FI76791B - Foerfarande foer framstaellning av 2-amino-4-hydroxikinazolinderivat med anticanceraktivitet. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av 2-amino-4-hydroxikinazolinderivat med anticanceraktivitet. Download PDFInfo
- Publication number
- FI76791B FI76791B FI803957A FI803957A FI76791B FI 76791 B FI76791 B FI 76791B FI 803957 A FI803957 A FI 803957A FI 803957 A FI803957 A FI 803957A FI 76791 B FI76791 B FI 76791B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- group
- formula
- cooh
- compound
- amino
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
- C07D239/70—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D239/72—Quinazolines; Hydrogenated quinazolines
- C07D239/95—Quinazolines; Hydrogenated quinazolines with hetero atoms directly attached in positions 2 and 4
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D205/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D205/02—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
- C07D205/04—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
Description
1 76791
Menetelmä syöpää vastustavien 2-amino-4-hydroksikinatsoliini-johdannaisten valmistamiseksi
Esillä oleva keksintö koskee menetelmää 2-amino-4-hydroksiki-natsoliinijohdannaisten valmistamiseksi, jotka ovat tehokkaita tuumoria (syöpää) vastustavia aineita.
Pääosa niistä lääkeaineista, joita on käytetty tuumorien käsittelyssä, on vaikuttanut joko suoraan tai epäsuorasti nukleiinihappojen uudistumiseen jakautuvissa soluissa. Useiden aineiden, joita nimitetään anti-aineenvaihdunta-aineiksi, on esitetty tappavan tuumorin poistamalla sen pääasialliset kas-vuelementit kilpailemalla ja korvaamalla niiden spesifisten entsyymien substraatit, jotka sisältyvät DNA-synteesiin. Anti-aineenvaihdunta-aineet (antimetaboliitit) voidaan luokittaa niiden spesifisen estovaikutuksen perusteella, ja esimerkkejä niistä ovat puriini- ja pyrimidiinianalogit ja foolihappoa vastustavat aineet, kuten aminopteriini ja ametopteriini (me-totreksaatti).
Foolihappoa vastustavista antimetaboliiteista käytetään metotreksaattia laajasti käsiteltäessä pahanlaatuisia ihmisten sairauksia, erikoisesti käsiteltäessä koriokarsinoomaa ja osteosarkoomaa, ja hoidettaessa akuuttista lymfaattista leukemiaa. Sen entsyymidihydrofolaatti-reduktaasin estovaikutus (DHFR, EC 1.5.1.4) aiheuttaa yhden hiiliatomin sisältävän tetrahydrofolaattituotteen puuttumisen, josta on seurauksena sekä tymidiini- että puriininukleotidien de novo -synteesin estyminen, jotka aineet ovat välttämättömiä DNA:n synteesissä. Vaikkakin metotreksaatin aikaansaama "puriinivapaa” tila on todettu sellaiseksi, että se aiheuttaa myrkyllisyyttä hiirien ruuansulatuskanavassa, ei se edistä metotreksaatin sytotok-sista vaikutusta määrättyjä viljeltyjä 2 76791 tuumorin solulinjoja kohtaan, ja sillä voi olla vastustava vaikutus tähän vaikutukseen nähden muissa solui in joissa. Metotreksaatti ei vaadi aineenvaihdunta-aktivointia eikä siinä tapahdu oleellista metabolista hajaantumista solutyyppien pääosassa. Metotreksaatti-resistanssin tunnettuja syitä ovat pienentynyt kalvon läpäisevyys ja lisääntynyt solujen DHFR-arvo. Viimemainitussa tapauksessa metotreksaatin tehokkaaksi päämääräksi voi tulla tymidylaattisyntetaasi (TS, EC 2.1.1.45), jolloin entsyymi katalysoi tymidylaatin de novo synteesin loppuvaihetta, jota vaaditaan run-saati DNA-synteesissä. Suora TS-estovaikutus voidaan aikaansaada 5-fluoriurasiili, 5-fluorideoksiuridiini-monofosfaatin aktiivisen aineenvaihduntatuotteen avulla. 5-fluoriurasiili-resistanssia seuraa kuitenkin usein vastaavien aktivoivien entsyymien määrän pieneneminen, ja lääkeaineella voi myös olla myrkyllisiä vaikutuksia, jotka johtuvat sen liittymisestä RNAtan.
Tämän johdosta tarvitaan aine, joka kilpailee pikemminkin TS:n tetrahydrofolaatti-kosubstraatin kuin py-rimidiinisubstraatin kanssa, koska tällaisella yhdisteellä voidaan odottaa olevan yhtä hyvän tai paremman aktiivisuuden kuin metotreksaatilla ei ainoastaan me-totreksaatti-herkissä tuumoreissa vaan myös sellaisissa, jotka ovat resistanttia solujen kohonneesta DHFR-arvosta johtuen. Se on ilmeisesti myös vähemmän myrkyllinen potilaalle, koska se ei vaikuta puriinisyn-teesiin. Täten folaattianalogien oletetaan olevan tehokkaampia kuin pyrimidiinien, koska ne eivät tarvitse aineenvaihdunta-aktivoitumista.
Useiden klassisten kinatsoliini-antifolaattien on todettu olevan TS-inhibiittoreita, esim. 2-amino-4-hydroksi- ja 2,4-diamino-johdannaisten, mutta vaikka li 3 76791 näiden viimemainittujen on todettu olevan suhteellisen tehokkaita TS-inhibiittoreita, sitoutuvat ne myös erittäin lujasti DHFR:ään.
Keksinnön mukaisesti on nyt todettu, että parantunut antituu-moriaktiivisuus voidaan aikaansaada substituoimalla määrättyjä ryhmiä, erikoisesti tyydyttymättömiä hiilivetyryhmiä, 2-amino-4-hydroksi-kinatsoliini-johdannaisten 10-asemassa. Nämä tyydyttymättömät yhdisteet omaavat erikoisesti suuremman TS-estovaikutuksen kuin niiden vastaavat tyydytetyt analogit ja ovat täten tehokkaampia.
Esillä olevan keksinnön avulla aikaansaadaan täten analogia-menetelmä 2-amino-kinatsoliinijohdannaisen valmistamiseksi, jolla on kaava XX> - *9« ...
NH I
2 (X) n jossa R on: 1) suoran tai haarautuneen ketjun omaava tyydyttymätön hiilivetyryhmä, joka sisältää 2-6 hiiliatomia, tai 2) suoran tai haarautuneen ketjun omaava tyydyttynyt tai tyydyttymätön hiilivetyryhmä, joka sisältää enintään 6 hiili-atomia ja joka on substituoitu ainakin yhdellä fluoriatomilla; n on nolla tai kokonaisluku 1-4, edullisesti 0, 1 tai 2; X tai, kun n on kokonaisluku vähintään 2, kukin X erikseen on halogeeniatomi, C -C -alkyyli-, aryyli-, aralkyyli-, 1 4 C -C -alkoksi- tai NO -ryhmä, ja 14 2 Y on ryhmä, jolla on kaava
a) -NH-CH-COOH
CH^-COOH (L-aspartaatti)
b) -NH-CH-COOH
CH -CH -C00H (L-glutamaatti) 2 2 4 76791 tai c) -NH-CH-COOH f _ CH -CH -CO- -NH-CH-COOH 2 2 CH -CH -CO- -OH _ 2 2 _ m jossa m on kokonaisluku, joka on vähintään 1, (poly-L-gluta-maatit), edullisesti 1-9, erikoisesti 1, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan tai esterin valmistamiseksi.
Keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet ovat käyttökelpoisia syöpää vastustavia aineita, jotka ovat joko aktiivisia sellaisinaan tai sopivia esituotteita, jotka voidaan muuttaa in vivo aktiivisten yhdisteiden saamiseksi.
Edullisia kohdassa 1) määriteltyjä substituentteja R ovat sellaiset, jotka sisältävät 2-6, esim. 4, ja erikoisesti 3 hiilitomia, ja erikoisesti sellaiset, jossa esiintyy tyydyt-tymättömyys ainakin 2- tai -asemassa. Esimerkkejä tällaisista ryhmistä ovat alkenyyli-, alkadienyyli-, alkynyyli- ja alka-diynyyliryhmät, ja erikoisesimerkkejä ovat allyyli, propar-gyyli, but-2-ynyyli, but-3-ynyyli ja l-metyyliprop-2-ynyyli.
Kohdassa 2) määritellyt ryhmät R sisältävät enintään 6 hiiliatomia hiilivetyketjussa ja erikoisesti kaikkiaan enintään 4 hiiliatomia ryhmässä R. Tyydytetty hiilivetyketju sisältää edullisesti 1-3 hiiliatomia, kun taas tyydyttymätön hiilivety-ketju sisältää edullisesti 3 tai 4 hiiliatomia. Ketjussa on edullisesti 1 tai 2 tai 3 substituenttiryhmää. Esimerkkejä tällaisista ryhmistä R ovat 2,2,2-trifluorietyyli ja 2-fluori-etyyli.
Ryhmä X voi olla C -C -alkoksi tai NO tai halogeeni- 14 2 atomi, esim. klooriatomi, tai esim. metyyli. Aralkyyli-X-substituentissa olevissa alkyyliryhmissä on tavallisesti 1-4 hiiliatomia.
Il 5 76791
Erittäin voimakkaita syöpää estäviä aineita ovat sellaiset, joissa R on propargyyli, n = 0 ja Y on glutamiinihapporadi-kaali tai sen suola tai esteri. Lisäksi vastaavilla yhdisteillä, joissa n = 1 ja X on kloori tai metyyli 2-asemassa, on voimakas aktiivisuus.
Keksinnön mukaisesti valmistetut kinatsoliinijohdannaiset voivat olla vapaiden happojen muodossa ja myöskin näiden happojen farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen tai estereiden muodossa, jotka voivat olla osittaisia suoloja ja estereitä. Täten kysymyksen ollessa sellaisista yhdisteistä, jotka sisältävät glutamiinihappo- ja aspartiinihapporadikaaleja, tulevat kysymykseen myös monoesteri-, monohappo- ja diesteri-johdannaiset ja vastaavat suolat. Suolat voivat olla sellaisia suoloja, jotka on muodostettu käyttäen fysiologisesti sopivia epäorgaanisia tai orgaanisia happoja tai emäksiä, ja ovat edullisesti natriumsuoloja, esim. dinatriumsuoloja. Esterit ovat edullisesti lipofiilisia estereitä, jossa muodossa yhdiste voidaan esilääkkeenä kiinnittää entsyymiin ennen sen hajoamista vastaavaksi happomuodoksi. Esimerkkejä edullisista estereistä ovat sellaiset, joissa on C -C alifaattisia 1 20 ryhmiä, esim. alkyyliesterit, edullisesti sellaiset, joissa on 1-4 hiiliatomia, ja varsinkin dietyyliesterit.
US-patentissa 3 472 851 esitetään yhdisteitä, jotka ovat samankaltaisia kaavan I mukaisten yhdisteiden kanssa, mutta joissa R on vety tai metyyliryhmä. Tunnetaan myös yhdisteitä, joissa R on propyyli. Nämä yhdisteet eroavat tämän keksinnön mukaisesti valmistetuista yhdisteistä, joissa R on joko tyydyttämätön hiilivetyryhmä tai substituoitu tyydytetty hiili-vetyryhmä. Kaavan I mukaisilla uusilla yhdisteillä on odottamattomia ja parempia ominaisuuksia kuin näillä tunnetuilla 10 N -substituoimattomilla ja alkyyli-substituoiduilla analogeilla, kuten tullaan osoittamaan.
6 76791
Yhdisteet voidaan keksinnön mukaisesti valmistaa siten, että A) poistetaan suojaus täydellisesti tai osittain yhdisteestä, jolla on kaava: O 2
Il R f—\ HN Π "^~CH - N—/ CO-Y'
,λΛ/ T
R NH 1 (X) n 2 jossa X ja n tarkoittavat samaa kuin edellä, R tarkoittaa samaa kuin edellä määritelty ryhmä R tai se on suojatussa muodossa oleva ryhmä R, R on vety tai aminosuojaryhmä ja Y' on ryhmä, jolla on kaava a), b) tai c), jotka kaavat on esitetty edellä Y:n määritelmän yhteydessä, tai näiden ryhmien suola, tai nämä ryhmät ovat osittain tai täydellisesti suojatussa muodossa, jolloin suojaryhmä ryhmässä Y' on esteriryhmä tai jokin muu suojaryhmä sillä edellytyksellä, että kaavan Ia mukainen yhdiste sisältää vähintään yhden suojaryhmän, ja että mikäli suojan poistaminen toteutetaan poistamalla useampi kuin yksi suojaryhmä, suojauksen poistaminen voidaan suorittaa samanaikaisesti tai missä hyvänsä järjestyksessä, tai B) kytketään yhdiste, jolla on kaava 0
Il ^ CH X" "YY 2 i (1II>
R NH
jossa R tarkoittaa samaa kuin kohdassa A) ja X" on poistuva ryhmä, sellaisen yhdisteen kanssa, jolla on kaava 2
R
NH-(II) n
II
(X) 2 7 76791 jossa R , X, n }a Y tarkoittavat samaa kuin kohdassa A), kohdassa A) määritellyn kaavan Ia mukaisen yhdisteen muodostamiseksi, jossa yhdisteessä ei tarvitse olla suojaryhmiä, ja mikäli välttämätöntä poistetaan suojaus kohdassa A) määritellystä kaavan Ia mukaisesta yhdisteestä, ja mahdollisesti muutetaan saatu kaavan I mukainen yhdiste farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.
Täten esimerkiksi happoja ja suoloja voidaan valmistaa keksinnön mukaisesti poistamalla suojaus täydellisesti kaavan Ia mukaisesta yhdisteestä, osittaiset esterit voidaan valmistaa poistamalla suojaus 2-aminoryhmästä ja R -ryhmästä mikäli tarpeellista, jolloin Y' on joko edelleen osittaisen esterin muodossa tai täydellisesti esteröidyssä muodossa, josta sitten suojaus poistetaan osittain, ja täydellisiä estereitä voidaan valmistaa poistamalla suojaus 2-aminoryhmästä ja mi- 2 käli tarpeellista R -ryhmästä, Y -ryhmän ollessa täydellisesti esteröidyssä muodossa.
Esterin muodossa olevan ryhmän Y' suojan poisto esimerkiksi hapon muodostamiseksi voidaan toteuttaa käyttäen varovaista saippuoimista emäksen, kuten NaOH:n, avulla. Saatu happo voidaan haluttaessa saattaa reagoimaan hapon tai emäksen kanssa farmaseuttisesti sopivan suolan muodostamiseksi. Kaikkein edullisimmin hapon annetaan reagoida NaOH:n kanssa niin, että muodostuu vastaava dinatriumsuola. Vaihtoehtoisesti happotuo-te voidaan esteröidä, tuotteena saatu suola voidaan muuttaa hapoksi tai esteriksi, tai esterituote voidaan transesteröidä. Voi olla toivottavaa muodostaa suola esteristä suojanpoistome-netelmän avulla. Mikäli kaavan Ia mukainen yhdiste on dieste-rin muodossa, voidaan kaavan I mukaisen yhdisteen dinatriumsuola muodostaa saippuoimalla tämä diesteri 3 moolilla NaOH aq 1 moolia kohden diesteriä, ja kun tämä reaktio on päättynyt, lisäämällä 1 mooli HC1 aq moolia kohden diesteriä, ja β 76791 edullisesti jäädytyskuivaamalla tuotteena saatu suola. Suoloja voidaan myös muodostaa esim. 2-aminoryhmään käyttäen happoa, kuten HC1 tai HBr.
Suojaryhmä R valitaan tavallisesti ottaen huomioon ryhmän R ja Y' luonne sekä haluttu tuote, so. siten, että ne olosuhteet, jotka vaaditaan R -ryhmän poistamiseksi, eivät vaikuta suojaamattomaan R-ryhmään eivätkä poista suojaavia esteriryh-miä ryhmästä Y' mikäli näitä halutaan lopputuotteeseen. Eräs esimerkki ryhmästä R on pivaloyyliryhmä, joka voidaan poistaa saippuoimisvaiheessa käyttäen esimerkiksi NaOH:ta es-teriryhmien poistamiseksi ryhmästä Y'.
2
Kuten edellä mainittiin, on R joko ekvivalenttinen ryhmän R kanssa tai on haluttu ryhmä R suojatussa muodossa.
Kaavassa III X" on poistuva ryhmä, edullisesti halogeeni, esim. kloori tai bromi, p-tolueenisulfonaatti, metyylisulfo-naatti tai trifluorimetyylisulfonaatti. Menetelmässä B esitetty konjugointi toteutetaan yleensä happoa sitovan aineen, esimerkiksi kalsiumkarbonaatin, kaliumkarbonaatin, 2,6-dime-tyylipyridiinin tai trietyyliamiinin läsnäollessa liuottimes-sa, esim. Ν,Ν-dimetyyliasetamidissa tai sellosolvessa.
Kaavan II mukaisia amiineja voidaan valmistaa saattamalla yh- 2 , , , 2 diste, jolla on kaava R X (jossa kaavassa R on määritelty edellä ja X' on poistuva ryhmä, edullisesti halogeeni, esim. kloori tai bromi, p-tolueenisulfonaatti, metyylisulfo-naatti tai trifluorimetyylisulfonaatti), reagoimaan suoraan yhdisteen N-(4-aminobentsoyyli)-L-glutamaatti, -L-aspartaatti tai -poly-L-glutamaatti kanssa suojatussa muodossa.
Eräs vaihtoehtoinen menetelmä kaavan II mukaisen amiinin valmistamiseksi on se, jonka on esittänyt Santi (katso J. Heterocyclic. Chem. 4, 475), käyttäen lähtöaineena yhdistettä 4-(((4-metyylifenyyli)-sulfonyyli)amino)bentsoaattiesteri, esimerkiksi etyyliesteriä, jonka annetaan reagoida yhdisteen 2 , R X kanssa 9 76791 2 2 (jossa kaavassa R 3a X' on määritelty edellä) R - ryhmän liittämiseksi aminotyppeen. Esteri saippuoidaan sitten vapaaksi hapoksi, muutetaan happokloridik-si ja kytketään sitten Y'-ryhmän kanssa suojatussa, esimerkiksi diesterimuodossa. Tuote on kaavan II mukainen amiini, jossa on suojaryhmä CH2-0-GO2 amino-ryhmässä, joka voidaan myöhemmin poistaa.
Haluttaessa valmistaa sellaisia keksinnön mukaisia yhdisteitä, joissa on substituentteja X, on edullista valmistaa ensin vastaava N-(4-nitrobentsoyyli)-L-glu-tamaatti, -L-aspartaatti tai poly-L-glutamaatti suojatussa muodossa, joka sisältää vastaavan X-substi-tuentin ja muuttaa tämä hydraamalla tai pelkistämällä vastaavaksi 4-aminojohdannaiseksi, joka saatetaan sit-ten reagoimaan yhdisteen R X' kanssa kaavan II mukaisen amiinin valmistamiseksi.
Kaavan III mukaiset reagoivat aineet, joissa R^ = H ja X" on bromi tai kloori, voidaan valmistaa vastaavasta 6-bromimetyyli-2-trimetyyliasetamido(pivaloyyli)-yhdisteestä reaktion avulla tetrahydrofuraanissa vesipitoisen HBr:n kanssa ja vastaavasti vesi-metanolipi-toisen HCl:n kanssa. N-bromimeripihkahappoimidiä voidaan käyttää 6-metyyli-2-trimetyyliasetamido-kinatso-liinin bromauksen aikaansaamiseksi.
Eräs vaihtoehtoinen menetelmä kaavan Ia mukaisten suojattujen yhdisteiden valmistamiseksi käsittää N^-substituoimattoman konjugoidun yhdisteen saattamisen reagoimaan 2-amino-suojatussa muodossa ja rynmän Y' ollessa suojatussa muodossa yhdisteen R X' kanssa 2 (jossa kaavassa R ja X' on määritelty edellä) seuraa-van reaktiokaavion mukaisesti: _ _ - - Γ_ ___ ίο 76791 o ΗΝ""^ --CHj-NH Q-C°- <Ib*
R1.N„ T
' 'n O R2 —> xVY'082'" “O'00”'’ (ia)
R-NH
(Xln
Kaavan Ib mukainen yhdiste voidaan valmistaa seuraavaa reaktiota käyttäen: _ Jj ch2x" nh2-(Xy co-ϊ· ♦ ® y y r -nh n (X>n
Ha III
joissa kaavoissa X" on määritelty edellä. Tässä reaktiossa on mahdollista käyttää kaavan III mukaisen 6-CH2~X"--yhdisteen sijasta vastaavia 6-formyyli- tai 6-syano-yhdisteitä, koska kaavan Ha mukaisessa yhdisteessä ei ole R-ryhmää aminoryhmässä reaktion tässä vaiheessa.
Keksinnön mukaisilla yhdisteillä on laaja-alainen anti-tuumori-aktiivisuus erilaisissa leukemioissa, lymfasairauksissa ja kysymyksen ollessa erilaisista kiinteistä tuumoreista, erikoisesti karsinoomasta ja sarkoomasta. Ihmisiä varten on terapeuttisesti tehokkaisen annosten todettu olevan alueella 50-500 mg/kg ruumiin painoa.
11 76791
Esillä olevaa keksintöä kuvataan seuraavien esimerkkien avulla;
Esimerkki 1
Dietyyli-N-(4 -(prop-2-enyyliamino)bentsoyyli)-L-gluta-maatti ja dietyyli-N-(4-prop-2-ynyyliamino)bentsoyyli)-L-glutamaatti alkyloitiin molemmat 2-amino-6-kloorimetyyli- 4-hydroksikinatsoliinilla.
Sekoitettu kloorimetyylikinatsoliinihydrokloridin ja amiinin seos (1 mooliekv.) 2-etoksietanolissa (2,5 ml per mmooli) kuumennettiin lämpötilaan 80°C. Sitten lisättiin trietyyliamiinia (2 mooliekv.), jolloin saatiin kirkas liuos, jota kuumennettiin siksi, kunnes TLC-arvo (10 % EtOH-CHCl^/SiC^) osoitti maksimaalisen (vaikkakin epätäydellisen) reaktion. (Reaktioaika ja reaktiolämpö-tila olivat vastaavasti 5 h lämpötilassa 100°C ja 6 h lämpötilassa 105°C). Liuotin poistettiin tyhjössä ja jäännös liuotettiin CHCl^reen ja liuos pestiin vedellä.
Uute kuivattiin (MgSO^) ja väkevöitiin, jolloin saatiin raaka tuote. Tämä puhdistettiin piioksidigeeliä (180 g) käyttäen HPLC-menetelmällä ja elutoitiin 5 %:sella EtOH-CHC13:11a.
Tuotteet olivat dietyyli-N-(4-(N-((2-amino-4-hydroksi- 6-kinatsolinyyli)metyyli)prop-2-enyyliamino) bentsoyyli)-L-glutamaatti (CB 3716:n esteri) ja dietyyli-N-(4-(N-((2-amino-4-hydroksi-6-kinatsolinyyli)metyyli)prop-2-ynyyliamino)bentsoyyli)-L-glutamaatti (CB 3721) ei-kiteisten, kumimaisten, kiinteiden aineiden muodossa, __- - Ί“Γ -----— 12 76791 joiden rakenne vahvistettiin alkuaineanalyysin ja NMR-spektrin (liuos DMSO-Dgjssa) avulla, ja saannot ja sulamispisteet olivat seuraavat: CB 3716:n esteri 21,5 %, 107-112°C; CB 3721 27,5 %, 143-147°C.
Esimerkki 2
Dietyyli-N-(4-(N-((2-amino-4-hydroksi-6-kinatsolinyy-li)metyyli)prop-2-ynyyliamino)bentsoyyli)-L-glutamaat-ti, esimerkin 1 mukainen tuote, valmistettiin myös seu-raavaa menetelmää käyttäen:
Liuosta, jossa oli 2-amino-6-bromimetyyli-4-hydroksiki-natsoliinihydrobromidia (15,1 g) ja dietyyli-N-(4-(prop-2-ynyyliamino)bentsoyyli)-L-glutamaattia (16,2 g) N,N-dimetyyliasetamidissa (300 ml), sekoitettiin kal-siumkarbonaatilla (13,5 g) 65 h lämpötilassa 25°C. Kalsiumkarbonaatti poistettiin sentrifugoimalla kier-rosnopeudella 2000 kierr/min 15 minuutin ajan (poistaminen voidaan myös suorittaa suodattamalla celiten lävitse) . Liuotin poistettiin sitten lämpötilassa 40°C/0,2 mm. Täten saatu raakatuote liuotettiin 5 %:seen tilavuus/tilavuus etanoli-kloroformiin pientä liukenematonta jäännöstä lukuunottamatta ja käsiteltiin kromatograafisesti piioksidigeelillä (".Merck, Art 15111") ja elutoitiin 5%:sella EtOH-CHC^:11a. Tuote, dietyyli-N-(4-(N-((2-amino-4-hydroksi-6-kinatsolinyy-li)metyyli)prop-2-ynyyliamino)bentsoyyli)-L-glutamaat-ti (CB 3721), oli vaaleahko kiinteä aine, sp. 145-148°C (korjaamaton), saanto 69 %. Rakenne vahvistettiin alkuaineanalyysin avulla. Todettu: C 62,54; H 5,65; N 13,07. C28H31N5°6 vastaa C 63,03; H 5,86; N 13,13 %.
Esimerkeissä 1 ja 2 käytetyt lähtöaineet voidaan valmistaa seuraavasti: 13 76791
Dietyyli-N-(4- (prop-2-enyyliamino)bentsoyyli)-L-gluta-maatti valmistettiin käsittelemällä dietyyli-N-(4-aminobentsoyyli)-L-glutamaattia (5,00 g) etanoliliuok-sessa (100 ml) 8 h lämpötilassa 60°C allyylibromidil-la (5,4 ml) kaliumkarbonaatin läsnäollessa (2,14 g). Liuottimen poistamisen jälkeen tyhjössä liuotettiin jäännös kloroformiin ja liuos pestiin vedellä. Uute kuivattiin (MgSO^) ja väkevöitiin, jolloin saatiin raakatuote. Tämä puhdistettiin HPLC-menetelmällä käyttäen elutoimisaineena 50:50 kloroformi:petrolieetteriä.
Dietyyli-N-(4-(prop-2-ynyyliamino)bentsoyyli)-L-gluta-maatin valmistamiseksi toistettiin edellä mainittu menetelmä lukuunottamatta sitä, että reaktio suoritettiin 4 h kuluessa lämpötilassa 70°C käyttäen 10 ml 80 %:sta propargyylibromidiliuosta tolueenissa al-lyylibromidin sijasta.
Rakenteet vahvistettiin alkuaineanalyysin ja NMR-spekt-roskopian perusteella ja saannot ja sulamispisteet olivat seuraavat: 76,5 %, 60-61°C; ja 55,5 %, 98-99°C, vastaavasti.
Esimerkki 3 N-(4-(N-((2-amino-4-hydroksi-6-kinatsolinyyli)metyyli)-prop-2-enyyliamino)bentsoyyli)-L-glutamiinihappo (CB 3716) ja N-(4-(N-((2-amino-4-hydroksi-6-kinatsoli-nyyli)metyyli)prop-2-ynyyliamino)bentsoyyli)-L-glutamiinihappo (CB 3717) saatiin vastaavista dietyylieste-reistä, jotka voidaan valmistaa esimerkeissä 1 ja 2 kuvatulla tavalla, suspendoimalla 25 %:seen EtOH aq:un (20 ml per mmooli) ja käsittelemällä 1-n NaOH aq:lla (4 mooliekv.). Voimakkaasti ravistettaessa saatiin liuos 5 minuutin kuluessa. Yhden tunnin kuluttua kirkastettiin liuos suodattamalla "Hyflo" suodatusaineen 14 76791 lävitse ja pH saatettiin arvoon 4,1 käyttäen 1-n HCl aq. Saatiin tuotteen geelimäinen sakka. Siinä ei esiintynyt epäorgaanisia ioneja suoritettaessa kolmasti suspensio-sentrifugoimis-dekantoiminen. Amorfinen, vaikeahko, hygroskooppinen kiinteä aine kuivattiin sitten lämpötilassa 100°C tyhjössä. Se oli homogeeninen TLC-analyysissä kahdessa järjestelmäsöä (1) n-butano-li:etikkahappo:vesi (5:2:3); (2) kloroformi:metanoli: et ikkahappo (75:20:5).
Rakenteet vahvistettiin alkuaineanalyysin ja UV-spektroskopian avulla (spektrit määrättiin 0,1-n aq. NaOH:ssa). Saanto, sulamispiste ja UV-arvot olivat seu-raavat: CB 3716 saanto 46 %, sp. 207-209°C.
UV λ (nm)(ε) maksimit: 311,5 (29,100), 276 (17,600), 228,5 (49,300), minimit: 282 (16,900), 252 (9,060).
CB 3717: saanto 81 %, sp. 232-235°C, UV λ (nm)(e) maksimit: 301,5 (26,600), 279 (23,900), 229 (50,700), minimit: 284, (23,700), 251,5 (9,800). Käyttöä varten voidaan CB 3717 saattaa väkevyydessä 10 mg/ml dinat-riumsuolana pH-arvossa 8,5-9,0 fysiologiseksi suolaliuokseksi (0,9 % paino/tilavuus, NaCl).
Esimerkeissä 1 ja 3 määrättiin sulamispisteet Kofler-laitteella ja ne ovat korjattuja, ja folaatti-analo-gian alkuaineanalyysit suoritettiin käyttäen sekä katalyyttistä lisäainetta että happea luovuttavaa ainetta. Kullakin yhdisteellä oli tyydyttävä (+ 0,4 %) mikroanalyysi alkuaineiden C, H ja N suhteen. NMR-spektrit määrättiin "Perkin-Elmer R12B" 60 MHz-spektrometrillä lukuunottamatta esimerkin 1 mukaisia tuotteita, joiden suhteen arvot määrättiin lämpötilassa 50°C "Bru-ker HFX 90 MHz Fourier"-laitteistolla. Preparatiivinen HPLC-määräys suoritettiin "Jobin-Yvon Chromatospac Prep 10"-laitteella käyttäen piioksidigeeliä ("Merck, Art
II
is 76791 11695"), jolloin elutoimisaine, joka kulki "Cecil 212A"-suo-datusaineen lävitse, käsiteltiin erilaisen aaltopituuden omaavalla ultraviolettivalolla. TLC-arvo määrättiin käyttäen "Polygram PG 23" esipäällystettyjä piidioksidilevyjä (Macherey-Nagel & Co.). Sentrifugoiminen suoritettiin arvossa 20 000 g.
Esimerkki 4 a) Dietyyli-N-(4-(N—((2-amino-4-hydroksi-6-kinatsolinyy-li Jmetyyli)prop-2-ynyyliamino)bentsoyyli)-L-glutamaattia (6,436 g) suspendoitiin veteen (130 ml) ja käsiteltiin 0,1-n NaOH aq:lla, (36,10 ml; 3,00 mooliekv.). Seosta ravistettiin erittäin voimakkaasti 45 min, jonka jälkeen oli muodostunut liuos. Vähäinen jäljelle jäänyt kiinteä aine poistettiin suodattamalla suodattimen n:o 3 lävitse. 6 tunnin kuluttua emäksen lisäämisen aloittamisen jälkeen lisättiin 0,1-n HC1 aq (13,00 ml), jolloin pH-arvoksi saatiin 8,45. Liuos, joka sisälsi muutamia hiutaleita saostunutta ainetta, jäädytyskui-vattiin, jolloin saatiin seos, jossa oli N-(4-(N-((2-ami-no-4-hydroksi-6-kinatsolinyyli)metyyli)-prop-2-ynyyliamino)-bentsoyyli)-L-glutamiinihapon dinatriumsuolaa (CB 3717) ja natriumkloridia kermanvärisenä, höytälemäisenä, amorfisena jauheena. HPLC-analyysissä todettiin, että N-(4-(N-((2-amino- 4-hydroksi-6-kinatsolinyyli Jmetyyli)prop-2-ynyyliamino)-bensoyyli)-L-glutamiinihappo (CB 3717) sisälsi 99 % orgaanista materiaalia.
b) Toisessa valmistuskäsittelyssä sekoitettiin dietyy-liesteriä (14,0 g) veden (400 ml), etanolin (68 ml) ja 1 N NaOH aq (78,7 ml) kanssa. Tunnin kuluttua liuos kirkastettiin suodattamalla ja neutraloitiin pH-arvoon 8,35 1 N HC1 aq: 11a. Seos jäädytyskuuvattiin, jolloin saatiin kermanväristä kiinteätä ainetta (15,5 g). Koska seos oli erittäin hygroskooppista, annettiin sen seistä ilmakehän vaikutuksen alaisena tasapainon aikaansaamiseksi ennen mikroanalyysiä.
ie 76791
Todettu: C 43,41; H 4,03; N 10,91; Cl 8,68; Na 11,53; H O 7,69; C H NONa +1,31 (NaCl) + 0,51 2 24 21 5 6 2 (HC1) + 2,5 (H O) (=C H N O Na Cl ) 2 24 26,51 5 8,5 3,31 1,82 vastaa: C 43,56; H 4,03; N 10,58; Cl 9,75; Na 11,50; H O 6,81 %.
2
Tarkemmat Cl- ja H^O-arvot saatiin erikseen analysoidusta näytteestä kuiva-aineen seistyä ulkoilman vaikutuksen alaisena tasapainon saavuttamiseksi 24 h. Saadut arvot olivat seuraa vat: Cl 9,48; H^O 7,12 %. Tämän näytteen HPLC-analyysi osoitti, että CB 3717 käsitti 98 % orgaanista materiaalia.
Esimerkki 5
Seosta, jossa oli 2-amino-6-bromimetyyli-4-hydroksikinatso-liini-hydrobromidia (1 mooliekv.), kalsiumkarbonaattia (1 mooliekv.) ja dietyyli-N-(4-(prop-2-ynyyliamino)-bentsoyyli)-L-aspartaattia (1 mooliekv.) N,N-dimetyyliasetamidissa (5 ml/mmooli), sekoitettin huoneen lämpötilassa 60 h. Seos suodatettiin ja liuotin poistettiin tyhjössä. Saatu Öljy puhdistettiin kromatografisesti piioksidigeelillä ja elutoitiin 10-%:sella metanoli-metyleenikloridilla. Tuotteen, dietyyli-N-(4-(N-((2-amino-4-hydroksi-6-kinatsolinyyli)metyyli)-prop-2-ynyyli-amino)bentsoyyli)-L-aspartaatin (CB 3748), sp. oli 157-159°C.
Samalla tavoin käyttäen emäksenä kalsiumkarbonaattia valmistettiin seuraavat yhdisteet alkyloimalla vastaava amiini:
CH C=CH X COOC H
12 ✓ , 2 5 O --( (CH )
Il I / SS, 2 2
N-K CONH.CH.COOC H
HN 1, 2 \ / 2 5
Jks J J \=y ie
H N N
2 jossa X = Cl; sp. 138-141°C (CB 3750) X = CH^· Sp. 162-165°C (CB 3749) 17 76791
Esimerkissä 5 käytettävät amiinilähtöaineet Ile voidaan valmistaa seuraavasti:
COOC H
2 X I 2 5 R _/ (ch2 ) He
HN // V_ CONH^HCOOC H
\=J 2 5
Seosta, jossa oli dietyyli-N-(4-amino-2-metyylibentsoyyli)-L-glutamaattia (1 mooliekv.), 2,6-dimetyylipyridiiniä (1,1 mooliekv.) ja propargyylibromidia (1,1 mooliekv.) N,N-dime-tyyliasetamidissa (2 ml per mmooli amiinia), sekoitettiin huoneen lämpötilassa 16 h. Seos kaadettiin veteen, uutettiin etyyliasetaatilla ja orgaaninen faasi pestiin vedellä, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin poistettiin tyhjössä.
Saatu öljy puhdistettiin kromatografisesti piioksidigeelillä ja elutoitiin 30 %:sella etyyliasetaattimetyleenikloridilla.
Tuotteen, dietyyli-N-(4-(prop-2-ynyyliamino)-2-metyylibentso- 2 yyli)-L-glutamaatin (Ile: R = -CH C=CH, X = -CH , m = o 2 3 2) sp. oli 85-87 C ja sen rakenne todettiin alkuaineanalyysin ja NMR-spektrin avulla. Samalla tavoin valmistettiin seu-raavat yhdisteet sopivan alkyloimisaineen vastaavaan amiiniin: 2 ,o % R_ _X_ m_ sp. ( C) Alaviitteet -CH C=CH CL 2 öljy 1 2 -CH C=CH - 1 öljy 2
Elutoitiin 20 %:sella etyyliasetaatti-metyleenikloridilla
Dietyyli-N-(4-amino-2-klooribentsoyyli)-L-glutamaatti valmistettiin seuraavasti:
Sekoitettiin liuokseen, jossa oli dietyyli-N-(2-kloori-4-nitrobentsoyyli)-L-glutamaattia 55 %:sessa etanoli-vedessä (20 ml per mooli) huoneen lämpötilassa, lisättiin natriumve-tykarbonaattia (6 mooliekv.) ja tämän jälkeen vähitellen nat-riumditioniittia (3 mooliekv.) 20 minuutin kuluessa. Kun oli sekoitettu vielä tunnin ajan, poistettiin etanoli tyhjössä ja ie 7 6 7 91 jäännös laimennettiin suolavedellä. Yhdiste uutettiin etyyliasetaattiin ja puhdistettiin uuttamalla takaisin 2-n kloo-rivetyhappoon, neutraloimalla natriumbikarbonaatilla ja uuttamalla uudelleen eetteriin. Eetteriuute kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin saatiin öljy, joka kiteytyi seistessään. Tuotteen, dietyyli-N-(2-kloori-4-aminobentsoyyli)-L-glutamaatin, sp.
o oli 73-75 C ja sen rakenne todettiin alkuaineanalyysin ja NMR-spektrin perusteella.
Dietyyli-N-(2-metyyli-4-aminobentsoyyli)-L-glutamaatti valmistettiin seuraavasti:
Sekoitettuun suspensioon, jossa oli dietyyli-L-glutamaatti- hydrokloridia (1 mooliekv.) tolueenissa (0,5 ml per mmooli) o ja joka oli jäähdytetty lämpötilaan 0 C, lisättiin pyridii-niä (2,5 mooliekv.) ja tämän jälkeen tipoittain liuosta, jossa oli 2-metyyli-4-nitrobentsoyylikloridia (1,5 mooliekv.) liuotettuna tolueeniin (0,7 ml per mmooli) 20 minuutin kuluessa. Sekoittamista jatkettiin vielä 30 min lämpötilassa o 0 C ja tämän jälkeen 1 h huoneen lämpötilassa. Tolueenilla laimentamisen jälkeen uutettiin seosta vedellä, 2-n kloorive-tyhapolla, 5-S:sella natriumvetykarbonaattiliuoksella ja vedellä. Orgaaninen faasi kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin poistettiin tyhjössä. Saatu öljy puhdistettiin kromatografisesti piioksidigeelillä, elutoitiin etyy- o liasetaatti - 60-80 C petrolieetterillä (1:1). Tuotteen, dietyyli-N-(4-nitro-2-metyylibentsoyyli)-L-glutamaatin, sp.
o oli 67-78 C ja sen rakenne todettiin alkuaineanalyysin ja NMR-spektrin perusteella.
Dietyyli-N-(2-metyyli-4-nitrobentsoyyli)-L-glutamaattia hyd-rattiin etanoliliuoksessa (8 ml per mmooli) käyttäen katalyyttinä 10-%:sta hiilellä olevaa palladiumia siksi, kunnes teoreettinen vetymäärä oli kulunut. Reaktioliuos suodatettiin ja liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin saatiin öljy, joka kiteytyi seistessään. Tuotteen, dietyyli-N-(2-metyyli-4-amino-. o bentsoyyli)-L-glutamaatin, sp. oli 98-100 C ja sen rakenne vahvistettiin alkuaineanalyysin ja NMR-spektrin perusteella.
19 7 6791
Esimerkki 6
CH C=CH X COOH
° I 2 (CH2) CH N -M \-CONHCHCOOH Id H N 2
Dietyyli-N-(4-(N-((2-amino-4-hydroksi-6-kinatsolinyyli)metyy-ii)prop-2-ynyyliamino)bentsoyyli)-L-aspartaattia (1 mooliekv.) suspendoitiin etanoli-veteen (1:1) (40 ml per mmooli), käsiteltiin 1-n natriumhydroksidin vesiliuoksella (3 mooliekv,) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 18 h. Lisättäessä 0,1-n vesipitoista kloorivetyhappoa (3 mooliekv.) saatiin geelimäinen sakka, joka puhdistettiin käyttäen kuutta sentri-fugoimis-dekantoimisjaksoa ja uudelleen suspendoimista tislattuun veteen. Lopullinen vesisuspensio jäädytyskuivattiin, jolloin saatiin amorfinen, valkoinen, kiinteä aine. Tuotteen, N-(4-(N-((2-amino-4-hydroksi-6-kinatsolinyyli)metyyli)prop-2-ynyyliamino)bentsoyyli)-L-asparagiinihapon (Id: ei X-ryhmää, m = 1, CB 3737) rakenne vahvistettiin alkuaineanalyysin ja protonien NMR-spektrin perusteella (liuos DMSO-d :ssa).
6
Hydrolyysireaktio edellä mainitussa esimerkissä tapahtuu diesteristä monohappo-monoesterin välityksellä, jota ei eroteta vaan hydrolysoidaan in situ dihapoksi. Samalla tavoin valmistettiin seuraavat yhdisteet hydrolysoimalla vastaavat esterit:
Yhdiste X m Alaviite CB n:o 3737 - 1 10 3739 Cl 2 11 3738 CH 2 12 3 ____- TT ·----- 20 76 7 91 10 NMR DMSO-d :ssa 2,7 (2H, m), 3,1 (1H, t, J 1,5 Hz), 4,3 (2H, d, J 1,5 Hz), 4,7 (3H, m), 6,4 (2H, b), 6,85 (2H, d), 7,2 (1H, d, J 7 Hz), 7,5 (1H, dd, J 7,3 Hz), 7,7 (2H, d), 7,8 jlH, d, J 3 Hz), 8,2 (1H, d).
NMR DMSO-d :ssa 1,95 (2H, m), 2,3 (2H, m), 3,2 (1H, s), 4,3 (3H, m), 4,65 (2H, s), 6,5 (2H, b), 6,7-6,9 (2H, m),
7,15 (1H, d, J 7 Hz), 7,25 (1H, d, J 7 Hz), 7,5 (1H, dd, J
7^3 Hz), 7,8 (1H, d, J 3 Hz), 8,35 (1H, d).
NMR DMSO-d :ssa 2,0 (2H, m), 2,3 (2H, m), 2,4 (3H, s), 3.1 (1H, t, J 1,4 Hz), 4,2 (2H, bs), 4,3 (1H, m), 4,6 (2H, s), 6,1-6,6 (2H, b), 6,6-6,8 (2H, m), 7,15 (1H, d, J 7 Hz), 7,25 (1H, d, J 7 Hz), 7,5 (1H, dd, J 7,3 Hz), 7,8 (1H, d, J 3 Hz), 8.1 (1H, d).
Esimerkki 7
Liuosta, jossa oli 2-amino-6-bromimetyyli-4-hydroksikinatso- liini-hydrobromidia (0,420 g) ja dietyyli-N-(4-(2-fluorietyy- liamino)bentsoyyli)-L-glutamaattia (0,370 g) dimetyyliaset- amidissa (8 ml), sekoitettiin kalsiumkarbonaatilla (0,417 g) o 45 h huoneen lämpötilassa (23 C). Kalsiumkarbonaatti poistettiin suodattamalla celiten lävitse ja liuotin poistettiin o lämpötilassa 40-55 C/0,02 mm. Täten saatu raakatuote liuotettiin 5 %:seen tilavuus/tilavuus kloroformissa lukuunottamatta pientä jäännöstä ja käsiteltiin kromatografisesti piioksidigeelissä (Merck, Art 15111 250 g) ja elutoitiin 5-%:sella EtOH-CHCl^:11a. Tuote, dietyyli-N-(4-(N-((2-ami-no-4-hydroksi-6-kinatsolinyyli)metyyli)-2-fluorietyyliamino)- bentsoyyli)-L-glutamaatti, oli valkoinen kiinteä aine, sp. o 115-120 C (46,3 %). Rakenne vahvistettiin alkuaineanalyysin (C, H, N ja F) perusteella ja NMR-spektroskopian avulla.
Esimerkissä 7 lähtöaineena käytetty amiini voidaan valmistaa seuraavasti:
Dietyyli-N-(4-aminobentsoyyli)-L-glutamaattia (3,22 g) käsi- o teltiin DMF-liuoksessa (40 ml) 17 h lämpötilassa 135 C 2-fluorietyyli-p-tolueenisulfonaatilla (4,36 g) (W.F. Edgell 2i 76791 ja L. Parts, J.Am. Chem. Sos. 77, 4899, (1955) kalsiumkarbonaatin (3,00 g) läsnäollessa. Oli välttämätöntä lisätä lisää reagenssia (4,36 g) 2 h 45 min kuluttua. Kalsiumkarbo-naatti poistettiin suodattamalla celiten lävitse ja liuottimen poistamisen jälkeen tyhjössä liuotettiin jäännös kloroformiin ja saatu liuos pestiin vedellä. Uute kuivattiin (MgSO ) 4 ja väkevöitiin, jolloin saatiin raaka tuote. Tämä puhdistettiin HPLC-menetelmällä piioksidigeeliä käyttäen (Merck, Art 15111) ja käyttäen elutoimisaineena 50:50 kloroformi:petroli- eetteriä. Saatiin valkoisia kiteitä (11,3 %), sp. 105,5-o 106,5 C. Rakenne voitiin vahvistaa alkuaineanalyysin (C, H, N ja F) ja NMR-spektroskopian perusteella.
Esimerkki 8 N-(4-(N-((2-amino-4-hydroksi-6-kinatsolinyyli)metyyli)-2-fluorietyyliamino)bentsoyyli)-L-glutamaattia (0,206 g) sus-pendoitiin seokseen, jossa oli vettä (4,5 ml) ja etanolia (1 ml), ja käsiteltiin 1-n NaOH aq:lla (5 mooliekv.). Ravistettaessa voimakkaasti aikaansaatiin liuos 5 minuutin kuluessa. Liuos kirkastettiin 2 tunnin kuluttua suodattamalla ja pH saatettiin arvoon 4,0 käyttäen 1-n HC1 aq. Tällöin saatiin tuotteen geelimäinen sakka. Se vapautettiin epäorgaanisista ioneista käyttäen kolmea suspensio-sentrifugoimis-dekantoi- misjaksoa. Amorfinen, valkoinen kiinteä aine kuivattiin o o lämpötilassa 70 C tyhjössä (sp. 350 C, jolloin tuote .... o tummeni ja hajosi hitaasti lämpötilasta 245 C alkaen), jolloin saatiin N-(4-(N-((2-amino-4-hydroksi-6-kinatsolinyyli)-metyyli)-2-fluorietyyliamino)bentsoyyli)-L-glutamiinihappo (CB 3731). Saanto 60,1 S. Rakenne voitiin vahvistaa alkuaineanalyysin (C, H, N ja F) perusteella ja spektroskopian avulla (spektri määrättiin 0,1-n NaOH aq:ssa). uv (nm) ( ) maksimit: 307 (29,200), 275 (19,500), 227,5 (49,700); minimit: 279 (19,200), 250 (9,100).
Esimerkin 3 mukaiset yhdisteet tutkittiin in vitro TS-estoai-neina ja solun kasvunestoaineina ja in vivo L1210 tuumoria vastustavina aineina. Koska metotreksaatin (MTX)-vastustus- 22 76791 kyky on tärkeä probleema syövän terapiassa, tutkittiin uudet yhdisteet myös tässä suhteessa. MTX-resistentin solulinjan L1210/R71 poikittaisvastustuskyky, jolla tiedetään olevan kasvaneen DHFR- mutta normaalin MTX siirtymisen, mitattiin viljelmässä ja määrättiin myös yhdisteiden kyky kilpailla merkityn MTX- tai foolihapon kanssa kulkeutumisesta LI210 soluihin .
Entsymologia
Yhdisteet CB 3716 ja CB 3717 liuotettiin molemmat N/10 NaOHsn ja neutraloitiin ennen käyttöä. Log faasin L1210 solujen liuos, jotka oli otettu talteen eläimistä, puhdistettiin osittain TS I - ja Ki-määrityksiä varten sellaisen fosfa-taasin poistamiseksi valmisteista, joka hajottaa dUMPsn deok-siuridiiniksi. (I määritellään siksi estoväkevyydeksi, joka tarvitaan pienentämään TS:n reaktionopeutta 50 %:lla). DHFR puhdistettiin affiniteettikromatografiän avulla ja suoritettiin Ki-määritykset.
Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa 1, jossa on myös suoritettu vertailu 10-propyyliyhdisteen kanssa, joka vastaa yhdisteitä CB 3716 ja 3717.
Taulukko 1
Tymidylaatti- Dihydrofo-
Yhdiste R syntetaasi Ιςη laatti-reduk- _ _ (nM)_ taasi Ki (nM)
Vertailu -CH2-CH2-CH3 170 20 CB 3716 -CH2-CH=CH2 69 27 CB 3717 -CH2~C=CH 5 14
Allyyli- ja propargyyliryhmien esiintyminen 10-asemassa verrattuna propyyliryhmään antaa sellaiset TS-estoarvot, jotka ovat parantuneet noin 3-30-kertaisiksi, kun taas DHFR-estyminen säilyy samaa suuruusluokkaa olevana.
Yhdisteen CB 3717 TS-estovaiktuus karakterisoitiin ja sen todettiin olevan verrattavissa Ν^,Ν^-metyleenitetra-hydrofolaattiin Ki-arvon ollessa suunnilleen 1,1 nM.
il 23 767 91
Soluviljelmä L1210- ja L1210:R71-solut kasvatettiin jatkuvassa sus-pensiokulttuurissa RPMI 1640 väliaineessa, joka sisälsi 10 % hevosen seerumia (Flow Laboratories Irvine, Skotlanti, UK). Solut laimennettiin arvoon 10^/ml ja lisäyksiä (laimennetut väliaineessa ja steriloidut millipore-suodatuksen avulla) suoritettiin ennen kunkin haudon-nan aloittamista. Solulaskennat suoritettiin 24 ja 48 tunnin kuluttua käyttäen parannettua Neubauer-hemokyto-metriä. ID^Q-arvo määritellään siksi lääkeaineen väkevyydeksi, joka tarvitaan pienentämään 48 tunnin kulut-tia suoritettu laskenta-arvo 50 %:ksi vertailunäyttees-tä.
L1210 ja L1210:R7I (MTX-resistantti) soluviljelmien ID^Q-väkevyydet on esitetty alla olevassa taulukossa 2. Lääkeaineiden myrkyllisyys ei ainoastaan lisääntynyt kumpaankin solulinjaan nähden 10-substituentin tyydyt-tymättömyyden kasvaessa, vaan myös L1210:R71 poikittais-resistanssin aste tuli vähemmän huomattavaksi. L1210:R71 on noin 600 kertaa vastustuskykyisempi MTXrään nähden.
Taulukko 2
Yhdiste ID^Q-arvot ( /Um) Poikittaisvastustuskyky L1210 L1210:R71 (ID50 Ll210:R71/ID50 _ _ L1210)_
Vertailu* 33,0 315 10 CB 3716 8,8 100 11 CB 3717 5,0 14 3 ^Yhdiste, joka vastaa CB 3716 ja 3717, jossa R = pro-pyyli.
Yhdisteen CB 3717 myrkyllisyyden muutos voitiin aikaansaada hautomalla samanaikaisesti tymidiinin (10 ^uM) kanssa, mutta ainoastaan osittainen muuttuminen aikaansaatiin käytettäessä foolihappoa kaikissa väkevyyksissä 24 76791 aina 100 ^,uM saakka. Nämä tulokset on esitetty oheenliitettyjen piirustusten kuviossa 1, joka esittää L1210-solujen suojaamista 20 ^uM CB 3717-soluviljelmässä.
• CB 3717 pelkästään? O CB 3717 + foliinihappo 5 ^uM; O CB 3717 + foliinihappo 50 ^uM? CB 3717 + foliinihappo 500 ^UM? A CB 3717 + TdR 1 ^uM; Δ CB 3717 + TdR 10 uM.
Nämä tulokset osoittavat, että TS on CB 3717 pääasiallinen vaikutuskohde erikoisesti, koska sen affiniteetti DHFRjn suhteen on 10 kertaa pienempi kuin TS:n suhteen ja koska on mahdollista aikaansaada todellisuudessa täydellinen L1210 suolujen suojaaminen lisäämällä kymi-diiniä väliaineeseen, kun taas foliinihapon lisääminen ei muuta näiden aineiden vaikutusta korkeitakin väkevyyksiä (100 yum) käytettässä.
Yhdisteet, jotka valmistettiin muissa esimerkeissä, arvioitiin myös samalla tavoin in vitro TS-estoaineina ja solun kasvunestoaineina seuraavin tuloksint (näissä esimerkeissä käytetty TS oli puhdistettu > 2000-kertai-sesti L1210-soluista affiniteettikromatografiän avulla). (Vaikkakaan nämä yhdisteet eivät aikaansaa erittäin hyvää TS-estymistä, on niillä huomattava mielenkiinto syöpää vastustavina aineina, koska niillä on määrätty myrkyllisyys Ll210-solujen suhteen soluviljelmässä).
TS ^50^X *^5o Tyrni— CB Esim. I50 Jf^T (/UH) n‘° n:° (nM) 3717 CB 3717 L1210 tama ver- (suhteel- (kudos- muutos tailu) linen voi- viljel- (viljel- _makkuus)_mä)_mässä) 3717 3,4 vaihte- - 1 6,5-8,5 kyllä lu 6-48 vaihte- (kts. lu ei seur. huomat- sara- tava kettä ) 25 76791 (taulukon jatkoa) TS TS (I )x ID Tymidiinin . , 50 , 50^ aiheuttama CB Esim. I I A (I ) ( uM) muutos .50 50 50 / (viljel - n:o n:o (n M) (CB CB 3717 L1210 massa) 3717 Tsuhteel- (kudos-vertai- linen voi- viljel-lu) makkuus) mä) 3721 1,2 >3,000 48 >62 52 3731 8 95 14 6,8 16 3737 6 66 41 1,6 >100 3748 5 100 3738 6 47 41 1,1 24 3749 5 100 3739 6 30 14 2,1 17 3750 5 18
Si i rtyrni stutkimukset
Siirtymistutkimukset suoritettiin yhdisteellä CB 3717, joka edustaa keksinnön mukaisia yhdisteitä, hautomalla soluja merkityn aineen läsnäollessa, poistamalla saadun aineen määräsuuruisia osia, erottamalla ja pesemällä solut sentrifugoimal1 a ja laskemalla lukumäärä.
Yhdisteen CB 3717 erilaisten väkevyyksien vaikutus tässä väliaineessa trituoidun metoktreksaatin ja tritu- ___________ - Γ" __ 26 7 6 7 91 oidun foolihapon kuljettamiseksi on esitetty oheenliitettyjen piirustusten kuviossa 2.
• 4 yUM. MTX; A 4 ^uM foolihappo
Kummankin näiden yhdisteen siirtyminen estyi yhdisteen CB 3717 vaikutuksesta.
Täten CB 3717 ilmeisesti poistaa vaikeudet käyttää meto-treksaattia, johon resistanssi voi muodostua lisääntyneen solujen DHFR-pitoisuuden johdosta ja johtuen sen solukalvon siirtymismekanismin pienenemisestä, joka vastaa sekä metotreksaatti- että tetrahydrofolaatti-johdannaisten siirtymistä. CB 3717 kytotoksinen sijainti on TS eikä DHFR, ja siirtymistutkimukset osoittavat, että tämä yhdiste voidaan ilmeisesti kuljettaa samaa kuljetusrataa pitkin, jota käytetään metotreksaatin ja myös foolihapon kysymyksessä ollessa, koska CB 3717 aikaansai annoksesta riippuvan kummankin näiden aineen siirtymisen pienenemisen.
L1210 tuumorin omaavien eläinten käsittely Li210 tuumori aikaansaatiin tavanomaiseen tapaan DBA2-hiiriin. Kokeita varten istutettiin 5 x 10^ solua i.p. naaraspuolisiin C57B1 x DBA2F1 hybridihiiriin 3 vuorokautta ennen käsittelyä, jolloin aikaansaatiin noin 2 x 106 solun suuruinen tuumori käsittelyajankontana.
Yhdiste CB 3717 liuotettiin N/10 NaOH:n, laimmennettiin sopivaan tilavuuteen ja pH säädettiin arvoon 8,5 ennen i.p. injektiota.
Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa 3: 27 7 6 7 91
Taulukko 3; Terapeuttiset tulokset CB 3717 käsittelystä hiirissä, joissa on L1210 askiittinen tuumori .........
Sulkeilla varustetut ryhmät osoittavat erillisiä kokeita.
Yhdiste Eläi- Annostus- Keskimääräi- Pitkän aikaa CB 3717 miä tapa sen elinajan eläneet eläi- annos per kasvu-% met (mg/kg) ryhmä_(>200 vrk) f 80 5 yksi annos 14 0 \l60 5 yksi annos 32 0 [8 5 vrk. x 5 8 0 |l6 5 vrk. x 5 13 0 16 5 vrk. x 5 29 0 32 5 vrk. x 5 62 0 64 5 vrk. x 5 72 0 JL28 5 vrk. x 5 >1200 4 /125 10 vrk. x 5 >1200* 9 (200 10 vrk. x 5 >1200* 9 χ katso kuviota 3
Kuvio 3 esittää sellaisten hiirien eloonjäännin, joissa on L1210-tuumori ja joihin on injektoitu CB 3717.
Ei käsittelyä (10 eläintä)-MTX vertailu Q Ei käsittelyä (20 eläintä)-CB 3717 vertailu (Eläimet injektoitiin 20 mM NaHCO^ puskurilla 0,4 ml vrk. x 5 vrk.).
• MTX 3 mg/kg vrk. x 5 (10 eläintä) A CB 3717 125 mg/kg vrk. x 5 (10 eläintä) Δ CB 3717 200 mg/kg vrk. x 5 (10 eläintä) CB 3717 ja MTX:llä käsiteltyjen eläimien eloonjäämisen eroavaisuus on erittäin selvä p <0,001 käytettäessä - ---- Γ ___ 28 7 6 7 91 logaritmista arvosteluasteikkoa.
Yksittäiset yhdisteen CB 3717 annokset aina 160 mg/kg saakka eivät olleet myrkyllisiä ja aikaansaivat erittäin vähän terapeuttista vaikutusta. Viiden päivittäisen annoksen ryhmä aikaansai kasvua keskimääräisessä elämisajassa/ joka oli annoksesta riippuvainen (katso taulukkosa 3). Annosten ollessa 125 ja 200 mg/kg jäi eloon yhdeksän hiirtä kymmenestä pitkäksi ajaksi ( > 120 vrk.) (katso kuviota 3).
Lääkeaineen saatavuus ja sen liukoisuus estivät suurempien annosten käytön. Koska injektioliuoksia ei voitu neutraloida pH-arvoon 8/5 samalla liukoisuuden säilyttäen, injektoitiin vastaavat vertailunäytteet yhdessä bikarbonaatin kanssa pH-arvossa 8,5. Missään vertailuryhmässä ei esiintynyt eliniän kasvua. Vertailutarkoi-tuksissa käsiteltiin eläimien muita ryhmiä erilaisilla metotreksaattiannoksilla samaa käsittelyjärjestystä käyttäen. Metotreksaatin optimlannos 3 mg/kg aikaansai 71 %:n keskimääräisen eliniän kasvun, mutta ainoastaan 2/10 pitkä aikaa elossa pysyvää eläintä.
Näissä eläimissä ei esiintynyt huomattavaa painon menetystä tai muita myrkyllisyysmerkkejä suoritettaessa käsittely lääkeaineen avulla siten kuin oheenliitettyjen piirustusten kuviosta 4 ilmenee, jossa on esitetty 10 hiiren muodostaman ryhmän ruumiinpainon muutokset kun näitä hiiriä käsiteltiin viidellä päivittäisellä annoksella CB 3717 määrässä 125 mg/kg/vrk. (·): 200 mg/kg/vrk.
(A)$ käsittelemättömiä vertailueläimiä, joilla tuumori (·)$ käsitellyt vertailueläimet ilman tuumoria (o).
Koetulokset, jotka sisältävät L1210 tuumorin omaavien eläinten käsittelyn, osoittavat huomattavaa eläinten pitkäaikaista eliniän kasvua verrattuna sellaisiin eläimiin, joita on käsitelty optimaalisesti metotreksaatin avulla.
Claims (2)
1. Analogiförfarande för framställning av ett 2-amino- 4-hydroxikinazolinderivat med anticanceraktivitet och med formeln 0 r HN CH - N—L Λ CO-Y xjU 2 y/ u, NH
2 (X) n väri R Mr 1. en omättad kolvätegrupp med rak eller grenad kedja som innehäller 2-6 kolatomer, eller 2. en mättad eller omättad kolvätegrupp med rak eller grenad kedja som innehäller upp tili 6 kolatomer och som är substituerad med ätminstone en fluoratom; n Mr noll eller ett heltal 1-4, X eller, da n är ett heltal pä minst 2, envar av X betecknar skilt för sig en halogenatom eller en C^-C^-alkyl-, aryl-, aralkyl-, C^-C^-alkoxi- eller NO^-grupp, och Y är en grupp med formeln a) -NH-CH-COOH CH -COOH (L-aspartat) 2 b) -NH-CH-COOH CH -CH -COOH (L-glutamat) 2 2 eller c) -NH-CH-COOH Γ — CH -CH -CO--NH-CH-COOH 2 2 CH -CH -CO--OH 2 2 t- _ m 33 7 6 7 91 väri m är ett heltal som är minst 1 (poly-L-glutamat), eller ett farmaceutiskt acceptabelt sait eller ester därav, kännetecknat av att man A) avlägsnar skyddet helt eller delvis fran en förening med formeIn: O R2 - N—C CO-Y' R NH (X) n 2 väri X och n har ovan angiven betydelse, R är ekvivalent med den ovan definierade gruppen R eller är en grupp R i skyddad form, R är väte eller en aminoskyddsgrupp och Y' är en grupp med formeln a), b) eller c), vilka formler angi-vits ovan i samband med definitionen av Y, eller ett sait av dessa grupper, eller dessa grupper är i helt eller delvis skyddad form, varvid skyddsgruppen i gruppen Y' är en ester-grupp eller en annan skyddsgrupp, förutsatt att föreningen med formeln Ia innehäller minst en skyddsgrupp och att, ifall av-lägsnandet av skyddet utföres genom att avlägsna flera än en skyddsgrupp, avlägsnandet av skyddet kan genomföras samtidigt eller i vilken som heist ordning, eller B) kopplar en förening med formeln O Il CH X" mj || i (III) R NH väri R har den under punkt A) angivna betydelsen och X" är en avgängsgrupp, med en förening med formeln
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB7943715 | 1979-12-19 | ||
| GB7943715 | 1979-12-19 | ||
| GB8006813 | 1980-02-28 | ||
| GB8006813 | 1980-02-28 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI803957L FI803957L (fi) | 1981-06-20 |
| FI76791B true FI76791B (fi) | 1988-08-31 |
| FI76791C FI76791C (fi) | 1988-12-12 |
Family
ID=26273917
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI803957A FI76791C (fi) | 1979-12-19 | 1980-12-18 | Foerfarande foer framstaellning av 2-amino-4-hydroxikinazolinderivat med anticanceraktivitet. |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4447608A (fi) |
| EP (1) | EP0031237B1 (fi) |
| AU (1) | AU543237B2 (fi) |
| CA (1) | CA1184900A (fi) |
| DE (1) | DE3069468D1 (fi) |
| DK (1) | DK157019C (fi) |
| ES (3) | ES8300716A1 (fi) |
| FI (1) | FI76791C (fi) |
| GB (1) | GB2065653B (fi) |
| GR (1) | GR72847B (fi) |
| HU (1) | HU193505B (fi) |
| IE (1) | IE51188B1 (fi) |
| IL (1) | IL61756A (fi) |
| NO (1) | NO154919C (fi) |
| NZ (1) | NZ195876A (fi) |
| PT (1) | PT72232B (fi) |
| YU (1) | YU321180A (fi) |
Families Citing this family (73)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5026851A (en) * | 1985-03-08 | 1991-06-25 | The Trustees Of Princeton University | Pyrido[2,3-]pyrimidine derivatives |
| US4927828A (en) * | 1985-03-08 | 1990-05-22 | The Trustees Of Princeton University | Diastereoisomeric tetrahydropyrido-(2,3,d) pyrimidine derivatives |
| US4684653A (en) * | 1985-03-08 | 1987-08-04 | The Trustees Of Princeton University | Pyrido(2,3-d)pyrimidine derivatives |
| GB8513754D0 (en) * | 1985-05-31 | 1985-07-03 | Jones T R | Anti-cancer quinazoline derivatives |
| GB8607683D0 (en) * | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Ici Plc | Anti-tumor agents |
| US5187167A (en) * | 1986-03-27 | 1993-02-16 | Imperial Chemical Industries Plc | Pharmaceutical compositions comprising quinazolin-4-one derivatives |
| US4833145A (en) * | 1986-06-30 | 1989-05-23 | The Trustees Of Princeton University | 4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahydropyrido[2,3-d]pyrimidine derivatives |
| US4902796A (en) * | 1986-10-20 | 1990-02-20 | The Trustees Of Princeton University | 6-alkenyl and ethynyl derivatives of 2-amino-4-hydroxypyrido[2,3-d]pyrimidines |
| US4818819A (en) * | 1986-10-20 | 1989-04-04 | The Trustees Of Princeton University | Process for the preparation of fused pyridine compounds |
| GB8707053D0 (en) * | 1987-03-25 | 1987-04-29 | Ici Plc | Anti-tumour agents |
| US4857530A (en) * | 1987-11-03 | 1989-08-15 | Warner-Lambert Company | Substituted quinazolinones as anticancer agents |
| GB8727737D0 (en) * | 1987-11-26 | 1987-12-31 | Ici Plc | Antitumour agents |
| JP2830008B2 (ja) * | 1988-04-01 | 1998-12-02 | 武田薬品工業株式会社 | 縮合ピリミジン誘導体 |
| US5223620A (en) * | 1988-04-01 | 1993-06-29 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Pyrido[2,3-d]pyrimidine compounds useful as intermediates |
| GB8809978D0 (en) * | 1988-04-27 | 1988-06-02 | Ici Plc | Anti-tumour agents |
| EP0365763A1 (en) * | 1988-09-30 | 1990-05-02 | Agouron Pharmaceuticals, Inc. | Antiproliferative cyclic compounds |
| GB8829296D0 (en) * | 1988-12-15 | 1989-01-25 | Ici Plc | Anti-tumour compounds |
| US5252573A (en) * | 1988-12-15 | 1993-10-12 | Imperial Chemical Industries Plc | Anti-tumor agents |
| US5028608A (en) * | 1989-12-11 | 1991-07-02 | The Trustees Of Princeton University | N-(6-Amino-(pyrrolo(2,3-d)pyrimidin-3-ylacyl) )-glutamic acid derivatives |
| US5160727A (en) * | 1990-02-13 | 1992-11-03 | Warner-Lambert Company | Tumor cell sensitization method using quinazolinedione derivatives |
| US5286726A (en) * | 1990-04-12 | 1994-02-15 | The Regents Of The University Of Michigan | Difluoroglutamic acid conjugates with folates and anti-folates for the treatment of neoplastic diseases |
| AU640016B2 (en) * | 1990-05-30 | 1993-08-12 | Imperial Chemical Industries Plc | Hydroquinazoline derivatives |
| US6762188B1 (en) | 1990-06-19 | 2004-07-13 | Smithkline Beecham Corporation | Pharmaceutically active benzoquinazoline compounds |
| GB9013615D0 (en) | 1990-06-19 | 1990-08-08 | Wellcome Found | Pharmaceutical compounds |
| GB9105771D0 (en) * | 1991-03-19 | 1991-05-01 | Cancer Res Inst Royal | Anti-cancer compounds |
| US5145854A (en) * | 1991-11-27 | 1992-09-08 | Nair Madhavan G | 1-formyl-5,8,10-trideazafolates |
| GB9205320D0 (en) * | 1992-03-11 | 1992-04-22 | Ici Plc | Anti-tumour compounds |
| GB9205907D0 (en) * | 1992-03-18 | 1992-04-29 | Cancer Res Inst Royal | Anti-cancer compounds |
| US5430148A (en) * | 1992-03-31 | 1995-07-04 | Agouron Pharmaceuticals, Inc. | Antiproliferative quinazolines |
| CH684644A5 (de) * | 1992-07-13 | 1994-11-15 | Eprova Ag | 5,10-Methylentetrahydrofolsäure-Cyclodextrin-Einschlussverbindungen. |
| GB9223352D0 (en) * | 1992-11-06 | 1992-12-23 | Ici Plc | Tricyclic compounds |
| US5821231A (en) * | 1993-12-06 | 1998-10-13 | Cytel Corporation | CS-1 peptidomimetics, compositions and methods of using same |
| WO1995015973A1 (en) * | 1993-12-06 | 1995-06-15 | Cytel Corporation | Cs-1 peptidomimetics, compositions and methods of using the same |
| EP0737204A4 (en) * | 1993-12-06 | 1999-06-23 | Cytel Corp | CS - 1 peptide mimetics, compositions and methods of their use |
| US5770573A (en) * | 1993-12-06 | 1998-06-23 | Cytel Corporation | CS-1 peptidomimetics, compositions and methods of using the same |
| US5804396A (en) * | 1994-10-12 | 1998-09-08 | Sugen, Inc. | Assay for agents active in proliferative disorders |
| US5837524A (en) * | 1994-12-15 | 1998-11-17 | Sugen, Inc. | PYK2 related polynucleotide products |
| US5837815A (en) * | 1994-12-15 | 1998-11-17 | Sugen, Inc. | PYK2 related polypeptide products |
| US5593999A (en) * | 1995-06-07 | 1997-01-14 | Nair; Madhavan G. | Non-classical folate analogue inhibitors of glycinamide ribonucleotide formyltransferase (GARFT) |
| EP0832073B1 (en) * | 1995-06-07 | 2002-01-16 | Sugen, Inc. | Quinazolines and pharmaceutical compositions |
| US7119174B2 (en) * | 1995-12-18 | 2006-10-10 | Sugen, Inc. | Diagnosis and treatment of AUR1 and/or AUR2 related disorders |
| US6716575B2 (en) | 1995-12-18 | 2004-04-06 | Sugen, Inc. | Diagnosis and treatment of AUR1 and/or AUR2 related disorders |
| JP2001505779A (ja) * | 1996-12-11 | 2001-05-08 | スージェン・インコーポレーテッド | Ｐｙｋ２関連産物および方法 |
| US6818440B2 (en) * | 1997-04-28 | 2004-11-16 | Sugen, Inc. | Diagnosis and treatment of alk-7 related disorders |
| US6228641B1 (en) | 1997-05-20 | 2001-05-08 | Sugen, Inc. | Diagnosis and treatment of PTP04 related disorders |
| US7115710B2 (en) * | 1997-06-11 | 2006-10-03 | Sugen, Inc. | Diagnosis and treatment of PTP related disorders |
| US6342593B1 (en) | 1997-06-11 | 2002-01-29 | Sugen, Inc. | Diagnosis and treatment of ALP related disorders |
| US6388063B1 (en) | 1997-06-18 | 2002-05-14 | Sugen, Inc. | Diagnosis and treatment of SAD related disorders |
| US6495353B1 (en) | 1998-01-21 | 2002-12-17 | Sugen, Inc. | Human orthologues of wart |
| AU3642499A (en) * | 1998-04-14 | 1999-11-01 | Sugen, Inc. | Ste20-related protein kinases |
| US6861442B1 (en) | 1998-12-30 | 2005-03-01 | Sugen, Inc. | PYK2 and inflammation |
| GB9904275D0 (en) | 1999-02-24 | 1999-04-21 | Cancer Res Campaign Tech | Anti-cancer compounds |
| US6677382B1 (en) | 1999-09-23 | 2004-01-13 | Pharmacia Corporation | Substituted N,N-bis-phenyl aminoalcohol compounds useful for inhibiting cholesteryl ester transfer protein activity |
| US6521607B1 (en) | 1999-09-23 | 2003-02-18 | Pharmacia Corporation | (R)-chiral halogenated substituted N-phenoxy N-phenyl aminoalcohol compounds useful for inhibiting cholesteryl ester transfer protein activity |
| US6451830B1 (en) | 1999-09-23 | 2002-09-17 | G.D. Searle & Co. | Use of substituted N,N-disubstituted non-fused heterocyclo amino compounds for inhibiting cholesteryl ester transfer protein activity |
| US7364866B2 (en) * | 1999-10-22 | 2008-04-29 | Pharmacia & Upjohn Company | Drosophila G protein coupled receptors, nucleic acids, and methods related to the same |
| EP1222273A2 (en) | 1999-10-22 | 2002-07-17 | PHARMACIA & UPJOHN COMPANY | Drosophila g protein coupled receptors, nucleic acids, and methods related to the same |
| US20030162223A1 (en) * | 1999-10-22 | 2003-08-28 | Lowery David E. | Drosophila G protein coupled receptors, nucleic acids, and methods related to the same |
| AU784543B2 (en) * | 1999-11-16 | 2006-04-27 | Pharmacia & Upjohn Company | Novel G protein-coupled receptors |
| US20030082534A1 (en) * | 1999-11-16 | 2003-05-01 | Peter Lind | Novel G protein-coupled receptors |
| US6143776A (en) * | 2000-02-02 | 2000-11-07 | Sunesis Pharmaceuticals, Inc. | Tosylproline analogs as thymidylate synthase inhibitors |
| EP1265925A2 (en) * | 2000-02-23 | 2002-12-18 | PHARMACIA & UPJOHN COMPANY | G protein-coupled receptors |
| US20030027308A1 (en) * | 2000-05-30 | 2003-02-06 | Sugen Incorporated | Novel human protein phosphatases identified from genomic sequencing |
| CA2321345A1 (fr) * | 2000-10-02 | 2002-04-02 | Abdelbast Guerfi | Utilisation du graphite dans un composite pour reduire l'accumulation de glace |
| US20040157306A1 (en) * | 2000-11-13 | 2004-08-12 | Sugen Incorporated | Mammalian protein phosphatases |
| US20050069976A1 (en) * | 2001-02-14 | 2005-03-31 | Peter Lind | Protein-coupled receptor |
| DK1420809T3 (da) | 2001-08-31 | 2011-12-19 | Btg Int Ltd | Anvendelse af cyclopenta[G]quinazolinderivater til behandling af cancer |
| ATE483722T1 (de) | 2001-08-31 | 2010-10-15 | Btg Int Ltd | Antikrebs-cyclopentaag chinazoline-derivate |
| JP2005509418A (ja) * | 2001-11-13 | 2005-04-14 | スージェン・インコーポレーテッド | 哺乳動物蛋白質ホスファターゼ |
| US7537774B2 (en) * | 2005-12-23 | 2009-05-26 | Orion Therapeautics, Llc | Therapeutic formulation |
| US20110008347A1 (en) * | 2006-12-01 | 2011-01-13 | Agency For Science ,Technology And Research | Cancer-related protein kinases |
| WO2008125617A2 (en) | 2007-04-11 | 2008-10-23 | Merck Eprova Ag | 18f-labelled folates |
| US8273617B2 (en) | 2009-09-30 | 2012-09-25 | Suvolta, Inc. | Electronic devices and systems, and methods for making and using the same |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1021196A (en) * | 1964-02-20 | 1966-03-02 | Parke Davis & Co | Novel amino acids and means for producing the same |
| US3471498A (en) * | 1967-08-11 | 1969-10-07 | Parke Davis & Co | Certain n-p-((2,4-diamino-6-quinazolinyl)-methyl)benzoylamino acids |
-
1980
- 1980-12-16 EP EP80304539A patent/EP0031237B1/en not_active Expired
- 1980-12-16 GB GB8040202A patent/GB2065653B/en not_active Expired
- 1980-12-16 DE DE8080304539T patent/DE3069468D1/de not_active Expired
- 1980-12-17 HU HU803031A patent/HU193505B/hu unknown
- 1980-12-18 CA CA000367126A patent/CA1184900A/en not_active Expired
- 1980-12-18 IE IE2672/80A patent/IE51188B1/en unknown
- 1980-12-18 NO NO803868A patent/NO154919C/no unknown
- 1980-12-18 AU AU65495/80A patent/AU543237B2/en not_active Ceased
- 1980-12-18 DK DK540080A patent/DK157019C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-12-18 IL IL61756A patent/IL61756A/xx unknown
- 1980-12-18 FI FI803957A patent/FI76791C/fi not_active IP Right Cessation
- 1980-12-18 PT PT72232A patent/PT72232B/pt unknown
- 1980-12-18 NZ NZ195876A patent/NZ195876A/xx unknown
- 1980-12-18 YU YU03211/80A patent/YU321180A/xx unknown
- 1980-12-18 GR GR63713A patent/GR72847B/el unknown
- 1980-12-18 ES ES497884A patent/ES8300716A1/es not_active Expired
-
1981
- 1981-12-30 ES ES508453A patent/ES508453A0/es active Granted
- 1981-12-30 ES ES508454A patent/ES508454A0/es active Granted
-
1982
- 1982-10-19 US US06/435,215 patent/US4447608A/en not_active Expired - Lifetime
-
1984
- 1984-03-20 US US06/591,566 patent/US4564616A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL61756A (en) | 1987-02-27 |
| EP0031237A1 (en) | 1981-07-01 |
| DE3069468D1 (en) | 1984-11-22 |
| AU543237B2 (en) | 1985-04-04 |
| PT72232A (en) | 1981-01-01 |
| IE802672L (en) | 1981-06-19 |
| EP0031237B1 (en) | 1984-10-17 |
| FI803957L (fi) | 1981-06-20 |
| ES497884A0 (es) | 1982-11-01 |
| NZ195876A (en) | 1983-11-18 |
| YU321180A (en) | 1983-06-30 |
| GR72847B (fi) | 1983-12-07 |
| IL61756A0 (en) | 1981-01-30 |
| HU193505B (en) | 1987-10-28 |
| PT72232B (en) | 1981-11-02 |
| GB2065653B (en) | 1983-03-09 |
| US4447608A (en) | 1984-05-08 |
| CA1184900A (en) | 1985-04-02 |
| US4564616A (en) | 1986-01-14 |
| DK157019C (da) | 1990-03-26 |
| IE51188B1 (en) | 1986-10-29 |
| DK157019B (da) | 1989-10-30 |
| GB2065653A (en) | 1981-07-01 |
| ES8308314A1 (es) | 1983-09-01 |
| AU6549580A (en) | 1981-06-25 |
| DK540080A (da) | 1981-06-20 |
| ES8300716A1 (es) | 1982-11-01 |
| NO803868L (no) | 1981-06-22 |
| FI76791C (fi) | 1988-12-12 |
| NO154919B (no) | 1986-10-06 |
| ES508453A0 (es) | 1983-09-01 |
| NO154919C (no) | 1987-01-14 |
| ES8307762A1 (es) | 1983-08-01 |
| ES508454A0 (es) | 1983-08-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI76791B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av 2-amino-4-hydroxikinazolinderivat med anticanceraktivitet. | |
| Rewcastle et al. | Potential antitumor agents. 61. Structure-activity relationships for in vivo colon 38 activity among disubstituted 9-oxo-9H-xanthene-4-acetic acids | |
| EP0204529B1 (en) | Anti-cancer quinazoline derivatives | |
| AU753716B2 (en) | Cyclin dependent kinase inhibitors | |
| NZ251804A (en) | Aromatic quinazoline derivatives and medicaments | |
| WO1998008382A1 (en) | Nonclassical pyrrolo[2,3-d]pyrimidine antifolates | |
| RU2266280C2 (ru) | Замещенные производные n-бензилиндол-3-ил-глиоксиловой кислоты, обладающие противоопухолевым действием (варианты), их кислотно-аддитивные соли (варианты), фармацевтический препарат, фармацевтическая форма | |
| CA1340792C (en) | Pyrido[2,3-d]pyrimidine deratives | |
| AU667568B2 (en) | Process for preparing 5-substituted pyrrolo{2,3-d}pyrimidines | |
| US5574039A (en) | Antiproliferative compounds having nitrogen-containing tricyclic ring systems and phenyl substituents | |
| US5128345A (en) | Carcinostatic composition comprising indolquinolines | |
| CA2583437C (en) | Novel inhibitors of folic acid-dependent enzymes | |
| WO2020077944A1 (zh) | 嘌呤系列衍生物及其制备方法和用途 | |
| Shcherbakov et al. | Modification of polyfluoro-containing 3-(ethoxycarbonyl) flavones by biogenic amines and amino acids | |
| WO1992005173A1 (en) | Substituted tricyclic compounds | |
| CN102229563A (zh) | 4-氨基喹啉衍生物及其制备方法和用途 | |
| Rosowsky et al. | Methotrexate analogs. 16. Importance of the side-chain amide carbonyl group as a structural determinant of biological activity | |
| Makowski et al. | Quinazoline antifolate thymidylate synthase inhibitors: Replacement of glutamic acid by aminophosphonic acids | |
| KR100267595B1 (ko) | 신규한 이소퀴놀린계 항암 활성 화합물 | |
| JPH0512347B2 (fi) | ||
| JPH06228139A (ja) | 三環結合ヒドロキシグアニジン、その製造法及びそれを含む抗癌組成物 | |
| Levine | THE SYNTHESIS AND CHEMISTRY OF PYRIMIDO (5, 4-B) QUINOLINES--A NEW CLASS OF COMPOUNDS STRUCTURALLY RELATED TO REBOFLAVIN |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: NATIONAL RESEARCH DEVELOPMENT |