NO175517B - Fremgangsmåte for stabilisering av leukocytter, og framstilling av blanding fri for röde blodlegemer - Google Patents

Fremgangsmåte for stabilisering av leukocytter, og framstilling av blanding fri for röde blodlegemer

Info

Publication number
NO175517B
NO175517B NO882731A NO882731A NO175517B NO 175517 B NO175517 B NO 175517B NO 882731 A NO882731 A NO 882731A NO 882731 A NO882731 A NO 882731A NO 175517 B NO175517 B NO 175517B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
cells
storage medium
plasma
gelatin
storage
Prior art date
Application number
NO882731A
Other languages
English (en)
Other versions
NO882731L (no
NO175517C (no
NO882731D0 (no
Inventor
Bernard M Babior
Original Assignee
New England Medical Center Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by New England Medical Center Inc filed Critical New England Medical Center Inc
Publication of NO882731D0 publication Critical patent/NO882731D0/no
Publication of NO882731L publication Critical patent/NO882731L/no
Publication of NO175517B publication Critical patent/NO175517B/no
Publication of NO175517C publication Critical patent/NO175517C/no

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14Blood; Artificial blood
    • A61K35/15Cells of the myeloid line, e.g. granulocytes, basophils, eosinophils, neutrophils, leucocytes, monocytes, macrophages or mast cells; Myeloid precursor cells; Antigen-presenting cells, e.g. dendritic cells
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02Preservation of living parts
    • A01N1/0205Chemical aspects
    • A01N1/021Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • External Artificial Organs (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Freezing, Cooling And Drying Of Foods (AREA)
  • Packages (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

ranulocytter preserveres effektivt under lagring over lange tidsrom uten frysing ved å bruke en ikke-toksisk buffer inneholdende både gelatin og plasma som lagringsmiddel.

Description

Denne oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for lagring av menneske-granulocytter uten frysing, som omfatter oppslemming av cellene i et ikke-giftig lagrings-medium omfattende gelatin og plasma. Etter lagring i et slikt medium viser cellene hovedsaklig det meste av sine opprinnelige fysiologiske egenskaper og er anvendelige ved behandling av sykdommer karakterisert ved en kvalitativ og kvantitativ svikt av disse celler.
Selv om blodbanker har vært utviklet i stor grad for å samle menneskeblod og skille det i sine flere forskjellige bestanddeler som røde celler, hvite celler inneholdende nøytrofiler, blodplater og serum, kan den maksimale fysiologiske eller terapeutiske anvendelse av komponentene bare foretas hvis de kan lagres inntil bruk og/eller transporteres til bruksstedet. Visse bestanddeler så som røde blodceller og serum kan lagres over lange tidsrom etter frysing under bestemte betingelser og deretter rekonstitueres for bruk. Begrenset lagring av blodplater er mulig, men de taper sin evne til å fungere etter maksimalt 5 dagers lagring ved temperaturer over frysepunktet, og frysingen av blodplater for lagring er, selv om det er mulig (Kotelba-Witkowska et al., Transfusion, Vol. 22, 121 ff. (1982), en dyr og lite anvendt teknikk. Nøytrofiler har på den annen side vært gjenstand for agglutinering eller klumping etter lagring ned til 48 timer ved temperaturer over frysepunktet, og har således måttet brukes i løpet av 2 dager fra fremstilling; lagring av nøytrofiler ved frysing har ikke vært vellykket.
Det har vært foreslått i Tullis, Blood, vol.6, 772-773
(1951) å anvende en isotonisk buffer inneholdende gelatin sammen med EDTA, askorbinsyre, natriumacetat og fenolrødt indikator som lagringsmedium for leukocytter. Crowley et al., Transfusion, Vol.14, 574-580 (1974) beskrev dekantering av leukocytt-rikt plasma fra fullstendige blod tatt i buffer inneholdende 0,4% gelatin basert på den totale blod-buffer-blanding og lagret ved 4°C med eller uten tilsetning av forskjellige tilsetningsmidler, men granulocyttenes funksjon avtok markert etter lagring i en uke. Contreras et al., Cryobiology, Vol.17, 243-251 (1980) beskrev lagring av granulocytter i forskjellige plasmaholdige lagringsmedier ved 4°C, men utilfredsstillende reduksjon i funksjonalitet forekom etter 4 dager. Contreras et al., Transfusion, Vol. 18, 46-53
(1978) beskrev lagring av granulocytter i medier som inneholdt enten plasma eller syremodifisert gelatin ved 4°C eller 22°C med utstrakt tap av celler etter 3 dager. Price et al., Transfusion, Vol. 25, 238-241 (1985) beskrev anvendelsen av syremodifisert flytende gelatin som et middel for sedimentering av røde celler i samlingen av granulocytter, men ingen lagring av granulocytter forekom før prøving. Sher et al., Immunology, Vol. 31, 337-341 (1976) beskrev anvendelsen av gelatin som hjelpemiddel for sedimentering av røde celler i samlingen av granulocytter, men gelatinet ble vasket fra granulocyttene før oppslemming av dem i et inkubasjonsmedium uten noen lengre lagring.
Det er nå funnet at granulocytter kan stabileres effektivt for lagring ved temperaturer under 25°C, fortrinnsvis under 8°C over lengre tid på minst 5 dager eller til og med 7 dager eller mer, forutsatt at de er oppslemmet i en hensikts-messig buffer, en som er ikke-giftig og fysiologisk akseptabel, som inneholder gelatin og menneskeplasma oppløst i seg. Etter lagring kan granulocyttene transfuseres uten ytterligere behandling unntatt oppvarming til en ikke høyere temperatur enn 40°C for å få enhver tilstedeværende gel over i væskeform, eller granulocyttene kan rekonstitueres for bruk ved enkelt å vaske ut gelatinet og plasmaet med buffer, som kan være den samme eller forskjellige fra bufferen som brukes for lagring, eller ved å fjerne den gelatinholdige buffer ved sentrifugering etterfulgt av gjenoppslemming av granulocyttene i en ønsket buffer eller medium.
Den anvendte buffer kan være enhver vanlig ikke-toksisk buffer som gir en pH i det ønskede området. Bufferens pH kan variere over et stort område fra ca. pH 6,1 til pH ca. 8,5; fortrinnsvis holdes pH nær nøytralpunktet, for eksempel ca.
6,5 til ca. 7,5 for å preservere funksjonen optimalt. For de beste resultater bør granulocyttene og blodplatene i plasma-og gelatin-holdig buffer lagres ved lav temperatur, for eksempel under 8°C, selv om de kan lagres ved høyere temperaturer opp til 25°C i minst 12 timer med tilfredsstillende resultater.
Gelatin fra enhver av de vanlige kommersielle kilder kan anvendes ved utøvelsen av den foreliggende oppfinnelse. Gelatinmengden kan variere over et stort område, delvis avhengig av den ønskede lengde lagring. Ned til 1,0 vekt% i forhold til totalvekten av hele buffer-plasmablandingen er effektiv for kort lagring; der det er ingen kritisk øvre grense på anvendt mengde, untatt at den må være lav nok slik at blandingen er en væske istedenfor en gel ved en ikke høyere temperatur enn 4 0oC for å lette fjerning av gelatinet etter lagring.
Konsentrasjonen eller tallet på granulocyttene i bufferen kan variere over et begrenset område fra 10<7> til 10<9> pr. ml., fortrinnsvis fra 1 x IO<8> til 5 x IO<8> pr. ml.
Det anvendte plasma kan være normalt menneskeplasma eller autologt plasma. Plasmamengden kan variere fra 25 vekt% av hele blandingen til så meget som 90 vekt%.
Et lokalt anestetikum så som lidocain, er et eventuelt additiv som hjelper til å holde celleantallet på et høyt nivå. Andre lokal anestetika som kan anvendes er procain, mepivacain, bupivacain og lignende.
Forsøk har vist at granulocytter som er blitt lagret i 5 dager eller til og med 7 dager eller mer ifølge foreliggende oppfinnelse, deretter rekonsitituert ved 2 5 gangers fortynning av gelatinet og plasmaet, i stor grad beholder alle de ønskede fysiologiske egenskaper og er hovedsaklig fri for agglutinering eller klumping. Spesielt er de i stand til å fordøye og drepe opsoniserte mikroorganismer.
De følgende spesifike eksempler er ment mer fullstendig å illustrere karakteren til den foreliggende oppfinnelse uten å virke som begrensende på dens omfang.
I hvert av de følgende eksempler ble granulocytt fremstilt fra nytappet menneskeblod som hadde blitt antikoagulert ved tilsetning av 15-18 volum% av en sur eller hypertonisk buffer, en vandig løsning inneholdende natriumsitrat og sitronsyre (0,38 M i sitrat og sitronsyre og 20 mg/ml glykose ved pH 4,8) (ACD). Granulocyttene ble separert ved dextran sedimentasjon og sentrifugering som beskrevet i Curnutte et al., J.Clin.Invest., Vol. 53, pp.1662-1672 (1974). De ble så vasket i Dulbeccos fosfatbufferet saltvann uten kalsium eller magnesium (PBS) og uten å fjerne røde celler ved hypotonisk lysing.
Granulocyttene ble så oppslemmet i den nøytrale histisin-buffer som ble anvendt som lagringsmedium? 0,1 M natriumsitrat, 0,05 M histidin, 0,1 M glukose, 0,05 M natriumpyruvat og 1 fiM lidocain justert til pH 7,4 (HCP) .
Autologt human-plasma ble tatt inn på samme måte som HCP-buffer, idet 10 ml blod ble blandet med 1,4 ml buffer og spunnet i 10 minutter i serie ved 1500 og 2000 opm henholdsvis under seprasjon av plasmafraksjonen etter hver sentrifugering.
De følgende blandinger ble deretter fremstilt idet for-holdende gelatin og plasma er uttrykt som en vektprosendel av det totale:
I hvert tilfelle var konsentrasjonen av granulocytter 2 x IO<8> pr. ml, og pH var 7,4 ved romtemperatur.
Fem prøver av hver av blandingene ble lagret i et kjøle-
skap ved 4°C.
Etter lagring i 7 dager ved 4°C ble hver prøve oppvarmet til romtemperatur; de prøver som var geler ved 4°C ble flytende etter oppvarming. Prøvene ble fortynnet 10 ganger med Dulbeccos fosfatbufferet saltvann uten kalsium og magnesium. Granulocytt funksjonen ble så vurdert. Overlevelse av granulocytter ble målt ved celletelling uttrykt som en prosentdel av begynnelses-celletallet før lagring. Levedyktighet ble bestemt ved prosentdel celler som utelukket tryptofanblått ved oppslemming i 0,4 vekt% i PBS buffer uten kalsium og magnesium. Evne til å drepe bakterier ble målt med hensyn til S. aureus ved å bruke hovedsaklig den samme metode som beskrevet av Babior et al. i Leukocyte Function, Cline ed., pp. 1-38 (NY 1981). *
Resultatene var som følger (gjennomsnitt av fem prøver):
Fra de foregående resultater er det klart at celle-tallene, levedyktigheten og bakteridrepeevnen alle opprett-holdes i meget større grad i blandingene som inneholder gelatin og plasma i kombinasjon, mens to eller selv alle tre funksjoner reduseres sterkt når en eller flere av disse bestanddelene sløyfes.

Claims (7)

1. Fremgangsmåte for lagring av menneske-granulocytter uten frysing, som omfatter oppslemming av cellene i et ikke-giftig lagringsmedium omfattende gelatin og plasma, karakterisert ved at cellene lagres i lagringsmediet ved en temperatur under 25°C og ved en pH på 6,1 til 8,0, idet gelatinmengden er minst 1 vekt% av vekten til de samlede celler og lagringsmediet, og mindre enn den nødvendige mengde for å få lagringsmediet som inneholder cellene til å stivne til en gel ved 40°C og høyere.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at plasma foreligger i en mengde på 25 til 90% av totalvekten til cellene og lagringsmediet.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at den medfører lagring av lagringsmediet i et tidsrom på minst 5 dager.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at lagringen utføres ved en temperatur under 8°C.
5. Fremgangsmåte ved fremstilling av en blanding som er fri for røde blodlegemer, karakterisert ved at menneskegranulocyter oppslemmes fra 10<7> til 10<9> pr. ml i et ikke-giftig lagrings-medium ved pH 6,1 til 8,0 inneholdende gelatin og plasma, hvori gelatinmengden er minst 1 vekt% av vekten til de samlede celler og lagringsmediet, og mindre enn den nødvendige mengde for å få lagringsmediet som inneholder cellene til å stivne til en gel ved 40°C eller høyere.
6. Fremgangsmåte ifølge krav 5, karakterisert ved at plasma utgjør 25 til 90% av totalvekten til cellene og lagringsmediet.
7. Fremgangsmåte ifølge krav 5, karakterisert ved at det oppslemmes fra 1 x IO<8> til 5 x IO<8> menneskeceller pr. ml i lagringsmediet.
NO882731A 1984-11-29 1988-06-21 Fremgangsmåte for stabilisering av leukocytter, og framstilling av blanding fri for röde blodlegemer NO175517C (no)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US67607184A 1984-11-29 1984-11-29
US06/758,514 US4639373A (en) 1984-11-29 1985-07-24 Stabilization of granulocytes
PCT/US1986/002275 WO1988003028A1 (en) 1984-11-29 1986-10-22 Stabilization of leukocytes

Publications (4)

Publication Number Publication Date
NO882731D0 NO882731D0 (no) 1988-06-21
NO882731L NO882731L (no) 1988-08-19
NO175517B true NO175517B (no) 1994-07-18
NO175517C NO175517C (no) 1994-10-26

Family

ID=27101470

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO882731A NO175517C (no) 1984-11-29 1988-06-21 Fremgangsmåte for stabilisering av leukocytter, og framstilling av blanding fri for röde blodlegemer

Country Status (10)

Country Link
US (1) US4639373A (no)
EP (1) EP0288467B1 (no)
JP (1) JPH0686384B2 (no)
AT (1) ATE79758T1 (no)
AU (1) AU589237B2 (no)
DE (1) DE3686584T2 (no)
DK (1) DK338888D0 (no)
FI (1) FI91362C (no)
NO (1) NO175517C (no)
WO (1) WO1988003028A1 (no)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4639373A (en) * 1984-11-29 1987-01-27 New England Medical Center Hospitals, Inc. Stabilization of granulocytes
US4936963A (en) * 1987-05-27 1990-06-26 Abbott Laboratories Polycationic buffers and method for gel electrophoresis of nucleic acids
IT1217938B (it) * 1988-06-28 1990-03-30 Girolamo Sirchia Procedimento per la preparazione e la conservazione di concentrati eritrocitari e piastrinici
US4923797A (en) * 1988-11-29 1990-05-08 President & Fellows Of Harvard College Stabilization of leukocytes
US5211960A (en) * 1988-11-29 1993-05-18 Scripps Clinic And Research Foundation Stabilization of leukocytes
GB8830197D0 (en) * 1988-12-23 1989-02-22 Univ Dundee Tissue preservation medium
US5459030A (en) * 1992-03-02 1995-10-17 Steritech, Inc. Synthetic media compositions for inactivating bacteria and viruses in blood preparations with 8-methoxypsoralen
AU4107396A (en) * 1992-03-02 1996-06-06 Cerus Corporation Synthetic media for blood components
WO1994000567A1 (en) * 1992-06-25 1994-01-06 David Scheer Stem cell and lymphocyte storage
WO1994003054A1 (en) * 1992-08-07 1994-02-17 Steritech, Inc. Methods for inactivating bacteria in blood preparations with 8-methoxypsoralen
US6413713B1 (en) * 1998-10-30 2002-07-02 Hyperbaric Systems Method for preserving blood platelets
US7112576B1 (en) 1999-12-10 2006-09-26 Regents Of The University Of Minnesota Compositions and methods for cryopreservation of peripheral blood lymphocytes
EP1399018A1 (en) * 2001-06-26 2004-03-24 Human Biosystems Preservation of blood platelets at cold temperatures
AU2004232350A1 (en) * 2003-04-23 2004-11-04 Human Biosystems Improved methods and solutions for storing donor organs

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4390619A (en) * 1981-09-28 1983-06-28 James Clifford Haight Leukocyte or platelet storage using ion-exchange resins
US4639373A (en) * 1984-11-29 1987-01-27 New England Medical Center Hospitals, Inc. Stabilization of granulocytes

Also Published As

Publication number Publication date
FI91362C (fi) 1994-06-27
JPH01501469A (ja) 1989-05-25
NO882731L (no) 1988-08-19
US4639373A (en) 1987-01-27
DE3686584D1 (de) 1992-10-01
EP0288467A4 (en) 1990-01-08
DK338888A (da) 1988-06-21
WO1988003028A1 (en) 1988-05-05
FI91362B (fi) 1994-03-15
DE3686584T2 (de) 1993-03-04
AU589237B2 (en) 1989-10-05
JPH0686384B2 (ja) 1994-11-02
ATE79758T1 (de) 1992-09-15
NO175517C (no) 1994-10-26
AU6627986A (en) 1988-05-25
NO882731D0 (no) 1988-06-21
EP0288467B1 (en) 1992-08-26
DK338888D0 (da) 1988-06-21
FI882944A0 (fi) 1988-06-20
EP0288467A1 (en) 1988-11-02
FI882944A (fi) 1988-06-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO175517B (no) Fremgangsmåte for stabilisering av leukocytter, og framstilling av blanding fri for röde blodlegemer
US5378601A (en) Method of preserving platelets with apyrase and an antioxidant
Wright et al. Functional abnormalities of human neutrophils collected by continuous flow filtration leukopheresis
US20090239208A1 (en) Red Blood Cell Storage Medium For Extended Storage
Tullis et al. Studies on the in vivo survival of glycerolized and frozen human red blood cells
Johnson et al. PAS‐G supports platelet reconstitution after cryopreservation in the absence of plasma
US20110117647A1 (en) Red Blood Cell Storage Medium For Extended Storage
De Loecker et al. Effects of cell concentration on viability and metabolic activity during cryopreservation
Curran et al. Superoxide production by Crohn's disease neutrophils.
Greenwalt et al. Studies in Red Blood Cell Preservation 2. Comparison of Vesicle Formation, Morphology, and Membrane Lipids during Storage in AS‐1 and CPDA‐1
EP0647267B1 (en) Stem cell storage
Valeri et al. Observations on the preservation of autologous human erythrocytes using glycerol, slow‐freeze technic and agglomeration
Beaujean et al. Characteristics of peripheral blood progenitor cells frozen after 24 hours of liquid storage
Lionetti et al. Factors affecting the stability of cryogenically preserved granulocytes
Morris et al. Effects of cooling rate on thermal shock hemolysis
CA1270446A (en) Stabilization of leukocytes
Belisário et al. Influence of laboratory procedures on postthawing cell viability and hematopoietic engraftment after autologous peripheral blood stem cell transplantation
Valeri et al. 24-hour survival of ACD-and CPD-stored red cells
Pedrazzoli et al. Autologous platelet transfusion in patients receiving high-dose chemotherapy and circulating progenitor cell transplantation for stage II/III breast cancer
Huggins et al. Advances in blood preservation
Landi et al. Effects of high platelet concentration in collecting and freezing dry platelets concentrates
Bannatyne et al. Bactericidal function of cryopreserved neutrophils
Richman Prolonged cryopreservation of human granulocytes
Amer et al. Effect of different resuspension media on the post‐thaw characteristics of frozen blood
Chien et al. Rheologic properties of erythrocytes preserved in liquid nitrogen

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees