FI86547B - Foerfarande foer framstaellning av en peptid som verkar farmakologiskt pao hjaercirkulationen eller skelettaemnesomsaettningen. - Google Patents

Claims (8)

1. Förfarande för framställning av en peptid, som verkar farmakologiskt pä hjärtcirkulationen eller skelettämnes-omsättningen och som innehäller säsom en delsekvens av en högst 90 aminosyror omfattande större peptid eller säsom den enda sekvensen en aminosyrasekvens med formeln I -AlaCysAsnThrAlaThrCysValThrHisArgLeuAlaGlyLeuLeuSer-ArgSerGlyGlyMetValLysSerAsnPheValProThrAsnValGlySer- (I) LysAlaPhe- varvid cysteinresterna kan bilda inter- eller intramole-kylära disulfidbryggor, eller ett derivat av en sädan förening, som innehäller en amiderad terminal karboxyl-grupp och/eller en acylerad terminal aminogrupp, eller salter av en sädan förening, kännetecknat därav, att a) en amidbindning i en sädan förening bildas genom att omsätta den del av denna förening, som har en fri kar-boxylgrupp eller är ett reaktionsdugligt karboxylsyrade-rivat av denna del, med en komplementär del, som innehäller en fri aminogrupp, eller ett reaktionsdugligt derivat därav, varvid fria funktionella grupper i de nämnda de-larna, förutom de i reaktionen deltagande grupperna, är vid behov skyddade under reaktionen, och eventuellt när-varande skyddsgrupper avlägsnas, eller b) för framställning av den ovannämnda föreningen, som har en inter- eller intramolekylär disulfidbrygga, en av de ovannämnda föreningarna, i vilken cysteinresternas merkaptogrupper är i fri form, eller väri merkapto-gruppernas skyddsgrupper avgär under reaktionsförhällan-dena, oxideras med ett lämpligt oxideringsmedel, eller 94 86547 c) frän en sädan peptid, peptidamid eller ett N-acylerad derivat av dessa, i vilken minst en funktionell grupp är i skyddad form, skyddsgruppen avlägsnas, eller d) för framställning av de ovannämnda peptiderna E. coli-celler, som transformerats med en uttryckningsvektor, som innehäller en DNA-sekvens, som kodar för den önskade ami-nosyrasekvensen och reguleras av en uttryckningskontroll-sekvens, odlas i ett vätskeformigt näringsmedium, som innehäller assimilerbara koi- och kvävekällor, produkten frigörs vid behov frän E. coli-cellerna och isoleras och en eventuellt erhällen dlmer eller polymer behandlas vid behov med ett reduceringsmedel, som är lämpligt för spaltning av disulfidbindningar och den erhällna reduce-rade produkten behandlas vid behov med ett oxideringsme-del, som är lämpligt för äterbildning av disulfidbindningar, eller e) för framställning av en av de ovannämnda peptidamider-na, en sädan peptid, som i C-ändan av den önskade peptid-amidens aminosyrasekvens har en ytterligare aminosyra ASQ, som kan spaltas enzymatiskt tili NH2-gruppen av den önskade peptidamidens terminala amidgrupp eller substitueras med ammoniak i närvaro av ett lämpligt enzym, behandlas med hjälp av ett lämpligt enzym eventuellt i närvaro av ammoniak, och, om sä önskas, ett i vilket som heist av de ovannämnda förfarandealternativen a) - e) erhället sait överförs i en fri förening eller en erhällen fri förening överförs i ett sait.

2. Förfarc\nde enligt patentkravet 1, känneteck-n a t därav, att utgängsämnen väljes sä, att man kan framställa en peptid med högst 72 aminosyrarester och med en sekvens med formeln II 95 86547 AspTyrValGlnMetLysAlaSerGluLeuLysGlnGluGlnGluThr-GlnSerSerSerSerAlaAlaGlnLysArgAlaCysAsnThrAlaThr-CysValThrHisArgLeuAlaGlyLeuLeuSerArgSerGlyGlyMet- (II) valLysSerAsnPheValProThrAsnValGlySerLysAlaPheGly-ArgArgArgSerAspLeuGluAla eller ett derivat därav, som innehäller en C-terminal karbamoylgrupp och/eller en N-terminal acetylaminogrupp, eller ett salt därav.

3. Förfarande enllgt patentkravet 2, känneteck-n a t därav, att utgängsämnen väljes sä, att man kan framställä en peptidamid med formeIn III eller ett salt därav S-S Ala-Cy-Asn-Thr-Ala-Thr-Cy-Val-Thr-His-Arg-Leu-Ala-Gly-Leu-Leu-Ser-Arg-Ser-Gly-Gly-Met-Val-Lys-Ser- (III) Asn-Phe-Val-Pro-Thr“Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2.

4. Förfarande enligt patentkravet 2, känneteck-n a t därav, att utgängsämnen väljes sä, att man kan framställa en peptid med formeln XV eller ett salt därav S—-S Ala-Cy-Asn-Thr-Ala-Thr-Cy-Val-Thr-His-Arg-Leu-Ala-Gly-Leu-Leu-Ser-Arg-Ser-Gly-Gly-Met-Val-Lys- (xv) Ser-Asn-Phe-Val-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-Tyr-OH.

5. Förfarande enligt patentkravet 2, känneteck-n a t därav, att utgängsämnen väljes sä, att man kan framställa en peptid med formeln XIX eller ett salt därav 96 8 6 5 4 7 s-s Ala-Cy-Asn-Thr-Ala-Thr-Cy-Val-Thr-His-Arg-Leu-Ala-Gly-Leu-Leu-Ser-Arg-Ser-Gly-Gly-Met-Val-Lys- (XIX) Ser-Asn-Phe-Val-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-Gly-OH.

6. Förfarande enligt nägot av patentkraven 1-5, kännetecknat därav, att utgängsämnen väljes sä, att man kan framställa ett farmaceutiskt användbart sait.

7. Förfarande enligt nAgot av patentkraven 1-6, kännetecknat därav, att DNA-sekvensen, som nämns i förfarandealternativet d), innehAller sekvensen enligt formeln IV d(GCETGYAAYACXGCEACXTGYGTXACXCAYNGK YT Z GCEGGX YT Z YT Z AlaCysAsnThrAlaThrCysValThrHisArgLeuAlaGlyLeuLeu QRSNGKQRSGGXGGXATGGTXAAMQRSAAYTTLGTXCCXACXAAYGTX (IV) SerArgSerGlyGlyMetValLysSerAsnPheValProThrAsnVal GGXQRSAAMGCETTL) GlySerLysAlaPhe i vilken angetts endast deoxinukleotidsekvensen av den kodande strängen börjande frAn 5'-ändan och nedanför de aminosyror, som var och en triplett kodar för, och i vilken A = adenosyl, T = tymidyl, G = guanosyl, C cytidyl, E = A, T, C eller G, 97 86547 K = A, T, C eller G, när N = C, eller A eller G, när N = A, L = T eller C, M = A eller G, N = A eller C, Q - T eller A, R,S: R = C och S = A, T, C eller G, när Q = T; eller R = G och S = T eller C, när Q = A, X = A, T, C eller G, Y = T eller C och Z = A, T, C eller G, när Y = C, eller A eller G, när Y = T, och "d" före parentesen betyder, att nukleosiderna inom pa-rentesen är 2-deoxi-nukleosider.

8. Förfarande enligt patentkravet 7, känneteck-n a t därav, att den i förfarandealternativet d) nämnda DNA-sekvensen innehäller DNA-sekvensen med formeln IVb, varvid endast sekvensen av den kodande strängen börjande frän 5'-ändan angetts och för underlättande av förständet ocksä den aminosyra, som var och en triplett kodar för AlaCysAsnThrAlaThrCysValThrHlsArgLeuAlaGlyLeu d(GCTTGCAACACCGCTACCTGCGTTACCCACCGTCTGGCTGGTCTG LeuSerArgSerGlyGlyMetValLysSerAsnPheValProThr (IVb) CTGTCTCGTTCTGGTGGTATGGTTAAATCTAACTTCGTTCCGACC AsnValGlySerLysAlaPhe AACGTTGGTTCTAAAGCTTTC).