FI56317C - Foerfarande foer isolering av tymosin alfa1 med immunitetpotentierande verkan - Google Patents
Foerfarande foer isolering av tymosin alfa1 med immunitetpotentierande verkan Download PDFInfo
- Publication number
- FI56317C FI56317C FI773221A FI773221A FI56317C FI 56317 C FI56317 C FI 56317C FI 773221 A FI773221 A FI 773221A FI 773221 A FI773221 A FI 773221A FI 56317 C FI56317 C FI 56317C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- buffer
- glu
- lys
- mercaptoethanol
- tris
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/57581—Thymosin; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
I- "Ti . . KU ULUTUSJ U LKAISU _ _ _ . „ ^ (11) UTLÄGGNI NGSSKRIFT 5 63 1 7 C (4S) Patentti myönnetty 10 01 1930 Patent oieddelat
(5,) KA gj K
SUOMI—FINLAND OT Patenttihakemus — PatentaneBknlng 77 3221 (22) Hakemlipilvl— AnsSknlngsdag 28.10.77 ^ ^ ^ (23) Alkupilvi — Glltlghetsdag 28.10.77 (41) Tullut julklaakal — Bllvlt offantflg 29.. 78 hunttl· |. r.M<Mrih.nitu. NiMMk«p«»n pm-
Patent- och registerstyrelsan ' Anaökan utligd och utl.skrtften publkerad 28.09.79 (32)(33)(31) Fyydstty etuoikeus — Begird prlorltat 28.10.76 08.02.77 USA(us) 736638, 766638 (71) F. Hofflnann-La Roche & Co. Aktiengesellschaft, CH-U002 Basel, Sveitsi-Schweiz(CH), The University of Texas System,. Board of Regents, Austin,
Texas, USA(US) (72) Allan L. Goldstein, Galveston·, Texas, Teresa L.K. Low, Galveston, Texas, Chun-Yen Lai, Clifton, N.J., Su-Sun Wang, Bloomfield, N.J., USA(US) (7^+) 0y Roister Ab (5^) Menetelmä immuniteettia tehostavan tymosiini CY·^:n eristämiseksi - Förfarande för isolering av tymosin med immunitetpotentierande verkan
Nykyään on yleisesti tunnettu tosiasia, että kateenkorvarauhasella on keskeinen merkitys ihmisen ja eläimen immuunisysteemin kehittymiseen ja vanhenemiseen. Vaikkakin vielä on olemassa hyvin vähän tietoa molekyylitapahtumista, joiden avulla kateenkorvarauhanen kontrolloi T-solujen kehittymistä, näyttää siltä, että hormoo-nit säätävät olennaista osaa tästä mekanismista. Kateenkorvarauhanen tuottaa poly-peptidejä, joita kutsutaan tymosiiniryhmäksi ja mahdollisesti joukon muita käteenkö rvahormoone ja ja/tai kateenkorvaan vaikuttavia tekijöitä, joilla on tärkeä merkitys T-solujen kehittymisessä, erilaistumisessa ja toiminnassa. Nyt on todettu, että tymosiini saa aikaan T-solujen erilaistumisen ja vahvistaa immunologisia toimintoja geneettisesti ilman kateenkorvarauhasta olevilla hiirillä, täysikasvuisilla hiirillä, joilta on kateenkorva poistettu, NZB-hiirillä, joilla on voimakkaita itseimmuunireaktioita, hiirillä, joilla on kasvain ja hiirillä, jotka sairastavat kaseiinin aiheuttamaa amyloidi-tautia.
56317
Julkaisuista Proc. Nat. Acad. Sei. USA , 725 (1977) ja Annals N.Y. Acad.
Sei. 2kSt 125 (1975) on tunnettua, että tymusfraktio 5 on tehokas immuniteettia tehostava valmiste, joka voi vaikuttaa kuten itse kateenkorvarauhanen immuunitoi-mintojen palauttamiseen yksilöillä, joilla ei ole kateenkorvarauhasta ja/tai yksilöillä, joilla ei ole immuniteetti-systeemiä. Kateenkorvafraktiolla 5 suoritetut pitkäaikaiset kliiniset kokeet näyttävät vahvistavan olettamusta, että tymosiini kohottaa T-solujen lukumäärää sekä lapsilla, joilla esiintyy kateenkorvasta johtuvaa primaarista immuniteettidefektiä että myös syöpää sairastavilla potilailla, joilla on rajoitettu immuunitorjunta.
Analyyttisin menetelmin on voitu osoittaa, että kateenkorvafraktio 5 koostuu IO-15 pääkomponentista ja 20 tai useammasta sivukomponentista, joiden molekyylipaino on 1000-15000.
Esilläoleva keksintö koskee tapaa valmistaa puhtaana kateenkorvafraktiossa 5 esiintyvää hapanta polypeptidiä, jota nimitetään tymosiini ojiksi ja jonka aminohapposekvenssi on pystytty selvittämään. Tymosiini :llä on erilaisissa in vitro-ja in vivo-testeissä, joita pidetään mittana T-solujen erilaistumiselle ja toiminnalle, 10-1 000-kertainen aktiviteetti verrattuna kateenkorvafraktioon 5·
Tymosiini 0(^:n molekyylipaino on 3108, sen pl on alueella ^,0-1*,3 (isoelek-trinen fokusointi geelissä pH-alueella 3-5) ja sen aminohapposekvenssi on seuraava: (N-Asetyyli)-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-
Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-OH.
Esimerkki
Tymosiini βί^:η eristäminen ja valmistus puhtaana keksinnön mukaisesti tymo-siinifraktiosta 5 suoritetaan ioninvaihtokromatografian ja geelisuodatuksen kombinaatiolla seuraavasti: (a) Lyofilisoitu kateenkorvafraktio 5 kromatografoidaan pylväässä, joka koostuu karboksimetyyli-selluloosasta puskurissa, joka sisältää 10mM natriumase-taattia ja 1,0 mM 2-merkaptoetanolia, ja jonka pH on 5,0, jolloin pylväs pestään ensin tällä puskurilla ja sitten eluoidaan lineaarigradientilla, joka koostuu tästä puskurista ja tämän puskurin ja 1,0 M natriumkloridiliuoksen seoksesta.
(b) Ensimmäinen kohdan (a) mukaan saatu proteiinipiikki fraktioidaan dekstraa-nigeelipylväällä (Sephadex-G-25, valmistaja Pharmacial Fine Chemicals AB, Uppsala), käyttäen steriiliä vettä.
(e) Toinen kohdan (b) mukaan saatu proteiinipiikki kromatografoidaan pylväässä, joka koostuu 2-di-etyyliaminoetyyli-selluloosasta (DE-32, myyjä H. Reeve Angel & Co. Ltd., London) 50 mM:ssa tris-HCl/ 1,0 mM:lla 2-merkaptoetanoli-puskuria, jonka pH-arvo on 8,0, jolloin ensin eluoidaan tällä puskurilla ja sitten lineaari-gradi-entilla, joka koostuu 1,3 litrasta tätä puskuria ja 1,3 litrasta tätä puskuria, joka sisältää 0,8 M natriumkloridia.
3 56317 (d) Ne fraktiot, jotka sisältävät ensimmäisen kuudenneksen kohdan (c) mukaan saadusta proteiinipiikistä, yhdistetään ja puhdistetaan edelleen dekstraanigeeli-pylväällä (Sephadex G-75» valmistaja Pharmacia Fine Chemicals AB, Uppsala) puskurissa, joka koostuu 6,0 M:sta guanidiinihydrokloridia ja 10 mMtsta tris'ia, jonka pH-arvo on 7,5· (e) Lopuksi suoritetaan suolanpoisto kohdan (d) mukaan saadun proteiinipii-kin keskimmäisistä fraktioista dekstraanigeelipylväällä (Sephadex G-10, valmistaja Pharmacia Fine Chemicals AB, Uppsala) käyttäen steriiliä vettä.
Näin saatu, puhdistettu proteiinifraktio (saanto 0,6 %) on identifioitu ty-mosiini ^iksi, jolla on edellä ilmoitettu aminohapposekvenssi.
Seuraava taulukko osoittaa tymosiini o(^ :n 10-1000 suuremman biologisen aktiviteetin verrattuna kateenkorvafraktio 5 biologiseen aktiviteettiin kolmessa tunnetussa eläinkoemäärityksessä, nimittäin mitogeeni-testissä, joka on suoritettu hiirillä, lymfokiini-testissä (in vitro-testissä, jonka avulla mitataan makrofagien siirtymisen estämistekijän, MIF:n tuotantoa) ja E-rosetti(keräs)-testissä, joka on suoritettu ihmisen lymfosyyteillä (imusoluilla). (Kts. esimerkiksi julkaisua Ann. N.Y. Acad. Sei. 2^9, 125 Z597§7)-
Aktiviteetti fyig)
Lymfokiinitesti E-rosetti-testi Mitogeeni-testi Tymosiinifraktio 1-5 1-10 1-10
Tymosiini ^ 0,01-0,1 0,001-0,01 0,01-0,1
Tymosiini voidaan antaa ihmisille ja nisäkkäille parenteraalisesti, so. intravenoosisti (suonensisäisesti), subkutaanisesti (ihonalaisesti) tai intramus-kulaarisesti (lihaksensisäisesti). Intravenoosissa annossa on päivittäinen annos tavallisesti alueella 1-100 pg/kg kehon painoa kohden.
Claims (2)
1. Menetelmä sellaisen immuniteettia tehostavan tymosiini of^rn eristämiseksi kemiallisesti puhtaana, jonka aminohapposekvenssi on (N-Asetyyli)-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ber-Ser-Glu-Ile-Thr -Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-OH kateenkorvafraktiosta 5,tunnettu siitä, että (a) lyofilisoitu kateenkorvafraktio 5 kromatografoidaan pylväässä, joka koostuu karboksimetyyli-selluloosasta natriumasetaatti/2-merkaptoetanoli-pus-kurissa, jonka pH-arvo on 5»0, jolloin pylväs pestään ensin tällä puskurilla ja sitten eluoidaan lineaari-gradientilla, joka koostuu tästä puskurista ja tämän puskurin ja 1,0 M natriumkloridiliuoksen seoksesta, (b) ensimmäinen kohdan (a) mukaan saatu proteiinipiikki fraktioidaan dekst-raanigeelipylväällä, (c) toinen kohdan (b) mukaan saatu proteiinipiikki kromatografoidaan pylväässä, joka koostuu 2-dietyyliaminoetyyli-selluloosasta tris/2-merkapto-etanoli-puskurissa, jonka pH-arvo on 8,0, jolloin ensin eluoidaan tällä puskurilla ja sitten lineaari-gradientilla, joka koostuu tästä puskurista ja tämän puskurin ja 0,8 M natriumkloridiliuoksen seoksesta, (d) ensimmäinen kuudesosa kohdan (c) mukaan saadusta proteiinipiikistä johdetaan dekstraanigeelipylvään kautta guanidiini-hydrokloridi/tris-puskuriin, jonka pH-arvo on 7,5 ja lopuksi (e) kohdan (d) mukaan saadun proteiinipiikin keskimmäisistä fraktioista suoritetaan suolanpoisto dekstraanigeelipylväällä.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheessa (a) käytetty puskuri koostuu 10 mM:sta natriumasetaattia ja 1,0 mMrsta 2-merkaptoetanolia, vaiheessa (c) käytetty puskuri koostuu 50 raMrsta tris-hydro-kloridia ja 1,0 mM:sta 2-merkaptoetanolia, vaiheessa (d) käytetty puskuri koostuu 6,0 M:sta guanidiinihydrokloridia ja 10 mMrsta Tris’ia, ja vaiheet (b) ja (e) suoritetaan käyttäen steriiliä vettä.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US73663876A | 1976-10-28 | 1976-10-28 | |
| US73663876 | 1976-10-28 | ||
| US76663877 | 1977-02-08 | ||
| US05/766,638 US4079127A (en) | 1976-10-28 | 1977-02-08 | Thymosin alpha 1 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI773221A FI773221A (fi) | 1978-04-29 |
| FI56317B FI56317B (fi) | 1979-09-28 |
| FI56317C true FI56317C (fi) | 1980-01-10 |
Family
ID=27113070
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI773221A FI56317C (fi) | 1976-10-28 | 1977-10-28 | Foerfarande foer isolering av tymosin alfa1 med immunitetpotentierande verkan |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5411220A (fi) |
| AR (1) | AR214903A1 (fi) |
| AT (1) | AT362493B (fi) |
| AU (1) | AU514996B2 (fi) |
| CA (1) | CA1101842A (fi) |
| CH (1) | CH633258A5 (fi) |
| DE (1) | DE2748213A1 (fi) |
| DK (1) | DK149094C (fi) |
| ES (1) | ES463588A1 (fi) |
| FI (1) | FI56317C (fi) |
| FR (1) | FR2369248A1 (fi) |
| GB (1) | GB1590457A (fi) |
| IL (1) | IL53218A (fi) |
| IT (1) | IT1195254B (fi) |
| LU (1) | LU78395A1 (fi) |
| MC (1) | MC1167A1 (fi) |
| NL (1) | NL188699C (fi) |
| NO (1) | NO143346C (fi) |
| NZ (1) | NZ185519A (fi) |
| PT (1) | PT67204B (fi) |
| SE (1) | SE442479B (fi) |
| YU (1) | YU40314B (fi) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2919592A1 (de) * | 1979-05-15 | 1981-01-15 | Max Planck Gesellschaft | Verfahren zur herstellung von thymosin- alpha 1 und derivaten davon |
| US4339427A (en) * | 1980-04-14 | 1982-07-13 | Hoffmann-La Roche Inc. | Radioimmunoassay of thymosinα |
| FR2492663B1 (fr) * | 1980-10-24 | 1985-11-08 | Vtoroi Mo G | Produit medicamenteux regulateur du t-systeme de l'immunite et son procede de preparation |
| DE3137231A1 (de) * | 1981-09-18 | 1983-04-14 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V., 3400 Göttingen | Bis-thymosin(alpha)(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)-verbindungen |
| JPH01250018A (ja) * | 1988-03-30 | 1989-10-05 | Noble Sangyo Kk | 電子計測器用変位検知器 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1195980A (en) * | 1966-08-24 | 1970-06-24 | Univ Yeshiva | Hormone-Like Preparations Derived from Thymus Gland and Methods of Producing the Same. |
-
1977
- 1977-10-05 CH CH1216177A patent/CH633258A5/de not_active IP Right Cessation
- 1977-10-14 AU AU29699/77A patent/AU514996B2/en not_active Expired
- 1977-10-25 IL IL53218A patent/IL53218A/xx unknown
- 1977-10-26 JP JP12766677A patent/JPS5411220A/ja active Granted
- 1977-10-26 SE SE7712071A patent/SE442479B/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-10-26 MC MC771268A patent/MC1167A1/xx unknown
- 1977-10-26 FR FR7732259A patent/FR2369248A1/fr active Granted
- 1977-10-26 CA CA289,510A patent/CA1101842A/en not_active Expired
- 1977-10-26 IT IT29020/77A patent/IT1195254B/it active
- 1977-10-26 NZ NZ185519A patent/NZ185519A/xx unknown
- 1977-10-27 NL NLAANVRAGE7711814,A patent/NL188699C/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-10-27 DE DE19772748213 patent/DE2748213A1/de active Granted
- 1977-10-27 ES ES463588A patent/ES463588A1/es not_active Expired
- 1977-10-27 DK DK478277A patent/DK149094C/da not_active IP Right Cessation
- 1977-10-27 AT AT765877A patent/AT362493B/de not_active IP Right Cessation
- 1977-10-27 AR AR269752A patent/AR214903A1/es active
- 1977-10-27 PT PT67204A patent/PT67204B/pt unknown
- 1977-10-27 LU LU7778395A patent/LU78395A1/xx unknown
- 1977-10-27 YU YU2578/77A patent/YU40314B/xx unknown
- 1977-10-27 NO NO773681A patent/NO143346C/no unknown
- 1977-10-28 GB GB45001/77A patent/GB1590457A/en not_active Expired
- 1977-10-28 FI FI773221A patent/FI56317C/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4079127A (en) | Thymosin alpha 1 | |
| Robb et al. | Amino acid sequence and post-translational modification of human interleukin 2. | |
| Peterson et al. | Human eosinophil cationic proteins (ECP and EPX) and their suppressive effects on lymphocyte proliferation | |
| Parsons et al. | Purification of an alternate form of the alpha subunit of the glycoprotein hormones from bovine pituitaries and identification of its O-linked oligosaccharide. | |
| US4818763A (en) | Biologically active substance with hormonal properties, production process thereof and utilization of histones for medical purposes | |
| IE45819B1 (en) | Shuttle type livestock feeder | |
| Sidman et al. | B cell maturation factor (BMF): a lymphokine or family of lymphokines promoting the maturation of B lymphocytes. | |
| Goyert et al. | Isolation of I–A subregion-like molecules from subhuman primates and man | |
| EP0211899B1 (en) | Purification of native colony stimulating factor-1 | |
| Bell et al. | Bovine a-Lactalbumin C and aS1-, ß-and?-Caseins of Bali (Banteng) Cattle, Bos (Bihos) Javanicus | |
| EP0159289B1 (en) | Immunosuppressant factor | |
| Levo | Nature of cryoglobulinaemia | |
| EP0337799B1 (en) | 14-Beta-gal mammalian lectins | |
| FI56317C (fi) | Foerfarande foer isolering av tymosin alfa1 med immunitetpotentierande verkan | |
| Carlsson | Snake venom toxins the primary structure of protein S4C11: A neurotoxin homologue from the venom of forest cobra (Naja melanoleuca) | |
| McLean et al. | Natural occurrence but lack of melanotrophic activity of γ-MSH in fish | |
| Edman et al. | Amino acid sequence at the N-terminal end of a cold agglutinin kappa chain | |
| Nathenson et al. | Biochemical similarity of papain-solubilized H-2d alloantigens from tumor cells and from normal cells | |
| Miyaji et al. | Hemoglobin Hijiyama: a new fast-moving hemoglobin in a Japanese family | |
| US4046877A (en) | Method of increasing immunologic competence | |
| Ando et al. | Natural human interferon‐γ derived from lipopolysaccharide‐stimulated human myelomonocytic HBL‐38 cells | |
| Sanders et al. | Isolation and purification of histones from avian erythrocytes | |
| FI91484C (fi) | Menetelmä uuden solun kasvua säätelevän tekijän, onkostatiini M:n valmistamiseksi | |
| Labib et al. | Immunosuppressive factors in mouse amniotic fluid and neonate serum | |
| Wajcman et al. | Hemoglobin Nouakchott [α114 (GH2) Pro→ Leu]: a new hemoglobin variant displaying an unusual increase in hydrophobicity |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired | ||
| MA | Patent expired |
Owner name: BOARD OF REGENTS OF THE Owner name: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG |