
この実施例においては、盲検法での顕微鏡法によって評価される前に、結腸の固定、染色、及び切片化を行なった。結腸は、活動性疾患だけでなく、疾患からの回復の証拠についても検査され、以下の基準に従ってスコア付けされた。スコアリングは、６つのカテゴリーのそれぞれにおいて最大スコアが３で、スコアラーが知らされず、３回実行された。
大腸炎の組織学的スコアリング
大腸炎の活動（重症度に基づいて０～３）
血管過多（血管の開口部）
単核細胞の存在（構造も消失）
上皮過形成（細長い陰窩及び絨毛）
上皮損傷（上皮連続性の喪失）
好中球の存在
リンパ凝集体（スコア０～２）０、１～２、＞２
データは、プラセボ対照に対する有意性について、スチューデントのｔ－検定によって照合分析された。要約統計量は以下の表に報告されており、各グループの平均データから健康な対照の平均を差し引いたもの（ｘ￣＝５．１、σ＝１．７）が図１９に示されている。
Figure 2022552510000032
データは、プレドニゾロン治療が治癒を改善する傾向を示し、ＧａＲＰ（スレオニン／酪酸／ビタミンＤ）、及びブロメライン両濃度での完全製剤が、プレドニゾロンの有無に関係なく、組織学的スコアの統計的に有意な改善を示すことを示している。
理論に縛られることを望むものではないが、本明細書で提供されるデータは、結腸を標的とするＧａＲＰ成分及び小腸を標的とするブロメライン／メントールの使用が、大腸炎の治療のための予想外、且つ驚くほど強い治療上の恩恵を提供し得ることを示すものであると、本発明者は考えている。
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Claims (53)

  1. 以下の成分を含む組成物。
    （ｅ）ブロメライン
    （ｆ）１つ以上のＳＣＦＡ又はそのエステル
    （ｇ）Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、及びＬ－メチオニン、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸
    （ｈ）ビタミンＤ又はその代謝物
  2. 前記（ｃ）が、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、及びＬ－メチオニン、並びにそれらの組み合わせから選択される１つ以上のアミノ酸を含む、請求項１に記載の組成物。
  3. 前記（ｃ）が、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、及びＬ－メチオニンを含む、請求項１に記載の組成物。
  4. 前記（ｃ）が、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、及びＬ－メチオニンを含む、請求項１に記載の組成物。
  5. 前記（ｃ）が、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、及びＬ－メチオニンを含む、請求項１に記載の組成物。
  6. 前記（ｃ）が、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－アルギニン、及びＬ－メチオニンを含む、請求項１に記載の組成物。
  7. 前記（ｃ）が、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－アルギニン、及びＬ－グルタミンを含む、請求項１に記載の組成物。
  8. 前記（ｃ）が、Ｌ－トリプトファン及びＬ－アルギニンを含む、請求項１に記載の組成物。
  9. 前記（ｃ）が、Ｌ－トリプトファン及びＬ－グルタミンを含む、請求項１に記載の組成物。
  10. 前記（ｃ）が、Ｌ－トリプトファン及びＬ－メチオニンを含む、請求項１に記載の組成物。
  11. 前記（ｃ）が、Ｌ－アルギニン及びＬ－グルタミンを含む、請求項１に記載の組成物。
  12. 前記（ｃ）が、Ｌ－アルギニン及びＬ－メチオニンを含む、請求項１に記載の組成物。
  13. 前記（ｃ）が、Ｌ－グルタミン及びＬ－メチオニンを含む、請求項１に記載の組成物。
  14. 前記（ｃ）が、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、又はＬ－メチオニンを含む、請求項１に記載の組成物。
  15. 前記（ｃ）が、本質的にＬ－トリプトファン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、又はＬ－メチオニンからなる、請求項１に記載の組成物。
  16. 前記（ａ）、前記（ｂ）、Ｌ－スレオニン、及び前記（ｄ）を含む、請求項１に記載の組成物。
  17. 本質的にブロメライン、ＳＣＦＡ、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤ、又はそれらの代謝物からなる請求項１６に記載の組成物。
  18. １つ以上のＳＣＦＡ、又はそのエステルが、酪酸、プロピオン酸、又は酢酸、或いはそれらの塩である、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
  19. １つ以上のＳＣＦＡ、又はそのエステルが、酪酸ナトリウム、酪酸カルシウム、プロピオン酸ナトリウム、又は酢酸ナトリウムであり、好ましくは酪酸ナトリウムである、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
  20. １つ以上のＳＣＦＡ、又はそのエステルが、酪酸ナトリウムである、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
  21. 本質的にブロメライン、酪酸ナトリウム、Ｌ－スレオニン、及びビタミンＤ、或いはそれらの代謝物からなる、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
  22. 前記組成物が、約５０～約２５００ｍｇ、好ましくは約２５０～約２２５０ｍｇ、約５００～約２０００ｍｇ、約７５０～約１７５０ｍｇ、約１０００ｍｇ～約１６００ｍｇ、約１３００ｍｇ～約１５５０ｍｇ、約１４００～約１５００ｍｇ、約１４２０～約１４６０ｍｇ、より好ましくは約１４４０ｍｇのブロメラインを含む単位剤形である、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
  23. 約１４４０ｍｇ、好ましくは約１０３０ｍｇ、より好ましくは約７２０ｍｇ、さらに好ましくは約４８０ｍｇのブロメラインを含む、請求項２２に記載の組成物。
  24. 前記組成物が、約４５～１８００ｍｇのＳＣＦＡ、好ましくは約７５～約１６５０ｍｇ、約２５０～約１５００ｍｇ、約５００～約１４００ｍｇ、約７５０～約１５００ｍｇ、約１０００～約１４００ｍｇ、約１１００～約１３００ｍｇ、より好ましくは約１２００ｍｇのＳＣＦＡを含む単位剤形である、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
  25. 約１２００ｍｇ、好ましくは約６００ｍｇ、より好ましくは約３００ｍｇのＳＣＦＡを含む、請求項２４に記載の組成物。
  26. 前記ＳＣＦＡが酪酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、又は酢酸ナトリウム、好ましくは酪酸ナトリウムである、請求項２４、又は２５に記載の組成物。
  27. 前記組成物が、約６７．５～約２７００ｍｇ、好ましくは約１１２．５～約２２５０ｍｇ、約２５０～約２０００ｍｇ、約５００～約１９００ｍｇ、約９００～約１８００ｍｇ、より好ましくは約１８００ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせを含む単位剤形である、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
  28. 約６７．５～約２７００ｍｇ、好ましくは約１１２．５～約２２５０ｍｇ、約２５０～約２０００ｍｇ、約５００～約１９００ｍｇ、約９００～約１８００ｍｇ、より好ましくは約１８００ｍｇのＬ－スレオニンを含む、請求項２７に記載の組成物。
  29. 約１８００ｍｇ、好ましくは約９００ｍｇ、より好ましくは約４５０ｍｇのＬ－スレオニンを含む、請求項２８に記載の組成物。
  30. 前記組成物が、約４～約１５０μｇ、約６．５～約１４０μｇ、約１３～約１３０μｇ、約２５～約１２０μｇ、約３５～約１１０μｇ、約５０～約１０５μｇ、より好ましくは約１００μｇ、さらに好ましくは約５０μｇ、さらに好ましくは約２５μｇ、さらに好ましくは約１２．５μｇのビタミンＤを含む単位剤形である、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
  31. 約３～約１５０ｍｇ、好ましくは約６～約１４５ｍｇ、約１２～約１４０ｍｇ、約２４～約１３５ｍｇ、４８～約１３０ｍｇ、約６０～約１２５ｍｇ、約８０～約１２０ｍｇ、約９０～約１１０ｍｇ、約１００ｍｇ、より好ましくは約９６ｍｇのメントールをさらに含む、請求項３０に記載の組成物。
  32. 約１０５ｍｇ、好ましくは１００ｍｇ、より好ましくは約９６ｍｇ、さらに好ましくは約７０ｍｇ、さらに好ましくは約５０ｍｇ、さらに好ましくは約４８ｍｇのメントールを含む、請求項３１に記載の組成物。
  33. 約１～約１０ｇの、請求項１から３２のいずれか１項に記載の組成物を含む、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）又は過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の治療、又は予防に使用される際の単位剤形。
  34. 経口剤形である、請求項３３に記載の単位剤形。
  35. 約１～約８ｇ、約１～約７ｇ、約１～約６ｇ、約１～約５ｇ、約１～約４、約１～３ｇの、請求項１から３２のいずれか１項に記載の組成物を含む、請求項３４に記載の経口剤形。
  36. ５０～２５００ｍｇのブロメライン、好ましくは７２０ｍｇのブロメライン、４５～１８００ｍｇの酪酸ナトリウム、好ましくは６００ｍｇ、より好ましくは３００ｍｇの酪酸ナトリウム、６７．５～２７００ｍｇのＬ－スレオニン、好ましくは９００ｍｇ、より好ましくは４５０ｍｇのＬ－スレオニン、４～１５０μｇのビタミンＤ、好ましくは２５μｇ、より好ましくは１２．５μｇのビタミンＤ、及び任意で３～１５０ｍｇのメントール、好ましくは１０５ｍｇ、より好ましくは７０ｍｇ、さらに好ましくは４８ｍｇのメントールを含む、請求項３４、又は３５に記載の経口剤形。
  37. １つ以上の丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項３３から３６のいずれか１項に記載の経口剤形。
  38. ２つの異なるタイプの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子を含み、各々の異なるタイプがその内容物を胃腸管の異なる部分に放出するように処方される、請求項３３から３７のいずれか１項に記載の経口剤形。
  39. 前記胃腸管の異なる部分が十二指腸、及び結腸である、請求項３３から３８のいずれか１項に記載の経口剤形。
  40. 前記２つの異なるタイプの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子が、タイプＡ、及びタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子であり、前記タイプＡ、及びタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子が、それぞれ、請求項１から３２のいずれか１項に記載の組成物の少なくとも１つの成分、好ましくは少なくとも２つの成分を含む、請求項３８、又は３９に記載の経口剤形。
  41. 前記タイプＡ及びタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子が、それぞれ、前記組成物の少なくとも１つの互いに異なる成分、好ましくは前記組成物の少なくとも２つの互いに異なる成分を含む、請求項４０に記載の経口剤形。
  42. 前記タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子がブロメラインを含む、請求項４０、又は４１に記載の経口剤形。
  43. 前記タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子が、約４００～１１００ｍｇのブロメライン、約６００～１０００ｍｇ、約７００～９００ｍｇ、約７５０～８５０ｍｇ、好ましくは約８００ｍｇのブロメラインを含む、請求項４０から４２のいずれか１項に記載の経口剤形。
  44. 前記タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子が、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、酪酸ナトリウムと、ビタミンＤとを含む、請求項４０、又は４１に記載の経口剤形。
  45. 前記タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子が、Ｌ－スレオニン、酪酸ナトリウム、及びビタミンＤ、好ましくはビタミンＤ３を含む、請求項４４に記載の経口剤形。
  46. 前記タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子が、約６７．５～約２７００ｍｇ、好ましくは約１１２．５～約２２５０ｍｇ、約２５０～約２０００ｍｇ、約５００～約１９００ｍｇ、約９００～約１８００ｍｇ、好ましくは約１８００ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項４０から４５のいずれか１項に記載の経口剤形。
  47. 前記タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子が、約１８００ｍｇ、好ましくは約９００ｍｇ、好ましくは約４５０ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項４６に記載の経口剤形。
  48. 前記タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子が、約４５～１８００ｍｇの酪酸ナトリウム、好ましくは約７５～約１６５０ｍｇ、約２５０～約１５００ｍｇ、約５００～約１４００ｍｇ、約７５０～約１５００ｍｇ、約１０００～約１４００ｍｇ、約１１００～約１３００ｍｇ、より好ましくは約１２００ｍｇ、さらに好ましくは約６００ｍｇの酪酸ナトリウムを含む、請求項４０から４７のいずれか１項に記載の経口剤形。
  49. 前記タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子が、約４～約１５０μｇ、約６．５～約１４０μｇ、約１３～約１３０μｇ、約２５～約１２０μｇ、約３５～約１１０μｇ、約５０～約１０５μｇ、好ましくは約１０５μｇ、より好ましくは約１００μｇ、さらに好ましくは約７０μｇのビタミンＤを含む、請求項４０から４８のいずれか１項に記載の経口剤形。
  50. 小腸を標的とする１４４０ｍｇのブロメライン及び２８８ｍｇのメントールを含む、少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせと、結腸を標的とした用量である１２００ｍｇの酪酸（ナトリウム塩）、１８００ｍｇのＬ－スレオニン、及び０．０２５ｍｇのビタミンＤ３を含む、少なくとも１つの腸溶コーティングされた丸薬、錠剤、ミニタブ、カプセル、顆粒、粒子、又は微粒子、或いはそれらの任意の組み合わせとを含む、請求項３３、又は３４の単位剤形。
  51. タイプＡ、及びタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子を個別の部分として含む単位剤形であって、
    前記タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子が、本質的に７２０ｍｇのブロメラインからなり、前記ブロメラインを対象の小腸へ放出するために処方され、
    前記タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子が、任意で１４４ｍｇのメントールを含み、前記タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子は、本質的に、６００ｍｇの酪酸ナトリウムと、９００ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、０．０１２５ｍｇのビタミンＤとからなり、前記酪酸ナトリウムと、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、ビタミンＤとを対象の下部腸へ放出するために処方された、単位剤形。
  52. タイプＡ、及びタイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子を個別の部分として含む単位剤形であって、
    前記タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子が、本質的に１４４０ｍｇのブロメラインからなり、前記ブロメラインを対象の小腸へ放出するために処方され、前記タイプＡの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子が、任意で２８８ｍｇのメントールを含み、
    前記タイプＢの丸薬、錠剤、ミニタブ、顆粒、カプセル、粒子、又は微粒子が、本質的に、１２００ｍｇの酪酸ナトリウムと、１８００ｍｇのＬ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、０．０２５ｍｇのビタミンＤとからなり、前記酪酸ナトリウムと、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－アルギニン、又はＬ－メチオニン、或いはそれらの任意の組み合わせと、ビタミンＤとを対象の下部腸に放出するために処方された、単位剤形。
  53. 治療上有効量の、請求項１から３２のいずれか１項の組成物、又は請求項３４から４９のいずれか１項の経口剤形を、必要とする対象に投与することを含む、ＩＢＤ、又はＩＢＳを予防する、治療する、又は管理する方法。
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