FR2731353A1 - Utilisation de l'oeuf de caille ou de ses derives ajoute a un antigene comme adjuvant de l'induction d'une tolerance par voie orale ou aerienne pour le traitement des maladies a composantes immunitaires - Google Patents
Utilisation de l'oeuf de caille ou de ses derives ajoute a un antigene comme adjuvant de l'induction d'une tolerance par voie orale ou aerienne pour le traitement des maladies a composantes immunitaires Download PDFInfo
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Abstract
La présente invention concerne un nouveau traitement des allergies et de divers maladies immunitaires chez l'homme. Cette invention est à inclure dans le domaine de la biologie médicale et de la médecine. Il consiste à utiliser l'oeuf de caille lyophilisé selon une procédure originale de lyophilisation faisant intervenir des paramètres particuliers et des protecteurs de cryo conservation adaptés à l'oeuf de caille comme adjuvant de l'induction d'une tolérance par voie orale vis à vis des antigènes qui provoquent les effets délétères chez le sujet malade.
Description
La présente invention a pour objet l'adjonction à un antigène d'un lyophilisat d'oeuf de caille qui provoque un état de tolérance vis à vis de cet antigène. L'oeuf de caille se comporte comme un adjuvant de l'induction de la tolérance par voie orale (TVO) chez l'homme et l'animal.
La tolérance par voie orale est un phénomène immunologique physiologique qui veut qu'un antigène apporté par voie digestive n'induit pas de réponse immunitaire systémique de type rejet mais au contraire une réponse immunitaire de type tolérance. Cette réponse immunitaire de tolérance peut mettre en oeuvre plusieurs mécanismes complexes comme l'induction d'un état d'anergie, une déviation immune avec modification de l'isotype des anticorps produit après le contact avec l'antigène, une induction de T suppresseurs, une délétion clonale T ou B.
Cependant cette tolérance peut aussi interférer avec une réponse de type rejet antérieurement établie ou prévenir une telle réponse. Ce phénomène peut avoir de multiple applications dans la mesure ou on peut le maîtriser parfaitement. Ce phénomène peut donc être utilisé pour améliorer ou traiter les allergies. les maladies autoimmunes, les situations pathologiques ou 1' autoimmunité est un facteur aggravant, les inductions de tolérance avant des greffes d'organes etc...
Cependant les règles qui régissent l'induction de la TVO sont encore mal connues.
Plusieurs modèles expérimentaux animaux la démontrent et constatent que son induction varie avec: -la structure de 1' antigène et sa sensibilité à la protéolyse -la dose de l'antigène ingéré -la chronologie d'administration -le mode et la durée d'administration -l'espèce et la lignée des animaux utilisées -l'age et le sexe des animaux -le régime alimentaire
Il est donc assez difficile d'exploiter de façon large la TVO chez l'homme dans la mesure ou l'on ne peut pas maîtriser facilement tous ces paramètres.
Il est donc assez difficile d'exploiter de façon large la TVO chez l'homme dans la mesure ou l'on ne peut pas maîtriser facilement tous ces paramètres.
Notre invention apporte une solution à ce problème. En effet aucun véritable adjuvant de la tolérance par voie orale n'a été proposé à ce jour. La présente invention a pour objet d'établir que l'oeuf de caille se comporte comme un adjuvant de la TVO. Ce phénomène peut donc être utiliser chez la plupart des individus avec des doses faibles d'antigènes. L'utilisation de l'oeuf de caille pour le traitement des maladies allergiques a fait l'objet d'un brevet Français ( N" 79 31997) puis étendue à l'Europe (N" 80 401866). Cependant dans ces brevets l'action adjuvante sur l'induction de la TVO n'a pas été rapportée si bien que la validation des méthodes de préparation des lyophilisats ne pouvaient pas être établie sur des critères scientifiquement mesurables.Bien que le mécanisme exact de l'action de boeuf de caille soit imprécis on possède des éléments d'orientation.
En effet il a été établi que le blanc d'oeuf avait une activité antiprotéase pouvant protéger l'antigène contre la dégradation gastrique et intestinale. De plus l'activité catalase peut aussi intervenir. Enfin la présence du jaune évoque une action de type liposomique avec présentation de l'antigène au sein d'une structure amorphe favorisant l'induction d'un état d'anergie.
Pour illustrer notre invention nous décrirons cinq situations chez la souris au cours desquelles la TVO a été induite à l'aide du lyophilisat produit selon notre procédé.
Dans toutes nos expérimentations nous avons utilisé les oeufs fécondés de la souche MINA B- croisement de caille sauvage Coturnix-coturnix-coturnix et de caille Coturnix-coturnix-japonica. Cependant d'autres souches de caille ont révélé les mêmes propriétés alors que dans les mêmes expérimentations les oeufs de poules, de canes, de pintades, de faisans n'ont jamais permis d'obtenir cet effet.
A) Conditions de Ivophilisation de l'oeuf de caille
Des tentatives antérieures de lyophilisation ont été réalisées en utilisant une technologie standard dans l'industrie agro-alimentaire sans contrôle de ses actions sur le produit final. Dans ce cadre le produit ainsi élaboré avait perdu ses actions dans le traitement des allergies et ses effets adjuvants de la TVO dans nos systèmes expérimentaux.
Des tentatives antérieures de lyophilisation ont été réalisées en utilisant une technologie standard dans l'industrie agro-alimentaire sans contrôle de ses actions sur le produit final. Dans ce cadre le produit ainsi élaboré avait perdu ses actions dans le traitement des allergies et ses effets adjuvants de la TVO dans nos systèmes expérimentaux.
Nous avons constaté, que de façon surprenante,les propriétés adjuvantes de l'oeuf de caille étaient bien conservées lorsque du miel était ajouté, à raison de 5 à 40%, au totum de l'oeuf. Cette observation a été mise à profit pour examiner les propriétés des hydrates de carbones dans la protection des principes actifs lors de la lyophilisation.
Les lots d'oeufs sont trempés dans une solution antiseptique, cassés en masse, filtrés, centrifugés, et mélangés avec du saccharose à raison de 5 à 20% ( P/P). Les autres hydrates de carbone utilisables dans cette application sont représentés par les disaccharides comme le maltose, le tréhalose ou le lactose ou les monosaccharides comme le glucose, le fructose, le galactose. Le mélange est ensuite pasteurisé avec une température n'excédant pas 37"C.
La lyophilisation se déroule avec une étape de congélation qui ne doit pas descendre au dessous de -42 C avec une vitesse de refroidissement de 5 C/mn sous une pression de 0.01 torr. Une alternative consiste à congeler brutalement l'oeuf avec de l'azote liquide. La dessiccation doit se faire à moins de 25"C sous une pression de 0.003 à 0.006 torr. La poudre est ensuite repartie à raison de 6 g par sachet ce qui correspond à 3 oeufs.
Cette préparation a conservé toutes les propriétés de l'oeuf cru sur l'action adjuvante de l'induction de la TVO dans les systèmes utilisés chez les souris.
B) Action adjuvante de l'oeuf de caille sur l'induction de la TVO
Exemple 1:
Production d'anticorps anti transferrine chez les souris C3H. Balb/c. OF1
Les souris Balb/c ne font pas de TVO aux antigènes solubles alors qu'elle est très facile à induire chez la souris C3H. Nous avons choisi de prendre la transferrine humaine comme antigène. Ainsi 5 souris Balb/c ( groupe A) ont reçu par voie orale 20 mg de transferrine dissoute dans 1 ml de sérum salée isotonique à 0.9% à
JO. Puis à J15 elles recoivent 1 mg de transferrine mélangée dans 100 mml d'Adjuvant Complet de Freund (ACF), enfin à J30 le titre des anticorps anti transferrine est évalué par une technique d'hémaglutination passive selon la méthode de Johnson et al ( Int Arch Allergy 1968,33,511-520).
Exemple 1:
Production d'anticorps anti transferrine chez les souris C3H. Balb/c. OF1
Les souris Balb/c ne font pas de TVO aux antigènes solubles alors qu'elle est très facile à induire chez la souris C3H. Nous avons choisi de prendre la transferrine humaine comme antigène. Ainsi 5 souris Balb/c ( groupe A) ont reçu par voie orale 20 mg de transferrine dissoute dans 1 ml de sérum salée isotonique à 0.9% à
JO. Puis à J15 elles recoivent 1 mg de transferrine mélangée dans 100 mml d'Adjuvant Complet de Freund (ACF), enfin à J30 le titre des anticorps anti transferrine est évalué par une technique d'hémaglutination passive selon la méthode de Johnson et al ( Int Arch Allergy 1968,33,511-520).
Un groupe B de 5 souris Balb/c a subi le même protocole mais en recevant la transferrine par voie digestive mélange avec 100 mg d'un mélange de blanc et de jaune d'oeuf de caille. De plus une série contrôle de 5 souris recevaient par voie orale 20 mg d'albumine bovine avec ou sans oeuf puis à J15 l'injection de transferrine dans 1'ACF ( groupe C et D).
Le même shéma expérimental a été réalisé avec des souris C3H (groupe E,F,G,H) et des souris OF1 (Groupe I,J,K,L,).
Balb/c C3H OFl
Transf POs/JO; Tf+ACF J15 A E I
idem + OCaille B F J
idem + OPoule C G K
Alb Bov POs/JO;Tf+ACF J15 D H L
Les résultats de cette expérimentation sont présentés dans le tableau suivant.
Transf POs/JO; Tf+ACF J15 A E I
idem + OCaille B F J
idem + OPoule C G K
Alb Bov POs/JO;Tf+ACF J15 D H L
Les résultats de cette expérimentation sont présentés dans le tableau suivant.
La valeur rapportée représente la moyenne géométrique de rang des titres des anticorps antitransferrine de chaque animal dans chaque groupe
Balb/c C3H OF1
Transf POs/JO;Tf+ACFJ15 13 5 16
idem + OCaille 4 1 3
idem + OPoule 15 7 14
Alb Bov POs/JO;Tf+ACFJ15 16 18 17
Ces résultats démontrent que l'adjonction d'oeuf de caille à l'antigène au moment de la prise orale augmente l'action de l'induction de la TVO chez les souris Balb/c et OF1 peu sensible à ce phénomène à l'état basale.
Balb/c C3H OF1
Transf POs/JO;Tf+ACFJ15 13 5 16
idem + OCaille 4 1 3
idem + OPoule 15 7 14
Alb Bov POs/JO;Tf+ACFJ15 16 18 17
Ces résultats démontrent que l'adjonction d'oeuf de caille à l'antigène au moment de la prise orale augmente l'action de l'induction de la TVO chez les souris Balb/c et OF1 peu sensible à ce phénomène à l'état basale.
Exemple 2
Hypersensibilité Retardée de Contact (HRC) chez les souris OF1
Dans cette série d'expérimentations nous avons utilisé des souris non consanguines pour démontrer que l'induction d'une TVO avec l' oeuf de caille étaient indépendant du terrain génétique.
Hypersensibilité Retardée de Contact (HRC) chez les souris OF1
Dans cette série d'expérimentations nous avons utilisé des souris non consanguines pour démontrer que l'induction d'une TVO avec l' oeuf de caille étaient indépendant du terrain génétique.
L'haptène utilisé est le DNCB ( 2,4-dinitrobenzène) obtenu chez Sigma. Cet haptène est dilué dans un mélange acétone/huile d'olive (4V/1V). Pour induire un état d'hypersensibilitée de contact nous appliquons sur le dos de la souris après rasage une solution à 5% de DNCB à JO. Puis la réaction est révélée 5 jours après par l'application à l'oreille d'une suspension à 1%. Enfin la réaction est lue 48 heures plus tard en mesurant l'épaisseur de l'oreille avec un micromètre. L'oreille controlatérale servant de contrôle. Dans ces conditions on observe une HRC spécifique facilement évaluable.
La TVO a été induite en faisant ingérer 500 mml d'une suspension à 1,25% de
DNCB avec ou sans oeuf de caille 7 jours avant l'immunisation.
DNCB avec ou sans oeuf de caille 7 jours avant l'immunisation.
Le tableau suivant résume les résultats sur des groupes de 5 souris. Les valeurs représentent la différence d'épaisseur en mm entre l'oreille test et l'oreille témoin.
DNCB Per Os J-7 DNCB Per Os + Oeuf de caille Test
Groupe 1 0 0 5016
Groupe 2 + O 3618
Groupe 3 O + 1619
Il est manifeste que l'administration simultanée de l'antigène avec l'oeuf de caille provoque une TVO beaucoup plus importante chez tous les animaux.
Groupe 1 0 0 5016
Groupe 2 + O 3618
Groupe 3 O + 1619
Il est manifeste que l'administration simultanée de l'antigène avec l'oeuf de caille provoque une TVO beaucoup plus importante chez tous les animaux.
Exemple 3
Prévention de l'anémie hémolvtigue autoimmune expérimentale (AHAI) chez la souris OFI.
Prévention de l'anémie hémolvtigue autoimmune expérimentale (AHAI) chez la souris OFI.
L'injection intrapéritonéale de 10X8 globules rouges de rat 1 fois par semaine durant 4 à 5 semaine provoque une AHAI chez la souris avec la présence d'autoanticorps et de xénoanticorps anti globules rouges de rat. Cette AHAI survient chez 100% des animaux. Si on fait ingérer 10x9 globules rouges de rat 3 jours avant chacune des injections on obtient une diminution du nombre d'animaux atteint d'AHAI (60%) avec des titres peu abaissés. En revanche le mélange des globules de rat avec de l'oeuf de caille provoque une diminution importante du nombre d'animaux ayant une AHAI puisque seulement 10% des animaux sont atteint avec des titres très faible d'autoanticorps anti globules rouges de souris. Ces résultats sont représentés dans le tableau suivant.
% AHAI Titre autoanticorps
Groupe + 100
Groupe + GRR
per Os 60 12+3
Groupe + GRR
per Os + Oeuf 10 2+1
de caille
Ce travail démontre que l'on peut induire une TVO avec de l'oeuf de caille dans les situations d'autoimmunisation en cours.
Groupe + 100
Groupe + GRR
per Os 60 12+3
Groupe + GRR
per Os + Oeuf 10 2+1
de caille
Ce travail démontre que l'on peut induire une TVO avec de l'oeuf de caille dans les situations d'autoimmunisation en cours.
Exemple 4
Prévention et traitement de 1'AXAI expérimentale de la souris par ingestion des autoanticorps avec l'oeuf de caille.
Prévention et traitement de 1'AXAI expérimentale de la souris par ingestion des autoanticorps avec l'oeuf de caille.
Nous avons utilisé le protocole décrit dans l'exemple 4. Cependant nous avons établi que l'ingestion d'autoanticorps anti globules rouges de souris avec l'oeuf de caille diminuait significativement le pourcentage d'animaux présentant une AHAI.
En effet selon la quantité d'autoanticorps ingérée et la fréquence des ingestions seulement 25 à 45% des souris OF1 ont une AHAI contre 100% dans le groupe témoin.
De plus lorsqu'une AHAI a été établie chez les souris OF1 l'ingestion d'autoanticorps avec l'oeuf de caille abrège très significativement la durée de l'autoimmunisation après l'arrêt de l'injection des globules rouges de rat. En effet elle passe de 150+35 chez les animaux témoins à 54,,23 chez les animaux traités avec les autoanticorps et l'oeuf de caille.
Exemple S
Prévention de la production d'anticorps réaginique chez la souris Balb/c.
Prévention de la production d'anticorps réaginique chez la souris Balb/c.
Les souris Balb/c sont réfractaires à l'induction d'une TVO selon les protocoles
classiques. Elles présentent même un choc anaphylactique lors de l'ingestion de
l'antigène si au préalable elles ont été immunisées avec celui-ci. Dans une série
d'expérimentation nous démontrons que l'antigène ( Transferrine Humaine)
mélangé à de l'oeuf de caille provoque une TVO chez ces souns. Par ailleurs la
même ingestion chez des animaux immunisés ne provoque plus de choc
anaphylactique.
classiques. Elles présentent même un choc anaphylactique lors de l'ingestion de
l'antigène si au préalable elles ont été immunisées avec celui-ci. Dans une série
d'expérimentation nous démontrons que l'antigène ( Transferrine Humaine)
mélangé à de l'oeuf de caille provoque une TVO chez ces souns. Par ailleurs la
même ingestion chez des animaux immunisés ne provoque plus de choc
anaphylactique.
Ce travail démontre que l'antigène en présence d'oeuf de caille n'induit plus de
manifestation liée à des phénomènes dhypersensibilitée immédiate.
manifestation liée à des phénomènes dhypersensibilitée immédiate.
Les diverses observations réalisées dans l'induction d'une TVO en présence de
l'oeuf de caille nous ont permis de constater que le ou les principes actifs étaient
présents à la fois dans le blanc et le jaune de l'oeuf puisque des expérimentations
faites avec chacun de ces constituants donnaient des résultats moins probant mais
cependant encore statistiquement significatif.
l'oeuf de caille nous ont permis de constater que le ou les principes actifs étaient
présents à la fois dans le blanc et le jaune de l'oeuf puisque des expérimentations
faites avec chacun de ces constituants donnaient des résultats moins probant mais
cependant encore statistiquement significatif.
Autres résultats biologiques
Une étude récente faite par nous même démontre qu'il est possible d'induire la
production d' une lymphokine, le Transfonning Growth Factor ( TGF beta 1), par
les lymphomonocytes en présence de l'oeuf de caille. Or cette cytokine est connue pour avoir des propriétés très immunosuppressive.
Une étude récente faite par nous même démontre qu'il est possible d'induire la
production d' une lymphokine, le Transfonning Growth Factor ( TGF beta 1), par
les lymphomonocytes en présence de l'oeuf de caille. Or cette cytokine est connue pour avoir des propriétés très immunosuppressive.
Claims (8)
1) Utilisation de l'oeuf de caille de différentes varietés pour le traitement des allergies et maladies immunes caractérisé par le fait que celui-ci est inclus à des allergènes ou antigènes pour la préparation de médicaments déstinés a avoir une action adjuvante de l'induction d'une tolérance par voie orale.
2) Utilisation selon t caractérisé par le fait que l'oeuf de caille est utilisé sous forme Iyophilisée.
3) Procédé selon 1 et 2 caractérisé par le fait que lors de la lyophilisation les propriétés de l'oeuf sont protégées par l'adjonction d'hydrate de carbone.
4) Utilisation selon 1 et 2 caractérisé par le fait de mélanger un antigène avec l'oeuf de caille pour induire une tolérance par voie orale.
5) Procédé selon 1 et 2 caractérisé par le fait de mélanger un autoanticorps à l'oeuf de caille pour induire une tolérance par voie orale vis à vis des idiotypes de l'autoanticorps.
6) Utilisation selon 2 caractérisé par le fait de mélanger les oeufs avec 5 à 40% de miel pour protéger les fonctions adjuvantes. au cours de la lyophilisation.
7) Utilisation selon I et 5 caractérisé par le fait de mélanger des antigènes avec les composants issus de l'oeuf de caille pour obtenir une déviation de la réponse immune.
8) Utilisation selon 2 caractérisé par le fait que le lyophilisat d'oeuf de caille induit la production de lymphokines suppressives de la réponse immunitaire.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9502958A FR2731353A1 (fr) | 1995-03-09 | 1995-03-09 | Utilisation de l'oeuf de caille ou de ses derives ajoute a un antigene comme adjuvant de l'induction d'une tolerance par voie orale ou aerienne pour le traitement des maladies a composantes immunitaires |
| AU50042/96A AU5004296A (en) | 1995-03-09 | 1996-03-08 | Composition for oral tolerance induction and use thereof |
| PCT/EP1996/001004 WO1996028176A1 (fr) | 1995-03-09 | 1996-03-08 | Composition destinee a induire la tolerance orale et utilisation de ladite composition |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9502958A FR2731353A1 (fr) | 1995-03-09 | 1995-03-09 | Utilisation de l'oeuf de caille ou de ses derives ajoute a un antigene comme adjuvant de l'induction d'une tolerance par voie orale ou aerienne pour le traitement des maladies a composantes immunitaires |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR2731353A1 true FR2731353A1 (fr) | 1996-09-13 |
Family
ID=9477020
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FR9502958A Pending FR2731353A1 (fr) | 1995-03-09 | 1995-03-09 | Utilisation de l'oeuf de caille ou de ses derives ajoute a un antigene comme adjuvant de l'induction d'une tolerance par voie orale ou aerienne pour le traitement des maladies a composantes immunitaires |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| AU (1) | AU5004296A (fr) |
| FR (1) | FR2731353A1 (fr) |
| WO (1) | WO1996028176A1 (fr) |
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- 1995-03-09 FR FR9502958A patent/FR2731353A1/fr active Pending
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1996
- 1996-03-08 AU AU50042/96A patent/AU5004296A/en not_active Abandoned
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|---|
| J. BENVENISTE: "GUÉRIR L'ALLERGIE.", LA RECHERCHE, vol. 10, no. 104, PARIS FR, pages 1012 - 1013 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2810550A1 (fr) * | 2000-06-27 | 2001-12-28 | Medibrevex | Nouvelle formes galeiques solubles d'oeufs de caille a usage medicamenteux pour lavage oculaire et nasale et leurs procedes de fabrication |
| FR2811898A1 (fr) * | 2000-07-18 | 2002-01-25 | Medibrevex | Formes galeniques medicamenteuses homeopathiques d'allergenes impregnes sur un support biologiquement actif pour desensibilisation specifique par voie sublinguale et leur procede de fabrication |
| FR2813531A1 (fr) * | 2000-09-06 | 2002-03-08 | Medibrevex | Formes galeniques d'oligoelements incorpores dans un excipient biologiquement actif d'homogenat d'oeufs de caille et leur procede de fabrication |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1996028176A1 (fr) | 1996-09-19 |
| AU5004296A (en) | 1996-10-02 |
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