FI109901B

FI109901B - Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten bentseenisulfonyyli-imiinijohdannaisten valmistamiseksi

Info

Publication number: FI109901B
Application number: FI962235A
Authority: FI
Inventors: David M Stemerick; George Ku; Boyd Lynn Harrison; Christopher Robin Dalton; Scott Burrill Meikrantz
Original assignee: Merrell Pharma Inc
Priority date: 1993-11-29
Filing date: 1996-05-28
Publication date: 2002-10-31
Also published as: CA2175458A1; JPH09506345A; CN1044116C; WO1995014669A1; EP0731791B1; DE69416859D1; FI962235A; TW279161B; DE69416859T2; DK0731791T3; GR3029827T3; ZA949303B; EP0731791A1; IL111776A0; KR960706476A; HU219565B; HUT76273A; CA2175458C; US5684017A; FI962235A0

Description

109901

Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten bents-eeni sulfonyy1i-imi ini johdannais ten valmi s tami seksi Käsillä oleva keksintö kohdistuu menetelmään uusien 5 bentseenisulfonyyli-imiinijohdannaisten valmistamiseksi. Yhdisteet ovat käyttökelpoisia interleukiini-1:n toiminnan inhibiittoreina. Tällaiset inhibiittorit ovat hyödyllisiä hoidettaessa useita tautitiloja, kuten tässä julkaisussa on esitetty, kuten esimerkiksi nivelreumaa, keskushermoston 10 pesäkekovettumatautia (MS-tauti), sokeritautia, valtimon hauraus-kovetustautia (arterioskleroosi), septistä shokkia ja keuhkojen sidekudostumista.

Keksinnön yhteenveto Käsillä oleva keksintö antaa käyttöön menetelmän 15 uusien, seuraavan kaavan mukaisten bentseenisulfonyyli-imiinijohdannaisten valmistamiseksi: n/S02Y^\ 20 z • # · · v;

Y

:/··25 Kaava I q • · · • » · • · · jossa • ♦ « A on NH, 0 tai S; • t . R on haarautunut, suoraketjuinen tai syklinen Ci_6~ • · · 30 alkyyliradikaali, fenyyli tai substituoitu fenyyli, jossa ·;· on 1 - 3 substituenttia, jotka ovat toisistaan riippumatta • · j Ci-4-alkyyli, Ci-4-alkoksi, halogeeni, -NHC(0)CH3, amino tai hydroksi; Z on 1 - 3 substituenttia, jotka ovat toisistaan • # · ‘ , 35 riippumatta vety, Ci-4-alkyyli, Ci-4-alkoksi tai halogeeni; ja 2 109901 Y on 1 - 3 substituenttia, jotka ovat toisistaan riippumatta vety, Ci-4-alkyyli, Ci-4-alkoksi tai halogeeni, tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi.

5 Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus Tässä hakemuksessa käytettynä a) termi "halogeeni" tarkoittaa fluori-, kloori-, bromi- tai jodiatomia; b) termi "Ci-4-alkyyli" tarkoittaa haarautunutta tai 10 suoraketjuista alkyyliradikaalia, joka sisältää 1-4 hiiliatomia, kuten metyyli, etyyli, n-propyyli, iso-propyyli, n-butyyli, isobutyyli, t-butyyli, jne.; c) termi "Ci-6-alkyyli" tarkoittaa syklistä, haarautunutta tai suoraketjuista alkyyliradikaalia, joka 15 sisältää 1-6 hiiliatomia, kuten metyyli, etyyli, n-propyyli, isopropyyli, n-butyyli, isobutyyli, n-pentyyli, syklopentylyi, n-heksyyli, sykloheksyyli, jne.; d) termi "Ci-4-alkoksi" tarkoittaa suoraa tai haarautunutta alkoksiryhmää, joka sisältää 1-4 hiili- 20 atomia, kuten metoksi, etoksi, n-propoksi, isopropoksi, n-butoksi, isobutoksi, t-butoksi, jne.; • · .* e) termi "substituoitu fenyyli" tarkoittaa * · · : '.*· seuraavan kaavan mukaista yhdistettä, • · :\:25 _

. : W

30 • » •y* jossa Q, W ja X ovat toisistaan riippumatta vety, C1-4- j ·.. alkyyli, Ci-4-alkoksi, halogeeni, -NHC(0)CH3, amino tai hydroksi; f) termi "sen farmaseuttisesti hyväksyttävät • * · * # 35 suolat" tarkoittaa joko happoadditiosuolaa tai emäsadditiosuolaa.

3 109901

Ilmaisu "farmaseuttisesti hyväksyttävät happoaddi-tiosuolat" tarkoittaa mitä tahansa myrkyttömiä orgaanisia tai epäorgaanisia kaavan I mukaisten yhdisteiden tai niiden välituotteiden happoadditiosuoloja. Esimerkkejä sopivia 5 suoloja muodostavista epäorgaanisista hapoista ovat suolahappo, bromivetyhappo, rikkihappo ja fosforihappo ja happometallisuoloista natriummonovetyortofosfaatti ja kaliumvetysulfaatti. Esimerkkejä sopivia suoloja muodostavista orgaanisista hapoista ovat mono-, di- ja 10 trikarbokdyylihapot. Esimerkkejä ovat mm. etikkahappo, glykolihappo, maitohappo, palorypälehappo, malonihappo, meripihkahappo, glutaarihappo, fumaarihappo, omenahappo, viinihappo, sitruunahappo, askorbiinihappo, maleiinihappo, hydroksimaleiinihappo, bentsoehappo, hydroksibentsoehappo, 15 fenyylietikkahappo, kanelihappo, salisyylihappo, 2-fenoksibentsoehappo, p-tolueenisulfonihappo sekä sul-fonihapot, kuten metaanisulfonihappo ja 2-hydrok-sietaanisulfonihappo. Tällaiset suolat voivat esiintyä joko hydratussa tai olennaisesti vedettömässä muodossa. Yleensä 20 näiden yhdisteiden happoadditiosuolat ovat liukoisia veteen ja useisiin hydrofiilisiin orgaanisiin liuottimiin ja ···* : niillä on vapaisiin emäsmuotoihin verrattuna korkeammat : ." sulamispisteet.

·/·· Ilmaisu "farmaseuttisesti hyväksyttävät emäs- • · : \:25 additiosuolat" tarkoittaa mitä tahansa myrkyttömiä ; orgaanisia tai epäorgaanisia kaavan I mukaisten yhdisteiden tai niiden välituotteiden emäsadditiosuolaa. Esimerkkejä sopivia suoloja muodostavista emäksistä ovat alkalimetalli-. tai maa-alkalimetallihydroksidit, kuten natrium-, kalium-, 30 kalsium-, magnesium- tai bariumhydroksidit; ammoniakki ja *;·’ alifaattiset, alisykliset tai aromaattiset orgaaniset : amiinit, kuten metyyliamiini, dimetyyliamiini, tri- metyyliamiini ja pikoliini. Näiden yhdisteiden kanssa voi muodostua joko mono- tai diemässuoloja.

• | 35 Kuten alan ammattilaiset helposti ymmärtävät,

esiintyvät sellaiset kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa A

4 109901 on NH, tautomeereinä. Mikä tahansa viittaus kaavan I mukaisiin yhdisteisiin tai niiden välituotteisiin, tarkoittaa kumpaa tahansa tautomeeriä. Näitä tautomeerejä voidaan kuvata seuraavasti: 5

n-S0V-N

“ Μτγ' — r^'V'

O O

Esimerkkejä käsillä olevan keksinnön mukaisesti 15 valmistettavista yhdisteistä esitetään seuraavaksi. Nämä yhdisteet ainoastaan kuvaavat käsillä olevaa keksintöä, eikä niitä tulisi tulkita keksinnön piiriä millään tavalla raj oittavina.

5.7- dikloori-2-asetyyli-4-[bentseenisulfonyyli-20 imino]-1,4-dihydrokinoliini; 5.7- dikloori-2-bentsoyyli-4-[bentseenisulfon- .·.* : yyliimino]-1,4-dihydrokinoliini; : 5,7-dikloori-2-(4-aminobentsoyyli)-4-[bentseeni- sulfonyyli-imino] -1,4-dihydrokinoliini; : \;25 5,7-dikloori-2-(2-aminobentsoyyli)-4-[bentseeni- : sulfonyyli-imino]-1,4-dihydrokinoliini; 7-kloori-2-asetyyli-4- [bentseenisulfonyyli-imino] - 1,4-dihydrokinoliini; . . 7-kloori-2-bentsoyyli-4-[bentseenisulfonyyli- * * · 30 imino]-1, 4-dihydrokinoliini; • · ·;·’ 2-asetyyli-4- [bentseenisulfonyyli-imino] -1,4- : ·.. dihydrokinoliini; 2-bentsoyyli-4-[bentseenisulfonyyli-imino]-1,4-dihydrokinoliini; » « · • ’ 35 2-bentsoyyli-4-[bentseenisulfonyyli-imino]-4H- kromeeni; 5 109901 2-(4-metoksibentsoyyli)-A-[bentseenisulfonyyli-imino]-4H-kromeeni; 2-(4-hydroksibentsoyyli)-A-[bentseenisulfonyyli-imino]-4H-kromeeni; 5 5,7-dikloori-2-bentsoyyli-4-[bentseenisulfonyyli- imino]-4H-kromeeni; 2-bentsoyyli-4-[bentseenisulfonyyli-imino]-4H-tiokromeeni; 5.7- dikloori-2-bentsoyyli-4-[bentseenisulfonyyli-10 imino]-4H-tiokromeeni; 5.7- dikloori-2-asetyyli-4-[(4-klooribentseeni)-sulfonyyli-imino]-1, 4-dihydrokinoliini; 5.7- dikloori-2-bentsoyyli-4-[(4-metoksibentseeni)-sulfonyyli-imino]-1,4-dihydrokinoliini; 15 7-kloori-2-asetyyli-4-[(4-bromibentseeni)sul fonyyli-imino] -1,4-dihydrokinoliini; 7-kloori-2-bentsoyyli-4-[(2-klooribentseeni)-sulfonyyli-imino]-1,4-dihydrokinoliini; 2-asetyyli-4-[(4-metyylibentseeni)sulfonyyli-20 imino]-1,4-dihydrokinoliini; 2-bentsoyyli-4-[(4-klooribentseeni)sulfonyyli-: imino]-4H-kromeeni; : 5,7-dikloori-2-bentsoyyli-4-[ (4-metyylibentseeni) - • · ./.: sulfonyyli-imino]-4H-kromeeni.

/•,•25 Esillä olevan keksinnön mukaiselle menetelmälle on • · : /· tunnusomaista, että yhdiste, jonka kaava on i « ·

:T: O

/·,: ;./ 30 (II)

O

» I » • · · ’*’ [ 35 jossa A, R ja Y tarkoittavat samaa kuin edellä, jolloin » » * » >

mahdolliset amino- ja hydroksisubstituentit ryhmässä R

6 109901 voivat olla suojattuja, saatetaan reagoimaan bents-eenisulfonyyli-isosyanaatin kanssa, jonka kaava on

SO--NCO

5 i__ ^ (III) jossa Z tarkoittaa samaa kuin edellä, minkä jälkeen mahdolliset suojaryhmät poistetaan, ja haluttaessa saatu 10 kaavan I mukainen yhdiste muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.

Yleinen synteettinen menetelmä näiden kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa A on NH, on esitetty yksityiskohtaisesti kaaviossa A. Reagenssit ja 15 lähtöaineet ovat alan ammattilaisen saatavilla. Kaaviossa A

kaikki substituentit, jollei muuta mainita, ovat ennalta määriteltyjä.

• · * · · * • « • t * • * • · · • · · • · * # · • » · * · · * * · • · • · ·

Ml • · • I · ( s • · · I · · I » * · » · » * · I · 7 109901

Kaavio A

^_____ Vaihe a ^ 10 γ^" ^N'^TCiOJCI /^^^VN;S!ii^XxC(0)NCH30CH3 (1) Y (2)

Vaihe b

15 o o'^xV^X

I . Vaihe c

» AVV

(4) H (3) I

,.: : O O

·.'·· Vaihe d :\?5 • % * i « ’“’· Valinnainen » ^ ·:’ Y H^C'

Kaava I, Kaava I, t

jossa A on NH O jossa A on NH O

!35 » » β 109901

O

Kaavion A vaiheessa a sopiva rakenteen (1) mukainen happokloridi, jota vastaava on sinänsä tunnettu (P. Leeson, EP-patenttihakemus 303 387, julkaistu 15.2.1989), konvertoidaan rakenteen (2) mukaiseksi N-metyyli-O-5 metyylihydroksaamihapoksi.

Sopiva rakenteen (1) mukainen happokloridi on sellainen, jossa Y on kuten kaavan I mukaisen lopputuotteen kohdalla on toivottavaa.

Esimerkiksi sopivan rakenteen (1) mukaisen 10 happokloridin annetaan olla kosketuksessa N-metyyli-O-met-yylihydroksyyliamiinin tai N-metyyli-O-metyylihydroksyy-liamiinisuolan kanssa. Reaktio suoritetaan sopivan emäksen, kuten trietyyliamiinin, läsnäollessa. Käytettävän emäksen määrä on yksi molaarinen ekvivalentti neutraloimaan 15 reaktiossa vapautunut happo ja niissä reaktioissa, joissa käytetään N-metyyli-O-metyylihydroksyyliamiinisuolaa, käytetään lisänä yksi molaarinen ekvivalentti neutraloimaan N-metyyli-O-metyylihydroksyyliamiinisuola. Reaktio suoritetaan sopivassa liuottimessa, kuten tetrahydrofuraanissa 20 (THF). Tuote erotetaan sinänsä tunnetuilla menetelmillä, . kuten haihduttamalla tyhjössä ja uuttamalla ja se voidaan ;;·/ puhdistaa kromatograf isesti ja uudelleenkiteyttämällä • ·’ rakenteen (2) mukaisen yhdisteen saamiseksi.

• · • ·

Kaavion A vaiheessa b rakenteen (2) mukaisen N- • · ·.*·· 25 metyyli-O-metyylihydroksaamihapon annetaan olla kosketuksessa sopivan organometallisen reagenssin kanssa, jolloin työstön jälkeen saadaan rakenteen (3) mukainen ketoni.

.·. : Sopiva organometallinen reagenssi on jokin • a · a a ,···, 30 rakenteen R-metalli, jossa R on kuten kaavan I mukaisen ”* lopputuotteen kohdalla on toivottavaa.

• *·· Esimerkiksi rakenteen (2) mukaisen yhdisteen annetaan olla kosketuksessa sopivan organometallisen reagenssin kanssa. Kuten alan ammattilainen tietää, • » * ' 35 reagenssi voidaan valita seuraavista: organolitium- reagenssit, organonatriumreagenssit, organokalium- 9 109901 reagenssit, organomagnesiumreagenssit, organokadmium-reagenssit, organosinkkireagenssit, organomangaani- reagenssit, jne.; edullisia ovat organolitiumreagenssit, organonatriumreagenssit, organokaliumreagenssit ja orga-5 nomagnesiumreagenssit ja edullisimpia ovat organo litiumreagenssit sekä organomagnesiumreagenssit. Reaktio suoritetaan sopivassa liuottimessa, kuten tetra-hydrofuraanissa tai dietyylieetterissä lämpötilassa -78 °C - liuottimen refluksilämpötila. Tuote voidaan 10 erottaa sinänsä tunnetuilla menetelmillä, kuten uuttamalla ja haihduttamalla tyhjössä. Sitten tuote voidaan puhdistaa sinänsä tunnetuilla menetelmillä, kuten kromatografisesti tai uudelleenkiteyttämällä rakenteen (3) mukaisen yhdisteen saamiseksi.

15 Kaavion A vaiheessa c rakenteen (3) mukainen yhdiste debentsyloidaan rakenteen (4) mukaisen yhdisteen saamiseksi.

Esimerkiksi rakenteen (3) mukaisen yhdisteen annetaan olla kosketuksessa sopivan debentsyloivan aineen, 20 kuten trifluorietikkahapon kanssa lämpötilassa, joka on . riittävä poistamaan suojaryhmän, mutta joka ei hajota • a ||·,· lähtöainetta tai tuotetta. Debentsylaatiossa, jossa sopiva » a · • ·* debentsyloiva aine on trifluorietikkahappo, on lämpötila • a '· " 70 - 80 °C edullinen. Tuote voidaan ottaa talteen ja • · ·.’·· 25 puhdistaa sinänsä tunnetuilla tekniikoilla, kuten :t·.! haihduttamalla tyhjössä, kromatografisesti ja uudel- leenkiteyttämällä, jolloin saadaan rakenteen (4) mukaista yhdistettä.

; Kaavion A vaiheessa d rakenteen (4) mukaisen ,···, 30 yhdisteen annetaan olla kosketuksessa sopivan bentseenisulfonyyli-isosyanaatin kanssa sellaisen kaavan I : ’·· mukaisen bentseenisulfonyyli-imiinin muodostamiseksi, jossa • · A on NH.

* » ♦

Sopiva bentseenisulf onyyli-isosyanaatti on sei- • > · it(§. 35 lainen, jossa Z on kuten kaavan I mukaisen lopputuotteen » ♦ kohdalla on toivottavaa.

10 109901

Esimerkiksi rakenteen (4) mukaisen yhdisteen annetaan olla kosketuksessa sopivan bentseenisulfonyyli-isosyanaatin kanssa. Reaktio suoritetaan käyttämällä 1-2 molaarista ekvivalenttia sopivaa bentseenisulfonyyli-5 isosyanaattia. Reaktio suoritetaan sopivassa liuottimessa, kuten asetonitriilissä tai propionitriilissä, lämpötilassa 20 °C - liuottimen refluksilämpötila. Tuote otetaan talteen sinänsä tunnetuilla tekniikoilla, kuten sammuttamalla proottisella liuottimena, kuten metanolilla, ja 10 haihduttamalla tyhjössä. Tuote voidaan puhdistaa kromatografisesti ja uudelleenkiteyttämällä, jolloin saadaan sellaista kaavan I mukaista yhdistettä, jossa A on NH.

Kaavion A valinnaisessa vaiheessa e suojatusta 15 aminoryhmästä tai suojatusta hydroksiryhmästä voidaan poistaa suojaus, jolloin saadaan sellaisia kaavan I mukaisia yhdisteitä, joissa R on substituoitu fenyyli, jossa Q, W tai X on amino tai hydroksi. Sopivien suojaryhmien valikoima on alan ammattilaisten sinänsä 20 tuntema ja suojaryhmien poistoa kuvataan teoksessa . Protecting Groups in Organic Synthesis (T. Greene).

• · )|·/ Seuraavissa esimerkeissä esitetään tyypillisiä * « · '· ·’ synteesejä, joita on kuvattu kaaviossa A. Nämä esimerkit

• I

\ *: ainoastaan kuvaavat keksintöä eikä niiden tarkoitus ole ·.*·· 25 rajoittaa käsillä olevaa keksintöä millään lailla.

: Seuraavissa esimerkeissä käytetyillä termeillä on seuraavat merkitykset: "g" tarkoittaa grammoja, "mg" tarkoittaa milligrammoja, "mmol" tarkoittaa millimooleja, "ml" : tarkoittaa millilitroja, ,,0C" tarkoittaa Celsius-asteita, • « · .··.[ 30 "Rf" tarkoittaa retentiota, "sp" tarkoittaa sula- mispistettä, "haj." tarkoittaa hajoavaa, "TLC" tarkoittaa • '·· ohutlevykromatografiaa.

• > 11 109901

Esimerkki 1 Kaavio A, vaihe a: 5,7-dikloori-2-bentsyylioksikinoliini-2-(N-metyyli- O-metyyli)hydroksaamihappo 5 5,7-dikloori-4-bentsyylioksikinoliini-2-karboksyy- lihappokloridi (5,49 g, 15 mmol), trietyyliamiini (4,17 ml, 30 mmol) ja N-metyyli-O-metyyli-hydroksyyli- amiinihydrokloridi (1,46 g, 15 mmol) yhdistetään THFrssa (150 ml) . 2 tunnin kuluttua se haihdutetaan tyhjössä ja 10 jäännös kromatografoidaan silikageelipylväässä eluoiden 5-prosenttisella asetonilla dikloorimetaanissa. Etyyli-asetaatti/heksaanista suoritetun uudelleenkiteyttämisen jälkeen saadaan otsikon mukaista yhdistettä, sp. 109 110 °C. Rf = 0,31 TLC/silikageeli/5 % asetoni 15 dikloorimetaanissa.

Alkuaineanalyysi yhdisteelle C19H16CI2N2O3:

Laskettu: C 58,32, H 4,12, N 7,16 Löydetty: C 58,40, H 4,19, N 7,08 Esimerkki 2 20 Kaavio A, vaihe b: . 5,7-dikloori-4-bentsyylioksi-2-bentsoyylikinoliini 5, 7-dikloori-2-bentsyylioksikinoliini-2- (N-metyyli-

• ·’ O-metyyli)hydroksaamihappo (1,19 g, 3,1 mmol) ja THF

• · (30 ml) yhdistetään ja jäähdytetään 0 °C:een. Tähän • · 25 seokseen lisätään tipoittain fenyylimagnesiumbromidia (1,2 : ml, 3 M, 3,3 mmol). Sitten tämän annetaan sekoittua 15 • · t minuuttia ja sitten reaktioseos jaetaan dikloorimetaanin (200 ml) ja veden kesken. Orgaaninen kerros erotettaan ja .·, : sitä uutetaan 1 M suolahapolla. Orgaaninen kerros kuivataan • · · 30 MgS04:lla, se suodatetaan ja haihdutetaan tyhjössä.

t '1' Etyyliasetaatti/heksaanista suoritetun uudelleenkiteyt- • ’·. tämisen jälkeen saadaan otsikon mukaista yhdistettä, sp.

153 - 154 °C.

Alkuaineanalyysi yhdisteelle C23H15CI2NO2: ; ! 35 Laskettu: C 67,66, H 3,70, N 3,43 Löydetty: C 67,60, H 3,76, N 3,38

Esimerkki 3

Kaavio A, vaihe b: 12 109901 5.7- dikloori-4-bentsyylioksi-2-asetyylikinoliini

5.7- dikloori-2-bentsyylioksikinoliini-2-(N-metyyli-5 O-metyyli)hydroksaamihappo (1,95 g, 5,0 mmol) ja THF

(25 ml) yhdistetään ja jäähdytetään 0 °C:een. Tähän seokseen lisätään tipoittain metyylimagnesiumbromidia (5,0 ml, IM, 5,0 mmol). Sitten tämän annetaan sekoittua 15 minuuttia ja sitten reaktioseos kaadetaan dikloorimetaaniin 10 (200 ml) ja tätä uutetaan 1 M suolahapolla. Orgaaninen kerros kuivataan MgS04:lla, se suodatetaan ja haihdutetaan tyhjössä. Etyyliasetaatti/heksaanista suoritetun uudelleen-kiteyttämisen jälkeen saadaan otsikon mukaista yhdistettä, s.p. 156 - 157 °C.

15 Alkuaineanalyysi yhdisteelle C18H13CI2NO2:

Laskettu: C 62,44, H 3,78, N 4,05 Löydetty: C 62,48, H 3,84, N 4,02.

Esimerkki 4 Kaavio A, vaihe c: 20 5,7-dikloori-2-bentsoyyli-l,4-dihydrokinol-4-oni 5.7- dikloori-4-bentsyylioksi-2-bentsoyylikinoliini ;;· · (1,07 g, 2,6 mmol) ja trif luorietikkahappo (65 ml)

• I I

• yhdistetään ja lämmitetään 70 °C:een. 4 tunnin kuluttua • · reaktioseos haihdutetaan tyhjössä jäännöksen saamiseksi.

• · •‘.'J 25 Jäännös uudelleenkiteytetään asetonitriilistä, jolloin ; saadaan otsikon mukaista yhdistettä, sp. 242 - 243 °C. Rf = 0,33 TLC/silikageeli/2 % asetoni dikloorimetaanissa. Alkuaineanalyysi yhdisteelle C16H9CI2NO2: : Laskettu: C 60,40, H 2,85, N 4,40 30 Löydetty: C 60,35, H 2,89, N 4,50.

• 1 1 ! » t » 1

I

t I

13 109901

Esimerkki 5

Kaavio A, vaihe c: 5.7- dikloori-2-asetyyli-l,4-dihydrokinol-4-oni 5.7- dikloori-4-bentsyylioksi-2-asetyylHeinoliini 5 (0,75 g, 2,2 mmol) ja trif luorietikkahappo (55 ml) yhdistetään ja lämmitetään 80 °C:een. 4 tunnin kuluttua reaktioseos haihdutetaan tyhjössä jäännöksen saamiseksi. Jäännös uudelleenkiteytetään asetonitriilistä, jolloin saadaan otsikon mukaista yhdistettä, s.p. 277 - 278 °C.

10 Rf = 0,29 TLC/silikageeli/5 % asetoni dikloorimetaanissa.

Alkuaineanalyysi yhdisteelle C11H7CI2NO2:

Laskettu: C 51,59, H 2,76, N 5,47 Löydetty: C 50,65, H 2,83, N 5,26.

Esimerkki 6 15 Kaavio A, vaihe d: 5.7- dikloori-2-bentsoyyli-4-[bentseenisulfon-yyliamino]-1,4-dihydrokinoliini 5.7- dikloori-2-bentsoyyli-l, 4-dihydrokinol-4-oni (0,57 g, 1,8 mmol) ja bentseenisulfonyyli-isosyanaatti 20 (0,26 ml, 2,0 mmol) asetonitriilissä (9 ml) yhdistetään ja , tätä seosta lämmitetään refluksissa 18 tuntia. Seokseen lisätään metanolia (5 ml) reaktion lopettamiseksi. Seos : ·" haihdutetaan tyhjössä jäännöksen saamiseksi. Jäännös ·: kromatografoidaan silikageelipylväässä dikloorimetaanilla ·,1· 25 eluoiden ja näin saadaan kiinteää ainesta. Kiinteä aines *tj : uudelleenkiteytetään etyyliasetaatti/heksaanista, jolloin saadaan otsikon mukaista yhdsitettä, sp. 186 - 187 °C. Rf = 0,37 TLC/silikageeli/dikloorimetaani.

.1. : Alkuaineanalyysi yhdisteelle C22H14CI2N2O3S: • · · ’·-[ 30 Laskettu: C 57,77, H 3,09, N 6,13 Löydetty: C 57,76, H 3,22, N 5,91.

k t » » • 1 I I I k k

Esimerkki 7

Kaavio A, vaihe d: 14 109901 5,7-dikloori-2-asetyyli-4-[bentseenisulfonyyli-amino]-1,4-dihydrokinoliini 5 5,7-dikloori-2-asetyyli-l,4-dihydrokinol-4-oni (0,28 g, 1,1 mmol) ja bentseenisulfonyyli-isosyanaatti (0,16 ml, 1,2 mmol) yhdistetään asetonitriilissä (5 ml). Seosta lämmitetään refluksissa 3 tuntia. Seokseen lisätään metanolia (5 ml) reaktion lopettamiseksi. Seos haihdutetaan 10 tyhjössä jäännöksen saamiseksi. Jäännös kromatografoidaan silikageelipylväässä dikloorimetaanilla eluoiden ja näin saadaan kiinteää ainesta. Kiinteä aines uudel- leenkiteytetään etyyliasetaatti/heksaanista, jolloin saadaan otsikon mukaista yhdistettä, sp. 163 - 164 °C. Rf = 15 0,32 TLC/silikageeli/dikloorimetaani.

Alkuaineanalyysi yhdisteelle C17H12CI2N2O3S:

Laskettu: C 51,65, H 3,04, N 7,09 Löydetty: C 51,92, H 3,11, N 6,85.

Yleinen synteettinen menetelmä joidenkin kaavan I 20 mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa A on O tai S, . on esitetty kaaviossa B. Kaaviossa B kaikki substituentit, "· · jollei muuta mainita, ovat kuten edellä on määritelty.

• < · • · • · • · • · » • · • · » » * * « · • · » · · * · > · · • · · > · » » · · ft · * * · » ·

I » ft > I

ft i I ft « ft ft ft ft ft ft ft ft » I ft I ft ft ft ft ft ft I · * ft ft ft ft 15 109901

Kaavio B

• O

I , Vaihe a I

10 (5) (6)

O

Vaihe b ' 15 n/S°S^N /S°V^n I Valinnainen / ~ ^*'V’

Kaava I, J! Kaava I, Il

: jossa A on O tai SU jossa A on O tai S O

• · · 0-125 ti» • * ·

Kaavion B vaiheessa a rakenteen (5) mukainen happo-kloridi (Chromenes, Chromanones and Chromones, toim. G. P.

: Ellis, John Wiley & Sons, 1977) laitetaan Friedel-Crafts I I · ,···, 30 reaktioon bentseenin tai sopivasti substituoidun bentsee-nin kanssa rakenteen (6) mukaisen yhdisteen saamiseksi.

: *· Bentseenin käyttö tässä reaktiossa antaa rakenteen

» « I

(6) mukaisen yhdisteen, jossa R on fenyyli, ja johtaa kaa-van I mukaisiin yhdisteisiin, joissa R on fenyyli.

16 109901

Sopivan substituoidun bentseenin käyttö tässä reaktiossa antaa rakenteen (6) mukaisen yhdisteen, jossa R on substituoitu fenyyli ja johtaa kaavan I mukaisiin yhdisteisiin, joissa R on substituoitu fenyyli. Sopiva 5 substituoitu bentseeni sisältää rakenteita Q, W ja X, kuten kaavan I mukaisen lopputuotteen kohdalla on toivottavaa, tai se sisältää rakenteita Q, W ja X, jotka ovat suojattu amino, kuten asetanilidin asetyyliryhmä tai suojattu hydroksi, kuten anisolin metyyliryhmä. Nämä suojaryhmät 10 voidaan poistaa, joka johtaa substituentteihin Q, W ja X, jotka ovat amino ja hydroksi, kuten kaavan I mukaisen lopputuotteen kohdalla on toivottavaa.

Esimerkiksi rakenteen (5) mukaisen happokloridin annetaan olla kosketuksessa bentseenin tai sopivasti 15 substituoidun bentseenin kanssa. Reaktio, jossa rakenteen (5) mukaisen happokloridin annetaan olla kosketuksessa bentseenin kanssa, suoritetaan käyttämällä bentseeniä liuottimena. Reaktio, jossa rakenteen (5) mukaisen happokloridin annetaan olla kosketuksessa sopivasti 20 substituoidun bentseenin kanssa, voidaan sopivasti substituoitua bentseeniä käyttää liuottimena.

J Vaihtoehtoisesti reaktio voidaan suorittaa liuottimessa, • · * : ”· kuten nitrobentseenissä, nitrometaanissa, dikloori- • · • '-· metaanissa tai hiilitetrakloridissa. Reaktio suoritetaan * · 25 sopivan katalyytin, kuten alumiinitrikloridin, ; alumiinitribromidin, sinkkikloridin, sinkkibromidin, * i » tinakloridin, booritrifluoridin tai vastaavien, molaarisen ylimäärän läsnäollessa. Katalyyttien valinta ja käyttö . . Friedel-Crafts reaktiossa on sinänsä tunnettua. Reaktio • t · I,,* 30 voidaan suorittaa lämpötilavälillä 0 °C - liuottimen • » **·* refluksilämpötila. Tuote voidaan saada reaktiovyöhykkeeltä : menetelmillä, jotka ovat alan ammattilaisten hyvin tuntemia, kuten kaatamalla reaktioseos jäälle tai jääveteen ja eristämällä tuote suodattamalla tai uuttamalla sopivaan • » · i · · ' p 35 orgaaniseen liuottimeen, kuten etyyliasetaattiin, dietyylieetteriin tai dikloorimetaaniin. Tuote voidaan 17 109901 puhdistaa kromatografisesti ja uudelleenkiteyttämällä rakenteen (6) mukaisen yhdisteen saamiseksi.

Kaavion B vaiheessa b rakenteen (6) mukaisen yhdisteen annetaan olla kosketuksessa sopivan bents-5 eenisulfonyyli-isosyanaatin kanssa sellaisen kaavan I mukaisen bentseenisulfonyyli-imiinin saamiseksi, jossa A on O tai S.

Sopiva bentseenisulfonyyli-isosyanaatti on sellainen, jossa Z on kuten kaavan I mukaisen lopputuotteen 10 kohdalla on toivottavaa.

Esimerkiksi rakenteen (6) mukaisen yhdisteen annetaan olla kosketuksessa sopivan bentseenisulfonyyli-isosyanaatin kanssa. Reaktio suoritetaan sopivassa liuottimessa, kuten asetonitriilissä tai propionitriilissä 15 lämpötilassa 20 °C - liuottimen refluksilämpötila. Tuote otetaan talteen sinänsä tunnetuilla tekniikoilla, kuten haihduttamalla tyhjössä, kromatografisesti ja uudelleenkiteyttämällä, jolloin saadaan kaavan I mukaista yhdistettä, jossa A on O tai S.

20 Kaavion B valinnaisessa vaiheessa c suojatun aminoryhmän tai suojatun hydroksiryhmän suojaus voidaan ·'* : poistaa sellaisten kaavan I mukaisten yhdisteiden ; .* saamiseksi, joissa R on substituoitu bentseeni ja Q, W tai ·,'* X on amino tai hydroksi. Sopivien suojaryhmien valikoima on ! ‘.j 25 alan ammattilaisten sinänsä tuntema ja suojaryhmien poistoa ! kuvataan teoksessa Protecting Groups in Organic Synthesis S'; (T . Greene) .

Seuraavissa esimerkeissä esitetään tyypillisiä . synteesejä, joita on kuvattu kaaviossa B. Nämä esimerkit 30 ainoastaan kuvaavat keksintöä eikä niiden tarkoitus ole G’ rajoittaa käsillä olevaa keksintöä millään lailla.

'·· Seuraavissa esimerkeissä käytetyillä termeillä on seuraavat merkitykset: "g" tarkoittaa grammoja, "mmol" tarkoittaa (.l. millimooleja, "ml" tarkoittaa millilitroja, "°C" tarkoittaa 35 Celsius-asteita, "Rf" tarkoittaa retentiota ja "sp" tarkoittaa sulamispistettä.

Esimerkki 8

Kaavio B, vaihe a: 18 109901 2-bentsoyylikromoni

Kromoni-2-karboksyylihappokloridi (2,0 g, 9,6 mmol) 5 ja alumiinikloridi (3,84 g, 28,7 mmol) yhdistetään bentseenissä (70 ml). Tätä seosta lämmitetään refluksissa 4 tuntia. Reaktioseos kaadetaan jääveteen (150 ml).Seosta uutetaan dikloorimetaanilla kaksi kertaa. Erotetut orgaaniset kerrokset kuivataan MgSChilla, suodatetaan ja 10 haihdutetaan tyhjössä. Sitten jäännös kromatografoidaan silikageelillä 15 prosenttisella etyyliasetaatti/-heksaanilla eluoiden. Fraktioita sisältävä tuote haihdutetaan ja näin saadaan otsikon mukaista yhdistettä kiinteänä aineena.

15 Esimerkki 9

Kaavio B, vaihe a: 2-(4-metoksibentsoyyli)kromoni

Kromoni-2-karboksyylihappokloridi (10 mmol) ja alumiinikloridi (30 mmol) yhdistetään anisolissa (70 ml) .

20 Tätä seosta lämmitetään refluksissa 24 tuntia. Reaktioseos kaadetaan jääveteen (150 ml). Seosta uutetaan <<> ’ dikloorimetaanilla kaksi kertaa. Erotetut orgaaniset * * * . '!* kerrokset kuivataan MgSChtlla, suodatetaan ja haihdutetaan -/«· tyhjössä. Sitten jäännös kromatografoidaan silikageelillä t ',! 25 ja näin saadaan otsikon mukaista yhdistettä.

; Esimerkki 10

Kaavio B, vaihe b: f 2-bentsoyyli-4-bentseenisulfonyyli-imino- 4H- > . kromeeni t * » 30 2-bentsoyylikromoni (0,17 g, 0,68 mmol) ja > · bentseenisulf onyyli-isosyanaatti (1,02 ml, 2,03 mmol) j h, yhdistetään asetonitriilissä (7,0 ml). Tätä seosta lämmitetään refluksissa 48 tuntia. Reaktioseokseen lisätään 1 t t metanolia (5 ml) reaktion lopettamiseksi. Seos haihdutetaan s i i 1 » » * , 35 tyhjössä kiinteän aineksen saamiseksi. Sen jälkeen, kun * i * i * I · 19 109901 jäännös on uudelleenkiteytetty metanolista, saadaan otsikon mukaista yhdistettä kiinteänä aineena, sp. 159 - 160 °C. Alkuaineanalyysi yhdisteelle C22H15NO4S:

Laskettu: C 67,85, H 3,88, N 3,60 5 Löydetty: C 67,47, H 3,70, N 3,56.

Esimerkki 11 Kaavio B, vaihe b: 2-(4-metoksibentsoyyli)-4-bentseenisulfonyyli-imino-4H-kromeeni 10 2-(4-metoksibentsoyyli)kromoni (1 mmol) ja bentseenisulfonyyli-isosyanaatti (1,2 mmol) yhdistetään asetonitriilissä (7,0 ml). Tätä seosta lämmitetään refluksissa 48 tuntia. Reaktioseokseen lisätään metanolia (5 ml) reaktion lopettamiseksi. Seos haihdutetaan tyhjössä.

15 Sen jälkeen, kun jäännös on uudelleenkiteytetty, saadaan otsikon mukaista yhdistettä.

Esimerkki 12

Kaavio B, valinnainen vaihe c: 2-(4-hydroksibentsoyyli)-4-bentseenisulfonyyli-20 imino-4H-kromeeni ,·. 2- (4-metoksibentsoyyli) -4-bentseenisulfonyyli- • · imino-4H-kromeeni (1 mmol) ja natriumtioetoksidi (2 mmol) ", yhdistetään dimetyyliformamidissa (5 ml) . Tätä seosta • 1· sekoitetaan 48 tuntia. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja • · · '· '25 dikloorimetaanilla. Orgaaninen kerros erotetaan, kuivataan MgS04:lla, suodatetaan ja haihdutetaan tyhjössä.

• · · · Silikageelillä suoritetun kromatografoinnin jälkeen saadaan otsikon mukaista yhdistettä.

;1·.· Yleinen synteettinen menetelmä joidenkin kaavan I

• · .”30 mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa A on NH, on • · · esitetty kaaviossa C. Kaaviossa C kaikki substituentit, ’· " jollei muuta mainita, ovat kuten edellä on määritelty.

• 1 * 1 1 · · 20 109901

Kaavio C

Vaihe a /^Nj^-c(o)cl (') (3)

O

Vaihe b

15 N I

j ^ ^ ^ Vaihe c | J

20 R Y ^ H^1

tt| · Kaava I, jossa O

• · _ ·# A on NH

:35 | ίί ^Vy

Kaava I, jossa O

; A on NH

21 109901

Kaavion C vaiheessa a sopivan rakenteen (1) mukaisen happokloridin, jota vastaava on sinänsä tunnettu (P. Leeson, EP-patenttihakemus 303 387, julkaistu 15.2.1989), annetaan reagoida sopivan organostannaanin 5 kanssa katalyytin läsnäollessa rakenteen (3) mukaisen yhdisteen saamiseksi.

10 Sopiva organostannaani on sellainen, jossa on ryhmä R, kuten kaavan I mukaisen lopputuotteen kohdalla on toivottavaa. Kun R on substituoitu fenyyli, substituentit Q, W tai X ovat sellaisia, kuten kaavan I mukaisen lopputuotteen kohdalla on toivottavaa. Vaihtoehtoisesti 15 sopiva organostannaani on sellainen, jossa on rthmä R, joka sisältää suojatun aminoryhmän tai suojatun hydroksiryhmän, jolloin saadaan Q, W tai X, jotka ovat amino tai hydroksi, kuten kaavan I mukaisen lopputuotteen kohdalla on toivottavaa.

20 Esimerkiksi, sopivan rakenteen (1) mukaisen .*. happokloridin annetaan olla kosketuksessa sopivan organostannaanin kanssa katalyytin, kuten \ \ tetrakis(trifenyylifosfiini)palladiumin (0), bis (asetoni- i I triili)palladium (II)kloridin, palladium (II)kloridin, pal- *•*£5 ladium(II)asetaattin, palladium (II)bromidin, bis(bentsoni- triili)palladium(II)kloridin tai palladium (II)- · asetoasetaatin kanssa. Reaktio suoritetaan liuottimessa, kuten tetrahydrofuraanissa, l-metyyli-2-pyrrolidinonissa tai dimetyyliformamidissa. Reaktio suoritetaan lämpötilassa •"'30 0 °C - liuottimen refluksilämpötila. Reaktioon kuluu 1-72 tuntia ja se tulisi lopettaa silloin, kun saadaan haluttua * ” tuotetta (3) mahdollisimman paljon ja ei-toivottu j a tuotteita mahdollisimman vähän. Tuote eristetään reaktioalueelta ja puhdistetaan sinänsä tunnetuilla ....35 tekniikoilla, kuten haihduttamalla, uuttamalla, kromatografoimalla ja uudelleenkiteyttämällä.

22 109901

Kaavion C vaiheessa b rakenteen (3) mukainen yhdiste debentsyloidaan rakenteen (4) mukaisen yhdisteen saamiseksi.

Esimerkiksi rakenteen (3) mukaisen yhdisteen 5 annetaan olla kosketuksessa sopivan debentsylointiaineen, kuten trifluorietikkahapon kanssa lämpötilassa, joka on riittävä poistamaan suojaryhmän, mutta joka ei hajota lähtöainetta tai tuotetta. Debentsylaatioissa, joissa sopiva debentsyloiva aine on trifluorietikkahappo, on 10 edullinen lämpötila 70 - 80 °C. Tämä reaktio voi poistaa happo labiilit suojaryhmät, kun ryhmä R sisältää suojatun amino- tai hydroksiryhmän. Niissä reaktioissa, joissa suojaryhmä poistetaan debentsylointuolosuhteissa, reaktioseos haihdutetaan tyhjössä ja suojaryhmä laitetaan 15 uudelleen raakareaktioseokseen sinänsä tunnetuilla menetelmillä ja näitä on kuvattu T. Greenen teoksessa Protecting Groups in Organic Synthesis. Tuote otetaan talteen sinänsä tunnetuilla menetelmillä, kuten haihduttamalla tyhjössä, kromatografoimalla ja 20 uudelleenkiteyttämällä, jolloin saadaan rakenteen (4) mukaista yhdistettä.

!!V Kaavion C vaiheessa c rakenteen (4) mukaisen \ yhdisteen annetaan olla kosketuksessa sopivan • · "· ’· bentseenisulfonyyli-isosyanaatin kanssa kaavan I mukaisen • · · '· ‘25 bentseenisulfonyyli-imiinin saamiseksi.

Sopiva bentseenisulfonyyli-isosyanaatti on • * · ·',! ·* sellainen, jossa Z on kuten kaavan I mukaisen lopputuotteen kohdalla on toivottavaa.

:*·,· Esimerkiksi rakenteen (4) mukaisen yhdisteen • * .‘•'30 annetaan olla kosketuksessa sopivan bentseenisulf onyyli-isosyanaatin kanssa. Reaktio suoritetaan sopivassa • · «' ” liuottimessa, kuten asetonitriilissä tai propionitriilissä lämpötilavälillä 20 °C - liuottimen ref luksilämpötila. Sitten tuote otetaan talteen sinänsä tunnetuilla k .,,.:35 tekniikoilla, kuten haihduttamalla tyhjössä, kromato- 23 109901 grafoimalla ja uudelleenkiteyttämällä, sellaisen kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa A on NH.

Kaavion C valinnaisessa vaiheessa d suojatun aminoryhmän tai suojatun hydroksiryhmän suojaus voidaan 5 poistaa, jolloin saadaan kaavan I mukaisia yhdisteitä ,joissa R on substituoitu fenyyli ja Q, W tai X ovat amino tai hydroksi. Sopivien suojaryhmien valinta on sinänsä tunnettua ja suojaryhmien poistoa kuvataan T. Greenen teoksessa Protecting Groups in Organic Synthesis.

10 Seuraavissa esimerkeissä esitetään tyypillisiä synteesejä, joita on kuvattu kaaviossa C. Nämä esimerkit ainoastaan kuvaavat keksintöä eikä niiden tarkoitus ole rajoittaa käsillä olevaa keksintöä millään lailla. Seuraavissa esimerkeissä käytetyillä termeillä on seuraavat 15 merkitykset: "g" tarkoittaa grammoja, "mg" tarkoittaa milligrammoja, "mmol" tarkoittaa millimooleja, "ml" tarkoittaa millilitroja, "°c" tarkoittaa Celsius-asteita, "Rf" tarkoittaa retentiota, "sp" tarkoittaa sulamispistettä, "haj." tarkoittaa hajoavaa ja "TLC" 20 ohutlevykromatografiaa.

Esimerkki 13 4-tributyylistannyyli-N,N' - (1,1,4,4-tetrametyyli- 1,4-disiletyleeni) aniliinin valmistus l 4-tributyylistannyyli-N,N'-(1,1,4,4-tetrametyyli- *· '25 1,4-disiletyleeni)aniliini ’·'··' 4-bromi-N,N' -(1,1,4,4-tetrametyyli-l, 4-disiletyl- • · · ·,· · eeni) aniliini (10 mmol) (T. L. Guggenheim, Tet. Lets. 25 (1984) 1 253 - 1 254) ja heksabutylditiini (20 mml) yhdistetään tolueenissa (50 ml) . Tähän seokseen lisätään • · •‘"30 tris(bentsyylideeniasetoni)dipalladiumia(0) (400 mg) ja lämmitetään 80 °C:een inertissä ilmakehässä. 48 tunnin kulutta tämä haihdutetaan tyhjössä ja puhdistetaan ’···* kromatografisesti silikageelillä ja näin saadaan otsikon mukaista yhdistettä.

• · 24 109901

Esimerkki 14

Kaavio C, vaihe a: 5,7-dikloori-2-[(4-N,N'-(1,1,4,4-teträmetyyli-1,4-disiletyleeni)amino)bentsoyyli]-4-bentsyylioksikinoliini 5 5,7-dikloori-4-bentsyylioksikinoliini-2-happo- kloridi (1,83 g, 5 mmol) ja 4-tributyylistannyyli-N,N'-(1,1,4,4-tetrametyyli-l,4-disiletyleeni)aniliini (5 mmol) yhdistetään l-metyyli-2-pyrrolidonissa (5 ml) ja tähän seokseen lisätään bis-asetonitriilipalladium(II)dikloridia 10 (5 mg) . Reaktioastia huuhdellaan typpikaasulla, se suljetaan ja lämmitetään 60 °C:een. 8 tunnin sekoittamisen jälkeen reaktioseokseen lisätään vielä bis- asetonitriilipalladium ( II ) dikloridia (2,07 mg, 0,08 mmol) ja sekoittamista jatketaan 16 tuntia. Reaktioseos kaadetaan 15 veteen ja sitä uutetaan dikloorimetaanilla, se kuivataan magnesiumsulfaatilla ja haihdutetaan tyhjössä.

Silikageelillä suoritetun kromatografoinnin jälkeen saadaan otsikon mukaista yhdistettä.

Esimerkki 15 20 Kaavio C, vaihe a: .·. 5,7-dikloori-2- [2- (t-butoksikarbonyyliamino) - • *t;’ bentsoyyli] -4-bentsyylioksikinoliini *. 5,7-dikloori-4-bentsyylioksikinoliini-2-happoklo- • t ; ) ridi (1,83 g, 5 mmol) ja 2-(t-butoksi-karbon- • · · *· '25 yyliamino)fenyylitrimetyylistannaania (5 mmol) (F. G.

*..V Salituro ja I. A. McDonald, J. Org. Chem. 53 (1988) 6 138 -: 6 139) yhdistetään tolueenissa (5 ml) ja tähän lisätään tetrakis(trifenyylifosfiini)palladiumia(0) (5 mg). Reak- :*·,· tioastia huuhdellaan typpikaasulla, se suljetaan ja ♦ · ."‘30 lämmitetään 60 °C:een. 8 tunnin sekoittamisen jälkeen * i * reaktioseokseen lisätään vielä bis-asetonitrii- “ lipalladium(II) dikloridia (2,07 mg, 0,08 mmol) ja sekoittamista jatketaan 16 tuntia. Reaktioseos kaadetaan :‘j'; veteen ja sitä uutetaan dikloorimetaanilla, se kuivataan .... :35 magnesiumsulfaatilla ja haihdutetaan tyhjössä. Sili- > · 25 109901 kageelillä suoritetun kromatografoinnin jälkeen saadaan otsikon mukaista yhdistettä.

Esimerkki 16

Kaavio C, vaihe b: 5 5,7-dikloori-2-[(4-N,N'-(1,1,4,4-tetrametyyli-l,4- disiletyleeni)amino)bentsoyyli]-1,4-dihydrokinol-4-oni 5.7- dikloori-2-[(4-N,N'-(1,1,4,4-tetrametyyli-l,4-disiletyleeni)amino)bentsoyyli]-4-bentsyylioksikinoliini (4 mmol) ja trifluorietikkahappo (55 ml) yhdistetään ja seos 10 lämmitetään 80 °C:een. 4 tunnin kuluttua reaktioseos haihdutetaan tyhjössä jäännöksen saamiseksi. Jäännös uudelleenkiteytetään asetonitriilistä ja näin saadaan otsikon mukaista yhdistettä.

Esimerkki 17 15 Kaavio C, vaihe b: 5.7- dikloori-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino)-bentsoyyli]-1,4-dihydrokinol-4-oni 5.7- dikloori-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino)bentsoyyli] -4-bentsyylioksikinoliini (4 mmol) ja trifluo- 20 rietikkahappo (55 ml) yhdistetään ja seos lämmitetään 80 .·, °C:een. 4 tunnin kuluttua reaktioseos haihdutetaan tyhjössä *.’V jäännöksen saamiseksi. Seokseen lisätään dikloorimetaania ", ja se haihdutetaan useita kertoja trifluori- *; ’· etikkahappojäännösten poistamiseksi täysin. Raaka • » · ’· '25 reaktioseos liuotetaan dikloorimetaaniin (20 ml) ja siihen lisätään di-t-butyylidikarbonaattia (4 mmol) . Seoksen ·1 annetaan sekoittua 24 tuntia. Seos haihdutetaan tyhjössä. Jäännös kromatografoidaan silikageelillä ja näin saadaan otsikon mukaista yhdistettä.

* » · t I « 26 109901

Esimerkki 18

Kaavio C, vaihe c: 5.7- dikloori-2-[(4-Ν,Ν'-(1,1,4,4-tetrametyyli-l,4-disiletyleeni) amino)bentsoyyli]-4-(bentseenisulfonyyli- 5 imino)-1,4-dihydrokinoliini 5.7- dikloori-2-[(4-N,N'-(1,1,4,4-tetrametyyli-l,4-disiletyleeni)amino)bentsoyyli]-1,4-dihydrokinol-4-oni (2 mmol) ja bentseenisulfonyyli-isosyanaatti (2,2 mmol) yhdistetään asetonitriilissä (9 ml) ja seosta lämmitetään 10 refluksissa 48 tuntia. Tähän lisätään metanolia (5 ml) reaktion lopettamiseksi. Seos haihdutetaan tyhjössä jäännöksen saamiseksi. Jäännös kromatografoidaan silika-geelipylväässä ja näin saadaan otsikon mukaista yhdistettä.

Esimerkki 19 15 Kaavio C, vaihe c: 5.7- dikloori-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino)bentsoyyli] -4-(bentseenisulfonyyli-imino)-1,4-dihydrokinoliini 5.7- dikloori-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino)-bentsoyyli]-1,4-dihydrokinol-4-oni (2 mmol) ja bents- 20 eenisulfonyyli-isosyanaatti (2,2 mmol) yhdistetään .·. asetonitriilissä (9 ml) ja seosta lämmitetään refluksissa ••V 48 tuntia. Tähän lisätään metanolia (5 ml) reaktion lopettamiseksi. Seos haihdutetaan tyhjössä jäännöksen • » • » * ; ' saamiseksi. Jäännös kromatografoidaan silikageelipylväässä

t I I

*· *25 ja näin saadaan otsikon mukaista yhdistettä.

Esimerkki 20 ·,· · Kaavio C, valinnainen vaihe d: 5.7- dikloori-2-(4-aminobentsoyyli)-4-bentseeni-sulfonyyli-imino) -1,4-dihydrokinoliini • · .“‘30 5,7-dikloori-2-[(4-N,N’-(l,l,4,4-tetrametyyli-l,4- disiletyleeni)amino)bentsoyyli]-4-(bentseenisulfonyyli- » 4 ·’ " imino)-1,4-dihydrokinoliini (1 mmol) ja tetra- • butyyliammoniumfluoridi (1,2 ml, 1 M tetrahydrofuraanissa, 1,2 mmol) yhdistetään tetrahydrofuraanissa (5 ml). Seosta ...,35 sekoitetaan 24 tuntia. Se haihdutetaan tyhjössä jäännöksen 27 109901 saamiseksi. Jäännös kromatografoidaan silikageelipylväässä otsikon mukaisen yhdisteen saamiseksi.

Esimerkki 21

Kaavio C, valinnainen vaihe d: 5 5,7-dikloori-2-(2-aminobentsoyyli)-4-bentseeni- sulfonyyli-imino)-1,4-dihydrokinoliini 5,7-dikloori-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino)-bentsoyyli]-4-(bentseenisulfonyyli-imino)-1,4-dihydro-kinoliini (1 mmol) ja etyyliasetaatti (50 ml) yhdistetään. 10 Tähän seokseen lisätään trifluorietikkahappoa (1 ml) ja sitä sekotietaan. 24 tunnin kuluttua se haihdutetaan tyhjössä ja jäännös jaetaan dikloorimetaanin ja kyllästetyn natriumbikarbonaattivesiliuoksen kesken. Orgaaninen kerros erotetaan, kuivataan magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja 15 haihdutetaan tyhjössä. Jäännös kromatografoidaan silikageelipylväässä otsikon mukaisen yhdisteen saamiseksi.

Yleinen synteettinen menetelmä joidenkin kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa A on O tai S, on esitetty kaaviossa D. Kaaviossa D kaikki substituentit, 20 jollei muuta mainita, ovat kuten edellä on määritelty.

* • · • » • * · · i* t « · · • · • · • t • · • * · • · • * * «n • · • · · tl· < · » I I I • * > » * * • I • » · • · t • · · · • · > t » I · » > » I · t » * » * » • »

J

28 109901

Kaavio D

0 O

5 Γ^Υ^Ί I . j Vaihe a J | (5) (6) 10 0

Vaihe b 15 N/S°y\ /®i/v

Valinnainen I

- τ^Α,,Υγ-* ""· J^A.aA^-> • · · · Λ ... o o . ··; Kaava I, jossa Kaava I, jossa

’. '. A on O tai S A on O tai S

• I

*. '25 Kaavion D vaiheessa a annetaan sinänsä tunnetun, ·,·,· rakenteen (5) mukaisen happokloridin reagoida sopivan * i * :: : organostannaanin kanssa katalyytin läsnäollessa rakenteen (6) mukaisen yhdisteen saamiseksi.

.*. : Sopiva rakenteen (5) mukainen happokloridi on .•*•,30 sellainen, jossa Y on kuten kaavan I mukaisen lopputuotteen '·* kohdalla on toivottavaa.

t » i « : ** Sopiva organostannaani on sellainen, jossa on ryhmä R, kuten kaavan I mukaisen lopputuotteen kohdalla on toivottavaa. Kun R on substituoitu fenyyli, substituentit ,,,,:35 Q, W tai X ovat sellaisia, kuten kaavan I mukaisen lopputuotteen kohdalla on toivottavaa. Vaihtoehtoisesti 29 109901 sopiva organostannaani on sellainen, jossa on ryhmä R, joka sisältää suojatun aminoryhmän tai suojatun hydroksiryhmän, jolloin saadaan Q, W tai X, jotka ovat amino tai hydroksi, kuten kaavan I mukaisen lopputuotteen kohdalla on 5 toivottavaa.

Esimerkiksi, sopivan rakenteen (5) mukaisen happokloridin annetaan olla kosketuksessa sopivan organostannaanin kanssa katalyytin, kuten tetrakis-(trifenyylifosfiini)palladiumin(0) , bis (asetonitriili)- 10 palladium (II)kloridin, palladium (II)kloridin, palladium-ill) asetaattin, palladium(II)bromidin, bis(bentsonitriili)-palladium(II)kloridin tai palladium (II)asetoasetaatin kanssa. Reaktio suoritetaan liuottimessa, kuten tetra-hydrofuraanissa, l-metyyli-2-pyrrolidinonissa tai 15 dimetyyliformamidissa. Reaktio suoritetaan lämpötilassa 0 °C - liuottimen refluksilämpötila. Reaktioon kuluu 1-72 tuntia ja se tulisi lopettaa silloin, kun saadaan haluttua tuotetta (6) mahdollisimman paljon ja ei-toivottuja tuotteita mahdollisimman vähän. Tuote eristetään 20 reaktioalueelta ja puhdistetaan sinänsä tunnetuilla tekniikoilla, kuten uuttamalla ja uudelleenkiteyttämällä • · !!",* rakenteen (6) mukaisen yhdisteen saamiseksi.

« · ·

Kaavion D vaiheessa b rakenteen (6) mukaisen • · *· ’· yhdisteen annetaan olla kosketuksessa sopivan • · ·. *25 bentseenisulfonyyli-isosyanaatin kanssa sellaisen kaavan I ’,·,· mukaisen bentseenisulfonyyli-imiinin saamiseksi, jossa A on ; : : o tai s.

Sopiva bentseenisulfonyyli-isosyanaatti on sellai-nen, jossa Z on kuten kaavan I mukaisen lopputuotteen » * ,••>,30 kohdalla on toivottavaa.

» *·* Esimerkiksi rakenteen (6) mukaisen yhdisteen ; ** annetaan olla kosketuksessa sopivan bentseenisulfonyyli-isosyanaatin kanssa. Reaktio suoritetaan sopivassa .':*. liuottimessa, kuten asetonitriilissä tai propionitriilissä iiu;35 lämpötilavälillä 20 °C - liuottimen ref luksilämpötila.

Sitten tuote otetaan talteen sinänsä tunnetuilla 30 109901 tekniikoilla, kuten haihduttamalla tyhjössä, kromato-grafoimalla ja uudelleenkiteyttämällä, sellaisen kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa A on O tai S.

Kaavion D valinnaisessa vaiheessa c suojatun 5 aminoryhmän tai suojatun hydroksiryhmän suojaus voidaan poistaa, jolloin saadaan kaavan I mukaisia yhdisteitä, joissa R on substituoitu fenyyli ja Q, W tai X ovat amino tai hydroksi. Sopivien suojaryhmien valinta on sinänsä tunnettua ja suojaryhmien poistoa kuvataan T. Greenen 10 teoksessa Protecting Groups in Organic Synthesis.

Seuraavissa esimerkeissä esitetään tyypillisiä synteesejä, joita on kuvattu kaaviossa D. Nämä esimerkit ainoastaan kuvaavat keksintöä eikä niiden tarkoitus ole rajoittaa käsillä olevaa keksintöä millään lailla.

15 Seuraavissa esimerkeissä käytetyillä termeillä on seuraavat merkitykset: "g" tarkoittaa grammoja, "mg" tarkoittaa milligrammoja, "mmol" tarkoittaa millimooleja, "ml" tarkoittaa millilitroja, "°C" tarkoittaa Celsius-asteita, "Rf" tarkoittaa retentiota, "sp" tarkoittaa sulamis-20 pistettä, "haj." tarkoittaa hajoavaa ja "TLC" ohutlevykromatografiaa.

!!V Esimerkki 22 *. Kaavio D, vaihe a: *; 2-[ (4-N,N'-(1,1,4,4-tetrametyyli-l,4-disiletyl- ’· * 125 eeni) amino)bentsoyyli] kromoni ·,!,· Kromoni-2-karboksyylihappokoridi (10 mmol) ja 4- '/· ’ tributyylistannyyli-N,N'-(1,1,4,4-tetrametyyli-l,4-disil- etyleeni)aniliini (5 mmol) yhdistetään l-metyyli-2-pyrrolidinonissa (5 ml) ja tähän seokseen lisätään bis-.•’*.30 asetonitriilipalladium(II) dikloridia (5 mg). Reaktioastia huuhdellaan typpikaasulla, se suljetaan ja lämmitetään 60 ' ” °C:een. 8 tunnin sekoittamisen jälkeen reaktioseokseen ’,,,· lisätään vielä bis-asetonitriilipalladium(II) dikloridia . (2,07 mg, 0,08 mmol) ja sekoittamista jatketaan 16 tuntia.

,,.,:35 Reaktioseos kaadetaan veteen ja sitä uutetaan dikloorimetaanilla, se kuivataan magnesiumsulfaatilla ja 31 109901 haihdutetaan tyhjössä. Silikageelillä suoritetun kromato-grafoinnin jälkeen saadaan otsikon mukaista yhdistettä. Esimerkki 23 Kaavio D, vaihe b: 5 2-[ (4-N,N'-(1,1,4,4-tetrametyyli-l,4-disiletyl- eeni)amino)bentsoyyli]-4-bentseenisulfonyyli-imino-4H-kromeeni 2 - [ (4-N,N'-(1,1,4,4-tetrametyyli-l,4-disiletyl-eeni)amino)bentsoyyli]kromoni (1 mmol) ja bentseeni-10 sulfonyyli-isosyanaatti (1,2 mmol) yhdistetään asetonitriilissä (7,0 ml). Seosta refluksoidaan 48 tuntia. Siihen lisätään metanolia (5 ml) reaktion lopettamiseksi. Seos haihdutetaan tyhjössä. Silikageelillä suoritetun kromatografoinnin jälkeen saadaan otsikon mukaista 15 yhdistettä.

Esimerkki 24

Kaavio D, valinnainen vaihe c: 2- (4-aminobentsoyyli) -4-bentseenisulfonyyli-imino-4H-kromeeni 20 2-[(4-N,N'-(l,l,4,4-tetrametyyli-l,4-disiletyl- eeni)amino)bentsoyyli]-4-bentseenisulfonyyli-imino-4H- • · kromeeni (1 mmol) ja tetrabutyyliammoniumfluoridi (1,2 ml, *. *. IM tetrahydrofuraanissa, 1,2 mmol) yhdistetään • · *· ’· tetrahydrofuraanissa (5 ml). Seosta sekoitetaan 24 tuntia.

• · · ‘•'25 Se haihdutetaan tyhjössä jäännöksen saamiseksi. Jäännös M.* kromatografoidaan silikageelipylväässä ja näin saadaan ·' otsikon mukaista yhdistettä.

Interleukiini-1 (IL-1) koostuu kahdesta ;’·,· polypeptidistä, joita nimitetään IL-Ια ja IL-Ιβ, jotka a · .’"30 kuuluvat sytokiiniperheeseen, johon näiden lisäksi kuuluvat « ♦ a _* myös tuumorinekroositeki j ä (TNFa) ja IL-6. Näillä : '* sytokiineillä on päällekkäisiä biologisia ominaisuuksia, » i » kuten kyky stimuloida T- ja B-lymfosyyttej ä ja vaikuttaa proteiinien ilmentymiseen, joka liittyy moniin .,,,:35 immunologisiin ja inflammatorisiin vasteisiin.

32 109901

Aineet, jotka inhiboivat IL-l:n toimintaa, voivat saada sen aikaan usealla mekanismilla, kuten inhiboimalla IL-l:n tuotantoa inhiboimalla ilmentymistä, synteesiä tai IL-l:n vapautumista, antagonismilla IL-l-reseptorissa, 5 inhiboimalla IL-l:n aikaansaamaa IL-l:n tuotannon vahvistumista tai inhiboimalla IL-l:n aikaansaamaa muiden sytokiinien tuotantoa, jne.

Tiedetään esimerkiksi, että IL-l:a tuottavat epiteelisolut ja IL-1 stimuloi fibroplastien 10 proliferaatiota ja vapauttaa proteolyyttisiä entsyymejä (esimerkiksi kollagenaasia) ja prostaglandiineja inflammatorisissa prosesseissa, kuten nivelreumassa. Katso S. K. Durom, J. A. Schmidt, J. J. Oppenheim, "Interleukin 1: an Immunological Perspective", Ann. Rev. Immunol., 3 15 (1985) 263 - 287, I. G. Otterness, M. L. Blieven, J. T.

Downs, E. J. Natoli, D. C. Hanson, "Inhibition of

Interleukin-1 Synthesis by Tenidap: a New Drug for

Arthritis", Cytokine 3 (1991) 277 - 283, ja N. Miyasaka, K.

Sato, M. Goto, M. Sasano, M. Natsuyma. K. Inoue ja K.

20 Nishioks, "Augmented Interleukin-1 Production and HLA-DR

.·, Expression in the Synovium of Rheumatoid Arthritis » *

Patients", Arthritis and Rheumatism 31 (1988) 480 - 486.

t * * Täten aineet, jotka inhiboivat IL-l:n toimintaa, olisivat *1 '! hyödyllisiä hoidettaessa nivelreumaa.

* * « *· '*25 Lisäksi on osoitettu, että IL-1 voi vaikuttaa arterioskleroosin patogeneesiin suoraan stimuloimalla · sileiden solujen uudiskasvua tai epäsuorasti stimuloimalla verihiutaleesta johdetun kasvutekijän (PDGF) toimintaa. Ka-tso R. L. Jackson ja G. Ku, "Interleukin-1B, its Role in • · .’•',30 the Pathogenesis of Atherosclerosis and Agents that Inhibit its Action, Current Drugs: Anti-atherosclerotic Agents, : '* (lokakuu 1991) s. B31 - B42. Lisäksi Tenidap, aine jonka » · tiedetään estävän IL-l-tuotantoa, alentaa seerumin kolesterolin, seerumin LDL-kolesterolin ja seerumin ,,,,:35 triglyseridien kokonaismäärää nisäkkäässä, jolla on artriittinen tila, johon Tenidapia annetaan. Katso US- 33 109901 patentti numero 5 122 534 (8.2.1991). Täten aineet, jotka inhiboivat IL-l:n toimintaa, voivat olla hyödyllisiä myös arterioskleroosin profylaktisessa hoidossa.

Lisäksi on myös väitetty, että makrofaageilla, 5 jotka läpäisevät Langerhansin saarekkeet, voivat näytellä osaa β-solujen tuhoutumisessa ja että sytokiinit, erityisesti IL-1, jota vapautuu paikallisesti makrofaageista, voi olla toksinen molekyyli, joka aiheuttaa β-solujen tuhoutumista insuliinista riippuvaisessa 10 sokeritaudissa (IDDM). Katso S. Sandler, D. Eizirik, C. Svensson, E. Strandell, M. Welsh ja N. Welsh, "Biochemical and Molecular Action of Interleukin-1 on Pancreatic β-cells", Autoimmunity 10 (1991) 241 - 253. Täten aineet, jotka inhiboivat IL-1:n toimintaa, voivat olla hyödyllisiä 15 myös sokeritaudin hoidossa.

Korrelaatiota on osoitettu myös kohonneen IL-1 tuotannon ja keskushermoston pesäkekovettumataudin (MS-taudin) kliinisessä kulussa. On osoitettu, että IL-la:n tuotannossa viljellyillä veren mononukleaarisoluilla on 20 merkittävä lisäys MS-tautia sairastavissa potilaissa ja ,·, toistuvan MS: n aktiivisessa vaiheessa on IL-la:n • · !!*.* tuotannossa kaikkein suurin lisäys. Katso M. Matsuda, N.

i « i * « ·

Tsukada, K. Miyagi ja N. Yanagisawa, "Increased • · *·’’ Interleukin-1 production by peripheral blood mononuclear » * * '525 cells in patients with multiple sclerosis", Journal of the •\.V Neurological Sciences 102 (1991) 100 - 104. Täten aineet, < 1 · !s! ί jotka inhiboivat IL-l:n toimintaa, voivat olla hyödyllisiä myös keskushermoston pesäkekovettumataudissa.

• ’ *, * Tutkimukset ovat osoittaneet myös, että IL-1 • · ,"‘,30 reseptoriantagonistit saattaisivat olla hyödyllisiä i t * • hoidettaessa alkavaa tai pysyvää keuhkojen i * • " sidekudostumista. Katso P. Piquet, C. Vesin, G. Grau ja R.

i « · *,,,· Thompson, "Interleukin-1 Reseptor Antagonist (IL-lra) Pre- « j'j’. vents or Cures Pulmonary Fibrosis Elicited in Mice By Bleo-.,,,:35 mycin or Silica", Cytokine 5 (1993) 57 - 61. Täten aineet,

• I

34 109901 jotka inhiboivat IL-l:n toimintaa, voivat olla hyödyllisiä myös hoidettaessa keuhkojen sidekudostumista.

Lisäksi on ehdotettu, että interleukiini-1 reseptoriantagonisteilla voi olla merkitystä septisestä 5 shokista johtuvan kuolleisuuden alenemisessa. Katso K.

Ohlsson, P. Björk, M. Bergenfeldt, R. Hageman ja R.

Thompson, "Interleukin-1 Receptor Antagonist Reduces

Mortality from Endotoxin Shock, Nature 348 (1990) 550 - 552. Täten aineet, jotka inhiboivat IL-l:n toimintaa, 10 voivat olla hyödyllisiä myös hoidettaessa septistä shokkia.

Kaavan I mukaiset yhdisteet inhiboivat IL-l:n toimintaa. Eräs mekanismi IL-l:n toiminnan inhiboimiseksi on inhiboida IL-l:n tuotantoa. IL-l:n tuotannon inhibointia testattiin käyttämällä lipopolysakkaridilla (LPS) 15 stimuloituja makrofaageja. IL-l:n inhibitio aikaansaaman sytokiinien tuotantoa testattiin mittaamalla TNFocn (tuumorinekroositekijäalfan) synteesin inhibitio IL-1 stimuloiduista makrofaageista. Näiden tutkimusten protokollia on kuvattu seuraavaksi.

20 Endotoksiinin aikaansaaman interleukiini-ΐβ:n . vapautuminen ihmisen makrofaageilla • » • · I)·/ Kohde: Tämän tutkimuksen kohde on määrittää • ·* inhibitiopitoisuudet tutkimusyhdisteille endotoksiinin • · *. *: aikaansaaman interleukiini-ΐβ:n (IL-Ιβ) vapautumista • · ·.*·· 25 (tuotantoa) vastaan ihmisen perifeeriveren monosyyteistä • t·t· johdetuilla makrofaageilla.

Lähde: Ihmisen perifeeriveren monosyyteistä johdettujen makrofaagien lähde on seuraava: .·, : Laskimoverta kerätään terveiltä vapaaehtoisilta • · · ,···[ 30 10 mM natriumsitraatissa (2 ml steriiliä natriumsitraattia 40 millilitraa verta kohden). Yksitumaiset solut erotetaan • · ί ’·· Leucoprep-putkilla (Becton Dickenson, tuotenumero 27 52 tai » · · !(ftt 2751) sentrifugoimalla nopeudella 1 500 g 15 minuuttia. 1 x 106 yksitumaisten solujen alikvootit lisätään 24-

• I I

' . 35 kaivoisille kudosviljelyalustoille (Corning) RPMI-1640:ssa.

• ·

Tunnin 37 °C:ssa tapahtuneen inkuboinnin jälkeen 35 109901 tarttumattomat solut huuhdellaan varovasti pois. Tarttuvat solut (makrofaagit) laitetaan takaisin tuoreelle RPMI-1640-alustalle, 1 ml/kaivo.

Menetelmä: Makrofaagien yksikerrosviljelmiä 5 esikäsitellään yhdisteillä tunti ennen endotoksiinistimulaatiota (20 ng/ml, Salmonella typhimurium, Re-mutantti, yhtiöstä Ribi Immuchem.). Yhdisteet, jotka on liuotettu 95-prosenttiseen etanoliin tai DMSO:iin, tarvitsisivat lisäksi yksikerrosviljelmiä, 10 joita on käsitelty 10:llä tai 2,5:11a mikrolitralla 95-prosenttista etanolia tai DMSO:a. Viljelmäsupernatantit otetaan talteen 24 tuntia myöhemmin ja niistä testataan IL-15 käyttämällä kaupallisesti saatavilla olevia ELISA-pakkausta (Cistron).

15 Tulosten analyysi: IL-lfi-pitoisuus viljelmä- supernatantissa lasketaan standardikäyrän avulla, joka on johdettu tunnetuista pitoisuussarjoista. Yhdisteen teho ilmoitetaan arvolla IC50 (μΜ).

2 0 Tulokset . Yhdiste IC50 • · 5,7-dikloori-2-bentsoyyli-4- 2 μΜ • · * • ·’ (bentseenisulfonyyli-imino)- • · • · " 1,4-dihydrokinoliini * · » » · ‘25 5,7-dikloori-2-asetyyli-4- 4 μΜ • · · (bentseenisulfonyyli-imino) -*·' * 1, 4-dihydrokinoliini • · • * * ’* *· Interleukiini-ΐβ: n aikaansaaman tuumorinekroosi- 30 tekijäalfan vapautuminen ihmisen makrofaageilla •’•tt Kohde: Tämän tutkimuksen kohde on määrittää inhibitiopitoisuudet testiyhdisteille interleukiini-ΐβ: n i;> (IL-Ιβ) aikaansaaman tuumorinekroositeki jän vapautumista • * · ’·’ ’ (tuotantoa) vastaan ihmisen perifeeriveren monosyyteistä • ’· 35 johdetuilla makrofaageilla. Tulee ymmärtää, että tässä testataan testiyhdisteiden kykyä moduloida eli inhiboida 109901 ί IL-Ιβ:n aktiivisuutta mittaamalla IL-Ιβ:n aikaansaaman THFa:n vapautumisen inhibitiota.

Ihmisen perifeeriveren monosyyteistä johdettujen makrofaagien lähde: 5 Laskimoverta kerätään terveiltä vapaaehtoisilta 10 mM natriumsitraatissa (2 ml steriiliä natriumsitraattia 40 millilitraa verta kohden). Yksitumaiset solut erotetaan Leucoprep-putkilla (Becton Dickenson, tuotenumero 2752 tai 2751) sentrifugoimalla nopeudella 1 500 g 15 minuuttia. 1 x 10 106 yksitumaisten solujen alikvootit lisätään 24- kaivoisille kudosviljelyalustoille (Corning) RPMI-1640:ssa. Tunnin 37 °C:ssa tapahtuneen inkuboinnin jälkeen tarttumattomat solut huuhdellaan varovasti pois. Tarttuvat solut (makrofaagit) laitetaan takaisin tuoreelle RPMI-1640-15 alustalle, 1 ml/kaivo.

Menetelmä: Makrofaagien yksikerrosviljelmiä esi- käsitellään yhdisteillä tunti ennen IL-lB-stimulaatiota (20 ng/ml, ihmisen rekombinatti IL-Ιβ). Yhdisteet, jotka on liuotettu 95-prosenttiseen etanoliin tai DMSO:iin, 20 tarvitsisivat lisäksi yksikerrosviljelmiä, joita on . käsitelty 10:llä tai 2,5:11a mikrolitralla 95-prosenttista *"/ etanolia tai DMSO:a. Viljelmäsupernatantit otetaan talteen ·* 24 tuntia myöhemmin ja niistä testataan IL-Ιβ käyttämällä • « ’· kaupallisesti saatavilla olevia ELISA-pakkausta (Cistron) .

• · :.''i 25 Tulosten analyysi: TNFa-pitoisuus viljelmä- ·,|#ί supernatantissa lasketaan standardikäyrän avulla, joka on : johdettu tunnetuista pitoisuussarjoista. Yhdisteen teho ilmoitetaan arvolla IC50 (μΜ).

• » • » i • · · • · · t · » » * I » 37 109901

Tulokset:

Yhdiste IC50 2-bentsoyyli-5,7-dikloori-4- 3 μΜ (bentseenisulfonyyli-imino)-5 1,4-dihydrokinoliini 2-asetyyli-5,7-dikloori-4- 8 μΜ (bentseenisulfonyyli-imino)- 1,4-dihydrokinoliini 2-bentsoyyli-4-(bentseenisulfo- 1,3 μΜ 10 nyyli-imino)-4H-kromeeni Käsillä olevan keksinnön mukaisesti valmistettavia yhdisteitä voidaan antaa useilla tavoilla. Ne ovat tehokkaita oraalisesti annettuina. Yhdisteitä voidaan antaa 15 myös parenteraalisesti (eli subkutaanisesti, intra- venoosisesti, intramuskulaarisesti, intraperitoneaalisesti tai intratekaalisesti).

Yhdisteiden terapeuttisten ominaisuuksien esiin saamiseksi niitä tulee antaa riittävä määrä IL-l:n . 20 toiminnan inhiboimiseksi. Annosväli, jolla näillä • · ;;*/ yhdisteillä on tämä inhiboiva teho, voi vaihdella suuresti • · · • ·' hoidettavasta sairaudesta, potilaan sairauden vakavuudesta, • * • · '· " potilaasta, annettavasta yhdisteestä, antotavasta, potilaan • · muiden piilevien sairaustilojen läsnäolosta, ja muista 25 vastaavista tekijöistä riippuen. Tyypillisesti yhdisteillä on terapeuttista tehoa annosvälillä noin 0,1 mg painokiloa kohden päivässä - noin 50 mg painokiloa kohden päivässä .·. : minkä tahansa tai edellä mainitun tilan hoitamiseksi.

··· Farmaseuttisia koostumuksia voidaan valmistaa * 1 30 käyttämällä hyväksi sinänsä tunnettuja tekniikoita. Tehokas : *· määrä kaavan I mukaisia yhdisteitä on tyypillisesti * · » :...· seoksessa farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan kanssa.

Oraalista antoa varten kaavan I mukaiset yhdisteet » » » _ . voidaan formuloida kiinteisiin tai nestemäisiin * * 35 valmisteisiin ja tällaisia ovat esimerkiksi kapselit, 109901 !

JO

pillerit, tabletit, lääketabletit, suussa sulavat tabletit, jauheet, suspensiot tai emulsiot. Kiinteitä yksik-köannosmuotoja voivat olla tavalliset gelatiinityyppiset kapselit, jotka sisältävät esimerkiksi pinta-aktiivisia 5 aineita, liukastusaineita ja inerttejä täyteaineita, kuten laktoosia, sakkaroosia ja maissintärkkelystä, tai ne voivat olla jatkuvan vapautumisen omaavia valmisteita.

Toisessa suoritusmuodossa voidaan kaavan I mukaisia yhdisteitä tabletoida tavanomaisilla tablettiperusaineilla, 10 kuten laktoosin, sakkaroosin ja maissintärkkelyksen avulla yhdessä sidonta-aineiden, kuten akaasian, maissintärkkelyksen tai gelatiinin, hajoamisaneiden, kuten perunatärkkelyksen tai alginiinihapon, ja liukastus-aineiden, kuten steariinihapon tai magnesiumstearaatin 15 kanssa. Nestemäiset valmisteet valmistetaan liuottamalla aktiivinen ainesosa vesipitoiseen tai vedettömään farmaseuttisesti hyväksyttävään liuottimeen, joka voi sisältää myös sinänsä tunnettuja suspendointiaineita, makeutusaineita, aromiaineita ja säilöntäaineita.

20 Parenteraalista antoa varten kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan liuottaa fysiologisesti hyväksyttävään • · ··· : farmaseuttiseen kantajaan ja näitä voidaan antaa joka * ♦ t • .* liuoksena tai suspensiona. Esimerkkejä sopivista ·."·· farmaseuttisista kantajista ovat vesi, suolaliuos, !_’··' 25 dekstroosiliuokset, f ruktoosiliuokset, etanoli tai : eläinöljyt, kasvisöljyt tai synteettiset öljyt. Farma- » * « :'·*· seuttinen kantaja voi sisältää myös sinänsä tunntettuja säilöntäaineita, puskureita, jne.

.·, ; Tässä hakemuksessa käytettynä

• M

30 a) termi "potilas" tarkoittaa lämminverisiä eläimiä, kuten esimerkiksi marsuja, hiiriä, rottia, • ’·· kissoja, kaneja, koiria, apinoita, simpansseja ja ihmistä; : b) termi "hoitaa" tarkoittaa yhdisteiden kykyä joko • helpottaa, lievittää tai hidastaa potilaan sairauden 35 etenemistä; • · 39 109901 c) termi "tehokas määrä" tarkoittaa määrää, joka on tehokas yksittäisenä tai useampana annoksena annettuna potilaalle inhiboimaan IL-1 toimintaa.

Käsillä olevan keksinnön mukaisesti valmistettavia 5 yhdisteitä voidaan antaa myös topikaalisesti. Tämä voidaan toteuttaa valmistamalla yksinkertaisesti liuos annettavasta yhdisteestä käyttäen edullisesti liuotinta, jonka tiedetään parantavan transdermaalista antoa, kuten etanolia tai dimetyylisulfoksidia (DMSO) täyteaineiden kanssa tai ilman 10 niitä. Edullisesti topikaalinen anto voidaan toteuttaa käyttämällä joko varastoivaa ja huokoista membraa- nityyppistä laastaria tai kiinteää matriisia.

Joitakin sopivia transdermaalisia välineitä on kuvattu US-patenteissa 3 742 951, 3 797 494, 3 996 934 ja 15 4 031 894. Nämä välineet sisältävät yleensä pohjus-tusrakenteen, joka määrittelee yhden sen pinnoista, aktiivisen aineen, jossa on läpäisevä adhesiivinen kerros, joka määrittelee toisen pinnan ja ainakin yhden aktiivista ainetta sisältävän säiliön pintojen välissä.

20 Vaihtoehtoisesti aktiivinen aine voi olla useissa . mikrokapseleissa, jotka jakautuvat koko läpäisevän • · "/// adhesiivisen kerroksen läpi. Kummassakin tapauksessa a « · • ·’ aktiivista ainetta vapautuu jatkuvasti säiliöstä tai • a mikrokapseleista membraanin läpi aktiivista ainetta ·.'·· 25 läpäisevään sideaineeseen, joka on yhteydessä •yy vastaanottajan ihon tai limakalvon kanssa. Jos aktiivinen aine absorboituu ihon läpi, vastaanottajalle annetaan kontrolloitu ja ennalta määrätty määrä aktiivista ainetta.

.·. : Mikrokapseleiden ollessa kyseessä kapsulointiaine voi • » 30 toimia myös membraanina.

»

Toisessa välineessä transdermaalisessa annossa : ’*· käsillä olevan keksinnön mukainen yhdiste on matriisissa, :>ti: josta sitä vapautuu haluttu määrä kontroilloidulla ja vakionopeudella. Yhdiste pääsee matriisin läpi diffuusion (ii. 35 tai mikrohuokosvirran avulla. Vapautusmisnopeutta voidaan kontrolloida. Sellaista systeemiä, jossa tarvitaan ιη 109901 40 membraani, on kuvattu US-patentissa 3 921 636. Ainakin kahdentyyppinen vapautuminen on mahdollista näissä systeemeissä. Diffuusiovapautumista esiintyy, kun matriisi ei ole huokoinen. Farmaseuttisesti tehokas yhdiste liukenee 5 ja hajaantuu itse matriisin läpi. Vapautumista mikrohuokosvirralla ilmenee, kun farmaseuttisesti tehokas yhdiste kulkeutuu nestefaasin läpi matriisin huokosissa.

Vaikkakin käsillä olevaa keksintöä on kuvattu erityisillä suoritusmuodoilla, on ymmärrettävä, että 10 muutkin muunnelmat ovat mahdollisia, ja tämän hakemus kattaa kaikki keksinnön variaatiot, käytöt tai mukaelmat, jotka seuraavat yleisesti käsillä olevan keksinnön periaatteita, ja käsittää sellaiset poikkeamat käsillä olevasta selitysosasta, jotka alan ammattilainen tuntee ja 15 tietää.

• · ·

• · · I

• · · • · • · • · ♦ a · • t • · • · · • · » * · a • · · * * · «ta • a a • · · • · • · » • I ♦ • a taa a • at • · ·

• · I

» * · • » » t ·

Claims

4i 109901 !

1. Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten kaavan I mukaisten bentseenisulfonyyli-5 imiinijohdannaisten ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, (i)

15 Ci jossa kaavassa A on NH, 0 tai S; R on haarautunut, suoraketjuinen tai syklinen

20 Ci-6alkyyliradikaali, fenyyli tai substituoitu fenyyli, . jossa on 1 - 3 substituenttia, jotka ovat toisistaan * · ··· · riippumatta Ci-4-alkyyli, Ci-4-alkoksi, halogeeni, : -NHC(0)CH3, amino tai hydroksi; Z on 1 - 3 substituenttia, jotka ovat toisistaan • · ·'.·; 25 riippumatta vety, Ci-4-alkyyli, Ci-4-alkoksi tai halogeeni; : : ; Y on 1 - 3 substituenttia, jotka ovat toisistaan 1 t · riippumatta vety, Ci-4-alkyyli, Ci-4-alkoksi tai halogeeni, tunnettu siitä, että yhdiste, jonka kaava on » » > .•’•ί 30 0 i *· (II) f: => O 109901 jossa A, R ja Y tarkoittavat samaa kuin edellä, jolloin mahdolliset amino- ja hydroksisubstituentit ryhmässä R voivat olla suojattuja, saatetaan reagoimaan bentseenisul-i fonyyli-isosyanaatin kanssa, jonka kaava on S0o-NC0 z-fj dll» jossa Z tarkoittaa samaa kuin edellä, minkä jälkeen mah-10 dolliset suojaryhmät poistetaan, ja haluttaessa saatu kaavan I mukainen yhdiste muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan I mukai- 15 nen yhdiste, jossa R on fenyyli.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on metyyli.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 20 tunnettu siitä, että valmistetaan 5,7-dikloori-2- asetyyli-4-[bentseenisulfonyyli-imino] -1,4-dihydrokinolii- • · : ni.

• · · • .· 5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, • « ·.1·· tunnettu siitä, että valmistetaan 5,7-dikloori-2- • « 25 bentsoyyli-4- [bentseenisulfonyyli-imino] -1,4-dihydrokino- ' i : liini. • · ·

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 2-bentsoyyli-4-[bentseenisulfonyyli-imino]-4H-kromeeni. t · .···. 30

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, • -» tunnettu siitä, että valmistetaan 5,7-dikloori-2- • » ·1 1· bentsoyyli-4-[bentseenisulfonyyli-imino]-4H-kromeeni. » · · t · • • i · » 1 1 * · · t · 109901