FR2634394A1 - Composes doues de proprietes detergentes, compositions et kits les contenant et procedes les utilisant pour accroitre temporairement les proprietes hydrophiles d'une matiere - Google Patents

Composes doues de proprietes detergentes, compositions et kits les contenant et procedes les utilisant pour accroitre temporairement les proprietes hydrophiles d'une matiere Download PDF

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Abstract

L'invention concerne des composés ayant des propriétés détergentes, qui sont diminuées en mettant en contact avec ces composés un réactif modificateur, ces composés étant utiles comme agents solubilisants pour des matières telles que des antigènes microbiens et/ou des anticorps et pour le mouillage réversible de surfaces hydrophobes. Des procédés sont décrits pour accroître les propriétés hydrophiles desdites matières, par mise en contact de la matière avec le composé ayant des propriétés détergentes et portant un groupe modifiable et par modification dudit composé avec un réactif modificateur. Application : kits destinés à la mise en oeuvre de ces procédés.

Description

Les détergents sont utilisés dans tous les
domaines industriels pour des applications très diverses.
Ils sont destinés non seulement à une utilisation domesti-
que pour le nettoyage des ustensiles de cuisine, des sols, des vêtements, etc., mais sont également utilisés indus- triellement pour le nettoyage d'objets manufacturés, dans les carburants, pour l'élimination des peintures, la récupération du pétrole, le traitement des minerais, le traitement chimique, le démoulage de pièces en matière
plastique, la mise en suspension de pigments, d'insec-
ticides et d'herbicides, ainsi que dans la polymérisation - en émulsion, la dissolution de médicaments, la purification de protéines, des applications bioanalytiques, etc. Dans des analyses d'analytes intéressants, il est souvent nécessaire de solubiliser un micro-organisme pour soumettre ses sites antigéniques à une reconnaissance par un partenaire de liaison marqué. Un détergent est
parfois utilisé pour solubiliser le micro-organisme.
Cependant, le détergent peut interférer avec l'analyse et, fréquemment, il est souhaitable d'éliminer un détergent après que celui-ci a rempli son rôle dans des analyses destinées à des analytes microbiens. L'élimination du détergent présente généralement certains inconvénients. Un inconvénient est la nécessité fréquente d'au moins une étape opératoire supplémentaire pour l'élimination. Un autre inconvénient est la perte parfois de cette matière
dans l'étape opératoire supplémentaire. Puisque le micro-
organisme est présent en de petites quantités, cela peut
constituer un inconvénient sérieux.
Des surfactants destructibles ont été utilisés en chimie préparative. Ces surfactants ont été utilisés pour surmonter les effets de la formation d'une émulsion au cours de procédés d'extraction dans des milieux organisés à base de surfactants contenant des micelles, des micelles inverses et des micro-émulsions. Une fois la réaction préparative achevée, le surfactant destructible est
transformé en non-surfactants dans des conditions douces.
Jaeger et collaborateurs, dans J. Orq. Chem. (1986), 51:3956-3959, décrivent la préparation et la caractérisation de surfactants destructibles sensibles aux bases. Des surfactants destructibles, à base d'un groupe cétal, sont décrits par Jaeger et collaborateurs, ibid. (1984) , 49:4545-4547. La préparation et la caractérisation de surfactants destructibles à chaîne double et. de vésicules qui en dérivent sont décrites par Jaeger et
collaborateurs, JOACS (1987) 64(11):1550-1551.
Conformément à un premier aspect de la présente invention, il est proposé un procédé pour accroître temporairement les propriétés hydrophiles d'une matière. Le procédé consiste: (a) à mettre en contact la matière dans un milieu aqueux avec un composé ayant des propriétés détergentes -- le composé comprenant une portion lipophile
(contenant un groupe modifiable) et une portion hydro-
phile -- les propriétés hydrophiles de la matière étant ainsi accrues; et (b) à modifier le groupe modifiable avec un réactif modificateur, les propriétés détergentes étant ainsi modifiées et les propriétés hydrophiles de la matière étant ainsi réduites. Le détergent est un composé répondant à la formule structurale L-J, dans laquelle L représente un groupement lipophile Y-A-Z apte à être modifié par le réactif modificateur, groupement dans lequel: Y représente un groupe alkyle, alcényle ou alcynyle ayant 2 à 12 atomes de carbone; ou un groupe aralkyle, aralcényle ou aralcynyle ayant 7 à 12 atomes de carbone; A représente -S-; -Se-; un groupe -CHX-, -CH(X)CH=CH-, dans lequel X représente Cl, Br ou I;.un groupe -O-CH=CH-; -S-CH=CH- ou -S-S-; et Z représente un groupe alkylène saturé ou insaturé ayant 1 à 10 atomes de carbone ou un groupe aralkylène saturé ou insaturé ayant 7 à 10 atomes de carbone;
et J représente un groupe hydrophile.
Conformément à un deuxieme aspect de la présente invention, il est proposé un procéde pour la modification des propriétés détergentes d'un détergent dans un milieu aqueux. Ce procédé comprend l'étape consistant à mettre en contact le milieu avec un réactif modificateur
afin de modifier chimiquement le détergent.
Conformément à un troisième aspect de la présente invention, il est révélé un perfectionnement d'un procédé pour le mouillage ou la dispersion réversible d'une substance dans un milieu aqueux, procédé qui consiste à mettre en contact la substance avec un détergent et à éliminer le détergent. Le perfectionnement consiste: (a) à utiliser comme détergent un composé répondant à la formule structurale L-J, dans laquelle L représente un groupement lipophile contenant un groupe modifiable et J représente un groupement hydrophile; et (b) à mettre en contact l'association de la substance et du détergent avec une quantité suffisante d'un réactif modificateur pour modifier notablement la totalité des groupes modifiables du détergent, le détergent perdant ainsi ses propriétés détergentes. Conformément à un quatrième aspect de la présente invention, il est révélé un procéde pour la préparation d'un analyte destiné à une analyse. Le procédé comprend les étapes consistant: (a) à solubiliser l'analyte avec un détergent répondant à la formule structurale L-J, dans laquelle L représente un groupement lipophile contenant un groupe modifiable et J représente un groupement hydrophile; et (b) à modifier les propriétés du détergent par addition d'un réactif modificateur capable de
modifier le groupe modifiable.
Conformément à un cinquième aspect de la présente invention, il est décrit un kit pour la mise en oeuvre d'une analyse destinée à déterminer la présence d'un
analyte dans un échantillon suspecté de contenir l'analyte.
Le kit comprend, sous une forme conditionnée: un composé ayant des propriétés détergentes et répondant à la formule structurale Y-A-Z-J, dans laquelle:
Y représente un groupe alkyle, alcényle ou-
alcynyle ayant 2 à 12 atomes de carbone; ou un groupe aralkyle, aralcényle ou aralcynyle ayant 7 à 12 atomes de carbone; A représente -S-; -Se-; un groupe -CHX-, -CH(X)CH=CH-, dans lequel X représente Cl, Br ou I; un groupe -O-CH=CH-; -S-CH=CH-; -S-S-; -S02CH2CH20-; un groupe cétal; ou un groupe Si(R)20- et -OSi(R)20- dans lequel R représente l'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur; Z représente un groupe alkylène saturé ou insaturé ayant 1 à 10 atomes de carbone ou bien un groupe aralkylène saturé ou insaturé ayant 7 à 10 atomes de carbone; et J représente un groupement hydrophile; et un réactif modificateur capable de modifier les
propriétés détergentes du composé Y-A-Z-J.
Conformément à un sixième aspect de la présente invention, il est décrit un kit pour la mise en oeuvre d'une analyse destinée à déterminer la présence d'un analyte dans un échantillon suspecté de contenir l'analyte, l'analyte étant un membre d'une paire à liaison spécifique comprenant un ligand et son récepteur complémentaire. Le kit comprend, sous une forme conditionnée: (1) un détergent répondant à la formule structurale Y-A-Z-J, dans laquelle: Y représente un groupe alkyle, alcényle ou alcynyle ayant 2 à 12 atomes de carbone; ou bien un groupe aralkyle, aralcényle ou aralcynyle ayant 7 à 12 atomes de carbone; A représente -S-; -Se-; un groupe -CHX-, -CH(X)CH=CH-, dans lequel X représente Cl, Br ou I; un groupe -O-CH=CH-; -S-CH=CH-; -S-S-; SO2CH2CH20-; un groupe cétal; ou bien un groupe -Si(R),20-, -OSi(R)20- dans lequel R représente, indépendamment, H ou un groupe alkyle inférieur; Z représente un groupe alkylène saturé ou insaturé ayant 1 à 10 atomes de carbone ou bien un groupe aralkylène sature ou insaturé ayant 7 à 10 atomes de carbone; et J represente un groupe OS03H, S03H, COOH, PO(OR)OH ou OPO(OR)OH, dans lequel R représente H ou un groupe alkyle inférieur; et (2) un membre de la.paire à liaison spécifique,
complémentaire de l'analyte.
Conformément à un septième aspect de la présente invention, une composition est décrite. La composition comprend un milieu aqueux contenant un antigène microbien et/ou son anticorps complémentaire, ainsi qu'un composé de formule Y-A-Z-J, dans laquelle: Y représente un groupe alkyle, alcényle ou alcynyle ayant 2 à 12 atomes de carbone; ou bien un groupe aralkyle, aralcényle ou aralcynyle ayant 7 à 12 atomes de carbone; A représente -S-; -Se-; un groupe -CHX-, -CH(X)CH=CH-, dans lequel X représente C1, Br ou I; un groupe -O-CH=CH-; -S-CH=CH-; -S-S-; SO2CH2CH20-; un groupe cétal; ou un groupe -Si(R)20- et -OSi(R)20- dans lequel R représente l'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur; Z représente un groupe alkylene saturé ou insaturé ayant 1 à 10 atomes de carbone ou bien un groupe aralkylène saturé ou insaturé ayant 7 à 10 atomes de carbone; et
J représente un groupement hydrophile.
Conformément à un huitième aspect de la présente invention, il est décrit un composé répondant à la formule CH3(CH2)n-A-(CH2)mOW, dans laquelle A représente -S- ou un groupe -S-CH=CH-; W représente H ou un groupe SO3H; n représente un nombre entier de 2 à 4 et
_ représente un nombre entier de 6 à 11 lorsque A repré-
sente -S-, ou bien n et m ont, indépendamment, une valeur
de 1 à 10 lorsque A représente un groupe -S-CH=CH-.
La présente invention propose un procédé pour modifier chimiquement les propriétés d'un détergent afin de l'éliminer plus efficacement ou de supprimer le besoin de
son élimination. Avant d'aller plus loin dans la des-
cription de la présente invention, les termes suivants sont définis. Les termes "alkyle", "alcényle", "alcnyle", "aralkyle", "aralcényle" et "aralcynyle" désignent tous des radicaux à chaîne hydrocarbonée ayant un nombre spécifié d'atomes de carbone, jusqu'à 4 atomes de carbone si le terme "inférieur" précède le nom du radical, ou bien, s'il n'existe aucune spécification concernant la longueur de la chaîne, ayant jusqu'à 12 atomes de carbone: En consequence, le terme "alkyle" désigne un radical hydrocarboné saturé ramifié ou non ramifié, tel que
les radicaux méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-
butyle, isobutyle, sec.-butyle, tertio-butyle, pentyle, hexyle, heptyle, octyle, nonyle, décyle, undécyle,
dodécyle, etc., y compris leurs isomères de position.
Le terme "alcényle" désigne n'importe quel radical à chaîne carbonée insaturée, ramifié ou non ramifié, ayant le nombre d'atomes de carbone spécifié, ou ayant jusqu'à 12 atomes de carbone si aucune limitation n'est précisée en ce qui concerne le nombre d'atomes de carbone. En conséquence, les radicaux alcényle possèdent une ou plusieurs doubles liaisons entre des atomes de
carbone, par exemple les radicaux vinyle, allyle, 1-
propényle, 2-butényle, 1,3-butadiényle, 2-pentényle, etc., et sont par ailleurs définis suivant un cadre similaire à
celui des radicaux alkyle définis ci-dessus.
Le terme "alcényle" désigne des radicaux hydrocarbonés entrant dans le cadre de la définition des groupes alcényle, mais ayant une ou plusieurs triples liaisons dans le radical, par exemple les radicaux ethynyle, 2propynyle, 2-pentène-4-ynyle, etc. L'expression "aralkyle ayant 7 à 12 atomes de carbone" désigne un radical ayant un groupe alkyle auquel est fixé un cycle benzenique, tel que le radical benzyle, le radical phénéthyle, le radical 3-phénylpropyle, etc. Les termes "aralcényle" et "aralcynyle" possèdent des définitions similaires, sauf qu'un groupe alcenyle ou alcynyle remplace le groupe alkyle auquel le cycle benzénique est fixé. Des exemples de radicaux aralcényle et aralcynyle sont, respectivement, des radicaux
styryle et benzylidyne.
Un groupe cetal désigne le radical
R /O-C(R)3
-C-O-C (R2) -
dans lequel R représente H ou un groupe alkyle inférieur, et comprend des cetals cycliques de formule
R O-C(R)2
\ /
-C-O-CR-
L'expression "groupe alkylène saturé ou insaturé ayant 1 à 10 atomes de carbone" désigne, aux fins
de la présente invention, une chaîne (un radical) hydrocar-
bonée qui constitue une partie d'une molécule (dans ce contexte, une partie d'un détergent ou d'un composé ayant des propriétés détergentes) et qui est située de sorte qu'elle réalise un pontage entre deux autres parties de la molécule. Plus précisément, dans la formule Y-A-Z-P décrite dans la présente invention, Z peut représenter un groupe alkylène, tel que les groupes méthylène (-CH2-), éthylène (-CH2-CH2-), etc. Cependant, aux fins de la présente invention, le terme "alkylène" est utilisé pour qu'il soit entendu que des radicaux insaturés correspondants, tels que, par exemple, le radical -CH=CH-, entrent dans la définition de l'expression "groupe alkylène insaturé".. De manière similaire, un groupe aralkylène saturé ou insaturé est une chaîne carbonée portant un cycle benzénique comme chaîne latérale à la place d'un atome d'hydrogène, de sorte qu'un radical -CH(C6H5)- constitue un exemple d'un groupe
aralkylene sature.
Un analyte est un composé ou une composition à doser, qui est habituellement un membre d'une paire à liaison spécifique (défini cidessous) et peut être un
ligand ou un récepteur.
Conformément aux définitions proposées ci-
dessous, la matière dont les propriétés hydrophiles sont accrues peut être un antigène et/ou un anticorps, de préférence un antigène de chlamydia, un anticorps de chlamydia, un antigène de gonocoque ou un anticorps de gonocoque. Un antigène est n'importe quelle substance au contact de laquelle un organisme peut présenter une réponse immunitaire. Les antigènes sont généralement capables d'une liaison spécifique à des anticorps complémentaires. Les antigènes peuvent être n'importe quel groupe organique et sont habituellement des poly(amino-acides), c'est-àdire des polypeptides et des protéines, des polysaccharides, des lipopolysaccharides, des glycoprotéines, des lipoprotéines, des protéines ribonucléaires, etc. Les antigènes sont fréquemment des constituants de bactéries, de virus, de mitochondries, de noyaux, de membranes cellulaires, etc. Dans ce contexte: Les polysaccharides sont une association d'au moins environ trois ou quatre monosaccharides, reliés les
uns aux autres par des liaisons glycosidiques. Les poly-
saccharides comprennent, par exemple, l'amidon, le
glycogène, la cellulose et le dextrane.
Des protéines tres diverses peuvent -être envisagées:
La famille de protéines ayant des caracteristi-
ques structurales similaires, des protéines ayant des fonctions biologiques particulières, des protéines se rapportant à des microorganismes particuliers, en particulier des micro-organismes vecteurs de maladies, etc. Les lipopolysaccharides (LPS) sont des
molécules contenant des groupements lipidiques et poly-
saccharidiques, qui sont présentes dans la couche exté-
rieure des membranes cellulaires des bactéries Gram-
négatives.
Les bactéries comprennent des bactéries Gram-
négatives, comprenant, mais à titre non limitatif, Chlamydia trachomatis, Chlamvdia psittaci, E. coli, Pseudomonas fluorescens, Azotobacter vinelandii, Proteus vulqaris, Hydrogenomonas sp., Aerobacter aeroqcenes, Neisseria qonorrhoeae, Treponema pallidum, Serratia marcescens, Achromobacter fischer, Bacillus subtilis, Bacillus megaterium, Sarcina lutea, Micrococcus pyovenes, Lactobaccillus casei, Torulopsis utilis et Streptomyces ariseus, Shicrella, Camo lobacter, Salmonella, Lecionella, Hemophilus influenzae, etc. Un antigène microbien est un antigène qui est présent dans un hôte qui est malade, la maladie étant provoquée par un micro-organisme tel qu'une bactérie (des exemples de ces maladies sont la gonorrhée et les maladies
provoquées par les Chlamydia.
Pour la plupart, les antigènes utilisés dans la présente invention possèdent un poids moléculaire d'au moins environ 1000, le plus souvent d'au moins environ 2500, fréquemment supérieur à 5000. Dans la catégorie des poly(amino-acides), les poly(amino-acides) intéressants ont généralement un poids moléculaire d'environ 5000 à 000 000, le plus souvent d'environ 20 000 à 1 000 000. La nature précise de certains des antigènes et de nombreux exemples de ces antigènes sont décrits dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N 4 299 916 aux noms de Litman et
collaborateurs, en particulier dans les colonnes 16 à 23.
Un anticorps est une molécule, c'est-à-dire une immunoglobuline, formée par le système immunitaire d'un hôte en réponse à la mise en contact avec un antigène. En général, un anticorps se lie spécifiquement, et est en
conséquence défini comme étant complémentaire, à l'anti-
gène. L'anticorps peut être monoclonal ou polyclonal et peut être préparé par des techniques qui sont bien connues dans la pratique, telles que l'immunisation d'un hôte et la collecte de sérums (polyclonaux), ou bien la préparation de lignées cellulaires hybrides continues et la collecte de la protéine sécrétée (monoclonale). Les anticorps peuvent' comprendre une immunoglobuline complète ou un de ses fragments, ces immunoglobulines comprenant les différentes catégories et les différents isotypes, tels que IgA, IgD, IgE, IgGl, IgG2a, IgG2b et IgG3, IgM, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, etc. Leurs fragments peuvent comprendre Fab, Fv et F(ab')2, Fab', etc. Lorsqu'il est mentionné dans la présente invention qu'une solution ou une matière comprend un antigène ou un anticorps, la solution ou la matière peut comprendre à la fois l'antigène mentionné et l'anticorps mentionné. Un kit analytique est un produit, dont les réactifs sont associés sous une forme conditionnée, utilisé
pour déterminer la présence d'un analyte dans un échantil-
lon. Les réactifs sont conditionnés pour assurer la conservation, par exemple, de chaque réactif dans des récipients distincts dans les cas o une réactivité conjointe supprimerait les possibilités de conservation si les réactifs étaient conditionnés ensemble.
Un détergent, ou un composé ayant des pro-
priétés détergentes, désigne un composé qui peut, par contact avec une autre matière, modifier les propriétés hydrophiles de cette autre matière. En général, un
détergent accroît ces propriétés hydrophiles. En conse-
quence, un détergent ou un composé ayant des propriétés détergentes accroit l'aptitude de la matière mise en contact à absorber ou adsorber l'eau. Les détergents conformes à la présente invention possèdent un groupement hydrophile, tel qu'un groupe acide ou un de ses sels, et un groupement lipophile, contenant un groupe modifiable. Le groupe modifiable présente un- "état non modifié" et un "état modifié". Dans l'état non modifié, le détergent ou le composé ayant des propriétés détergentes a pour effet d'accroître les propriétés hydrophiles de la matière avec
laquelle il est en contact. A l'état modifié, les pro-
priétés détergentes sont accrues, de sorte que les propriétés hydrophiles de la matière mise en contact sont réduites. Un réactif modificateur est un réactif qui modifie chimiquement le détergent, ou le composé ayant des propriétés détergentes, faisant ainsi passer le groupe modifiable de l'état non modifié a l'état modifié. Le réactif modificateur peut agir sur le groupe modifiable dans le détergent de plusieurs manières: Par exemple, le réactif modificateur peut agir par clivage du détergent au niveau ou à proximité du groupe modifiable. Aux fins de la présente invention, le terme "clivage" désigne la coupure de la molécule détergente au niveau d'une ou plusieurs liaisons de n'importe quel type (en conséquence, le terme doit être considéré dans son sens large pour comprendre la dissociation en un ou plusieurs fragments). Des exemples de réactifs modificateurs nucléophiles qui peuvent cliver le détergent ou se fixer à celui-ci au niveau d'un groupe modifiable sont: un fluorure, la thiourée (à savoir NH2-CS-NH2); l'hydroxylamine (NH2OH); des hydrazines (à savoir des composés contenant le groupe R-NH-NH2, dans lequel R représente l'hydrogène ou un groupe alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone); des hydrazides (à savoir R-CO-NH-NH2 dans lequel R représente un groupe alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone); l'ammoniac; des mercaptans (alcanethiols inférieurs), tels que l'éthylmercaptan (éthanethiol:CH3CH2SH); des mercapto-alcools tels que le dithioérythritol et des mercapto-acides tels que HS-R-COOH dans lequel R représente un groupe alkyle ayant jusqu'à 4 atomes de carbone; des thiosulfates (à savoir M2(S203)n
dans lequel M représente un cation avec n charges posi-
tives); et des thio-acides (à savoir R-CO-SH, R-CS-OH ou R-CS-SH dans lequel R représente un groupe alkyle ayant 1 à 4-atomes de carbone). Les réactifs nucléophiles précités
peuvent, par exemple, cliver des silyléthers, des disul-
fures, des esters, des cétones ou des bases de Schiff, ou bien intervenir dans des réactions de substitution nucléophile telles que, par exemple, le déplacement
d'halogénures dans des halogénures d'alkyle, des halogé-
nures allyliques ou des 3-halogénalcynes, habituellement des chlorures allyliques. Le réactif modificateur peut être un anion choisi dans le groupe comprenant des anions contenant du soufre tels qu'un sulfure, etc., de l'oxygène tels qu'un hydroxyde, un alkoxyde, un aralkoxyde, etc., ou un composé azoté tel qu'un azothydrure, l'ammoniac, etc. En outre, le réactif modificateur peut agir par oxydation du groupe modifiable. Des oxydants convenables sont un hypochlorite et un hypobromite. En outre, les peroxydes et les peracides constituent de bons agents oxydants, tels que des hydroperoxydes d'alkyle ou d'acyle inférieurs, H202, un perborate, un persulfate et un peracetate. Ces réactifs oxydants peuvent oxyder de nombreux types de groupes modifiables, tels que des groupes séléno- ou thio-éthers, séléno- ou thio-éthers vinyliques,
sulfoxydes ou éthers d'enol.
Encore un autre mode d'action d'un agent
modificateur consiste en la réduction du groupe modifiable.
Des agents réducteurs convenables sont des sulfites, des
hyposulfites et des mercaptans, en particulier des bis-
mercapto-alcanes et alcanols en C3 et C4 qui peuvent
réduire les liaisons disulfure.
De préférence, lorsque le groupe modifiable A est un groupe -CH(X)-CH=CH-, le réactif modificateur est un anion choisi dans le groupe comprenant des anions contenant du soufre, de l'oxygène ou de l'azote. De même, lorsque A représente un groupe -S-S-, ledit réactif modificateur est de préférence un alkyl- ou acyl-mercaptan inférieur, un
agent oxydant ou un hyposulfite.
Une paire à liaison spécifique (PLS) consiste en deux molécules différentes (premier et second membres de la PLS), l'une des molécules possédant une zone sur sa surface ou dans une cavité qui se lie spécifiquement à une organisation spatiale et polaire particulière de l'autre molécule. Les deux membres de la paire à liaison spécifique sont désignés sous le nom de ligand et de son récepteur
complémentaire (antiligand).
La présente invention concerne de manière générale un procédé pour l'élimination de détergents par modification chimique du détergent afin de modifier ou supprimer ses propriétés détergentes. Habituellement, le procédé est utile pour des détergents utilisés dans un
milieu aqueux. Le procédé utilise des réactifs modifica-
teurs qui n'endommagent pas la matière à débarrasser du détergent et qui provoquent une modification autre qu'une simple protonation ou déprotonation du détergent. Des agents réducteurs et des variations du pH peuvent être utilisés. Habituellement, un oxydant doux ou une substance nucléophile est utilisé. Les oxydants préférés sont les peroxydes et les peracides. Les substances nucléophiles préférées sont des thiosulfates, des mercapto-acides, la thiourée, des hydroxylamines, l'ammoniac, des hydrazines, des hydrazides, etc. Les agents réducteurs appréciés sont le dithioérythritol, le dithiothréitol, l'acide ascorbique, un borohydrure, etc. On utilise des détergents qui, par réaction avec des réactifs modificateurs, changent fortement de polarité ou bien sont clivés. Habituellement, un groupe modifiable non polaire qui accroit ou ne supprime pas les propriétés détergentes est incorporé à un détergent. Le groupe modifiable est de préférence situé de manière à avoir une interférence maximale avec les propriétés
détergentes lorsqu'il est modifié. Ce groupe est habituel-
lement situé dans la portion lipophile du détergent, de préférence à proximité du centre de la portion lipophile ou bien en position distale du centre et du groupe hydrophile ou bien, si plus d'un groupe est utilisé, ces groupes sont espacés pour produire des segments ayant des propriétés
lipophiles fortement réduites.
En conséquence, une formule classique pour un détergent utilisé dans la présente invention est L-J, dans laquelle L représente un groupement lipophile contenant un
groupe modifiable et J représente un groupement hydrophile.
De préférence, le groupement lipophile répond à la formule
Y-A-Z. Dans cette formule, Y représente un groupe hydro-
carboné aliphatique saturé ou insaturé ayant 2 à 12 atomes de carbone ou bien est un groupe aralkyle, aralcényle ou
aralcynyle ayant jusqu'à 12 atomes de carbone. A repré-
sente un groupe modifiable, tel que -S-; -Se-; un groupe -CHX- ou -CH(X)CH=CH- dans lequel X représente Cl, Br ou I; un groupe -O-CH=CH-; -SCH=CH- ou -S-S-. Z représente un groupe alkylene saturé ou insaturé ayant 1 a 10 atomes de carbone ou bien un groupe aralkylène saturé ou insaturé ayant 6 à 10 atomes de carbone. De préférence, Z possède 2 à 10 atomes de carbone, notamment lorsque A ne représente pas un groupe -O-CH=CH- (ce dernier groupe A fournissant déjà 2 atomes de carbone). J représente de préférence un groupe OSO3H, S03H, COOH, PO(OR)OH ou OPO(OR)OH, dans
lequel R représente H ou un groupe alkyle inférieur.
De préférence, les composés détergents utilisés dans les procédés, les compositions et les kits de la présente invention répondent à la formule Y-A-Z-J, pouvant correspondre au composé CH3(CH2)n-S-(CH2)mOSO3H ou à un de ses sels, dans lequel n est un nombre entier de 1 à 6, de préférence de 2 à 4 et m est un nombre entier de 4 à 11, de préférence de 6 a 11. De préférence, la formule Y-A-Z-P représente le composé CH3(CH2)2-S-(CH2) 110SO3H ou
CH3(CH2)4-S-(CH2)6OSO3H ou un de ses sels.
Le détergent doit pouvoir présenter une
modification chimique par addition d'un réactif modifica-
teur. Il existe plusieurs manières d'effectuer une telle réaction chimique, comprenant, à titre non limitatif, un
clivage, une oxydation et une réduction du groupe modi-
fiable. Le clivage peut être effectué, par exemple, en utilisant une substance nucléophile, telle qu'un fluorure, un thiosulfate, un mercaptan, un thio-acide, une thiourée,
une hydroxylamine, une hydrazine, un hydrazide ou l'am-
moniac. L'oxydation peut être effectuée, par exemple, avec un peroxyde ou un peracide tel qu'un hydroperoxyde d'alkyle ou d'acyle inférieur, H202, un perborate ou un persulfate; ou bien en utilisant un hypochlorite ou un hypobromite. La réduction peut être effectuée, par exemple, en utilisant un sulfite, un hyposulfite ou un alkyl- ou acyl-mercaptan
inférieur. Bien entendu, le groupe modifiable doit être un groupe sur lequel il est
possible d'agir par le réactif modificateur. Par exemple, lorsqu'un acide est utilisé comme réactif modificateur pour rompre le détergent, le groupe modifiable peut être un éther d'énol ou un acétal. En variante, le groupe modifiable peut être une base de
Schiff ou une énamine.
Lorsqu'un agent réducteur est utilisé comme réactif modificateur, tel qu'un mercaptan, le groupe
modifiable peut être un disulfure.
Lorsqu'une substance nucléophile est utilisée comme réactif modificateur, le groupe modifiable peut être une base de Schiff ou une cétone, mais est avantageusement un chlorure, un bromure ou un iodure, de préférence un halogénure allylique ou un 3-halogénalcyne, habituellement un chlorure allylique ou bien, lorsque la substance nucleophile est un fluorure, le groupe modifiable peut être
un éther de silyle.
Lorsqu'un oxydant est utilisé comme réactif modificateur, le groupe modifiable peut être un séléno- ou
thio-éther ou bien un séléno- ou thio-éther de vinyle.
Comme composés proprement dits, les détergents de la présente invention, ou leurs sels, répondent à la formule CH3(CH2)n-A-(CH2)mOW, dans laquelle A représente -S- ou un groupe -S-CH=CH-; W représente H ou un groupe SO3H; n est un nombre entier de 2 à 4 et m est un nombre entier de 6 à 11 lorsque A représente -S-, ou bien n et mn ont, indépendamment, une valeur de 1 à 10 lorsque A représente un groupe -S-CH=CH-. De préférence, lorsque A représente -S-, m est égal à 11 et n est égal à 2 ou bien m est égal à 6 et n est égal à 4, ce qui correspond aux composés de formules CH3(CH2)2-S-(CH2)llOS03H et CH3(CH2)4-S-(CH2)60SO3H, ou à leurs sels. Ou bien, lorsque A représente un groupe -S-CH=CH-, m est égal à 6 et n est égal à 4, de préférence, ce qui correspond au composé
CH3(CH2)6-S-CH=CH-(CH2)40S03H ou à un de ses sels.
Les applications préférées de la présente invention concernent la technologie bioanalytique et la technologie d'administration des médicaments. Pour l'administration des médicaments, il est possible de produire des préparations à libération différée, qui libèrent un médicament par mise en contact avec un agent
de libération, et les liposomes utilisés dans l'administra-
tion des médicaments peuvent être débarrasses des déter-
gents contaminants. Pour une utilisation bioanalytique, des particules de latex préparées par polymérisation en émulsion peuvent être débarrassées d'un détergent. Des protéines peuvent être séparées des solutions de détergents utilisées en électrophorèse sur gel. Des constituants de membranes cellulaires qui sont séparés par solubilisation avec des détergents peuvent être reconstitués. Des antigènes peuvent être séparés de débris cellulaires et de liquides biologiques par des détergents, puis être débarrassés du détergent pour permettre l'absorption sur
des surfaces et/ou une liaison à des anticorps.
Le procédé peut être appliqué en particulier à la microbiologie analytique. Des antigènes microbiens, en particulier un lipopolysaccharide de Chlamydia et des
protéines de surface des gonocoques peuvent être solubi-
lises par le détergent de la présente invention, puis être libérés de manière à permettre l'analyse par liaison à un anticorps. A cet effet, il est préféré des dérivés de détergents du type alkylsulfate, répondant à la formule: CH3(CH2)nA(CH2)mOS03M+ dans laquelle A peut représenter, par exemple, -S-, un groupe -S-S-, -S-CH=CH-, -Se-, -CHX-, -CH(X)CH=CH- (X=Cl, Br, I), -O-CH=CH-; -S02CH2CH20-; Si(R)20-, -OSi(R)20-, dans lequel R représente H ou un groupe alkyle inférieur; n et m peuvent aller de 1 à 12 et, pris conjointement, sont
au moins égaux à 5; et M représente un métal alcalin.
Cependant, A représente avantageusement -S-; -Se-; -CHX-,
dans lequel X représente Cl, Br ou I; un groupe -0-CH=CH-
ou -S-S-. De préférence, A représente -S-, n est un nombre
entier de 1 à 6 et m est un nombre entier de 4 à 11.
Des détergents particulièrement appréciés sont: CH3 (CH2)5-S-(CH2)505O3Na+ Détergent I CH3(CH2)6-S-(CH2)60S03Na+ Détergent II CH3(cHo)2-S(CH211nSc3Na+ Détergent III Parmi ceux-ci, le détergent II est actuellement le détergent préféré. Ces composés peuvent solubiliser un antigène, puis libérer l'antigène lors du traitement avec
le peroxyde d'hydrogène.
La présente invention possède une application à de nombreuses techniques connues pour la détection d'antigènes dans un échantillon, tel qu'un liquide biologique, à savoir le sang, l'urine, des cultures de cellules. Il est important de pouvoir détecter rapidement et avec précision la présence d'antigènes tels que des antigènes de bactéries Gram-négatives, à savoir Chlamvdia trachomatis, Chlamvdia psittaci et Neisseria aonorrhoeae, en raison de la prédominance des maladies liées à ces bactéries. Certaines des techniques utilisées pour détecter des antigènes font intervenir des procédés de cultures de cellules, l'électrophorèse, etc. La plupart des techniques de détection font intervenir des immuno- essais. Certaines de ces techniques impliquent la détection d'anticorps contre l'antigène intéressant. Cependant, il est préférable d'analyser des antigènes plutôt que des anticorps. Les techniques d'immuno-essais pour la détection d'antigènes font souvent intervenir des immuno-essais enzymatiques, tels que l'essai d'immunosorbant lié à un enzyme, désigné de manière générale sous le nom de ELISA. Ces analyses impliquent classiquement la détection de l'antigène intéressant en revêtant avec l'antigène une surface solide nue ou une surface qui a été revêtue préalablement avec une protéine telle qu'un anticorps. Après revêtement de la surface du support avec l'antigène, la surface est lavée pour éliminer l'antigène non lié. Puis l'antigène présent sur la surface est mis en contact avec un anticorps contre l'antigène, qui est marque ou peut être marqué. La surface est de nouveau lavée et l'anticorps qui s'est lie à la surface du support
est détecté par détection du marqueur.
Une méthode pour la détection de la présence de l'antigène de Chlamydia trachomatis dans un échantillon biologique est décrite dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N' 4 497 899. La méthode décrite fait intervenir la lyse de cellules de Chlamydia dans l'échantillon pour libérer l'antigène; le revêtement d'un support solide nu avec le lysat cellulaire; la séparation du support révêtu de l'échantillon; le traitement du support séparé avec un
anticorps pour former un complexe antigène-anticorps anti-
Chlamydia sur le support; la séparation du complexe de l'anticorps non lié; le traitement du complexe lié avec une antiglobuline marquée pour former sur le support un complexe antigène-anticorps-antiglobuline marquée; la séparation de ce dernier complexe de l'antiglobuline marquée non liée; et le dosage de l'antiglobuline marquée liée, ce qui constitue une mesure de la quantité d'antigène dans l'échantillon. Le brevet des Etats-Unis d'Amérique N' 4 497 900 décrit une méthode pour la détermination de ia présence de Neisseria qonorrhoeae, analogue à celle mentionnée dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique
26 34394
Ne 4 497 899.
Une méthode indirecte pour la détermination de la présence d'un antigène dans un échantillon de liquide est décrite dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N 4 067 959, et fait intervenir l'adsorption d'un antigène du même type immunologique que l'antigène de l'échantillon sur la surface d'un support solide, et la réaction d'une quantité connue d'anticorps spécifique marqué en solution avec l'antigène de l'échantillon et avec l'antigène adsorbé. L'anticorps marqué est présent en excès, de sorte qu'une portion de l'anticorps marqué est liée dans la solution à l'antigène de l'échantillon et l'anticorps marqué en excès réagit immunologiquement avec l'antigène adsorbé sur la surface. La surface est lavée, puis la quantité d'anticorps marqué ayant réagi, présente sur la surface, est déterminée, ce qui constitue une mesure de la
quantité de l'antigène dans l'échantillon.
Une méthode pour déterminer la présence d'une infection à Chlamydia faisant intervenir la production d'anticorps contre la principale protéine de la membrane extérieure de Chlamydia trachomatis est décrite dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique Ne 4 427 782. La méthode consiste à traiter un échantillon suspecté de présenter une infection par les chlamydia pour solubiliser la protéine de la membrane cellulaire extérieure de Chlamydia, à mettre en
contact les anticorps produits avec l'échantillon solubi-
lisé et à déterminer la réaction entre les anticorps et
l'échantillon solubilisé.
Une autre méthode pour la détection d'un antigène dans un échantillon biologique est décrite dans la demande de brevet des Etats-Unis d'Amérique N 135 869, déposée le 21 Décembre 1987 (correspondant à la demande de brevet japonais N 63-321 869; à la demande de brevet canadien Ne 586 443 et à la demande de brevet européen N 88 312056.0). La méthode fait intervenir l'association 2.63Lf394 d'un support solide, qui est pratiquement dépourvu de protéines à liaison spécifique, et d'un milieu comprenant un antigène de l'échantillon et un anticorps contre
l'antigène. L'ensemble est mis à incuber dans des condi-
tions suffisantes pour que l'anticorps, lorsqu'il est lié à l'antigène, se lie au support. La présence ou la quantité d'anticorps sur le support ou dans le milieu est déterminée et un rapport est établi entre celle-ci et la présence de
l'antigène dans l'échantillon.
Les descriptions des brevets et demandes
précités sont incorporées dans leur intégralité au présent mémoire a titre de référence. Dans la plupart des méthodes précitées, la solubilisation d'un micro-organisme est
- importante ou nécessaire.
Cette solubilisation peut être effectuée conformément à la présente invention par incubation de l'échantillon bactérien en présence d'un détergent, de la manière décrite ci-dessus, habituellement dans la plage de concentrations d'environ 0,01 à 1,0 % en poids/volume. Les
températures utilisées pour la solubilisation de l'échan-
tillon bactérien sont habituellement comprises dans l'intervalle d'environ 10 à 50 C, le plus souvent d'environ 15' à 100'C. Dans la plupart des cas, des temps
relativement courts sont nécessaires pour la solubilisa-
tion. Habituellement, la solubilisation peut s'effectuer en un temps d'au moins environ 5 secondes et pas plus de 1 heure, le plus souvent d'environ 30 secondes à environ minutes. Le temps dépend de la nature de l'échantillon bactérien, de l'antigène et du type et de la quantité de
détergent, ainsi que de la température utilisée.
Le milieu de solubilisation est généralement
aqueux et peut contenir jusqu'à 40 % d'un solvant organi-
que. Le pH du milieu de solubilisation est habituellement compris dans l'intervalle d'environ 2 à 12, le plus souvent d'environ 5 à 9. Le pH est généralement choisi pour
parvenir à un haut degré de solubilisation de l'antigène.
Différents tampons peuvent être utilisés pour parvenir au
pH et pour maintenir celui-ci au cours de la solubilisa-
tion. Des exemples d'échantillons comprennent les tampons au borate, phosphate, carbonate, Tris, barbital, etc. Le tampon particulier utilisé n'est pas déterminant, mais un
tampon peut être préféré à un autre.
Dans des immuno-essais dans lesquels des surfaces en phase solide sont utilisées pour la capture de constituants bactériens solubilisés (antigène) et un détergent connu, tel que le SDS, le Triton, le NP-40, le sarcosyle ou le chénodéoxycholate, est utilisé pour la
solubilisation, une dilution de l'échantillon est habituel-
lement requise après l'étape de solubilisation afin de réduire l'interférence du détergent avec la liaison de l'antigène à la surface captive. La présente invention réduit notablement le besoin d'une telle dilution, ou évite cette dilution, et offre ainsi une sensibilité analytique supérieure. Des thio-éthers (A= -S-) destinés à être utilisés dans les procédés, les kits et les compositions de la présente invention peuvent être préparés, par exemple, par réaction d'un thiol approprié avec un alcool halogéné
dans des conditions permettant le déplacement de l'halogé-
nure par le thiol déprotoné pour donner un thio-éther-
alcanol, qui peut être ensuite transformé en un ester
renfermant le groupement hydrophile.
Par exemple, se référer au schéma I:
SCHEMA I
a CH3(CH2>n SH + Q(CH2)mOH CH3(CH2)nS(C2)mH G-D b CH3(CH2)nS(CH2)mOD-M+ dans lequel: n et m peuvent avoir des valeurs variant de 1 à 12; Q = C1 ou Br; G = Cl, Br ou Y, Y représentant un groupe (CH3CH2)N, (CH3)3N ou la pyridine; D = S03, PO(OR)O, dans lequel R représente H ou un groupe alkyle inférieur, ClC(O)NHCH2, CH2SO3 ou ClC(O)CH2CH2COO; M = Na ou K; a = un hydrure métallique tel que l'hydrure de sodium dans un solvant du type éther, tel que l'éther éthylique, le tétrahydrofuranne, etc.; et b = une solution aqueuse de substance alcaline, telle que l'hydroxyde de sodium, l'hydroxyde de potassium, etc. Les détergents modifiables contenant un groupe sélénium (A = -Se-) destinés à être utilisés dans la présente invention peuvent être préparés de manière similaire à celle décrite ci-dessus pour les détergents
destructibles contenant une liaison thio-éther.
Les détergents du type vinylthio-éther (A = -S-CH=CH-) destinés à être utilisés dans le procédé, les kits et les compositions de la présente invention peuvent être préparés, par exemple, par réaction d'un thiol approprié avec un alcynyl-alcanol approprié dans des conditions dans lesquelles le groupement thiol se fixe sur le groupe alcynyle. Le vinylthio-éther-alcanol résultant est ensuite transformé en un ester renfermant le groupement hydrophile. Par exemple, se référer au schéma II:
SCHEMA II
a CH3(CH2)nSH + H-CSC(CH2)mOH a CH3(CH2)nS-CH=CH(CH2)mOD-M+ G-D + CH3(CH2) nSCH=CH(CH2)m0H dans lequel: n et n peuvent avoir des valeurs variant de 1 à 12; M =Na ou K G = Cl, Br ou Y, Y représentant un groupe (CH3CH3)N, (CH3)3N ou la pyridine; D = S03, PO(OR)O, dans lequel R représente H ou un groupe alkyle inférieur, ClC(O)NHCH2CH2SO3, ClC(O)CH2CH2COO, etc.; a = un peroxyde de diacyle tel que le peroxyde de dibenzoyle, etc., dans un solvant du type alcane (en C5 à C8), tel que l'heptane, etc.; et b = une solution aqueuse d'une substance alcaline, telle que l'hydroxyde de sodium, l'hydroxyde de potassium, etc. Les détergents du disulfure (A = S-S-) destinés à être utilisés dans la présente invention peuvent être préparés, par exemple, par réaction d'un thiol approprié avec un sulfure halogéné activé approprié dans des conditions permettant le déplacement du groupe activateur par le groupe thiol pour former un disulfure activé, qui peut être amené à réagir avec un thio-alcanol approprié. Puis le disulfure-alcanol résultant peut être traité pour transformer le groupement alcool en un ester renfermant le groupement hydrophile. Par exemple, se référer au schéma III:
SCHEMA III
CH3(CH2> SH + (W-S)2- -, CH3(CH2)nS-S-W + HS(CH2)mOH CH)n-( m ( l'-D+ C3(CH2)n C2m0b CH3(CH2)nS-S(CH2)m0D M.- G'-D + CH3(CH2)n -S(CH2)OH dans lequel: n et m peuvent avoir des valeurs variant de 1 à 12; Il G'=Br,Cl ou Y,Y représentant un groupe CH3C-S, NO2-C6H4S-, 2-pyridylthio, etc.; D = S03, PO(OR)O dans lequel R représente H ou un groupe alkyle inférieur, C1C(O)NHCH2CH2SO3, ClC(O)CH2CH2COO, etc.; M =K ou Na r__C02H W =, 02N t ", - CH CH20C-, etc.; N a = une trialkylamine inférieure, telle que la triéthylamine, dans un éther tel que l'éther éthylique, le tétrahydrofuranne, etc.; b = a; et c = une solution aqueuse d'une substance alcaline, telle que l'hydroxyde de sodium ou de potassium, etc. Les détergents du type éther vinylique (A = -O-CH=CH-), destinés à être utilisés dans les procédés, les kits et les compositions de la présente invention, peuvent être préparés, par exemple, par réaction
d'un alcanol approprié avec un aldéhyde d'alcool trialkyli-
que (inférieur) silylé et un diazométhylphosphate d'alkyle inférieur dans des conditions fortement basiques pour donner un éther vinylique avec un groupe silyle terminal, qui peut être transformé en un ester renfermant le groupement hydrophile. Par exemple, se référer au schéma IV:
SCHEMA IV
0 0
CH3(CH2)nOH + HC-(CH2)m-0Si(CH3)3 + (CH30)2PCEN2 a CH3(CH2)n-0-CH=CH-(CH2) m0Si(CH3)3 lb CH3(CH2)n-0-CH=CH-(CH2)mOD M ±- G-D+CH3(CH2)n-O-CH=CH(CH2)m-0H dans lequel: n et m peuvent avoir des valeurs variant de 1 à 12; G = Cl, Br ou Y, Y représentant un groupe (CH3CH2)N, (CH3)3N ou la pyridine; - D = SO3, PO(OR)O dans lequel R=H ou un groupe alkyle inférieur, ClC(O)NHCH2CH2SO3, CiC(O)CH2CH2COO, etc.; M = Na ou K; a = un sel métallique d'un alcool alkylique inférieur, tel que l'alcool tertiobutylique, etc.; b = un halogénure métallique tel que le fluorure de sodium, etc.; et c = une solution aqueuse d'une substance alcaline, telle que l'hydroxyde de sodium ou l'hydroxyde de potassium, etc.
Les détergents du type halogénalkyle (A = -CHX-
ou -CH(X)-CH=CH-), destinés à être utilisés dans la présente invention, peuvent être préparés à partir de l'alcool alcénylique correspondant par réaction avec un
acide halogéné. Le groupement alcool de l'halogénalkyl-
alcanol résultant est ensuite transformé en un groupement hydrophile. Par exemple, se référer au schéma V:
SCHEMA V
CH3(CH2)n-CH=CH-(CH2)m-OH + N-X X CH3(CH2)n 1-CH-CH=CH(CH2)m OH or x CH3(CH2)n-CH=CH-CH(CH2)m1-OH x +G-D X CH3(CH2)n_1-CH-CH=CH(CH2)m OD-M+ or X CH3(CH2)n-CH=CH-CH-(CH2)m 1OD-M+ dans lequel: n et m peuvent avoir des valeurs variant de 1 à 12; X = C1, Br ou I; G = C1, Br ou Y, Y représentant un groupe (CH3CH2)3N, (CH3)3N ou la pyridine; D = SO3, PO(OR) O dans lequel R représente H ou un groupe alkyle inférieur, ClC(O) NHCH2CH2SO3 ou ClC(O)CH2CH2COO, etc.; et M = K ou Na; a = une solution aqueuse d'une substance alcaline, telle que l'hydroxyde de sodium ou l'hydroxyde de potassium, etc. Les détergents dans lesquels A représente un groupe -CHX- peuvent être préparés d'une manière similaire, en réduisant en outre la double liaison du groupe
-CH(X) -CH=CH-.
Les détergents modifiables contenant un groupe sélénium (A = -Se-), destinés à être utilisés dans la présente invention, peuvent également être préparés par réaction d'un diséléniure de dialkyle symétrique avec un trialkylborohydrure métallique dans un solvant du type éther pour donner un sélénolate de métal alcalin, qui peut être amené à réagir avec un halogénalcool approprié. Le groupement alcool du séléno-alcanol résultant peut ensuite être estérifié avec le groupe hydrophile approprié. Par exemple, se référer au schéma VI:
SCHEMA VI
CH(CH2)nSe-Se(CH2)n CH3 + 2M(alkl. i- 3BH 2CH3 (CH2)nSeM + G-D + CH3(CH)nSe-(CH 2)mOH X (CbR 3 lln CH2)OHf-m---------X_(CH2)mR, d te CH3(CH2)n-Se(CH2)m O0D dans lequel: n et m peuvent avoir des valeurs variant de 1 à 12; M = un métal tel que le lithium, etc.; R' = un groupe protecteur de la fonction alcool, tel que (CH3)3Si-, etc.; X = Cl, Br ou I; G = Cl, Br ou Y, Y représentant un groupe (CH3CH2)3N, (CH3)3N ou la pyridine; D = SO3H, PO(OR)O, dans lequel R représente H ou un groupe alkyle inférieur, ClC(O)NHCH2CH2SO3H, ClC(O)CH2CH2COOH; a = un solvant du type éther, tel que l'éther éthylique, le tétrahydrofuranne, etc.; b=a; c = un agent pour l'élimination d'un groupe protecteur d'un alcool, tel que (CH3)4N+F-, etc. ; d = une solution aqueuse d'une substance alcaline, telle que l'hydroxyde de sodium ou de potassium, etc.; et e = une solution aqueuse d'un acide, tel que l'acide chlorhydrique ou l'acide sulfurique, etc. Tous les composés précités peuvent être
prépares sous forme d'un sel métallique du groupe hydro-
phile, tel que le sel de sodium, le sel de potassium, etc. D'autres détergents (A = -SO2CH2CH2O-, un groupe cétal ou -Si(R)20- dans lequel R représente un groupe alkyle inférieur), destinés à être utilisés dans les méthodes analytiques, les kits et les compositions de la présente invention, peuvent être préparés suivant les modes
opératoires décrits par Jaeger et collaborateurs, ci-
dessus. Les détergents dans lesquels A représente un groupe
-OSi(R)20- peuvent être préparés d'une manière analogue.
Les schémas de préparation précités décrivent des procédés de préparation des sulfates (-OSO3-Na+) et des phosphates (-OPO(OR)O-Na+). Les sels d'acides sulfoniques, phosphoniques et carboxyliques peuvent être préparés de la manière suivante: Les acides carboxyliques et leurs sels (J = -COOH ou -CO0-Na+)-, destinés à être utilisés dans les procédés, les kits et les compositions de la présente invention, peuvent être préparés, par exemple, par réaction d'un thiol approprié avec un acide carboxylique halogéné approprié, dans des conditions permettant le déplacement de l'halogénure par le thiol déprotoné pour donner un acide thio-éther carboxylique. Par exemple, se référer au schéma VII:
SCHEMA VII
a CH3(CH) SH + Q(CH2)mCOOH > CH3(CH2)n-S- (CH2)mCOOH dans lequel: n et m peuvent avoir des valeurs variant de 1 à 12; Q = CI ou Br; a = un hydrure métallique tel que l'hydrure de sodium. (Le composé de formule Q(CH2) mCOOH est
disponible dans le commerce).
Les sels d'acide phosphonique (J=PO(OR)O-Na+), destinés à être utilisés dans les procédés, les kits et les compositions de la présente invention, peuvent être préparés, par exemple, par réaction d'un dihalogéno-alcane approprié avec un phosphite approprié pour donner l'ester phosphonique, qui est hydrolysé pour donner le dérivé d'acide phosphonique. La réaction avec un thiol approprié,
suivie par celle d'un alcool en présence de dicyclohexyl-
carbodiimide, donne le sel d'acide thio-étherphosphonique, comme pour le schéma VIII:
*SCHEMA VIII O
Il Q-(CH2)m-Q + P(OEt)3 - Q-(CH2-)-P-OEt OEt
H2 O/H+
0 0
It Il CH3(CH2)nS(CH2)m-P-OH X Q-(CH2)m-P-OH OH CH3(CH2)nSH OH R-OH DCC CH3 (CH2) nS(CH2)m --R OH dans lequel: n et m ont des valeurs pouvant varier de I à 12;
Q = Cl ou Br.
(Les composés de départ sont disponibles dans
le commerce).
Les sels d'acide sulfonique (J = S03-Na+), destinés à être utilisés dans les procédés, les kits et les compositions de la présente invention, peuvent être préparés, par exemple, par réaction d'un halogenalcool avec le chlorure de tosyle pour donner un ester halogéné d'acide toluènesulfonique. Celui-ci est ensuite amené à réagir avec S03Na2 et un thiol approprié pour donner le sel d'acide thio-éthersulfonique, comme pour le schéma IX suivant:
SCHEMA IX
o0 TsCl SO3Na2 I- + Q(CH2)m H Q(CH2)mOTS Q(CH2)-S0 Na+ CH3(CH 2mSH CH3(CH2)nS(CH2)mS3O Na dans lequel n et m ont des valeurs pouvant varier de 1 a 12; Q= Cl ou Br; et
TsCl = chlorure de tosyle.
De la manière précitée, le réactif modificateur et les conditions choisies pour la modification des propriétés d'un détergent utilisé conformément à la présente invention varient suivant le groupe modificateur particulier. Les réactifs et les conditions suivants sont
proposés à titre d'exemple et à titre non limitatif.
Réactifs modificateurs nucléophiles et conditions: (a) le 6-mercaptoéthanol à un pH alcalin pour le clivage du groupe disulfure, (b) l'acide thio-acétique, (c) l'hydroxylamine à un pH alcalin, (d) l'hydrazine à un pH alcalin, (e) l'ammoniac à un pH alcalin et (f) la thio-
urée à un pH alcalin.
Agents modificateurs oxydants et conditions: (a) le peroxyde d'hydrogène dans un tampon à l'acétate, à pH 4,5, (b) le periodate de sodium dans l'eau, (c) l'acide peracétique dans l'acide acétique, (d) l'iodure
de dichlorophényle dans un solvant organique, (e) l'hypo-
chlorite de tertio-butyle dans l'eau, (f) l'hypochlorite ou l'hypobromite de sodium dans l'eau, (g) un perborate, le borate de sodium à un pH alcalin, et (h) Na2S208 dans
l'eau.
Réactifs modificateurs réducteurs et condi-
tions: (a) le dithiothréitol ou le dithioérythritol,.à pH 8, pour un clivage réducteur des disulfures, (b) la triphénylphosphine dans une solution aqueuse de dioxanne, (c) la n-butylphosphine à un pH alcalin et (d) le sulfite
de sodium à un pH alcalin.
EXEMPLES
La présente invention est démontrée plus en détail par les exemples illustratifs suivants. Les parties et les pourcentages sont exprimés en poids/volume, sauf
spécification contraire.
EXEMPLE I
Préparation d'un détergent déqradable contenant le groupe thio-éther Partie A: CH3(CH2)6SH + Cl(CH2)60H NaH CH3(CH2)6S(CH2)60H (2,6 g, 0,105 mole) 13,23 g 13,66 g * 19,09 g (rendement 0,105 mole 0,1 mole THF (170 ml) 82 %)
Alcool intermé-
diaire 1. De l'heptylmercaptan dans le tétrahydrofuranne (THF) a été ajouté a une suspension sous agitation énergique de NaH dans le THF, en
minutes. Le mélange a été agité a tempéra-
ture ambiante pendant un heure sous atmosphère d'argon. 2. Du chlorhexanol dans le THF a été ajouté goutte à goutte à une suspension sous agitation énergique d'heptylmercaptide de sodium sous atmosphere d'argon, en 30 à 45 minutes. Le mélange a été agité à température ambiante sous atmosphère d'argon pendant 24 heures. La fin de la réaction a été contrôlée par chromatographie
sur couche mince.
3. Le THF a été évapore sur un évaporateur rotatif. De l'eau a eté ajoutée et l'extraction a été effectuée à trois reprises avec de
l'acetate d'éthyle (EtOAc). La phase d'extrac-
tion au EtOAc a été lavée à l'eau. Puis les phases d'extraction au EtOAc ont été lavées
avec de la saumure saturée et ont été déshydra-
tées sur Na2SO4. Le Na2SO4 a été filtré et évaporé en une huile de couleur jaune sur un
évaporateur rotatif.
4. Le produit a été chromatographié au moyen d'un appareil de CLHP Waters Prep 500, en utilisant un mélange hexane-EtOAc. Les fractions appropriées ont été réunies et évaporées en une huile limpide de couleur jaune clair. Le produit a été distillé sous vide, point
d'ébullition 85-100 C/1,33 Pa.
Partie B: 1) Et20 (100 ml)
CH3(CH2)6S(CH2)60H + C1S03H >
2) NaOH 19,09 g 10,04 g 0,082 moi 0,086 mole ALcool intermédiaire CH3(CH2) 6S(CH2) 60S03Na+ 26,18 g (ï-endemenft 95,-) Détergent II 1. Le Et20 (éther éthylique) a été refroidi à une température de o à 5 C sous agitation en atmosphère d'argon. 2. Du ClS03H a été ajouté goutte à goutte, en
maintenant la température à 0-5 C.
3. L'alcool intermédiaire a été ajouté goutte à
goutte, en maintenant la température à 0-5 C.
4. Le Et20 a été éliminé sur un évaporateur rotatif; puis du Et20 a été ajouté et évaporé de nouveau sur un évaporateur rotatif relié à
une pompe à vide.
5. La solution a été versée lentement dans une solution de NaOH et de glace. Le pH a été
ajusté à 10.
6. Une extraction a été effectuée au moyen d'éther de pétrole. De l'éthanol a été ajouté pour faciliter la séparation des phases et
l'élimination de la mousse. -
7. Le procédé a été déshydraté par évaporation
rotative, puis par lyophilisation.
EXEMPLE II Cet exemple illustre l'utilisation d'un détergent du type thio-éther,
modifiable chimiquement, dans l'analyse destinée à Neisseria cronorrhoeae, et compare les
performances du détergent modifiable à celles du dodécyl-
sulfate de sodium (SDS) en utilisant de la nitrocellulose pour la capture non spécifique de l'antigène et des anticorps polyclonaux de lapin pour la détection de l'antigène. Protocole 1. Solubilisation d'antiqène (Acq) - N. conorrhoeae (GC) a été solubilisé (5 x 106 cellules/ml) dans un tampon de solubilisation consistant en: Tampon de solubilisation A = 0,5 % de détergent I (Na+O3SO(CH2)5S(CH2)5CH3) dans de l'acétate 0,1 M (pH 4, 6) contenant du NaCl 0,1 M. Tampon de solubilisation B = 0,5 % de SDS (Na+ O3SO(CH2)11(CH3) dans de l'acétate 0,1 M (pH 4,6) contenant du NaCl 0,1 M. Les solutions ont été incubées à température
ambiante pendant 15 minutes pour faciliter la solubilisa-
tion des constituants de surface (Ag) des cellules de gonocoques, puisont été diluées en outre au centième avec les mêmes tampons ou bien avec un tampon dépourvu de détergent, consistant en acétate 0,lM et en NaCl 0, lM, à pH 4,6. Les témoins consistaient en les tampons seuls, sans
addition de cellules.
2. Oxydation - A 0,5 ml de chacune des solutions préparées à partir d'un tampon contenant du détergent a été ajoutée une quantité de H202
suffisante (30 %) pour parvenir à une concen-
tration finale de 1 %, puis la solution a été incubée à température ambiante pendant
minutes.
3. Procédé analvtique.
A. Des portions aliquotes (0,1 ml) de chaque solution ont été appliquées, en double essai, à un filtre de nitrocellulose (diamètre des pores égal à 0,8 gm) monté
sur un tampon de papier absorbant.
B. 0,1 ml de diluant standard (80 % de sérum bovin foetal, 15 % de glycérol, 4,9 % de Tris 0,2M (pH 7,5) et 0,1 %de Tween 20)
a été appliqué au filtre de nitro-
cellulose pour réduire la liaison non
spécifique des réactifs restants.
C. 0,05 ml d'antisérum total de lapin anti-
GC à 1 % (dans le diluant de référence) a été ensuite appliqué et laissé en incubation avec le filtre à température
ambiante pendant 5 minutes.
D. Le lavage a été effectué par application
de 0,1 ml de diluant standard au filtre.
E. 0,05 ml d'anti-IgG de lapin, provenant de chèvre, marquée à la peroxydase de Raifort (PR), à 1 hg/ml (chaînes lourdes plus chaînes légères) dans du diluant standard a été appliqué et laissé en incubation avec le filtre à température
ambiante pendant 5 minutes.
F. Le lavage a été effectué par application de 0,1 ml de diluant de référence, puis par application de 0,1 ml de citrate
0,1 M, à pH 5,5.
G. 0,05 ml d'une solution tamponnée renfermant de la dicarboxidine et H202, à pH 5,0, a été appliqué et l'incubation a été effectuée à température ambiante
pendant 8 minutes.
H. Les réactions ont été stoppées par addition de 0,1 ml de citrate 0,1 M, à pH
5,5.
I. L'intensité de couleur du filtre a été notée. Résultats Les résultats sont résumés sur le tableau I.
TABLEAU I
Intensité de couleur (moyenne de deux résultats) Détergent dans le tampon de dilution H202 Sans Ag Avec Ag
_
SDS - 36 88
SDS + 33 104
Détergent I - 25 199 Détergent I + 20 648 Aucun* - 23 497 Aucun** - 30 461 * préparé a partir de GC solubilisée avec du SDS ** préparé a partir de GC solubilisée avec le détergent I Conclusions La réponse analytique avec de la GC diluée dans 0,5 % de SDS est notablement inférieure à celle obtenue lorsque la GC est diluée dans du tampon dépourvu de détergent et n'est pas accrue notablement par H202. Bien que la réponse analytique avec de la GC diluée dans 0,5 % de détergent I soit supérieure à celle obtenue avec le SDS, elle est encore notablement inférieure à celle obtenue lorsque la GC est diluée dans du tampon dépourvu de détergent. Après oxydation du détergent avec H202, la réponse analytique observée avec 0,5 % de détergent I est accrue notablement et excède la réponse avec le tampon dépourvu de détergent. Il est conclu que l'un ou l'autre détergent interfère avec la liaison de l'antigène au filtre et qu'une liaison peut se produire seulement en l'absence de détergents forts. Le peroxyde d'hydrogène transforme le détergent I en un détergent faible et permet la liaison et,
en conséquence, l'obtention d'une forte réponse analytique.
EXEMPLE III
Cet exemple illustre l'utilisation d'un détergent du type thio-éther, modifiable chimiquement, dans une analyse destinée à Neisseria gonorrhoeae (GC) et compare les effets du détergent sous ses formes modifiée et non modifiée sur la sensibilité de l'analyse. Des anticorps polyclonaux anti-GC de lapin, immobilisés en phase solide, ont été utilisés pour la capture spécifique -de l'antigène et des anticorps monoclonaux anti-GC de souris ont été
utilisés pour la détection de l'antigène.
Protocole 1. Prétraitement de l'échantillon A. N. gonorrhoeae a été solubilisé (lx106 cellules/ml) dans du sérum physiologique tamponné avec un phosphate (STP) de Dulbecco (phosphate 9mM, pH 7,2, NaCl 150mM) contenant 1 % de détergent I (CH3)(CH2)5S(CH2)50S03Na+), 0,1% de Tween 20 et 2 mg/ml de sérum-albumine bovine. Le mélange a été incubé pendant
15 minutes à température ambiante.
B. Du H202 (30 %) a été ajouté à 0,5 ml des cellules solubilisées, en une quantité
suffisante pour parvenir à une concentra-
tion finale de 1 %, et le mélange a été incubé à température ambiante pendant
minutes.
2. Procédé analvtigue A. Des portions aliquotes (0,1 ml) des cellules solubilisées, avant et après traitement avec H202, ont été introduites
dans des puits d'une plaque de micro-
titration revêtue de Suter-Butler (poly-
styrène revêtu successivement avec de la KLH (hémocyanine de patelle) biotinylée, de la streptavidine et finalement avec de l'anti-GC de lapin biotinylé) et ont été laissées au repos pendant 1 heures a 37*C pour activer la capture spécifique de l'antigène solubilisé sur l'anticorps anti-GC de lapin, immobilisé en phase
solide.
B. Les échantillons ont été enlevés des puits et les puits ont été ensuite lavés à quatre reprises avec du STP de Dulbecco contenant 0,1 % de Tween 20. Les puits ont été remplis a leur capacité au cours
de chaque cycle de lavage.
C. Les puits ont été ensuite incubés pendant 1 heure à 37'C avec 0,10 ml d'anticorps monoclonal anti-GC de souris (MAb 4G5) à 2 gg/ml dans du diluant standard (50 % de sérum de veau foetal, 0,1 % de Tween 20,
% de STP de Dulbecco.
D. Les solutions ont été enlevées des puits et les puits ont été ensuite lavés à quatre reprises de la manière indiquée ci-dessus dans l'étape B. E. Les puits ont été ensuite incubés pendant 1 heure à 37'C avec 0,1 ml d'anti-IgG de souris, provenant de la chèvre, marqué à la peroxydase de Raifort (0,12 pg/ml)
dans du diluant de référence.
F. Les solutions ont été enlevées des puits et les puits ont été ensuite lavés à quatre reprises de la manière indiquée ci-dessus dans l'étape B. G. Les puits ont été ensuite incubés pendant minutes à température ambiante avec 0,10 ml d'une solution de dichlorhydrate de 3,3,5,5,'tétraméthylbenzidine 0,83 mM, EDTA 1 mM et peroxyde d'urée
4 mM dans du citrate 50 mM, à pH 3,8.
H. Les réactions ont été stoppées par addition de 0,1 ml de H2SO4 dans chaque puits. I. L'intensité de couleur dans chaque puits
a été déterminée par mesure de l'absor-
bance à 450 nm.
Résultats Traitement de Absorbance à solubilisation 450 nm*
H202 (1 %) 1,81
Aucun 0,18
*Moyenne des valeurs obtenues dans des essais en double.
Aucun témoin de Ag n'a fait l'objet d'un essai; les valeurs d'absorbance observées pour ces analyses sont
généralement comprises dans l'intervalle de 0,1 à 0,2.
Conclusion Les résultats ci-dessus démontrent que l'interférence analytique liée à la présence du détergent I sous sa forme naturelle est notablement réduite par
traitement avec H202.
EXEMPLE IV
Cet exemple illustre l'utilisation d'un détergent du type thio-éther, modifiable chimiquement, dans l'analyse destinée à Chlamydia trachomatis (CT) et compare les effets du détergent, sous ses formes modifiée et non modifiée, sur la sensibilité analytique en utilisait de la fibre de verre pour la capture non spécifique de J!antigène et des anticorps polyclonaux de lapin pour la détection de l'antigène. Protocole 1. Prétraitement de l'échantillon A. Plusieurs échantillons biologiques d'écouvillonnage médical négatifs vis-a- vis des Chlamydia (site de prélèvement de l'échantillon: tractus urogénital de la femme) ont été solubilisés avec 1, 0 ml d'acétate 0,lM (pH 5,5) contenant 1 % de détergent I, en incubant les mélanges à
température ambiante pendant 15 minutes.
B. Les écouvillons ont été enlevés et les solutions ont été réunies pour obtenir un
échantillon biologique.
C. Deux portions aliquotes (volume = 0,40 ml) de l'échantillon biologique total ont été mélangées à des corps élémentaires (CE) de Chlamydia qui avaient été solubilisés dans une solution d'acétate 0,1 M, NaCl 0,1 M, à pH 4,6, contenant 0,5 % de détergent I, de la manière décrite pour GC dans l'exemple II. Une quantité suffisante d'antigène solubilisé a été ajoutée pour parvenir à une concentration finale équivalente à lx105 CE/ml. Les témoins consistaient en l'échantillon biologique total, seul,
sans addition de CE.
D. Une portion aliquote a été mélangée à une quantité de H202 suffisante (30 %) pour parvenir à une concentration finale de 1 %, puis a été incubée à température
ambiante pendant 15 minutes.
2. Méthode analytiqcue A. Une partie de chaque portion aliquote (0,05 ml) a été appliquée à des filtres distincts en fibres de verre (diamètre des pores égal à 1,0 Mm) montés sur des
tampons de papier absorbant.
B. 0,1 ml de diluant de référence (50 % de sérum de bovin foetal, 15 % de glycérol, 34,9 % de Tris 0,01M, à pH 7,5, et 0,1 % de Tween 20) a été ajouté à chaque filtre
de fibres de verre.
C. 0,05 ml d'antisérum anti-CT entier de lapin, à 1 % (dans du diluant standard), a été appliqué à chaque filtre, qui a été ensuite laissé au repos à température
ambiante pendant 5 minutes.
D. 0,1 ml du diluant standard a été ajouté à
chaque filtre.
E. 0,05 ml d'anti-IgG de lapin (chaînes lourdes plus chaînes légères), provenant de la chèvre, marqué à la peroxydase de Raifort (PR) dans du diluant standard a été appliqué à chaque filtre. qui a été ensuite laissé au repos à température
ambiante pendant 5 minutes.
F. Un lavage a été ensuite effectué en appliquant 0,1 ml de diluant standard, puis 0,1 ml de citrate à pH 5,5 à chaque filtre. H. 0,05 ml d'une solution tamponnée de 0* dicarboxidine et de H202, à pH 5,5, a été appliqué et une incubation a été effectuée à température ambiante pendant
8 minutes.
I. Les réactions ont été arrêtées par addition de citrate 0,1 M, a pH 5,5
(0,1 ml).
J. L'intensité de couleur a été notée au niveau du site de réaction. Résultats Traitement de solubilisation Intensité de couleur*
+CE -CE
H202 (1 %) 993 1
Aucun 190 1 *unités arbitraires Conclusion
Les résultats précités démontrent que l'inter-
férence analytique liée à la présence du détergent I sous sa forme naturelle est notablement réduite par traitement
avec H202.
EXEMPLE V
Préparation de: 7-thia-tétradécane-5-ène-l-ol
(CH3-(CH2)6-S-CH=CH-(CH2)4-OH)
Quelques cristaux de peroxyde de dibenzoyle ont été ajoutés à 1,332 g (10 mmoles) de n-heptylmercaptan et 981 mg (10 mmoles) de 5-hexyne-l-ol dissous dans 25 ml d'heptane, sous atmosphère d'argon. Le mélange réactionnel a été soumis à une agitation magnétique et a été chauffé au reflux pendant 18 heures. Puis il a été refroidi et versé dans 25 ml d'une solution de bicarbonate de sodium a 10 % et a été soumis à une extraction avec 3x25 ml d'acétate d'éthyle. Les phases organiques ont été réunies et déshydratées sur du sulfate de sodium, filtrées et évaporées, donnant une huile de couleur jaune. L'huile a été chromatographiée sur huit plaques préparatives de gel de silice type GF, en utilisant un mélange hexane-acétate d'éthyle (4:1) comme solvant de développement. Après enlèvement des plaques de la bande correspondant au produit, le produit a été extrait de la silice avec du
méthanol; 684 mg (rendement 30 %) de 7-thia-tétradécane-5-
ène-l-ol pur ont été obtenus sous forme d'une huile de
couleur jaune pâle.
1H-RMN (ppm, CDC13): 0,82 (t, 3H, CH3), 1,1-1,8 (m, 14H, -CH2), 2,1 (m, 2H, -CH2-C=C-), 2,6 (t, 2H, -CH2S-), 3,62 (t, 2H, -CH2OH), ,38-6,0 (m, 2H, -CH=CH-).
EXEMPLE VI
Préparation de: 7-thiatétradécane-5-ène-1-ol-
sulfate de sodium (CH3-(CH2)6-S-CH=CH-(CH2)4-OSO3Na) 1,39 g (10,4 mmoles) de complexe anhydride sulfurique-triméthylamine ont été ajoutés, sous atmosphère d'argon, à une solution sous agitation de 1,40 g (10,4 mmoles) de 7-thiatétradécane-5-ène-1-ol provenant de la réaction précédente, dans 10 ml de pyridine anhydre. Le mélange réactionnel a été chauffé à une température de 50 à C pendant 15 minutes, puis a été agité pendant une nuit à température ambiante. La réaction a été contrôlée par chromatographie sur couche mince (hexane 50 %-acétate d'éthyle; plaques de gel de silice GF: visualisation par l'iode) pour confirmer la formation du produit polaire nouveau. La totalité de la pyridine a été évaporée du mélange réactionnel, le produit a été dissous dans 10 ml d'eau et 10 ml d'une solution fraîchement préparée d'hydroxyde de sodium 1 N ont été ajoutés goutte à goutte, avec refroidissement. La solution incolore a été congelée et lyophilisée pendant une nuit; 1,66 g (rendement 77 %) de 7-thia-tétradécane-5-ène-l-ol-sulfate de sodium a été
obtenu sous forme d'une poudre de couleur blanche.
1H-RMN (ppm, D20): 0,70 (t, 3H, CH3), 0,9-1,8 (1 m, 14H, -CH2-), 1,98 (m, 2H, -CH2-C=C-), 2,50 (t, 2H, -CH2S-), 3,91 (t, 2H, -CH2OSO3Na), ,30-5,95 (m, 2H, -CH=CH-). Il va de soi que la présente invention n'a été décrite qu'à titre explicatif, mais nullement limitatif, et que de nombreuses modifications pourront y être apportées
sans sortir de son cadre.

Claims (11)

REVENDICATIONS
1. Procédé pour accroître temporairement les propriétés hydrophiles d'une matière, caractérisé en ce qu'il consiste: (a) à mettre en contact ladite matière dans un milieu aqueux avec un compose ayant des propriétés
détergentes, ledit composé répondant à la formule struc-
turale L-J, dans laquelle L représente une portion lipophile portant un groupe modifiable et J représente une portion hydrophile, et dans laquelle: L répond à la formule Y-A-Z: dans laquelle Y représente un groupe alkyle, alcényle ou alcynyle ayant 2 à 12 atomes de carbone; ou bien un groupe aralkyle, aralcenyle ou aralcynyle ayant 7 à 12 atomes de carbone; A représente -S-; -Se-; un groupe -CHX-, -CH(X)CH=CH-, dans lequel X représente Cl, Br ou I; -O-CH=CH-; -S-CH=CH- ou -S-S-; et Z représente un groupe alkylene sature ou insaturé ayant 1 à 10 atomes de carbone ou bien un groupe aralkylène saturé ou insaturé ayant 7 à 10 atomes de carbone, les propriétés hydrophiles de ladite matière étant ainsi accrues; et (b) a modifier ledit groupe modifiable avec un réactif modificateur, lesdites propriétés détergentes étant ainsi modifiées et les propriétés hydrophiles de ladite
matière étant ainsi réduites.
2. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le groupement hydrophile J est un groupe acide ou un de ses sels, de préférence dans lequel J représente un groupe OS03H, SO3H, COOH, PO(OR)OH ou OPO(OR)OH, dans lequel R représente H ou un groupe alkyle inférieur.
3. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que l'étape de modification (b) comprend l'étape consistant à-cliver le composé ayant des propriétés détergentes avec le réactif modificateur, le clivage étant
effectué de préférence en utilisant une substance nucléo-
phile comme réactif modificateur pour l'étape (b); la
substance nucléophile la plus appréciée étant un thio-
sulfate, un mercapto-acide, une thio-urée, une hydroxyl-
amine, une hydrazine, un hydrazide ou l'ammoniac.
4. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que l'étape modificatrice (b) comprend l'étape consistant à oxyder le composé ayant des propriétés détergentes avec le réactif modificateur, l'oxydation étant de préférence effectuée en utilisant un peroxyde, un peracide, un hypochlorite ou un hypobromite comme agent modificateur pour l'étape (b); le peroxyde ou le peracide le plus apprécié étant un hydroperoxyde d'alkyle ou d'acyle
inférieur, H202, un perborate ou un persulfate.
5. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que l'étape modificatrice (b) comprend
l'étape consistant à réduire le composé ayant des pro-
priétés détergentes avec le réactif modificateur, la réduction étant de préférence effectuée en utilisant un sulfite, un hyposulfite ou un mercaptan comme réactif
modificateur pour l'étape (b).
6. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le composé ayant des propriétés détergentes est un composé de formule CH3(CH2)n-S(CH2)mOSO3H ou un de ses sels, dans lequel _ est un nombre entier de 1 à 6 et m est un nombre entier de 4 à 11, ledit composé répondant de préférence à la formule
CH3(CH2)2-S-(CH2)110S03H ou CH3(CH2)4-S-(CH2)60SO3H.
7. Procédé de préparation d'un analyte destiné à une analyse, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant: (a) à solubiliser l'analyte avec un détergent contenant un groupe modifiable, ledit détergent répondant à la formule structurale L-J, dans laquelle L représente un groupement lipophile et J représente un groupement hydrophile, et (b) a modifier les propriétés dudit détergent par addition d'un réactif modificateur capable de modifier
ledit groupe modifiable.
8. Procédé suivant la revendication 7, caractérisé en ce qu'il est utilisé, comme détergent répondant à la formule structurale L-J pour l'étape (a), un composé dans lequel: L répond à la formule Y-A-Z: dans laquelle Y représente un groupe alkyle, alcényle ou alcynyle ayant 2 à 12 atomes de carbone; ou un groupe aralkyle, aralcényle ou aralcynyle ayant 7 à 12 atomes de carbone; A représente -S-; -Se-; un groupe -CHX- ou CH(X)CH=CH-, dans lequel X représente Cl, Br ou I; -O-CH=CH-; -S-CH=CH-; S-S-; -SO2CH2CH2-O-; un
groupe cétal; ou bien un groupe -Si(R)20- ou -OSi(R)20-
dans lequel R représente, indépendamment, H ou un groupe alkyle inférieur; et Z représente un groupe alkylène saturé ou insaturé ayant 1 à 10 atomes de carbone ou bien un groupe aralkylene saturé ou insaturé ayant 7 à 10 atomes de carbone et J représente un groupe acide ou un de ses sels, J étant de préférence un groupe OS03H, S03H, COOH, PO(OR)OH ou OPO(OR)OH, dans lequel R représente H ou un
groupe alkyle inférieur.
9. Kit destiné à effectuer une analyse pour déterminer la présence d'un analyte dans un échantillon suspecté de contenir l'analyte, ledit analyte pouvant être un membre d'une paire à liaison spécifique consistant en un ligand et en son récepteur complémentaire, caractérisé en ce qu'il comprend, sous forme conditionnée: (a) un composé ayant des propriétés détergentes et répondant à la formule structurale Y-A-Z-J, dans laquelle: Y représente un groupe alkyle, alcényle ou alcynyle ayant 2 à 12 atomes de carbone; ou bien un groupe aralkyle, aralcényle ou aralcynyle ayant 7 à 12 atomes de carbone; A représente -S-; -Se-; un groupe -CHX- ou -CH(X) CH=CH-, dans lequel X représente Cl, Br ou I; -O-CH=CH-;-S-CH=CH-; -S-S-; -S02CH2CH20-; un groupe cétal ou bien un groupe Si(R)20- ou -OSi(R)20dans lequel R représente, indépendamment, H ou un groupe alkyle inférieur; . Z représente un groupe alkylène saturé ou insaturé ayant 1 à 10 atomes de carbone ou bien un groupe aralkylène saturé ou insaturé ayant 7 à 10 atomes de carbone; et (b) J représente un groupement hydrophile; et (c) l'un ou l'autre, ou bien l'un et l'autre:
d'un réactif modificateur capable de modifier lesdites pro-
priétés détergentes dudit composé Y-A-Z-J, ou d'un membre d'une paire à liaison spécifique complémentaire dudit analyte.
10. Composition, caractérisée en ce qu'elle comprend un milieu aqueux contenant un antigène microbien et/ou son anticorps complémentaire et un composé de formule Y-A-Z-J, dans laquelle: Y représente un groupe alkyle, alcényle ou alcynyle ayant 2 à 12 atomes de carbone; ou bien un groupe aralkyle, aralcényle ou aralcynyle ayant 7 à 12 atomes de carbone; A représente -S-; -Se-; un groupe -CHX- ou -CH(X)CH=CH-, dans lequel X représente Cl, Br ou I; -O-CH=CH-; -S-CH=CH-; -S-S-; -S02CH2CH20-; un groupe cétal, ou bien un groupe -Si(R)20- ou -OSi(R)20- dans lequel R représente, indépendamment, H ou un groupe alkyle inférieur; Z représente un groupe alkylène saturé ou insaturé ayant 1 à 10 atomes de carbone ou bien un groupe aralkylène saturé ou insaturé ayant 7 à 10 atomes de carbone; et J représente un groupement hydrophile, de préférence de formule OSO3H, SO3H, COOH, PO(OR)OH ou OPO(OH)OH, dans laquelle R représente H ou un groupe alkyle inférieur.
11. Composé ou un de ses sels, -caractérisé en ce qu'il répond à la formule CH3(CH2)n-A-(CH2)mOW, dans laquelle A représente -S- ou un groupe -S-CH=CH-; W représente H ou un groupe SO3H; et n représente un nombre entier de 2 à 4 et m représente un nombre entier de 6 à 11
lorsque A représente -S-; ou bien n et m ont, indépendam-
ment, une valeur de 1 a 10 lorsque A représente un groupe
-S-CH=CH-.
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