FI80688C - Ny mellanprodukt (8s)-8- fluorerytronolid a som aer anvaendbar vid framstaellning av halvsyntetiska makrolidantibiotika. - Google Patents

Description

1 80688

Uusi välituote (8S)-8-fluorierytronolidi A, joka on käyttökelpoinen valmistettaessa puolisynteettisiä makrolidi-antibiootteja 5 Jakamalla erotettu hakemuksesta 820067

Keksinnön kohteena on (8S)-8-fluorierytronolidi A, joka on käyttökelpoinen välituotteena valmistettaessa uusia makrolidiantibiootteja, ja jonka kaava on 10 o F'><'CH3 CH,xVl ,0H HOn NJ L^-"CH3

15 JL

°xX'oh (I CH-,

O J

20 Puolisynteettiset makrolidiantibiootit puolestaan ovat hyödyllisiä bakteerien vastaisina aineina. Itse asiassa niillä on, verrattuna tunnetun tyyppisiin erytromysii-neihin, samanlaiset tai laajemmat aktiivisuuskirjot ja -tasot, ne ovat vähemmän herkkiä pilaantumiselle happames-25 sa ympäristössä ja sallivat siten paremman imeytymisen suun kautta annettaessa; niiden esterit tai suolamuodot imeytyvät nopeammin ja täydellisemmin.

Julkaisusta R. A. LeMahieu et ai.; J. Med. Chem. 17, 963 (1974) on tunnettua, että erytronolidi A on substraat-30 ti, jota voidaan saada erytromysiini A:sta poistamalla selektiivisesti sokerit kladinoosi ja desosamiini.

On myös tunnettua, että erytronolidi B ja 3-O-myka-rosyyli-erytronolidi B ovat substraatteja, joita voidaan saada suoraan fermentoimalla asiaan kuuluvissa määrissä ja 35 siten teollisesti toteutettavissa olevin kustannuksin käyttäen erytromysiiniä tuottavia mikro-organismeja sekä niiden mutantteja. Toisaalta, kuten myös on hyvin tunnettua, lukuun ottamatta normaalin erytromysiini A:n tuotantoa, näillä substraateilla ei ole käyttöä ilman haittavaikutuksia 2 80688 olevissa muissa fermentoinneissa antiobioottien tuottamiseksi, jotka substraatit vaikuttavat itse erytromysiinin, kun taas teollisuuden näkökannalta niiden käyttö näyttää olevan mitä toivottavinta.

5 Nyt on keksitty, että erytronolidi A:n, erytrono- lidi B:n tai 3-0-mykarosyylierytronolidi B:n johdannaiset, joita voidaan valmistaa kemiallista tietä yksinkertaisella ja teollisesti toteutettavissa olevalla tavalla, ovat käyttökelpoisia substraatteja fermentointiprosesseja var- 10 ten, jotka käyttävät hyväksi mikro-organismeja, jotka on saatu mutaatiolla kannoista ja jotka on sopeutettu erytromysiini A:n mikrobiologista tuotantoa varten, tuottavat uusia makrolidiantibiootteja.

Kemiallista menetelmää tämän keksinnön mukaisten 15 uusien välituotteiden valmistamiseksi esittää seuraava kaavio:

CU-, CH

I 3 F\ s' 3 20

L0H T -» T OH

CH3 CH-'>r I<^CH3 C2H5 I OH 3C9H ^OH 3 0/c«3 0Y^3 2j o 0 f11» v (III) / ^ ^ 3 0 pit |3 F .CH3

CH,v 11 '°H CH3' Il -"0H

h°x 3 ho n k^CHi^oH

^ s' -OH "

35 L OH I L°H I

CH^" <^CH3 CH3^X^ k^^CH

3 C2H5*0 JK0H °2ίΐ5 ’ CH3 0V>1f CH3

O O

(I) (IV)

II

3 80688

Tarkemmin esitettynä voidaan uusia välituotteita valmistaa seuraavasti: a) yhdistettä (I), joka on erytronolidi A, erytro-nolidi B tai 3-0-mykarosyyli-erytronolidi B, käsitellään 5 vedettömällä hapolla, kuten jääetikalla tai hydroksyyli- amiini-hydrokloridin metanoliliuoksella yhdisteen (II), nimittäin 8,9-anhydroerytronolidi A-6,9-hemiasetaalin, 8,9-anhydroerytronolidi B-6,9-hemiasetaalin tai 3-0-myka-rosyyli-8,9-anhydroerytronolidi B-6,9-hemiasetaalin muo-10 dostamiseksi; b) yhdiste (II) saatetaan reagoimaan reagenssin kanssa, joka pystyy kehittämään elektrofiilistä fluoria ja joka on edullisesti fluorioksi-perfluori-alkaani (jonka yleinen kaava on cnF2n+i^F^ tai perkloryylifluoridi, muo- 15 dostamaan vastaava asetaali (III) inertin orgaanisen liuottimen läsnäollessa ja alhaisessa lämpötilassa.

c) yhdiste (III) saatetaan reagoimaan vesipitoisen hapon kanssa, jolloin muodostuu haluttu yhdiste (IV).

Vaiheessa b) on fluorioksi-perfluori-alkaanien ryh-20 män reagensseista eniten käytetty fluorioksi-trifluori-metaani, joka on kaupallisesti saatavissa.

Muita reagensseja, jotka sisältävät fluoriatomeja, joilla on positiivinen varaus, ja joita voidaan käyttää tässä reaktiossa, ovat fluorioksirikki-pentafluori, mole-25 kyylinen fluori sekä lyijytetra-asetaatti-fluorivetyhappo.

Reaktioliuottimiksi sopivat klooratut hiilivedyt, kuten trikloorimetaani (Freon 11), kloroformi, metyleeni-kloridi ja sen kaltaiset, tetrahydrofuraani, sekä niiden seokset. On edullista saattaa reaktio tapahtumaan alhai-30 sissa lämpötiloissa, edullisesti välillä -75 ja -85°C jatkuvan sekoituksen alaisena.

4 80688

Reaktio on normaalisti täydellinen ajassa noin 15 minuutista yhteen tuntiin.

On tärkeää korostaa, että asetaalin (III) muodostumiseen liittyy jo tässä vaiheessa halutun yhdisteen 5 (IV) muodostuminen määrissä, jotka eivät ole aivan mitättömiä.

Mitä kolmanteen reaktiovaiheeseen (c) tulee, käytetään orgaanisia tai epäorgaanisia vesipitoisia happoja, kuten etikkahappoa tai kloorivetyhappoa. Reaktiota var-10 ten voidaan käyttää lämpötiloja noin 30 - 150°C. Syntynyt tuote (IV) otetaan talteen puhtaassa muodossa uudel-leenkiteyttämällä tai kromatografiaa käyttäen.

yhdisteet (II), (III) ja (IV) ovat uusia.

Esimerkki 1 15 8,9-anhydroerytronolidi A-6,9-hemiasetaalin (II) valmistus.

Liuoksen, jossa on 4,185 g (0,01 mol) erytronolidi A:ta (I), jota ovat selostaneet R.A. LeMahieu et ai. julkaisussa J. Med. Chem. 17, 953 (1974), 32 ml:ssa jää-20 etikkaa, annetaan seistä kaksi tuntia huoneen lämpötilassa. Etikkahappo poistetaan sitten tyhjössä 40°C:n lämpötilassa ja öljymäinen jäännös liuotetaan 150 mitään kloroformia. Kloroformiliuos pestään natriumbikarbonaatin kyllästetyllä liuoksella ja sitten vedellä neutraaliksi ja kuivataan lo-25 puksi Na2SO^:llä.

Liuottimen poistamisen jälkeen tyhjössä, saatiin raakatuote, joka puhdistettiin piihappogeelipylväässä, jok a oli valmistettu metyleenikloridi/metanoliin (1:1).

Eluointi metyleenikloridi/metanoliseoksella 30 (98:2) antoi jakeita, jotka sisälsivät ainoastaan 8,9- anhydroerytronolidi A-6,9-hemiasetaalia (II). Haihduttamalla nämä yhdistetyt jakeet kuiviin ja kiteyttämällä sen jälkeen asetoni/n-heksaanista, saatiin 2,750 g yhdistettä (II), joilla oli seuraavat tunnusarvot:

It 5 80688 sp. 188-193°Cj +20,5° (C = 1 metanolissa); UV (MeOH) 210 nm (fcD6720) IR (KBr) 3630, 3520, 3495, 3400, 1710, 1465, 1450, 1440, 1415, 1400, 1370, 1350, 1310, 1285, 1230, 1200, 1170, 5 1140, 1090, 1075, 1060, 1050, 1035, 1020, 1010, 1000, 970, 950, 940, 920, 915, 905, 890, 825, 810, 800 cm-1.

Analyysi C2iH3g°7:lie antoi seuraavat arvot:

Laskettu (%): C 62,97 H 9,06

Saatu (%): C 63,12 H 9,10 10 Esimerkki ,2 (8S)-8-fluorierytronolidi A-6,9;9,11-asetaalin (III) ja (8S)-8-fluorierytronolidi A:n (IV) valmistus 8,9-anhyd-roerytronolidi A-6,9-hemiasetaalista (II)

Valmistettiin fluorioksi-trifluorimetaanin liuos 15 CCl^Fjssä -80°C:ssa: ylimäärä (tavallisesti n. kaksinkertainen) CF^OF liuotettiin CCl^Frään (esijäähdytetty -80°C:ssa hiilihappojäillä) lisäämällä kaasua hitaasti tyh-jennysputken kautta (samalla kun sylinteriä, joka sisälsi CF^OF, punnittiin jatkuvasti Sartosious-sähkövaa'alla).

20 Sen väkevyys määritettiin jodometrisellä titrauksel- la.

CF^OF/CCl^F-liuos, -80°C:ssa tai -85°C:ssa, lisättiin hitaasti liuokseen, joka sisälsi 4 g (0,010 mol) 8,9-anhydroerytronolidi A-6,9-hemiasetaalia CC13F/CH2C12:ssa 25 (295 ml/370 ml) n. -80°C:ssa, sekoitettiin magneettisesti kalsiumoksidin kanssa (1,920 g) fluorivedyn poistamiseksi. Reaktion edistymistä tarkkailtiin aika-ajoittain suurpaine-nestefaasi-kromatografiällä (HPLC) yhdisteen (II) luonteenomaisen huipun häviämisen suhteen.

30 Sen jälkeen, kun yhdisteen (II) huippu oli hävinnyt (tai pienentynyt) sekoittamista jatkettiin viisi minuuttia ja typpikaasua pulputettiin liuoksen läpi CF^OF-ylimäärän poistamiseksi -80°C:ssa ja liuoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan. Liuosta pestiin NaHCO^:n kyllästetyllä 35 liuoksella (650 ml) ja pestiin sitten neutraaliksi vedellä ja kuivattiin lopuksi Na2S04:lla.

6 80688

Liuottimen poistaminen antoi kiinteän jäännöksen, joka sitten puhdistettiin piihappogeelipylväässä kromato-grafisesti (suhde 1:50), joka oli valmistettu metyleeni-klorid/metanoliin (1:1). Eluointi metanolin kasvavilla vä-5 kevyyksillä metyleenikloridissa antoi jakeita, jotka sisälsivät ainoastaan (8S)-8-fluorietyronolidi A-6,9;9,11-ase-taalia (III), ja jakeita, jotka sisälsivät ainoastaan (8S)- 8-fluorierytronolidi A:ta (IV). Jakeiden, jotka sisälsivät yhdisteen (III), kuiviin haihduttamisen jälkeen ja niiden 10 kiteyttämisen jälkeen asetoni/n-heksaanista saatiin 3,435 g tuotetta, jolla oli seuraavat tunnusarvot: sp. 192-3°C; ^δζ/^0 +64,7° (C = 1 metanolissa) UV (metanoli): ei ketoniryhmää vastaavaa adsorptiota 15 IR (KBr): 3560, 3420, 1720, 1460, 1395, 1380, 1355, 1345, 1330, 1320, 1305, 1290, 1270, 1255, 1215, 1180 (leveä), 1095, 1070, 1045, 1025, 1020, 990, 980, 970, 955, 940, 930, 910, 905, 895, 855, 840, 830, 805 cm"1

Analyysi :lie antoi seuraavat arvot: 20 Laskettu (S): C 60,27 H 8,43 F 4,54

Saatu (%): C 60,22 H 8,51 F 4,69

Jakeiden, jotka sisälsivät yhdisteen (IV), kuiviin-haihduttamisen ja kiteyttämisen jälkeen asetoni/n-heksaa-nista saatiin 145 mg tuotetta, jolla oli seuraavat tunnus-25 arvot: sp. 239-240°C; -3,1° (C = 1 metanolissa) UV (metanoli): 287-8 nm (£ 25,3) IR (KBr) 3610, 3550, 3480 (olake) , 3380 (olake), 1735, 1700, 1460, 1405, 1390, 1380, 1350, 1325, 1300, 30 1290, 1270, 1175, 1105, 1090, 1050, 1035, 1020, 980, 960, 920, 905, 895, 875, 860 cm"1 . . Analyysi ^-^H^-yFOg: lie antoi seuraavat arvot:

Laskettu (%): C 57,78 H 8,54 F 4,35

Saatu (%): C 57,87 H 8,63 F 4,19

II

7 80688

Esimerkki 3 (8S)-8-fluorierytronolidi B-6,9}9,11-hemiasetaalin (III) ja (8S)-8-fluorierytronolidi B:n (IV) valmistaminen 8,9-anhydroerytronolidi B-6,9-hemiasetaalista (II) 5 Menetellen samoin kuin esimerkissä 3, mutta lähtien liuoksesta, joka sisälsi 3,845 g (0,010 mol) 8,9-anhydroerytronolidi B-6,9-hemiasetaalia (II) (selostettu US-pa-tentissa nro 3 697 547), saatiin raakatuote, joka kiteyttämällä asetoni/n-heksaanista antoi 3,450 g (8S)-8-fluori-10 erytronolidi B-6,9;9,11-asetaalia (III), jolla oli seuraa-vat tunnusarvot: sp. 191-2°C; +42,6° (C = 1,0 metanolissa) UV (metanoli). ei ketoniryhmää vastaavaa adsorptiota IR (KBr): 3540, 3450, 1735, 1460, 1260, 1170, 1060, 15 1035, 980, 925, 875, 450 cm"1

Analyysi C2iH35FOg:He antoi seuraavat arvot: Laskettu (%): C 62,67 H 8,76 F 4,72 Saatu (%): C 62,63 H 8,82 F 4,81

Kun emäliuokset puhdistettiin piihappogeeli-pylväs-20 kromatografialla (suhde 1:50) eluenttina metyleenikloridi/ metanoli (98:2), saatiin 75 mg toista tuotetta, (8S)-8-fluorierytronolidi B:tä (IV), jolla oli seuraavat tunnusarvot : sp. 247-8°; UV (metanoli): 286 nm (£ 26) 25 “30° (C = 1 metanolissa) IR (KBr): 3540, 1727, 1703, 1460, 1330, 1270, 1175, 1130, 1075, 1050, 1015, 940, 920, 895, 860 cm"1

Analyysi C2iH37F07:He antoi seuraavat arvot: Laskettu (%): C 59,98 H 8,87 F 4,52 30 Saatu (%): C 59,92 H 9,00 F 4,59

Esimerkki 4 (8S)-8-fluorierytronolidi B:n (IV) valmistus (8S)-8-fluorierytronolidi B-6,9;9,11-asetaalista (III)

Seosta, jossa oli 4,830 g (0,012 mol) (8S)-8-fluo-35 rierytronolidi B-6,9;9,ll-asetaalia (III) ja 3 000 ml etik-kahapon vesipitoista liuosta (pH 3), kuumennettiin palautus jäähdyttäen 110°C:ssa 15 minuuttia sekoittaen ja sitten 8 80688 lisättiin 220 ml etikkahappoa. Yhden tunnin kuluttua 110°C:ssa kaikki lähtöaine oli liuennut. Kuumentamista jatkettiin puoli tuntia ja liuos jäähdytettiin sitten niin pian kuin mahdollista huoneen lämpötilaan, tehtiin neutraa-5 liksi NaHCO^slla ja uutettiin etyyliasetaatilla.

Vedenpoiston jälkeen natriumsulfaatilla etyyliase-taattiliuos haihdutettiin kuiviin tyhjössä.

Kun raakatuote oli puhdistettu piihappogeeli-pylväs-kromatografiällä (suhde 1:50) käyttäen eluenttina mety-10 leenikloridi/metanolia (95:5), saatiin 1,8 g tuotetta, jonka kemialliset ja fysikaaliset ominaisuudet oli samanlaiset kuin esimerkissä 4 eristetyn yhdisteen (IV) vastaavat ominaisuudet.

Esimerkki 5 15 3-0-mykarosyyli-8,9-anhydroerytronilidi B-6,9-hemi- asetaalin (II) valmistus

Liuoksen jossa on 5,465 g (0,010 mol) 3-0-mykaro-syyli-erytronolidi B:tä (I), jonka on selostanut J.R.

Martin julkaisussa Biochemistry, 5, 2852 (1966), 32 ml:ssa 20 jääetikkaa, annetaan seistä kaksi tuntia huoneen lämpötilassa.

Etikkahappo poistetaan sitten tyhjössä 40°C:n lämpötilassa ja öljymäinen jäännös liuotetaan 150 ml:aan kloroformia. Kloroformiliuosta pestään kyllästetyllä natriumbi-25 karbonaattiliuoksella ja sitten vedellä neutraaliksi ja kuivataan lopuksi Na2SO^:llä. Liuottimen poistamisen jälkeen tyhjössä saatiin raakatuote, joka puhdistettiin pii-happogeelipylväässä (suhde 1:100), joka oli valmistettu kloroformiin.

30 Eluointi metanolin kasvavalla väkevyydellä kloro formissa antoi jakeita, jotka sisälsivät ainoastaan 3-0-mykarosyyli-8,9-anhydroerytronolidi B-6,9-hemiasetaalia (II).

Haihduttamalla nämä yhdistetyt jakeet kuiviin ja kiteyttämällä sen jälkeen asetoni/n-heksaanista, saatiin 35 1,160 g yhdistettä (II), jolla oli seuraavat tunnusarvot: li 80688 9 sp. 85-88°C; ^6ς/^ -5° (C = 1 metanolissa) UV (MeOH): 210 nm (£ 6850) IR (KBr): 3500, 1730, 1465, 1415, 1380, 1340, 1185, 1120, 1085, 1055, 1005, 985, 945, 895, 810 cm"1 5 Analyysi C28H48°9:lle antoi seuraavat arvot:

Laskettu (%): C 63,61 H 9,15 Saatu (%)s C 63,52 H 9,09

Esimerkki 6 3-0-mykarosyyli(8S)-8-fluorierytronolidi B-6,9;9,11-10 asetaalin (III) ja 3-0-mykarosyyli-(8S)-8-fluorierytronolidi B:n (IV) valmistus 3-0-mykarosyyli-8,9-anhydroerytro-nolidi B-6,9-hemiasetaalista (II)

Valmistettiin fluorioksi-trifluorimetaanin liuos CClgF'.ssa -80°C:ssa: ylimäärä (tavallisesti n. kaksinker-15 täinen) CF^OF liuotettiin CClgFraan (esijäähdytetty -80°C:ssa hiilihappojäissä) lisäämällä hitaasti kaasua tyh-jennysputken kautta (samalla kun sylinteriä, joka sisälsi CFgOF, jatkuvasti punnittiin Sartorious-sähkövaa’alla).

Sen väkevyys määritettiin jodometrisellä titrauksel- 20 la.

CFgOF/CClgF-liuos, -80°C:ssa tai -85°C:ssa, lisättiin hitaasti liuokseen, joka sisälsi 5,285 g (0,010 mol) 3-0-mykarosyyli-8,9-anhydroerytronolidi B-6,9-hemiasetaa-lia (II) CCl3F/CH2Cl2:ssa (295 ml/370 ml) n. -80°C:ssa, se-25 koitettiin magneettisesti kalsiumoksidin kanssa (1,920 g) fluorivedyn poistamiseksi.

k

Reaktion edistymistä tarkkailtiin aika-ajoittain suurpaine-nestekromatografialla (HPLC) yhdisteelle (II) luonteenomaisen huipun häviämisen suhteen.

30 Yhdisteelle (II) kuuluvan huipun häviämisen (tai pienenemisen) jälkeen sekoittamista jatkettiin vielä viisi minuuttia ja typpikaasua pulputettiin liuoksen läpi CF^OF-ylimäärän poistamiseksi -80°C:ssa ja liuoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan. Liuos pestiin kyllästetyllä 35· NaHCOg-liuoksella (650 ml) ja pestiin sitten nuetraaliksi vedellä ja kuivattiin lopuksi Na2S04:llä. Poistamalla liuotin, saatiin kiinteä jäännös, joka sitten puhdistettiin pii- 10 80688 happogeeli-pylväskromatografiällä (suhde 1:100), joka oli valmistettu kloroformiin.

Eluointi metanolin kasvavalla väkevyydellä kloroformissa antoi jakeita,jotka sisälsivät pelkästään 5 3-0-mykarosyyli-(8S)-8-fluorierytronolidi B-6,9*9,11-ase- taalia (III) sekä jakeita, jotka sisälsivät pelkästään 3-0-mykarosyyli- (8S) -8-fluorierytronolidi B:tä (IV).

Jakeiden, jotka sisälsivät yhdisteen (III), kuiviin haihduttamisen ja niiden kiteyttämisen jälkeen asetonista 10 saatiin 1,100 g ainetta, jolla oli seuraavat tunnusarvot: sp. 175-7°C; -9,8° (C = 1 metanolissa) UV (metanoli): ei ketoniryhmää vastaavaa adsorptiota IR (KBr): 3540, 3490, 1720, 1460, 1395, 1380, 1365, 1355, 1330, 1320, 1290, 1275, 1265, 1245, 1205, 1185, 1165, 15 1145, 1120, 1100, 1080, 1060, 1045, 1015, 1005, 990, 960, 940, 925, 915, 900, 880, 865, 840, 815 cm"1

Analyysi c2gH^^FOg:lie antoi seuraavat arvot: Laskettu (%): C 61,52 H 8,67 F 3,47 Saatu (%): C 61,46 H 8,51 F 3,48 20 Jakeiden, jotka sisälsivät yhdisteen (IV), kuiviin haihduttamisen ja kiteistämisen jälkeen asetoni/n-heksaa-nista, saatiin 290 mg tuotetta, jolla oli seuraavat tunnus-arvot : sp. 214-5°C; -73,2° (C = 1 metanolissa) 25 UV (metanoli) 287 nm (£ 25,3) IR (KBr): 3570, 3550, 3460 (olake), 1745, 1735, 14,65, 1380, 1365, 1340, 1300, 1275, 1250, 1180, 1115, 1080, 1055, 1010, 1000 (olake), 985, 945, 935, 920, 895, 855, 840, 810 cm"1 30 Analyysi C2gH4gFO10:lie antoi seuraavat arvot:

Laskettu (%) : C 59,55 H 8,75 F 3,37 Saatu (%): C 59,68 H 8,60 F 3,48

Esimerkki 7 3-0-mykarosyyli-(8S)-8-fluorierytronolidi B:n (IV) 35 valmistus 3-0-mykarosyyli-(8S)-8-fluorierytronolidi B-6,9;9,11-asetaalista (III) 11 n 80688

Seosta, jossa oli 6,560 g (0,012 mol) 3-0-mykarosyy-li-(8S)-8-fluorierytronolidi B-6,9;9,11-asetaalia (III) ja 3 000 ml etikkahapon vesiliuosta (pH 3), pidettiin huoneen lämpötilassa sekoituksen alaisena, kunnes liukeneminen oli 5 täydellinen ja sitten lisättiin 220 ml etikkahappoa.

Liuos jätettiin sekoituksen alaiseksi huoneen lämpötilaan, kunnes lähtöyhdiste (III) oli täydellisesti hävinnyt (tarkistus suoritettiin suurpaine-nestekromatografiällä) , tehtiin neutraaliksi NaHCO^:lla ja uutettiin etyyli-10 asetaatilla.

Veden poiston jälkeen natriumsulfaatilla etyyliase-taattiliuos haihdutettiin kuiviin tyhjössä.

Kun raakatuote puhdistettiin piihappogeeli-pylväs-kromatografiällä (suhde 1:50) metyleenikloridi/metanoli 15 (95:5) eluenttina, saatiin tuote, jonka kemialliset ja fysikaaliset ominaisuudet olivat samanlaiset kuin esimerkissä 7 eristetyllä yhdisteellä (IV).

Esimerkki 8 (8S)-8-fluorierytronolidi A:n (IV) valmistus (8S)-8-20 fluorierytronolidi A-6,9}9,11-asetaalista (III)

Seosta, jossa oli 5,020 g (0,012 mol) (8S)-8-fluorierytronolidi A-6,9}9,11-asetaalia (III) ja 3 000 ml etikka-hapon vesiliuosta (pH 3), kuumennettiin palautusjäähdyttäen 110°C:ssa 15 minuuttia sekoittaen ja sitten lisättiin 220 ml 25 etikkahappoa.

Yhden tunnin kuluttua 110°C:ssa kaikki lähtöaine oli liuennut.

Kuumentamista jatkettiin puoli tuntia ja liuos jäähdytettiin sen jälkeen huoneen lämpötilaan niin nopeasti 30 kuin mahdollista, neutraloitiin NaHCO^lla ja uutettiin etikkahapolla.

Veden poiston jälkeen natriumsulfaatilla etyyliase-taattiliuos haihdutettiin kuiviin tyhjössä.

Raaka kiinteä aine puhdistettiin sitten piihappogee-35 li-pylväskromatografialla (suhde 1:50), valmistettune me-tyleenikloridiin.

12 80688

Eluointi metanolin kasvavalla väkevyydellä metylee-nikloridissa antoi jakeita, jotka vielä sisälsivät lähtö-yhdistettä, (8S)-8-fluorierytronolidi A-6,9;9,11-asetaalia (III) sekä jakeita, jotka sisälsivät pelkästään (8S)-8-5 f luorierytronolidi A: ta (IV)

Toistamalla reaktio talteenotetulla lähtöyhdisteellä ja suorittamalla sen jälkeen kromatografinen puhdistus, saatiin jakeita, jotka sisälsivät (8S)-8-fluorierytronolidi A:ta. Haihduttamalla kaikki yhdistetyt jakeet kuiviin ja 10 kiteyttämällä saatu sakka sitten uudelleen, saatiin 0,725 g (8S)-8-fluorierytronolidi A:ta (IV), jolla oli samat ominaisuudet kuin esimerkissä 3 esitetyt.

Il