FI91362B - Stabilointimenetelmä ihmisen leukosyyttien varastoimiseksi ja menetelmä veren punasoluista vapaan koostumuksen valmistamiseksi - Google Patents
Stabilointimenetelmä ihmisen leukosyyttien varastoimiseksi ja menetelmä veren punasoluista vapaan koostumuksen valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI91362B FI91362B FI882944A FI882944A FI91362B FI 91362 B FI91362 B FI 91362B FI 882944 A FI882944 A FI 882944A FI 882944 A FI882944 A FI 882944A FI 91362 B FI91362 B FI 91362B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- storage
- composition
- plasma
- leukocytes
- gelatin
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 21
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 title claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 title claims 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 title description 5
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims abstract description 22
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims abstract description 22
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims abstract description 22
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims abstract description 22
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 21
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 19
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims abstract description 10
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 claims abstract description 7
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 9
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N Lidocaine Chemical compound CCN(CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 229960004194 lidocaine Drugs 0.000 description 3
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- LEBVLXFERQHONN-UHFFFAOYSA-N 1-butyl-N-(2,6-dimethylphenyl)piperidine-2-carboxamide Chemical compound CCCCN1CCCCC1C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C LEBVLXFERQHONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241000581364 Clinitrachus argentatus Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940035674 anesthetics Drugs 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960003150 bupivacaine Drugs 0.000 description 1
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000003193 general anesthetic agent Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 229960002409 mepivacaine Drugs 0.000 description 1
- INWLQCZOYSRPNW-UHFFFAOYSA-N mepivacaine Chemical compound CN1CCCCC1C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C INWLQCZOYSRPNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001624 sedative effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000012536 storage buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/15—Cells of the myeloid line, e.g. granulocytes, basophils, eosinophils, neutrophils, leucocytes, monocytes, macrophages or mast cells; Myeloid precursor cells; Antigen-presenting cells, e.g. dendritic cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Virology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Freezing, Cooling And Drying Of Foods (AREA)
- Packages (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
91362
Stabilointimenetelmä ihmisen leukosyyttien varastoimiseksi ja menetelmä veren punasoluista vapaan koostumuksen valmistamiseksi 5 Tämä keksintö koskee ihmisen leukosyyttien, erikoi sesti granulosyyttien, stabilointia tai säilyttämistä ja liittyy erikoisemmin tällaisten solujen varastointiin jäätymispistettä ylemmissä lämpötiloissa myrkyttömässä, fysiologisesti hyväksyttävässä alustassa, joka sisältää 10 plasmaa ja gelatiinia välttämättöminä aineksina. Sellaisessa alustassa säilytyksen jälkeen soluilla on oleellisesti jäljellä suurin osa niiden alkuperäisiä fysiologisia ominaisuuksia ja ne ovat käyttökelpoisia sellaisten tautien hoidossa, joille on tunnusomaista näiden solujen kva-15 litatiivinen tai kvantitatiivinen puutos.
Vaikka veripankit ovat kehittyneet voimakkaasti ihmisen veren keräyksessä ja sen erottamisessa useisiin eri komponentteihin, kuten punasoluihin, valkosoluihin, mukaan luettuna neutrofiilit, verihiutaleisiin ja seeru-20 miin, komponenttien suurin fysiologinen tai terapeuttinen hyöty voidaan saada aikaan vain, jos niitä voidaan varastoida, kunnes niitä tarvitaan, ja/tai kuljettaa tarvittavaan paikkaan. Tiettyjä komponentteja, kuten punaisia verisoluja ja seerumia voidaan varastoida pitkiä aikoja tie-25 tyissä olosuhteissa tapahtuneen jäädytyksen jälkeen ja sitten saada uudelleen käyttökuntoon. Verihiutaleiden rajattu varastointi on mahdollista, mutta ne menettävät toimintakykynsä enintään viiden vuorokauden varastoinnin jälkeen jäätymispistettä ylemmissä lämpötiloissa; ja veri-30 hiutaleiden varastointi jäädyttämällä, vaikkakin se on mahdollista (Kotelba-Witkowska et ai., Transfusion, osa 22, 121 (1982). on kallis ja vähän käytetty menetelmä.
Neutrofiilit toisaalta agglutinoituvat tai muodostavat rykelmiä jäätymispistettä ylemmissä lämpötiloissa niinkin 35 lyhyen kuin 48 tunnin varastoinnin jälkeen ja ne on näin 2 käytettävä kahden vuorokauden sisällä valmistuksesta; neu-trofiilien varastointi jäädyttämällä ei ole onnistunut.
Tullis, Blood, voi. 6, 772-773 (1951) on ehdottanut isotonisen puskurin, joka sisältää gelatiinia yhdessä 5 EDTA:n, askorbiinihapon, natriumasetaatin ja fenolipuna-indikaattorin kanssa, käyttöä leukosyyttien varastointi-alustaksi. Crowley et ai., Transfusion, voi. 14, 574-580 (1974) kuvasivat leukosyyttirikkaan plasman dekantoimisen seoksesta, jossa kokoveri oli otettu puskuriin, joka si-10 sälsi 0,4 % gelatiinia laskettuna kokoveri-puskurikoostu-muksesta, ja sen varastoimista 4 °C:ssa eri lisäaineiden kanssa tai näitä ilman, mutta granulosyyttien toimintakyky väheni merkittävästi viikonvarastoinnin jälkeen.
Contreras et ai., Cryobiology, voi. 17, 243-251 15 (1980) kuvasivat granulosyyttien varastointia erilaisissa plasmaa sisältävissä varastointialustoissa 4 °C:ssa, mutta epätyydyttävä toimintakyvyn väheneminen ilmeni 4 vuorokauden jälkeen. Contreras et ai., Transfusion, voi. 18, 46-53 (1978) kuvasivat granulosyyttien varastointia alustoissa, 20 jotka sisälsivät joko plasmaa tai happomodifioitua gelatiinia 4 °C:ssa tai 22 °C:ssa, jolloin tuloksena oli voimakas solujen häviäminen 3 vuorokauden jälkeen. Price et ai., Transfusion, voi. 25, 238241 (1985) kuvasivat happo-modifioidun nestemäisen gelatiinin käytön punasoluja sedi-25 mentoivana aineena granulosyyttien keräyksessä, mutta granulosyyttien varastointia ei tehty ennen testausta. Sher et ai., Immunology, voi. 31, 337-341 (1976) kuvasivat gelatiinin käyttöä apuna punasolujen sedimentoinnissa granulosyyttien keräyksessä, mutta gelatiini pestiin granulo-30 syyteistä ennen niiden suspendointia inkubaatioalustaan ilman pidempää varastointia.
Nyt on havaittu, että leukosyytit, erityisesti gra-nulosyytit voidaan tehokkaasti stabiloida alle 25 °C:n, edullisesti alle 8 °C:een lämpötiloissa tapahtuvaa pitkä-35 aikaista, ainakin viiden vuorokauden tai jopa seitsemän 91362 3 tai usemman vuorokauden varastointia varten menetelmällä, joka on tämän keksinnön kohteena ja jolle on tunnusomaista, että leukosyytit suspendoidaan gelatiinia ja plasmaa sisältävään myrkyttömään puskuriin, jossa gelatiinin määrä 5 on vähintään 1 paino-% koostumuksen kokonaismäärästä ja pienempi kuin määrä, joka tarvitaan kyseisen koostumuksen hyytymiseksi geeliksi 40 °C:ssa tai tätä korkeammassa lämpötilassa, ja plasman määrä on 25 paino-%:sta 90 paino-%:iin koostumuksen kokonaismäärästä.
10 Edellä kuvattua menetelmää voidaan käyttää myös punasoluista vapaan koostumuksen valmistamiseksi ja siten myös tämä on keksinnön kohteena.
Varastoinnin jälkeen leukosyytit, edullisesti gra-nulosyytit voidaan transfusoida ilman lisäkäsittelyä, 15 paitsi lämmitystä lämpötilaan, joka ei ole 40 °C:tta korkeampi läsnäolevan geelin liuottamiseksi; tai ne voidaan saattaa käyttökuntoon yksinkertaisesti pesemällä pois gelatiini ja plasma puskurilla, joka voi olla sama tai eri kuin varastoinnissa käytetty puskuri, tai poistamalla ge-20 latiinia sisältävä puskuri sentrifugoimalla ja suspendoi-malla leukosyytiyt sen jälkeen haluttuun puskuriin tai alustaan.
Käytetty puskuri voi olla mikä tahansa tavanomainen myrkytön puskuri, jonka pH on halutulla alueella. Puskurin 25 pH voi vaihdella laajalla alueella, pH:sta noin 6,1 pH:hon noin 8,5; edullisesti pH pidetään lähellä neutraalia, esim. noin 6,5:stä noin 7,5:een toimintakyvyn säilyvyyden optimoimiseksi. Parhaiden tulosten saavuttamiseksi plasmaa ja gelatiinia sisältävässä puskurissa olevia granulosyyt-30 tejä ja verihiutaleita tulisi säilyttää alhaisessa lämpötilassa, esim. alle 8 °C:ssa, vaikka niitä voidaan säilyttää korkeammissakin, jopa 25 °C:n lämpötiloissa ainakin 12 tuntia tyydyttävin tuloksin.
Esillä olevan keksinnön toteutuksessa voidaan käyt-35 tää mistä tahansa tavallisesta kaupallisesta lähteestä 4 peräisin olevaa gelatiinia. Gelatiinin määrä voi vaihdella laajalla alueella riippuen osittain halutusta varastointi-ajasta. Niinkin pieni määrä kuin 1,0 paino-% koostumuksen kokonaismäärästä on tehokas lyhyessä varastoinnissa; käy-5 tetylle määrälle ei ole kriittistä ylärajaa, paitsi että sen täytyy olla tarpeeksi pieni koostumuksen säilymiseksi nestemäisenä (so. geeliytymättömänä) korkeintaan 40 °C:n lämpötilassa, jotta gelatiini saadaan poistetuksi varastoinnin jälkeen.
10 Leukosyyttien konsentraatio eli niiden lukumäärä puskurissa voi vaihdella rajoitetulla alueella, 107:stä 109:ään per millilitra, mieluummin 1 x 10*:sta 5 x 10*:aan per millilitra.
Käytetty plasma voi olla normaalia ihmisen plasmaa 15 tai autologista plasmaa.
Puudutusaine, kuten lidokaiini on valinnainen lisäaine, joka auttaa solumäärän pitämistä korkealla tasolla. Muut käyttökelpoiset puudutusaineet sisältävät proka-iinin, mepivakaiinin, bupivakaiinin ja vastaavat.
20 Kokeet ovat osoittaneet, että granulosyytit, jotka on stabiloitu tämän keksinnön mukaisesti ja joita on varastoitu viisi vuorokautta tai jopa seitsemän vuorokautta tai enemmän ja sitten saatettu käyttökuntoon gelatiinin ja plasman 25-kertaisella laimennuksella, suureksi osaksi 25 säilyttävät kaikki halutut fysiologiset ominaisuudet ja ovat olennaisesti vapaita agglutinaatiosta tai rykelmämuo-dostuksesta. Erikoisesti ne ovat kykeneviä syömään ja tappamaan opsonisoituja mikro-organismeja.
Seuraavat spesifiset esimerkit on tarkoitettu ku-30 vaarnaan täydellisemmin esillä olevan keksinnön luonnetta ilman, että ne rajoittavat sen laajuutta.
Kussakin seuraavassa esimerkissä granulosyytit valmistettiin tuoreesta ihmisen verestä, joka oli antikoagu-loitu lisäämällä 15-18 tilavuusprosenttia hapanta ja hy-35 pertonista puskuria, vesiliuosta, joka sisälsi natriumsit- 5 91362 raattia ja sitruunahappoa (0,38 M sitraatin ja sitruunahapon suhteen ja 20 mg/ml glukoosia pH:ssa 4,8) (ACD). Gra-nulosyytit erotettiin dekstraanisedimentaatiolla ja sent-rifugaatiolla, kuten ovat kuvanneet Curnutte et ai., J.
5 Clin. Invest., voi. 53, 1662-1672 (1974). Sitten ne pestiin kalsiumia tai magnesiumia sisältämättömällä Dulbec-co'n fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS) ja poistamatta punasoluja hypotonisella lyysillä.
Granulosyytit suspendoitiin sitten neutraaliin, valo rastointialustana käytettyyn histidiinipuskuriin: 0,1 M
natriumsitraatti, 0,05 M histidiini, 0,1 M glukoosi, 0,05 M natriumpyruvaatti ja 1 μΜ lidokaiini, jonka pH oli säädetty arvoon 7,4: (HCP).
Autologinen ihmisen plasma otettiin samaan HCP-pus-15 kuriin niin, että sekoitettiin 10 ml verta 1,4 ml:aan puskuria ja sentrifugoitiin 10 minuuttia nopeudella 1500 kierrosta minuutissa ja sen jälkeen 10 minuuttia nopeudella 2000 kierrosta minuutissa ja plasmafraktio erotettiin kummankin sentrifugoinnin jälkeen.
20 Sitten valmistettiin seuraavat koostumukset, joissa gelatiinin ja plasman osuudet on ilmaistu painoprosentteina kokonaismäärästä:
Koostumuksen Gelatiini Plasma Lidokaiini 25 numero % % (μΜ) 1 2 44 0,5 2 1 44 0,5 3 0,5 0 0,5 4 00 0,5 30 5 0 44 0 6 0,5 44 0 7 10 0 8 2 0 0 6
Kussakin tapauksessa granulosyyttien konsentraatio oli 2 x 108 per millilitra ja pH oli 7,4 huoneen lämpötilassa.
Viisi näytettä kutakin koostumusta varastoitiin jääkaappiin 4 °C:seen.
5 7 vuorokauden varastoinnin jälkeen 4 °C:ssa kunkin näytteen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan; ne näytteet, jotka olivat geelimäisiä 4 °C:ssa, nesteytettiin lämmittämällä. Näytteet laimennettiin kymmenkertaisesti kalsiumia ja magnesiumia sisältämättömällä Dulbecco'n fosio faattipuskuroidullasuolaliuoksella. Sitten määritettiin granulosyyttitoiminta. Granulosyyttien henkiinjääminen mitattiin solulaskennalla ja ilmaistiin prosentteina ennen varastointia suoritetusta alkuperäisestä solulaskennasta. Elinkyky määritettiin niiden solujen prosentuaalisena osu-15 utena, jotka hylkivät trypaanisinistä suspendoituina 0,4 painoprosenttiseksi suspensioksi PBS-puskuriin ilman kalsiumia ja magnesiumia. Bakteerintappokyky mitattiin S. aureus-soluien suhteen käyttäen olennaisesti samaa menetelmää, jonka ovat kuvanneet Babior et ai., Leukocyte 20 Function, Cline toim., 1-38 (NY 1981).
Tulokset olivat seuraavat (viiden näytteen keskiarvot) :
Koostumuksen Solumäärä % Elinkyky Bakteerin- numero alkuperäisestä % tappokyky % 25 1 109 74 98 2 62 59 95 3 18 13 74 4 31 30 69 5 32 18 99 30 6 22 27 96 7 58 60 57 8 71 73 73 7 91362
Edellä olevien tulosten perusteella on selvää, että solumäärät, elinkyky ja bakteerintappokyky kaikki säilyvät paljon paremmin koostumuksissa, jotka sisältävät gelatiinia ja plasmaa yhdessä, kun taas kaksi tai jopa kaikki 5 kolme toimintaa vähenevät suuresti, kun toinen tai molemmat näistä lisäaineista jätetään pois.
Claims (7)
1. Stabilointimenetelmä verestä saatujen ihmisen leukosyyttien varastoimiseksi ilman jäädytystä, t u n - 5. e t t u siitä, että leukosyytit suspendoidaan gelatiinia ja plasmaa sisältävään myrkyttömään puskuriin, jossa gelatiinin määrä on vähintään 1 paino-% koostumuksen kokonaismäärästä ja pienempi kuin määrä, joka tarvitaan kyseisen koostumuksen hyytymiseksi geeliksi 40 °C:ssa tai tätä 10 korkeammassa lämpötilassa, ja plasman määrä on 25 paino-%:sta 90 paino-%:iin koostumuksen kokonaismäärästä.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että se sisältää lisävaiheena kyseisen suspension varastoimisen ilman jäädytystä alle 15 25 °C:n lämpötilassa vähintään viiden vuorokauden ajan.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että varastointi suoritetaan alle 8 °C:n lämpötilassa.
4. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, 20 tunnettu siitä, että puskurin pH on välillä 6,1 - 8,0, varastointi suoritetaan alle 8 °C:n lämpötilassa ja leukosyyttien määrä suspensiossa on 1 x 107:stä 2 x 108:aan millilitraa kohti.
5. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-4 mukainen 25 menetelmä, tunnettu siitä, että leukosyytit ovat granulosyyttej ä.
6. Menetelmä veren punasoluista vapaan koostumuksen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että suspendoidaan leukosyyttejä gelatiinia ja plasmaa sisältävään myr- 30 kyttömään puskuriin, jossa gelatiinin määrä on vähintään 1 paino-% koostumuksen kokonaismäärästä ja pienempi kuin määrä, joka tarvitaan kyseisen koostumuksen hyytymiseksi geeliksi 40 °C:ssa tai tätä korkeammassa lämpötilassa, ja plasman määrä on 25 paino-%:sta 90 paino-%:iin koostumuk-35 sen kokonaismäärästä. 91362
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että leukosyytit ovat granulosyyt-tejä.
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US67607184A | 1984-11-29 | 1984-11-29 | |
| US67607184 | 1984-11-29 | ||
| US75851485 | 1985-07-24 | ||
| US06/758,514 US4639373A (en) | 1984-11-29 | 1985-07-24 | Stabilization of granulocytes |
| PCT/US1986/002275 WO1988003028A1 (en) | 1984-11-29 | 1986-10-22 | Stabilization of leukocytes |
| US8602275 | 1986-10-22 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI882944A0 FI882944A0 (fi) | 1988-06-20 |
| FI882944A FI882944A (fi) | 1988-06-20 |
| FI91362B true FI91362B (fi) | 1994-03-15 |
| FI91362C FI91362C (fi) | 1994-06-27 |
Family
ID=27101470
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI882944A FI91362C (fi) | 1984-11-29 | 1988-06-20 | Stabilointimenetelmä ihmisen leukosyyttien varastoimiseksi ja menetelmä veren punasoluista vapaan koostumuksen valmistamiseksi |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4639373A (fi) |
| EP (1) | EP0288467B1 (fi) |
| JP (1) | JPH0686384B2 (fi) |
| AT (1) | ATE79758T1 (fi) |
| AU (1) | AU589237B2 (fi) |
| DE (1) | DE3686584T2 (fi) |
| DK (1) | DK338888D0 (fi) |
| FI (1) | FI91362C (fi) |
| NO (1) | NO175517C (fi) |
| WO (1) | WO1988003028A1 (fi) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4639373A (en) * | 1984-11-29 | 1987-01-27 | New England Medical Center Hospitals, Inc. | Stabilization of granulocytes |
| US4936963A (en) * | 1987-05-27 | 1990-06-26 | Abbott Laboratories | Polycationic buffers and method for gel electrophoresis of nucleic acids |
| IT1217938B (it) * | 1988-06-28 | 1990-03-30 | Girolamo Sirchia | Procedimento per la preparazione e la conservazione di concentrati eritrocitari e piastrinici |
| US4923797A (en) * | 1988-11-29 | 1990-05-08 | President & Fellows Of Harvard College | Stabilization of leukocytes |
| US5211960A (en) * | 1988-11-29 | 1993-05-18 | Scripps Clinic And Research Foundation | Stabilization of leukocytes |
| GB8830197D0 (en) * | 1988-12-23 | 1989-02-22 | Univ Dundee | Tissue preservation medium |
| US5459030A (en) * | 1992-03-02 | 1995-10-17 | Steritech, Inc. | Synthetic media compositions for inactivating bacteria and viruses in blood preparations with 8-methoxypsoralen |
| AU4107396A (en) * | 1992-03-02 | 1996-06-06 | Cerus Corporation | Synthetic media for blood components |
| WO1994000567A1 (en) * | 1992-06-25 | 1994-01-06 | David Scheer | Stem cell and lymphocyte storage |
| WO1994003054A1 (en) * | 1992-08-07 | 1994-02-17 | Steritech, Inc. | Methods for inactivating bacteria in blood preparations with 8-methoxypsoralen |
| US6413713B1 (en) * | 1998-10-30 | 2002-07-02 | Hyperbaric Systems | Method for preserving blood platelets |
| US7112576B1 (en) | 1999-12-10 | 2006-09-26 | Regents Of The University Of Minnesota | Compositions and methods for cryopreservation of peripheral blood lymphocytes |
| EP1399018A1 (en) * | 2001-06-26 | 2004-03-24 | Human Biosystems | Preservation of blood platelets at cold temperatures |
| AU2004232350A1 (en) * | 2003-04-23 | 2004-11-04 | Human Biosystems | Improved methods and solutions for storing donor organs |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4390619A (en) * | 1981-09-28 | 1983-06-28 | James Clifford Haight | Leukocyte or platelet storage using ion-exchange resins |
| US4639373A (en) * | 1984-11-29 | 1987-01-27 | New England Medical Center Hospitals, Inc. | Stabilization of granulocytes |
-
1985
- 1985-07-24 US US06/758,514 patent/US4639373A/en not_active Expired - Lifetime
-
1986
- 1986-10-22 JP JP61506071A patent/JPH0686384B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1986-10-22 WO PCT/US1986/002275 patent/WO1988003028A1/en active IP Right Grant
- 1986-10-22 AT AT86907055T patent/ATE79758T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-10-22 EP EP86907055A patent/EP0288467B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-10-22 AU AU66279/86A patent/AU589237B2/en not_active Ceased
- 1986-10-22 DE DE8686907055T patent/DE3686584T2/de not_active Expired - Fee Related
-
1988
- 1988-06-20 FI FI882944A patent/FI91362C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-06-21 NO NO882731A patent/NO175517C/no not_active IP Right Cessation
- 1988-06-21 DK DK338888A patent/DK338888D0/da not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI91362C (fi) | 1994-06-27 |
| JPH01501469A (ja) | 1989-05-25 |
| NO882731L (no) | 1988-08-19 |
| NO175517B (no) | 1994-07-18 |
| US4639373A (en) | 1987-01-27 |
| DE3686584D1 (de) | 1992-10-01 |
| EP0288467A4 (en) | 1990-01-08 |
| DK338888A (da) | 1988-06-21 |
| WO1988003028A1 (en) | 1988-05-05 |
| DE3686584T2 (de) | 1993-03-04 |
| AU589237B2 (en) | 1989-10-05 |
| JPH0686384B2 (ja) | 1994-11-02 |
| ATE79758T1 (de) | 1992-09-15 |
| NO175517C (no) | 1994-10-26 |
| AU6627986A (en) | 1988-05-25 |
| NO882731D0 (no) | 1988-06-21 |
| EP0288467B1 (en) | 1992-08-26 |
| DK338888D0 (da) | 1988-06-21 |
| FI882944A0 (fi) | 1988-06-20 |
| EP0288467A1 (en) | 1988-11-02 |
| FI882944A (fi) | 1988-06-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI91362B (fi) | Stabilointimenetelmä ihmisen leukosyyttien varastoimiseksi ja menetelmä veren punasoluista vapaan koostumuksen valmistamiseksi | |
| CA1254838A (en) | Prolonged storage of red blood cells | |
| EP0108588B1 (en) | Plasma-free medium for platelet storage and its production | |
| JP2000516963A (ja) | 酸素除去・添加剤使用による赤血球長期保存法 | |
| JP4927282B2 (ja) | 血小板の保存のための組成物 | |
| Hak et al. | Toxic effects of DMSO on cultured beating heart cells at temperatures above zero | |
| EP0647267B1 (en) | Stem cell storage | |
| Owens et al. | Cryopreserved platelets have decreased adhesive capacity | |
| Lionetti et al. | Factors affecting the stability of cryogenically preserved granulocytes | |
| US5369001A (en) | Stabilization of leukocytes | |
| Hardeman et al. | Storage of human blood platelets | |
| CA1270446A (en) | Stabilization of leukocytes | |
| Wagner et al. | Red blood cell stabilization reduces the effect of cell density on recovery following cryopreservation | |
| EP3979797A1 (en) | Red blood cell storage solutions, additives, and methods for improving the storage of red blood cells using inorganic pyrophosphates | |
| Weatherbee et al. | The effect of plasma on hydroxyethyl starch-preserved red cells | |
| Lionetti et al. | Improved method for the cryopreservation of human red cells in liquid nitrogen with hydroxyethyl starch | |
| Derrick et al. | Studies of the Metabolic Integrity of Human Red Blood Cells After Cryopreservation: II. Effects of Low‐glycerol‐Rapid‐freeze Preservation on Glycolysis | |
| Mabry et al. | Differential phagocytosis of normal, trypsinized and virus-treated human and rabbit erythrocytes by macrophages in tissue culture | |
| Moore et al. | Post‐Thaw Storage at 4° C of Previously Frozen Red Cells with Retention of 2, 3‐DPG 1 | |
| Hill et al. | Improved functional recovery of human granulocytes after cryopreservation | |
| Korsak et al. | Evaluation of two distinct cryoprotectants for cryopreservation of human red blood cell concentrates | |
| Hardeman | The effect of continuous dialysis on platelet preservation | |
| French et al. | Ultrastructural analysis of preserved dog granulocytes | |
| Dayian et al. | ADP-aggregation in platelets frozen with glycerol | |
| Charles et al. | Advances in Hematology and Oncology Research |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: NEW ENGLAND MEDICAL CENTER HOSPITALS |