FI95484B

FI95484B - Förvarande för bestämning av metall i provet

Info

Publication number: FI95484B
Application number: FI940225A
Authority: FI
Inventors: Marko Virta; Matti Karp
Original assignee: Marko Virta; Matti Karp
Priority date: 1994-01-17
Filing date: 1994-01-17
Publication date: 1995-10-31
Also published as: FI95484C; FI940225A0; EP0689608A1; WO1995019446A1; FI940225A; US5776681A

Claims

1. Förfarande för bestämning av en metall i ett prov, kännetecknat av att ai) tili cellen överförs en kombinations-DNA-plasmid, som innehäller insektlucife-5 rasgen och vars kopietal underlyder en promotor som är reglerbar med tungmetall, eller a2) tili cellen överförs en kombinations-DNA-plasmid, som innehäller insektluci-ferasgen och vars kopietal har ett konstant värde mellan 1 och 2000/cell och plas-10 miden innehäller som markörprotein protein av ett virus, en prokaryotcell eller en eukaryotcell eller en DNA-sekvens, som kodar en med avseende pä dess biologiska aktivitet väsentlig del, vars exponering underlyder en promotor som kan regleras med tungmetall och kontrollerats med negativ och/eller positiv respons, 15 b) en cell som ingär i kombinations-DNA-plasmiden enligt punkt ai) eller a2) sätts i kontakt med ett prov som innehäller tungmetallen, tili exempel genom inkubation av dem tillsammans, varvid drivande av tungmetallen tili cellen är antigen passivt eller det har en egen mekanism i cellen, 20 c) tungmetallen far päverka cellen som ingär i kombinations-DNA-plasmiden under en lämplig tid, varefter mängden av kombinations-DNA-plasmid eller mängden av protein den kodar bestäms antingen med fysikaliska eller kemiska medel, d) mängden av kombinations-DNA-plasmid eller det protein den kodar jämförs med 25 kemiska eller fysikaliska metoder med en referenstest, i vilken metall inte var närva-rande och/eller farms i en känd mängd i reaktionen, varvid närvaron och/eller mängden av metall kan fastställas.

2. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att i steg ai) kombinations-30 DNA-plasmid innehäller en DNA-sekvens, som kodar ett eller flera utvalda protein av ett virus, en prokaryotcell eller en eukaryotcell eller en med avseende pä dess biologiska aktivitet väsentlig del.

3. Förfarande enligt patentkrav 2, kännetecknat av att DNA-sekvens som kodar 35 proteinet underlyder en reglerbar promotor, som kontrollerats med positiv eller negativ respons och kan regleras i den använda mikrobcellen, och som aktiveras samtidigt med eller i en önskad stund efter promotom som reglerar kopietal av plasmiden aktiverats. 95484

4. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att kopietalet av plasmider enligt steg la) regleras med ett tili kvicksilver eller en organisk förening därav responderande element. 5

5. Förfarande enligt patentkrav 4, kännetecknat av att cellen är Escherichia coli och syntesen av ett protein av kombinations-DNA-plasmid som ingär i bakterien regleras av ett samma eller olikt tili tungmetall responderande element. 10

6. Förfarande enligt nagot av foregäende patentkrav, kännetecknat av att i steg ai) är kombinations-DNA-plasmiden pMV3, som deponerats vid DSM med deponeringsnumret 8893.

7. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att i steg a2) är kombinations-15 DNA-plasmiden pMV 1, som deponerats vid DSM med deponeringsnumret 8708.

8. Förfarande enligt patentkrav 1 eller 7, kännetecknat av att bestämningen jämfors med en referenstest, i vilken kontrollen av en sekundär regleringsenhet förorsakar celler en konstant produktionsniva av markörprotein. 20

9. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att cellen är en gramnegativ eller grampositiv bakterie som hör tili gruppen Enterobacteriaceae eller gruppen Bacillus. 25

10. Förfarande enligt patentkrav 9, kännetecknat av att cellen är Escherichia coli.

11. Förfarande enligt patentkrav 9, kännetecknat av att cellen är Bacillus subtilis.

12. Förfarande enligt nägot av foregäende patentkrav, kännetecknat av att 30 regleringsfaktorer av den promoter som styr produktion av protein medfors tili cellen frän utanför, syntetiseras genom styming av en annan plasmid som frnns inne i cellen eller av cellens genomiska DNA eller de kommer med det prov som skall undersökas. 35

13. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att provet som skall fastställas är i ett flytande, gasformigt eller fast tillständ och provet är av biologiskt eller icke-biologiskt ursprung. <1 · iät äiti· Iita 95484

14. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att celler som ingär i kombinations-DNA-plasmiden är kalltorkade och de rehydreras fore bestämningen med en lämplig buffert, en lösning som skall undersökas eller odlingslösning eller de har inunobiliserats i en fast bärare. 5

15. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att metallen är en tungmetall eller en organisk förening därav och att den cell som används är sensitiv för den tungmetall som skall bestämmas. 10

16. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att luciferin blandas in i reaktionen vid mätning av mängden av uttryck luciferasenzym i bakterien.

17. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att mängden av kombina-tions-DNA-plasmid jämförs genom utnyttjande av en andra plasmid som finns i 15 samma cell i vilken plasmid en gen, som kodar en olik maximiväglängd produce-rande luciferas, underlyder kontrollen av en annan regleringsenhet.

18. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att bestämningen utförs för mjölk, livsmedel eller förpackningsmaterial därav, serum, urin, saliv, sediment, rök- 20 gaser, industriprocessvattnen, avfallsvattnen eller naturvattnen.

19. Plasmid pMVl, som har deponerats i DSM med deponeringsnumret 8708.

20. Plasmid pMV3, som har deponerats i DSM med deponeringsnumret 8893. • · m ·