FI100402B - Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten makrolidiyhdisteiden valmis tamiseksi - Google Patents

Description

100402

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten makrolidiyhdis-teiden valmistamiseksi

Jakamalla erotettu patenttihakemuksesta 864150 5

Keksintö koskee uusien makrolidijohdannaisten valmistusta, joiden kaava on R2. Λ 10 CH3 ^ 3 c„rL ίΓ (i> 15 H 1 I H S* S V/°

\ QH H

20 0 ή r ch,

H * 4 J

OR

jossa R1 on metyyli, etyyli tai isopropyyli, R2 on vety tai ryhmä -OR5, ja R3 on vety, tai R2 ja R3 muodostavat yhdessä 25 hiiliatomin kanssa, johon ne ovat liittyneet C=0-ryhmän, .·.·. jolloin OR5 on -OH, -OCOR6, jossa R6 on C^-alkyyli, joka voi olla substituoitu halogeenilla, C^-alkoksilla tai fe-noksilla; -OCOOR6*, jossa R6a on C^-alkyyli; -OR7, jossa R7 on C1_4-alkyyli, joka voi olla substituoitu halogeenilla, 30 tai C3_5-alkenyyli; tai -0C0C02R9, jossa R9 on vety tai C^-• · *’ alkyyli; ja OR4 on -OH tai -OCOR4*, jossa R4* on C1.4-alkyyli, ·.· joka voi olla substituoitu halogeenilla tai fenoksilla; lukuunottamatta sellaisia kaavan 1 mukaisia yhdisteitä, joissa R2 on -OH ja OR4 on -OH.

• · 35 Näillä yhdisteillä on antibioottinen vaikutus.

100402 2

Fl-patenttijulkaisusta 90 663, joka vastaa FI-hake-musta 872517 (tullut julkiseksi 7.12.1987), tunnetaan kaavaa I vastaavia yhdisteitä, joissa R2 ja R3 yhdessä muodostavat oksoryhmän. Kyseiset yhdisteet on mainitussa julkai-5 sussa esitetty välituotteina.

GB-patenttijulkaisussa 2 166 436 (vast. FI 87 366) on kuvattu antibioottien Antibiotics S541 tuotantoa, jotka ovat eristettävissä Streptomyces-lajin käymistuotteista. Kyseiset luonnollisella fermentoinnilla saadut yhdisteet 10 vastaavat kaavan I mukaisia yhdisteitä, joissa R2 on OH, R3 on H ja R4 on H tai CH3. Nyt on havaittu, että uudet kaavan I mukaiset yhdisteet muodostavat antibioottista aktiivisuutta omaavien yhdisteiden lisäryhmän, jotka yleisesti ottaen ovat selvästi akttivisempia kuin mainitut tunnetut 15 yhdiseet ja joita voidaan valmistaa modifioimalla kemiallisesti Antibiotics S541-yhdisteitä.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet, joissa on hapan ryhmä, voivat muodostaa suoloja sopivien emästen kanssa. Esimerkkejä tällaisista suoloista ovat alkalimetallisuolat, 20 kuten natrium- ja kaliumsuolat.

' · Merkittäviä kaavan (I) mukaisia yhdisteitä ovat ne, joissa R1 merkitsee metyyli-, etyyli- tai isopropyyliryh-: : ; mää, R2 on etoksiryhmä, OR4 on hydroksiryhmä tai substi- : tuoitu hydroksiryhmä, ja R3 merkitsee vetyatomia, ja niiden ·· 25 suolat.

• · · ·

Merkittäviä kaavan (I) mukaisia yhdisteitä ovat myös ne, joissa R1 merkitsee metyyli-, etyyli- tai isopro-pyyliryhmää, R2 ja R3 yhdessä hiiliatomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, muodostavat ryhmän >C=0 ja OR4 on hydrok-30 siryhmä tai substituoitu hydroksiryhmä, ja niiden suolat.

• · • ** Edelleen merkittäviä kaavan (I) mukaisia yhdisteitä • · · *.* ovat ne, joissa R1 merkitsee metyyli-, etyyli- tai iso- • · propyyliryhmää, R2 ja R3 tarkoittavat kumpikin vetyä ja OR4 ,··. merkitsee hydroksyyli- tai substituoitua hydroksyyliryh- 35 mää, ja niiden suolat.

il 100402 3

Kaavan (I) mukaisissa yhdisteissä ryhmä R1 on ensisijaisesti isopropyyliryhmä.

Ryhmä R2 on ensisijaisesti vetyatomi tai hydroksi-ryhmä tai ryhmä -OR7, jossa R7 on C1_4-alkyyli tai allyyli, 5 tai R2 ja R3 yhdessä hiiliatomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, muodostavat >C=0-ryhmän. Erityisesti, R2 on ensisijaisesti vetyatomi tai etoksiryhmä tai R2 ja R3 yhdessä hiiliatomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, muodostavat >C=0-ryhmän.

10 Ryhmä -OR4 kaavan (I) mukaisissa yhdisteissä on en sisijaisesti hydroksi-, metoksi-, asetoksi- tai metyyliok-sikarbonyylioksiryhmä.

Merkittäviä aktiivisia kaavan I mukaisia yhdisteitä ovat kaavan (I) mukaiset yhdisteet, joissa R1 on metyyli-, 15 etyyli- tai erityisesti isopropyyliryhmä, R2 on vetyatomi, tai etoksiryhmä ja R3 on vetyatomi tai R2 ja R3 yhdessä hiiliatomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, muodostavat >C=0-ryhmän, ja OR4 on hydroksi-, asetoksi- tai metoksikar-bonyylioksiryhmä.

20 Erityisen merkittäviä kaavan I mukaisia yhdisteitä ovat kaavan (I) mukaiset yhdisteet, joissa R1 on isopropyyliryhmä, R2 on vetyatomi, R3 on vetyatomi ja : I ' OR4 on hydroksyyliryhmä; : R1 on isopropyyliryhmä, R2 ja R3 yhdessä hiiliatomin kanssa, ·· 25 johon ne ovat sitoutuneet, ovat >C=0 ja -OR4 on hydroksyy- .*.* liryhmä; ja R1 on isopropyyliryhmä, R2 on etoksiryhmä, R3 on vetyatomi ja -OR4 on hydroksyyliryhmä.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä ja niiden suoloja voi- 30 daan valmistaa siten, että ·· * m · • * (ai) sellaisten kaavan (I) mukaisten yhdisteiden »·· *.· valmistamiseksi, joissa toinen tai kumpikin ryhmistä R2 ja • · • .*:* OR4 on asyloitu hydroksiryhmä, vastaava yhdiste, jossa toi- .··· nen tai kumpikin ryhmistä R2 ja OR4 on hydroksyyliryhmä, > · 35 saatetaan reagoimaan asylointireagenssin tai sen reaktii- 100402 4 visen johdannaisen kanssa, jolloin asylointiaineena käytetään kaavan R6COOH, R6aC020H, HOOCCOOR9 tai R4aCOOH mukaista happoa tai sen reaktiivista johdannaista, tai a2) sellaisten kaavan (I) mukaisten yhdisteiden 5 valmistamiseksi, joissa R2 on eetteröity hydroksiryhmä, vastaava yhdiste, jossa R2 on hydroksyyliryhmä, eette-röidään yhdisteellä, jonka kaava on R7-Y, jossa R7 tarkoittaa samaa kuin edellä ja Y on poistuva ryhmä, tai (b) sellaisten kaavan (I) mukaisten yhdisteiden 10 valmistamiseksi, jossa R2 ja R3 merkitsevät vetyä, vastaava yhdiste, jonka kaava on

L

CH-.

CH, X J

15 ^y CH3 N». 4H \ H | R1 (III> 20 \ O /0 :1 \x

• ; oiS H

: 25 0 Pf' CH

.*.* OR

• « * jossa R1 tarkoittaa samaa kuin edellä, -OR4 on edellä määritelty substituoitu hydroksyyliryhmä, ja L on ryhmä 30 R^OCSO, jossa R11 on C^-alkyyli (aryyli) , kuten p-tolyyli- • · • * klooritionoformiaatti, pelkistetään homolyyttisesti sopi- • · · ·.· valla pelkistysreagenssilla, tai • i tl 100402 5 (c) sellaisten kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa R2 ja R3 muodostavat yhdessä okso-ryhmän, vastaava yhdiste, jossa R2 -OH, hapetetaan, jolloin OR4 on suojattu ryhmä, valmistettaessa yhdisteitä, joissa 5 OR4 on hydroksyyliryhmä, tai (d) sellaisten kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa R2 tai OR4 on hydroksyyliryhmä, vastaavasta yhdisteestä, jossa R2 tai OR4 on suojattu hydroksyyliryhmä, poistetaan suojaryhmä.

10 Eräissä edellä kuvatuista menetelmistä voi olla välttämätöntä suojata lähtöaineen 5- tai 23-asemassa oleva hydroksyyliryhmä ennen selostetun reaktion toteuttamista. Sellaisissa tapauksissa voi sitten olla välttämätöntä poistaa saman hydroksyyliryhmän suojaus reaktion tapahduttua 15 halutun yhdisteen saamiseksi. Tällöin voidaan käyttää tavallisia suojaus- ja suojauksenpoistomenetelmiä. Suojatut hydroksyyliryhmäesimerkit ovat hyvin tunnettuja ja niitä on selostettu esimerkiksi julkaisussa "Protective Gropus in Organic Synthesis", Theodora W. Greene. (Wiley-Inter-20 science New York 1981) ja julkaisussa "Protective Groups in Organic Chemistry", J.F.W. McOmie (Plenum Press, Lontoo, 1973) . Esimerkkejä R2- ja OR4-suojatuista hydroksiryh-mistä ovat fenoksiasetoksi, silyylioksiasetoksi, (esim. trimetyylisilyylioksiasetoksi ja t-butyylidimetyylisilyy-: 25 lioksiasetoksi), ja silyylioksi, kuten trimetyylisilyyli- .·.· oksi ja t-butyylidimetyylisilyylioksi. Täten esim. asyyli- • » ryhmä, kuten asetyyliryhmä, voidaan poistaa hydrolysoimalla emäksellä, esim. käyttämällä natrium- tai kaliumhydrok-sidia vesipitoisessa alkoholissa tai hydrolysoimalla ha-30 polla, esim. käyttämällä väkevää rikkihappoa metanolissa.

• · i * Asetaaliryhmät kuten tetrahydropyranyyli voidaan poistaa, V esim. käyttämällä hapolla hydrolysointia (käyttämällä hap- • « .';· poa kuten etikka- tai trifluorietikkahappoa tai laimeaa .· · epäorgaanista happoa). Silyyliryhmät voidaan poistaa käyt- ·’. 35 tämällä fluoridi-ioneja (esim. tetra-alkyyliammoniumfluo- 100402 6 ridista, kuten tetra-n-butyyliammoniumfluoridista, saatuja) , fluorivetyä vesipitoisessa asetonitriilissä tai happoa, kuten p-tolueenisulfonihappoa (esim. metanolissa).

Aryylimetyyliryhmät voidaan poistaa käsittelemällä Lewis-5 hapon (esim. booritrifluoridi-eteraatin) kanssa tiolin (esim. etaanitiolin) läsnä ollessa sopivassa liuottimessa, kuten dikloorimetaanissa, esim. huoneenlämpötilassa. Selektiivinen 5-suojauksen poisto keksinnön mukaisesta 5,23-disilyyli-yhdisteestä voidaan suorittaa käyttämällä tetra-10 n-butyyliammoniumfluoridia, kun taas selektiivinen 5-suo- jauksen poisto 5,23-diasetoksiyhdisteestä voidaan suorittaa käyttämällä natriumhydroksidia vesipitoisessa metanolissa .

Kaavan I mukaisia yhdisteitä, joissa R2 ja/tai -OR4 15 on substituoitu hydroksyyliryhmä, voidaan tavallisesti valmistaa antamalla Antibiotics S541-yhdisteiden tai niiden 5- tai 23-O-monosubstituoitujen johdannaisten reagoida reagenssien kanssa, joiden avulla saadaan muodostetuksi substituoitu hydroksyyliryhmä. Yleensä 5-hydroksyyliryhmä 20 on reaktiokykyisempi kuin 23-hydroksyyliryhmä. 5-aseman hydroksyyliryhmistä suojauksen poisto tapahtuu helpommin kuin 23-aseman hydroksyyliryhmistä. Yleensä 5-monosubsti-: tuoituja yhdisteitä voidaan valmistaa antamalla 5,23-sub- .·.·. stituoimattoman hydroksi-Antibiotics S541 -yhdisteen rea- 25 goida rajoitetun reagenssimäärän kanssa, miedommissa olo- » suhteissa, kun taas 5,23-disubstituoituja yhdisteitä muodostetaan käyttämällä suuremmin määrin reagenssia ja vähemmän miedoissa olosuhteissa ja/tai käyttämällä katalyyttiä. 23-mono-substituoituja yhdisteitä voidaan valmistaa 30 muodostamalla ensin 5,23-substituoitua yhdistettä ja pois- • · • *·· tamalla selektiivisesti suojaus 5-asemasta. 5,23-disubsti- :*:* tuoituja yhdisteitä, joissa on erilaiset substituentit 5- • ja 23-asemissa, voidaan saada antamalla yhdisteen, jossa on mono-substituentti joko 5- tai 23-asemassa, reagoida 100402 7 reagenssin kanssa, jonka avulla saadaan muodostetuksi erilailla substituoitu hydroksyyliryhmä toiseen asemaan.

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa toinen R2:sta ja OR4:stä on substituoitu hydroksyy-5 liryhmä ja toinen on edellä määritelty hydroksyyli- tai substituoitu hydroksyyliryhmä, yhdiste, jonka kaava on OR5 3 10 ch3 CH;3

\ J^CH

cHrK, t^h v <“) 15 H | S v rtii" 20 0- : H CH3 .:.: or4 (jossa R1 on aikaisemmin määritelty ja toinen ryhmistä -OR4 ja -OR5 on hydroksyyliryhmä toisen ollessa hydroksyyliryhmä 25 tai substituoitu hydroksyyliryhmä) saatetaan reagoimaan ]·*· reagenssin kanssa, jonka avulla hydroksyyliryhmä saadaan • · « muutetuksi substituoiduksi hydroksyyliryhmäksi, ja sen jälkeen, haluttaessa, seuraa selektiivinen suojauksen poisto kaavan (I) mukaisesta yhdisteestä, jossa R2 ja -OR4 30 ovat molemmat substituoituja hydroksyyliryhmiä, jolloin • · i *·· saadaan kaavan (I) mukaista yhdistettä, jossa OR4 on hyd- ··· - roksyyliryhmä ja R on substituoitu hydroksyyliryhmä.

,·; Reaktiona on tavallisesti asylointi, formylointi, ··. sulfonylointi, eetteröinti, silylointi tai asetaalin muo- ‘ 1 ‘. 35 dostaminen.

100402 8 Täten esim. asylointi voidaan suorittaa käyttämällä asylointiainetta, kuten kaavan R6COOH mukaista happoa, tai sen reaktiokykyistä johdannaista, kuten happohalogenidia (esim. happokloridia), anhydridiä tai aktivoitua esteriä, 5 tai karboksyylihapon R6aOCOOH reaktiokykyistä johdannaista.

Asyloinnit happohalogenideja ja -anhydridejä käyttäen voidaan haluttaessa suorittaa happoa sitovan aineen, kuten tertiäärisen amiinin (esim. trietyyliamiinin, dime-tyylianiliinin tai pyridiinin), epäorgaanisten emästen 10 (esim. kalsiumkarbonaatin tai natriumvetykarbonaatin), ja oksiraanien, kuten alempien 1,2-alkyleenioksidien (esim. etyleenioksidin tai propyleenioksidin), läsnä ollessa, joka sitoo asylointireaktiossa vapautuneen halogeeni vedyn.

Asylointeja, käyttämällä hyvin elektrofiilisiä hap-15 poklorideja (esim. oksalyylikloridia, metoksiasetyyliklo- ridia, klooriasetyylikloridia tai bromiasetyylikloridia) ensisijaisesti hapon neutraloivan aineen, kuten kalsium-karbonaatin, läsnä ollessa, voidaan käyttää 23-aseman selektiiviseen substituointiin, jolloin saadaan kaavan (I) 20 mukaista yhdistettä, jossa R2 on ryhmä OR5, jossa R5 on sub-stituoitu hydroksyyliryhmä ja OR4 on hydroksyyliryhmä.

Asyloinnit happoja käytettäessä suoritetaan mieluummin kondensointiaineen, esim. karbodi-imidin, kuten N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidin tai N-etyyli-N* -dime-25 tyyliaminopropyylikarbodi-imidin; karbonyyliyhdisteen, ku- [Π ten karbonyylidi-imidatsolin; tai isoksatsolium-suolan, • · kuten N-etyyli-5-fenyyli-isoksatsolium-perkloraatin, läsnä ollessa.

Aktivoitua esteriä voidaan muodostaa mukavasti in 30 situ käyttämällä, esimerkiksi, 1-hydroksibentsotriatsolia • » i *·· edellä esitetyn kondensointiaineen läsnä ollessa. Vaih- « « · :: toehtoisesti aktivoitu esteri voidaan muodostaa etukäteen.

Asylointireaktio voidaan suorittaa vesipitoisessa tai vedettömässä reaktioväliaineessa, tarkoituksenmukaisesti 35 lämpötilan ollessa rajoissa -20° - +100 °C, esim. -10° - 0! +50 °C.

100402 9

Formylointi voidaan suorittaa käyttämällä muurahaishapon aktivoitua johdannaista, esim. N-formyyli-imi-datsolia tai muurahaisetikkahappoanhydridiä standardin mukaisissa reaktio-olosuhteissa.

5 Eetteröinti voidaan suorittaa käyttämällä kaavan R7Y

mukaista reagenssia, jossa R7 on aikaisemmin määritelty, ja Y merkitsee poistuvaa ryhmää, kuten kloori-, bromi- tai jodiatomia tai hydrokarbyylisulfonyylioksiryhmää, kuten mesyylioksi- tai tosyylioksiryhmää, tai halogeenialkanoyy-10 lioksiryhmää kuten diklooriasetoksia. Reaktio voidaan suorittaa muodostamalla magnesiumalkoholaattia käyttämällä Grignard-reagenssia, kuten metyylimagnesiumhaloidia, esim. metyylimagnesiumjodidia tai käyttämällä trialkyylisilyyli-metyylimagnesiumhaloidia, esim. trimetyyli-silyylimetyyli-15 magnesiumkloridia, minkä jälkeen seuraa käsittely reagens-sin R7Y kanssa.

Vaihtoehtoisesti reaktio voidaan suorittaa hopea-suolan, kuten hopeaoksidin, hopeaperkloraatin, hopeakarbo-naatin tai hopeasalisylaatin tai niiden seosten, läsnä ol-20 lessa, ja tämä systeemi voi olla erityisen sopiva suori- tettaessa eetteröinti käyttämällä alkyylihalogenidia (esim. metyylijodidia).

Eetteröinti voidaan suorittaa tarkoituksenmukaisesti liuottimessa, kuten eetterissä, esim. dietyylieet-, 25 terissä.

[·[· Asetaalin muodostaminen voidaan suorittaa syklisen • « tai asyklisen vinyylieetterin kanssa tapahtuvana reaktiona. Tämä menetelmä on erityisen käyttökelpoinen tetrahyd-ropyranyylieettereitä valmistettaessa, käyttämällä rea-30 genssina dihydropyraania, tai valmistettaessa 1-alkoksi- • * 1 ’· alkyylieettereitä, kuten 1-etoksialkyylieetteriä, käyttä- «t» !,·' mällä reagenssina alkyylivinyylieetteriä. Reaktio suori tetaan mieluummin vahvan happokatalyytin, esimerkiksi epäorgaanisen hapon, kuten rikkihapon, tai orgaanisen sulfo-35 nihapon, kuten p-tolueenisulfonihapon, läsnäollessa, hyd- 100402 10 roksyylittömässä, pääasiallisesti vedettömässä liuotti-messa.

Vedettömiä liuottimia, joita voidaan käyttää edellä mainituissa reaktioissa, ovat ketonit (esim. asetoni), 5 amidit (esim. N,N-dimetyyliformamidi, N,N-dimetyyliaset-amidi tai heksametyylifosforiamidi), eetterit (esim. sykliset eetterit, kuten tetrahydrofuraani tai dioksaani, ja asykliset eetterit, kuten dimetoksietaani tai dietyylieet-teri), nitriilit (esim. asetonitriili), hiilivedyt, kuten 10 halogenoidut hiilivedyt (esim. metyleenikloridi), ja esterit, kuten etyyliasetaatti, samoin kuin kahden tai useamman sellaisen liuottimen seokset.

Silylointi voidaan suorittaa antamalla reaktion tapahtua silyylihalogenidin (esim. kloridin) kanssa, edul-15 lisesti emäksen, kuten imidatsoli-trietyyliamiinin tai pyridiinin läsnä ollessa, käyttämällä liuotinta, kuten dimetyyliformamidia.

Monissa tapauksissa, esimerkiksi käytettäessä lähtöaineena kaavan (II) mukaista 5,23-dihydroksi-yhdistettä, 20 muodostuu lopputuotteiden seosta, esim. 5-monosubstituoi-tujen ja 5,23-disubstituoitujen johdannaisten seosta. Nämä voidaan kuitenkin erottaa tavanomaisin menetelmin, esim.

• : . kromatografoimalla, esimerkiksi kromatografoimalla piidi- • oksidilla tai hplcm avulla.

·.' 2 5 Kaavan (I) mukaista yhdistettä, jossa R2 ja R3 mer- :V: kitsevät kumpikin vetyatomia, voidaan valmistaa antamalla kaavan (III) mukaisen yhdisteen reagoida, jossa R1 on aikaisemmin määritelty ja OR4 on substituoitu hydroksyyliryhmä ja OR5 on hydroksyyliryhmä, korvaamalla 23-hydroksiryhmä .. 30 vetyatomilla, minkä jälkeen seuraa ryhmän OR4 suojauksen poisto haluttaessa yhdistettä, jossa OR4 on hydroksyyliryh-‘•j > mä, ja haluttaessa, sen jälkeen uudelleensubstituointi, jolloin saadaan kaavan (I) mukaista yhdistettä, jossa OR4 on substituoitu hydroksyyliryhmä.

Il 100402 11 Täten kaavan (II) mukaisten lähtöaineiden, joissa OR4 on substituoitu hydroksyyliryhmä ja OR5 on hydroksyy-liryhmä, voidaan antaa reagoida reagenssin kanssa, joka korvaa hydroksyyliryhmän poistuvalla ryhmällä, jolloin 5 saadaan kaavan (III) mukaisia yhdisteitä:

L

CH, CH3 Γ ]'*N" 3 i° Xo4n/chi

J « I

3h\ 1'\R1 S, v/° 15 il nvc"3

OR

20 jossa R1 tarkoittaa samaa kuin edellä ja -OR4 on edellä määritelty substituoitu hydroksyyliryhmä ja L on homolyyt-tisen pelkistyksen avulla poistettavissa oleva ryhmä R11OCSO- jossa R11 on (C^-alkyyH)aryyli, kuten p-tolyyli-4i<: 25 klooritionof ormiaatti.

Reaktio voidaan suorittaa emäksen, esimerkiksi amiinin, kuten pyridiinin, läsnä ollessa liuottimessa, kuten halogenoidussa hiilivedyssä, esim. dikloorimetaanissa.

Haluttaessa kaavan (III) mukaiset väliyhdisteet ·· 30 voidaan eristää.

• · • · ♦ *... Kaavan (III) mukaiset väliyhdisteet voidaan sitten * · \ . pelkistää, halutun kaavan (I) mukaisen yhdisteen saamisek si käyttämällä pelkistävää ainetta, kuten alkyylitinahyd-ridiä (esim. tri-n-butyylitinahydridiä) radikaali-initi- 100402 12 aattorin, kuten peroksidin, atsobisisobutyronitriilin tai valon, läsnä ollessa.

Reaktio voidaan suorittaa tarkoituksenmukaisesti sopivassa liuottimessa, joka voidaan valita liuottimista 5 ketoni, esim. asetoni; eetteri, esim. dioksaani; hiilivety, esim. heksaani tai tolueeni; halogenoitu hiilivety, esim. triklooribentseeni; tai esteri, esim. etyyliasetaatti. Myöskin sellaisten liuottimien yhdistelmiä voidaan käyttää joko yksinään tai veden kanssa.

10 Reaktio voidaan suorittaa lämpötilan ollessa välil lä 0 - 200 eC, ensisijaisesti välillä 20 - 130 °C.

Kaavan (I) mukaista yhdistettä, jossa R2 ja R3 yhdessä hiiliatomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, merkitsevät ryhmää >C=0, voidaan valmistaa hapettamalla kaa-15 van (II) mukaista yhdistettä, jossa OR5 on hydroksyyliryh-mä ja OR4 on substituoitu hydroksyyliryhmä, minkä jälkeen seuraa ryhmän OR4 suojauksen poisto haluttaessa yhdistettä, jossa OR4 on hydroksiryhmä ja haluttaessa sen jälkeen seuraa uudelleensubstituointi, jolloin saadaan kaavan (I) 20 mukaista yhdistettä, jossa OR4 on substituoitu hydroksyyliryhmä. Reaktio voidaan suorittaa hapettavalla aineella, joka muuttaa sekundäärisen hydroksyyliryhmän oksoryhmäksi, jolloin saadaan valmistetuksi kaavan (I) mukaista yhdis- • , tettä.

25 Sopivia hapettavia aineita ovat kinonit veden läs- nä ollessa, esim. 2,3-dikloori-5,6-disyaani-l,4-bentsoki-noni tai 2,3,5,6-tetrakloori-l,4-bentsokinoni? kromi (VI)-hapetusaine, esim. pyridiniumdikromaatti tai kromitrioksi-di pyridiinissä; mangaani (IV-hapetusaine, esim. mangaani-30 dioksidi dikloorimetaanissa; N-halogeenisukkiini-imidi, *... esim. N-kloorisukkiini-imidi tai N-bromisukkiini-imidi; • « *\ . dialkyylisulfoksidi, esim. dimetyylisulfoksidi, aktivoivan : : aineen, kuten N,N' -disykloheksyylikarbodi-imidin tai asyy- lihaloidin, esim. oksalyylikloridin, läsnä ollessa; tai 35 pyridiini-rikkitrioksidikompleksi.

11 100402 13

Reaktio voidaan suorittaa tarkoituksenmukaisesti sopivassa liuottimessa, joka voi olla valittu ryhmästä ketoni, esim. asetoni; eetteri, esim. dietyylieetteri, dioksaani tai tetrahydrofuraani? hiilivety, esim. heksaa-5 ni; halogenoitu hiilivety, esim. kloroformi tai metyleeni-kloridi; tai esteri, esim. etyyliasetaatti tai substituoi-tu amidi, esim. dimetyyliformamidi. Voidaan käyttää myös sellaisten liuottimien yhdistelmiä yksinään tai veden kanssa. Liuottimen valinta riippuu konversion aiheuttami-10 seen käytettävästä hapettavasta aineesta.

Reaktio voidaan suorittaa -80 °C:n - +50 °C:n lämpötilassa.

Kaavan (II) mukaisia Antibiotics S541 -yhdisteiden väliyhdisteitä, jossa kaavassa OR5 on hydroksiryhmä ja OR4 15 on hydroksi- tai metoksiryhmä, voidaan saada myös käyttämällä edellä selostettuja käymis- ja eristysmenetelmiä, kuten on selostettu esimerkiksi GB-patenttijulkaisussa nro 2 166 436. Toisia kaavan (II) mukaisia väliyhdisteitä voidaan valmistaa näistä yhdisteistä käyttämällä menetelmiä, 20 joita on selostettu edellä kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistuksen osalta.

Kaavan I mukaisilla yhdisteillä on antibioottinen * t vaikutus, esim. matolääkevaikutus, esim. sukkulamatojen vastainen vaikutus, ja erityisesti sisäloisien ja ulko-25 loisien vastainen vaikutus.

Kaavan I mukaisilla yhdisteillä on sen vuoksi käyt- « töä hoidettaessa eläimiä ja ihmisiä, joissa on sisäloisien ja/tai ulkoloisien aiheuttamia infektioita. Ulkoloiset ja sisäloiset infektoivat ihmisiä ja erilaisia eläimiä ja .. 30 ovat erityisen yleisiä maatilojen eläimissä, kuten siois- • · « « sa, lampaassa, karjassa, vuohissa ja siipikarjassa (esim.

• · *·) , kananpojissa ja kalkkunoissa), hevosissa, kaneissa, riis- : : talinnuissa, häkkilinnuissa, ja kotieläimissä, kuten koi- rissa, kissoissa, marsuissa, hyppyrotissa ja hamstereissa.

35 Karjan loisinfektio, joka aiheuttaa anemiaa, vajaaravitse- 100402 14 musta ja painon hukkaa, on pääsyynä taloudellisiin menetyksiin kaikkialla maapallolla.

Esimerkkejä sisäloissuvuista, jotka infektoivat sellaisia eläimiä ja/tai ihmisiä, ovat Ancylostoma, Asca-5 ridia, Ascaris, Aspicularis, Brugia, Bunostomum, Capilla-ria, Chabertia, Cooperia, Dictyocaulus, Dirofilaria, Dra-cunculus, Enterobius, Haemonchus, Heterakis, Loa, Necator, Nematodirus, Nematospiroides (Heligomoroides), Nippostron-gylus, Desophagostomum, Onchocerca, Ostertagia, Oxyuris, 10 Parascaris, Strongylus, Syphacia, Toxascaris, Toxocara,

Trichonema, Trichostrongylus, Trichinella, Trichuris, Tri-odontophorus, Uncinaria ja Wuchareria.

Esimerkkejä ulkoloisista, jotka infektoivat eläimiä ja/tai ihmisiä, ovat niveljalkaiset ulkoloiset, kuten 15 pistävät hyönteiset, lihakärpäset, kirput, täit, punkit, imevät hyönteiset, punkit ja muut kaksisiipiset syöpäläiset.

Esimerkkejä sellaisista ulkoloissuvuista, jotka infektoivat eläimiä ja/tai ihmisiä, ovat Ambylomma, Boop-20 hilus, Chorioptes, Culliphore, Demodex, Damalinia, Derma- * ; tobia, Gastrophilus, Haematobia, Haematopinus, Haemophy- salis, Hyaloma, Hypoderma, Ixodes, Linognathus, Lucilia,

Melophagus, Oestrus, Otobius, Otodectes, Psorergates, Pso- roptes, Rhipicephalus, Sarcoptes, Stomoxys ja Tapanus.

: 25 Kaavan I mukaisten yhdisteiden on todettu tehoavan • * « « :Y sekä in vitro että in vivo lukuisien sisäloisien ja uiko- loisien vastaisesti. Kaavan I mukaisten yhdisteiden antibioottinen aktiivisuus voidaan osoittaa esim. niiden aktiivisuutena vapaana eläviä sukkulamatoja, esim. lajia .. 30 Caenorhabiditis elegans vastaan. Erityisesti on todettu, • $ että yhdisteet vaikuttavat tehokkaasti loissukkulamato- • * jen, kuten lajien Haemonchus contortus, Ostertagia circum-cincta, Trichostrongylus colubiformis, Dictyocaulus vivi-paris, Cooperia onchophera, Ostertagia ostertagi, Nematos-35 piroides dubius ja Nippostrongylus braziliensis, ja lois- 100402 15 punkkien, kuten lajien Sarcoptes ja Psoroptes, vastaisesti .

Loisiajit vaihtelevat riippuen isännästä ja pääasiallisesti infektion paikasta. Täten esim. Haemonchus 5 contortus, Ostertagia circumcincta ja Trichostrongylus colubiformis infektoivat tavallisesti lampaan ja sijoittuvat pääasiallisesti mahaan ja ohutsuoleen, kun taas Dic-tyocaulus viviparus, Cooperia oncophora ja Ostertagia os-tertagi yleensä infektoivat karjan ja sijoittuvat pää-10 asiallisesti keuhkoihin, suolaan tai vastaavasti mahaan.

Lisäksi kaavan I mukaisilla yhdisteillä on käyttöä sienien vastaisina aineina, esimerkiksi Candida-lajin kantoja, kuten lajeja Candida albicans ja Candida glabrata vastaan ja hiivoja, kuten lajia Saccharomyces carlsbergensis, vas-15 taan.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä on tutkittu Caenorhab-ditis elegans in vitro -kokeessa. Vapaasti elävän sukkulamadon C. elegans herkkyyttä S541-analogeille ja Ivermec-tiinille käytettiin yhtenä primaarisena seulontana lois-20 vastaisen aktiivisuuden määrittämiseksi. Sukkulamatoa C. elegans pidettiin huoneenlämpötilassa minimaalisella agar-väliaineella, johon oli lisätty lysiiniä sekä DAP:tä, jolla E. colia viljeltiin ravinnon lähteenä. Sukkulamadot korjattiin talteen ja suspendoitiin M9-puskuriin ja 200 25 μΐ, joka sisälsi 100 - 200 sukkulamatoa, jaettiin mikro- • · · · tiitteriputkiin. Yhdisteistä valmistettiin liuoksia tai suspensioita propyleeniglykolissa ja seriaalisia laimennuksia, 400 pg/ml >, jotka muodostettiin 20 %:isessa propyleeniglykolissa. 10 μΐ saatuja liuoksia sekoitettiin 200 30 μ1:η kanssa saatuja sukkulamatosuspensiota ja pidettiin 20 • · • 1' tuntia huoneenlämpötilassa. Tulokset ilmaistiin kuoletta- φ · · *.1 vana minimikonsentraationa mlc, joka aiheutti sukkulamato jen >98 %:isen kuoleman tai paralysoinnin. Ivermectiiniä käytettiin kontrolliyhdisteenä kussakin kokeessa. Tulokset 35 on esitetty taulukossa 1.

100402 16

Taulukko 1

Kaavan I mukaisten yhdisteiden C. elegans -koetulokset (R1 = isopropyyli) 5 4 r3 r2 R_ mlc(pg/ml) 20 h H, OH H 0,03 - 0,1 (Factor A, tunnettu) 10 H, 0CH3 H 0,005 H, OCH2CH3 H 0,005 h, och2ch2ch3 H 0,01 H, OCH2CH2CH2I H 0,002 H, 0CH2CH=CH2 H 0,007 15 H, 0CH2CH3 C(0)CH3 0,08 H, 0C(0)CH3 H <0,005 H, 0C(0)CH2C1 H 0,06 H, oc(o)ch2ch3 H 0,01 h, oc(o)ch2ch2ch3 H 0,01 20 H, 0C(0)CH(CH3)CH2CH3 H 0,01 :·; H, 0C(0)CH(CH2)2 H 0,06 H, 0C(0)CH20C6H5 H 0,03 H, 0C(0)CH20CH3 H 0,005 H, 0C(0)C(0)0CH3 H 0,005 25 H, 0C(0)0CH3 H 0,015 ·;·; H, 0C(0)CH3 C(0)CH3 0,03 *·: : H, 0C(0)CH2CH2CH3 C(0)CH3 0,06 =0 H 0,005 =0 C(0)CH3 0,03 30 =0 C(0)CH2C1 0,06 • · « · * · · * 1 · « • · • · 100402 17

Taulukko 1 (jatkoa) R3, R2 R1 R4 mlc(pg/ml) 20 h 5 H, 0C(0)CH3 CH3 H 0,002 =0 CH3 H 0,005 H, 0C(0)CH3 CH2CH3 H 0,001 H, 0C(0)CH3 CH2CH3 C(0)CH3 0,08 =0 CH2CH3 H 0,0005 10 =0 CH2CH3 C(0)CH3 0,005

Tulokset osoittavat, että uudet kaavan I mukaiset yhdisteet yleisesti ottaen ovat selvästi aktiivisempia kuin tunnettu yhdiste Factor A.

15 Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan formuloida annettaviksi millä tahansa sopivalla tavalla käyttöä varten eläinten tai ihmisten lääkkeenä. Sellaisia yhdistelmiä voidaan tarjota käytettäväksi tavanomaiseen tapaan käyttämällä apuna yhtä tai useampaa sopivaa kantajaa tai lisäai-20 netta. Yhdistelmät on erityisesti formuloitu parenteraa-lista (nisänsisäinen anto mukaan lukien), suun kautta, peräaukkoon, paikallisesti tai istutteena tapahtuvaa käyttöä varten. Sopivia menetelmiä ja aineita kaavan I mukaisten yhdisteiden formuloimiseksi eläinten ja ihmisten lääk-25 keenä käyttöä varten ovat menetelmät ja aineet, joita on ·*·· .·.·. selostettu GB-patenttijulkaisussa nro 2 166 436 Antibio- • · tics S541 -yhdisteiden osalta.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan antaa yhdistelmänä muiden farmaseuttisesti aktiivisten aineosien 30 kanssa.

• · ♦ * Sekä eläinten että ihmisten lääkkeeksi käytettävien · *♦ ·.· yhdisteiden sopivat kokopäiväännökset ovat rajoissa 1 - 200 pg kehon painon kiloa kohden, ensisijaisesti 10 -1 000 pg/kg, ensisijaisemmin 100 - 500 pg/kg ja nämä voi-• · 35 daan antaa jaettuina annoksina, esim. 1-4 kertaa päivän aikana.

100402 18

Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä. Esimerkeissä kaavan (II) mukaisesta yhdisteestä, jossa R1 on iso-propyyli, ja OR4 ja OR5 ovat hydroksyyliryhmiä, käytetään nimitystä "Factor A". Kaikki lämpötilat ovat celsiusastei-5 ta.

Esimerkki 1 5-fenoksiasetoksi ja 5,23-difenoksiasetoksi

Faktor A

Factor A:ta (2,0 g) dikloorimetaanissa (25 ml) ja 10 pyridiiniä (0,35 ml) käsiteltiin 0 °C:ssa liuoksen kanssa, jossa oli fenoksiasetyylikloridia (0,5 ml) dikloorimetaanissa. Liuoksen oltua 18 tuntia 3 °C:ssa sitä käsiteltiin pyridiinin kanssa (1,0 ml) ja fenoksiasetyylikloridin (1,0 ml) kanssa dikloorimetaanissa (5 ml). Liuosta sekoitettiin 15 0-5 °C:ssa 30 minuuttia ennen kuin se kaadettiin jääve- teen. Lisättiin eetteriä (100 ml) ja seosta sekoitettiin 20 minuuttia. Vesikerros uutettiin eetterillä. Eetteri-kerrokset yhdistettiin, pestiin peräkkäin vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin. Jään-20 nös puhdistettiin kromatografoimalla piidioksidilla käyttämällä seosta dikloorimetaaniasetoni (40:1), jolloin saatiin otsikon yhdisteitä seoksena (1,8 g, monoasyyli:di-asyyli = 6:1), joka erotettiin käänteisfaasi-preparatii-vista hplc:tä käyttäen, jolloin saatiin 5-fenoksiasetoksi 25 Faktor A:ta, δ (CDC13) 6,8 - 7,4 (m; 5H) ja 4,66 (s; 2H), .·.· m/z 746, 728, 710, 594 ja 576 ja 5,23-difenoksiasetoksi

Factor A:ta, 6 (CDC13) 6,8 - 7,4 (m, 10H), 4,60 (s, 2H) ja 4,70 (s, 2H).

Esimerkki 2 30 5-fenoksiasetoksi-23-(4-metyylifenoksitionokarbo- l * nyylioksi) • · ·

v' Factor A

5-fenoksiasetoksi Factor A:ta (747 mg) käsiteltiin ,·· dikloorimetaanissa (10 ml) 0 °C:ssa typen suojaamana pyri- 35 diinin (0,81 ml) kanssa ja sitten 4-metyylifenyyli-kloori- 100402 19 tionoformlaatin (0,75 g) kanssa dikloorimetaanissa (2 ml). Tummaa liuosta sekoitettiin 15 minuuttia 0 eC:ssa ja sitten 22 tuntia jäähdyttämättä. Seos kaadettiin kylmään veteen ja suolaliuokseen, ja uutettiin eetterillä. Yhdiste-5 tyt eetterikerrokset pestiin vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös puhdistettiin kromatografoimalla piidioksidi-kolonnissa ja käänteisfaa-si-preparatiivista hplc:tä käyttäen, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (430 mg), 6 (CDC13) 3,34 (m; 1H), 3,58 (m; 10 1H), 3,97 (dlO; 1H), 4,72 (s, 2H), 5,4 (m, 1H), 5,59 (d6; 1H) ja 6,9 - 7,4 (m, 9H), m/z 728, 616, 576, 466, 464, 448, 354, 297, 247, 219 ja 151.

Esimerkki 3

5-tert-butyylidimetyylisilyylioksiasetoksi 15 Factor A

Factor A:ta (2,144 g), joka oli kuivassa eetterissä (25 ml) ja pyridiinissä (2,5 ml) 0 °C:ssa typen suojaamana, käsiteltiin lisäämällä tiputtaen t-butyylidimetyyli-silyylioksiasetyylikloridia (1,2 g) eetterissä (10 ml).

20 Seosta sekoitettiin 90 minuuttia 0 C°:ssa ennen kuin sitä käsiteltiin lisäämällä tiputtaen lisää happokloridia (1,10 g) eetterissä (10 ml). Seosta sekoitettiin 0 eC:ssa 60 minuuttia ja kaadettiin kylmään veteen ja eetteriin. Vesikerros pestiin eetterillä. Yhdistetyt orgaaniset ker-J 25 rokset pestiin vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös puhdistettiin kromatogra- • · * foimalla piidioksidilla käyttämällä eluenttina seosta di- kloorimetaani-asetoni (25:1), jolloin saatiin otsikon yhdistettä, 6 (CDC13) 0,09 (s, 6H), 0,78 (d6, 3H), 0,90 (s, 30 9H), 0,93 (d6, 3H), 0,97 (d6, 3H), 1,03 (d6, 3H, 1,51 (s, f*· 3H), 1,59 (s, 3H), 1,74 (s, 3H), 3,32 (m, 1H), 3,52 (dlO, :T 1H), 3,64 (m, 1H), 3,74 (dlO, 1H), 3,82 (m, 1H), 4,32 (s, ·.·;·' 2H) ja 5,57 (d5, 1H), m/z 784, 766, 748, 595, 577, 484, 466, 354, 314, 297, 265, 247, 237, 219 ja 151.

« « 100402 20

Esimerkki 4 5-1ert-butyy1idimetyy1i silyylioksi

Factor A

Factor A:ta (250 mg) ja imidatsolia (163 mg), jot-5 ka olivat kuivassa dimetyyliformamidissa (10 ml), käsiteltiin t-butyylidimetyylisilyylikloridin (197 mg) kanssa. Liuosta sekoitettiin 2 tuntia ja kaadettiin kylmään veteen. Seosta uutettiin perusteellisesti eetterin kanssa, ja yhdistetyt eetteriuutteet kuivattiin ja haihdutettiin 10 kuiviin. Jäännös puhdistettiin kromatografoimalla piidioksidilla, käyttämällä eluenttina seosta dikloorimetaani:-asetoni (10:1), jolloin saatiin otsikon yhdistettä (235 mg), 6 (CDC13) 0,13 (s, 6H), 0,80 (d6, 3H), 0,92 (s, 9H), 0,96 (d6, 3H), 1,00 (d6, 3H), 1,03 (d6, 3H), 1,53 (s, 3H), 15 1,60 (s, 3H), 1,80 (s, 3H), 3,37 (m, 1H), 3,56 (dlO, 1H), 3,64 (m, 1H), 3,75 (dlO, 1H) ja 4,43 (d5, 1H), m/z 726, 708, 691, 651, 633, 466, 448, 354, 314, 297, 265, 247, 219 ja 151.

Esimerkki 5 20 5-asetoksi ja 5,23-diasetoksi

Factor A

· Factor A:ta (3,0 g) käsiteltiin pyridiinissä (20 ml) -5 °C:ssa etikkahappoanhydridin (8 ml) kanssa ja saatu liuos jätettiin 3 °C:seen 20 tunniksi. Lisättiin bentsee- 25 niä (100 ml) ja liuos konsentroitiin vakuumissa. Jäljelle .·.·. jäänyt öljy kromatografoitiin piidioksidilla käyttämällä eluenttina seosta dikloorimetaani-asetoni (40:1), jolloin saatiin Factor A:n 5-asetaattia (2,06 g), jossa oli 5,23- diasetaattia (10 %). Yhdisteet erotettiin käyttämällä 30 käänteisfaasi-preparatiivista hplc:tä, jolloin saatiin 5- • ** asetoksi-Factor A:ta (saanto 79 %), Tl .«k·. (EtOH) 244,5 nm • · · (E\ 462), 6 (CDCI3) 2,14 (s, 3H), m/z 654, 594 ja 576 ja 5,23-diasetoksi Factor A:ta (saanto 6,5 %), δ (CDC13) 2,01 (s, 3H) ja 2,13 (s, 3H), m/z 696 ja 636.

100402 21

Esimerkki 6 5-asetoksi-23-keto Factor Ä

Liuosta, jossa oli oksalyylikloridia (1,96 ml) kui-5 vassa dikloorimetaanissa (25 ml) -70 °C:ssa typen suojaamana, käsiteltiin lisäämällä tiputtamalla liuos, jossa oli dimetyylisulfoksidia (3,19 ml) kuivassa dikloorimetaanissa (15 ml) ja sitten tiputtamalla liuos, jossa oli 5-asetok-si-Factor A:ta (4,91 g) kuivassa dikloorimetaanissa (30 10 ml). Saatua liuosta sekoitettiin -70 °C:ssa 1,5 tuntia ennen kuin sitä käsiteltiin lisäämällä tiputtamalla liuos, jossa oli trietyyliamiinia (12,6 ml) kuivassa dikloorimetaanissa (40 ml). Reaktioseosta sekoitettiin 1,25 tuntia jäähdyttämättä ja kaadettiin kylmän veden ja eetterin 15 seokseen (1:1). Vesikerros uutettiin eetterillä. Yhdistetyt orgaaniset kerrokset pestiin vedellä, suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin. Jäljelle jäänyt vaahto kromatografoitiin piidioksidilla käyttämällä dikloori-metaaniasetoniseosta (50:1), jolloin saatiin otsikon yh-20 distettä (3,4 g), 6 (CDC13) 3,33 (m, 1H), 3,49 (m, 1H), 3,70 (dlO, 1H) ja 5,52 (d5, 1H), m/z 652, 634, 609, 591, :7: 574, 482, 263, 235 ja 151.

Esimerkki 7 23-keto

25 Factor A

7! Esimerkin 6 yhdistettä (276 mg) käsiteltiin meta- * nolissa (5 ml) 0 °C:ssa lisäämällä tiputtamalla liuos, jossa oli 2-norm. natriumhydroksidia (0,42 ml) metanolissa (1,0 ml). Liuos jätettiin 5 °C:seen 5 tunniksi ennen kuin 30 se kaadettiin kylmään veteen. Seos uutettiin eetterillä ja • · • ’·· etyyliasetaatilla. Yhdistetyt orgaaniset kerrokset pestiin • ♦ ♦ ’·/. suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin, jol loin jäljelle jäi kiinteätä ainetta, joka puhdistettiin preparatiivista TLC:tä käyttäen, käyttämällä liuottimena 35 seosta dikloorimetaani:asetoni (10:1), jolloin saatiin 100402 22 otsikon yhdistettä (140 mg), 6 (CDC13) 3,28 (m, 1H), 3,48 (m, 1H), 3,70 (dlO, 1H) ja 4,28 (tr7, 1H), m/z 592, 549, 482, 370, 265, 235 ja 151.

Esimerkki 8 5 5-fenoksiasetoksi-23-deoksi

Factor A

Esimerkin 2 yhdistettä (350 mg) ja atsobisisobuty-ronitriiliä (25 mg) jotka olivat kuivassa tolueenissa (20 min) typen suojaamana 120 °C:ssa, käsiteltiin lisäämällä 10 tiputtamalla liuos, jossa oli tri-n-butyylitinahydridiä (0,5 ml) kuivassa tolueenissa (10 ml). Liuosta kiehutettiin 90 minuuttia, jäähdytettiin ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös kromatografoitiin piidioksidilla, käyttämällä liuottimena seosta dikloorimetaani:asetoni (40:1), jolloin 15 saatiin otsikon yhdistettä (280 mg), δ (CDC13) 3,32 (m, 1H), 3,42 (dlO, 1H), 3,57 (m, 1H), 4,71 (s, 2H), 5,59 (d6, 1H) ja 6,8 - 7,4 (m, 5H), m/z 730, 712, 578, 560, 468, 450, 356, 314, 299, 249, 248, 221 ja 151.

Esimerkki 9 20 23-deoksi

Factor A

Esimerkin 8 yhdiste (240 mg) lisättiin kyllästettyyn ammoniakin metanoliliuokseen (10 ml) -5 eC:ssa.

·'. Liuosta sekoitettiin 0-10 °C:ssa 2 tuntia ennen kuin se 25 haihdutettiin kuiviin. Jäännös kromatografoitiin piidiok- « ··»» sidilla käyttämällä seosta dikloorimetaani:asetoni (20:1), • · · jolloin saatiin otsikon yhdistettä (180 mg), 6 (CDC13) 3,27 (m, 1H), 3,42 (d6, 1H), 3,54 (m, 1H) ja 4,29 (t6, 1H), m/z 596, 578, 560, 468, 450, 356, 314, 299, 249, 248, 221 ja 30 151.

• ·

II

100402 23 eränä ylimäärin oksalyylikloridia (1,0 ml). 4 - 5 minuutin jälkeen seosta käsiteltiin veden (15 ml) kanssa ja edelleen 5 minuutin kuluttua 2-mol. HCl:n (10 ml) ja etyyliasetaatin (70 ml) kanssa. Orgaaninen faasi erotettiin, 5 pestiin vedellä ja suolaliuoksella ja käsiteltiin sitten värin poistavan puuhiilen kanssa. 5-10 minuutin kuluttua orgaaninen liuos suodatettiin faasit erottavan paperin läpi ja liuotin haihdutettiin suodoksesta. Eetteriin (50 ml) liuotettu jäännös selkeytettiin suodattamalla 10 "Hyflo":n läpi ja poistamalla liuotin saatiin vaaleankeltaista vaahtoa. Trituroimalla tätä ainetta di-isopropyyli-eetterin (noin 7 ml) kanssa saatiin otsikon yhdistettä kiteisenä kiinteänä aineena (750 mg) sen jälkeen kun kiinteä aine oli pesty di-isopropyylieetterin ja n-pentaanin 15 kanssa. ABak«. (CHBr3) 3360 - 3600 (OH), 1805 (happomono-meeri) ja 1720 cm-1 (happodimeeri ja esterit); 6 (CDC13) 4,30 (d, 5Hz, 1H) ja 5,14 (m, 1H).

Esimerkki 11 Factor A

20 Liuosta, jossa oli 23-hemioksalaatti Factor A:ta (500 mg) dikloorimetaanissa (30 ml), sekoitettiin voimakkaasti natriumhydroksidin vesiliuoksen (1,54 g 30 ml:ssa H20:ta) kanssa 2 tuntia 21 °C:ssa. Orgaaninen faasi otet-;·,· tiin talteen ja vesifaasi pestiin pienellä tilavuusmää- 25 rällä dikloorimetaania. Orgaaniset faasit yhdistettiin, pestiin 2-mol. HClrllä, sitten kuivattiin (Na2S04) ja li- • · uotin haihdutettiin pois, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (430 mg) vaahtona. Yhdisteen osoitettiin olevan Factor A:ta vertaamalla hplc:n avulla Factor A:n autenttiseen 30 näytteeseen, ϊ Esimerkki 12 :*:* Factor A, 5-hemisukkinaatti

Liuosta, jossa oli Factor A;ta (306 mg) ja meripih-kahappoanhydridiä (60 mg) kuivassa pyridiinissä (0,5 ml), ;t 35 sekoitettiin 22 eC:ssa 24 tuntia. Seos laimennettiin eet- 100402 24 terillä ja orgaaninen faasi pestiin sitten 2-norm. kloori-vetyhapolla ja suolaliuoksella. Haihduttamalla kuivattu eetterikerros kuiviin saatiin vaahtoa, josta otsikon yhdiste eristettiin käänteisfaasisen preparatiivisen HPLC:n 5 avulla. Eetterissä oleva tuote saostettiin valkeana amorfisena kiinteänä aineena (86 mg) lisäämällä n-pentaania; [a]p2+ 125° (c 0,44, CHC13) ABake. etanoli 245 nm (eBak..

30,700), 7\, naks. (CHBr3) 3490 (OH) 3,300 - 2,200 (C02H), 1730 (happokarbonyyli) ja 1710 cm'1 (esteri); 6 (CDC13) 2,74 (s, 10 4H), m/z = 712 (M*).

Esimerkki 13

Factor A, 5-klooriasetaatti

Liuosta, jossa oli Factor Aita (123 mg) ja pyridii-niä (0,1 ml) kuivassa dikloorimetaanissa (5 ml), sekoitet-15 tiin 0 °C:ssa ja lisättiin klooriasetyylikloridia (0,3 ml 1-mol. dikloorimetaaniliuosta). Saatua liuosta sekoitettiin 0 °C:ssa 15 minuuttia, sitten lisättiin vielä klooriasetyylikloridia (0,1 ml 1-mol. liuosta), ja sekoittamista jatkettiin edelleen 15 minuuttia. Liuos laimennet-20 tiin dikloorimetaanilla (50 ml), pestiin sitten 2-norm.

; kloorivetyhapolla (2 x 20 ml:11a), ja kyllästetyllä nat- riumvetykarbonaatilla (20 ml), ja kuivattiin (magnesium-sulfaatilla), ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös (140 mg) ;·,· puhdistettiin kromatografoimalla Kieselgel 60:ll:ä (15 g).

J 25 Eluoimalla kolonni petrolieetteri:etyyliasetaatti-seoksel-la (4:1) saatiin otsikon yhdistettä (90 mg) värittömänä • · vaahtona, [a]o0 + 143° (c, 1,11, CHC13), λ Bake (etanoli) 245,5 nm (6 30,400), Λ Bake. (CHBr3) 3500 (OH), 1760 (kloori-asetaatti) ja 1710 cm"1 (esteri), 6 (CDC13) 5,5 - 5,6 (m, 30 2H), 4,18 (s, 2H), noin 3,81 (m, 1H), 3,74 (d, J 10Hz, 1H) ja 0,80 (d, J 7Hz, 3H), m/z = 688 (M*, 35C1).

:T Esimerkkien 15, 16, 17 ja 18 yhdisteitä valmistet- tiin samalla tavalla.

• 1 100402 25

Esimerkki 14

Factor A, 5-klooriasetaatti, 23-ketoni

Liuosta, jossa oli Factor A:ta, 5-klooriasetaattia (276 mg) ja pyridiiniumdikromaattia (602 mg) kuivassa N,N-5 dimetyyliformamidissa (10 ml), sekoitettiin 20 °C:ssa 48 tuntia, ja kaadettiin sitten seokseen, jossa oli etyyliasetaattia (50 ml) ja 2-norm. kloorivetyhappoa (25 ml). Orgaaninen faasi pestiin 2-norm. kloorivetyhapolla ja kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella, ja kuivat-10 tiin (magnesiumsulfaatilla), ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös puhdistettiin kromatografoimalla Kieselgel 60:llä (25 g). Eluoimalla kolonni petrolieetteri:etyyliasetaatti-seoksella (4:1) saatiin otsikon yhdistettä (85 mg) värittömänä vaahtona, [a]|° + 120° (c 1,05, CHC13), Λ Bak,.

15 (etanoli) 245 nm (e 26,500), Λ. Baks. (CHBr3) 3480 (OH), 1760 (klooriasetaatti) ja 1715 cm'1 (esteri ja ketoni), 6(CDC13) 5,5 - 5,7 (m, 2H), 4,17 (s, 2H), 3,72 (d, J 10Hz, 1H), 2,50 (s, 2H) ja 0,85 (d, J 7Hz, 3H), m/z = 686 (M+, 3SC1).

Esimerkki 15 20 Factor A, 5-bromiasetaatti (447 mg) [a]^0 + 132° (c 0,77, CHC13), ABakB. (etanoli) 245,5 nm (e 31,500), ^ BakB.

(CHBr3) 3495 (OH), 1730 (bromiasetaatti) ja 1712 cm-1 (es- ; teri), 6 (CDC13) 5,5 - 5,6 (m, 2H), 3,97 (d, J 12Hz, 1H), 3,90 (d, J 12 Hz, 1H), 3,81 (m, 1H), 3,75 (d, J 10 Hz, ! 25 1H), ja 0,81 (d, J 7Hz, 3H), Factor A:sta (613 g) ja bro- **'* miasetyylibromidista (0,13 ml).

• »

Esimerkki 16 23-deoksi Factor A, 5-metyylikarbonaatti (57 mg) [a]30 + 152° (c 0,6, CHC13), Λ BakB. (etanoli) 244,5 nm 30 (6 28,200), A Bak.. (CHBr3) 3530 ja 3460 (OH), 1740 (karbo- Γ*. naatti) ja 1707 cm'1 (esteri), δ (CDC13) 5,55 (s, 1H), 3,82 :T (S, 3H), 3,42 (d, J 10Hz, 1H) ja 0,69 (d, J 4Hz, 3H), 23- deoksi Factor A:sta (90 mg) ja metyyliklooriformiaatista (0,3 ml 1-mol. dikloorimetaaniliuosta).

• I

100402 26

Esimerkki 17

Factor A, 5-metyylikarbonaatti, 23-ketoni (830 mg) [a]*0 + 132° (c 0,82, CHC13), Λ (etanoli) 245 nm (6 29,800), Factor A, 23-ketonista (916 mg) 3a metyyli-5 klooriformiaatista (0,23 ml).

Esimerkki 18

Factor A, 5-bentsyylikarbonaatti, 23-ketoni (57 mg) [a]*0 + 99° (c 0,4, CHClj), ^Bake. (etanoli) 245,5 nm (6 29,600), λ.«k.. (CHBr3) 3600, 3550 ja 3480 (OH), 1740 10 (karbonaatti) ja 1715 cm'1 (esteri ja ketoni), 6 (CDC13) 7,5 - 7,2 (m, 5H), 5,57 (s, 1H), 5,21 (s, 2H), 3,70 (d, J 10Hz, 1H), 2,49 (s, 2H) ja 0,86 (d, J 6Hz, 3H), Factor A, 23-ketonista (92 mg) ja bentsyyliklooriformiaatista (0,05 ml).

15 Esimerkki 19

(a) 5-asetoksi-23-n-butoksi Factor A

Hopeakarbonaattia (1 g) lisättiin liuokseen, jossa oli 5-asetoksi Factor A:ta (325 mg) kuivassa eetterissä, ja sen jälkeen jodibutaania (0,5 ml) ja hopeaperklonaattia 20 (550 mg). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 20 tun tia lisättäessä kollidiinia (0,5 ml). Edelleen 20 minuutin sekoittamisen jälkeen seos suodatettiin ja suodos pestiin peräkkäin 2-norm. kloorivetyhapolla, kyllästetyllä nat-riumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä. Kuivattu 25 orgaaninen faasi haihdutettiin lähes kuiviin ja öljy puh-distettiin kromatografoimalla Merck Kieselgel 60:llä, 230 - 400 mesh (100 ml). Eluoimalla kolonni heksaani:etyy-liasetaattiseoksella (3:1) saatiin otsikon yhdistettä värittömänä vaahtona (276 mg, 78 %), [a]22 + 160° (c 0,94, 30 CHCI3) λ makB. (etanoli) 245 nm (eBak.. 28300); 6 (CDC13) 3,16 • · i *· (m, 1H), 3,43 (m, 1H), 3,59 (m, 1H).

• · · V (b) 5-asetoksi-23-etoksi Factor A:ta valmistettiin samalla tavalla 5-asetoksi Factor A:sta ja etyylijodidis-ta. Otsikon yhdistettä saatiin värittömänä vaahtona; 35 [a]22 + 1670 (c 1,02, CHC13), Λ Bake. (etanoli) 245 nm

II

100402 27 (G 28070), 6 (CDC13) 3,25 (m, 1H), 3,46 (m, 1H), 3,64 (m, 1H).

Esimerkki 20 23-etoksi

5 Factor A

Liuosta, jossa oli 5-asetoksi-23-etoksi Factor Aita (806 mg) metanolissa (18 ml), jäähdytettiin jäähauteessa, lisättiin 1-norm. natriumhydroksidin vesiliuosta (1,3 ml) ja vaaleankeltaista liuosta sekoitettiin jäähauteessa 1,25 10 tuntia. Liuos laimennettiin etyyliasetaatilla (80 ml), sitten se pestiin peräkkäin 1-norm. kloorivetyhapolla, vedellä ja suolaliuoksella. Kuivattu orgaaninen faasi haihdutettiin kuiviin ja jäännöshartsi puhdistettiin kro-matografoimalla Merck Kieselgel 60 -piidioksidilla, 230 -15 400 mesh (200 ml). Eluoimalla kolonni 15 % etyyliasetaat tia sisältävällä dikloorimetaaniseoksella saatiin otsikon yhdistettä värittömänä vaahtona (623 mg), [a]^1 + 178° (c 1,13, CHC13) λ»«1.. (etanoli) 244 nm (€aak. 29,400); δ (CDC13) 4,29 (t, 7, 1H), 3,65 (m, 1H), 3,47 (m, 1H), 3,26 20 (m, 2H), 1,15 (t, 7, 3H).

Esimerkin 21 yhdistettä valmistettiin samalla tavalla:

Esimerkki 21 23-n-butoksi Factor Aita (61 %) saatiin värittömänä 25 vaahtona; [a]11 + 161° (c 1,47, CHC13), Λ.»«κβ. (etanoli) 244 nm (6 33100); δ (CDC13) 4,30 (t, 7, 1H), 3,60 (m, 1H), 3,43 • · (m, 1H), 3,17 (m, 1H) 5-asetoksi-23-n~butoksi-Factor A:sta.

• ♦ — « « • · ♦ · · • 1 • ·

Claims (4)

100402 28

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten kaavan (I) mukaisten makrolidijohdannaisten valmistamiseksi,

5. R 2>/3 CH, ch3 s' i v°'q 3 <i> 'tl! T S· S V OH H °—= \ H X CK3 OR jossa R1 on metyyli, etyyli tai isopropyyli, R2 on vety tai 2. ryhmä -OR5, ja R3 on vety, tai R2 ja R3 muodostavat yhdessä hiiliatomin kanssa, johon ne ovat liittyneet C=0-ryhmän, · jolloin OR5 on -OH, -OCOR6, jossa R6 on C^-alkyyli, joka : voi olla substituoitu halogeenilla, C^-alkoksilla tai fe- ; v noksilla; -OCOOR63, jossa R6a on C^-alkyyli; -OR7, jossa R7 25 on C^-alkyyli, joka voi olla substituoitu halogeenilla, .·,·_ tai C3.5-alkenyyli; tai -0C0C02R9, jossa R9 on vety tai C^- alkyyli; ja OR4 on -OH tai -OCOR4a, jossa R4a on C^-alkyyli, joka voi olla substituoitu halogeenilla tai fenoksilla; lukuunottamatta sellaisia kaavan I mukaisia yhdisteitä, 30 joissa R2 on -OH ja OR4 on -OH, tunnettu siitä, • · • *· että • · · (ai) sellaisten kaavan (I) mukaisten yhdisteiden ,··' valmistamiseksi, joissa toinen tai kumpikin ryhmistä R2 ja OR4 on asyloitu hydroksiryhmä, vastaava yhdiste, jossa toi- 3. nen tai kumpikin ryhmistä R2 ja OR4 on hydroksyyliryhmä, il 100402 29 saatetaan reagoimaan asylointireagenssin tai sen reaktiivisen johdannaisen kanssa, jolloin asylointlaineena käytetään kaavan R6COOH, R6aC020H, HOOCCOOR9 tai R4aCOOH mukaista happoa tai sen reaktiivista johdannaista, tai 5 a2) sellaisten kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa R2 on eetteröity hydroksiryhmä, vastaava yhdiste, jossa R2 on hydroksyyliryhmä, eette-röidään yhdisteellä, jonka kaava on R7-Y, jossa R7 tarkoittaa samaa kuin edellä ja Y on poistuva ryhmä, tai 10 (b) sellaisten kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, jossa R2 ja R3 merkitsevät vetyä, vastaava yhdiste, jonka kaava on L 15 ? c«3 b CH3 li H i 20 ch3 k ys γ H I I R1 (III) \ o /0 :: ii : Il OH JY- H ' .· 25 I | *:! o-- : : ? ch H J CH3 OR 30 jossa R1 tarkoittaa samaa kuin edellä, -OR4 on edellä mää- • · *· ritelty substituoitu hydroksyyliryhmä, ja L on ryhmä RuOCSO, jossa R11 on CVg-alkyyli(aryyli), kuten p-tolyyli- ·(.' klooritionoformiaatti, pelkistetään homolyyttisesti sopi valla pelkistysreagenssilla, tai 100402 30 (c) sellaisten kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa R2 ja R3 muodostavat yhdessä okso-ryhmän, vastaava yhdiste, jossa R2 -OH, hapetetaan, jolloin OR4 on suojattu ryhmä, valmistettaessa yhdisteitä, joissa

5 OR4 on hydroksyyliryhmä, tai (d) sellaisten kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa R2 tai OR4 on hydroksyyliryhmä, vastaavasta yhdisteestä, jossa R2 tai OR4 on suojattu hydroksyyliryhmä, poistetaan suojaryhmä.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R2 on vety tai hydroksiryhmä tai ryhmä, jonka kaava on -OR7, jossa R7 on C1_4-alkyyli tai allyyli, tai R2 ja R3 muodostavat yhdessä hiiliatomin kanssa, johon ne 15 ovat liittyneet C=0-ryhmän. • ' I • · « · • · « • · - • · « · • · · • · • · 1 li t < 100402 31