FR2553295A1 - Appareil en vue de l'electroelution de macromolecules porteuses d'une charge electrique - Google Patents

Abstract

DISPOSITIF EN VUE DE L'ELECTROELUTION DE MACROMOLECULES PORTEUSES D'UNE CHARGE ELECTRIQUE SE COMPOSANT D'UN CORPS PARALLELEPIPEDIQUE OU EN FORME DE DISQUE COMPORTANT UN CANAL AU MOINS, QUI S'ETEND AU MOINS D'UNE EXTREMITE A L'AUTRE DU CORPS EN PRESENTANT UNE OUVERTURE SUR CHACUNE DE SES EXTREMITES, QUI EST, AU MOINS PARTIELLEMENT, OUVERT VERS LE HAUT ET QUI, DANS LA ZONE DE L'UNE DE SES EXTREMITES AU MOINS, COMPORTE TRANVERSALEMENT A SON AXE LONGITUDINAL DEUX ELEMENTS SUCCESSIFS CONSTITUANT DES PAROIS DE LIMITATION QUI FORMENT ENTRE EUX UN SECTEUR SOUS FORME DE PIEGE POUR LES MACROMOLECULES, CARACTERISE EN CE QUE LES ELEMENTS DE LIMITATION SONT DES MEMBRANES EN MATIERE POLYMERE M1, M2, EN CE QUE EN PRESENCE D'UN CHAMP ELECTRIQUE LA MEMBRANE EXTERIEURE EST PERMEABLE A L'EAU, AUX PETITS IONS ET AUX MOLECULES ET IMPERMEABLE AUX MACROMOLECULES A ELUER, ALORS QU'EN PRESENCE D'UN CHAMP ELECTRIQUE LA MEMBRANE INTERIEURE M2 EST PERMEABLE AUX IONS ET AUX MOLECULES ET AUX MACROMOLECULES A ELUER ET EN CE QUE PAR L'ABSENCE D'UN CHAMP ELECTRIQUE LES DEUX MEMBRANES EN MATIERE POLYMERE M1, M2 SONT IMPERMEABLES A L'ENSEMBLE DES IONS, DES MOLECULES, NOTAMMENT A L'EAU ET AUX SOLUTIONS DE TAMPONNAGE.

Description

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L'invention concerne un dispositif en vue de l'électroélution de macromolécules porteuses d'une charge électrique se composant d'un corps parallèlépipédique ou en forme de disque comportant un canal au moins, qui s'étend au moins d'une extrémité à l'autre du corps en présentant une ouver5 ture sur chacune de ses extrémités, qui se situe essentiellement dans le plan principal du corps ou parallèlement à celui-ci qui est, au moins partiellement, ouvert vers le haut et qui, dans la zone de l'une de ses extrémités au moins, comporte transversalement à son axe longitudinal deux éléments successifs

constituant des parois de limitation qui forment entre eux un secteur sous for10 me de piège pour les macromolécules.

L'invention se rappor 4 otamment à un procédé en vue de l'électroélution selon les règles de l'art, de macromolécules biologiques porteuses

d'une charge électrique, à partir de gels d'électrophorèse.

Un dispositif de ce type a été décrit dans la revue "Analytical Biochemistry" 124 299 à 302 ( 1982) Ce dispositif connu présente la forme d'un parallélépipède discolde en verre polyacrylique comportant un certain nombre de canaux d'élution en forme d'U parallèles entre eux, qui s'étendent d'une extrémité du parallélépipède à l'autre L'une des extrémités de chacun de ces canaux est garnie de sachets en gaze de nylon filtrant, hermétiquement 20 étanches sur le côté en contact avec la paroi du canal et remplis d'un gel d'adsorption pour les macromolécules, telles par exemple le DNA, RNA, des

protéines ou des Lipopolysaccharides.

Le problème de l'électroélution se pose dans le cadre du traitement des gels d'électrophorèse qui, traditionnellement, consiste à fractionner les 25 macromolécules La partie du gel d'électrophorèse portant la fraction à récupérer est découpée et placée dans le canal du dispositif d'électroélution Le dispositif est introduit ensuite dans un compartiment d'électrophorèse horizontal, de manière que le champ électrique que l'on peut provoquer dans le compartiment d'électrophorèse s'étale parallèlement au canal d'élution du dispo30 sitif d'électroélution Finalement, le compartiment d'électrophorèse est rempli de produit de tamponnage, de maniere que les parois de séparation placés

entre les canaux parallèles se trouvent entièrement, mais tout juste immergées.

Lors de l'enclenchement du champ électrique, les macromolécules biologiques, porteuses d'une charge électrique quittent le gel d'électrophorèse plongé dans z 2553295 le produit de tamponnage et sont recueillies dans le gel d'adsorption placé en amont du sachet en nylon A la fin du processus d'élution, le gel d'élution est extrait du sachet en nylon pour être élué du gel d'adsorption sur une colonne en utilisant la gélose au vert malachite traditionnel en liaison, dans les règles de l'art, avec une solution de perchlorate de sodium. Le processus complet de ce procédé qui, au niveau actuel de la technique, est le meilleur connu à ce jour, s'étend par fraction de gel d'électrophorèse sur environ 40 minutes et provoque, compte tenu des phases d'adsorption et d'élution répétéesdes pertes importantes en substance finale Compte non 10 tenu des pertes bactérielles, il apparaft que ce procédé d'élution conduit à des pertes approximatives en substance finale d'au moins 25 %, ce qui correspond à un rendement maximum d'environ 75 % seulementrapporté au poids des macromolécules contenues dans la partie de l'électrophorèse traitée Par ailleurs, les coûlts du gel d'adsorption intermédiaire sont considérables d'autant 15 plus que dans le commerce 25 ml de gelose au vert malachite sont facturés au

prix d'environ 1100 FF.

Compte tenu du niveau technique actuellement connu, il incombe à l'invention de créer un dispositif en vue de l'électroélution de macromolécules porteuses d'une charge électrique, notamment de macromolécules biologiques 20 qui permette une électroélution des macromolécules rapide, peu onéreuse et sans pertes, notamment à partir de gels d'électrophorèse Dans le cadre du problème ainsi posé, tout comme dans le cadre de la présente invention, en

général, la notion "élution ou électroélution" couvre également "l'élution" des macromolécules à partir de phases liquides sous l'effet d'un champ électrique, 25 notamment les processus de concentration de certaines solutions, de déminéralisation ou d'inversion de tamponnage.

Le problème ainsi posé est résolu par un dispositif d'électroélution qui comporte un piège/pour les macromolécules finale slimité, c'est-à-dire constitué, par deux membranes en matière polymère Rapporté à l'axe longitu30 dinal du canal d'élution, l'une de ces deux membranes, c'est-àdire la membrane extérieure, est perméable sous l'effet du champ électrique aux petits ions et aux molécules, notamment à l'eau et au produit de tarnponnage, mais imperméable aux macromolécules à éluer Par contre, la membrane intérieure, vue dans le même sens, est perméable sous l'effet du champ électrique à 35 tous les ions et à toutes les molécules, notamment aux macromolécules à

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éluer Dès la suppression du champ électrique, ce sont les deux membranes qui deviennent imperméables à tous les ions et à toutes les molécules quelle que soit leur grosseur, c'est-à-dire que ces membranes sont ainsi pratiquement imperméables à l'eau A partir du moment o le fluide d'électroélution atteint la hauteur voulue et après avoir enclenché le champ électrique, les macromolécules sont extraites de la fraction d'électrophorèse placée en amont et dirigées vers le champ électrique et a fortiori sur le pôle positif en traversant la membrane intérieure pour se fixer, c'est-à-dire s'accumuler donc se concentrer, sur la face intérieure de la membrane extérieure, alors que les 10 ions du produit de tamponnage traversent cette membrane pour pénétrer dans

le compartiment d'électrophorèse.

Dans le compartiment d'électrophor>se, le dispositif défini par l'invention est mis en état de fonctionnement de la même manière que le dispositif connu commenté ci-dessus A la fin du processus d'élution, la polarité 15 du champ électrique est inversée pendant une courte durée variant de préférence entre 10 et 15 secondes, de manière que les macromolécules accumulées

sur la paroi intérieure de la membrane extérieure, voire les macromolécules partiellement adsorbées, sont décollées de la paroi de la membrane et retombent dans le compartiment du piège.

Avec ce dispositifl'électroélution d'une fraction (pièce) d'électrophorèse peut s'effectuer en moins de 5 minutes Le rendement en macromolécules élevées est de 90 % au moins et peut atteindre pratiquement 100 % Ce taux peut être atteint par le fait que la membrane intérieure est imperméable à l'eau et de plus imperméable aux bactéries, c'est-à-dire une membrane qui 25 ne laisse passer dans le piège aucune bactérie en provenance du canal ou du compartiment d' élution Dans le cas o le piège aura été préalablement et soigneusement stérilisé, l'on évite la destruction des macromolécules par les bactéries, destruction qui dans tous les dispositifs connus peut prendre une

ampleur considérable.

Les membranes les plus diverses possédant les qualités requises précisées ci-dessus sont disponibles dans le commerce De préférence, l'on utilisera des membranes polymères réalisées à base de polymères mouillables par l'eau et par les solutions tampon utilisées, telles que la cellulose, les dérivés de la cellulose, les polyamides, les polyimides et les polysulfones Pour

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les membranes extérieures, l'on utilisera de préférence des acétates de cellulose, alors que pour les membranes intérieures l'on utilisera la cellulose régénérée De telles membranes sont proposées par exemple par la demanderesse sous la référence RAB ou RCB pour la membrane extérieure et sous la dénomination PSB pour la membrane intérieure Par ailleurs, un grand choix de membranes cellulosiques utilisées dans le cadre de la présente invention est disponible chez de nombreux autres fabricants Pour ce qui concerne la membrane intérieure, l'on utilisera une membrane dont la grosseur moyenne des pores se situe dans une plage * 0, 2 pm et notamment entre 0, 05 et 0, 2 pum, 10 alors que la membrane extérieure devra être imperméable aux macromolécules d'un poids moléculaire supérieur à environ 1000 Il va de soi qu'il s'agit là de

valeurs purement indicatives que l'utilisateur devra moduler en fonction du problème spécifique qu'il aura à résoudre.

Selon un exemple de réalisation de l'invention, les pièges à macro15 molécules sont constitués chacun par une membrane intérieure et une membrane extérieure, placée chacune sur une extrémité du canal d'élution, qui est ouvert sur toute sa longueur et qui constitue ainsi entre les deux membranes intérieures un compartiment d' élution séparé Cette disposition permet de travailler dans le compartiment d'élution avec une solution tampon qui diffère de la solution

utilisée dans le compartiment d'électrophorèse dans lequel fonctionne le dispositif défini par l'invention On a ainsi lapossibilité de déminéraliser ou d'inverser le tamponnage de la solution macromoléculaire.

Les membranes placées dans le corps du dispositif sont remplaçables.

Ce remplacement peut se faire par enfichage ou par un glissement de haut en 25 bas dans des rainures de guidage ou des évidements pratiqués dans le corps du dispositif Pour ce qui concerne les membranes intérieures, il s'est avéré qu'il était particulierement facile, pratique et d'une parfaite fiabilité d'utiliser une membrane intérieure, montée sur un cadre gonflable Il importe toutefois que ce cadre, à l'état sec et non gonflé, puisse être glissé en position ajustée 30 avec précision, dans un guidage en forme d'U présentant l'ouverture vers le

haut Après le remplissage du compartiment d'élution avec du fluide d'élution, c'est-à-dire après la mise en place du dispositif dans le compartiment d'électrophorèse horizontal, le fluide d'élution noye le cadre et provoque son gonflement, ce qui fait que la membrane intérieure s'applique étroitement, comme 35 un filtre, contre les parois du canal.

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La membrane extérieure, qui peut également être maintenue dans un cadre, s'applique avantageusement et de l'extérieur contre la paroi de séparation qui limite le piège vers l'extérieur Dans cette paroi pleine se trouve une perforation centrale qui offre le passage aux flux des ions et qui est obturée 5 par une membrane Le cadre tend la membrane qui s'applique ainsi très étroitement contre la paroi de séparation, voire contre la perforation Le cadre se trouve lui-même poussé vers l'intérieur, vu dans le sens axial, soit par une vis de serrage, soit par un ressort à pression De plus, l'étanchéité de la membrane extérieure contre la paroi extérieure peut être améliorée par une 10 ou plusieurs bagues ou arêtes d'étanchéité Ainsi, l'on réalise, dans le cadre et dans le manchon de la vis de serrage, un canal à ouverture progressive qui s'ouvre vers l'extérieur sous une forme conique, en vue d'éviter la formation

de bulles de gaz.

Le corps du dispositif défini par l'invention est réalisé de préférence 15 à l'aide d'une matière synthétique inerte, notamment à l'aide de polycarbonate ou d'un verre acrylique Le matériau synthétique sera de préférence souple et

pliable sans dommage.

D'autres caractéristiques et avantages de cette invention ressortiront de la description faite ci-après en référence aux dessins annexés qui en

illustrent divers exemples de réalisation dépourvus de tout caractère limitatif.

Sur ces dessins: la Figure 1 est une vue de dessus d'un exemple de réalisation du dispositif d'élution sans les membranes; la Figure 2 est une vue selon la ligne II-II de la Figure 1 la Figure 3 est une vue schématique relative au fonctionnement du dispositif des Figures 1 et 2; la Figure 4 est une vue en plan partielle d'un deuxième exemple de réalisation du dispositif d'élution et,

la Figure 5 est une vue en coupe axiale du dispositif défini par 30 l'invention.

La Figure 1 est une vue de dessus d'un exemple de réalisation du dispositif d'élution défini par l'invention, c'est-à-dire du corps 1 de ce dispositif La Figure 2 représente une coupe axiale de l'exemple de réalisation de la Figure 1 qui fait apparaître la membrane extérieure M 1, ainsi que la mem35 brane intérieure sur le côté gauche de la Figure Le corps 1 se compose d'un

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polycarbonate transparent La membrane MI est une membrane en acétate de cellulose imperméable aux molécules, dont le poids moléculaire est supérieur à 1000 et ce même en présence d'un champ électrique La membrane intérieure M 2 est une membrane en cellulose traditionnelle avec une grosseur des pores de 0, 2 Hum Le compartiment défini et limité par les membranes M 1 et M 2 constitue le piège pour les macromolécules à éluer Dans le sens axial et vers l'extérieur, le piège 2 est limité par une paroi de séparation 3 qui est formée d'une seule pièce dans le corps 1 La paroi de séparation 3 comporte une ouverture 4 relativement importante qui assure la liaison libre entre le piège 2 et l'environnement Cette ouverture donne dans un évidement ou pré-compartiment qui est découpé sur sa partie supérieure et qui comporte une ouverture sous forme de perforation dirigée dans le sens axial vers l'extrémité frontale du corps 1 Cette perforation est dotée d'un taraudage 6 Pendant le fonctionnement de l'appareil, ce pré-compartiment 5 est, de préférence, rempli d'air A cet 15 effet, le manchon tendeur, notamment son filetage doit être réalisé de manière qu'après son vissage dans le taraudage 6, il assure une étanchéité à leau parfaite vers l'extérieur, c'est-à-dire vers le précompartiment ou compartiment avancé 5 Le manchon de serrage 7 loge, dans le sens axial, un cadre tendeur 8 qui, sur les parois latérales 9 et 10 du compartiment avancé 5, est maintenu 20 contre tout mouvement de rotation Le cadre tendeur 8 porte sur son pourtour une arete d'étanchéité dont le diamètre libre est légèrement supérieur au diamètre de l'ouverture 4 Si l'on visse le manchon tendeur 7 portant le cadre tendeur 8 dans le corps 1, le cadre tendeur 8 se dirige en direction de la paroi de séparation 3, ce qui a pour effet d'enserrer fixement la membrane MI engagée 25 par le haut, qui assure ainsi l'étanchéité de l'ouverture 4 entre le cadre tendeur

8 et la paroi de séparation 3 De cette manière et sous l'effet de l'arête d'étanchéité 21, la membrane M 1 fait fonction d'élément d'étanchéité.

Une ouverture 12 pratiquée dans le cadre tendeur 8 et alignée sur l'ouverture 4, assure le libre passage du flux à travers la membrane Mi L'ou30 verture 12 dans le cadre tendeur et l'ouverture 21 dans le manchon tendeur/forment un canal cylindrique (voir Figure 2) ou un canal conique s'élargissant vers l'extérieur (voir Figure 5) évitant ainsi l'accrochage de bulles gazeuses en amont de la membrane Ml Dans le taraudage 6, l'on visse le manchon tendeur 7 fileté dans lequel on introduit par enfichage et de manière télescopique le manchon 35 tendeur 8 qui, sur les parois latérales 9, 10, du compartiment avancé, est

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maintenu contre tout mouvement de rotation Le vissage du manchon tendeur 7 provoque le déplacement par forcement du cadre tendeur 8 en direction de la paroi de séparation 3 Ainsi, la membrane extérieure M 1, introduite dans le compartiment avancé 5 par le haut, se trouve maintenue fixement et assure l'étanchéité entre le cadre tendeur 8 et la paroi de séparation 3 Cette étanchéité peut être améliorée à l'aide de joints d'étanchéité 11 supplémentaires. Une ouverture 12 pratiquée dans le cadre tendeur 8 et alignée sur l'ouverture 4 assure le libre passage de flux à travers la membrane Ml En évitant un écoulement d'eau dans le compartiment avancé 5, on peut contrô 181 er d'une ma10 nière optimale l'étanchéité entre le piège 2 et le compartiment avancé 5 tout

en évitant la formation de voies de courant.

Dans le sens radial et vers l'intérieur, la limite du piège 2 est

constituée par une rainure en forme d'U, 13 présentant l'ouverture vers le haut dans laquelle s'engage la membrane intérieure Cette rainure en forme d'U est 15 pratiquée tant dans les parois latérales 14, 15, que dans le fond 16 du canal 17.

La membrane 12 est dotée d'une zone marginale constituant un cadre qui à l'état sec s'engage avec précision dans la rainure 13 Sous l'effet du fluide d'élution dirigé dans le canal 17, le cadre de la membrane M 2 gonfle

dans la rainure 13 et assure ainsi une étanchéité absolue de la membrane.

Les deux membranes intérieures MZ limitent un secteur déterminé du canal 17 Ce secteur constitue le compartiment d'élution 18 D'une part, ce compartiment d'élution 18 est relié électriquement au travers des membranes Ml, M 2 et les ouvertures 4 et 12 à l'électrolyte extérieur du compartiment d'électrophorèse, alors que, d'autre part, ce môme compartiment 18 de l'en25 vironnement est isolé dans les domaines hydrodynamique et chimique de manière que le compartiment d'élution 18 puisse être rempli avec l'électrolyte ou le produit de tamponnage qui soit d'une composition entièrement différente

de l'électrolyte utilisé dans le compartiment d'électrophorèse.

Pour le fonctionnement, la pièce à éluer, qui contient les macro30 molécules, est placée dans le compartiment d'élution 18 du dispositif d'élution.

Les deux pièges 2 et le compartiment d'élution 18 sont remplis d'un produit de tamponnage fortement dilué oud'eau distillée, de manière que le niveau 19 (Figure 3) du fluide ne se trouve pas au-dessous de l'arête supérieure 20 du compartiment 18 du corps 1 Le dispositif est placé ensuite dans un compar35 timent d'électrophorèse horizontal qui est alors rempli avec la solution de

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tamponnage, de manière que le niveau supérieur de cette solution de tamponnage dans le compartiment d'électrophorèse atteigne au moins le niveau supérieur 19 du compartiment d'élution A cet effet, le degré de concentration de

la solution de tamponnage dans le compartiment d'électrophorèse est nettement 5 plus élevé, c'est-à-dire de 10 à 100 fois plus élevé que le degré de concentration de la solution de tamponnage dans le fluide d'élution.

Le dispositif d'élution est ainsi placé dans le compartiment d'électrophorèse, de manière que le champ électrique provoqué dans ce même compartiment d' électrophorèse soit au moins approximativement parallèle au canal 10 10, ce qui apparaft sur la Figure 3 Sur cette Figure 3, les signes "moins" encerclés (grand cercle) représentent les macromolécules porteuses d'une charge négative, alors que les signes "plus" placés dans un petit cercle représentent les macromolécules porteuses d'une charge positive Les petits cercles enrobant des signes "plus" et des signes "moins" représentent les ions de tam15 ponnage En présence du champ électrique dont la polarité apparaît dans la Figure 3, les ions se déplacent dans le sens indiqué par des pointes de flèches, c'est-à-dire que les ions de tamponnage positifs se dirigent vers le pôle négatif, alors que les ions de tamponnage négatifs et les macromolécules porteuses d'une charge négative se dirigent vers le pile positif du champ électrique Pen20 dant ce processus, toutes les particules à charge négative traversent la membrane M 2 et pénètrent dans le piège 2 Alors que les ions de tamponnage, qui sous l'action du champ électrique portent une charge négative, traversent également la membrane extérieure M 1 et aboutissent dans le produit de tamponnage du compartiment d'électrophorèse, les macromolécules par contre, porteuses 25 d'une charge électrique, sont retenues sur la face intérieure, vu dans le sens

axial de la membrane extérieure M 1.

De cette manière, les macromolécules porteuses d'une charge électrique s'accumulent progressivement sur la membrane M 1 A l'issue du processus d'élution et du transfert de l'ensemble des macromolécules porteuses 30 d'une charge électrique du compartiment d'élution 18 dans le piège 2, la polarité du champ est inversée pendant une durée d'environ 10 à 15 secondes, ce qui provoque le décollage des macromolécules accumulées sur la membrane extérieure M 1 et leur retour dans la solution du piège 2 d'oh elles peuvent 8 tre prélevées sans difficultés et à haute concentration à l'aide d'une micropipette. 35 Le rapport du volume de chacun des pièges 2 au compartiment

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d'élution atteint approximativement 1:100 Etant donné que le piège 2 doit être suffisamment large pour assurer le passage de la pipette, la réduction du volume est obtenue, comme on peut le voir sur la Figure 2, en relevant le fond

du piège 2 par rapport au fond du compartiment d'élution 18.

Il est possible par ailleurs de réduire également le volume du piège 2 par la mesure préconisée dans les Figures 4 et 5, c'est-à-dire en utilisant un

piège 2 présentant une coupe transversale circulaire se réduisant vers le bas.

Les autres exemples de réalisation du dispositif d'élution représentés dans les Figures 4 et 5 se différencient des exemples schématisés dans les 10 Figures 1 et 2 par le fait que le canal 21, constitué par l'ouverture 12 pratiquée dans le cadre tendeur 8 et la zone intérieure du manchon de serrage, se dirige progressivement entre des parois lisses vers l'extérieur On évite ainsi la formation ou l'accumulation de bulles de gaz à l'intérieur du canal 21, en m 8 me

temps qu'on évite toute modification des effets électriques du courant.

Par ailleurs, la Figure 5 présente un cadre tendeur 8 comportant

une arête d'une bague coupante qui presse étroitement la membrane M 3 contre la face extérieure de la paroi de séparation 3 en y assurant une parfaite étanchéité.

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Claims (10)

REVENDICATIONS

1 Dispositif en vue de l'électroélution de macromolécules porteuses d'une charge électrique se composant d'un corps parallèlépipédique ou en forme de disque comportant un canal au moins, qui s'étend au moins d'une extrémité à l'autre du corps en présentant une ouverture sur chacune de ses extré5 mités, qui se situe essentiellement dans le plan principal du corps ou parallèlement à celui-ci qui est, au moins partiellement, ouvert vers le haut et qui, dans la zone de l'une de ses extrémités au moins, comporte transversalement à son axe longitudinal deux éléments successifs constituant des parois de limitation qui forment entre eux un secteur sous forme de piège pour les macromo10 lécules, caractérisé en ce que les éléments de limitation sont des membranes en matière polymère (M 1, M 2), en ce que en présence d'un champ électrique la membrane extérieure est perméable à l'eau, aux petits ions et aux molécules et imperméable aux macromolécules à éluer, alors qu'en présence d'un champ électrique la membrane intérieure (M 2) est perméable aux ions et aux molécules 15 et a fortiori aux macromolécules à éluer et en ce que par l'absence d'un champ électrique les deux membranes en matière polymère (MI, M 2) sont imperméables à l'ensemble des ions, des molécules, notamment à l'eau et aux solutions de tamponnage.

2 Dispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce que sur les 20 deux extrémités du canal ( 17) se trouvent des pièges ( 2) constitués par des membranes et placés de manière qu'entre les deux membranes intérieures (M 2) opposées l'une à l'autre se trouve un compartiment d'élution ( 18) indépendant.

3 Dispositif selon l'une des revendication 1 ou 2, caractérisé en

ce que les membranes en matière polymère (M 1, M 2) sont mouillables dans 25 l'eau et dans les solutions de tamponnage utilisées.

4 Dispositif selon la revendication 3, caractérisé en ce que les membranes en matière polymère (M 1, M 2) sont essentiellement des membranes en cellulose, en dérivé de cellulose, en polyamide, en polyimide ou en polysulfone 5 Dispositif selon la revendication 4, caractérisé en ce que la membrane extérieure (M 1) est réalisée à base d'acétate de cellulose, alors que

la membrane intérieure (M 2) est réalisée à base de cellulose régénérée.

6 Dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 5,

caractérisé en ce qu'une partie au moins des membranes est remplaçable en il 2553295 la glissant ou en l'enfichant de haut en bas dans des ouvertures ( 5) ou dans

des rainures de guidage ( 13) pratiquées dans le corps ( 1) ou dans le canal ( 17).

7 Dispositif selon la revendication 6, caractérisé en ce que l'une des membranes (M 2) au moins est maintenue dans un cadre qui est gon5 flable dans le fluide d'élution et qui, à l'état sec et non gonflé, peut être enfiché avec une grande précision dans une rainure ( 13) pratiquée dans le plan des

membranes et dans toutes les parois ( 14, 15, 16) du canal.

8 Dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que le piège ( 2) est limité vers l'extérieur par une paroi de 10 séparation ( 3) imperméable qui a été réalisée dans la masse du corps ( 1) et qui

comporte ou une ouverture ( 4) ou une perforation, dont le libre passage de l'extérieur est obturé par la membrane extérieure (M 1) qui sous l'effet d'un cadre ( 8) pré-tendu ou poussé vers l'intérieur dans le sens radialest appliqué étroitement et d'une manière étanche devant cette ouverture ( 4) pratiquée dans la pa15 roi de séparation ( 3).

9 Dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que le piège ( 2) ouvert vers l'extérieur offre un volume situé dans le domaine microlitrique, alors que le volume du compartiment d'élution

( 18) atteint quelques dizaines de millilitres.

10 Dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 9,

caractérisé en ce que le cadre ( 8) est pressé, voire forcé contre la paroi de séparation à l'aide d'un manchon tendeur ( 7) notamment un manchon à vis et en ce qu'un canal ( 21) ménagé conjointement dans le cadre ( 8) et dans le manchon

( 7) s'ouvre progressivement et sous une forme conique vers l'extérieur.

11 Applicationdu dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 destiné à l'électroélution à partir de gels d'électrophorèse, à la

concentration, à la déminéralisation ou à l'inversion du tamponnage de macromolécules biologiques, ainsi qu'à la concentration et au décollage de protéines

porteuses d'une charge positive.