FR2468909A1 - Dispositif d'analyse simultanee - Google Patents
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Abstract
L'invention concerne l'analyse utilisant un support solide d'accrochage destiné à capter successivement une quantité d'un premier réactif tel qu'un liquide biologique contenant la substance à doser, puis une quantité d'un deuxième réactif contenant une protéine sur laquelle est fixé un indicateur biologique. Selon l'invention, le dispositif est remarquable en ce qu'il est essentiellement constitué d'un rotor d'analyse comportant d'une part une pluralité de cellules périphériques contenant chacune une bille d'accrochage, et d'autre part des moyens permettant l'acheminement d'un liquide de lavage vers chaque cellule, chacune desdites cellules étant munies d'un orifice périphérique d'éjection de liquide, et présentant une portion supérieure recevant ledit réactif et dont le fond permet de remonter la bille sensiblement au niveau dudit orifice périphérique lorsque le dispositif est soumis à une centrifugation de façon à pouvoir rincer énergiquement ladite bille au moyen du liquide de lavage admis dans ladite cellule. Application à l'analyse par immuno-enzymes et à la radioimmunologie.
Description
Dispositif d'analyse simultanée
L'invention concerne un dispositif d'analyse, du type de ceux utilisant un support solide d'accrochage destiné à capter successivement une quantité d'un premier réactif tel qu'un liquide biologique (sérum ou plasma par exemple) contenant la substance à doser, puis une quantité d'un deuxième réactif contenant une protéine sur laquelle est fixé un indicateur biologique (par exemple un enzyme, ou un radio-isotope pour la radio-immunologie).
L'invention concerne un dispositif d'analyse, du type de ceux utilisant un support solide d'accrochage destiné à capter successivement une quantité d'un premier réactif tel qu'un liquide biologique (sérum ou plasma par exemple) contenant la substance à doser, puis une quantité d'un deuxième réactif contenant une protéine sur laquelle est fixé un indicateur biologique (par exemple un enzyme, ou un radio-isotope pour la radio-immunologie).
Les techniques actuelles utilisent un support solide d'accrochage qui est usuellement une bille sphérique en polystyrène recouvert d'une protéine ayant des propriétés de type anti-corps (par exemple un polypeptide provenant d'un animal vacciné). Ce support est disposé dans un récipient de type tube à essais dans lequel est alors admise une quantité d'un premier réactif, et, après un temps d'incubation, il faut procéder à un-lavage énergique à l'eau de la bille pour enlever 11 excès de réactif, lequel lavage est opéré manuellement ainsi que l'évacuation du liquide en retournant le tube dont l'extrémité ouverte présente des pattes évitant l'éjection de la bille ; cette opération doit être renouvelée avec le deuxième réactif dont l'excès est de nouveau évacué par lavage, après quoi le tube est transporté vers un poste d'analyse proprement dite, par exemple pour une analyse photocolorimétrique en injectant un réactif coloré.
Autant le principe de la bille d'accrochage captant successivement la quantité prévue de réactif est simple et performant, autant la technique utilisée donne peu de satisfactions : en effet, les opérations de lavage effectuées manuellement sont peu fiables en raison de l'hétérogénéité des lavages et des conditions de température, et sont impropres à une analyse par tests groupés avec des dosages différents en raison des nombreuses manipulations qui sont nécessaires et des risques d'erreurs inévitables.
La présente invention a pour objet de proposer un dispositif plus fiable, de conception simple, et parfaitement adapté à une analyse simultanée avec plusieurs dosages, avec le minimum de manipulations.
I1 s'agit plus particulièrement d'un dispositif d'analyse utilisant un support solide d'accrochage destiné à capter successivement une quantité d'un premier réactif tel qu'un liquide biologique contenant la substance à doser, puis une quantité d'un deuxième réactif contenant une protéine sur laquelle est fixé un indicateur biologique, caractérisé par le fait qu'il est essentiellement constitué d'un rotor d'analyse comportant d'une part une pluralité de cellules périphériques contenant chacune une bille d'accrochage, et d'autre part des moyens permettant l'acheminement d'un liquide de lavage vers chaque cellule, chacune desdites cellules étant munie d'un orifice périphérique d'éjection de liquide, et présentant une portion supérieure munie d'un orifice d'admission d'un réactif et une portion inférieure recevant ledit réactif et dont le fond permet de remonter la bille sensiblement au niveau dudit orifice périphérique lorsque le dispositif est soumis à une centrifugation de façon à pouvoir rincer énergiquement ladite bille au moyen du liquide de lavage admis dans ladite cellule.
Le dispositif d'analyse de l'invention peut présenter en outre l'une au moins des caractéristiques suivantes
- les moyens permettant l'acheminement d'un liquide de lavage sont essentiellement constitués par un orifice central d'admission duquel partent des conduits radiaux reliant ledit orifice central à chacune des cellules périphériques ; de préférence, les conduits radiaux sont dans un plan essentiellement perpendiculaire à l'axe de rotation du dispositif, et débouchent dans chaque cellule sensiblement au même niveau que l'orifice périphérique d'éjection de liquide de ladite cellule,
- les orifices d'admission d'un réactif sont équidistants de l'axe du rotor,
- le fond de chaque cellule présente une allure générale inclinée déterminée de telle façon que d'une part la portion inférieure de la cellule présente un volume suffisant pour recevoir la bille et la quantité de réactif la recouvrant, et que d'autre part ladite bille soit guidée sensiblement jusqu'au niveau de l'orifice périphérique de ladite cellule lors de la centrifugation ; de préférence, les parois définissant la portion inférieure de chaque cellule permettent une analyse photométrique simultanée,
- chaque cellule s'affine vers son bord périphérique extérieur de façon à favoriser le positionnement de la bille au niveau de l'orifice périphérique de ladite cellule,
- le rotor est obtenu par superposition de deux portions coaxiales dont les bords périphériques en contact définissent directement les orifices périphériques des cellules.
- les moyens permettant l'acheminement d'un liquide de lavage sont essentiellement constitués par un orifice central d'admission duquel partent des conduits radiaux reliant ledit orifice central à chacune des cellules périphériques ; de préférence, les conduits radiaux sont dans un plan essentiellement perpendiculaire à l'axe de rotation du dispositif, et débouchent dans chaque cellule sensiblement au même niveau que l'orifice périphérique d'éjection de liquide de ladite cellule,
- les orifices d'admission d'un réactif sont équidistants de l'axe du rotor,
- le fond de chaque cellule présente une allure générale inclinée déterminée de telle façon que d'une part la portion inférieure de la cellule présente un volume suffisant pour recevoir la bille et la quantité de réactif la recouvrant, et que d'autre part ladite bille soit guidée sensiblement jusqu'au niveau de l'orifice périphérique de ladite cellule lors de la centrifugation ; de préférence, les parois définissant la portion inférieure de chaque cellule permettent une analyse photométrique simultanée,
- chaque cellule s'affine vers son bord périphérique extérieur de façon à favoriser le positionnement de la bille au niveau de l'orifice périphérique de ladite cellule,
- le rotor est obtenu par superposition de deux portions coaxiales dont les bords périphériques en contact définissent directement les orifices périphériques des cellules.
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaitront plus clairement à la lumière de la description qui va suivre, donnée à titre illustratif mais nullement limitatif, en référence aux figures du dessin annexé, où
- la figure 1 est une vue partielle en perspective illustrant un dispositif d'analyse conforme à I'invention,
- la figure 2 est une coupe axiale partielle montrant l'obtention du dispositif de la figure 1,
- la figure 3 est une vue de dessus partielle du même dispositif,
- les figures 4A, 4B, 4C illustrent le fonctionnement du dispositif.
- la figure 1 est une vue partielle en perspective illustrant un dispositif d'analyse conforme à I'invention,
- la figure 2 est une coupe axiale partielle montrant l'obtention du dispositif de la figure 1,
- la figure 3 est une vue de dessus partielle du même dispositif,
- les figures 4A, 4B, 4C illustrent le fonctionnement du dispositif.
Figures 1 à 3, le dispositif d'analyse illustré, conforme à l'invention, est essentiellement constitué d'un rotor 1 comportant d'une part une pluralité de cellules périphériques 2 contenant chacune une bille d'accrochage 3 classique (en polystyrène recouvert d'une protéine ayant des propriétés de type anti-corps), et d'autre part des moyens permettant l'acheminement d'un liquide de lavage vers chaque cellule.Plusieurs moyens sont possibles pour acheminer un liquide de lavage : on a illustré ici une possibilité particulièrement simple et efficace en prévoyant un orifice central d'admission 4 duquel partent des conduits radiaux 5 reliant ledit orifice central à chaque cellule périphérique 2, lesdits conduits étant dans un plan essentiellement perpendiculaire à l'axe de rotation 6 du dispositif on pourrait aussi bien prévoir une gouttière annulaire à la place de l'orifice central 4, de laquelle partiraient des conduits de raccordement radiaux vers chaque cellule périphérique.Il est à noter que les conduits radiaux 5 sont ici définis par deux portions complémentaires formées sur chacune des deux parties 1A, 1B formant le rotor 1 (voir figure 2), mais que tout autre type de conduit serait envisageable, tel par exemple qu'un bord plat sur une partie du rotor (donc sa face interne) et une rainure sur l'autre partie
Chaque cellule 2 est par ailleurs munie d'un orifice périphérique 7 d'éjection de liquide, ici défini directement par superposition des bords périphériques des deux portions coaxiales 1A, 1B formant le rotor 1, et présente une portion supérieure munie d'un orifice 8 d'admission et dont le fond 9 permet de remonter par centrifugation la bille 3 sensiblement au niveau dudit orifice périphérique 7 lorsque le dispositif est mis en rotation (cette dernière caractéristique tout à fait fondamentale sera expliquée plus loin au regard des figures 4A, 4B, 4C).
Chaque cellule 2 est par ailleurs munie d'un orifice périphérique 7 d'éjection de liquide, ici défini directement par superposition des bords périphériques des deux portions coaxiales 1A, 1B formant le rotor 1, et présente une portion supérieure munie d'un orifice 8 d'admission et dont le fond 9 permet de remonter par centrifugation la bille 3 sensiblement au niveau dudit orifice périphérique 7 lorsque le dispositif est mis en rotation (cette dernière caractéristique tout à fait fondamentale sera expliquée plus loin au regard des figures 4A, 4B, 4C).
L'homme de l'art choisira tout moyen-pour la liaison et le positionnement respectif des deux portions 1A, 1B formant le rotor 1 on a illustré ici à titre d'exemple l'emploi d'une rainure annulaire 10 et de tétons de centrage 11, mais de nombreusns autres possibilités sont envisageables.
Les caractéristiques du dispositif concernant en particulier la forme des cellules vont être décrites-en même temps que le fonctionnement dudit dispositif, afin de mieux percevoir la fonction qu'elles remplissent
- figure 4A, le rotor 1 dont chaque cellule périphérique 2 est munie de sa bille associée 3 (chaque bille pouvant correspondre à un dosage particulier) est disposé sous un dispositif d'alimentation, ici une pipette 12, de façon à injecter dans chaque cellule par son orifice 8, un volume (de préférence calibré) d'un premier réactif tel que sérum, plasma ou tout autre liquide biologique contenant la substance à doser ; après cette injection, qui peut être obtenue par exemple en faisant successivement tourner le rotor de l'angle correspondant pour placer chaque orifice 8 sous la pipette 12, on laisse reposer pendant le temps d'incubation nécessaire. Il est à noter que le fond 9 de chaque cellule permet un volume suffisant pour recevoir la bille et le réactif sans que le niveau de celuici atteigne les conduits 5.
- figure 4A, le rotor 1 dont chaque cellule périphérique 2 est munie de sa bille associée 3 (chaque bille pouvant correspondre à un dosage particulier) est disposé sous un dispositif d'alimentation, ici une pipette 12, de façon à injecter dans chaque cellule par son orifice 8, un volume (de préférence calibré) d'un premier réactif tel que sérum, plasma ou tout autre liquide biologique contenant la substance à doser ; après cette injection, qui peut être obtenue par exemple en faisant successivement tourner le rotor de l'angle correspondant pour placer chaque orifice 8 sous la pipette 12, on laisse reposer pendant le temps d'incubation nécessaire. Il est à noter que le fond 9 de chaque cellule permet un volume suffisant pour recevoir la bille et le réactif sans que le niveau de celuici atteigne les conduits 5.
- figure 4B, le rotor 1-est mis en rotation par des moyens d'entraînement saillants 13 tout à fait classiques, et on injecte du liquide de lavage par l'orifice central 4 : pour chaque cellule, la centrifugation a pour effet d'éjecter l'excès de réactif par l'orifice périphérique 7, et de déplacer la bille 3 jusqu'au niveau dudit orifice périphérique grâce au fond 9 d'allure générale inclinée.En outre, le liquide de lavage, dont la bonne répartition peut être favorisée par la présence d'une protubérance centrale 14, passe par les conduits radiaux 5, et vient laver énergiquement chaque bille 3 dont la position est tout à fait favorable sous l'effet de la centrifugation, grâce en particulier à la forme de préférence affinée vers la périphérie pour chaque cellule, ledit liquide s'échappant par les orifices périphériques 7 après avoir entouré chaque bille (en la faisant d'ailleurs tourner sur elle-même).
- figure 4C, il s'agit d'une phase facultative de séchage des billes, obtenue en coupant l'admission du liquide de lavage tout en maintenant la centrifugation. Il est à noter que ce séchage était pratiquement impossible à obtenir avec les dispositifs antérieurs, à moins de montages compliqués, alors qu'ici il est obtenu avec une facilité extrême.
Ces opérations sont ensuite réitérées avec le deuxième réactif, qui contient une protéine sur laquelle est fixé un indicateur biologique tel par exemple qu'un enzyme ou un radio-isotope. Alors, une fois le rotor arrêté, les billes de chaque cellule redescendent et sont prêtes à servir pour une analyse simultanée (les parois définissant la portion inférieure des cellules étant prévues pour une telle analyse), analyse directe avec un compteur si l'on utilise des radio-isotopes, ou indirecte si l'on utilise en plus un réactif coloré et éventuellement un réactif de stoppage de réaction.
Le fonctionnement du dispositif qui vient d'entre décrit met en évidence la grande simplicité obtenue, -ainsi que la fiabilité élevée puisque les traitements sont très homogènes, tout en nécessitant peu de manipulations. A titre d'exemple, le dispositif de l'invention permet d'obtenir rapidement et simplement les cinq dosages simultanés requis pour une analyse de thyroide. La souplesse est aussi illustrée par la possibilité parmi d'autres de diviser le rotor en deux zones pour utiliser certaines cellules comme étalons de contrôle, et de prévoir soit des billes identiques, ce qui permet d'effectuer un même test pour plusieurs clients, soit des billes différentes, ce qui permet notamment d'effectuer plusieurs tests pour un même client.
Mentionnons enfin l'avantage considérable que représente le faible encombrement, puisqu'un tel dispositif peut être réalisé jusqu'à des diamètres de l'ordre de 5 cm.
Il va de soi que l'invention n'est nullement limitée aux exemples qui en ont été donnés à titre purement illustratif, mais comprend toute variante reprenant avec des moyens équivalents la définition générale figurant aux revendications.
Claims (9)
1/ Dispositif d'analyse utilisant un support solide d'accrochage destiné à capter successivement une quantité d'un premier réactif tel qu'un liquide biologique contenant la substance à doser, puis une quantité d'un deuxième réactif contenant une protéine sur laquelle est fixé un indicateur biologique, caractérisé par le fait qu'il est essentiellement constitué d'un rotor d'analyse comportant d'une part une pluralité de cellules périphériques contenant chacune une bille d'accrochage, et d'autre part des moyens permettant l'acheminement d'un liquide de lavage vers chaque cellule, chacune desdites cellules étant munie d'un orifice périphérique d'éjection de liquide, et présentant une portion supérieure munie d'un orifice d'admission d'un réactif et une portion inférieure recevånt ledit réactif et dont le fond permet de remonter la bille Sensiblement au niveau dudit oritice périphérique lorsque le dispositif est soumis à une centrifugation de façon à pouvoir rincer énergiquement ladite bille au moyen du liquide de lavage admis dans ladite cellule.
2/ Dispositif d'analyse selon la revendication 1, caractérisé par le fait que les moyens permettant l'acheminement d'un liquide de lavage sont essentiellement constitués par un orifice central d'admission duquel partent des conduits radiaux reliant ledit orifice central à chacune des cellules périphériques.
3/ Dispositif d'analyse selon la revendication 2, caractérisé-par le fait que les conduits radiaux sont dans un plan essentiellement perpendiculaire à l'axe de rotation du dispositif.
4/ Dispositif d'analyse selon l'une des revendications 2 et 3, caractérisé par le fait que les conduits radiaux débouchent dans chaque cellule sensiblement au même niveau que l'orifice périphérique d'éjection de liquide de ladite cellule.
5/ Dispositif d'analyse selon l'une des revendications précédentes, caractérisé par le fait que les orifices d'admission d'un réactif sont équidistants de l'axe du rotor.
6/ Dispositif d'analyse selon l'une des revendications précédentes, caractérisé par le fait que le fond de chaque cellule présente une allure générale inclinée déterminée de telle façon que d'une-part la portion inférieure de la cellule présente un volume suffisant pour recevoir la bille et la quantité de réactif la recouvrant, et que d'autre part ladite bille soit guidée sensiblement jusqu'au niveau de l'orifice périphérique de ladite cellule lors de la centrifugation.
7/ Dispositif d'analyse selon l'une des revendications précédentes, caractérisé par le fait que les parois définissant la portion inférieure de chaque cellule permettent une analyse photométrique simultanée.
8/ Dispositif d'analyse selon l'une des revendications précédentes, caractérisé par le fait que chaque cellule s'affine vers son bord périphérique extérieur de façon à favoriser le positionnement de la bille au niveau de l'orifice périphérique de ladite cellule.
9/ Dispositif d'analyse selon l'une des revendications précédentes, caractérisé par le fait que le rotor est obtenu par superposition de deux portions coaxiales dont les bords périphériques en contact définissent directement les orifices périphériques des cellules.
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