FI114992B - Förfarande för att indikera målnukleinsyror - Google Patents

Claims (11)

1. Förfarande för att indikera mälnukleinsyror, kännetecknat av att det innefat-tar skeden, i vilka a) av länga nukleinsyrasekvenser produceras, beroende av mälsekvensen, 5 talrika nukleinsyror, vilka kan fungera som primers för templatnukleinsyra, b) för nukleinsyrorna, vilka kan fungera som primers för templatnukleinsyra, eller för dess delar, utförs en amplifikation, c) mälnukleinsyran indikeras pä basis av en produkt eller en mellanprodukt som bildats i amplifikationen. 10

2. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att talrika nukleinsyror, vilka kan fungera som primers för templatnukleinsyra, produceras genom att avspjälka nukleinsyror som innehäller tvä delar B1 och B2, ooh nukleinsyror, vilka kan fungera som primers för templatnukleinsyran, varvid del B1 kan hybridiseras med mälnukleinsyran eller med en del av den och kan avspjälkas, dä den är i 15 sadan form att den hybridiserats med mälnukleinsyran, och del B2 hybridiseras inte med mälnukleinsyran och kan inte avspjälkas, dä del B1 hybridiserats med mälnukleinsyran. v

: 3. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att nukleinsyrorna, vilka ‘"'i kan fungera som primers för templatnukleinsyran, amplifieras genom att hybri- : 20 disera en primer med templatnukleinsyran, genom att förlänga nukleinsyror, vilka f kan fungera som primers för templatnukleinsyran genom att använda templat- ·; nukleinsyra som templat, genom att hybridisera förlängningsprodukten med ·:·, nukleinsyra, som innehäller en icke-avspjälkbar del D1, som inte är komplementär över hela sin längd eller delvis komplementär tili förlängningsprodukten, som 25 bildas i förlängningen av nukleinsyran, vilken nukleinsyra kan fungera som primer ; för templatnukleinsyran och som innehäller del D2, som inte hybridiseras med mälnukleinsyran, och nukleinsyra som innehäller delarna D1 och D2 avspjälks, som frigör nukleinsyror, vilka kan fungera som primers för templatnukleinsyran. 114992

4. Förfarande för att sensibelt indikera nukleinsyra A, kännetecknat av att a) mälnukleinsyran hybridiseras med en sadan sondnukleinsyra B, som innehäller del B1, vilken hybridiseras med mälnukleinsyran, samt del B2, som inte hybridiseras med mälnukleinsyran, 5 b) sondnukleinsyra B avspjälks i del B1, c) sondnukleinsyrans avspjälkningsprodukt B', som innehäller del B2, som inte hybridiseras med mälnukleinsyran, hybridiseras med en sädan templatnukleinsyra C, som innehäller en del C2, som hybridiseras med avspjälkningsprodukten B' i del B2, samt en del C1, som inte hybridiseras med sondnukleinsyrans del B1, 10 d) avspjälkningsprodukt B' förlängs med en sädan nukleinsyradel B3, som är i sin helhet eller delvis komplementär till del C1, och e) amplifikatorsonden D hybridiseras i del B3 med förlängningsprodukten av avspjälkningsprodukten B', varvid nämnda sond D innehäller en del D1, som är homolog med C1 eller en del av den och kan avspjälkas, 15 f) mälnukleinsyra A indikeras pä basis av en produkt som bildats i ett av skedena b) - e).

5. Förfarande enligt patentkrav 4, kännetecknat av att sondnukleinsyra B ....; avspjälks med hjälp av RNas H.

• » : 6. Förfarande enligt patentkrav 4, kännetecknat av att amplifikatorsonden D : I 20 innehäller förutom del D1 en del D2, som inte hybridiseras med mälnukleinsyran : och som är homolog med B2 eller en del av den.

7. Förfarande enligt patentkrav 4, kännetecknat av att det dessutom innefattar skeden, i vilka f) amplifikatorsonden D avspjälks i del D1, ·’ 25 g) den genom avspjälkning producerade avspjälkningsprodukten D' hybridise- / ras med templatnukleinsyra E, som innehäller en del E2, som hybridiseras med avspjälkningsprodukten i del D2, samt med en sädan del E1, som inte hybridise-| ras med del D1, h) avspjälkningprodukten D' förlängs med en sädan nukleinsyradel D3, som är 30 komplementär till del E1, och 114992 i) amplifikatorsonden F hybridiseras selektivt med avspjälkningproduktens D' förlängningsprodukt i del D3, varvid nämnda sond F innehäller en del F1, som är homolog med C1 eller en del av den eller är homolog med E1 eller dess del, varvid F1 kan avspjälkas. 5

8. Förfarande enligt patentkrav 4, kännetecknat av att amplifikatorsonden D i del D1 avspjälks med Rnas H.

9. Förfarande för att producera en nukleinsyrasekvens, kännetecknat av att det innehäller skeden, i vilka a) man förlänger en första nukleinsyrasekvens med förlängningsomrädet, 10 b) en andra nukleinsyrasekvens hybridiseras, som är längre än den första nukleinsyrasekvensen och som innehäller en sekvens, som är homolog med den första nukleinsyrasekvensen, med förlängningsomrädets förlängningsprodukt, c) en andra nukleinsyrasekvens sönderdelas för att avlägsna helt och hället eller delvis den del som skall hybridiseras, 15 d) skedena a) - c) upprepas med sönderdelningsprodukter frän skede c).

10. Reagensförpackning för att sensibelt indikera mälnukleinsyror med förfaran- \ det enligt patentkrav 1, kännetecknad av att förpackningen innefattar ' ‘ a) nukleinsyra B, som innefattar delarna 1 och B2, varvid B1 är en avspjälkt del, : vilken är komplementär till en del av mälnukleinsyran, och B2 är en del, som inte :,· j 20 hybridiseras med mälnukleinsyran, * · k · b) nukleinsyra C, som innefattar delarna C1 och C2, varvid C1 är en ny nukleinsyraspecifik del och C2 är en del, som är komplementär till B2, i’ c) nukleinsyra D med del D1, varvid D1 är homolog med C1 eller dess del och kan avspjälkas.

11. Reagensförpackning enligt patentkrav 10, kännetecknad av att nukleinsyran .: D dessutom innehäller en del D2, som är homolog med B2 eller komplementär tili C2 eller dess del.