ES3063007T3 - Pharmaceutical packages comprising polypropylene containers and ngf aqueous formulations packaged therein - Google Patents

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] Envases farmacéuticos comprendiendo recipientes de polipropileno y formulaciones acuosas de NGF envasadas en los mismos

[0003] La presente invención se refiere a envases farmacéuticos comprendiendo recipientes de polipropileno particulares y formulaciones acuosas de NGF envasadas en los mismos.

[0004] El envasado es un aspecto importante de la industria farmacéutica que garantiza la protección y la contención del fármaco durante la transferencia, el almacenamiento, la venta y el uso.

[0005] El envase primario es de gran importancia ya que está en contacto directo con el producto medicamentoso, por lo que debe ser inerte y no causar ninguna alteración en su composición.

[0006] El tipo de envase primario depende de la forma farmacéutica y de la composición química del fármaco. Para las formas de dosificación de fármacos líquidas, típicamente se usan materiales de vidrio o plástico de alta calidad. El vidrio es un material ampliamente usado puesto que es químicamente inerte y permite una inspección muy fácil del contenido en el recipiente. Sin embargo, el vidrio es frágil y caro.

[0007] En cuanto a los plásticos, tienen la ventaja de ser flexibles, ligeros y rentables pero, en algunos casos, surgen problemas debido al hecho de que algunos fármacos podrían reaccionar con el recipiente.

[0008] Para el envase primario farmacéutico, los materiales a base de polipropileno han sido aprobados por las Farmacopeas y se usan habitualmente.

[0009] El factor de crecimiento nervioso (Nerve Growth Factor, NGF) es una proteína compleja que regula la supervivencia, el desarrollo y la función de las neuronas, tanto a nivel central como periférico.

[0010] Se ha sugerido que el NGF es eficaz para tratar ciertas enfermedades degenerativas de tanto los sistemas nerviosos periférico como central, incluyendo las neuropatías sensoriales y motoras hereditarias, la degeneración hereditaria y esporádica del sistema, la esclerosis lateral amiotrófica, la enfermedad de Parkinson y la enfermedad de Alzheimer. Hoy en día, el NGF también encuentra un uso terapéutico específico en el tratamiento de enfermedades de la córnea tales como la queratitis neurotrófica. El NGF usado actualmente en terapia se extrae de glándulas submaxilares de ratón o se fabrica por tecnologías recombinantes.

[0011] El uso de NGF en terapia plantea algunos problemas ya que su bioactividad, que depende de su estructura secundaria y terciaria, puede alterarse durante la fabricación, purificación o almacenamiento. Las soluciones de NGF pueden someterse a la agregación de proteínas que puede dar como resultado la variabilidad del título.

[0012] Además de los problemas de estabilidad, como muchas otras proteínas, el NGF se une de forma inespecífica a las superficies y a una variedad de materiales, incluyendo el vidrio y los plásticos, con los que el NGF puede entrar en contacto durante la fabricación, el almacenamiento o la administración. Este fenómeno puede provocar una reducción en la concentración del activo en la solución y, en consecuencia, cantidades variables o insuficientes de NGF administradas finalmente al paciente.

[0013] El NGF se comercializa actualmente en forma liofilizada, para reconstituirse en el momento de su uso, o como formulación acuosa que requiere almacenamiento a bajas temperaturas, generalmente de -20 ° C, para minimizar la degradación y adhesión de las formulaciones acuosas de NGF. Es más, con el fin de mitigar la adhesión de NGF al envase primario, la superficie de contacto interna de los viales de vidrio comercializados actualmente con NGF está cubierta con un recubrimiento que reduce la adsorción de proteínas.

[0014] El documento WO95/05845A1 describe formulaciones de NGF e ilustra los inconvenientes de la escasa estabilidad y la adhesión no deseada a diversas superficies de esta proteína. Para reducir o prevenir la adhesión de NGF, este documento sugiere el uso de aditivos estabilizantes para las formulaciones acuosas de NGF, tales como tensioactivos como polisorbatos, por ejemplo, Tween<®>80, poloxámeros como Pluronic<®>F68 o proteínas, tales como albúmina. Los ejemplos 5 y 6 describen estudios de estabilidad de formulaciones acuosas de NGF envasadas en viales con punta de goteo de polipropileno. El polipropileno de estos viales es un material genérico no caracterizado.

[0015] El documento JP2012001588 A describe una lámina a base de propileno que tiene una excelente transparencia, resistencia al impacto, moldeabilidad y resistencia a la curvatura para envasar preparaciones sólidas.

[0016] El documento WO2016153663A1 describe adhesivos termofusibles a base de olefina pulverizables.

[0017] A la luz de lo anterior, todavía existe la necesidad de mantener la actividad y el título de las formulaciones acuosas de NGF durante la manipulación y el almacenamiento sin tener que recurrir al uso combinado de aditivos en la solución, a bajas temperaturas a lo largo de la fabricación y al almacenamiento y a recipientes sofisticados y caros para el envase primario.

[0018] RESUMEN DE LA INVENCIÓN

[0019] El solicitante ha realizado estudios destinados a prevenir o minimizar eficazmente la adhesión de NGF de formulaciones acuosas a la superficie de contacto interna de los recipientes en los que se almacenan y ha descubierto de manera sorprendente que los polipropilenos (polypropylenes, PP) particulares, caracterizados por ciertas propiedades térmicas y cristalinidad, muestran una adhesión de NGF significativamente inferior a la del vidrio siliconado u otros polipropilenos.

[0020] Usando estos PP particulares, es posible almacenar por tanto formulaciones acuosas de NGF en condiciones menos severas, incluso a temperatura ambiente, evitando ventajosamente tratamientos de recubrimiento adicionales en los recipientes y aditivos estabilizantes en la formulación mientras se mantiene constante el título de NGF.

[0021] Por tanto, un objeto de la presente invención es un envase farmacéutico comprendiendo un recipiente de plástico como envase primario y una formulación acuosa de factor de crecimiento nervioso (Nerve Growth Factor, NGF) envasada en el mismo, en el que el recipiente de plástico tiene una superficie interna en contacto con la formulación acuosa de NGF y una superficie externa, donde al menos dicha superficie de contacto interna está sustancialmente constituida por, preferentemente dicha superficie de contacto interna está constituida por más del 80 % en peso de al menos un copolímero de propileno-etileno que tiene una entalpía de fusión ΔHm inferior a 95 J/g y superior a 35 J/g, medida por DSC según el procedimiento indicado en la descripción.

[0022] También se describe un procedimiento de selección de un copolímero de propileno-etileno adecuado para fabricar al menos la superficie de contacto interna del recipiente de plástico del envase farmacéutico de la invención que comprende:

[0023] -proporcionar al menos una muestra de copolímero de propileno-etileno,

[0024] -medir la entalpía de fusión ΔHm de la muestra de copolímero de propileno-etileno por DSC según el procedimiento indicado en la descripción,

[0025] -seleccionar el copolímero de propileno-etileno como adecuado si su entalpía de fusión ΔHm es inferior a 95 J/g y superior a 35 J/g.

[0026] Un objeto adicional de la invención es el uso del recipiente de plástico definido anteriormente para envasar una formulación acuosa de factor de crecimiento nervioso (Nerve Growth Factor, NGF).

[0027] DEFINICIONES

[0028] Con el término “polipropileno” se entiende tanto homopolímeros como copolímeros de propileno. Con el acrónimo “PP” se entiende polipropileno.

[0029] Con la expresión “material a base de propileno” se entiende un material comprendiendo un % de mero de propileno superior al 50 %.

[0030] Con la expresión “copolímero de propileno-etileno” se entiende un copolímero de propileno con etileno, en el que el monómero de propileno es el monómero mayoritario. La expresión “copolímero de propileno-etileno” en esta invención también incluye terpolímeros de propileno-etileno en los que el monómero de propileno es el monómero mayoritario y está presente un monómero de olefina adicional. Con la expresión “monómero mayoritario” se entiende un monómero presente en el polímero en una cantidad superior al 50 % en moles.

[0031] Con el término “mero” se entiende una parte de unidad de repetición de un polímero.

[0032] Con el acrónimo “NGF” se entiende un factor de crecimiento nervioso.

[0033] Con la expresión “sustancialmente constituido por” se entiende un porcentaje del componente superior al 80 % en peso.

[0034] Con la expresión “forma farmacéutica de fármaco líquida” se entiende la formulación líquida en la que el producto medicamentoso se fabrica y se pone a disposición para su uso, tal como una solución, una emulsión, una suspensión, una loción y similares.

[0035] Con la expresión “envase primario” o “recipiente primario”, se entiende el envase en contacto directo con la forma farmacéutica de fármaco líquida.

[0036] Con la expresión “envase monodosis” se entiende un envase que incluye una dosis única del fármaco. Con la expresión “envase multidosis" se entiende un envase que incluye más de una dosis única del fármaco.

[0037] Con la expresión “superficie de contacto” se entiende la superficie del recipiente de plástico que se usa en contacto con la formulación acuosa de NGF.

[0038] A menos que se indique lo contrario, en esta invención todos los porcentajes son porcentajes en peso.

[0039] BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

[0040] -La Figura 1 muestra los gráficos de barras de los ángulos de contacto de las formulaciones F1 a F5 en los materiales de PP analizados PP1 a PP5;

[0041] -La Figura 2 muestra la gráfica de frecuencia de oscilación del electrodo frente al tiempo, medida en una microbalanza de cristal de cuarzo (ΔF - Hz frente al tiempo - min., 6 réplicas), en un experimento de adsorción de rhNGF de la formulación F1 sobre una película de material PP2;

[0042] -Las Figuras 3 y 4 muestran las gráficas de emisión de fotoelectrones de NGF adsorbido en la superficie de muestras PP3, PP4 y PP5 de la formulación F6;

[0043] -La Figura 5 muestra los gráficos de barras de absorbancia (a 280 nm) de la formulación F7 frente a la formulación de control (Ctrl), la formulación F7 envasada en viales de vidrio siliconado doble o en frascos de PP3 y almacenada a temperaturas de 2-8 °C, 25 °C y 37 °C; absorbancia medida en puntos de tiempo de 1 semana, 2 semanas, 1 mes, 2 meses y 3 meses (prueba de estabilidad de 3 meses).

[0044] -La Figura 6 muestra los gráficos de barras de fluorescencia de triptófano (intensidad a λ máx - x 10<7>cps) de la formulación F7 frente a la formulación de control (Ctrl), la formulación F7 envasada en viales de vidrio siliconado doble o en frascos de PP3 y almacenada a temperaturas de 2-8° C, 25° C y 37° C; fluorescencia medida en puntos de tiempo de 1 semana, 2 semanas, 1 mes, 2 meses y 3 meses (prueba de estabilidad de 3 meses).

[0045] A menos que se indique lo contrario, todos los porcentajes se expresan como porcentajes en peso.

[0046] DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

[0047] Un objeto de la presente invención es un envase farmacéutico comprendiendo un recipiente de plástico y una formulación acuosa de factor de crecimiento nervioso (Nerve Growth Factor, NGF) envasada en el mismo, en el que el recipiente de plástico tiene una superficie interna en contacto con la formulación acuosa de NGF y una superficie externa, donde al menos dicha superficie de contacto interna está sustancialmente constituida por, preferentemente dicha superficie de contacto interna está constituida por más del 80 % en peso de al menos un copolímero de propileno-etileno que tiene una entalpía de fusión ΔHm inferior a 95 J/g y superior a 35 J/g, medida por DSC según el procedimiento indicado en la descripción.

[0048] El recipiente de plástico del envase de la invención es un recipiente de plástico adecuado para el envase primario de la formulación acuosa de NGF.

[0049] El recipiente de plástico del envase de la invención puede ser un recipiente rígido o flexible. El recipiente del envase de la invención puede ser una ampolla, un vial, un frasco, un bote, una bolsa o una bolsita.

[0050] Preferentemente, el presente recipiente es un frasco o un vial.

[0051] El recipiente de plástico del envase de la invención puede tener una estructura monocapa o multicapa, preferentemente tiene una estructura monocapa.

[0052] En el caso de una estructura monocapa, el recipiente de plástico está sustancialmente constituido por un copolímero de propileno-etileno como se define en esta invención, preferentemente comprende al menos el 90 %, más preferentemente al menos el 95 %, incluso más preferentemente al menos el 99 % de al menos un copolímero de propileno-etileno como se define en esta invención.

[0053] En el caso de una estructura multicapa, al menos la capa de superficie de contacto está sustancialmente constituida por al menos un copolímero de propileno-etileno como se define en esta invención, preferentemente comprende al menos el 90 %, más preferentemente al menos el 95 %, incluso más preferentemente al menos el 99 % de al menos un copolímero de propileno-etileno como se define en esta invención.

[0054] En una realización, todo el recipiente está sustancialmente constituido por al menos un copolímero de propileno-etileno como se define en esta invención, preferentemente comprende al menos el 90 %, más preferentemente al menos el 95 %, incluso más preferentemente al menos el 99 % de al menos un copolímero de propileno-etileno o mezclas de los mismos, como se define en esta invención.

[0055] El complemento hasta el 100 % de la capa superficial de contacto o de todo el recipiente puede representarse por otros polímeros termoplásticos preferentemente miscibles tales como, por poner un ejemplo, copolímero de etilenoacetato de vinilo y similares.

[0056] El presente recipiente de plástico se caracteriza por al menos un copolímero de propileno-etileno que forma al menos la capa superficial de contacto, teniendo dicho copolímero de propileno-etileno una entalpía de fusión ΔHm inferior a 95 J/g y superior a 35 J/g, medida por DSC según el procedimiento indicado en la descripción.

[0057] Preferentemente, el copolímero de propileno-etileno tiene una entalpía de fusión ΔHm inferior a 90 J/g, más preferentemente inferior a 80 J/g.

[0058] Preferentemente, el copolímero de propileno-etileno tiene una entalpía de fusión ΔHm superior a 40 J/g.

[0059] Preferentemente, la entalpía de fusión ΔHm del copolímero de propileno-etileno está entre 90 J/g y 35 J/g, más preferentemente entre 80 J/g y 40 J/g.

[0060] Un homopolímero de propileno 100 % cristalino, que no es adecuado para fabricar el recipiente del presente envase, tiene una entalpía de fusión ΔHm de aproximadamente 207 J/g (Thermal Application Note - Polymer Heats of Fusion - Roger L. Blaine , TA Inctruments, 109 Lukens Drive, New Castle DE 19720, EE. UU.).

[0061] Preferentemente, el copolímero de propileno-etileno tiene una temperatura de fusión Tm inferior a 160 °C, más preferentemente inferior a 155 °C, medida según el procedimiento de DSC indicado en la descripción.

[0062] Preferentemente, el copolímero de propileno-etileno tiene una temperatura de fusión Tm superior a 130 °C, más preferentemente superior a 140 °C, medida según el procedimiento de DSC indicado en la descripción.

[0063] Preferentemente, el copolímero de propileno-etileno tiene una temperatura de fusión Tm entre 160 °C y 130 °C, más preferentemente entre 155 °C y 140 °C, medida según el procedimiento de DSC indicado en la descripción.

[0064] Preferentemente, el copolímero de propileno-etileno tiene un índice de fluidez inferior a 10 g/10 min, más preferentemente inferior a 9 g/10 min, medido según la norma ISO 1133 a 230 °C y 2,16 kg.

[0065] Preferentemente, el copolímero de propileno-etileno tiene un índice de fluidez entre 1 y 20 g/10 min, medido según la norma ISO 1133 a 230 °C y 2,16 kg.

[0066] Preferentemente, el copolímero de propileno-etileno es un copolímero de propileno-etileno aleatorio.

[0067] Preferentemente, el copolímero de propileno-etileno es semicristalino.

[0068] Preferentemente, el contenido de monómero de etileno en el copolímero de propileno-etileno es inferior al 40 %, más preferentemente inferior al 30 % y al menos del 5 %.

[0069] En una realización, el copolímero de propileno-etileno es un terpolímero de propileno, etileno y una alfa-olefina, preferentemente buteno.

[0070] Preferentemente, la superficie de contacto de copolímero de propileno-etileno, que en el recipiente final está en contacto con la formulación acuosa de NGF, se caracteriza por una aspereza superficial Sa, antes de la incubación de NGF, inferior a 25 nm, más preferentemente inferior a 20 nm, incluso más preferentemente inferior a 15 nm, medida según la norma ISO 4287 (1997).

[0071] Preferentemente, la superficie del copolímero de propileno-etileno que en el recipiente final está en contacto con la formulación acuosa de NGF se caracteriza por un ángulo de contacto superior a 90°, preferentemente superior a 95°, cuando se mide con respecto a la solución F1 como se describe en la presente parte experimental.

[0072] Preferentemente, el copolímero de propileno-etileno está aprobado en al menos una Farmacopea.

[0073] Ejemplos de copolímeros de propileno-etileno adecuados para la fabricación del recipiente del envase de la invención son los copolímeros de la serie Bormed™ de Borealis, en particular los copolímeros de propileno-etileno Bormed™ RD808CF, Bormed™ SB815MO y Bormed™ SC876CF.

[0074] El presente recipiente de plástico puede comprender un único copolímero de propileno-etileno o una mezcla de dos o más copolímeros de propileno-etileno.

[0075] En el caso de una mezcla de copolímeros de propileno-etileno, son miscibles para proporcionar una mezcla homogénea monofásica con un único pico de fusión y una única entalpía de fusión ΔHm, según las preferencias expresadas anteriormente.

[0076] En el presente recipiente de plástico, además de los polímeros plásticos, pueden estar presentes cantidades menores de aditivos comúnmente usados en este campo.

[0077] Dependiendo del recipiente, se pueden usar diferentes técnicas de fabricación conocidas, en las que los presentes copolímeros de propileno-etileno son el material para toda la pared del recipiente o al menos para la capa superficial de contacto.

[0078] Por poner un ejemplo, los recipientes rígidos más gruesos (por ejemplo, frascos o viales) se pueden realizar moldeando por inyección los polímeros seleccionados mientras que los recipientes delgados flexibles (por ejemplo, bolsas y bolsitas) pueden fabricarse cortando y autosellando adecuadamente películas monocapa o multicapa, como es conocido en la técnica de envasado. Ventajosamente, el envase farmacéutico de la invención proporciona el almacenamiento de formulaciones acuosas de NGF en condiciones de almacenamiento más fáciles mientras se minimiza la adhesión de NGF en la superficie de contacto del recipiente y se conserva el título de NGF.

[0079] En particular, el envase farmacéutico de la invención permite preservar la formulación acuosa de NGF a temperaturas superiores a 4 °C, incluso a temperatura ambiente, sin usar aditivos estabilizantes de la formulación, por ejemplo, que eviten la adhesión o agregación de NGF.

[0080] Preferentemente, el recipiente es un vial o un frasco que, al menos en la superficie de contacto interna, comprende, preferentemente consiste en, un copolímero de propileno-etileno como se definió anteriormente. El presente envase farmacéutico comprende una formulación acuosa de NGF, tal como una solución acuosa, una emulsión, una suspensión, una loción y similares, preferentemente una solución acuosa de NGF, más preferentemente una solución acuosa de NGF para uso oftálmico.

[0081] La formulación acuosa de NGF comprende NGF en cantidades terapéuticamente eficaces. Preferentemente, en la formulación acuosa, el NGF está presente en una cantidad de aproximadamente 0,0001 % a aproximadamente 0,5 % p/v, más preferentemente de aproximadamente 0,001 % a aproximadamente 0,1 % p/v, lo más preferentemente aproximadamente 0,002 % p/v de la formulación acuosa.

[0082] La formulación acuosa de NGF puede contener una cantidad suficiente de sales biológicamente aceptables para proporcionar la tonicidad del fluido correcta y para mantener el NGF en solución.

[0083] Preferentemente, la formulación acuosa de NGF contiene suficiente sal para ser isotónica, dentro de límites fisiológicamente aceptables, con líquidos oculares, sangre humana o líquido cefalorraquídeo, dependiendo del uso terapéutico.

[0084] La sal preferida es el cloruro de sodio (NaCl), pero se pueden usar otras sales biológicamente aceptables, tales como, por poner un ejemplo, cloruro de potasio (KCl), cloruro de calcio (CaCl<2>) y cloruro de magnesio (MgCl<2>) y sus mezclas. La formulación acuosa de NGF contiene además un tampón biológicamente aceptable para proporcionar y mantener el pH correcto durante el almacenamiento.

[0085] La formulación acuosa de NGF se tampona con un tampón biológicamente aceptable a un pH entre aproximadamente 6,8 y aproximadamente 7,5, más preferentemente a un pH de aproximadamente 7,2.

[0086] El tampón preferido es el tampón fosfato, pero también se incluyen otros tampones capaces de mantener el pH dentro del intervalo deseado, especialmente los tampones adecuados para uso oftálmico. La cantidad preferida de tampón variará dependiendo del tipo de tampón usado y de su capacidad de tamponamiento.

[0087] La formulación acuosa de NGF puede incluir opcionalmente aditivos que reducen o previenen adicionalmente la adsorción de NGF en diversas superficies, preferentemente tensioactivos tales como, por poner un ejemplo, polisorbatos tales como Tweeny 80, poloxámeros tales como Pluronics F68 o proteínas tales como albúmina sérica. En una realización, la formulación acuosa de NGF no incluye ningún aditivo que reduzca la adsorción, preferentemente no incluye ningún tensioactivo.

[0088] Los excipientes comúnmente usados en formulaciones acuosas farmacéuticas y conocidos por el experto técnico, tales como azúcares, alditoles, aminoácidos, derivados de celulosa, polietilenglicoles, pueden estar presentes en la formulación acuosa de NGF.

[0089] La formulación acuosa de NGF comprende agua en una cantidad suficiente para lograr la concentración adecuada de los componentes de la formulación.

[0090] El NGF incluye en esta invención cualquier forma de factor de crecimiento nervioso, de cualquier fuente, siempre que presente actividad biológica y se una a los receptores de NGF.

[0091] El NGF también comprende formas modificadas de NGF que conservan la bioactividad de NGF y la unión al receptor, incluyendo las proteínas de fusión, los fragmentos de NGF y los mutantes en los que se han eliminado o reemplazado ciertos aminoácidos mientras se mantiene suficiente bioactividad de NGF y unión al receptor para proporcionar actividad terapéutica.

[0092] En una realización, el NGF es de origen murino.

[0093] Preferentemente, el NGF es NGF humano (human NGF, hNGF), más preferentemente es hNGF recombinante (recombinant hNGF, rhNGF). Los procedimientos de obtención de rhNGF, adecuados para su uso en la presente formulación acuosa, son conocidos por los expertos en la materia, por poner un ejemplo, los procesos para su fabricación se describen en los documentos WO9505845A1, WO0022119A1 y WO2013092776A1.

[0094] El NGF de la presente formulación acuosa tiene preferentemente una pureza superior al 70 %, más preferentemente superior al 80 %, incluso más preferentemente superior al 90 % y lo más preferentemente superior al 95 %. La pureza del NGF aislado para su uso en las presentes formulaciones acuosas puede determinarse por medios convencionales conocidos por los expertos en la materia.

[0095] La presente formulación acuosa de NGF se prepara preferentemente de antemano y, a continuación, se envasa y almacena en el recipiente de la invención.

[0096] Sin embargo, en una realización, la formulación de NGF se envasa en el recipiente en forma de polvo, por ejemplo, en una forma liofilizada, a continuación, tras la reconstitución con un vehículo reconstituyente acuoso, se almacena como una formulación acuosa de NGF hasta la administración a pacientes que necesitan terapia.

[0097] El recipiente del envase de la invención después del llenado convencional con la formulación de NGF debe cerrarse. Los cierres, usados para cerrar los recipientes para fármacos después del proceso de llenado, deben ser lo más inertes posible. No deben dar lugar a interacciones no deseadas entre el contenido y el entorno exterior, y deben proporcionar un sellado completo. Además de su función protectora, los cierres también deben permitir la administración fácil y segura del fármaco.

[0098] Ejemplos de cierres adecuados para el presente recipiente son tapas elastoméricas simples o son parte de sistemas de suministro más sofisticados tales como, por poner un ejemplo, el sistema Novelia® de Nemera o el dosificador oftálmico flexible (Ophthalmic Squeeze Dispenser, OSD) de APTAR.

[0099] Ventajosamente, el presente envase, si se proporciona con suficientes propiedades de barrera a los gases, puede comprender una atmósfera modificada, tal como una atmósfera libre de oxígeno, con el objetivo de mejorar la estabilidad durante el almacenamiento.

[0100] En tal caso, el envase debe ser hermético a los gases, posiblemente incluyendo materiales de barrera a los gases adecuados como se conoce en la técnica de envasado.

[0101] Preferentemente, la formulación acuosa de NGF es una solución acuosa de NGF para uso oftálmico, en forma de colirios administrados por vía ocular.

[0102] Una formulación acuosa de NGF particularmente preferida además de NGF, preferentemente rhNGF, comprende trehalosa, manitol, Methocel, PEG 6000, L-metionina, tampón fosfato, agua y tiene un pH de aproximadamente 7,2. El presente envase farmacéutico puede ser un envase monodosis o un envase multidosis.

[0103] En una realización, el envase farmacéutico de la invención es un envase monodosis, a saber, un aplicador de plástico estéril precargado comprendiendo un recipiente como se definió anteriormente y una solución acuosa de NGF, preferentemente sin incluir aditivos estabilizantes, envasados en el mismo, para una única administración.

[0104] En una realización, el envase farmacéutico de la invención es un envase multidosis, comprendiendo un recipiente estéril multidosis como se definió anteriormente y una solución acuosa de NGF, preferentemente sin incluir estabilizadores, para administración múltiple, preferentemente usando sistemas de suministro.

[0105] Las formulaciones acuosas de NGF son útiles para tratar a individuos con afecciones que responden a la terapia con NGF.

[0106] Típicamente, dichas formulaciones son estériles y son adecuadas para administración oftálmica, intravenosa, intramuscular, parenteral o intracerebroventricular, preferentemente para administración oftálmica.

[0107] Dicha terapia puede resultar útil para tratar enfermedades corneales tales como queratitis neurotrófica o disfunciones neuronales que implican lesión neuronal o degeneración de neuronas sensibles a NGF, tal como en la enfermedad de Alzheimer.

[0108] La formulación acuosa de NGF como tratamiento para la queratitis neurotrófica se administra típicamente por vía ocular.

[0109] La formulación acuosa de NGF como tratamiento para la demencia se puede administrar por cualquiera de una variedad de vías dependiendo del uso final específico.

[0110] Para superar las posibles dificultades a la hora de atravesar la barrera hematoencefálica, el NGF puede administrarse en el SNC por inyecciones intraventriculares directas o a través de implantes o bombas impregnados con fármaco. Otra vía de administración es por infusión continua a través de un dispositivo de cánula intracerebroventricular. Ventajosamente, al menos la superficie de los recipientes de plástico (es decir, jeringas, tubos, cámaras internas, etc.) que entra en contacto con la formulación acuosa de NGF durante esas administraciones, está sustancialmente constituida por un copolímero de propileno-etileno como se definió anteriormente.

[0111] La dosis y el régimen exactos para la administración dependerán de muchos factores, tales como la vía de administración y el grado de aflicción del individuo que recibe el tratamiento. La presente invención se ilustra mejor en la siguiente sección experimental.

[0112] PARTE EXPERIMENTAL

[0113] En esta sección experimental, se evaluó la interacción entre la proteína (factor de crecimiento nervioso humano recombinante (recombinant human Nerve Growth Factor, rhNGF)) y el material plástico (polipropileno (Polypropylene, PP)) tanto en términos cualitativos como cuantitativos. Se usaron diferentes técnicas analíticas para determinar directa e indirectamente la adsorción de rhNGF en el material de envase de PP.

[0114] Sorprendentemente, se ha descubierto que diferentes grados de cristalinidad del material de PP dan como resultado diferentes niveles de adsorción de NGF y que las técnicas analíticas analizadas proporcionaron resultados congruentes, sólidos e interrelacionados.

[0115] En estas pruebas, se usaron los materiales de PP de calidad farmacéutica enumerados en la Tabla 1, ya aprobados para la fabricación de envases primarios de fármacos:

[0116] Tabla 1: los PP

[0118]

[0120] Las pruebas de moldeo por inyección mostraron que todos los materiales de PP eran fácilmente mecanizables y cumplían con las especificaciones requeridas para el proceso de extrusión y moldeo en términos de conformabilidad y mecánica.

[0121] Las muestras para llevar a cabo las pruebas se fabricaron para cada material por moldeo por inyección. Las muestras eran pastillas de 15 cm de largo, 2 cm de ancho y 1 cm de alto.

[0122] Ejemplo 1

[0123] Medición de la entalpía de fusión (ΔHm) y la temperatura de fusión (Tm) de PP por análisis calorimétrico de barrido diferencial (Differential Scanning Calorimetry, DSC)

[0124] Con el objetivo de evaluar las propiedades térmicas de diferentes PP, el análisis calorimétrico de barrido diferencial se llevó a cabo con un instrumento DSC TA 2010, que funciona por doble barrido térmico (primer calentamiento de 0 °C a 200 °C a una velocidad de 20 °C/min, enfriamiento intermedio de 200 °C a 0 °C a una velocidad de 20 °C/min y segundo calentamiento de 0 °C a 200 °C a una velocidad de 20 °C/min). Se analizaron dos muestras para cada material.

[0125] Los resultados promedio del análisis de DSC se indican en la siguiente Tabla 2:

[0126] Tabla 2: ro iedades térmicas de los PP

[0128]

[0130] La entalpía de fusión ΔHm (J/g) y la temperatura de fusión (pico de Tm en °C) relevantes fueron las medidas en el segundo calentamiento.

[0131] Como el grado de cristalinidad de los materiales plásticos es proporcional a la respectiva entalpía de fusión ΔHm (J/g), los PP analizados podrían ordenarse por cristalinidad como se muestra a continuación (de izquierda a derecha, de mayor a menor cristalinidad):

[0133] PP2 > PP5 > PP1 >PP3 >PP4

[0134] Ejemplo 2

[0135] Medición del ángulo de contacto

[0136] Para esta prueba se usaron cinco formulaciones con base acuosa de rhNGF (F1-F5). Las formulaciones de F1-F5 se muestran en la Tabla 3 a continuación:

[0137] Tabla 3: formulaciones

[0139]

[0141] c.s. Cantidad suficiente; el tensioactivo fue un poloxámero adecuado para uso oftálmico. Las formulaciones F1-F5 se prepararon como se describe más adelante en esta invención:

[0142] se introdujeron 70 ml de agua para inyección (Water For Injection, W.F.I.) en un vaso de precipitados de 150 ml, a continuación se añadieron todos los ingredientes excepto el rhNGF y se mantuvieron bajo agitación magnética hasta su completa disolución. Se añadió la cantidad exacta de rhNGF y la solución se llevó hasta el volumen (100 ml) con W.F.I. con agitación. Se midió el pH de la solución y, en su caso, se corrigió con hidróxido de sodio o ácido clorhídrico. La formulación F1 fue la que se esperaba que mostrara la mayor deposición de rhNGF, ya que no contenía tensioactivos ni otros aditivos estabilizantes.

[0143] Las mediciones del ángulo de contacto se realizaron con un instrumento con sistema de ángulo de contacto OCA 200 de Dataphysics, con un software de control electrónico con alineación automática. Se han realizado diez mediciones del ángulo de contacto para cada material y, a continuación, se ha calculado el valor medio y la desviación típica. Para minimizar el error inducido por las diferentes asperezas de las superficies de la muestra generadas por el proceso de moldeo por inyección, se realizaron cinco mediciones en la cara frontal y cinco mediciones en la cara posterior de cada muestra.

[0144] Para cada formulación F1-F5, se depositaron un total de 10 gotas de lixiviación de 3 μl en cada muestra de PP (5 gotas para cada superficie de la muestra). Las gotas depositadas no eran estables a lo largo del tiempo, ya que tendían a extenderse sobre la superficie del soporte. Por ende, la imagen de la gota para la adquisición de los ángulos de contacto se tomó dentro de los 10 segundos posteriores a la deposición de la gota.

[0145] Los ángulos de contacto promedio y los valores de desviación típica se registraron para cada formulación F1-F5 para los materiales PP1-PP5 y se indicaron en la Tabla 4 a continuación:

[0146] Tabla 4: án ulos de contacto °

[0149]

[0151] Según los valores de los ángulos de contacto, los materiales de PP analizados se caracterizaron por el siguiente orden de humectabilidad (de izquierda a derecha, del más humectable al menos humectable):

[0153] PP2 > PP5 > PP1 > PP4 > PP3

[0154] La tendencia del ángulo de contacto promedio, como función de la formulación F1-F5 y el material de la muestra, se indicó en la Figura 1.

[0155] Con referencia a la Tabla 4 y la Figura 1, se observó un comportamiento similar para algunos de los materiales de PP. En particular, PP3 y PP4 fueron los que tuvieron la humectabilidad más baja (ángulo de contacto más alto), especialmente con la formulación F1 (rhNGF en la formulación tampón pH 7,2, la formulación más discriminatoria al carecer de tensioactivos y otros aditivos). A partir del análisis de DSC, PP3 y PP4 fueron los que tuvieron la cristalinidad más baja (es decir, la ΔHm más baja, véase la Tabla 2). Por otro lado, los materiales PP5 y PP2 tenían una mayor humectabilidad, a saber, una superficie más hidrófila y una mayor cristalinidad que el anterior.

[0156] En conclusión, esta prueba mostró que existía una correlación entre, por un lado, la cristalinidad y la ΔHm de los PP y, por otro lado, su humectabilidad y ángulo de contacto. Un mayor ángulo de contacto fue indicativo de una menor humectabilidad de la superficie de plástico, que, a su vez, fue predictivo de una menor adsorción de NGF, como lo confirman las siguientes pruebas de adsorción.

[0157] Ejemplo 3

[0158] Medición de la adsorción de rhNGF en muestras de PP

[0159] La técnica adoptada para esta prueba usó una microbalanza de cristal de cuarzo (Quartz Crystal Microbalance, QCM) y proporcionó un análisis directo y cuantitativo del grado de adsorción de rhNGF en el material.

[0160] El material plástico de PP a analizar (PP1 a PP5) se disolvió primero en decalina (2 % p/v) con agitación a una temperatura de 150 °C durante 1 hora y, a continuación, se depositó por electrohilado como una película delgada en un electrodo de cristal de cuarzo (recubrimiento por centrifugación a 3500 rpm). El equipo para transferir el polímero disuelto al recubridor por centrifugado se precalentó a 120 °C-150 °C. El espesor de las películas de PP se indica en la siguiente Tabla 5:

[0161] Tabla 5: es esor de las elículas de PP

[0164]

[0166] Los electrodos recubiertos se incubaron durante la noche en PBS antes de los experimentos de adsorción de proteínas. Para la incubación se usó la siguiente formulación F6, preparada como las formulaciones F1-F5:

[0167] Tabla 6: formulación de rhNGF

[0169]

[0171] La formulación se bombeó con una bomba peristáltica multicanal de alta precisión a través de un tubo de teflón de 0,75 mm de diámetro interno y se aplicó sobre el electrodo recubierto, con un flujo de 50 microlitros/s.

[0172] Se aplicó una diferencia de tensión ΔV a los dos lados del electrodo, que comenzó a vibrar a una cierta frecuencia. La frecuencia de oscilación del electrodo disminuyó, a medida que aumentó la película de rhNGF depositada sobre el mismo, hasta una meseta de adsorción después de aproximadamente 60 minutos, como se muestra en la gráfica de la Figura 2 relacionada con el material de PP2.

[0173] Las Tablas 7 y 8 a continuación muestran la adsorción de rhNGF, antes y después de lavar el electrodo con solución salina tamponada con fosfato (Phosphate Buffered Saline, PBS), medida como masa (ng/cm<2>) una vez que alcanzó la meseta de adsorción después de aproximadamente 60 min.

[0174] Tabla 7

[0177]

[0179] El electrodo se lavó con PBS para verificar la estabilidad de la adsorción de rhNGF en la superficie de los diferentes PP.

[0180] Tabla 8

[0183]

[0184] (continuación)

[0187]

[0189] A partir de los análisis anteriores, se observó que los materiales de PP más cristalinos e hidrófilos (PP5 y PP2) tenían una mayor masa de rhNGF adsorbido en la superficie, en comparación con los materiales de PP más hidrófobos con menor cristalinidad (PP3, PP4 y PP1).

[0190] Los resultados posteriores al lavado indican que el rhNGF adsorbido es bastante estable en la superficie de plástico y que, en todas las superficies, el porcentaje de rhNGF desorbido después del lavado fue bastante bajo.

[0191] En conclusión, los resultados de la prueba de adsorción se correlacionaron adecuadamente con los datos de ángulo de contacto y cristalinidad, mostrando una menor adsorción de NGF en materiales menos cristalinos y más hidrófobos. Ejemplo 4

[0192] Medición de la aspereza superficial por microscopía de fuerza atómica (Atomic Force Microscopy, AFM)

[0193] La microscopía de fuerza atómica es una técnica que permite medir, a través de la desviación de una pequeña palanca llamada “voladizo”, las fuerzas mínimas presentes en una superficie y proporcionar una vista tridimensional de la misma superficie con una resolución entre 1 y 10 nm.

[0194] El detector de AFM mide la desviación del voladizo y la convierte en una señal eléctrica. La intensidad de esta señal es proporcional al desplazamiento del voladizo.

[0195] Parte 1

[0196] Se depositó una gota de la formulación F6 que contenía la proteína (factor de crecimiento nervioso humano recombinante (recombinant human Nerve Growth Factor, rhNGF)) sobre la superficie de las muestras de pastillas de PP1-PP5 (una muestra para cada PP) y se incubó durante 1 semana a 4 °C.

[0197] Después de la incubación, las muestras se enjuagaron y se sumergieron en un primer vaso de precipitados que contenía 200 ml de agua Milli-Q durante 5 min y, a continuación, se transfirieron a un segundo vaso de precipitados que también contenía 200 ml de agua Milli-Q, durante otros 5 min. A continuación, la superficie se deshidrató bajo una corriente débil de nitrógeno. Este procedimiento fue necesario para eliminar el NGF, no adsorbido pero presente en la solución atrapada en la superficie de PP, y las sales que inducirían artefactos una vez secos en la muestra.

[0198] La aspereza superficial se midió, antes y después de la incubación con la formulación de rhNGF, según la norma ISO 4287 (1997). Las muestras se analizaron adquiriendo las imágenes de barrido de la superficie con un microscopio de fuerza atómica (Bruker), funcionando en modo dinámico. Se usaron palancas TESPA (Bruker, EE. UU.) con constante elástica de 40 N/m y frecuencia de resonancia de 300 kHz. El radio de curvatura de la punta era de aproximadamente 10 nm.

[0199] Las imágenes se adquirieron a diferentes escalas, de 50 a 2 µm.

[0200] Los resultados, expresados como Sa, media aritmética del absoluto de los valores de ordenadas dentro de un área de definición (A), se muestran en la siguiente Tabla 9:

[0201] Tabla 9

[0204]

[0206] Sa es la extensión de Ra (altura media aritmética de una línea) a una superficie. Expresa, como valor absoluto, la diferencia de altura de cada punto respecto a la media aritmética de la superficie.

[0207] A partir de los valores de Sa de la Tabla 9, se observó que solamente para dos de los materiales, PP5 y PP2, la aspereza aumentó considerablemente después de la incubación con el NGF (véase Delta Sa, diferencia antes y después de 1 semana de incubación con NGF).

[0208] Estos datos de aspereza se correlacionaron adecuadamente con los datos de adsorción medidos por la microbalanza de cristal de cuarzo de las Tablas 7 y 8 y con los ángulos de contacto de la Tabla 4, siendo PP2 y PP5 los materiales más hidrófilos, teniendo la superficie más áspera y causando la mayor adsorción de NGF.

[0209] Los otros materiales PP1, PP3 y PP4 parecían adsorber mal el NGF y no se pudo apreciar un aumento en la aspereza de la superficie después de la incubación. En realidad, el material PP3 incluso parecía reducir su aspereza superficial después de la incubación con NGF.

[0210] Parte 2

[0211] En la segunda parte del experimento, se descartaron los materiales hidrófilos menos interesantes (PP5 y PP2) y se volvieron a examinar solamente los materiales hidrófobos más prometedores (PP3, PP1 y PP4).

[0212] También se realizó una variación en la metodología de preparación de la muestra. La formulación de rhNGF F6 se incubó esta vez durante 48 h en lugar de 1 semana. Los datos de aspereza se muestran en la Tabla 10 a continuación:

[0213] Tabla 10

[0216]

[0218] Los datos confirmaron que entre los polipropilenos PP1, PP3 y PP4 poco cristalinos, hidrófobos y más prometedores, PP3 y PP4 mostraron una aspereza constante o incluso menor después de la incubación con NGF.

[0219] Ejemplo 5

[0220] Medición de nitrógeno en la superficie de muestras de PP por espectroscopía fotoelectrónica de rayos X (X-ray Photoelectron Spectroscopy, XPS)

[0221] La espectroscopía fotoelectrónica de rayos X es una técnica de espectroscopía usada para sondear las superficies de los materiales. Permite evaluar los elementos químicos que componen la superficie de un material y, a veces, determinar su estado de unión.

[0222] Los electrones emitidos por el material que ha sido golpeado por un haz monocromático de rayos X son expulsados con una energía cinética proporcional a la energía de unión, indicativa del elemento químico.

[0223] En este caso, se analizaron los mejores materiales hidrófobos PP3 y PP4, previamente estudiados en términos de ángulo de contacto, AFM y QCM, comparándolos con PP5, el peor material en términos de adsorción de NGF. Parte 1

[0224] Se depositó una gota (aproximadamente 45 microlitros) de la formulación F6 en la superficie del material de PP y se dejó durante 5 segundos, a continuación la superficie se lavó con agua, se secó bajo flujo de nitrógeno y se analizó como se describe a continuación.

[0225] Todos los espectros de XPS se midieron en un espectrómetro S-Probe de Surface Science Instruments. Este instrumento tenía un rayo X monocromático A1 Ka y un cañón de electrones de baja energía para la neutralización de la carga de muestras no conductoras. Las muestras se montaron en cinta de doble cara y funcionaron como aislantes. El área de análisis de rayos X para estas adquisiciones tenía aproximadamente 800 μm de diámetro. La presión en la cámara analítica durante la adquisición espectral fue inferior a 666,6 Pa (5 x 10<-9>torr). La energía de paso se fijó en 150 eV. El ángulo de incidencia fue de 0° (ángulo de incidencia de 0° = profundidad de muestreo de 100 A).

[0226] Los gráficos de las Figuras 3 y 4 muestran la emisión de fotoelectrones y, en particular, destacan el pico de emisión de nitrógeno, indicativo de la presencia de rhNGF en la superficie. Cabe señalar que para los materiales plásticos más hidrófobos con baja cristalinidad (PP3 y PP4, Figuras 3A y 3B), la emisión máxima del átomo de nitrógeno tuvo una intensidad significativamente menor (intensidad 0,4-0,5 u.a.) en comparación con el pico asociado con el material más hidrófilo con alta cristalinidad (PP5) (intensidad 2 u.a.) de la Figura 4A.

[0227] Estos resultados, que demuestran una menor deposición de NGF para las muestras PP3 y PP4, se correlacionaron muy bien con los de las otras técnicas anteriores indicadas anteriormente.

[0228] Parte 2

[0229] Se quiere resaltar la alta propiedad de adsorción del material PP5 incubando el NGF durante un período de tiempo más largo (24 horas) y evaluando la intensidad de emisión de electrones asociada con el pico de nitrógeno.

[0230] Como se puede observar en los gráficos de la Figura 4, el rhNGF continuó adsorbiéndose en la superficie del plástico durante un período de 24 horas para proporcionar un pico con una intensidad de emisión de aproximadamente 4 u.a. (Figura 4B), que es dos veces más alto que las 2 u.a. iniciales medidas después de 5 segundos de incubación (Figura 4A).

[0231] Al final de esta primera fase experimental, se concluyó que:

[0232] 1) los polipropilenos de mayor cristalinidad, tales como los homopolímeros de propileno (PP2 y PP5), se asociaron con una mayor adsorción superficial de NGF.

[0233] 2) Los polipropilenos de menor cristalinidad, tales como los copolímeros de propileno-etileno PP1, PP3 y PP4, dieron como resultado una menor adsorción superficial de NGF.

[0234] 3) La adsorción fue bastante estable e irreversible: una vez que el NGF se adsorbió a la superficie plástica, fue muy difícil que se produjera la desorción.

[0235] En la Tabla 11 a continuación se presenta un resumen de los principales resultados recopilados en las pruebas anteriores:

[0236] Tabla 11: tabla resumen

[0238]

[0240] Claves: § medido por DSC en el segundo calentamiento, *diferencia antes y después de 1 semana de incubación de NGF, ++ interacción mínima de rhNGF-PP, --- interacción máxima de rhNGF-PP. A partir de los datos indicados en la Tabla 11, se concluyó que los materiales de PP más adecuados para la producción de recipientes para soluciones acuosas de NGF fueron PP1, PP3 y PP4, a saber, aquellos caracterizados por una o más de las siguientes propiedades:

[0241] - ΔHm inferior a 95 J/g, preferentemente inferior a 90 J/g, más preferentemente inferior a 80 J/g y, ΔHm superior a 35 J/g, preferentemente superior a 40 J/g,

[0242] - ángulo de contacto con el agua de la formulación F1 superior a 90°(± 2), preferentemente superior a 95°(± 2),-aspereza por AFM Delta Sa (nm), antes de la incubación con NGF, inferior a 10 nm, preferentemente inferior a 5 nm,-intensidad de emisión fotoelectrónica del nitrógeno entre 0,2 y 0,5 u.a., preferentemente a partir de 0,2 y 0,4 u.a. propiedades medidas según los procedimientos descritos anteriormente.

[0243] Ejemplo 6

[0244] Medición de la adsorción de rhNGF a partir de formulaciones acuosas envasadas en frascos de PP frente a viales de vidrio siliconado (3 meses de estudios de estabilidad)

[0245] Se realizó una prueba de estabilidad comparativa de 3 meses en la formulación de rhNGF F7, envasada en viales de vidrio siliconado doble 2R (2 ml, cerrados con una tapa de elastómero, que se fabricó por Soffieria Bertolini SpA) (V) o en frascos de PP (10 ml, cerrados con el sistema de Novelia® fabricado por Nemera) (B).

[0246] La composición de la formulación F7, preparada como las formulaciones F1-F5, se indica en la Tabla 12 a continuación:

[0247] Tabla 12: formulación F7

[0249]

[0251] Los frascos de PP (B) estaban hechos de PP3, uno de los mejores PP según las pruebas anteriores.

[0252] En esta prueba de estabilidad, los viales de vidrio cerrados (V) y los frascos de PP (B), que contenían la formulación F7, se mantuvieron a temperaturas de 2-8 °C, 25 °C o 37 °C y se analizaron para determinar la adsorción de NGF en los puntos de tiempo de 1 semana (1S), después de 2 semanas (2S), 1 mes (1M), 2 meses (2M) y 3 meses (3M) frente a una formulación de control (Ctrl), a saber, la formulación F7, pero recién preparada y analizada inmediatamente. En cada punto de tiempo, el contenido de NGF de al menos dos viales y dos frascos se analizó para algunas o todas las temperaturas. Los frascos de PP de Novelia® se prensaron manualmente y se recogieron gotas para su análisis. Las muestras de formulación se dejaron equilibrar al menos 30 min a temperatura ambiente antes de la medición. El contenido de NGF en las soluciones se midió mediante análisis espectrofluorométrico en un espectrofluorómetro Fluoromax (FluoroMax - 4) (emisión de autofluorescencia).

[0253] Para determinar la concentración de proteínas en las diferentes muestras de NGF, se prepararon curvas de calibración por medidas de absorción UV-Vis y de emisión de fluorescencia intrínseca. Se diluyó rhNGF en la solución que contenía tampón fosfato (50 mM), metionina 0,020 mg/ml, NaCl 100 mM, agua c.s. con un pH de 6,2, en un intervalo de concentración de 5-40 µg/ml; se realizaron tres diluciones para cada concentración.

[0254] El contenido de NGF de las muestras (formulación F7 frente a CTRL) evaluado por análisis espectroscópico se muestra en la Figura 5 y por análisis espectrofluorométrico en la Figura 6.

[0255] Los valores de absorbancia UV-Vis a 280 nm se corrigieron para el fondo de dispersión de luz (Light-Scatter, LS). Las barras con la misma marca de agua se refieren a duplicados para el mismo punto de tiempo.

[0256] A partir de estos datos, se observó que:

[0257] -para la formulación F7, que solamente contenía tampón fosfato y no un tensioactivo que evita la adsorción, fue evidente que el NGF se adsorbió más en el recipiente de vidrio siliconado que en el recipiente de plástico. Esta diferencia fue particularmente evidente a partir de los gráficos de emisión de autofluorescencia de triptófano: para F7, la adsorción en el recipiente de vidrio siliconado fue inicialmente muy rápida en comparación con el CTRL y a continuación se estabilizó durante los siguientes 3 meses (Figura 6);

[0258] -tanto para los recipientes de vidrio siliconado como en los de PP, el contenido de NGF se mantuvo constante durante un período de tres meses en todas las condiciones de estabilidad. Tanto la autofluorescencia del triptófano como las mediciones de absorbancia indicaron que no hubo una caída en el título de NGF en la solución durante la prueba, a saber, que el NGF fue estable en las condiciones de prueba; en particular, al analizar la longitud de onda de emisión de fluorescencia del triptófano, incluso en el recipiente donde el NGF se adsorbe más (V, vial de vidrio siliconado doble) y con la formulación más discriminante (formulación F7 sin tensioactivo), no se observó ningún proceso de desplegamiento o plegamiento erróneo del NGF, lo que es indicativo de la preservación de la actividad biológica de la proteína.

[0259] En conclusión, los análisis indicados anteriormente pudieron discriminar los materiales de PP en términos de adsorción de proteínas. Inesperadamente, se demostró con las técnicas anteriores que los materiales plásticos de PP que adsorben menos proteína en su superficie eran materiales hidrófobos, con un bajo grado de copolimerización con polietileno y baja cristalinidad. El material plástico de elección PP3 adsorbió menos proteína en la interfaz sólidolíquido que el vidrio siliconado.

Claims (16)

1. REIVINDICACIONES

1. Un envase farmacéutico comprendiendo un recipiente de plástico como envase primario y una formulación acuosa de factor de crecimiento nervioso (Nerve Growth Factor, NGF) envasada en el mismo, en el que el recipiente de plástico tiene una superficie interna en contacto con la formulación acuosa de NGF y una superficie externa, donde al menos dicha superficie de contacto interna está constituida por más del 80 % en peso de al menos un copolímero de propileno-etileno que tiene una entalpía de fusión ΔHm inferior a 95 J/g y superior a 35 J/g, medida por DSC según el procedimiento indicado en la descripción.

2. El envase según la reivindicación 1, donde el copolímero de propileno-etileno tiene una entalpía de fusión ΔHm inferior a 90 J/g, preferentemente inferior a 80 J/g, medida por DSC según el procedimiento indicado en la descripción.

3. El envase según la reivindicación 2, donde el copolímero de propileno-etileno tiene una entalpía de fusión ΔHm superior a 40 J/g, medida por DSC según el procedimiento indicado en la descripción.

4. El envase según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el copolímero de propileno-etileno tiene una temperatura de fusión Tm inferior a 160 °C, preferentemente inferior a 155 °C, medida según el procedimiento de DSC indicado en la descripción.

5. El envase según la reivindicación 4, donde el copolímero de propileno-etileno tiene una temperatura de fusión Tm superior a 130 °C, más preferentemente superior a 140 °C, medida según el procedimiento de DSC indicado en la descripción.

6. El envase según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el copolímero de propileno-etileno es un copolímero de propileno-etileno aleatorio.

7. El envase según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el contenido de monómero de etileno en el copolímero de propileno-etileno es inferior al 40 %, preferentemente inferior al 30 % y al menos del 5 %.

8. El envase según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el recipiente consiste en el copolímero de propileno-etileno como se define en cualquiera de las reivindicaciones anteriores.

9. El envase según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el recipiente es una ampolla, un vial, un frasco, un bote, una bolsa o una bolsita, preferentemente es un vial o un frasco.

10. El envase según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la formulación acuosa de NGF es una solución acuosa de NGF, una emulsión, una suspensión o una loción, preferentemente es una solución acuosa de NGF, más preferentemente una solución acuosa de NGF para uso oftálmico.

11. El envase según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde, en la formulación acuosa de NGF, el NGF está presente en una cantidad de aproximadamente 0,0001 % a aproximadamente 0,5 % p/v, preferentemente de aproximadamente 0,001 % a aproximadamente 0,10 % p/v, lo más preferentemente de aproximadamente 0,002 % p/v de la formulación acuosa.

12. El envase según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde, en la formulación acuosa de NGF, el NGF es NGF humano recombinante (recombinant human Nerve Growth Factor, rhNGF).

13. El envase según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la formulación acuosa de NGF se tampona con un tampón biológicamente aceptable a un pH entre 6,8 y 7,5, preferentemente a un pH de aproximadamente 7,2.

14. El envase según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la formulación acuosa de NGF, además de rhNGF, comprende trehalosa, manitol, Methocel, PEG 6000, L-metionina, tampón fosfato, agua y tiene un pH de aproximadamente 7,2.

15. El envase según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que es un envase monodosis o multidosis.

16. Uso de un recipiente de plástico para envasar una formulación acuosa de factor de crecimiento nervioso (Nerve Growth Factor, NGF), donde el recipiente de plástico tiene una superficie interna y una superficie externa, donde al menos dicha superficie interna está constituida por más del 80 % en peso de al menos un copolímero de propileno-etileno que tiene una entalpía de fusión ΔHm inferior a 95 J/g y superior a 35 J/g, medida por DSC según el procedimiento indicado en la descripción.