FR2573983A1 - Procede de production commerciale d'antigenes d'helminthes - Google Patents
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Abstract
PROCEDE DE PRODUCTION D'ANTIGENES DE VERS PARASITES, CONSISTANT A IDENTIFIER LES ANTIGENES D'UN VER PARASITE, A MODIFIER GENETIQUEMENT UN ORGANISME APPARENTE A CE VER PARASITE JUSQU'A CE QU'IL SE FORME UNE SOUCHE MUTANTE CARACTERISEE PAR DES ANTIGENES PRESENTANT UNE IDENTITE IMMUNOLOGIQUE AVEC DES ANTIGENES DU VER PARASITE, A CULTIVER LA SOUCHE MUTANTE, ET A RECOLTER LA SOUCHE MUTANTE DE SORTE QUE LES ANTIGENES PUISSENT ETRE ISOLES EN VUE DE LEUR UTILISATION COMME PRODUITS DE DIAGNOSTIC OU COMME VACCINS POUR LA DETECTION ET LA PREVENTION DE L'INFECTION DUE AU VER PARASITE.
Description
Procédé de production commerciale d'antigènes d'helminthes Cette invention
concerne la mise au point et la production commerciale d'antigènes d'helminthes (vers parasites). L'utilisation d'antigènes pour les produits de diagnostic et les vaccins afin de détecter et de prévenir des maladies infectieuses telles que la poliomyélite, la variole, la diphtérie, le tétanos, et les maladies des pieds et de la bouche, a été clairement démontrée aussi bien chez l'homme que chez l'animal. La plupart des antigènes qui sont utilisés comme produits de diagnostic et comme vaccins sont dérivés d'organismes infectieux cultivés. Ces organismes infectieux sont cultivés in vitro ou in vivo dans des animaux ou des cultures tissulaires. Un exemple est constitué par les antigènes de la poliomyélite qui sont dérivés de virus cultivés in vitro dans des cellules rénales de singe. Ces antigènes sont utilisés comme produits de diagnostic et pour
vacciner des humains.
Si une petite quantité de virus atténués est inoculée à un hôte, les virus inoculés qui portent des antigènes spécifiques induisent la formation d'anticorps chez l'hôte, lesquels à l'avenir reconnaîtront et détruiront les virus envahissants futurs de la poliomyélite. Les mêmes antigènes de virus de la poliomyélite peuvent également être
utilisés pour le diagnostic d'une infection poliomyélitique.
Si un hôte est infecté par la poliomyélite, certains anticorps spécifiques sont mis au jour dans l'organisme et
la présence de ces anticorps est révélatrice d'une infection.
On peut réaliser la détection des anticorps par leur fixation sur des antigènes de la poliomyélite par les méthodes courantes de dosage par immunofluorescence, radio-immunologie, et enzymatique, par immunoélectrophorèse, à l'hémagglutinine
et par immunodiffusion.
Mais il n'est pas possible de produire commercialement des antigènes pour toutes les maladies infectieuses. Une limite à cette production est l'impossibilité de cultiver ou de produire in vivo ou in vitro une grande quantité d'organismes infectieux dont sont dérivés les antigènes. Cela est particulièrement vrai pour les vaccins, dans lesquels les organismes infectieux ont des cycles vitaux compliqués et/ou ont plus d'un hôte. La plupart des maladies causées par des vers parasites qui infectent les chiens, les chats, les moutons, les cochons,
les chevaux et l'homme entrent dans cette catégorie.
Un exemple en est la maladie helminthiqueprovoquée par la filaire cruelle ou filaire du chien qui peut infecter une large variété d'organismes, des chiens, chats, phoques à l'homme (rarement). Cependant, le parasite réside généralement chez le chien comme hôte, le moustique servant d'hôte intermédiaire. Il serait difficile d'obtenir des antigènes nécessaires à la fabrication de vaccins ou de produits de diagnostic étant donné que le ver parasite passe par plusieurs stades de développement larvaire et qu'un seul stade larvaire contient les antigènes appropriés. Chez la filaire cruelle, ce stade particulier, représenté par les larves infectieuses, réside chez le moustique. Dans ces conditions, la capture des hôtes intermédiaires (les moustiques) et la dissection des larves infectieuses sont nécessaires pour produire les antigènes requis pour la fabrication d'un vaccin contre la filaire cruelle (Wong, M.M.; Guest, M.F. , et Laviopierre, M.J. (1974): Dirofilaria immitis; Fate and Immunogenicity of Irradiated Infective
Stage Larvae in Beagles, Experimental Parasitology 35, 65-
74). De même, les antigènes qui sont nécessaires pour diagnostiquer les anticorps de l'infection par la filaire cruelle doivent être dérivés de filaires adultes hébergées dans le coeur d'un chien infecté (Desowitz, R. S. et Una, S.R. (1976), The Detection of Antibodies in Human and Animal Filariosis by Counter-immunoelectrophoresis with Dirofilaria immitis Antigen. Journal of Helminthology, 50, 53-57; Grieve, R.B., Mika-Johnson, M., Jacobson, R.H., et Raymond, C.H., (1981) Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Measurement of Antibody Response to Dirofilaria immitis in Experimentally Infected Dogs. American Journal of Veterinary Research 42, 66-69). Ces sources et ces procédés de production d'antigènes de la filaire cruelle en vue de la fabrication de produits de diagnostic (à partir du coeur d'un chien) et de vaccins (à partir de moustiques) ne sont ni faisables commercialement,
ni socialement acceptables.
La présente invention fournit un procédé de production d'antigènes d'helminthes (vers parasites) dans lequel une espèce apparentée du ver infectieux qui peut être facilement cultivée est modifiée génétiquement. Le procédé consiste à identifier les antigènes de surface du ver parasite difficile à cultiver, puis à créer ces mêmes
antigènes dans l'espèce facilement cultivée.
L'espèce facilement cultivée est modifiée génétiquement par des mutations jusqu'à ce que ladite espèce présente certains des antigènes immunologiques du ver parasite difficile à cultiver. Du fait de ces manipulations génétiques, les types et les quantités d'antigènes intéressés se trouvant dans l'espèce facilement cultivée sont modifiés. Les antigènes qui sont dérivés de l'espèce génétiquement modifiée sont alors utilisés pour la production commerciale des antigènes nécessaires à la fabrication de produits de diagnostic et
de vaccins.
Le principe de l'invention est de modifier les gènes d'antigène de l'espèce facilement cultivée pour produire, de préférence in situ les antigènes de l'espèce parasite difficile à cultiver. L'expression de ces gènes modifiés pour produire ces antigènes peut également avoir lieu dans des bactéries ou des levures par clonage des gènes d'antigène, et permettre ainsi une production éventuellement
plus efficace de ces mêmes antigènes.
Dans les formes de réalisation préférées, les antigènes qui sont produits à l'aide de cette invention contre l'infection par la filaire cruelle le sont par Dirofilaria immitis, et l'espèce apparentée substituée est le nématode
hermaphrodite indépendant appelé Caenorhabditis elegans.
Production d'anticorps contre les antigènes de la filaire cruelle de Dirofilaria immitis Il faut d'abord produire des anticorps contre des antigènes parasites intéressés. Ces anticorps qui reconnaissent et se fixent spécifiquement sur les antigènes parasites difficiles à cultiver peuvent alors être utilisés comme une "sonde" pour isoler, dans l'espèce facilement cultivée, des mutants qui sont capables de produire les antigènes parasites correspondants. Dans les exemples qui seront donnés plus loin, il a été produit des anticorps contre les antigènes de la filaire cruelle adulte et isolé-des mutants dans C. elegans avec les antigènes correspondants de la filaire cruelle. Bien que l'invention soit décrite avec référence à C. elegans, d'autres espèces que l'on pense convenir sont Panagrellas redivious, Turbatric acetic et
C. briggsae.
On a isolé des filaires cruelles adultes d'un chien
infecté par la filaire cruelle. On a excisé des filaires--
adultes du coeur et on les a mises en suspension dans une solution saline tamponnée par phosphate (PBS) 0,15 M à pH
7,4. On a homogénéisé les filaires et on a ajusté l'homo-
généisat à une concentration finale de 500 microgrammes de protéines (poids à l'état humide) par ml de PBS. On a ensuite mélangé cet homogénéisat avec un volume-égal d'adjuvant complet de Freund. On a utilisé un échantillon de 2 ml de ce mélange pour immuniser un lapin contre les antigènes de la filaire cruelle. Avant l'immunisation réelle, on a prélevé du lapin un sérum pré-immun. On a inoculé au lapin,le 25ème et ème jours après la première immunisation, 2 ml d'un mélange comprenant un volume égal d'homogénéisat et d'adjuvant incomplet de Freund. Après une prise de sang positive au 45ème jour, on a recueilli le sérum et on l'a utilisé pour doser la formation des anticorps contre les antigènes
de la filaire cruelle utilisés pour l'immunisation.
Dosage du sérum contenant les anticorps anti-filaire cruelle On a dosé le sérum du lapin immunisé par les antigènes de la filaire cruelle pour déterminer l'activité des anticorps contre les antigènes de la filaire cruelle et les antigènes de C. elegans. La méthode préférée selon
l'invention consiste à utiliser un dosage par immuno-
fluorescence de l'immunoglobuline IgG de chèvre antilapin conjuguée à de la fluorescéine ou de la rhodamine. On peut également utiliser d'autres méthodes telles que le dosage enzymatique, le dosage radio-immunologique, le dosage à l'hémagglutinine et l'immunodiffusion. On a lavé trois fois avec du PBS des coupes de tissus de filaire cruelle provenant de chiens (contenant les antigènes), puis on les a fait incuber avec les anticorps anti-filaire cruelle du lapin, à la température ambiante pendant 30 minutes, puis on a lavé les tissus trois fois avec du PBS pour éliminer les anticorps anti-filaire cruelle du lapin. Après quoi, on a fait incuber les tissus avec des anticorps d'IgG de chèvre antilapin à la fluorescéine. Apres incubation, on a éliminé les anticorps libres de l'IgG de chèvre antilapin en lavant trois fois avec du PBS les tissus de la filaire cruelle. La présence d'activités anticorps de lapin se fixant sur des antigènes spécifiques de la filaire cruelle était indiquée par la
fixation des anticorps fluorescents de l'IgG de chèvre anti-
lapin, que l'on a alors observés au microscope à fluorescence, faisant apparaître une couleur rouge (rhodamine) ou verte (fluorescéine). On a également utilisé des animaux entiers et des tissus de C. elegans pour doser des anticorps anti-filaire cruelle engendrés par le sérum de lapin immunisé. Les résultats
des dosages par fluorescence obtenus pour l'activité anti-
filaire cruelle sont résumés dans le Tableau I ci-après.
Le sérum pré-immun témoin n'avait aucune activité contre les tissus de la filaire cruelle ni contre les tissus de C. elegans. Au contraire, on a mis en évidence des activités anticorps dans le sérum de lapin immunisé contre les tissus de la filaire cruelle, mais pas contre C. elegans. Ainsi, la production d'anticorps contre les antigènes de la filaire cruelle n'est spécifique que pour la filaire cruelle mais par pour C. elegans. On a utilisé ce sérum, qui paraît spécifique, comme sonde pour isoler des mutants de C. elegans qui, selon l'invention, porteront des antigènes correspondant
aux antigènes de la filaire cruelle.
TABLEAU I
Activités anticorps du sérum d'un lapin qui a été immunisé par des antigènes de la filaire cruelle Titre Sérum immun Sérum pré-immun Tissus de Tissus de Tissus de Tissus de filaire C. elegans filaire C. elegans cruelle cruelle
11:5 + -
1:20 + -
1:40 + -
1:80 + -
1:160 + -
+ = activité fluorescence = pas d'activité
TABLEAU II
Activité de fixation d'anticorps de six mutants isolés indépendamment, de C. elegans avec un sérum anti-filaire cruelle de lapin de titre 1:50 Sérum immun Sérum pré-immun
Type sauvage (C.
elegans Filaire cruelle + Souche mutante
VGI-1 +
VGI-2 +
VGI-3 +
VGI-4 +
VGI-5 +
VGI-6 +
25739&3
TABLEAU III
Activité de fixation d'anticorps d'un mutant VGI-6 avec le sérum antifilaire cruelle du lapin Titre Tissus de Tissus de Tissus de type VGI-6 filaire cruelle sauvage (C. elegans)
1:5 + +
1:20 + +
1:40 + +
1:80 + +
1:160 + +
Mutagénisation de C. elegans pour produire des mutants ayant des antigènes modifiés qui correspondent aux antigènes de la filaire cruelle La nématode de sol indépendante C. elegans a la préférence étant donné qu'elle peut être facilement cultivée en grandes quantités et que des mutations récessives homozygotes peuvent être produites (Brenner, S. (1974), The Genetics of Caenorhabditis elegans Genetics 77, 71-94). Ceia est dû à la nature hermaphrodite de l'animal, c'est-à-dire au fait que l'animal est autofertile. Une mutation introduite dans l'animal par autofécondation pendant deux générations
produira une mutation homozygote.
- On a exposé de jeunes larves de C. elegans, à leur premier et à leur second stades de développement larvaire, à un mutagène, 1'éthyl méthyl sulfonate (on peut également utiliser n'importe quels autres mutagènes, tels que le
méthane sulfonate de méthyle, l'orangé d'acridine, la nitroso-
guanidine, l'hydroxynitrosamine; (Drake, J.W. et R.H. Baltz (1976), The Biochemistry of Mutagenesis, Annual Review of Biochemistry 45, 11) et on les a laissées s'autoféconder et pondre des oeufs. On a laissé la génération F1 de cette mutagénèse se reproduire puis on a trié, dans la génération F2, les animaux qui se fixeraient sur des anticorps réalisés contre des antigènes spécifiques de la filaire cruelle. Comme C. elegans de type sauvage ne se fixe pas sur les anticorps réalisés contre les antigènes de la filaire cruelle qui sont produits dans l'antisérum de filaire cruelle du lapin selon l'invention (voir le Tableau I), on a procédé à un tri visuel des mutants qui avaient des antigènes qui se fixaient sur les anticorps de la filaire cruelle, en utilisant le dosage par fluorescence ci-dessus. Les mutants qui se fixent sur les anticorps de la filaire cruelle, à la différence du type sauvage (sans aucune fluorescence) avaient une couleur
fluorescente rouge (rhodamine) ou verte (fluorescéine).
On a séparé ces animaux mutants et on les a clones.
Les animaux qui se reproduisent de manière constante pour cette caractéristique sont considérés comme des mutants qui présentent un gène modifié susceptible de produire un ou
des antigènes correspondant à ceux de la filaire cruelle.
En utilisant les méthodes ci-dessus, il a été démontré qu'avec la présente invention (voir le Tableau II) il était possible de produire des mutants de C. elegans ayant des antigènes modifiés correspondant à ceux des antigènes de la filaire cruelle. Dans le Tableau II, les activités de fixation d'anticorps obtenues avec un sérum anti-filaire cruelle de six (6) mutants isolés indépendamment sont comparées avec celles des tissus de la filaire cruelle
et des tissus du type sauvage.
Le Tableau III représente une nouvelle caractéri-
sation de l'un des mutants représentatifs parmi les six (6) du Tableau II, chez lesquels la fixation de l'activité anticorps se manifeste de façon très similaire à celle des
tissus de filaire cruelle.
Par ailleurs, quand on a immunisé un lapin avec l'une de ces souches mutantes de C. elegans, on a pu mettre au jour une réponse immunogène selon laquelle les anticorps produits dans le sérum présentaient une activité de fixation
vis-à-vis d'une espèce d'antigènes de la filaire cruelle.
Ainsi, les mutants qui sont isolés selon l'invention présentent non seulement une réponse antigène de fixation sur des anticorps de la filaire cruelle, mais aussi une réponse immunogène dans la production d'anticorps contre
les antigènes de la filaire cruelle.
A l'aide de la méthode décrite ci-dessus, il a également été isolé une souche mutante de C. elegans qui a été modifiée, au moins en ce qui concerne certains de ses antigènes de surface, pour qu'elle soit immunologiquement identique aux antigènes d'un autre ver parasite, Ancylostoma caninum, un ankylostome qui s'introduit dans l'intestin du chien. On peut utiliser, dans le procédé selon l'invention, n'importe quelle espèce de vers qui sont facilement cultivés et dans lesquels des mutations peuvent être provoquées pour induire une modification de ses antigènes en un antigène
de ver parasite difficile à cultiver correspondant.
Du point de vue conceptuel, en utilisant C. elegans et la filaire cruelle, D. immitis à titre d'exemple, une fois que les antigènes du parasite voulu ont été produits par le procédé ci-dessus, on peut les utiliser pour mettre au point toute une gamme de produits de diagnostic permettant de détecter la présence d'anticorps induits lors d'une infection par un ver parasite. Il a été démontré qu'une telle approche, avec des antigènes de la filaire cruelle était utilisable pour le diagnostic de plusieurs types d'infections helminthiques (Desowitz and Una, supra; Hedge and Ridley (1977). Immunofluorescent Reactions with Microfilariae. 1 Diagnostic Evaluation; Transaction of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene 71, 304-307). Dans le cas des antigènes de la filaire cruelle qui ont été produits selon l'invention, il a été constaté que l'une des souches mutantes isolées dans C. elegans, VGI-2, était utilisable
pour le diagnostic de l'infection par la filaire cruelle.
Quand on a dosé avec la souche mutante VGI-2 des échantillons de sérums de chiens qui avaient été diagnostiqués comme infectés et non infectés par des filaires cruelles, les résultats étaient remarquablement précis, en ce sens que 6 chiens diagnostiqués par le dosage courant par filtre comme étant positivement infectés, sur la base de la présence de microfilaires, ont également montré une réponse positive avec cette souche mutante dans le dosage par immunofluorescence. Par contre, cinq échantillons de sérum provenant de chiens non infectés d'après le diagnostic clinique, ont également montré une réponse négative avec la souche mutante. Outre l'utilisation du dosage par immunofluorescence pour détecter une infection par des vers parasites avec des antigènes de la souche mutante, on peut également utiliser le dosage enzymatique, radio- immunologique, d'immunodiffusion ou à l'hémagglutinine (D. Stites (1976), Laboratory Methods for Detection of Antigens and Antibodies, Basic and Clinical Immunology,
Lange Medical Publications, pp. 281-315).
Les antigènes qui sont produits par la méthode décrite peuvent également être utilisés pour la fabrication de vaccins contre les vers parasites. Dans l'exemple de l'infection par la filaire cruelle, on sait que les antigènes qui sont dérivés de larves infectieuses peuvent être utilisés comme vaccin pour les chiens contre l'infection par la filaire cruelle (Wong, M.M, Guest, M.F., et Lavoipierre, M.J. (1974) Dirofilaria immitis; Fate and Immunogenicity of Irradiated Infective Stage Larvae in Beagles, Experimental Parasitology , 65-79). Dans la mesure o des anticorps peuvent être produits spécifiquement contre ces antigènes de larves infectieuses particulières, et que des souches mutantes de C. elegans avec des antigènes correspondants sont isolés, on peut utiliser ces souches mutantes pour produire les antigènes immunogènes nécessaires à la production
et à la fabricatin d'un vaccin contre la filaire cruelle.
Le vaccin produit peut ensuite être mis en suspension, par exemple dans une solution saline tamponnée, puis être utilisé pour injection souscutanée ou intramusculaire à un animal afin de l'immuniser contre l'infection par la filaire cruelle (W.J. Herbert (1978), Laboratory Animal Techniques for Immunology in "Handbook of Experimental Immunology", Vol. 1 Immuno Chemistry, 3rd Edition, Editor,
D.M. Weir, Blackwell Scientific Publishers, Oxford, London).
Le principe fondamental du procédé de l'invention est de modifier le ou les gènes d'une espèce de ver il étroitement apparentée qui est facile à cultiver pour produire des antigènes d'un ver parasite difficile à cultiver. Dans la forme de réalisation décrite, le concept de la production d'antigènes est de les produire in situ dans l'espèce du ver facilement cultivé. Ce concept peut être en outre étendu à l'expression d'antigènes dans d'autres organismes tels que les bactéries, les levures, ou autres micro-organismes qui peuvent fournir un rendement plus efficace et productif des antigènes voulus. L'isolement du ou des gènes d'antigène et leur insertion dans des bactéries avec des vecteurs génétiques peuvent être appliqués. On peut isoler les gènes, de C. elegans par exemple, en isolant initialement l'acide nucléique de l'animal avec la méthode de la protéinase K-SDS qui est décrite par Emmons, S., Klass, M.R., et Hirsh, D. (1979); Analysis of the Constancy of DNA Sequences During Development and Evolution of the Nematode Caenorhabditis elegans; Proceeding of the National Academy of Sciences
76, 1333-1337.
Le poly A (ARN) est séparé par précipitation à l'éthanol et par fixation sur de l'oligo(dT) cellulose selon Aviv et Leder (1972), Purification of Biologically Active Globin Messenger RNA by Chromatography on Oligothymidylic Acid Cellulose, Proceedings of the National Academy of Science 69, 1408-1412. Les substances qui se fixent sur l'oligo(dT) cellulose sont celles qui sont utilisées pour purifier le poly A (ARN) qui code pour le gène d'antigène produit. Etant donné que le poly A (ARN) ne s'hybride qu'avec l'ADN qui code pour le gène d'antigène, ce poly A(ARN)peut être utilisé pour sélectionner des molécules de poly A (ADN) recombinantes de C. elegans codant pour le gène d'antigène intéressé. Ces molécules d'ADN recombinantes peuvent ensuite être introduites dans des bactéries ou des levures avec divers vecteurs génétiques tels que les plasmides ou les bactériophages pour exprimer le gène d'antigène et le produit intéressé à l'aide des techniques fondamentales qui sont décrites par Davis, R.W., Botstein, D., et Roth, J.R. (1980). A manual for genetic engineering - Advanced Bacterial Genetics, Cold
Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York).
Il existe une possibilité que les antigènes qui sont produits par les parasites naturels soient plus puissants ou plus spécifiques que ceux qui dérivent de C. elegans par mutations génétiques. Aussi, le clonage des gènes parasites naturellement difficiles à cultiver pour leurs
antigènes dans unmicro-organisme peut-il être avantageux.
Si la méthode de clonage décrite ci-dessus était utilisée, ce clonage serait extrêmement difficile, sinon impossible, à réaliser. Cela est dû à la limitation de la quantité de tissus parasites disponible pour isoler le poly A (ARN) intéressé. Le poly A (ARN) n'est présent que dans des tissus qui sont en train d'exprimer l'antigène. Dans le cas du poly A (ARN) correspondant aux antigènes des larves infectieuses de la filaire cruelle, ces tissus doivent être dérivés d'animaux larvaires disséqués de moustiques capturés qui infestent les parasites. La disponibilité des tissus larvaires infectieux nécessaires pour isoler une quantité suffisante de poly A (ARN) correspondant à leurs antigènes est limitée, ce qui rend la tâche d'isolement du poly A (ARN) extrêmement difficile, sinon impossible. Cependant, si l'on utilise le poly A (ARN) isolé de la souche mutante de C. elegans qui correspond à ces antigènes intéressés, il est possible, par hybridationde l'ADN de la filaire cruelle, d'isoler les gènes d'ADN recombinant correspondant aux
antigènes des larves infectieuses de la filaire cruelle.
La disponibilité de l'ADN de la filaire cruelle n'est pas limitée étant donné que tous les tissus ont de l'ADN contenant tous les gènes, et qu'une grande quantité de tissus peuvent
être obtenus à partir de filaires cruelles adultes.
Claims (17)
1. Procédé de production d'antigènes de vers parasites, caractérisé en ce qu'il consiste: à identifier les antigènes d'un ver parasite; à modifier génétiquement un organisme apparenté à ce ver parasite jusqu'à ce qu'une souche mutante se forme, laquelle est caractérisée par des antigènes présentant une identité immunologique vis-à-vis des antigènes du ver parasite; à cultiver la souche mutante; et à récolter la souche mutante de façon que les antigènes puissent être isolés en vue de leur utilisation comme produit de diagnostic ou comme vaccin pour la détection
et la prévention de l'infection due audit ver parasite.
2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé
en ce que le ver parasite est un helminthe.
3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le ver parasite est choisi parmi les trématodes,
cestodes et nématodes.
4. Procédé selon la revendication 1 ou 3,
caractérisé en ce que l'organisme apparenté est un helminthe.
5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'organisme apparenté est choisi parmi les trématodes,
cestodes et nématodes.
6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé
en ce que l'organisme apparenté est un nématode.
7. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'organisme apparenté est choisi dans le groupe
comprenant C. elegans, P. redivious, T. acetic ou C.briggsae.
8. Procédé selon la revendication 1 ou 7,
caractérisé en ce que le ver parasite est D. immitis.
9. Procédé selon la revendication 1 ou 7,
caractérisé en ce que le ver parasite est A. caninum.
10. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend l'étape d'identification des souches mutantes qui présentent l'identité immunologique avec les antigènes du ver parasite par sélection des souches mutantes qui se fixent sur les anticorps produits par un hôte immunisé avec
des antigènes du ver parasite.
11. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes de séparation des souches mutantes ainsi identifiées et de clonage des souches mutantes ainsi séparées.
12. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la modification génétique de l'organisme étroitement apparenté comporte les opérations consistant à: isoler l'acide nucléique de l'organisme apparenté; séparer le poly A (ARN) ; sélectionner ensuite les molécules de poly A (ADN) recombinantesde l'organisme étroitement apparenté; coder pour le gène d'antigène intéressé; introduire les molécules d'ADN recombinantes dans une culture de support pour exprimer le gène d'antigène; et
récolter ensuite ce dernier.
13. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la modification génétique de l'organisme étroitement apparenté comporte les opérations consistant à: isoler l'acide nucléique de l'organisme apparenté; séparer le poly A (ARN) de l'organisme apparenté; sélectionner ensuite les molécules de poly A (ADN) recombinantesdu ver parasite; coder pour le gène d'antigène intéressé; introduire les molécules d'ADN recombinantes dans une culture de support pour exprimer le gene d'antigène; et
récolter ensuite ce dernier.
14. Procédé de détermination de la présence d'anticorps induits lors d'une infection par un ver parasite, caractérisé en ce qu'il comprend l'opération consistant à doser un sérum d'un hôte infecté avec unecomposition comprenant un porteur biologiquement acceptable et des antigènes produits à partir d'une souche mutante d'un organisme apparenté d'un ver parasite, les antigènes étant
immunologiquement identiques aux antigènes du ver parasite.
15. Composition comprenant un porteur biologique-
ment actif et une quantité efficace de la souche mutante
selon la revendication 1.
16. Composition selon la revendication 15,
caractérisée en ce qu'il s'agit d'un produit de diagnostic.
17. Composition selon la revendication 15,
caractérisée en ce qu'il s'agit d'un vaccin.
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