FR2826581A1

FR2826581A1 - Utilisation du tripeptide lys-pro-val (kpv) dans le traitement des melanomes

Info

Publication number: FR2826581A1
Application number: FR0108680A
Authority: FR
Inventors: Yann Mahe
Original assignee: LOreal SA
Current assignee: LOreal SA
Priority date: 2001-06-29
Filing date: 2001-06-29
Publication date: 2003-01-03
Anticipated expiration: 2021-06-29
Also published as: FR2826581B1

Abstract

L'invention a trait à l'utilisation d'au moins un peptide contenant au moins la séquence Lysine-Proline-Valine (KPV), ou d'au moins un équivalent fonctionnel d'un tel peptide, dans une composition dermatologique et/ ou pharmaceutique destinée à diminuer l'expression du facteur d'inhibition de la migration des macrophages (macrophage migration inhibitory factor, ou MIF), habituellement sur-exprimé dans les mélanomes.

Description

UTILISATION DU TRIPEPTIDE Lys-Pro-Val (KPV)
DANS LE TRAITEMENT DES MELANOMES L'invention a trait à l'utilisation d'au moins un peptide contenant au moins la séquence Lysine-Proline-Valine (KPV), ou d'au moins un équivalent fonctionnel d'un tel peptide, dans une composition dermatologique et/ou pharmaceutique destinée à diminuer l'expression d'un gène habituellement sur-exprimé dans les mélanomes.

Le facteur d'inhibition de la migration des macrophages (macrophage migration inhibitory factor, ou MIF) est une lymphokine initialement décrite pour son pouvoir d'inhibition de la migration des macrophages. Ce facteur a ensuite été désigné comme une cytokine, une hormone, et un immunorégulateur. En particulier, le MIF a une action antagoniste de l'action anti-inflammatoire des glucocorticoides.

Le MIF a été retrouvé dans plusieurs tissus, notamment dans la peau, et plus particulièrement dans les fibroblastes. Steinhoff et a/. ont étudié le rôle de ce facteur dans des maladies inflammatoires de la peau, notamment chez des patients atteints de psoriasis. Ils ont observé une sur-expression significative du MIF dans les peaux psoriatiques, suggérant son rôle actif dans l'établissement et le maintien de la pathologie (Steinhoff, Meinhardt et a/. 1999).

Par ailleurs, Shimizu et al. ont récemment mis en évidence une surexpression importante du MIF dans des lignées cellulaires dérivées de mélanomes, par comparaison avec des mélanocytes normaux en culture.

Ils ont étudié plus particulièrement le rôle de la sur-expression du MIF dans des cellules G361, qui sont une lignée cellulaire largement disponible de mélanome humain. La transfection de ces cellules avec un plasmide antisens du MIF a entraîné une chute marquée de la croissance de ces cellules, suggérant que le MIF participe au mécanisme de prolifération des

cellules de mélanome. Ils ont aussi montré le rôle du MIF dans la migration des cellules G361 et dans la néo-angiogénèse tumorale (Shimizu, Abe et al. 1999). Il ressort de cette étude que le MIF est probablement un facteur de croissance important dans la prolifération et l'invasion des cellules de mélanome.

Le rôle du MIF a aussi été étudié dans des pathologies non cutanées.

Ainsi, dans le domaine de la néphrologie, Kim et al. ont suggéré que le MIF avait un rôle dans la dégradation tubulo-interstitielle lors du dépôt de cristaux d'acide urique. Leurs données expérimentales montrent en effet une sur-expression du MIF d'un facteur 6 dans les zones dégradées, par rapport aux zones intactes (Kim, Huang et al. 2000). Ces auteurs concluent que la dégradation observée dans ce type de néphropathies résulte d'un phénomène d'hypersensibilité retardée (delayed-type hypersensitivity, ou DTH), induite par les cristaux et médiée par le MIF.

Le M ! F a aussi été récemment identifié comme un facteur important dans le maintien des septicémies et les chocs septiques. En effet, l'utilisation d'anticorps anti-MIF in vivo dans des modèles animaux entraîne l'abaissement des concentrations plasmatiques de facteur de nécrose tumorale (TNF), la diminution de la quantité de bactéries circulantes, et augmente la survie des animaux septicémiques (Das 2000).

Il apparaît donc utile, au vu de la littérature scientifique mentionnée cidessus, de trouver des agents capables de réguler négativement l'activité et/ou l'expression du gène codant pour le MIF, afin d'en limiter les effets délétères, tant au niveau cutané, pour traiter, limiter ou prévenir l'apparition de psoriasis ou de mélanomes, qu'au niveau d'organes profonds comme les reins ou au niveau systémique dans le cas des septicémies.

Dans ce cadre, la demanderesse a mis en évidence des substances capables de réduire spécifiquement l'expression des gènes codant pour le MIF dans des fibroblastes en culture. Plus précisément, l'effet d'un

tripeptide de séquence Lysine-Proline-Valine, ci-après désigné par KPV, a été testé sur l'expression de 475 gènes, dans des kératinocytes et des fibroblastes en culture (exemple 1). De façon surprenante, parmi ces 475 gènes, un seul gène était fortement réprimé dans les fibroblastes, en présence du tripeptide KPV ; il s'agit du MIF. Ainsi, il apparaît que le tripeptide KPV possède de façon inattendue la capacité intrinsèque de réguler négativement l'expression du MIF.

Le tripeptide KPV correspond aux trois acides aminés C-terminaux de l'hormone stimulatrice des mélanocytes de type a (a-MSH), ou Mélanotropine.

L'a-MSH est un peptide naturel connu ayant 13 résidus d'acides aminés.

Ce peptide fut décrit initialement comme produit par la glande pituitaire, mais le cerveau en général, le sang, la peau et d'autres tissus sont capables de produire une activité a-MSH.

En particulier, il a été montré que les kératinocytes de l'épiderme peuvent être une source naturelle d'a-MSH.

L'a-MSH (1-13) est connue pour ses activités antipyrétique, antiinflammatoire et propigmentante. Ce neuropeptide est connu pour inhiber l'inflammation induite par des cytokines ou d'autres médiateurs de l'inflammation, ainsi que par des produits à effet irritant.

Le signal antipyrétique de l'a-MSH, ainsi que son activité antiinflammatoire, réside dans sa séquence carboxy-terminale et peut être mimé par le tripeptide 11-13 carboxy-terminal (L) Lys (L) Pro (L) Val.

Ainsi, les brevets US 5028592 et US 5,157, 023 visent à protéger l'utilisation du tripeptide dans un procédé de traitement anti-inflammatoire et antipyrétique.

En cosmétologie, des propriétés anti-sensibilisantes et anti-inflammatoires du peptide KPV ont été décrites (demandes de brevets EP-A-1092427, et EP-A-0764444), ainsi que l'utilisation de dérivés de l'a-MSH pour stimuler la pousse des cheveux (brevet EP-A-759292).

L'invention porte donc, en premier lieu, sur l'utilisation d'au moins un peptide contenant le tripeptide KPV, ou d'au moins un équivalent fonctionnel d'un tel peptide, pour la préparation d'une composition destinée à diminuer l'expression du facteur d'inhibition de la migration des macrophages (MIF) dans des cellules de mammifère et, de façon préférée, dans des cellules humaines.

Dans une réalisation particulière de l'invention, les cellules sont des fibroblastes.

Par "équivalent fonctionnel" d'un peptide contenant le motif KPV, on entend, au sens de la présente invention, toute molécule présentant la capacité de diminuer l'expression du MIF, dans des fibroblastes en culture.

Un test pour déterminer si une molécule est un équivalent fonctionnel du peptide KPV selon cette dernière définition, est d'effectuer, en présence et en absence de cette molécule, une analyse de l'expression de certains gènes, tel que cela est présenté par exemple dans l'exemple 1. A titre d'exemple, un équivalent fonctionnel selon l'invention comprend un peptide contenant un motif KPV, dont l'un au moins des résidus d'acide aminé peut avoir été substitué, par exemple par un résidu d'acide aminé ayant un index hydropathique similaire. L'invention comprend aussi à ce titre une molécule comportant une partie peptidique comprenant le motif KPV, liée covalemment à un ou plusieurs autres groupements non peptidiques, à des fins de protection et/ou de vectorisation et/ou de ciblage du tripeptide. Bien entendu, le tripeptide KPV ou un équivalent fonctionnel de ce tripeptide sont accessibles au sein des molécules utilisées dans le cadre de la présente invention, de sorte que les fonctions du motif KPV mises en

oeuvre dans le cadre de l'invention, sont essentiellement préservées. De préférence, le motif KPV est exposé à la surface de ces molécules, en un ou plusieurs exemplaires.

Dans la suite de ce texte, le terme "peptide contenant le tripeptide KPV" désignera aussi bien un peptide ou une protéine de plus de trois acides aminés, dans lequel le tripeptide KPV est présent, que le tripeptide KPV seul, ou qu'un équivalent fonctionnel de ces peptides, suivant la définition ci-dessus.

Un aspect particulier de l'invention concerne l'utilisation d'au moins un peptide contenant le tripeptide KPV, pour la préparation d'une composition destinée à traiter, atténuer ou prévenir l'apparition de psoriasis. Une surexpression significative du MIF a été observée dans les peaux psoriatiques, ce qui suggère que le MIF a un rôle actif dans l'établissement et le maintien de la pathologie (Steinhoff, Meinhardt et al. 1999).

Une composition formulée pour être appliquée sur la peau psoriatique, comprenant au moins un peptide contenant le tripeptide KPV et permettant de résorber et/ou de faire disparaître le psoriasis, et/ou d'inhiber sa progression, fait également partie de l'invention.

Un autre aspect particulier de l'invention concerne l'utilisation d'au moins un peptide contenant le tripeptide KPV, pour la préparation d'une composition destinée à traiter, atténuer ou prévenir l'apparition de mélanomes. Une composition élaborée suivant cet aspect de l'invention est notamment susceptible d'inhiber la progression d'un mélanome et/ou la formation de métastases, en inhibant l'expression du MIF, impliqué dans l'angiogénèse tumorale. En effet, Shimizu et a/. ont mis en évidence le rôle du MIF comme facteur de croissance dans la prolifération et l'invasion des cellules de mélanome (Shimizu, Abe et al. 1999).

L'invention porte donc aussi sur une composition formulée pour être appliquée sur la peau au niveau d'un mélanome, comprenant au moins un peptide contenant le tripeptide KPV ou au moins un équivalent fonctionnel d'un tel peptide, ladite composition permettant de résorber et/ou de faire disparaître le mélanome, et/ou d'inhiber sa progression et/ou la formation de métastases.

Une telle composition est destinée à être utilisée de préférence chez l'humain, mais elle peut être aussi destinée à un usage vétérinaire.

Dans certaines réalisations particulières de l'invention, notamment liées à des pathologies de la peau, les peptides comprenant le tripeptide KPV sont utilisés de façon préférée pour la préparation d'une composition appropriée pour l'administration topique, c'est-à-dire contenant un milieu cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable, soit un milieu compatible avec la peau et les muqueuses.

Une composition thérapeutique suivant l'invention peut être appliquée directement sur l'endroit lésé ou dans son voisinage, ou encore, à titre préventif, en un autre site, par exemple en un site ayant présenté une lésion qui a disparu, afin de prolonger l'état de rémission.

Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, la composition a un pH proche de celui de la peau, compris entre 4 et 7. Lorsqu'elle est appliquée par voie topique, la composition comprenant au moins un peptide contenant le tripeptide KPV ou au moins un équivalent fonctionnel d'un tel peptide, peut être appliquée sur le visage, le cou, les muqueuses ou tout autre zone cutanée du corps.

Les compositions de l'invention destinées au traitement de psoriasis ou de mélanomes se présentent de préférence sous une forme appropriée pour une administration par voie topique. Elles se présentent notamment sous forme de solutions aqueuses, hydroalcooliques ou huileuses, de

dispersions du type lotion ou sérum, de gels anhydres ou huileux, d'émulsions de consistance liquide ou semi-liquide du type lait, obtenues par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/H), de suspensions ou d'émulsions de consistance molle, semi-solide ou solide du type crème, gel, de micro-émulsions, ou encore de micro-capsules, de micro-particules, ou de dispersions vésiculaires de type ionique et/ou non ionique. Ces compositions sont préparées selon les méthodes usuelles.

Les quantités des différents constituants des compositions utilisées selon l'invention sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés.

Ces compositions constituent notamment des crèmes de protection, de traitement ou de soin pour le visage, pour les mains ou pour le corps, des laits corporels de protection ou de soin, des lotions, gels ou mousses pour le soin de la peau et des muqueuses ou pour le nettoyage de la peau, des masques ou encore des patches.

Les compositions peuvent également consister en des préparations solides constituant des savons ou des pains de nettoyage.

De façon connue, les compositions utilisées selon l'invention peuvent contenir également des adjuvants habituels dans les domaines cosmétique et dermatologique, tels que les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les actifs hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges et les matières colorantes. Les compositions selon l'invention peuvent en outre contenir tout autre composé ayant des propriétés hydratantes et/ou améliorant la fonction barrière. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés, et par exemple de 0, 01% à 20% du poids total de la composition. Bien entendu, l'homme de l'art veillera à choisir ce ou ces éventuels additifs et/ou leurs quantités de manière telle que les propriétés

avantageuses attachées intrinsèquement à la composition conforme à l'invention, ne soient pas, ou substantiellement pas, altérées par la ou les adjonctions envisagées.

Comme huiles utilisables dans l'invention, on peut citer les huiles minérales (huile de vaseline), les huiles végétales (huile de karité, huile d'amande douce), les huiles animales, les huiles de synthèse, les huiles siliconées (cyclométhicone) et les huiles fluorées (perfluoropolyéthers). On peut aussi utiliser comme matières grasses des alcools gras, des acides gras (acide stéarique), des cires (paraffine, carnauba, cire d'abeilles).

Comme émulsionnants utilisables dans l'invention, on peut citer le Polysorbate 60 et le stéarate de sorbitane vendus respectivement sous les dénominations commerciales Tween 60 et Span 60 par la Société ICI. On peut y ajouter des co-émulsionnants tels que le PPG-3 myristyl éther vendu sous la dénomination commerciale Emcol 249-3K par la société Witco.

Comme solvants utilisables dans l'invention, on peut citer l'eau, les alcools inférieurs, notamment l'éthanol et l'isopropanol, le propylène glycol.

Comme gélifiants hydrophiles, on peut citer les polymères carboxyvinyliques (carbomer), les copolymères acryliques tels que les copolymères d'acrylates/alkylacrylates, les polyacrylamides, les polysaccharides tels que l'hydroxypropylcellulose, les gommes naturelles (xanthane) et les argiles, et, comme gélifiants lipophiles, on peut citer les argiles modifiées comme les bentones, les sols métalliques d'acides gras comme les stéarates d'aluminium, la silice hydrophobe, les polyéthylènes et l'éthylcellulose.

Comme actifs hydrophiles, on peut utiliser les protéines ou les hydrolysas de protéine, les acides aminés, les polyols, l'urée, l'allantoïne, les sucres et les dérivés de sucres, les vitamines hydrosolubles, l'amidon, les extraits bactériens ou végétaux, notamment d'Aloe Vera.

Comme actifs lipophiles, on peut utiliser le tocophérol (vitamine E) et ses dérivés, les acides gras essentiels, les céramides, les huiles essentielles.

Par ailleurs, il est important de protéger une peau lésée des méfaits des rayonnements solaires. En particulier, un sujet présentant un ou plusieurs mélanomes doit éviter de s'exposer au soleil. De ce fait, il est aussi possible d'ajouter aux compositions selon l'invention un ou plusieurs filtres solaires, actifs dans l'UVA et/ou l'UVB, hydrophiles ou lipophiles, comportant éventuellement une fonction sulfonique. Le filtre solaire est de préférence choisi parmi les filtres organiques et/ou les filtres minéraux.

En particulier, une composition selon l'invention destinée au traitement de mélanomes comporte de préférence un filtre solaire très puissant et/ou à large spectre.

Comme filtres organiques, on peut notamment citer les dérivés cinnamiques, les dérivés salicyliques, les dérivés du camphre, les dérivés de triazine, les dérivés de la benzophénone, les dérivés du dibenzoylméthane, les dérivés de P-P-diphénylacrylate, les dérivés de l'acide p-aminobenzoïque, les polymères filtres et silicones filtres décrits dans la demande WO-93/04665 ou encore les filtres organiques décrits dans la demande de brevet EP-A 0 487 404.

Comme filtres minéraux, on peut notamment citer des pigments ou bien encore des nanopigments (taille moyenne des particules primaires : généralement entre 5 nm et 100 nm, de préférence entre 10 et 50 nm) d'oxydes métalliques enrobés ou non, comme par exemple des nanopigments d'oxyde de titane (amorphe ou cristallisé sous forme rutile et/ou anatase), de fer, de zinc, de zirconium ou de cérium qui sont tous des agents photoprotecteurs bien connus en soi agissant par blocage physique (réflection et/ou diffusion) du rayonnement UV. Des agents d'enrobage classiques sont par ailleurs l'alumine et/ou le stéarate d'aluminium. De tels nanopigments d'oxydes métalliques, enrobés ou non enrobés, sont en

particulier décrits dans les demandes de brevets EP-A-0 518 772 et EP-A-0 518773.

Comme exemples de filtres solaires complémentaires actifs dans l'UV-A et/ou l'UV-B, on peut citer : - l'acide p-aminobenzoïque, - le p-aminobenzoate oxyéthyléné (25 mol), - le p-diméthylaminobenzoate de 2-éthylhexyle, - le p-aminobenzoate d'éthyle N-oxypropyléné, - le p-aminobenzoate de glycérol,

- le salicylate d'homomenthyle, - le salicylate de 2-éthylhexyle, - le salicylate de triéthanolamine, - le salicylate de 4-isopropylbenzyle, - le 4-ter-butyl-4'-méthoxy-dibenzoylméthane (P ARSOL
1789 de GIVAUDAN ROURE) - le p-méthoxycinnamate de 2-éthylhexyle (PARSOL MCX de GIVAUDAN ROURE) - le 4-isopropyl-dibenzoylméthane (EUSOLEX 8020 de
MERCK), - l'anthranilate de menthyle, - le 2-éthylhexyl-2-cyano-3,3'-diphénylacrylate, (UVINUL
N539 de BASF), -l'éthyl-2-cyano-3,3'-diphénylacrylate, - l'acide 2-phényl benzimidazole 5-sulfonique et ses sels, - le 3-(4'-triméthylammonium)-benzylidèn-bornan-2-on- méthylsulfate, - le 2-hydroxy-4-méthoxybenzophénone (UVINUL MS 40 de
BASF),

- le 2-hydroxy-4-méthoxybenzophénone-5-sulfonate (UVINUL MS 40 de BASF), - le 2,4-dihydroxybenzophénone (UVINUL 400 de BASF), - le 2,2', 4,4'-tétrahydroxybenzophénone (UVINUL D 50 de
BASF),

- le 2, 2'-dihydroxy-4, 4'-diméthoxybenzophénone (HELISORB Il de NORQUAY), - le 2-hydroxy-4-n-octoxybenzophénone, - le 2-hydroxy-4-méthoxy-4'-méthylbenzophénone, - l'acide a- (2-oxoborn-3-ylidène) -tolyl-4-sulfonique et ses sels, - le 3- (4'-sulfo) benzylidèn-bornan-2-one et ses sels, - le 3- (4'-méthylbenzylidène)-d, l-camphre, - le 3-benzylidène-d, l-camphre, - l'acide benzène 1,4-di (3-méthylidène-1 0- camphosulfonique) et ses sels (MEXORYL SX de
CHIMEX), - l'acide urocanique, - le 2, 4-6-tris-[p-(2'-éthylhexyl-1'-oxycarbonyl)anilino]-1, 3,5- triazine, - le 2-[p- (tertiobutylamido) anilino]-4, 6-bis [p- (2'-éthylhexyl- l'-oxycarbonyl) anilino ]-1, 3,5-triazine, - le 2,4-bis {[4-2-éthyl-hexyloxyl]-2-hydroxyl-phenyl}-6-(4-

méthoxy-phenyl) -1, 3, 5-triazine, - le polymère de N- (2 et 4)- [2-oxoborn-3ylidèn) méthyl) benzyl]-acrylamide, - l'acide 4, 4-bis-benzimidazolyl-phénylèn-3, 3', 5, 5'- tétrasulfonique et ses sels, - le 2, 2'-méthylèn-bis-[6-(2H-benzotriazol-2-yl)-4- (1,1, 3, 3-tétraméthylbutyl) phénol],

- les polyorganosiloxanes à fonction malonate.

Selon l'invention, le tripeptide Lysine-Proline-Valine peut être utilisé à une

concentration comprise entre 10-12 M et 1 M, et de préférence comprise entre 10-9 M et 10-1 M. L'homme du métier sait ajuster cette quantité de matériel selon qu'il utilise un peptide contenant le tripeptide Lysine-Proline- Valine, ou tout équivalent biologique fonctionnel d'un tel peptide. La composition sera formulée avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.

L'invention trouve aussi des applications dans des domaines autres que celui des pathologies cutanées. Ainsi, dans le domaine de la néphrologie, il a été montré que le MIF est sur-exprimé d'un facteur 6 dans les zones dégradées lors du dépôt de cristaux d'acide urique (Kim, Huang et a/.

2000). Ces données suggèrent que la dégradation observée dans ce type de néphropathies résulte d'un phénomène d'hypersensibilité retardée (delayed-type hypersensitivity, ou DTH) induite par les cristaux et médiée par le MIF. L'invention porte donc aussi sur l'utilisation d'un peptide contenant le motif KPV, pour la préparation d'une composition destinée à traiter, atténuer ou prévenir l'apparition d'une néphropathie liée à une surexpression du MIF.

Le MIF a aussi été identifié comme un facteur important dans le maintien des septicémies et les chocs septiques. L'utilisation d'anticorps anti-MIF in vivo dans des modèles animaux entraîne l'abaissement des concentrations plasmatiques de facteur de nécrose tumorale (TNF), la diminution de la quantité de bactéries circulantes, et augmente la survie des animaux septicémiques (Das 2000). L'utilisation d'un peptide contenant le motif KPV, pour la préparation d'une composition destinée à traiter ou atténuer

les symptômes d'une septicémie, ou pour la préparation d'une composition destinée à traiter, atténuer ou prévenir l'apparition d'un choc septique, est donc aussi partie intégrante de la présente invention.

Le peptide utilisé selon l'invention peut bien entendu être d'origine naturelle. Cela sous-entend qu'il peut avoir été purifié à partir de matériel biologique naturel.

Le peptide peut également être produit par génie génétique.

Il est également aisé de synthétiser chimiquement à façon des peptides, même de longueur importante.

Ainsi, l'invention a plus précisément pour objet l'utilisation d'au moins un peptide tel que défini précédemment, caractérisée par le fait que le (s) peptide (s) est (sont) un (ou des) peptide (s) d'origine naturelle ou synthétique.

Dans une utilisation particulière selon l'invention, le tripeptide KPV se trouve à l'extrémité C-terminale du peptide. Dans une autre utilisation particulière selon l'invention, le peptide est restreint au tripeptide KPV. Il peut enfin s'agir d'un des sels dudit tripeptide KPV, tel que par exemple un sel d'acétate, de citrate, tartrate, fumarate....

Il se peut que pour des questions de résistance à la dégradation, il soit nécessaire d'utiliser selon l'invention une forme protégée du peptide. La forme de la protection doit évidemment être une forme biologiquement compatible. De nombreuses formes de protections biologiquement compatibles peuvent être envisagées, comme par exemple l'acylation ou l'acétylation de l'extrémité amino-terminale ou l'amidation de l'extrémité carboxy-terminale.

Ainsi, l'invention concerne une utilisation telle que précédemment définie, caractérisée par le fait que le peptide est sous une forme protégée ou non.

De préférence, on utilise selon l'invention une protection basée soit sur l'acylation ou l'acétylation de l'extrémité amino-terminale, soit sur l'amidation de l'extrémité carboxy-terminale, soit encore sur les deux.

Dans le domaine des acides aminés, la géométrie des molécules est telle qu'elles peuvent théoriquement se présenter sous la forme d'isomères optiques différents. Il existe en effet une conformation moléculaire de l'acide aminé (aa) telle qu'elle dévie à droite le plan de polarisation de la lumière (conformation dextrogyre ou D-aa), et une conformation moléculaire de l'acide aminé (aa) telle qu'elle dévie à gauche le plan de polarisation de la lumière (conformation lévogyre ou L-aa).

La nature n'a retenu pour les acides aminés naturels que la conformation lévogyre. En conséquence, si le peptide utilisé dans les compositions selon l'invention est d'origine naturelle, celui-ci sera constitué d'acides aminés de type L-aa.

Cependant, la synthèse chimique en laboratoire permet de préparer des acides aminés ayant les deux conformations possibles. A partir de ce matériel de base, il est possible d'incorporer lors de la synthèse de peptides aussi bien des acides aminés sous la forme d'isomères optiques dextrogyre que lévogyre.

On peut ainsi incorporer lors de la synthèse de peptides des résidus d'acides aminés Lysine, Proline, Valine, indifféremment sous leur forme DLysine (D-Lys), L-Lysine (L-Lys), D-Proline (D-Pro), L-Proline (L-Pro), DValine (D-Val) ou L-Valine (L-Val).

Ainsi, l'invention concerne plus particulièrement l'utilisation d'au moins un peptide tel que défini précédemment, caractérisée par le fait que les résidus acides aminés du tripeptide Lysine-Proline-Valine constituant le peptide sont indépendamment sous la forme d'isomères optiques dextrogyre ou lévogyre. Il peut s'agir aussi d'un mélange des deux formes en toute proportion, particulièrement d'un mélange racémique.

On peut citer ainsi les peptides contenant au moins l'un des tripeptides suivants : D-Lys-D-Pro-D-Val, D-Lys-D-Pro-L-Val, D-Lys-L-Pro-D-Val, L-Lys-D-Pro-D-Val, D-Lys-L-Pro-L-Val, L-Lys-D-Pro-L-Val, L-Lys-L-Pro-D-Val, L-Lys-L-Pro-L-Val.

Selon l'invention, il peut bien entendu être utilisé plus d'un peptide. Dans ce cas, le mélange de peptides peut être constitué par une combinaison des peptides ci-dessus décrits.

Dans une utilisation particulière selon l'invention, le résidu Proline du tripeptide KPV est sous la forme d'isomère optique dextrogyre (DPro).

L'invention porte enfin sur un procédé de diminution de la synthèse du MIF par des fibroblastes en culture, consistant à appliquer sur lesdits fibroblastes, une composition contenant au moins un peptide contenant le tripeptide KPV ou au moins un équivalent fonctionnel d'un tel peptide.

Ce procédé peut être mis en oeuvre par exemple en vue d'améliorer la qualité des cultures de peau destinées à la greffe. Ils peuvent être mis en oeuvre sur des cultures pures de fibroblastes, mais aussi sur des cultures mixtes, par exemple des co-cultures de kératinocytes et de fibroblastes.

Ce procédé peut aussi être mis en oeuvre in vivo, par administration topique d'une composition comportant au moins un peptide contenant le tripeptide KPV ou au moins un équivalent fonctionnel d'un tel peptide.

La partie expérimentale présente les résultats obtenus des études in vitro sur l'effet d'un peptide de synthèse KPV (Exemple 1). Des exemples de compositions utilisées selon l'invention, dans le traitement de psoriasis ou de mélanomes sont ensuite indiqués (Exemple 2), sans être limitatifs.

Exemple 1 : Etude de l'effet d'un peptide synthétique KPV sur l'expression de 475 gènes dans et des fibroblastes en culture Des fibroblastes dermiques humains normaux (NHDF) sont précultivés à forte densité en 4 flasks de 175 cm2, dans du milieu MEM/M199, 3 : 1 (Gibco 31570021/2115130) contenant du bicarbonate de sodium 1,87 mg/ml (Gibco 25080060), de la L-glutamine 2mM (Gibco 25030024) et de la pénicilline 50 UI/ml (Polylabo 60703), jusqu'à quasi-confluence ; à 37 C 5% CO2. Le milieu de culture est alors remplacé par du milieu contenant le tripeptide KPV [ (D) K (D) P (D) VI à la concentration finale de 5 10-4% (en poids/volume : g/100 ml) ou du milieu contrôle. Les cellules des différentes boîtes sont récoltées après 18 h rapidement par trypsinisation, en tubes stériles RNAse-free, selon le protocole standard et immédiatement congelées à-80 C.

L'extraction/purification de l'ARN total de chaque culture est réalisée selon la méthode préconisée par Clontech (Palo Alto, USA).

Les solutions d'ARN total sont ajustées à 1 ug/pl et traitées par la DNAse 1, pour éliminer toute trace d'ADN contaminant l'ARN, selon les recommandations du fournisseur.

Les ARN messagers (ARNm) sont purifiés par hybridation des extrémités poly (A) des ARNm à des amorces d'oligo (dT) biotinylées et capture sélective sur billes de streptavidine, selon le protocole AtlasPure (Clontech).

Les sondes ADN multiple marquées au 32p sont réalisées par réversetranscription des ARNm liés sur billes de poly (dT), à l'aide d'un pool de primers spécifiques des séquences immobilisées sur les arrays , en présence de [a32P]-dATP. Cette étape a utilisé les réactifs et le protocole préconisé par Clontech.

Les sondes marquées sont purifiées par chromatographie sur colonnes d'exclusion et la qualité et l'équivalence des sondes marquées est évaluée par comptage en scintillation liquide.

Quatre membranes Custom ATLAS BlOaernaes sont prétraitées puis les cDNAs immobilises sur chaque membrane sont hybridés (68 C, une nuit) aux sondes marquées correspondantes ; les filtres sont ensuite lavés extensivement (68 C) et placés dans des sacs plastiques individuels pour analyse.

L'analyse a eu lieu par quantification directe de la radioactivité des spots à l'aide d'un Phosphorlmager Cyclone (Packard instruments ; 24 h d'acquisition).

Les résultats montrent une inhibition de l'expression des gènes du MIF d'environ 50% en présence du tripeptide.

Exemple 2 : Exemples de formulations (à compléter par les inventeurs) Composition 1 : Lait pour le visage

<tb>
<tb> - <SEP> Huile <SEP> de <SEP> vaseline............................................................................... <SEP> 7,0 <SEP> g
<tb> - <SEP> Tripeptide <SEP> KPV <SEP> .............................................................................. <SEP> 0,005 <SEP> g
<tb> - <SEP> Monostéarate <SEP> de <SEP> glycéryle, <SEP> stéarate <SEP> de
<tb> polyéthylène <SEP> glycol(100 <SEP> OE) <SEP> ............................................................. <SEP> 3,0 <SEP> g
<tb> - <SEP> Polymère <SEP> carboxyvinylique <SEP> ............................................................... <SEP> 0,4 <SEP> g
<tb> - <SEP> Alcool <SEP> stéarylique <SEP> .............................................................................. <SEP> 0,7 <SEP> g
<tb> - <SEP> Protéines <SEP> de <SEP> soja <SEP> .............................................................................. <SEP> 3,0 <SEP> g
<tb> NAOH <SEP> 0, <SEP> 4 <SEP> g
<tb> Conservateur <SEP> qs
<tb> Eau <SEP> qsp <SEP> 100 <SEP> g
<tb>
Cette composition se présente sous forme d'un lait pour le visage, ayant de bonnes propriétés cosmétiques, et étant doux et confortable à utiliser.

Le pH de la composition est d'environ 5.5.

Composition 2 : Lotion

<tb>
<tb> - <SEP> Tripeptide <SEP> KPV.............................................................................. <SEP> 0, <SEP> 001 <SEP> 9
<tb> - <SEP> Palmitate <SEP> d'éthyl-2 <SEP> hexyle............................................................... <SEP> 10,0 <SEP> 9
<tb> - <SEP> Cyclopentadiméthylsiloxane <SEP> 20,0 <SEP> 9
<tb> Butylène <SEP> glycol <SEP> 5,0 <SEP> 9
<tb> - <SEP> Conservateur......................................................................................... <SEP> qs
<tb> - <SEP> Eau............................................................................................ <SEP> qsp <SEP> 100 <SEP> g
<tb>
Cette lotion, qui ne contient pas de tensioactif, favorise la desquamation de la peau.

Composition 3 : Lait

<tb>
<tb> - <SEP> Palmitate <SEP> d'octyle........................................................................... <SEP> 35,0 <SEP> g
<tb> - <SEP> Glygérine..........................................................................................2,0 <SEP> g
<tb> - <SEP> Tripeptide <SEP> KPV <SEP> ............................................................................... <SEP> 0,01 <SEP> g
<tb> Polymère <SEP> réticulé <SEP> acrylates <SEP> C10-C30/alkylacrylates <SEP> ........................ <SEP> 0,1 <SEP> 9
<tb> Triéthanolamine <SEP> 0,1 <SEP> 9
<tb> Acides <SEP> aminés <SEP> de <SEP> blé <SEP> 1,0 <SEP> 9
<tb> Conservateur <SEP> qs
<tb> Eau........................................................................................... <SEP> qsp <SEP> 100 <SEP> g
<tb>
Le lait obtenu, qui ne contient pas de tensioactif, possède de bonnes propriétés cosmétiques.

Composition 4 : Gel pour le visage

<tb>
<tb> Glycérine <SEP> ........................................................................................ <SEP> 10,0 <SEP> g
<tb> Tripeptide <SEP> KPV <SEP> 0, <SEP> 05 <SEP> g
<tb> Cocoamphodiacétate <SEP> de <SEP> disodium <SEP> ................................................... <SEP> 1,0 <SEP> g
<tb> Conservateur <SEP> qs
<tb> - <SEP> Eau........................................................................................... <SEP> qsp <SEP> 100 <SEP> g
<tb>
Le gel obtenu possède de bonnes propriétés cosmétiques.

Composition 5 : Gel nettoyant à l'eau

<tb>
<tb> Butylène <SEP> glycol <SEP> 7,0 <SEP> g
<tb> Sarcosinate <SEP> de <SEP> lauroyl <SEP> sodium <SEP> ......................................................... <SEP> 4,0 <SEP> 9
<tb> - <SEP> Tripeptide <SEP> KPV <SEP> ........................................................................... <SEP> 0, <SEP> 0005 <SEP> g
<tb> Triéthanolamine <SEP> ............................................................................... <SEP> 0, <SEP> 8 <SEP> 9
<tb> Carbomer <SEP> ......................................................................................... <SEP> 0,5 <SEP> 9
<tb> Conservateur........................................................................................ <SEP> qs
<tb> Eau <SEP> qsp <SEP> 100 <SEP> 9
<tb>

Le gel obtenu possède de bonnes propriétés cosmétiques.

BIBLIOGRAPHIE Das, U. N. (2000)."Critical advances in septicemia and septic shock."Crit
Care 4 (5) : 290-6.

Kim, Y. G., X. R. Huang, et a/. (2000). "Involvement of macrophage migration inhibitory factor (MIF) in experimental uric acid nephropathy."Mo ! Med 6 (10) : 837-48.

Shimizu, T., R. Abe, et al. (1999)."High expression of macrophage migration inhibitory factor in human melanoma cells and its role in tumor cell growth and angiogenesis."Biochem Biophys Res
Commun 264 (3) : 751-8.

Steinhoff, M., A. Meinhardt, et al. (1999)."Evidence for a role of macrophage migration inhibitory factor in psoriatic skin disease." Br J
Dermatol 141 (6) : 1061-6.

Claims

REVENDICATIONS 1. Utilisation d'au moins un peptide contenant le tripeptide KPV ou d'au moins un équivalent fonctionnel d'un tel peptide, pour la préparation d'une composition destinée à diminuer l'expression du gène codant pour le facteur d'inhibition de la migration des macrophages (MIF) dans des cellules de mammifère.
2. Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle les cellules de mammifère sont des cellules humaines.
3. Utilisation d'au moins un peptide contenant le tripeptide KPV ou d'au moins un équivalent fonctionnel d'un tel peptide, pour la préparation d'une composition destinée à traiter, atténuer ou prévenir l'apparition de psoriasis.
4. Utilisation d'au moins un peptide contenant le tripeptide KPV ou d'au moins un équivalent fonctionnel d'un tel peptide, pour la préparation d'une composition destinée à traiter, atténuer ou prévenir l'apparition de mélanomes.
5. Utilisation d'au moins un peptide contenant le tripeptide KPV ou d'au moins un équivalent fonctionnel d'un tel peptide, pour la préparation d'une composition destinée à traiter ou atténuer les symptômes d'une septicémie.
6. Utilisation d'au moins un peptide contenant le tripeptide KPV ou d'au moins un équivalent fonctionnel d'un tel peptide, pour la préparation d'une composition destinée à traiter, atténuer ou prévenir l'apparition d'un choc septique.
7. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans laquelle les cellules sont des fibroblastes.

<Desc/Clms Page number 22>
8. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que la composition est appropriée pour l'administration topique.
9. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que la composition comprend également au moins un filtre solaire, actif dans l'UVA et/ou l'UVB, hydrophile ou lipophile, et comportant éventuellement une fonction sulfonique.
10. Utilisation l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisée en ce que le peptide contenant le tripeptide KPV ou son équivalent fonctionnel, est utilisé à une concentration comprise entre 10-12 M et

1 M, de préférence entre 10-9 M et 10-1 M.
11. Utilisation selon l'une des revendications 1 et 2, pour la préparation d'une composition destinée à traiter, atténuer ou prévenir l'apparition d'une néphropathie liée à une sur-expression du MIF.
12. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisée par le fait que le tripeptide KPV se trouve à l'extrémité C- terminale du peptide.
13. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisée en ce que le peptide contenant le tripeptide KPV, est le tripeptide KPV.
14. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, caractérisée en ce que le peptide contenant le tripeptide KPV ou son équivalent fonctionnel, est un des sels dudit tripeptide KPV.
15. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, caractérisée en ce que le peptide contenant le tripeptide KPV ou son équivalent fonctionnel, est protégé par acylation ou acétylation et/ou amidation.

<Desc/Clms Page number 23>
16. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, caractérisée en ce que les résidus Lysine, Proline et Valine du tripeptide KPV sont indépendamment sous la forme d'isomères optiques lévogyre ou dextrogyre ou sous la forme de mélange racémique.
17. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 16, caractérisée en ce que le résidu Proline du tripeptide KPV est sous la forme d'isomère optique dextrogyre (DPro).
18. Composition formulée pour être appliquée sur la peau psoriatique, comprenant au moins un peptide contenant le tripeptide KPV ou un équivalent fonctionnel d'un tel peptide, ladite composition permettant de résorber et/ou de faire disparaître le psoriasis, et/ou d'inhiber sa progression.
19. Composition formulée pour être appliquée sur la peau au niveau d'un mélanome, comprenant au moins un peptide contenant le tripeptide

KPV ou un équivalent fonctionnel d'un tel peptide, ladite composition permettant de résorber et/ou de faire disparaître le mélanome, et/ou d'inhiber sa progression et la formation de métastases.
20. Composition selon la revendication 19, comprenant également au moins un filtre solaire, actif dans l'UVA et/ou l'UVB, hydrophile ou lipophile, et comportant éventuellement une fonction sulfonique.
21. Procédé de diminution de l'expression du gène codant pour le MIF par des fibroblastes en culture, consistant à appliquer sur lesdits fibroblastes, une composition contenant au moins un peptide contenant le tripeptide KPV ou un équivalent fonctionnel d'un tel peptide.