FI106410B - Keinotekoisia standardi- ja kontrolliseerumeja - Google Patents
Keinotekoisia standardi- ja kontrolliseerumeja Download PDFInfo
- Publication number
- FI106410B FI106410B FI924607A FI924607A FI106410B FI 106410 B FI106410 B FI 106410B FI 924607 A FI924607 A FI 924607A FI 924607 A FI924607 A FI 924607A FI 106410 B FI106410 B FI 106410B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- antibody
- standard
- specific
- antibodies
- conjugate
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/96—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood or serum control standard
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/967—Standards, controls, materials, e.g. validation studies, buffer systems
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/972—Modified antibody, e.g. hybrid, bifunctional
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/861—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving IgG3, IgG4, IgA, or IgY
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/862—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving IgE or IgD
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/863—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving IgM
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/866—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving immunoglobulin or antibody fragment, e.g. fab', fab, fv, fc, heavy chain or light chain
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/867—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving immunoglobulin or antibody produced via recombinant dna technology
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Electrotherapy Devices (AREA)
- Control Of El Displays (AREA)
- Studio Devices (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Prostheses (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
, 106410
Keinotekoisia standardi- ja kontrolliseerumeja
Keksintö koskee keinotekoisia standardi- ja kontrollireagensseja käytettäviksi immuunikemiallisissa määritysmenetelmissä sekä menetelmiä näi-5 den reagenssien valmistamiseksi.
Tavanomaiset immunologiset menetelmät sairauksien diagnosoimiseksi, joihin liittyy spesifisten vasta-aineiden muodostuminen sairauksien aiheuttajia vastaan, kuten viruksia, bakteereja, allergeenejä, autoantigeenejä tai määrättyjä lääkkeitä vastaan, perustuvat näiden vasta-aineiden kykyyn muo-10 dostaa komplekseja aiheuttajan antigeenirakenteiden kanssa. Joissakin näissä menetelmissä spesifisten vasta-aineiden määrää mittaava näyte saatetaan kosketuksiin sairaudenaiheuttajan antigeenirakenteiden kanssa, jolloin nämä antigeenirakenteet on kiinnitetty sopiville kantomateriaaleille. Näytteen sisältämät todettavat spesifiset vasta-aineet sitoutuvat immuunikomplekseina kantomateri-15 aaliin kiinnitettyihin sairaudenaiheuttajan antigeenirakenteisiin ja todetaan. Tällöin voidaan käyttää vasta-aineita tai muita reseptoreita, esim. proteiini-A.ta, jotka kykenevät muodostamaan komplekseja näytteen sisältämien spesifisten vasta-aineiden kanssa. Määritysreagenssi sisältää yleensä merkin, joka tekee sitoutuneen spesifisen vasta-aineen määrästä mittateknisesti todettavan. Käyt-20 tökelpoisia merkkejä ovat: radioaktiiviset isotoopit, entsyymit, fluoresoivat, fosfo-roivat tai luminoivat aineet, aineet, joissa on stabiileja parittomia elektroneja, punasolut, lateksihiukkaset, metallisoolit.
Näihin immuunikemiallisiin menetelmiin tarvitaan kontrolli- ja standar-diseerumeja, jotka sisältävät todettavaa vasta-ainetta tietyn määrän. Tämänkal-25 täisellä positiivisella kontrolliseerumilla on mahdollista todeta testissä käytettyjen reagenssien kelvollisuus. Tämän ohella mahdollistuu sellaisten testitulosten standardointi ja siten verrattavuus, jotka on saatu eri päivinä tai eri laboratorioissa. Standardiseerumeja käyttämällä· kvantitatiiviset määritykset ovat mahdollisia.
Yleisesti käytetyn tekniikan mukaan positiivisten kontrolli- tai standar-30 diseerumien valmistamiseksi potilaista, joiden sairaus johtuu tietystä aiheutta-: jasta, otetaan verta, eristetään seerumi sekä sekoittamalla eri potilaista saatuja seerumeja säädetään kontrolli- tai standardiseerumi tiettyyn pitoisuuteen spesifisiä, sairaudenaiheuttajaa vastaan kohdistuvia vasta-aineita.
Näiden menetelmien huonoja puolia ovat, että käytettävissä on oltava 35 riittävä lukumäärä henkilöitä, joiden veri sisältää näitä vasta-aineita. Edelleen « 2 106410 monasti lääketieteelliset perusteet ovat vastaan verenottoa tällaisista henkilöistä, esimerkiksi lapsista, tai on olemassa vaara, että sairaan veri on tartuttavaa eikä sopivia tappomenetelmiä tällaiselle sairaudenaiheuttajalle tunneta.
DE-julkaisussa 3 112 334 kuvataan keinotekoisia standardi-ja kont-5 rolliseerumeja, joilla ei ole edellä mainittuja huonoja puolia, sekä menetelmiä niiden valmistamiseksi ja niiden käyttöä. Standardi- ja kontrollireagenssina käytetään kemiallisesti kahdesta rakenneosasta A ja B kytkettyä konjugaattia, jolloin konjugaatissa rakenneosa A tuo kyvyn kompleksinmuodostukseen sairaudenai-heuttajan antigeenirakenteiden kanssa ja rakenneosa B esittää ihmisimmu-10 noglobuliinia tai -immunoglobuliinifragmenttia luokasta, joka on immuunikemialli-sessa määritysmenetelmässä todettavissa. DE-julkaisun 3 112 334 mukaisen konjugaatin valmistamiseksi ihmisseerumista on siten eristettävä rakenneosaa B, eli luokan G, M, A, D tai E ihmisimmunoglobuliinia suuri määrä erittäin puhtaana. Identtistä menettelyä keinotekoisten standardi- ja kontrollireagenssien 15 valmistamiseksi kuvataan DE-julkaisussa 3 800 048 vuodelta 1988.
Näiden menetelmien huonoja puolia ovat, että immunoglobuliinien saamiseksi tarvitaan käyttökelpoinen puhdistusmenetelmä ja nämä puhdistus-menettelyt johtavat immunoglobuliinien antigeenirakenteiden hävikkiin tai muuttumiseen. Täten esimerkiksi ihmisimmunoglobuliini M on taipuvainen kaikissa 20 tunnetuissa puhdistusmenetelmissä aggregaattimuodostukseen, mikä haittaa sen käyttökelpoisuutta edellä kuvattua tyyppiä edustavien konjugaattien valmistamisessa. Muiden immunoglobuliinien, esim. luokasta IgE, tavanomaisesti ihmisseerumeissa esiintyvä pitoisuus on alle 100 pg/l. lhmis-lgE:n puhdistamiseksi on siksi käytettävä veriluovutuksia myelooma-lgE-potilailta, joita maail-25 manlaajuisesti tunnetaan vain vähän ja joiden verinäytteet ovat vastaavasti harvinaisia ja kalliita.
Kontrolliseerumeihin tämän keksinnön merkityksessä luetaan myös standardiseerumit.
Täten tehtäväksi muodostui keinotekoisten standardi- ja kontrollisee-30 rumien löytäminen, joilla ei ole edellä kuvattujen konjugaattien huonoja puolia.
Yllättäen todettiin, että sopiva keinotekoinen standardi- ja kontrolli-seerumi voidaan saada siten, että valmistetaan konjugaatti rakenneosasta A, jossa on sitoutumistekijä sairaudenaiheuttajan rakennemerkeille, esim. tätä ra-kennemerkkiä vastaan kohdistuva vasta-aine, sekä rakenneosasta B, joka ky-35 kenee sitoutumaan todettavan sairaudenaiheuttajan vastaisen sitoutumistekijän spesifisiin rakennemerkkeihin rajoittamatta tämän immuunikemiallista reaktioky- • , 106410
O
kyä. Tätä konjugaattia lisätään sopiva pitoisuus vereen, veriosiin tai näytenes-teisiin terveiltä henkilöiltä. Saatua tuotetta käytetään sitten standardi- tai kontrol-litarkoituksissa.
Osoittautui, että konjugaatteja voidaan valmistaa toistettavasti edellä 5 kuvatuista rakenneosista A ja B ja että yhdistettynä vereen, veriosiin tai muihin näytenesteisiin terveiltä henkilöiltä luonnolliseen immunoglobuliinipitoisuuteen voidaan saada erityisen sopiva reagenssi toimintakontrolliin tai standardointiin.
Keksintö koskee siten standardi- ja kontrolliseerumeja käytettäviksi immuunikemiallisissa menetelmissä spesifisesti tiettyjä sairaudenaiheuttajia 10 vastaan kohdistuvien vasta-aineiden tietyistä vasta-aineluokista määrittämiseksi nisäkkäiden ruumiinnesteistä, jotka mainitut seerumit sisältävät konjugaatteja analyyttispesifisestä ja vasta-ainespesifisestä sitoutumisosasta nisäkkään spesifisen todettavan vasta-aineluokan läsnä ollessa, jolloin konjugaattia sellaisenaan ei tunnisteta todettavan vasta-aineen immuunikemialliseksi ekvivalentiksi.
15 Edullisia ovat tällöin sellaiset standardi- ja kontrolliseerumit, joissa to dettava vasta-aine on ihmisestä peräisin.
Edelleen edullisia ovat sellaiset standardi- tai kontrolliseerumit, joissa analyyttispesifinen ja vasta-aineluokkaspesifinen sitoutumisosa on monoklonaa-lisia vasta-aineita tai vasta-ainefragmentteja.
20 Sairaudenaiheuttajan rakennemerkeillä tarkoitetaan antigeenejä, esim. proteiineja, glykoproteiineja. Konjugaatin rakenneosan A voivat edullisesti muodostaa polyklonaaliset tai monoklonaaliset vasta-aineet tai niiden fragmentit, joita alan ammattilaiselle tutuilla menetelmillä voidaan valmistaa sairaudenaiheuttajan rakennemerkkejä, kuten lektiinejä tai muita reseptoreita vastaan. Edul-: 25 lisesti rakenneosa A ei ole ihmisestä peräisin.
"Ei ole ihmisestä peräisin" tarkoittaa tämän keksinnön merkityksessä, että näin kuvattua molekyyliä sellaisenaan eivät spesifiset sitoutumispartnerit, joita käytetään analyyttivasta-aineen toteamiseksi, tunnista.
Erityisen edullisia ovat monoklonaaliset vasta-aineet.
30 Rakenneosa B koostuu edullisesti samoin polyklonaalisista tai mo- noklonaalisistä vasta-aineista tai niiden fragmenteista, jotka kohdistuvat todettavaa vasta-ainetta vastaan, tai sitoutumistekijöistä, esim. lektiineistä tai proteiini-A:sta, jotka kykenevät reagoimaan spesifisesti todettavan vasta-aineen raken-nemerkkien kanssa.
35 Erityisen edullisia ovat vasta-aineet, aivan erityisen edullisia ovat mo noklonaaliset vasta-aineet. Edullisesti rakenneosa B:kään ei ole ihmisalkuperää.
. 106410 4
Konjugaatilla keksinnön merkityksessä tarkoitetaan mitä tahansa rakennetta, jossa rakenneosat A ja B on kytketty siten, että niiden immuunikemial-linen funktio säilytetään.
Alan ammattilaiselle tuttuja menetelmiä tällaisten konjugaattien val-5 mistamiseksi ovat esimerkiksi kytkeminen käyttäen kemiallisia reagensseja tai bioaffiniteetti-vaihtovaikutuksen välityksellä. Kuitenkin voidaan muodostaa myös hybridimolekyylejä kemiallisesti syntetisoimalla, hybridoomatekniikalla tai geeniteknisin menetelmin.
Vasta-aineisiin luetaan tämän keksinnön merkityksessä myös kulloin-10 kin oleelliset, alan ammattilaiselle sinänsä tutut vasta-ainefragmentit.
Tyypillinen menetelmä keksinnön mukaisten seerumien valmistamiseksi on seuraavanlainen:
Alan ammattilaiselle tutuilla menetelmillä valmistetaan monoklonaali-sia vasta-aineita analyyttiantigeeniä vastaan.
15 Esimerkissä 1 kuvatun menetelmän mukaan analyyttispesifiset vasta- aineet kytketään monoklonaalisiin vasta-aineisiin, jotka kohdistuvat spesifisesti vastaan todettavaa vasta-aineluokkaa.
Konjugaattia puhdistetaan esim. geelikromatografisesti. Edullisesti sen jälkeen konjugaattia konsentroidaan esim. dialysoimalla, edullisesti pitoi-20 suuteen 1 - 10mg/ml, minkä jälkeen se stabilisoidaan alan ammattilaiselle tutuilla menetelmillä. Tätä konjugaattia lisätään määrättyjä määriä tiettyyn tilavuuteen esim. normaalia ihmisseerumia, joka ei sisällä analyyttivasta-ainetta. Näin saatu standardi- tai kontrolliseerumi voidaan stabiloida ja tehdä varastointikel-poiseksi alan ammattilaiselle tutulla tavalla.
: 25 Seerumia käytetään alan ammattilaiselle tutulla tavalla.
Tunnusomaista keksinnön mukaiselle menetelmälle on sen yleinen käyttökelpoisuus. Ei tunneta rajoituksia, jotka haittaisivat esimerkeissä käytetyn menetelmän soveltamista muihin konjugaatteihin.
Keksinnön mukaista menetelmää voidaan käyttää myös ei-ihmiskont-30 rolliseerumeissa, oleellista on, että ettei vastaavassa testimenetelmässä merkki-*; reseptorina käytetty molekyyli tunnista käytettyä konjugaattia sellaisenaan, vaan vasta sitoutumisen kulloisellekin eläinlajille ja vasta-aineluokalle spesifiseen molekyyliin jälkeen.
Keksinnön mukaisille standardi-ja kontrolliseerumeille voi löytyä käyt-35 töä monissa ihmis- ja eläinlääketieteen diagnostisissa menetelmissä. Esimerkkeinä voidaan mainita määritys eri immunoglobuliiniluokkien vasta-aineiden vi- « 106410 5 rusten rakennemerkkejä vastaan, esim. hepatiitti-A, B, C-virukset, erilaiset HIV-tyypit, vihurirokkovirus, sytomegalovirus, tuhkarokkovirus, sikotautivirus, vesirokkovirus, herpes simplex ja Epstein-Barr-virus, ja vastaavasti bakteeri- ja parasiit-tisairaudenaiheuttajat, kuten syfilis, borreliosis, toksoplasmosis, allergiset sai-5 raudet, esim. allergiaspesifisten IgE-vasta-aineiden määritys, autoimmuunisairaudet, sekä nestepuolustusreaktioiden osoittaminen potilaissa, joille mahdollisesti on annettu immunogeenisiä vaikutusaineita diagnostisissa tai terapeuttisissa tarkoituksissa. Esimerkkejä tästä ovat monoklonaaliset vasta-aineet kasvain-liitteisiä rakenteita vastaan sekä yhdistelmä-DNA-proteiinit, joilla on sytokineetti-10 siä tai hyydyttäviä ominaisuuksia.
Keksintöä havainnollistetaan seuraavilla esimerkeillä:
Esimerkki 1
Positiivisen kontrolliseerumin valmistus anti-HBcAg-lgM:lle 4 mg:aan monoklonaalista anti-HBcAg-vasta-ainetta (1 ml:ssa 15 PBS:ää, pH 7,2) lisätään 1 ml 0,2 M Li-BO3/20 % dioksaani -liuosta, minkä jälkeen lisätään 15-kertainen mooliylimäärä N-maleimidobutyryylioksisukkinimidiä (GMBS) ja inkuboidaan 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Ei-reagoinut hete-robifunktionaalinen reagenssi erotetaan geelikromatografisesti (Sephadex G-25) käyttäen 0,1 M natriumfosfaattipuskuria + 5 mM nitrilotrietikkahappoa (NTA), pH 20 6,0.
2 mg monoklonaalista anti-ihmis-IgM-vasta-ainetta (2 ml:ssa 10 mM natriumfosfaattiliuosta, 100 mM NaCI, pH 7,4) inkuboidaan 24-kertaisella mooli-ylimäärällä N-sukkinimidyyli-3-(2-pyridyyliditio)propionaattia (SPDP) 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa, minkä jälkeen pelkistetään käyttäen ditiotreitolilla • 25 (DTT) 100-kertaista mooliylimäärää SPDP.n nähden 15 minuutin ajan huo neenlämpötilassa. Pelkistyksen jälkeen DTT- ja SPDP-ylimäärät poistetaan gee-likromatografisesti (Sephadex G-25) käyttäen 0,1 M natriumfosfaatti/5 mM NTA -liuosta, pH 6,0.
SH-aktivoitua anti-ihmis-lgM:ää inkuboidaan aktivoidulla anti-30 HBcAg.llä 2 tunnin ajan huoneenlämpötilassa, minkä jälkeen reaktio keskeyte-*; tään lisäämällä 1/10 tilavuus 0,1 M N-etyylimaleimidiä.
Konjugaattia puhdistettiin geelikromatografisesti (ACA 34, LKB) käyttäen 50 mM Tris/HCI-liuosta, pH 7,4, minkä jälkeen se konsentroitiin 3 ml:ksi ja stabiloitiin HSA:lla. Tätä konjugaattia (pitoisuus 2 mg/ml) pipetoitiin 50, 25, 35 12,5 ja 6,25 ml 1 mkaan normaalia ihmisseerumia (anti-HBc-IgM-negatiivinen), « 106410 6 suodatettiin 0,2 mm:n Sartorius-membraanisuodattimella ja varastoitiin +2 -+8 °C:seen.
Esimerkki 2
Konjugaatin käyttö entsyymi-immuunimäärityksessä 5 Entsyymi-immuunimäärityksessä HBcAg-vastaisten IgM-vasta-ainei- den toteamiseksi (EnzygnostR Anti-HBcAg/IgM-testipakkaus, Behringwerke AG, Marburg, Saksa) 10 ml 1:100 laimennosta seerumista tai esimerkin 1 mukaan valmistetusta keinotekoisesta positiivisesta kontrollista ja 90 ml näytepuskuria inkuboidaan mikrotiitterilevyillä, jotka on päällystetty anti-ihmis-lgM:llä, 1 tunnin 10 ajan 37 °C:ssa, pestään pakkauksessa toimitettujen ohjeiden mukaan, inkuboidaan 1 tunnin ajan 37 °C:ssa 100 mlrlla HBcAg-POD-konjugaattia, pestään taas, inkuboidaan 100 mhlla tetrametyylibentsidiini (TMB) -substraattiliuosta pakkaus-ohjeiden mukaisesti 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa, keskeytetään reaktio lisäämällä 100 ml 0,5 M H2S04-liuosta ja suoritetaan fotometrinen mittaus 15 450 nm.ssä.
Merkkientsyymi peroksidaasi katalysoi kromogeenin TMB muuttumista väriaineeksi; 30 minuutissa saatu väri on verrannollinen näytteen sisältämään määrään HBcAg-vastaisia vasta-aineita. Keinotekoisen positiivisen kontrollin esimerkissä 1 kuvatulle laimennosalueelle saadut ekstinktioarvot esitetään 20 suhteessa negatiivisen kontrollin ekstinktioon taulukossa 1:
Taulukko 1
Keinotekoisen Ekstinktioarvo Negatiivisen positiivisen 450 nm:ssä kontrollin : 25 kontrollin ekstinktioarvo laimennos 450 nm:ssä 1:20 >3,000 1:40 2,583 0,056 1:80 1,385 30 1:160 0,638
Esimerkki 3
Konjugaatin valmistus anti-ihmis-lgM:stä ja anti-herpes simplex- virus (HSV) F(ab') -fragmentista
10 mg HSV-vastaista monoklonaalista vasta-ainetta (2 ml:ssa 50 mM 35 natriumasetaattipuskuria, pH 4,3) inkuboidaan 1 mg:lla pepsiiniä 24 tunnin ajan 37 °C:ssa, ja reaktioseoksen pH säädetään 7,2:ksi lisäämällä noin 0,2 ml 2 N
106410 7
NaOH-liuosta. F(ab')2-fragmenttia puhdistetaan geelikromatografisesti (ACA-44 Fa. LKB) käyttäen 50 mM Tris/ HCI.ää, pH 7,4, minkä jälkeen se konsentroidaan 1 ml:ksi (noin 5 mg F(ab')2-fragmenttia) ja pelkistetään 0,1 ml:lla 0,1 M kyste-amiini-HCI-liuosta 60 minuutin ajan huoneenlämpötilassa F(ab'):ksi ja suorite-5 taan kromatografia-ajo Sephadex G-25 -kolonnissa (1 cm, til. 10 ml). Pelkistetyn anti-HSV-F(ab')-fragmentin annetaan reagoida 5 mg:n aktivoitua anti-ihmis-lgM-maleimidiä (katso edellä) kanssa 1 tunnin ajan 37 °C:ssa. Ei-reagoinut vasta-aine/F(ab')-fragmentti erotetaan geelikromatografisesti (ACA-34 LKB) varsinaisesta konjugaatista käyttäen 50 mM Tris/HCI.ää, pH 7,4, ja konsentroidaan sit-10 ten 5 ml:ksi ja stabiloidaan HSA:lla.
Esimerkki 4
Positiiviset anti-GM-CSF-IgM-kontrolliseerumit
Samoin kuin esimerkissä 3 F(ab')-fragmentti kaniinin anti-GM-CSF-vasta-aineesta konjugoitiin hiiren anti-ihmis-IgM-vasta-aineeseen.
Claims (3)
1. Standardi- ja kontrolliseerumeja käytettäviksi immunokemiallisissa määritysmenetelmissä tiettyjen vasta-aineluokkien spesifisesti tiettyjä sairau-5 denaiheuttajia vastaan kohdistuvien vasta-aineiden määrittämiseksi nisäkkäiden ruumiinnesteistä, tunnetut siitä, että ne sisältävät konjugaatteja analyyttis-pesifisestä ja vasta-ainespesifisestä sitoutumisosasta nisäkkään osoitettavan spesifisen vasta-aineluokan läsnäollessa, jolloin konjugaattia ei sellaisenaan tunnisteta osoitettavan vasta-aineen immuunikemialliseksi ekvivalentiksi.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukaiset standardi- tai kontroliiseerumit, tunnetut siitä, että todettava vasta-aine on ihmisestä peräisin.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukaiset standardi- tai kontroliiseerumit, tunnetut siitä, että analyyttispesifinen ja vasta-aineluokkaspesifinen sitou-tumisosa ovat monoklonaalisia vasta-aineita tai vasta-ainefragmentteja. « 106410
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4133945 | 1991-10-14 | ||
| DE4133945A DE4133945A1 (de) | 1991-10-14 | 1991-10-14 | Kuenstliche standard- und kontrollseren, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI924607A0 FI924607A0 (fi) | 1992-10-12 |
| FI924607A FI924607A (fi) | 1993-04-15 |
| FI106410B true FI106410B (fi) | 2001-01-31 |
Family
ID=6442632
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI924607A FI106410B (fi) | 1991-10-14 | 1992-10-12 | Keinotekoisia standardi- ja kontrolliseerumeja |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5491218A (fi) |
| EP (1) | EP0537488B1 (fi) |
| JP (1) | JP3237923B2 (fi) |
| AT (1) | ATE153770T1 (fi) |
| AU (1) | AU670042B2 (fi) |
| CA (1) | CA2080408C (fi) |
| DE (2) | DE4133945A1 (fi) |
| ES (1) | ES2103017T3 (fi) |
| FI (1) | FI106410B (fi) |
| NZ (1) | NZ244681A (fi) |
| ZA (1) | ZA927861B (fi) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5319547A (en) * | 1990-08-10 | 1994-06-07 | Vivid Technologies, Inc. | Device and method for inspection of baggage and other objects |
| US6015662A (en) * | 1996-01-23 | 2000-01-18 | Abbott Laboratories | Reagents for use as calibrators and controls |
| DK2124064T3 (da) * | 2006-12-14 | 2012-07-09 | Zhejiang Wolwo Bio Pharmaceutical Co Ltd | Fremgangsmåde til fremstilling af en standardserumblanding til bestemmelse af et allergens styrke og anvendelse af serumblandingen |
| US20100009389A1 (en) * | 2008-07-14 | 2010-01-14 | Masood Unnabi Khan | Method of Making and Using Versatile Positive Controls and Antibody Detection Assays |
| CN104650236B (zh) * | 2013-06-28 | 2018-02-23 | 英科隆生物技术（杭州）有限公司 | 一种异源交联物及其在风疹病毒检测中的应用 |
| WO2016061861A1 (zh) * | 2014-10-20 | 2016-04-28 | 苏州浩欧博生物医药有限公司 | 一种自身免疫性抗原阳性血清的纯化制备方法 |
| WO2016058237A1 (zh) * | 2014-10-17 | 2016-04-21 | 苏州浩欧博生物医药有限公司 | 一种过敏原阳性血清的纯化制备方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3112334A1 (de) * | 1981-03-28 | 1982-10-07 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | "kuenstliche kontroll- und standardseren, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung" |
| US5635600A (en) * | 1986-07-07 | 1997-06-03 | Trustees Of Dartmouth College | Bifunctional and heteroantibodies specific for the high affinity Fc receptor for immunoglobulin G on human mononuclear phagocytes |
| DE3800048A1 (de) * | 1987-05-14 | 1988-11-24 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung eines antikoerpers in menschlichen koerperfluessigkeiten |
-
1991
- 1991-10-14 DE DE4133945A patent/DE4133945A1/de not_active Withdrawn
-
1992
- 1992-09-17 ES ES92115874T patent/ES2103017T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-09-17 DE DE59208543T patent/DE59208543D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-09-17 AT AT92115874T patent/ATE153770T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-09-17 EP EP92115874A patent/EP0537488B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-09 NZ NZ244681A patent/NZ244681A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-10-12 FI FI924607A patent/FI106410B/fi not_active IP Right Cessation
- 1992-10-13 ZA ZA927861A patent/ZA927861B/xx unknown
- 1992-10-13 AU AU26374/92A patent/AU670042B2/en not_active Ceased
- 1992-10-13 CA CA002080408A patent/CA2080408C/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-10-13 JP JP27389392A patent/JP3237923B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1994
- 1994-04-01 US US08/221,447 patent/US5491218A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-06-05 US US08/469,003 patent/US5895811A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NZ244681A (en) | 1994-12-22 |
| CA2080408A1 (en) | 1993-04-15 |
| EP0537488B1 (de) | 1997-05-28 |
| AU670042B2 (en) | 1996-07-04 |
| FI924607A0 (fi) | 1992-10-12 |
| DE59208543D1 (de) | 1997-07-03 |
| CA2080408C (en) | 2003-05-06 |
| FI924607A (fi) | 1993-04-15 |
| EP0537488A2 (de) | 1993-04-21 |
| ZA927861B (en) | 1993-04-27 |
| ES2103017T3 (es) | 1997-08-16 |
| DE4133945A1 (de) | 1993-04-15 |
| JP3237923B2 (ja) | 2001-12-10 |
| ATE153770T1 (de) | 1997-06-15 |
| US5491218A (en) | 1996-02-13 |
| AU2637492A (en) | 1993-04-22 |
| JPH05232111A (ja) | 1993-09-07 |
| EP0537488A3 (en) | 1993-05-26 |
| US5895811A (en) | 1999-04-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1149277A (en) | Process for determining immuno-complexes | |
| EP0005271A2 (en) | Method and kit for enzyme immunoassay of biological substances | |
| JP3363166B2 (ja) | 相互に対する極めて高い特異的親和性を有するペプチド対をイン・ビトロ診断分野に使用する方法 | |
| GB1571992A (en) | Process for binding organic compounds containing carbohydrate moieties to solid supports | |
| JP2636331B2 (ja) | 抗原特異的な抗体の一段階測定法およびそれに適する試薬 | |
| US4929543A (en) | Process for the determination of an antibody in human body fluids | |
| EP0310132A2 (en) | Immunoassay utilizing IgG capture antibody and multiple monoclonal antibody detection system | |
| US20120329176A1 (en) | Indirectly labelled assay conjugates and methods of preparing and using same | |
| JP4130505B2 (ja) | Ｄ−アミノ酸からなるペプチドによる診断方法の干渉の排除 | |
| FI106410B (fi) | Keinotekoisia standardi- ja kontrolliseerumeja | |
| US6251618B1 (en) | Color developing method, enzyme immunoassay using the color developing method, and immunochromatography incorporating the enzyme immunoassay | |
| JP3327488B2 (ja) | 被検体の免疫化学的測定方法 | |
| CN109870581A (zh) | 一种定量检测HBsAg的试剂盒及方法 | |
| Njayou et al. | Purification of measles virus by affinity chromatography and by ultracentrifugation: a comparative study | |
| JP4065600B2 (ja) | 免疫学的測定法および免疫学的測定用キット | |
| JP4292670B2 (ja) | 抗ＨＢｃ抗体の免疫測定法 | |
| EP0366673B1 (en) | Immunoassay method | |
| EP0106615B1 (en) | Assay for the free portion of substances in biological fluids | |
| US5639627A (en) | Method for assaying specific antibody | |
| JPS6113156A (ja) | ヒトインタ−フエロン−αの定量用試薬及び定量法 | |
| JPH09127114A (ja) | 免疫学的測定用安定化ＩｇＭ試薬 | |
| JPH11507635A (ja) | Ｈｉｖを検出するためのペプチド | |
| JPH0611507A (ja) | ヒトポドカリキシンの測定方法 | |
| JP3307637B2 (ja) | 酵素結合抗体免疫吸着アッセイを改善するために変性した伝播体タンパク質 | |
| KR890001538B1 (ko) | 세포기능 조절물질 등을 결합시킨 보체성분 Clq의 제조법 및 이 보체성분 Clq을 사용하는 측정법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| GB | Transfer or assigment of application |
Owner name: DADE BEHRING MARBURG GMBH |
|
| MA | Patent expired |