ES3036962T3 - Hbv vaccine - Google Patents

Hbv vaccine

Info

Publication number
ES3036962T3
ES3036962T3 ES18719248T ES18719248T ES3036962T3 ES 3036962 T3 ES3036962 T3 ES 3036962T3 ES 18719248 T ES18719248 T ES 18719248T ES 18719248 T ES18719248 T ES 18719248T ES 3036962 T3 ES3036962 T3 ES 3036962T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
hbv
seq
sequence
variant
immunogen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES18719248T
Other languages
English (en)
Inventor
Eleanor Barnes
Senthil Chinnakannan
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Oxford University Innovation Ltd
Original Assignee
Oxford University Innovation Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Oxford University Innovation Ltd filed Critical Oxford University Innovation Ltd
Application granted granted Critical
Publication of ES3036962T3 publication Critical patent/ES3036962T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/29—Hepatitis virus
    • A61K39/292—Serum hepatitis virus, hepatitis B virus, e.g. Australia antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C12N9/1241—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • C12N9/1276—RNA-directed DNA polymerase (2.7.7.49), i.e. reverse transcriptase or telomerase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases [RNase]; Deoxyribonucleases [DNase]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/07—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • C12Y207/07049—RNA-directed DNA polymerase (2.7.7.49), i.e. telomerase or reverse-transcriptase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/26—Endoribonucleases producing 5'-phosphomonoesters (3.1.26)
    • C12Y301/26004—Ribonuclease H (3.1.26.4)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55516—Proteins; Peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/50—Fusion polypeptide containing protease site
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
    • C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
    • C12N2710/24134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
    • C12N2730/00011—Details
    • C12N2730/10011—Hepadnaviridae
    • C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
    • C12N2730/10122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
    • C12N2730/00011—Details
    • C12N2730/10011—Hepadnaviridae
    • C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
    • C12N2730/10134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/10—Plasmid DNA
    • C12N2800/106—Plasmid DNA for vertebrates
    • C12N2800/107—Plasmid DNA for vertebrates for mammalian

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

La invención se refiere a una vacuna de vector viral inmunógeno multi-VHB que comprende: un vector viral que comprende un casete de expresión de inmunógeno, en donde la expresión de una proteína codificada por el casete de expresión está dispuesta para ser impulsada por un promotor, en donde el casete de expresión de inmunógeno codifica: a) núcleo del VHB; b) una polimerasa del VHB modificada (Pmut), en donde la modificación es una mutación a la polimerasa del VHB de tipo salvaje para eliminar sustancialmente la función de la polimerasa; c) antígeno de superficie del VHB (HbsAg); y d) una secuencia intergénica que está dispuesta para causar la expresión de al menos el antígeno de superficie del VHB (HbsAg) como una proteína separada del núcleo del VHB y la polimerasa del VHB modificada (Pmut), en donde la secuencia intergénica está corriente abajo (3') de las secuencias que codifican el núcleo del VHB y la polimerasa del VHB modificada (Pmut) y corriente arriba (5') de la secuencia que codifica el antígeno de superficie del VHB (HbsAg); y composiciones relacionadas, métodos de vacunación y métodos de tratamiento o profilaxis de la infección por VHB. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Vacuna contra el VHB
La presente invención se refiere a un inmunógeno de VHB multiantígeno para vacunas víricas vectorizadas para la vacunación terapéutica de la hepatitis B crónica.
La hepatitis B es una infección viral que ataca al hígado y puede causar enfermedades tanto agudas como crónicas. El virus de la hepatitis B (VHB) se transmite a través del contacto con la sangre u otros fluidos corporales de una persona infectada. No existe un tratamiento específico para la hepatitis B aguda. Por lo tanto, la atención está dirigida a mantener la comodidad y el equilibrio nutricional adecuado, incluida la reposición de los líquidos perdidos por vómitos y diarrea. Sin embargo, el pilar de la lucha contra la hepatitis B aguda es impedirla mediante la vacunación. Una vez establecida, la infección crónica por hepatitis B se puede tratar con fármacos, incluidos los agentes antivirales orales. El tratamiento puede retrasar la progresión de la cirrosis, reducir la incidencia de cáncer de hígado y mejorar la supervivencia a largo plazo. Sin embargo, una vez que se establece la infección crónica, el control viral espontáneo es raro. Por lo tanto, un objetivo importante es desarrollar vacunas inmunoterapéuticas contra el VHB para inducir el control o la curación viral.
Actualmente, hay pocas vacunas inductoras de células T diferentes en los ensayos clínicos de Fase I y Fase II, todas las cuales se basan en uno o dos antígenos de VHB de longitud completa o múltiples antígenos de VHB quiméricos truncados o de longitud completa o péptidos sintéticos basados en el proteoma de VHB. GS-4774, de GlobeImmune, se encuentra actualmente en un ensayo clínico de Fase II (GS-4774 tiene células de levadura inactivadas por calor que expresan una quimera de HBx HBsAg y HBcAg. TG1050, de Transgene, se encuentra actualmente en ensayo clínico de Fase I (TG1050 es una vacuna basada en adenovirus humano serotipo 5 que codifica una quimera de versión truncada de tres antígenos de VHB, núcleo-polimerasa-envoltura). HepTcellTM, de Altimmune, se encuentra actualmente en ensayo clínico de Fase I (HepTcell es un producto peptídico completamente sintético, basado en 9 péptidos 32-40 mer sintéticos derivados de regiones conservadas de la proteína de VHB). INO-1800, de Inovio, se encuentra actualmente en un ensayo clínico de Fase I (INO-1800 es una inmunoterapia de ADN SynCon® multiantígeno dirigida a los antígenos de superficie de los clados A y C del virus de la hepatitis B y los antígenos centrales de VHB). Las vacunas profilácticas contra el VHB actualmente disponibles (generalmente basadas en vacunas de proteínas de VHB) no tienen efecto terapéutico en individuos con VHB infectados crónicamente y, por lo tanto, no pueden controlar la infección crónica por VHB.
Por lo tanto, un objetivo de la presente invención es proporcionar una vacuna mejorada para la infección por VHB. Según un primer aspecto de la invención, se proporciona una vacuna de vector viral de inmunógeno multi-VHB según la reivindicación 1 en esta invención.
Se describe una vacuna de vector viral de inmunógeno multi-VHB comprendiendo:
un vector viral comprendiendo un casete de expresión de inmunógeno, donde la expresión de una proteína codificada por el casete de expresión está dispuesta para ser dirigida por un promotor, donde el casete de expresión de inmunógeno codifica:
a) núcleo de VHB;
b) una polimerasa de VHB modificada (Pmut), donde la modificación es una mutación a la polimerasa de VHB de tipo salvaje para eliminar sustancialmente la función de la polimerasa;
c) antígeno de superficie de VHB (HbsAg); y
d) una secuencia intergénica que está dispuesta para causar la expresión de al menos el antígeno de superficie de VHB (HbsAg) como una proteína separada del núcleo de VHB y la polimerasa de VHB modificada (Pmut), donde la secuencia intergénica está cadena abajo (3') de las secuencias que codifican el núcleo de VHB y la polimerasa de VHB modificada (Pmut) y cadena arriba (5') de la secuencia que codifica el antígeno de superficie de VHB (HbsAg).
La secuencia intergénica puede comprender un dominio de escisión, un IRES(Interna! Ribosomal Entry Site),una señal de empalme o un promotor secundario. En una realización, la secuencia intergénica comprende un dominio de escisión comprendiendo una secuencia dispuesta para causar omisión de ribosoma. En otra realización, la secuencia intergénica comprende un promotor secundario para promover la expresión de al menos el antígeno de superficie (HbsAg).
Se cree que la inducción de una fuerte respuesta de células T específicas de múltiples antígenos contra diferentes proteínas de VHB desempeña un papel importante en la eliminación viral de una infección crónica por VHB en resolución. Para la inducción de una respuesta de células T de múltiples antígenos, puede ser importante tener un número máximo de epítopos de células T, lo que requiere codificar proteínas de VHB de longitud completa dentro de una vacuna de VHB que induce células T Algunas de las vacunas contra el VHB actuales en desarrollo no codifican antígenos de VHB de longitud completa. La vacuna descrita puede codificar 3 proteínas de longitud completa de VHB (a saber, el núcleo, opcionalmente con la región prenúcleo, la polimerasa y las proteínas de superficie). Además, el diseño de la vacuna utiliza una expresión de al menos dos proteínas, por ejemplo, utilizando una estrategia de escisión del péptido F2A para codificar una proteína de superficie separada, que además de la inducción de la respuesta de células T también podría inducir una respuesta de anticuerpos que posiblemente podría tener un papel en la potenciación del efecto terapéutico de la vacuna de células T, con posible ayuda en la eliminación del virus dentro de un individuo infectado crónicamente. La inducción de anticuerpos basados en un sistema de mamífero (en comparación con otros sistemas, por ejemplo, levadura) tiene la ventaja selectiva de proporcionar la glicosilación de tipo mamífero que podría inducir anticuerpos apropiados para el huésped natural.
La descripción en esta invención proporciona ventajosamente una única vacuna que codifica antígenos de VHB múltiples de longitud completa que podrían inducir una amplia respuesta de células T y, además, también podrían inducir anticuerpos contra la proteína de superficie. El nuevo inmunógeno de VHB abarca al menos tres antígenos de VHB de longitud completa (a saber, el núcleo, la polimerasa y la superficie) y los codificó en un vector viral, como los vectores virales adeno y MVA de chimpancé. Además, la proteína polimerasa de VHB en el inmunógeno está provista de mutaciones que suprimen su función, lo que evita su participación en la replicación del genoma de VHB y mejora la seguridad de la vacuna.
Mediante el uso de una estrategia de escisión de péptidos, por ejemplo, mediante el uso de una secuencia de escisión de furina-2A, o un promotor secundario, el casete transgénico puede generar al menos dos proteínas, un núcleo fusionado y una proteína polimerasa y una proteína de superficie separada, ambas de las cuales generan una respuesta inmune de células T. La proteína de superficie codificada, además de la generación de respuesta inmunitaria de células T, también puede generar una respuesta de anticuerpos.
Casete de expresión de inmunógenos
El experto en la materia reconocerá que el dominio de escisión puede no conducir a la escisión en todas las ocasiones, por ejemplo, los eventos de omisión ribosómica basados en F2A pueden ocurrir en una pequeña proporción de expresiones, de modo que una pequeña proporción de proteínas producidas será una fusión de todas las proteínas/antígenos de v Hb que de otro modo estarían separadas por la escisión. Por lo tanto, en una realización, el casete de expresión de inmunógeno puede codificar además una proteína de fusión comprendiendo al menos el núcleo de VHB, polimerasa de VHB modificada (Pmut) y antígeno de superficie de VHB.
En una realización, el casete de expresión de inmunógeno codifica además prenúcleo (PreC) de VHB. En otra realización, el casete de expresión de inmunógeno codifica además PreS1 de VHB, y/o una forma truncada del mismo. En otra realización, el casete de expresión de inmunógeno codifica además PreS2 de VHB.
En una realización, el casete de expresión de inmunógeno codifica además prenúcleo (PreC) de VHB y PreS1 de VHB, o una forma truncada de PreS1 de VHB. En otra realización, el casete de expresión de inmunógeno codifica además prenúcleo (PreC) de VHB y PreS2 de VHB. En una realización, el casete de expresión de inmunógeno codifica además prenúcleo (PreC) de VHB y PreS1 de VHB, y una forma truncada de PreS1. En una realización, el casete de expresión de inmunógeno codifica además prenúcleo (PreC) de VHB, PreS1 de VHB y/o una forma truncada de las mismas, y PreS2 de VHB.
En una realización donde el prenúcleo y el núcleo de VHB están codificados, el casete de expresión de inmunógeno puede ser capaz de expresar el antígeno e de VHB. El experto en la materia reconocerá que el antígeno e de VHB comprende o consiste en los 10 aminoácidos del extremo C del prenúcleo y los 149 aminoácidos del extremo N del núcleo. Para la expresión del antígeno e de VHB, el prenúcleo y el núcleo se expresan juntos y esta proteína expresada completa se somete a escisión del extremo N y del extremo C.
En una realización, el núcleo de VHB y la polimerasa modificada (Pmut) están dispuestos para expresarse como una proteína de fusión. En una realización donde el casete de expresión de inmunógeno codifica el prenúcleo de VHB, el prenúcleo de VHB, el núcleo de VHB y la polimerasa modificada (Pmut) están dispuestos para expresarse como una proteína de fusión.
En una realización, el casete de expresión de inmunógeno codifica al menos dos proteínas, comprendiendo una primera proteína de fusión comprendiendo al menos el núcleo de VHB y la polimerasa de VHB modificada (Pmut), y una segunda proteína comprendiendo al menos el antígeno de superficie de VHB (HbsAg). En otra realización, el casete de expresión de inmunógeno codifica solo dos proteínas, comprendiendo una primera proteína de fusión comprendiendo al menos el núcleo de VHB y la polimerasa de VHB modificada (Pmut), y una segunda proteína comprendiendo al menos el antígeno de superficie de VHB (HbsAg).
En una realización, el casete de expresión de inmunógeno no codifica la proteína X de VHB.
En una realización, el casete de expresión de inmunógeno puede comprender una secuencia de ácido nucleico que codifica cualquiera de:
SIi-VHB-CPmutS;
SIi-VHB-SCPmut;
VHB-CPmutS
SIi-VHB-CPmutPreS-S(sh);
SIi-VHB-CPmutPreS-TPA-S(sh);
SIi-VHB-PreS-Pmut-C;
MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-S(sh); o
MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-TPA-S(sh), tal y como se describe en esta invención.
En una realización, el casete de expresión de inmunógeno comprende SEQ ID NO: 46 (SIi-VHB-CPmutS) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 46 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 46. La variante de SEQ ID NO: 46 puede codificar una proteína que retiene sustancialmente la inmunogenicidad de una proteína equivalente codificada por SEQ ID NO: 46.
En una realización, el casete de expresión de inmunógeno comprende SEQ ID NO: 47 (SIi-VHB-SCPmut) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 47 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 47. La variante de SEQ ID NO: 47 puede codificar una proteína que retiene sustancialmente la inmunogenicidad de una proteína equivalente codificada por SEQ ID NO: 47.
En otra realización, el casete de expresión de inmunógeno comprende SEQ ID NO: 48 (SIi-VHB-CPmutPreS-S(sh)) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 48 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 48. La variante de SEQ ID NO: 48 puede codificar una proteína que retiene sustancialmente la inmunogenicidad de una proteína equivalente codificada por SEQ ID NO: 48.
En otra realización, el casete de expresión de inmunógeno comprende SEQ ID NO: 49 (SIi-VHB-CPmutPreS-TPA-S(sh)) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 49 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 49. La variante de SEQ ID NO: 49 puede codificar una proteína que retiene sustancialmente la inmunogenicidad de una proteína equivalente codificada por SEQ ID NO: 49.
En una realización, el casete de expresión de inmunógeno comprende SEQ ID NO: 59 (SIi-VHB-PreS-Pmut-C) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 59 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 59. La variante de SEQ ID NO: 59 puede codificar una proteína que retiene sustancialmente la inmunogenicidad de una proteína equivalente codificada por SEQ ID NO: 59.
En una realización, el casete de expresión de inmunógeno comprende SEQ ID NO: 24 (MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-S(sh)) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 24 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 24. La variante de SEQ ID NO: 24 puede codificar una proteína que retiene sustancialmente la inmunogenicidad de una proteína equivalente codificada por SEQ ID NO: 24.
En una realización, el casete de expresión de inmunógeno comprende SEQ ID NO: 27 (MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-TPA-S(sh)) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 27 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 27. La variante de SEQ ID NO: 27 puede codificar una proteína que retiene sustancialmente la inmunogenicidad de una proteína equivalente codificada por SEQ ID NO: 27. En una realización, el casete de expresión de inmunógeno comprende SEQ ID NO: 58 (MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-TPA-S(sh)) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 58 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 58. La variante de SEQ ID NO: 58 puede codificar una proteína que retiene sustancialmente la inmunogenicidad de una proteína equivalente codificada por SEQ ID NO: 58.
Vector viral
El vector viral puede comprender un virus. La secuencia de casete de expresión de inmunógeno de la descripción puede clonarse en cualquier vector viral adecuado que se sabe que provoca una buena respuesta inmunitaria. Los vectores virales adecuados se han descrito en el documento de Dicks y col. (Vaccine. 25 de feb de 2015;33(9):1121-8. doi: 10.1016/j.vaccine.2015.01.042. Epub 25 de ene de 2015), el documento de Antrobus y col. (Mol Ther. 22 de mar de 2014(3):668-74. doi: 10.1038/mt.2013.284. Epub 30 de dic de 2013), y el documento de Warimwe y col. (Virol J. 5 de dic de 2013;10:349. doi: 10.1186/1743-422X-10-349).
El vector viral puede ser un vector viral atenuado. El vector viral puede comprender un adenovirus, tal como un adenovirus humano o de simio. En una realización, el vector viral comprende un adenovirus, tal como un adenovirus de simio del grupo E, cuando se usa en una vacuna de primado de un régimen de refuerzo de primado. El vector viral puede comprender un adenovirus de simio del grupo E. El vector viral puede comprender ChAdOx1 (un adenovirus de simio del grupo E, como el vector AdCh63 utilizado de forma segura en ensayos de malaria) o ChAdOx2. El experto en la técnica estará familiarizado con los vectores virales basados en ChAdOx1, por ejemplo, a partir de la publicación de patente WO2012172277. El vector viral puede comprender AdCh63. El vector viral puede comprender AdC3 o AdH6. En una realización, el vector viral es un serotipo humano. En otra realización, el vector viral comprende Vaccinia Ankara Modificada(Modified Vaccinia Ankara,MVA). El vector viral puede comprender MVA cuando se usa como refuerzo de vacuna en un régimen de refuerzo de primado. En una realización, el vector viral comprende un adenovirus, tal como un adenovirus de simio del grupo E, cuando se usa en una vacuna de primado de un régimen de refuerzo de primado, y puede comprender MVA cuando se usa como un refuerzo de vacuna en un régimen de refuerzo de primado. El experto en la técnica estará familiarizado con los vectores virales basados en MVA, por ejemplo, a partir de la publicación de patente de EE. UU. US9273327.
El MVA permite ventajosamente la expresión de más de una proteína usando diferentes promotores virales de la viruela.
En una realización alternativa, el vector viral puede comprender virus adenoasociados(Adeno-Associated Virus,AAV) olentivirus.En otra realización, el vector viral puede comprender cualquiera de los virus Vaccinia, virus de la viruela aviar o virus de la viruela del canario (por ejemplo, miembros dePoxviridaey el géneroAvipoxvirus),o virus vaccinia atenuado de Nueva York (Tartaglia y col. Virology. Mayo de 1992;188(1):217-32). En otra realización, el vector viral puede comprender cualquiera de los vectores de virus del herpes simple, citomegalovirus humano, virus del sarampión(Measles Virus,MeV), virus Sendai(Sendai Virus,SeV),Flavivirus(por ejemplo, virus de la fiebre amarilla - 17D) oalfavirus,tales como el virus Sindibis(Sindibis Virus,SINV), el virus de la encefalitis equina venezolana o el virus del bosque Semliki.
En una realización, el vector viral puede comprender ácido nucleico comprendiendo la secuencia de SEQ ID NO: 39 y 40 (ChAdOx1) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 39 y 40 pueden comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 39 y 40. La variante de SEQ ID NO: 39 y 40 pueden codificar un vector viral que retiene sustancialmente la función del vector viral de la SEQ ID NO: 39 y 40 (ChAdOx1).
En una realización, el vector viral puede comprender ácido nucleico comprendiendo la secuencia de SEQ ID NO: 41 y 42 (ChAdOx2) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 41 y 42 pueden comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 41 y 42. La variante de SEQ ID NO: 41 y 42 pueden codificar un vector viral que retiene sustancialmente la función del vector viral de la SEQ ID NO: 41 y 42 (ChAdOx2).
En una realización, el vector viral puede comprender ácido nucleico comprendiendo la secuencia de SEQ ID NO: 44 y 45 (MVA) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 44 y 45 pueden comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 44 y 45. La variante de SEQ ID NO: 44 y 45 pueden codificar un vector viral que retiene sustancialmente la función del vector viral de la SEQ ID NO: 44 y 45 (MVA).
En una realización, el vector viral codifica uno cualquiera de:
SIi-VHB-CPmutS;
SIi-VHB-SCPmut;
SIi-VHB-CPmutPreS-S(sh);
SIi-VHB-CPmutPreS-TPA-S(sh);
MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-S(sh); o
MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-TPA-S(sh), tal y como se describe en esta invención.
En una realización, el vector viral codifica la SEQ ID NO: 3 (Sli-VHB-CPmutS) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 3 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 3. La variante de SEQ ID NO: 3 puede retener sustancialmente la inmunogenicidad de SEQ ID NO: 3.
En una realización, el vector viral codifica la SEQ ID NO: 11 (SIi-VHB-SCPmut) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 11 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 11. La variante de SEQ ID NO: 11 puede retener sustancialmente la inmunogenicidad de SEQ ID NO: 11.
En una realización, el vector viral codifica la SEQ ID NO: 13 (SIi-VHB-CPmutPreS-S(sh)) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 13 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 13. La variante de SEQ ID NO: 13 puede retener sustancialmente la inmunogenicidad de SEQ ID NO: 13.
En una realización, el vector viral codifica la SEQ ID NO: 25 (SIi-VHB-CPmutPreS-TPA-S(sh)) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 25 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 25. La variante de SEQ ID NO: 25 puede retener sustancialmente la inmunogenicidad de SEQ ID NO: 25.
En una realización, el vector viral codifica la SEQ ID NO: 23 (MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-S(sh)) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 23 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 23. La variante de SEQ ID NO: 23 puede retener sustancialmente la inmunogenicidad de SEQ ID NO: 23.
En una realización, el vector viral codifica la SEQ ID NO: 26 (MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-TPA-S(sh)) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 26 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 26. La variante de SEQ ID NO: 26 puede retener sustancialmente la inmunogenicidad de SEQ ID NO: 26.
En una realización, el vector viral comprende la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 46 (SIi-VHB-CPmutS) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 46 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 46. En una realización, el vector viral comprende la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 47 (SIi-VHB-SCPmut) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 47 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 47. En una realización, el vector viral comprende la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 48 (SIi-VHB-CPmutPreS-S(sh)) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 48 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 48.
En una realización, el vector viral comprende la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 49 (SIi-VHB-CPmutPreS-TPA-S(sh)) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 49 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 49.
En una realización, el vector viral comprende la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 24 (MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-S(sh)) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 24 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 24.
En una realización, el vector viral comprende la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 27 (MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-TPA-S(sh)) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 27 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 27. En una realización, el vector viral comprende la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 58 (MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-TPA-S(sh)) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 58 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 58.
Promotor
En una realización, el promotor está codificado en el casete de expresión de inmunógeno, por ejemplo, el promotor puede estar codificado en, o adyacente a, el extremo 5' del casete de expresión de inmunógeno. Alternativamente, el promotor puede codificarse como parte del ácido nucleico del vector viral fuera del casete de expresión de inmunógeno. Por ejemplo, el promotor puede codificarse cadena arriba (5') del casete de expresión de inmunógeno. El promotor puede promover la expresión de toda la proteína codificada del casete de expresión de inmunógeno. En una realización alternativa donde el casete de expresión de inmunógeno comprende un promotor secundario, el promotor puede ser un promotor primario que está dispuesto para promover la expresión de al menos el núcleo de VHB y la polimerasa modificada (Pmut), y opcionalmente no el antígeno de superficie de VHB (HbsAg) que puede estar dispuesto para ser promovido por separado por el promotor secundario.
El experto en la técnica reconocerá que se puede usar cualquier promotor adecuado como promotor primario y/o secundario según sea apropiado para el huésped para la expresión. En una realización, el promotor comprende un promotor de CMV. El promotor de CMV puede comprender el promotor de CMV largo o corto. En una realización donde el vector viral comprende un vector adenoviral, tal como ChAdOx1 o 2, el promotor puede comprender un promotor de CMV, un promotor de SV40 o un promotor de EFla. En una realización donde el vector viral comprende un vector adenoviral, tal como ChAdOx1 o 2, el promotor puede comprender un promotor de CMV.
El o los elementos promotores usados en el vector, por ejemplo, vector adenoviral, (tal como ChAdOx1 o 2) pueden comprender una secuencia de operador de tetraciclina(Tetracycline Operator, tetO).Una secuencia de operador de tetraciclina(Tetracycline Operator, tetO)es útil para la generación de vectores virales que pueden expresar proteínas extrañas que son tóxicas para las células dentro de las cuales se generan.
En otra realización, el promotor comprende un promotor del virus de la viruela. En una realización donde el vector viral comprende MVA, el promotor puede comprender un promotor del virus de la viruela, tal como F11. En una realización, el promotor comprende el promotor temprano de F11. Alternativamente, el promotor del virus de la viruela puede comprender un promotor temprano, por ejemplo seleccionado de entre cualquiera de B8R, K6L, A44L, C11R y B2R, un promotor con actividad temprana y tardía, por ejemplo seleccionado de entre mH5, p7.5 y SSP, o un promotor tardío, por ejemplo FP4b.
La expresión transgénica basada en el promotor temprano puede ser útil para un inmunógeno destinado principalmente a la respuesta de células T (hay una mayor magnitud de inducción de células T tras el uso de estos promotores tempranos). Sin embargo, se pueden utilizar promotores con actividad temprana y tardía para un inmunógeno destinado a inducir una respuesta de anticuerpos. Sin embargo, estos promotores de actividad temprana y tardía también se pueden utilizar para un inmunógeno destinado a la inducción de células T
En una realización, el promotor comprende o consiste en la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 50 o 52 (promotor largo o corto de CMV) o variantes de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 50 o 52 pueden comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 50 o 52 respectivamente. La variante puede retener sustancialmente la función promotora de SEQ ID NO: 50 o 52).
En una realización, el promotor comprende o consiste en una secuencia ubicada en la secuencia del flanco izquierdo de F11 (SEQ ID NO: 35) o una variante del mismo. Una variante puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la secuencia promotora ubicada en la secuencia del flanco izquierdo de F11 (SEQ ID NO: 35). La variante puede retener sustancialmente la función promotora del promotor ubicado en la secuencia del flanco izquierdo de F11 (SEQ ID NO: 35).
Promotor secundario
En una realización, el casete de expresión de inmunógeno codifica un promotor secundario. En una realización donde se proporciona un promotor secundario además del promotor primero/primario, el promotor secundario puede estar codificado por/dentro del casete de expresión de inmunógeno. El promotor secundario puede codificarse en 3' del promotor primero/primario. El promotor secundario puede codificarse en 3' de la primera proteína/antígeno que se va a expresar, por ejemplo, cadena abajo del núcleo de VHB y la polimerasa modificada de VHB y cadena arriba del antígeno de superficie de VHB. El promotor secundario puede promover la expresión de al menos el antígeno de superficie de v Hb .
El promotor secundario puede comprender un promotor del virus de la viruela. El promotor secundario puede comprender promotores tempranos virales de la viruela, tales como cualquiera de B8R, K6L, A44L, C11R y B2R, o promotores virales de la viruela con actividad temprana y tardía, tales como mH5, p7.5 o SSP, o un promotor tardío tal como FP4b.
En una realización, el promotor secundario comprende el promotor temprano/tardío mH5. En una realización, el promotor secundario comprende o consiste en la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 28 (promotor mH5) o una variante del mismo. Una variante de SEQ ID NO: 28 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 28. La variante puede retener sustancialmente la función promotora secundaria de SEQ ID NO: 28).
En otra realización, el promotor secundario puede comprender un promotor SV40 o un promotor EF1a.
Dominio de escisión
En una realización, el casete de expresión de inmunógeno codifica un dominio de escisión. En una realización, el dominio de escisión es un dominio de escisión proteolítica postraduccional, que permite la escisión de una proteína traducida, por ejemplo, mediante una enzima de escisión proteolítica. La enzima de escisión puede ser proporcionada por el huésped, por ejemplo, el huésped que se está vacunando, tal como un ser humano. En otra realización, la enzima de escisión puede codificarse en el casete de expresión de inmunógeno o vector viral. En una realización, el dominio de escisión comprende una secuencia que no es de VHB, por ejemplo, una secuencia de mamífero. En una realización, el dominio de escisión comprende una secuencia derivada de ser humano.
En una realización, el dominio de escisión comprende un dominio de escisión de omisión de ribosoma. En una realización, el dominio de escisión comprende un sitio de reconocimiento de furina comprendiendo o consiste en la secuencia RXRR, donde X podría ser cualquier aminoácido. En una realización, el dominio de escisión comprende un sitio de reconocimiento de furina y una secuencia peptídica 2A. La secuencia peptídica 2A puede comprender la secuencia peptídica 2A de FMDV (virus de la fiebre aftosa) (APVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP - SEQ ID NO: 43). Alternativamente, los péptidos 2A pueden ser seleccionados de entre P2A (teschovirus porcino-1 2A), T2A (virus Thoseaasigna 2A) y E2A (virus de la rinitis equina A [ERAV] 2A). Se puede proporcionar cualquier secuencia peptídica 2A del picornavirus y funcionar como un sitio de escisión peptídica. Por lo tanto, el dominio de escisión puede comprender una secuencia que codifica la secuencia peptídica 2A del picornavirus.
En una realización, el dominio de escisión comprende o consiste en una secuencia peptídica de furina-2A (F2A) o una variante funcional de la misma. El dominio de escisión puede comprender o consistir en la secuencia de SEQ ID NO: 9 o una variante del mismo. Una variante de SEQ ID NO: 9 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 9. La variante de SEQ ID NO: 9 puede retener sustancialmente la función de escisión de SEQ ID NO: 9.
F2A es ventajosamente corto (solo 28 aminoácidos), lo que ayuda a proporcionar insertos apropiados y expresar más de una proteína a partir de vectores que pueden tener un límite de tamaño, como los vectores basados en adenovirus, incluido ChAdOx1/2.
En una realización donde el vector viral es MVA, o de lo contrario se usa un vector viral como una vacuna de refuerzo después de una vacuna de primado, se puede proporcionar un dominio de escisión diferente para evitar cualquier posible potenciación de las respuestas de células T al dominio de escisión de la vacunación de primado. Alternativamente, se puede utilizar un promotor secundario en lugar de un dominio de escisión para evitar cualquier posible potenciación de las respuestas de las células T a un dominio de escisión de una vacunación de primado.
IRES (Sitio interno de entrada ribosomal)
En una realización, el casete de expresión de inmunógeno codifica un sitio interno de entrada de ribosomas(Interna! Ribosome Entry Site,IRES). El experto en la materia reconocerá que un IRES es una estructura de ARN que permite el inicio de la traducción independiente de Cap y puede iniciar la traducción en medio de un ARN mensajero.
Señal de empalme
En una realización, el casete de expresión de inmunógeno codifica una señal de corte y empalme de ARNm. El experto en la materia estará familiarizado con las señales de empalme comúnmente utilizadas que son apropiadas para este uso. Un ejemplo de una señal de corte y empalme de ARNm que se puede usar es un intrón quimérico compuesto por el sitio donante 5' del primer intrón del gen de p-globina humana y la rama y el sitio aceptor 3' del intrón de una región variable de cadena pesada del gen de inmunoglobulina en el vector de expresión en mamíferos pCI-neo (Promega).
Prenúcleo (PreC) de VHB
El PreC de VHB puede comprender o consistir en una secuencia de PreC de VHB de tipo salvaje de longitud completa, o una variante de la misma. La variante de PreC de VHB puede comprender o consistir en una secuencia de PreC de VHB truncada.
El PreC de VHB puede comprender o consistir en la secuencia de SEQ ID NO: 16 o una variante del mismo. Una variante de SEQ ID NO: 16 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 16. La variante de SEQ ID NO: 16 puede retener sustancialmente la inmunogenicidad de SEQ ID NO: 16. La variante de SEQ ID NO: 16 puede retener sustancialmente la estructura terciaria de SEQ ID NO: 16.
Núcleo de VHB
El núcleo de VHB puede comprender o consistir en una secuencia de núcleo de VHB de tipo salvaje de longitud completa, o una variante de la misma. La variante del núcleo de VHB puede comprender o consistir en una secuencia del núcleo de VHB truncada. El núcleo de VHB puede no comprender el prenúcleo de VHB.
El núcleo de VHB puede comprender o consistir en la secuencia de SEQ ID NO: 6 o una variante del mismo. Una variante de SEQ ID NO: 6 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 6. La variante de SEQ ID NO: 6 puede retener sustancialmente la inmunogenicidad de SEQ ID NO: 6. La variante de SEQ ID NO: 6 puede retener sustancialmente la estructura terciaria de SEQ ID NO: 6.
Antígeno-e de VHB (HBeAg)
El antígeno-e de VHB (HBeAg) puede comprender o consistir en una secuencia de antígeno e de VHB de tipo salvaje de longitud completa, o una variante de la misma. La variante de antígeno-e de VHB puede comprender o consistir en una secuencia de antígeno e de VHB truncada.
El antígeno-e de VHB (HBeAg) puede comprender o consistir en la secuencia:
SKLCLGWLWGMDIDPYKEFGASVELLSFLPSDFFPSIRDLLDTASALYREALESPE HCSPHHTALRQA1LCWGELMNLATWVGSNLEDPASRELVVSYVNVNMGLK1RQ LLWFHISCLTFGRETVLEYLVSFGVW1RTPPAYRPPNAPILSTLPETTVV (SEQ ID N 0 - 17>-El antígeno-e de VHB (HBeAg) puede comprender o consistir en la secuencia de SEQ ID NO: 17 o una variante del mismo. Una variante de SEQ ID NO: 17 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 17. La variante de SEQ ID NO: 17 puede retener sustancialmente la inmunogenicidad de SEQ ID NO: 17. La variante de SEQ ID NO: 17 puede retener sustancialmente la estructura terciaria de SEQ ID NO: 17.
Polimerasa de VHB modificada
La polimerasa de VHB modificada (Pmut) puede comprender o consistir en una polimerasa de VHB truncada. En particular, la mutación a polimerasa de VHB de tipo salvaje para eliminar sustancialmente la función de polimerasa puede comprender una secuencia que codifica una polimerasa de VHB truncada. Alternativa o adicionalmente, la mutación comprende una o más mutaciones puntuales en la secuencia de polimerasa de VHB codificada. La modificación puede comprender una o más sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos en la secuencia de polimerasa de VHB codificada. En una realización, la polimerasa de VHB modificada (Pmut) no es una forma truncada de polimerasa de VHB (es decir, es de longitud completa con respecto a la polimerasa de VHB de tipo salvaje). La polimerasa de VHB modificada (Pmut) puede comprender o consistir en la secuencia de SEQ ID NO: 8 o una variante del mismo. Una variante de SEQ ID NO: 8 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 8. La variante de SEQ ID NO: 8 puede retener sustancialmente la inmunogenicidad de SEQ ID NO: 8. La variante de SEQ ID NO: 8 puede retener sustancialmente la estructura terciaria de SEQ ID NO: 8.
La modificación puede ser una mutación que impide el cebado de proteínas. Adicional o alternativamente, se pueden proporcionar mutaciones en los dominios de transcriptasa inversa y/o ARNasa para impedir su función. Adicional o alternativamente, la mutación puede ser estructural de modo que interrumpa el plegamiento correcto de la proteína de la polimerasa. Las modificaciones pueden comprender uno o más, o todos de Y63, C323, C334, C338, C352, R714, D788, R792, o residuos equivalentes de los mismos, por referencia a la secuencia consenso de polimerasa de VHB de tipo salvaje en esta invención (es decir, SEQ ID NO: 19). En una realización, las modificaciones pueden comprender uno o más, o todos de Y63A, C323A, C334A, C338A, C352A, R714A, D788A, R792A, o residuos equivalentes de estos, por referencia a la secuencia consenso de polimerasa de VHB de tipo salvaje en esta invención (es decir, SEQ ID NO: 19). En otra realización, las modificaciones pueden comprender uno o más, o todos de R714, D788 y R792, o residuos equivalentes de los mismos, por referencia a la secuencia consenso de polimerasa de VHB de tipo salvaje en esta invención (es decir, SEQ ID NO: 19). En una realización, las modificaciones pueden comprender uno o más, o todos de R714A, D788A y R792A, o residuos equivalentes de estos, por referencia a la secuencia consenso de polimerasa de VHB de tipo salvaje en esta invención (es decir, SEQ ID NO: 19). Se entiende que la referencia a residuos equivalentes significa que la polimerasa de VHB puede basarse en una secuencia alternativa a la secuencia de polimerasa de VHB proporcionada en esta invención, y que la numeración o identidad de los residuos de aminoácidos puede diferir entre las secuencias. Dichas diferencias y equivalencias se pueden determinar fácilmente mediante una alineación de la secuencia de polimerasa de VHB con la secuencia consenso de polimerasa de VHB de tipo salvaje en esta invención (es decir, SEQ ID NO: 19).
Las mutaciones R714A, D788A, R792A detienen ventajosamente la función de la polimerasa. Sin embargo, se pueden añadir una o más, o todas, las mutaciones adicionales de Y63 y otras mutaciones de cisteína de C323, C334, C338 y C352 como una medida adicional en caso de una reversión dentro de esas mutaciones funcionales. Las mutaciones adicionales pueden comprender Y63A, C323A, C334A, C338A y/o C352A.
Las mutaciones proporcionan ventajosamente que la función de la polimerasa de VHB se interrumpa por (a) mutaciones funcionales de la ARNasa H, para detener su actividad enzimática, y/o (b) mutación Y63A para detener la primera etapa de replicación (cebado de la síntesis de ADN), y/o (c) mutaciones de cisteína para interrumpir su conformación nativa y evitar que la polimerasa de VHB participe en las etapas iniciales de la replicación viral (cebado de proteínas, unión a ARN y empaquetamiento de ARN).
El experto en la materia estará familiarizado con diversas modificaciones de la polimerasa de VHB que pueden proporcionarse que reducen o eliminan significativamente la función, y pueden proporcionarse en la polimerasa modificada según la descripción. Tales modificaciones se describen, por ejemplo, en los documentos WO2016020538, WO2013007772, y WO2011015656.
En una realización, la polimerasa modificada se modifica para mostrar una actividad enzimática de transcriptasa inversa (RTasa) reducida con respecto a una polimerasa de VHB de tipo salvaje. La reducción de la actividad de RTasa puede ser proporcionada por una o más mutaciones en el dominio responsable de la actividad enzimática de RTasa. Se ha descubierto que cuatro residuos están involucrados en la actividad de RTasa, formando un motivo "YMDD" (para residuos de Tyr, Met, Asp y Asp) en aproximadamente la posición 538 a aproximadamente la posición 541 de una polimerasa de VHB de tipo salvaje. La presente descripción abarca cualquier mutación en este motivo, o en otra parte del dominio RTasa, que proporcione una reducción significativa (por ejemplo, al menos una reducción de 10 veces) o ablación de la actividad RTasa. Se describen ejemplos representativos de mutantes de polimerasa deficientes en RTasa adecuados en el documento de Radziwill y col. (1990, J. Virol. 64:613), en el documento de Bartenschlager y col. (1990, J. Virol. 64:5324) y en el documento de Jeong y col. (1996, Biochem Bioph Res Commun. 223(2):264). En una realización, la polimerasa modificada puede comprender la sustitución del primer residuo de Asp del motivo YMDD o del residuo de aminoácido ubicado en una posición equivalente en una polimerasa de VHB nativa por cualquier residuo de aminoácido distinto de Asp, con una sustitución opcional por un residuo de His (mutación D540H).
Adicional o alternativamente, la polimerasa modificada puede modificarse para proporcionar una actividad enzimática de RNasa H reducida con respecto a la polimerasa de VHB de tipo salvaje. La reducción de la actividad de la RNasa H puede ser proporcionada por una o más mutaciones en el dominio responsable de la actividad enzimática de la RNasa H. El dominio funcional involucrado en la actividad de RNasa H está dentro de la porción de extremo C de la polimerasa de VHB, aproximadamente desde la posición 680 hasta la posición de extremo C 832 de la polimerasa de tipo salvaje, y la polimerasa modificada de la presente descripción puede abarcar cualquier mutación en este dominio que proporcione una reducción significativa (por ejemplo, al menos una reducción de 10 veces) o ablación de la actividad de RNasa H. Los ejemplos representativos de mutantes de polimerasa deficientes en RNasa H adecuados se describen en el documento de Radziwill y col.. (1990, J. Virol. 64:613), en el documento de Bartenschlager y col. (1990, J. Virol. 64:5324).
Antígeno de superficie de VHB (HbsAg)
El experto entenderá que PreS1 y PreS2 son componentes de la forma grande (L) de la proteína de superficie de VHB (por ejemplo, forma L = PreS1+PreS2+S). La forma media (M) de la proteína de superficie de VHB tiene PreS2+S. Tener dichas secuencias juntas significa que los epítopos de células T se incluyen en ese orden secuencial.
El HbsAg puede comprender o consistir en una secuencia de HbsAg de tipo salvaje de longitud completa, o una variante de la misma. La variante de HbsAg puede comprender o consistir en una secuencia de HbsAg truncada. El HbsAg que incluye las secuencias PreS1 y PreS2 puede comprender o consistir en la secuencia de SEQ ID NO: 10 o una variante del mismo. Una variante de SEQ ID NO: 10 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 10. La variante de SEQ ID NO: 10 puede retener sustancialmente la inmunogenicidad de SEQ ID NO: 10. La variante de SEQ ID NO: 10 puede retener sustancialmente la estructura terciaria de SEQ ID NO: 10.
En otra realización, el HbsAg puede comprender el antígeno de superficie sin PreS1 y/o PreS2. El HbsAg puede comprender o consistir en la secuencia de SEQ ID NO: 18 o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 18 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 18. La variante de SEQ ID NO: 18 puede retener sustancialmente la inmunogenicidad de SEQ ID NO: 18. La variante de SEQ ID NO: 18 puede retener sustancialmente la estructura terciaria de SEQ ID NO: 18.
En una realización, el HbsAg puede comprender o consistir en una cualquiera o la totalidad de las cuatro regiones transmembrana conocidas en HbsAg (aminoácidos 1-226), que son los aminoácidos (8-32) FLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSL (SEQ ID NO: 54), aminoácidos (80-98) FIIFLFILLLCLIFLLVLL (SEQ ID NO: 55), aminoácidos (160-184) RFLWEWASVRFSWLSLLVPFVQWFV (SEQ ID NO: 56), y aminoácidos (189-210) TVWLSVIWMMwYWGpSLYNILS (SEQ ID NO: 57) respectivamente. En una realización, el HbsAg puede al menos comprender o consistir en la región transmembrana de HbsAg de los aminoácidos (8-32) FLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSL (SEQ ID NO: 54).
PreSI de VHB
La PreS1 de VHB puede comprender o consistir en una secuencia de PreS1 de VHB de tipo salvaje de longitud completa, o una variante de la misma. La PreS1 de VHB puede comprender o consistir en la secuencia de SEQ ID NO: 52 o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 52 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 52. La variante de SEQ ID NO: 52 puede retener sustancialmente la inmunogenicidad de SEQ ID NO: 52. La variante de SEQ ID NO: 52 puede retener sustancialmente la estructura terciaria de SEQ ID NO: 52.
La variante de PreS1 de VHB puede comprender o consistir en una secuencia de PreS1 de VHB truncada, por ejemplo, CAPreS1 o NAPreS1 descrita en esta invención (CAPreS1 se refiere a PreS1 truncada en el extremo C y NAPreS1 se refiere a PreS1 truncada en el extremo N). En una realización, el casete de expresión de inmunógeno puede codificar tanto NAPreS1 como CAPreS1. En una realización donde el casete de expresión de inmunógeno codifica tanto NAPreS1 como CAPreS1, la NAPreS1 puede codificarse cadena arriba (5') de la secuencia intergénica y la CAPreS1 puede codificarse cadena abajo (3') de la secuencia intergénica. En una realización donde el casete de expresión de inmunógeno codifica NAPreS1 cadena arriba (5') de la secuencia intergénica, puede fusionarse con PreS2 y/o la polimerasa modificada (Pmut). En una realización donde el casete de expresión de inmunógeno codifica NAPreS1 cadena arriba (5') de la secuencia intergénica, puede fusionarse con PreS2 y/o la polimerasa modificada (Pmut) y la CAPreS1 codificada cadena abajo (3') de la secuencia intergénica puede fusionarse con el antígeno de superficie (HbsAg).
CAPreSI
En una realización, el casete de expresión de inmunógeno codifica una forma truncada de PreS1 de VHB. El truncamiento puede comprender un truncamiento de extremo C. En una realización, la PreS1 de VHB truncada comprende cAPreS1 (SEQ ID NO: 21 descrita en esta invención. En una realización, la PreS1 truncada, tal como CAPreS1 descrita en esta invención, está dispuesta para expresarse en una proteína de fusión con el antígeno de superficie de VHB (S / HbsAg). Se puede proporcionar una secuencia enlazadora, tal como un enlazador descrito en esta invención, entre la PreS1 truncada y el antígeno de superficie (S / HbsAg). Por ejemplo, CAPreS1 enlazador S (descrito en esta invención como S(sh)). La secuencia de nucleótidos que codifica S(sh) puede comprender o consistir en SEQ ID NO: 61 o SEQ ID NO: 38.
La CAPreS1 puede comprender o consistir en la secuencia de SEQ ID NO: 21 o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 21 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 21. La variante de SEQ ID NO: 21 puede retener sustancialmente la inmunogenicidad de SEQ ID NO: 21. La variante de SEQ ID NO: 21 puede retener sustancialmente la estructura terciaria de SEQ ID NO: 21.
En una realización, la PreSI truncada, tal como CAPreSI descrita en esta invención, opcionalmente con un antígeno de superficie fusionado, se codifica cadena abajo (3') de la secuencia intergénica.
El truncamiento de PreS1 favorece ventajosamente la generación de anticuerpos tanto para la respuesta de células T como de anticuerpos para los antígenos de VHB proporcionados en el casete de expresión de inmunógeno. Sin limitarse a la teoría, la generación de anticuerpos se debe posiblemente al plegamiento adecuado de los antígenos PreS1 y de superficie.
NAPreSI
En una realización, la PreSI truncada comprende NAPreSI como se describe en esta invención. La fusión NAPreSI y PreS2 puede comprender o consistir en SEQ ID NO: 15, o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 15 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 15. La variante de SEQ ID NO: 15 puede retener sustancialmente la inmunogenicidad de SEQ ID NO: 15.
En una realización, la PreS1 truncada comprende NAPreS1 como se describe en esta invención. La fusión de NAPreS1 y PreS2 puede estar codificada por un ácido nucleico comprendiendo o consiste en la SEQ ID NO: 38 o 61, o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 38 o 61 pueden comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 38 o 61. La variante codificada de SEQ ID NO: 38 o 61 pueden retener sustancialmente la inmunogenicidad del péptido codificado por SEQ ID NO: 38 o 61.
La secuencia de fusión NAPreS1 y PreS2 proporciona ventajosamente una buena respuesta de células T NAPreS1 incluye ventajosamente aminoácidos en una secuencia que aún conservaría epítopos de células T (8-11 aminoácidos para epítopos de células T CD8 y ligeramente más largos (12-16) para epítopos de células T CD4.
En una realización donde el casete de expresión de inmunógeno codifica NAPreS1 fusionado con PreS2 cadena arriba (5') de la secuencia intergénica, puede fusionarse adicionalmente con la polimerasa modificada (Pmut). Se puede proporcionar una secuencia enlazadora, tal como un enlazador descrito en esta invención, entre la PreS2 y la polimerasa modificada (Pmut). Por ejemplo, NAPreS1 PreS2 enlazador Pmut.
PreS2 de VHB
La PreS2 de VHB puede comprender o consistir en una secuencia de PreS2 de VHB de tipo salvaje de longitud completa, o una variante de la misma. La variante de PreS2 de VHB puede comprender o consistir en una secuencia de PreS2 de VHB truncada.
La PreS2 de VHB puede comprender o consistir en la secuencia de SEQ ID NO: 53 o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 53 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 53. La variante de SEQ ID NO: 53 puede retener sustancialmente la inmunogenicidad de SEQ ID NO: 53. La variante de SEQ ID NO: 53 puede retener sustancialmente la estructura terciaria de SEQ ID NO: 53.
Adyuvante peptídico
El casete de expresión de inmunógeno puede codificar además un adyuvante peptídico. El adyuvante peptídico puede comprender activador del plasminógeno tisular(Tissue Plasminogen Activator,TPA). En una realización, el adyuvante peptídico puede comprender una cadena invariante (li) humana o no humana, o un fragmento de la misma. Un fragmento de la isoforma larga (isoforma (b)) de la molécula de CD74 humana, también se conoce como la cadena invariante (Nucleic Acids Res. 20 de diciembre de 1985; 13(24): 8827-8841). Se sabe que los fragmentos de extremo N de la cadena invariante (li) que comprende al menos el dominio transmembrana de la misma, proporcionan una función adyuvante sorprendentemente eficaz cuando se expresan como una proteína de fusión con un antígeno de interés. Los fragmentos que abarcan el dominio transmembrana y el dominio citoplasmático, y que incluyen preferentemente los 16 aminoácidos de extremo N de la isoforma larga de la proteína son particularmente eficaces. La cadena invariante puede comprender o consistir en una cadena invariante de tiburón (SIi), o fragmento o una variante funcional de la misma. La cadena invariante de tiburón variante (SIi) puede comprender una cadena invariante de tiburón truncada. Otras fuentes animales no humanas de una cadena invariante, o fragmento de la misma, incluyen pollo, codorniz, trucha, pez cebra, carpa, rana, mero, tiburón, pez mandarina o ánade real. El experto en la materia estará familiarizado con las cadenas invariantes apropiadas, o fragmentos de las mismas, para su uso como adyuvantes peptídicos codificados en un casete/vector de expresión, por ejemplo, la cadena invariante puede ser cualquier cadena invariante como se proporciona en el documento WO2015082922.
El adyuvante peptídico puede comprender o consistir en la secuencia de SEQ ID NO: 4 (Sli) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 4 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 4. La variante de SEQ ID NO: 4 puede retener sustancialmente la función adyuvante de SEQ ID NO: 4.
El adyuvante peptídico puede estar codificado por una secuencia comprendiendo o consiste en la secuencia de SEQ ID NO: 29 (secuencia de ácido nucleico de TPA) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 29 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 29. La variante de SEQ ID NO: 29 puede codificar un adyuvante peptídico que retiene sustancialmente la función adyuvante del TPA codificado por la SEQ ID NO: 29. El adyuvante peptídico puede estar codificado por una secuencia comprendiendo o consiste en la secuencia de SEQ ID NO: 60 (secuencia de ácido nucleico de TPA) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 60 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 60. La variante de SEQ ID NO: 60 puede codificar un adyuvante peptídico que retiene sustancialmente la función adyuvante del TPA codificado por la SEQ ID NO: 60.
El adyuvante peptídico puede comprender o consistir en la secuencia de SEQ ID NO: 30 (TPA) o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 30 puede comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 30. La variante de SEQ ID NO: 30 puede retener sustancialmente la función adyuvante de SEQ ID NO: 30.
El adyuvante peptídico puede codificarse en una posición de extremo N de una proteína/antígeno que se va a expresar a partir del casete de expresión de inmunógeno. Un primer adyuvante peptídico puede codificarse en una posición de extremo N de una primera proteína/antígeno (tal como la fusión de núcleo y polimerasa) que se expresará a partir del casete de expresión de inmunógeno, y un segundo adyuvante peptídico puede codificarse en una posición de extremo N de una segunda proteína/antígeno (tal como antígeno de superficie) que se expresará a partir del casete de expresión de inmunógeno.
Genotipo de VHB
El VHB puede ser el genotipo C de VHB. En otra realización, el VHB puede ser de uno cualquiera de los 10 genotipos (A-J). Todas las proteínas/antígenos de VHB codificados pueden derivar de un genotipo, por ejemplo, el genotipo C de VHB.
Enlazadores
En una realización, los residuos de enlazador pueden codificarse entre una o más, o todas, las secuencias de proteína/antígeno que se proporcionan en una proteína de fusión (por ejemplo, proporcionando uniones entre las secuencias en la proteína). En una realización comprendiendo un adyuvante peptídico, se puede codificar un enlazador entre el adyuvante peptídico y la proteína/antígeno codificado cadena abajo. En una realización, se codifica un enlazador entre las secuencias del núcleo de VHB y la polimerasa de VHB modificada.
Los residuos enlazadores pueden comprender secuencias de aminoácidos aleatorias, o aminoácidos que se han seleccionado para que no sean inmunogénicos basándose en programas informáticos de predicción de epítopos o experimentos en modelos animales. Por ejemplo, un enlazador puede no considerarse si se predice o se sabe que es un epítopo (es decir, para evitar una respuesta inmunitaria a epítopos, por ejemplo, epítopos artificiales, que no se encuentran en el VHB). El enlazador puede ser flexible. El enlazador puede comprender o consistir en residuos de aminoácidos K, G, P o S, o combinaciones de los mismos. En una realización, el enlazador puede comprender o consistir en residuos de aminoácidos G y/o P. Los residuos enlazadores pueden tener entre 1 y 10 aminoácidos de longitud. En otra realización, los residuos enlazadores pueden tener una longitud de entre 2 y 8 residuos. En otra realización, los residuos enlazadores pueden tener una longitud de entre 1 y 6 residuos.
Un enlazador puede comprender o consistir en cualquiera de las secuencias KGGGPGGG (SEQ ID NO: 5), GGGSGGG (SEQ ID NO: 7), KGGS (SEQ ID NO: 14), KSP, GSKGK (SEQ ID NO: 20), LEGGSGG (SEQ ID NO: 22), SKSGPPSGKS (SEQ ID NO: 31), GSKSGSK (SEQ ID NO: 32), SKSPGSGPP (SEQ ID NO: 33), o ASKGGKSG (SEQ ID NO: 34).
En una realización, un enlazador puede comprender la secuencia KGGGPGGG (SEQ ID NO: 5). En otra realización, un enlazador puede comprender la secuencia GGGSGGG (SEQ ID NO: 7). En otra realización, un enlazador puede comprender la secuencia KGGS (SEQ ID NO: 14). En otra realización, un enlazador puede comprender la secuencia KSP. En otra realización, un enlazador puede comprender la secuencia GSKGK (SEQ ID NO: 20). En otra realización, un enlazador puede comprender la secuencia LEGGSGG (SEQ ID NO: 22). En otra realización, un enlazador puede comprender la secuencia SKSGPPSGKS (SEQ ID NO: 31). En otra realización, un enlazador puede comprender la secuencia GSKSGSK (SEQ ID NO: 32). En otra realización, un enlazador puede comprender la secuencia SKSPGSGPP (SEQ ID NO: 33). En otra realización, un enlazador puede comprender la secuencia ASKGGKSG (SEQ ID NO: 34).
Ventajosamente, el uso de enlazadores puede evitar la generación de péptidos con homología con el proteoma humano (que podría generar potencialmente una respuesta inmune al autoantígeno) y evitar epítopos artificiales inmunodominantes. Además, los enlazadores pueden proporcionar una bisagra flexible entre segmentos de proteína, de modo que puedan plegarse en su conformación nativa. Por ejemplo, un enlazador entre CAPreSI y S permite el plegamiento independiente de CAPreSI y S, de modo que podrían generar anticuerpos para epítopos conformacionales para las proteínas respectivas.
Los enlazadores pueden variar entre diferentes casetes de expresión de inmunógenos. El uso de diferentes enlazadores evita la potenciación de cualquier respuesta de células T creada a cualquier epítopo artificial potencial (es decir, cambiando los enlazadores o cambiando las uniones). Por ejemplo, cuando las vacunas se usan en estrategias de vacunación de refuerzo de primado, cambiar los enlazadores o el orden de las proteínas dentro del diseño del inmunógeno, ayuda a superar la potenciación de la respuesta del epítopo artificial.
Otros elementos del (de los) casete(s) de expresión del inmunógeno
En una realización donde el casete de expresión de inmunógeno es para su uso en un vector de MVA, el casete de expresión de inmunógeno puede comprender además secuencias flanqueantes izquierda y derecha de F11 para permitir la inserción en el locus F11 de MVA por recombinación homóloga.
La secuencia del flanco izquierdo de F11 puede comprender o consistir en la secuencia de SEQ ID NO: 35, o una variante de la misma. La secuencia del flanco derecho de F11 puede comprender o consistir en la secuencia de SEQ ID NO: 36, o una variante de la misma. Una variante de SEQ ID NO: 35 o 36 pueden comprender una secuencia que tiene al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 98 %, el 99 % o el 99,5 % de identidad con la SEQ ID NO: 35 o 36 respectivamente. La variante de SEQ ID NO: 35 o 36 pueden retener sustancialmente la función de recombinación homóloga de SEQ ID NO: 35 o 36 respectivamente. El experto en la técnica apreciará que 1, 2, 3, 4, 5 o más residuos de aminoácidos pueden sustituirse, añadirse o eliminarse sin afectar la función. Por ejemplo, se pueden considerar las sustituciones conservadoras.
El casete de expresión de inmunógeno puede comprender además una secuencia terminadora de la transcripción. La secuencia terminadora de la transcripción puede proporcionarse en realizaciones del casete de expresión de inmunógeno comprendiendo un promotor secundario. Por ejemplo, la secuencia terminadora de la transcripción puede proporcionarse cadena abajo de una proteína expresada por el promotor primario, pero antes (cadena arriba) del promotor secundario. La secuencia terminadora de la transcripción puede comprender o consistir en la secuencia TTTTTGT, o variantes de la misma.
En una realización, el casete de expresión de inmunógeno descrito en esta invención puede aislarse o proporcionarse en un vector no viral.
Por lo tanto, según otra descripción, se proporciona un ácido nucleico comprendiendo el casete de expresión de inmunógeno descrito en esta invención, opcionalmente donde el ácido nucleico es ácido nucleico aislado.
Según otra descripción, se proporciona una composición comprendiendo el vector viral según la descripción, opcionalmente donde la composición es una composición farmacéuticamente aceptable.
La composición puede ser inmunogénica, por ejemplo, en un mamífero, tal como un ser humano. La composición puede comprender un vehículo farmacéuticamente aceptable. La composición puede ser una composición farmacéutica comprendiendo un vehículo farmacéuticamente aceptable. La composición puede ser para su uso en la profilaxis o el tratamiento de la infección por VHB.
Según otra descripción, se proporciona un procedimiento de tratamiento o profilaxis de la infección por VHB comprendiendo la administración del vector viral, ácido nucleico o composición según la descripción.
El procedimiento de tratamiento o profilaxis de la infección por VHB puede ser un procedimiento de vacunación. Según otra descripción, se proporciona un vector viral, ácido nucleico o composición según la descripción para su uso en el tratamiento o para impedir la infección por VHB, opcionalmente donde el uso es en una vacuna.
Según otra descripción, se proporciona una vacuna comprendiendo el vector viral, ácido nucleico o composición según la descripción.
La vacuna puede ser una vacuna de primado. La vacuna puede ser una vacuna de refuerzo. Cuando se proporciona una vacuna de refuerzo después de una vacuna de primado, el vector viral puede ser un vector viral diferente según la descripción.
Ventajosamente, la provisión de un vector viral diferente entre vacunas de primado y de refuerzo puede evitar la provisión de epítopos "falsos" formados a través de uniones de una secuencia de proteína/antígeno con otra, es decir, la misma unión puede no producirse en una proteína reordenada.
Según otra descripción, se proporciona un kit de vacunación de refuerzo de primado comprendiendo
- una vacuna de primado según la descripción;
- una vacuna de refuerzo según la descripción.
La vacuna de primado y refuerzo puede comprender diferentes vectores virales.
El vector viral puede usarse en una vacuna en combinación con otro ingrediente terapéutica o profilácticamente activo. El vector viral puede usarse en una vacuna en combinación con un adyuvante.
El vector viral, el ácido nucleico que codifica el vector viral puede proporcionarse en un vehículo farmacéuticamente aceptable.
El vector o composición viral según la descripción puede no comprender el VHB de tipo salvaje, o el ácido nucleico según la descripción puede no codificar el VHB de tipo salvaje.
La referencia a la "identidad" de secuencia utilizada en esta invención puede referirse al porcentaje de identidad entre dos secuencias alineadas utilizando parámetros estándar NCBI BLASTp (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov).
El término "inmunogénico", cuando se aplica al vector viral, ácido nucleico o composición de la presente descripción, significa capaz de provocar una respuesta inmune en un cuerpo humano o animal. La respuesta inmunitaria puede ser protectora contra el VHB. El término "protector" significa prevención de la enfermedad de la hepatitis B, un riesgo reducido de la enfermedad de la hepatitis B, un riesgo reducido de infección, transmisión y/o progresión de VHB, una gravedad reducida de la enfermedad de la hepatitis B, una cura de la hepatitis B, un alivio de los síntomas de la hepatitis B o una reducción en la gravedad de los síntomas de la enfermedad de la hepatitis B.
El término "profilaxis" significa prevención o tratamiento protector para la hepatitis B. La profilaxis puede incluir un riesgo reducido de infección por VHB, transmisión y/o progresión de la enfermedad de hepatitis B, o una gravedad reducida de la enfermedad de hepatitis B.
El término "tratamiento" significa una cura de la hepatitis B, un alivio de los síntomas o una reducción en la gravedad de la enfermedad de la hepatitis B o los síntomas de la enfermedad de la hepatitis B.
Con referencia a secuencias de ácido nucleico "variantes", el experto apreciará que 1, 2, 3, 4, 5 o más codones pueden sustituirse, añadirse o eliminarse sin afectar a la función. Por ejemplo, se pueden considerar las sustituciones conservadoras.
Con referencia a las secuencias de aminoácidos "variantes", el experto apreciará que 1,2, 3, 4, 5 o más aminoácidos pueden sustituirse, añadirse o eliminarse sin afectar a la función. Por ejemplo, se pueden considerar las sustituciones conservadoras.
El experto entenderá que las características opcionales de una realización o aspecto de la descripción pueden ser aplicables, cuando sea apropiado, a otras realizaciones o aspectos de la descripción.
Ahora se describirán con más detalle realizaciones de la descripción, a modo de ejemplo únicamente, con referencia a los dibujos adjuntos.
Figura 1: (A) Relación filogenética de las secuencias del genotipo C de VHB 1447 utilizadas para generar la secuencia consenso (B) Comparación del consenso del genotipo C de VHB (SEQ ID NO: 1) y KP017269.1 VHB aislado JP-02 (s EQ ID nO: 2).1447 Secuencias de nucleótidos del genotipo C de VHB, descargadas de la base de datos de V<h>B, VHBdb: https://hbvdb.ibcp.fr/HBVdb/HBVdbIndex, se alinearon utilizando MAFFT (un programa de alineación de secuencias múltiples), para generar la secuencia consenso del genotipo C de VHB y un árbol filogenético y. La alineación de las secuencias de 3215 nucleótidos del consenso y la secuencia del paciente elegido (KP017269.1 aislado de VHB JP-02) mostró tres diferencias de nucleótidos (en las posiciones 52, 1053 y 2699), que se resaltan en color gris. A continuación, se proporciona la secuencia de la secuencia consenso del genotipo C de VHB generada a partir del aislado jp-02 del genotipo c 1447.
Figura 2: (A) Genoma viral de VHB y diseño de codones.El virión de VHB tiene un ADN bicatenario parcial (que tiene un<a>D<n>de cadena negativa de longitud completa y un ADN de cadena positiva parcialmente sintetizado unido a la proteína polimerasa). El genoma tiene aproximadamente 3,2 Kb de longitud y tiene cuatro codones principales: núcleo (incluida la región prenúcleo), polimerasa, superficie (incluidas las regiones preS1 y preS2) y X.(B) Disposición del inmunógeno de VHB.Se diseñaron dos inmunógenos SIi-VHB-CPmutS y SIi-VHB-SCPmut. Ambos inmunógenos codifican codones de VHB (que abarcan prenúcleo, núcleo, polimerasa [Pmut], preS1, preS2 y proteínas de superficie) y codones no de VHB (comprendiendo una cadena invariante de tiburón truncada [SIi], dos enlazadores [representados en color azul turquesa] y una secuencia peptídica de furina 2A [F2A]). Dentro del casete de expresión de mamífero, las secuencias de codones de inmunógeno se sitúan junto al promotor de CMV.(C) Análisis de expresión invitro.Los plásmidos que codifican SIi-VHB-CPmutS y SIi-VHB-SCPmut se transfectaron en células HEK293A. 24 horas después de la transfección, las células se lisaron y los lisados se analizaron en experimentos de transferencia Western usando anticuerpos de ratón anti-VHB-PreS1 y de ratón anti-VHB-Polimerasa. Las transferencias sondeadas con anti-GAPDH de ratón sirvieron como controles de carga.(D) ChAdOX2-SIi-VHB-CPmutS.El casete de expresión de mamífero con codones de inmunógeno SIi-VHB-CPmutS se insertó en el vector ChAdOx2 deficiente en replicación. El virus ChAdOX2-SIi-VHB-CPmutS recombinante se generó transfectando el vector ChAdOX2-SIi-VHB-CPmutS en células T-REx™-293 (Thermo Fisher Scientific) utilizando procedimientos estándar como se describió anteriormente.
Figura 3: Prueba de la vacuna ChAdOx2-SIi-VHB-CPmutS en modelos de ratones sin tratamiento previo. (A) Respuestas de esplenocitos en ratones BALB/c (B) Respuestas de linfocitos intrahepáticos en ratones BALB/c (C) Respuestas de esplenocitos en ratones CD1 (D) Respuestas de linfocitos intrahepáticos en ratones CD1.Se vacunaron ratones BALB/c (4 ratones a la edad de 7 semanas) y CD1 (2 ratones a la edad de 18 semanas y 5 ratones a la edad de 13 semanas) mediante inyecciones intramusculares con 4 x 107 UI y 5 x 107 UI por ratón, respectivamente, de la vacuna ChAdOx2-SIi-VHB-CPmutS. 14 días después de la vacunación, los ratones se sacrificaron, los bazocitos y los linfocitos intrahepáticos (IHL) se aislaron del bazo y el hígado según el protocolo estándar. Se colocaron 2x105 esplenocitos y 1x105 IHL en placas ELSIPOT (recubiertas previamente con anticuerpo monoclonal INFy anti-ratón, mediante incubación durante la noche) junto con DMSO (1%) o un grupo de péptidos no VHB (A,I, L a una concentración de 3 pg/ml) o un grupo de péptidos VHB ( núcleo, Pol-1, Pol-2, Pol-3, Pol-4, PreS1/S2 y Superficie a una concentración de 3 pg/ml) o un mitógeno de control positivo (PHA o Concanavalina A a una concentración de 10 pg/ml y 12,5 pg/ml, respectivamente). Después de una incubación de 15 horas durante la noche a 37°C, las placas se lavaron 7 veces con PBS y se incubaron con anti-INFY de ratón conjugado con biotina durante 2 horas a temperatura ambiente, seguido de una incubación de 4 veces con PBS y anti-biotina conjugada con AP durante 2 horas a temperatura ambiente. A continuación, las placas se lavaron 4 veces con PBS y se revelaron con sustrato BCIP/NBT hasta que aparecieron manchas en los pocillos. Después de un lavado final con agua y secado, las unidades formadoras de manchas (Spot Forming Units, SFU) por millón de células de los pocillos individuales se contaron en un lector de placas ELISpot automatizado. Las respuestas ELISpot para cada estímulo de grupo de péptidos con esplenocitos y IHL de ratones BALB/c y CD1 se representan en gráficos separados. Las respuestas totales del estímulo peptídico de VHB también se calcularon combinando las respuestas ELISpot a todos los grupos peptídicos de VHB (Núcleo, Pol-1, Pol-2, Pol-3, Pol-4, PreS1/S2 y Superficie).
Figura 4: Comparación de la inmunogenicidad del inmunógeno de VHB SIi-VHB-CPmutS con y sin cadena invariante de tiburón (SIi). (A) Distribución del inmunógeno VHB-CPmutS.Los inmunógenos VHB-CPmutS se generaron eliminando el SIi y el primer enlazador presente en SIi-VHB-CPmutS. VHB-CPmutS tiene exactamente los mismos aminoácidos, excepto que carece del SIi y la primera secuencia enlazadora que está presente en el inmunógeno SIi-VHB-CPmutS.(B) Respuestas de esplenocitos en ratones CD1. (C) Respuestas de linfocitos intrahepáticos en ratones CD1.Se generó ChAdOX2-VHB-CPmutS como se describió anteriormente y se vacunaron ratones CD1 (10 ratones a la edad de 7 semanas) mediante inyecciones intramusculares con 5 x 107 UI por vacuna de ratones ChAdOx2-VHB-CPmutS y se sacrificaron ratones 14 días después de la vacunación y se generaron datos de respuesta de esplenocitos y linfocitos intrahepáticos, como se describió anteriormente. Los datos de 5 y 10 ratones<c>D1 vacunados con ChAdOx2-SIi-VHB-CPmutS y ChAdOx2-VHB-CPmutS respectivamente se compararon y representaron en gráficos para facilitar la comparación.
Figura 5A: Disposición esquemática de SIi-VHB-CPmutPreS-S(sh).
Figura 5B: Disposición esquemática de SIi-VHB-CPmutPreS-TPA-S(sh).
Figura 6A: Disposición esquemática de MVA-SIi-VHB-PreS-P<mut>-C-S(sh).
Figura 6B: Disposición esquemática de MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-TPA-S(sh).
Figura 7: Prueba de la vacuna ChAdOx1-SIi-VHB-CPmutS en ratones BALB/c, respuesta de esplenocitos:Se vacunaron ratones BALB/c (8 ratones a la edad de 8 semanas) mediante inyecciones intramusculares con 5 x 107 UI por ratón de vacuna ChAdOx1-SIi-VHB-CPmutS. 14 días después de la vacunación, los ratones se sacrificaron; se generaron datos de respuesta de esplenocitos, como se describió anteriormente. La respuesta de células T de esplenocitos para cada estímulo de grupo de péptidos y la respuesta total combinada de todos los grupos de péptidos de VHB se representan en el gráfico de barras.
Figura 8: Comparación de la inmunogenicidad del inmunógeno de VHB SIi-VHB-CPmutS codificado a través de ChAdOx1 y ChAdOx2.Se generaron vacunas vectorizadas virales ChAdOx1 y ChAdOx2 que codifican inmunógeno VHB-CPmutS, como se describió anteriormente (figura 2D). Se vacunaron 10 ratones CD1 a la edad de 7 semanas y 8 ratones CD1 a la edad de 8 semanas mediante inyecciones intramusculares con 5 x 107 UI por ratón de vacuna ChAdOx2-VHB-CPmutS y ChAdOx1-VHB-CPmutS, respectivamente, y se sacrificaron los ratones 14 días después de la vacunación y se generaron datos de respuesta de esplenocitos, como se describió anteriormente. Los datos de 10 y 8 ratones CD1 vacunados con ChAdOx2-SIi-VHB-CPmutS y ChAdOx1-VHB-CPmutS se compararon y representaron en gráficos para facilitar la comparación. Se observó una magnitud mayor estadísticamente significativa de la respuesta total de células T de esplenocitos en ratones vacunados con la vacuna ChAdOx2-VHB-CPmutS, en comparación con la vacuna ChAdOx1-VHB-CPmutS.
Figura 9: Comparación de la inmunogenicidad del inmunógeno de VHB SIi-VHB-CPmutPreS-S(sh) (denominado VHB-v2) codificado a través de los vectores virales ChAdOx1 y ChAdOx2 utilizando un promotor de CMV corto o un promotor de CMV largo.Se generaron dos vacunas de promotor de CMV corto y un inmunógeno de promotor de CMV largo basado en SIi-VHB-CPmutPreS-S (sh) (denominado VHB-v2) que codifica ChAdOx1 (ChAdOx1-LP-VHB-v2 y ChAdOx1-SP-VHB-v2) y ChAdOx2 (ChAdOx2-SP-VHB-v2) como se describió anteriormente. 15 ratones Balbc a la edad de 8 semanas se dividieron en 3 grupos (5 ratones por grupo) y se vacunaron mediante inyecciones intramusculares con 5 x 107 UI de vacuna ChAdOx1-SP-VHB-v2 o ChAdOx2-SP-VHB-v2 o ChAdOx1-LP-VHB-v2. 14 días después de la vacunación, los ratones se sacrificaron y se generaron datos de respuesta de esplenocitos como se describió anteriormente. Los datos comparativos de las tres vacunas contra el VHB-v2 se representan en el mismo gráfico para facilitar la comparación. Se observó una magnitud mayor estadísticamente significativa de la respuesta total de células T de esplenocitos en ratones vacunados con la vacuna ChAdOx1-SP-VHB-v2, en comparación con las otras dos vacunas contra el VHB-v2. Además, la vacuna ChAdOx2-SP-VHB-v2 mostró una magnitud mayor estadísticamente significativa de la respuesta total de células T de esplenocitos en comparación con la vacuna ChAdOx1-LP-VHB-v2.
Figura 10A-G:muestra el diseño del inmunógeno para (A) SIi-VHB-CPmutS; (B) SIi-VHB-SCPmut (C) VHB-CPmutS (D) SIi-VHB-CPmutPreS-S(sh) (E) MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-S(sh) (F) SIi-VHB-CPmutPreS-TPA-S(sh) y (G) MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-TPA-S(sh).
Se generó una vacuna contra el VHB basada en el genotipo C de VHB, uno de los genotipos de VHB más comunes en el sudeste asiático que tiene una asociación más frecuente con la infección crónica por el VHB. Para diseñar el inmunógeno de VHB, la secuencia del genotipo C de VHB de un paciente (GeneBank: KP017269.1) que estaba más cerca del consenso, esto se generó alineando 1447 secuencias del genotipo C de VHB de VHBdb, una base de datos del virus de la hepatitis B (Figura 1A y 1B). La secuencia del genotipo C de VHB elegida tuvo solo tres cambios de nucleótidos en comparación con el consenso, de los cuales dos fueron mutaciones silenciosas y uno tuvo una mutación en la proteína polimerasa (Figura 1C).
Se cree que una respuesta de células T fuerte y específica de múltiples antígenos contra diferentes proteínas de VHB desempeña un papel importante en la eliminación viral de una infección por VHB en resolución. En base a esto, se han diseñado inmunógenos de VHB que codifican todas las proteínas principales del virus, a saber, el núcleo (incluida la región prenúcleo), una polimerasa no funcional Pmut (Pmut: Polimerasa de VHB con mutaciones funcionales, con el objetivo de desalentar la capacidad de la polimerasa codificada por la vacuna para participar en la replicación viral de VHB) y la proteína de superficie (incluidas sus regiones PreS1 y PreS2). Las Figuras 2A y 2B muestran el diseño de codones del genoma de VHB y una representación esquemática de los dos primeros diseños de inmunógenos de vacunas contra el VHB, respectivamente. El diseño ha sido diseñado para codificar prenúcleo, núcleo y Pmut como una proteína de fusión y una proteína de superficie separada utilizando un mecanismo de escisión del péptido furina 2A (F2A), que al causar eventos de omisión ribosómica, ayuda a codificar dos proteínas de un solo marco de lectura abierto.
La codificación de múltiples proteínas dentro de un único casete transgénico requiere un diseño cuidadoso, donde la proximidad de la secuencia de codones al promotor de CMV desempeña un papel importante en el nivel de expresión de las proteínas codificadas. Para analizar estos dos inmunógenos (Figura 2B), SIi-VHB-CPmutS y SIi-VHB-SCPmut, generamos que codifica la proteína de superficie al final o al comienzo del casete de inmunógeno, respectivamente, y los probamos en estudios de expresión de transferencia Western. El análisis de expresión de transferencia Western mostró que el diseño SIi-VHB-CPmutS tiene la mejor posibilidad de escisión de F2A, que genera grandes cantidades de las proteínas CPmut y S esperadas en comparación con el SIi-VHB-SCPmut (Figura 2c).
Con base en esto, decidimos llevar adelante el diseño del inmunógeno SIi-VHB-CPmutS para la generación de una vacuna contra el VHB inductora de células T basada en adenovirus de chimpancé (ChAdOx2) (Figura 2D). Se fabricó un lote a pequeña escala de ChAdOx2-SIi-VHB-CPmutS en la instalación central de vectores virales del Instituto Jenner, Universidad de Oxford, siguiendo buenas prácticas de fabricación, y se utilizó en estudios de inmunogenicidad en ratones.
La capacidad de la vacuna ChAdOx2-SIi-VHB-CPmutS para generar una respuesta inmunitaria de células T se probó usando modelos de ratones sin tratamiento previo. Se inmunizaron ratones BALB/c y CD1 sin tratamiento previo con 4 x 107 UI y 5 x 107 UI por ratón, respectivamente, de la vacuna ChAdOx2-SIi-VHB-CPmutS mediante inyecciones intramusculares. 14 días después de la vacunación, los ratones se sacrificaron y se realizaron ensayos ELISpot de IFN-<y>con esplenocitos y linfocitos intrahepáticos (IHL) aislados de bazo e hígado. Los péptidos sintéticos de 15 meros, superpuestos por 11 aminoácidos, generados en todo el inmunógeno SIi-VHB-CPmutS, se combinaron en grupos específicos (que representan diferentes regiones del inmunógeno SIi-VHB-CPmutS) y se utilizaron como estimulantes en ensayos ELISpot de IFN-y. Los resultados mostraron que la vacuna ChAdOx2-SIi-VHB-CPmutS generó una buena respuesta ELISpot de IFN-<y>al inmunógeno SIi-VHB-CPmutS (Figura 3). Tanto los ratones BALB/c como CD1 mostraron respuestas más fuertes a la polimerasa y las proteínas de superficie, una respuesta débil a la proteína central y una respuesta insignificante o nula a las proteínas no VHB (cadena invariante de tiburón [SIi], F2A y enlazadores) en el inmunógeno.
Estudios previos han demostrado que la cadena invariante de tiburón (SIi), cuando se sitúa en el extremo N del inmunógeno, funciona como un adyuvante molecular y aumenta la respuesta inmune global de las células T al inmunógeno. Para probar esto, generamos un inmunógeno de VHB sin SIi (vacuna VHB-CPmutS) (Figura 4A), y a continuación generamos una vacuna ChAdOx2-VHB-CPmutS y los probamos en experimentos de inmunogenicidad de ratones CD1 similares. Los resultados mostraron que la vacuna SIi (ChAdOx2-SIi-VHB-CPmutS) genera una mayor magnitud de respuesta ELISpot de IFN-<y>(respuesta ELISpot de IFN-<y>tanto de esplenocitos como de linfocitos intrahepáticos, representada en la figura 4B, 4C) en comparación con la vacuna no SIi (ChAdOx2-VHB-CPmutS). El objetivo principal del diseño de vacuna de VHB vectorizada viral es generar tanto respuesta de células T como de anticuerpos al inmunógeno de VHB. Con el fin de generar una respuesta de anticuerpos exitosa, la proteína codificada por inmunógeno tiene que plegarse en su conformación nativa. Para proporcionar esto, se diseñaron inmunógenos de VHB, SIi-VHB-CPmutPreS-S (sh) y SIi-VHB-CPmutPreS-TPA-S (sh) (Figura 5A y 5B), que codifican la mitad de extremo N del dominio PreS1 fusionado con un enlazador al dominio S de la proteína de superficie, como el componente de inmunógeno inductor de anticuerpo, y las secuencias peptídicas restantes de la proteína de superficie (la mitad de extremo C del dominio PreS1 y todo el dominio PreS2) se fusionaron al prenúcleo/núcleo/Pmut, para preservar los epítopos de células T que serían necesarios para la generación de la respuesta inmune de células T. La Figura 5A y 5B muestra una disposición esquemática de SIi-VHB-CPmutPreS-S(sh).
También se diseñaron inmunógenos de MVA-VHB, que siguieron diseños similares a SIi-VHB-CPmutPreS-S(sh) y y SIi-VHB-CPmutPreS-TPA-S(sh). Sin embargo, el componente de células T del inmunógeno de VHB SIi-VHB-CPmutPreS está codificado por el promotor temprano F11 y el componente inductor de anticuerpos S(sh) o TPA-S (sh) está codificado por el promotor temprano/tardío mH5. El casete de clonación también tiene secuencias de flanco izquierdo F11 y flanco derecho F11, para permitir la inserción en el locus F11, mediante recombinación homóloga. Las Figuras 6A y 6B muestran disposiciones esquemáticas de MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-S(sh) y MVA-SIi-VHB-CPmutPreS-TPA-S(sh) respectivamente.
Conclusión:Los nuevos ChAdOx2-SIi-VHB-CPmutS basados en inmunógenos de VHB de múltiples antígenos son altamente inmunogénicos en modelos de ratones sin tratamiento previo. Estos estudios allanan el camino para futuros estudios en modelos crónicos de ratones con VHB, para evaluar su capacidad para superar la infección crónica por VHB a través de enfoques inmunoterapéuticos.
Secuencias:
La secuencia consenso del genotipo C de VHB generada a partir de 1447 secuencias del genotipo C (3215 pares de bases) se proporciona como la s Eq ID NO: 1. La secuencia del aislado de VHB KP017269.1 JP-02 se proporciona como SEQ ID NO: 2.
Ejemplo de casetes
1. SIi-VHB-CP<mut>S
1.1. SIi-VHB-CPmutS:El diseño del inmunógeno se muestra en la Figura 10A
1.2.SIi-VHB-CPmutS:Secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 3)
MSLLWGGVTVLAAMLIAGP VA SVVFLVKGGGPGG GMOLFHLCLIISC SCPT VQASKLCLGWLWGMDIDPYKEFaASVELLSFLPSDFFPSlRDLLDTASALYRE A LE S PE HC SPHHTALRQ AILCWGELMNL ATWVG SN LEDP ASREL W SY VN V N MG LK IRQ LL WFHISCLTFGRETVL EYLV S FG V WIRTPP AY RPPNAPILSTLPE TTV V RRRGRS PRRRTPS PRRRRS QSPRRRRSO SRES O CGGGSGG GMP L SY OH FRK L L L L DD E AGPLEEE LPRLADEGLNRRV AEDLNLGNLNV SIPWTHKV GNF TGLASSTVPVFNPEWQTPSFPHIHLQEDIINRCQQYVGPLTVNEKRRLKLIMPA RFYPNLTKYLPLDKGIKPYYPEHAVNHYFKTRHYLHTLWKAGILYKRETTRS ASFCGSPYSWEQELQHGRLVFQTSTRHGDESFCSQSSGILSRSFVGPCVRSQL KQSRLGLQPQQGSLA RGK SGRS GSIRARVHPTTRRSFG V EPS G SGHIDNS A SST S SCLHQS A VRKTAY SH LSTSK RQ S SSGHA VELHNIPPSS A RSQ SEGPIFSAWWL QFRN SKPASDYAL THIVNL LED W GP AT EHGEHNIRIP RTPARVTGG V FLV D KN PHNTTES RL W D F SQFS RGSTHV SWPKFA V PNLQS LTNLLS SNLS W L SLD VS A AFYHIPLHP AAMPHL L VGSS GLPRY V ARLS STS RNIN Y QHGTMQDL HD SCS R N L YV SLLLL YK TFGRKLH L Y SHPIT LGFRKIP MGV GLSPFLLAQFTSAICSVVRRAFPHCLAFSYMDDVVLGAKSVQHLESLFTS1TNFLLSLGIHLNPNKTKRWGYS LNFMGY VIGS W GTLPQ EHIVLKIKQ CFRKLPVNR PIDWKV CQRIV GL LGF A A PFTQCGYPALMPLYACIQSKQAFTFSPTYECAFLCKQYLNLYPVARQRSGLCQ VFADATPTGWGLAIGHRAMRGTFVAPLPIHTAELLAACFARSRSGAKLIGTD N S V VL S RKYTS FP WL LGC AAM WILRGTSF V Y VP S ALNPA A DPSAGRLGL YRP L L H L P FRPTTGRTSLYAV SPSVPSHLPD RVHF A SPLH VA WRPPRKRR AP VKO
t l n f d l l k l a g d v e s n p g p m g g w s s k p r q g m g t n l s v p n p l g f f p d h q l d p AFGANSNNPDWDFNPNKDHWPEANQVGAGAFGPGFTPPHGGLLGWSPQAQ GILTTVPAAPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWNSTITHQALLDPR VRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRTGDPAPNMENTTSGFLGPLLVL Q AGFFLLTRIL TIPQ SL D SWWTS LN FLGGA PTCPGQN S QSPTSNHSPTS CPPICP GYRWMCLRRFIIF LF J LLLCL T F LLV LLD Y QGMLP VCPL L PGTSTTSTG PC KTCT IP A QGTS MFP SCC CTXPS DGN CTCIPIPS SW A FARFLWEW A S VRF SWLSLLVPF VQWFVGLSPTVWLSVIWM MWYWGPSLYNILSPFLPLLPIFFCLWV VI.3.SIi-VHB-CP<mut>S: Descripción de las secuencias de aminoácidos del inmunógeno de VHB
1.3.1. Primer aminoácido del polipéptido = M
1.3.2. La cadena invariante de tiburón (Sli) = SLLWGGVTVLAAMLIAGQVASVVFLV (SEQ ID NO: 4) 1.3.3. Enlazador =KGGGPGGG(SEQ ID NO: 5)
1.3.4. C =
1.3.4.1, PreC =
MQLFHLCLIISCSCPTVQASKLCLGWLWG (SEQ ID NO: 16)
1.3.4.2. Núcleo =
MDIDPYKEFGASVELLSFLPSDFFPSIRDLLDTASALYREALESP EHCSPHHTALRQAILCWGELMNLATWVGSNLEDPASRELVVSY VNVNMGLKIRQLLWFHISCLTFGRETVLEYLVSFGVWIRTPPAY RPPNAPILSTLPETTVVRRRGRSPRRRTPSPRRRRSQSPRRRRSQS RESQC (SEQ ID NO: 6)
1.3.5. Enlazador =GGGSGGG(SEQ ID NO: 7)
1.3.6. Pmut = (mutaciones: Y63A, C323A, C334A, C338A, C352A, R714A, D788A, R792A)
MPLSYQHFRKLLLLDDEAGPLEEELPRLADEGLNRRVAEDLNLGNL NVSIPWTHKVGNFTGLASSTVPVFNPEWQTPSFPHIHLQEDIINRCQQ YVGPLTVNEKRRLKLIMPARFYPNLTKYLPLDKGIKPYYPEHAVNHY FKTRHYLHTLWKAGILYKRETTRSASFCGSPYSWEQELQHGRLVFQT STRHGDESFCSQSSGÍLSRSPVGPCVRSQLKQSRLGLQPQQGSLARGK SGRSGSIRARVHPTTRRSFGVEPSGSGHIDNSASSTSSCL1IQSAVRKT AYSHLSTSKRQSSSGHAVELHN1PPSSARSQSEGPIFSAWWLQFRNSK PASDYALTHIVNLLEDWGPATEHGEHN1R1PRTPARVTGGVFLVDKN PHNTTESRLVVDFSQFSRGSTHVSWPKFAVPNLQSLTNLLSSNLSTFG RKLHLYSHPI1LGFRKIPMGVGLSPFLLAQFTSAICSVVRRAFPHCLAF SYMDDVVLGAKSVQHLESLFTSITNFLLSLGIHLNPNKTKRWGYSLN FMGYV1GSWGTLPQEHIVLKIKQCFRKLPVNRP1DWKVCQR1VGLLG FAAPFTQCGYPALMPLYACTQSKQAFTFSPTYKAFLCKQYLNLYPVA RQRSGLCQVFADATPTGWGLAIGHRAMRGTFVAPLPIHTAELLAACF ARSRSGAKLIGTDNSVVLSRKYTSFPWLLGCAANW1LRGTSFVYVPS ALNPAADPSAGRLGLYRPLLHLPFRPTTGRTSLYAVSPSVPSHLPDRV HFASPLHVAWRPP (SEQ ID NO: 8)
1.3.7. Furina 2A (F2A) =RKRRAPVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP(SEQ ID NO: 9)
1.3.8. Proteínas de superficie (S) =
1.3.8.1. PreS1 =
MGGWSSKPRQGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWD FNPNKDHWPEANQVGAGAFGPGFTPPHGGLLGWSPQAQGILTTVP
AAPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQA (SEQ ID NO: 52)
1.3.8.2. PreS2 =
MQWNSTTFHQALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFS RTGDPAPN (SEQ ID NO: 53)
1.3.8.3. Superficie (S) = MENTTSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNFLGGAPTC PGQNSQSPTSNHSPTSCPPICPGY RWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLL DYQGMLPVCPLLPGTSTTSTGPCKTCTIPAQGTSMFPSCCCTKPSDGN CTCIPIPSSWAFARFLWEWASVRFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLS VIWMMWYWGPSLYNILSPFLPLLPIFFCLWVYI (SEQ ID NO: 10)
La secuencia de nucleótidos Sli-VHB-CPmutS se proporciona como SEQ ID NO: 46.
2.SIi-VHB-SCPmut
2.1. SIi-VHB-SCPmut: El diseño del inmunógeno se muestra en la Figura 10B
2.2. SIi_VHB-SCPmut: Secuencia de aminoácidos(SEQ ID NO: 11)
MSLLWGGVTVLAAMLIAGOVASVVFLVKGGSMGGWSSKPROGMGTNLSVP
NPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPNKDHWPEANQVGAGAFGPGFTPP
HGGLLGWSPQAQGILTTVPAAPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWN
STTFHQALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRTGDPAPNMEN
TTSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNFLGGAPTCPGQNSQSPT
SNHSPTSCPPICPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLLPG
TSTTSTGPCKTCTIPAQGTSMFPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSSWAFARFLWEWA
SVRFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLSVIWMMWYWGPSLYNILSPFLPLLPIF
FCLWVY1RKRRAPVKOTLNF DLL KL AGP VESA PGPMOLFHLCLIISCSCPTV
QASKLCLGWLWGMDIDPYKEFGASVELLSFLPSDFFPSIRDLLDTASALYREA
LESPEHCSPHHTALRQAILCWGELMNLATWVGSNLEDPASRELVVSYVNVN
MGLKIRQLLWFHISCLTFGRETVLEYLVSFGVWIRTPPAYRPPNAPILSTLPET
TVVRRRGRSPRRRTPSPRRRRSQSPRRRRSQSRESQCGGGSGGGMPLSYQHF
RKLLLLDDEAGPLEEELPRLADEGLNRRVAEDLNLGNLNVSIPWTHKVGNFT
GLASSTVPVFNPEWQTPSFPHIHLQEDIINRCQQYVGPLTVNEKRRLKLIMPAR
FYPNLTKYLPLDKG1KPYYPEHAVNHYFKTRHYLHTLWKAGILYKRETTRSA
SFCGSPYSWEQELQHGRLVFQTSTRHGDESFCSQSSGILSRSPVGPCVRSQLK
QSRLGLQPQQGSLARGKSGRSGSIRARVHPTTRRSFGVEPSGSGHIDNSASSTS
SCLHQSAVRKTAYSHLSTSKRQSSSGHAVELHNIPPSSARSQSEGPIFSAWWL
QFRNSKPASDYALTHIVNLLEDWGPATEHGEHNIRIPRTPARVTGGVFLVDKN
PHNTTESRLVVDFSQFSRGSTHVSWPKFAVPNLQSLTNLLSSNLSWLSLDVSA
AFYHIPLHPAAMPHLLVGSSGLPRYVARLSSTSRN1NYQHGTMQDLHDSCSR
NLYVSLLLLYKTFGRKLHLYSHPIILGFRKIPMGVGLSPFLLAQFTSAICSVVR
RAFPHCLAFSYMDDVVLGAKSVQHLESLFTSITNFLLSLGIHLNPNKTKRWGY
SLNFMGYVIGSWGTLPQEHIVLKIKQCFRKLPVNRPIDWKVCQRIVGLLGFAA
PFTQCGYPALMPLYACIQSKQAFTFSPTYKAFLCKQYLNLYPVARQRSGLCQ
VFADATPTGWGLAIGHRAMRGTFVAPLPIHTAELLAACFARSRSGAKLIGTD
NSVVLSRKYTSFPWLLGCAANW1LRGTSFVYVPSALNPAADPSAGRLGLYRP
LLHLPFRPTTGRTSLYAVSPSVPSHLPDRVHFASPLHVAWRPP
2.3.SIi-VHB-SCPmut: Descripción de las secuencias de aminoácidos del inmunógeno de VHB
2.3.1. Primer aminoácido del polipéptido = M
2.3.2. La cadena invariante de tiburón (Sli) = SLLWGGVTVLAAMLIAGQVASVVFLV (SEQ ID NO: 4) 2.3.3. Enlazador =KGGS(SEQ ID NO: 14)
2.3.4. Proteínas de superficie (S) =
2.3.4.1. PreS1 =
MGGWSSKPRQGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWD FNPNKDHWPEANQVGAGAFGPGFTPPHGGLLGWSPQAQGILTTVP
AAPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQA (SEQ ID NO: 52)
2.3.4.2. PreS2 =
MQWNSTTFHQALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFS RTGDPAPN (SEQ ID NO: 53)
2.3.4.3. Superficie (S) =
MENTTSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNFLGGAPTC PGQNSQSPTSNHSPTSCPPICPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLL DYQGMLPVCPLLPGTSTTSTGPCKTCTIPAQGTSMFPSCCCTKPSDGN CTCIPIPSSWAFARFLWEWASVRFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLS
VIWMMWYWGPSLYNILSPFLPLLPIFFCLWVYI (SEQ ID NO: 10)
2.3.5. Furina 2A (F2A) =RKRRAPVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP(SEQ ID NO: 9)
2.3.6. C =
2.3.6.1. Prenúcleo =
MQLFHLCLIISCSCPTVQASKLCLGWLWG (SEQ ID NO: 16)
2.3.6.2. Núcleo =
MDIDPYKEFGASVELLSFLPSDFFPSIRDLLDTASALYREALESP
EHCSPHHTALRQA1LCWGELMNLATWVGSNLEDPASRELVVSY VNVNMGLKIRQLLWFHISCLTFGRETVLEYLVSFGVWIRTPPAY RPPNAPILSTLPETTVVRRRGRSPRRRTPSPRRRRSQSPRRRRSQS RESQC (SEQ ID NO: 6)
2.3.7. Enlazador =GGGSGGG(SEQ ID NO: 7)
2.3.8. Pmut = (mutaciones: Y63A, C323A, C334A, C338A, C352A, R714A, D788A, R792A)
MPLSYQHFRKLLLLDDEAGPLEEELPRLADEGLNRRVAEDLNLGNLNVSIPWTH
KVGNFTGLASSTVPVFNPEWQTPSFPH1HLQEDIINRCQQYVGPLTVNEKRRLKLI
MPARFYPNLTKYLPLDKGIKPYYPEHAVNHYFKTRHYLHTLWK.AGILYKRETTR
SASFCGSPYSWEQELQHGRLVFQTSTRHGDESFCSQSSGILSRSPVGPCVRSQLKQ
SRLGLQPQQGSLARGKSGRSGSIRARVHPTTRRSFGVEPSGSGH1DNSASSTSSCL
HQSAVRKTAYSHLSTSK.RQSSSGHAVELHNIPPSSARSQSEGP1FSAWWLQFRNSK
PASDYALTHIVNLLEDWGPATEHGEHNIR1PRTPARVTGGVFLVDKNPHNTTESR
LVVDFSQFSRGSTH VSWPKFAVPNLQSLTNLLSSNLSTFGRRLHLYSHPI1LGFRKI
PMGVGLSPFLLAQFTSAICSVVRRAFPHCLAFSYMDDVVLGAKSVQHLESLFTSIT
NFLLSLGIHLNPNKTKRWGYSLNFMGYVIGSWGTLPQEHIVLKIKQCFRKLPVNR
PIDWKVCQRIVGLLGFAAPFTQCGYPALMPLYACIQSKQAFTFSPTYKAFLCKQY
LNLYPVARQRSGLCQVFADATPTGWGLAIGHRAMRGTFVAPLPIHTAELLAACF
ARSRSGAKLIGTDNSVVLSRKYTSFPWLLGCAANW1LRGTSFVYVPSALNPAADP
SAGRLGLYRPLLHLPFRPTTGRTSLYAVSPSVPSHLPDRVHFASPLHVAWRPP
(SEQ ID NO: 8)
La secuencia de nucleótidos Sli-VHB-SCPmut se proporciona como SEQ ID NO: 47:
3.VHB-CPmutS
3.1. VHB-CPmutS: El diseño del inmunógeno se muestra en la Figura 10C
3.2. VHB-CPmutS: Secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 12)
MQLFHLCLIISCSCPTVQASKLCLGWLWGMDIDPYKEFGASVELLSFLPSDFFP SIRDLLDTASALYREALESPEHCSPHHTALRQAILCWGELMNLATWVGSNLE DPASRELVVSYVN VNMGLKIRQLLWFHISCLTFGRETVLEYLVSFGVW1RTPP AYRPPNAPILSTLPETTVVRRRGRSPRRRTPSPRRRRSQSPRRRRSQSRESQCG GGSGGGMPLSYQHFRKLLLLDDEAGPLEEELPRLADEGLNRRVAEDLNLGN LNVSIPWTHKVGNFTGLASSTVPVFNPEWQTPSFPHIIILQEDI1NRCQQYVGPL TVNEKRRLKLIMPARFYPNLTKYLPLDKG1KPYYPEHAVNHYFKTRHYLHTL WKAGILYKRETTRSASFCGSPYSWF.QELQHGREVFQTSTRHGDESFCSQSSGI LSRSPVGPCVRSQLKQSRLGLQPQQGSLARGKSGRSGSIRARVHPTTRRSFGV EPSGSGHIDNSASSTSSCLHQSAVRKTAYSHLSTSKRQSSSGHAVELHNIPPSS ARSQSEGPIFSAWWLQFRNSKPASDYALTHIVNLLEDWGPATEHGEHNIRIPR TPARVTGGVFLVDKNPHNTTESRLVVDFSQFSRGS THVSWPKFAVPNLQSL T NLI.SSNLSWI.SLDVSAAFYHIPLHPAAMPHLEVGSSGLPRYVARI.SSTSRNIN YQHGTMQDLHDSCSRNLYVSLLLLYKTFGRKLHLYSHP1ILGFRKIPMGVGLS PFLLAQFTSAICSVVRRAFPHCLAFSYMDDVVLGAKSVQHLESLFTSITNFLLS LGIHLNPNKTKRWGYSLNFMGYVIGSWGTLPQEHIVLKIKQCFRKLPVNRPIDWKVCQRIVGLLGFAAPFTQCGYPALMPLYACIQSKQAFTFSPTYKAFLCKQYLNLYPVARQRSGLCQVFADATPTGWGLAIGHRAMRGTFVAPLPIHTAELLAA CFARSRSGAKLIGTDNSVVLSRKYTSFPWLLGCAANYVILRGTSFVYVPSALNP AADPSAGRLGLYRPLLHI.PFRPTTGRTSLYAVSPSVPSHLPDRVHFASPLHVA WRPPRKRRAPVKOTLNFDLLKLAGDVESNPGPMGGWSSKPROGMGTNLS VPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPNKDHWPEANQVGAGAFGPGFT PPHGGLLGWSPQAQGILTTVPAAPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQ WNSTTFHQALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRTGDPAPNM ENTTSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILT1PQSLDSWWTSLNFLGGAPTCPGQNSQS PTSNHSPTSC'PPICPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLLP GTSTTSTGPCKTCTIPAQGTSMFPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSSWAFARFLWEWASVRFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLSVIWMMWYWGPSLYNILSPFLPLLPIFFCLWVYI
3.3.VHB-CP<mut>S: Descripción de las secuencias de aminoácidos del inmunógeno de VHB
3.3.1. C =
3.3.1.1. Prenúcleo =
MQLFHLCLIISCSCPTVQASKLCLGWLWG (SEQ ID NO: 16)
3.3.1.2. Núcleo =
MDIDPYKEFGASVELLSFLPSDFFPSIRDLLDTASALYREALESP
EHCSPHHTALRQAILCWGELMNLATWVGSNLEDPASRELVVSY VNVNMGLKIRQLLWFHISCLTFGRETVLEYLVSFGVWIRTPPAY
RPPNAPILSTLPETTVVRRRGRSPRRRTPSPRRRRSQSPRRRRSQS RESQC (SEQ ID NO: 6)
3.3.2. Enlazador =GGGSGGG(SEQ ID NO: 7)
3.3.3. Pmut = (mutaciones: Y63A, C323A, C334A, C338A, C352A, R714A, D788A, R792A)
MPLSYQHFRKLLLLDDEAGPLEEELPRLADEGLNRRVAEDLNLGNLNVSIP WTHKVGNFTGLASSTVPVFNPEWQTPSFPHIHLQEDIINRCQQYVGPLTVNE KRRLKLIMPARFYPNLTKYLPLDKGIKPYYPEHAVNHYFKTRHYLHTLWKA GILYKRETTRSASFCGSPYSWEQELQHGRLVFQTSTRHGDESFCSQSSGILSR SPVGPCVRSQLKQSRLGLQPQQGSLARGKSGRSGSIRARVHPTTRRSFGVEP SGSGHIDNSASSTSSCLHQSAVRKTAYSHLSTSKRQSSSGHAVELHNIPPSSA RSQSEGPIFSAWWLQFRNSKPASDYALTHIVNLLEDWGPATEHGEHNIRIPR TPARVTGGVFLVDKNPHNTTESRLVVDFSQFSRGSTHVSWPKFAVPNLQSL TNLLSSNLSTFGRKLHLYSHPI1LGFRK.IPMGVGLSPFLLAQFTSA1CSVVRRA FPHCLAFSYMDDVVLGAKSVQHLESLFTSITNFLLSLGIHLNPNKTKRWGYS LNFMGYVIGSWGTLPQEHIVLKIKQCFRKLPVNRPIDWKVCQRIVGLLGFA APFTQCGYPALMPLYACIQSKQAFTFSPTYKAFLCKQYLNLYPVARQRSGL CQVFADATPTGWGLAIGHRAMRGTFVAPLPIHTAELLAACFARSRSGAKLI GTDNSVVLSRKYTSFPWLLGCAANWILRGTSFVYVPSALNPAADPSAGRLG LYRPLLHLPFRPTTGRTSLYAVSPSVPSHLPDRVHFASPLHVAWRPP (SEQ ID NO: 8)
3.3.4. Furina 2A (F2A) =RKRRAPVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP(SEQ ID NO: 9)
3.3.5. Proteínas de superficie (S) =
3.3.5.1. PreS1 =
MGGWSSKPRQGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWD FNPNKDHWPEANQVGAGAFGPGFTPPHGGLLGWSPQAQGILTTVP
AAPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQA (SEQ ID NO: 52)
3.3.5.2. PreS2 =
MQWNSTTFHQALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFS RTGDPAPN (SEQ ID NO: 53)
3.3.5.3. Superficie (S)
MENTTSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNFLGGAPTC PGQNSQSPTSNHSPTSCPPICPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLL DYQGMLPVCPLLPGTSTTSTGPCKTCTIPAQGTSMFPSCCCTKPSDGN CTCIPIPSSWAFARFLWEWASVRFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLS
VIWMMWYWGPSLYNILSPFLPLLPIFFCLWVYI (SEQ ID NO: 10) .SIi-VHB-CP<m ut>PreS-S(sh)
4.1. SIi-VHB-CPmutPreS-S(sh): El diseño del inmunógeno se muestra en la Figura 10D 4.2. SIi-VHB-CPmutPreS-s(sh): Secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 13)
MS LLW GGVTVLA A MLI AGP VAS V VFLV K G C C P C C G MOLFHLCLIIS CS CPT V QA SKLCLGW L WGMDIDPY KEF GA S VELLSFLPSDFFP SIRDLLDTASALYRE
ALE S PEHC SPHHTALRQAIL CWGELMN LATW V G S NLEDPASRELVV SY VN V N MGLK IRQ LLWFHIS CLTFG R ETVLEY LVSFGVWIRTPPAYRPPNAPII. STLP E TTVV RRRGR SPRRRTPSPRKRRS OSFRRRRSO SKESOCGGGSGGGMPLSY OH FRKLLLLDDE AGPLEEELPRL ADEGLNRRV A EDLNLGNLNV SIP WTHKV GN F TGL¿S STVPVFNPEW QTP SFPHIHLQEDIINRCQQ Y V GPLTVN E KRRLKLIMP A RFYPNLTKYLPLDKGIKPYYPEHAVNHYFKTRHYLHTLWKAGILYKRETTRS ASFCGSFYS WEQELQHGRL V F QTSTRHGDE S F C SQ S SGIL SRS P V GPC VRSQL KQ SRLGL QP QQG S L ARGK SGRS GSIRARVHPTTRRSFGV EPS G SGHIDN S A SST SSCLHQSAV RKTAYSH L STSKRQS S SG HA VELHNIPPS S ARSQ SEGPIFS A WWL QFRNSKPASDYAL THIVN LLED WGP AT E HGEHNIRIPRTP ARVTGGV FLVD KN PHNTTES RLV VDF S QFSRGSTHV SWPKFAVPNL QSLTN LLS SNL ST FGRKLH L Y SHPIILGFRKIPMG V GLSPFL LAQFTSAIC S V VRRAF PHCLAF S YMDD WLGA KS VQHLES LFTSITNFLLS LGtHLNPNKTKRW GY SLN FMGY VTGSW GTLP Q E H IV LKIKQCFRKLP VN RPID WK V C QRIV GLLGF AAPFTQCGYP ALM PLY A CIQS KQAFTFSPTYKAFLCKQYLNLYPVARQRSGLCQVFADATPTGWGLAIGHRA MRGTFVAPLP1HTAELLAACFARSRSGAKLIGTDNSVVLSRKYTSFPWLLGCA AN W3 LRGTS F VY VP S ALN P AAD P S AGRLGLYRPL LHLPFRPTTGRTSLYAV S P SVPSHLPD RVHF A SPLH V AWRPPKSPN SNNPD WDFNPNKDHWPEAN O V GAG AFGPGFTPPHGGLLGWS PQ AQGILTTVPA APPP A STN RQ SGRQPTPISPPLRD S HPQAMQWNSTTFHQALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRT GDP A PNGSKGKRKRRAPVKOTLNFDLLKLAGDVESNPGPMGGW SSKPRQG MGTNLS VPNPLG FFPDHÜ LD PAFG AN SNWPD WDFNPWKDHWP E AN O V GLEG G S GG MENTTS QFLGPLL V LO AGFFLLTRILTIPO SLDS WWTSLNFLGGAPTCP GQNSQSPTSNHSPTSCPPICPGYRWMCLRRFUFLFILLLCLIFLLVLLDYQGML P V CPLLPGTS T T STGP CKTCTIP AQGTSMFPSCC CTKP SDGN C TCIPIPS SW AFA RFLWEW AS VRFS WL SL L VPF VQWF V GL SPTVWLS VIWMMWYW G P SLYNIL S P F LPLLPIFFCLW VYI
.3. SIi-VHB-CP<mut>PreS-S(sh): Descripción de las secuencias de aminoácidos del inmunógeno de VHB
4.3.1. Primer aminoácido del polipéptido = M
4.3.2. La cadena invariante de tiburón (Sli) = SLLWGGVTVLAAMLIAGQVASVVFLV (SEQ ID NO: 4) 4.3.3. Enlazador = KGGGPGGG (SEQ ID NO: 5)
4.3.4. C =
4.3.4.1. Prenúcleo =
MQLFHLCLIISCSCPTVQASKLCLGWLWG (SEQ ID NO: 16)
4.3.4.2. Núcleo =
MDIDPYKEFGASVELLSFLPSDFFPSIRDLLDTASALYREALESP
EHCSPHHTALRQAILCWGELMNLATWVGSNLEDPASRELVVSY VNVNMGLKIRQLLWFHISCLTFGRETVLEYLVSFGVWIRTPPAY RPPNAPILSTLPETTVVRRRGRSPRRRTPSPRRRRSQSPRRRRSQS RESQC (SEQ ID NO: 6)
4.3.5. Enlazador = GGGSGGG (SEQ ID NO: 7)
4.3.6. Pmut = (mutaciones: Y63A, C323A, C334A, C338A, C352A, R714A, D788A, R792A)
MPLSYQHFRKLLLLDDEAGPLEEELPRLADEGLNRRVAEDLNLGNLNVSIP WTHK.VGNFTGLASSTVPVFNPEWQTPSFPHIHLQEDIINRCQQYVGPLTVNE KRRLKLIMPARFYPNLTKYLPLDKGIKPYYPEHAVNHYFKTRHYLHTLWKA GILYKRETTRSASFCGSPYSWEQELQHGRLVFQTSTRHGDESFCSQSSGILSR SPVGPCVRSQLKQSRLGLQPQQGSLARGKSGRSGSIRARVHPTTRRSFGVEP SGSGHIDNSASSTSSCLHQSAVRKTAYSHLSTSKRQSSSGHAVELHNIPPSSA RSQSEGPIFSAWWLQFRNSKPASDYALTHIVNLLEDWGPATEHGEHNIRIPR TPARVTGGVFLVDKNPHNTTESRLVVDFSQFSRGSTHVSWPKFAVPNLQSL TNLLSSNLSTFGRKLHLYSHPIILGFRKIPMGVGLSPFLLAQFTSAICSVVRRA FPHCLAFSYMDDVVLGAKSVQHLESLFTSITNFLLSLGIHLNPNKTKRWGYS LNFMGYVIGSWGTLPQEHIVLKIKQCFRKLPVNRPIDWKVCQRIVGLLGFA APFTQCGYPALMPLYACIQSKQAFTFSPTYKAFLCKQYLNLYPVARQRSGL CQVFADATPTGWGLAIGHRAMRGTFVAPLPIHTAELLAACFARSRSGAKLI GTDNSVVLSRKYTSFPWLLGCAANWILRGTSFVYVPSALNPAADPSAGRLG LYRPLLHLPFRPTTGRTSLYAVSPSVPSHLPDRVHFASPLHVAWRPP (SEQ ID NO: 8)
4.3.7. Enlazador = KSP
4.3.8. NAPreSI y PreS2 =
NSNNPDWDFNPNKDHWPEANQVGAGAFGPGFTPPHGGLLGWSPQA QGILTTVPAAPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWNSTTFHQ ALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRTGDPAPN (SEQ ID NO: 15)
4.3.9. Enlazador = GSKGK (SEQ ID NO: 20)
4.3.10. Furina 2A (F2A) = RKRRAPVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP (SEQ ID NO: 9)
4.3.11. S(sh) =
4.3.11.1. CAPreSI =
MGGWSSKPRQGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPD WDFNPNKDHWPEANQVG (SEQ ID NO: 21)
4.3.11.2. Enlazador =LEGGSGG(SEQ ID NO: 22)
4.3.11.3. Superficie (S) =
MENTTSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNFLGGAPTCPGQN SQSPTSNHSPTSCPPICPGYRWMCLRRF11FLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPV CPLLPGTSTTSTGPCKTCTIPAQGTSMFPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSSWAFAR FLWEWASVRFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLSVIWMMWYWGPSLYNIL SPFLPLLPIFFCLWVYI (SEQ ID NO: 18)
La secuencia de nucleótidos SIi-VHB-CPmutPreS-S (sh) se proporciona como SEQ ID NO: 48.
5.MVA-SIi-VHB-PreS-P<mut>-C-S(sh)
5.1. MVA-SIi-VHB-PreS-P<mut>-C-S(sh): El diseño del inmunógeno se muestra en la Figura 10E
5.2. MVA-SIi-VHB-PreS-P<mut>-C-S(sh): Secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 23)MSLLWGGVTVLAAMLIAGOVASVVFLVSKSGPPSGKSNSNNPDWDFNPNKDHWPEAN QVGAGAFGPGFTPPHGGLLGWSPQAQGILTTVPAAPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHP OAMOWNSTTFHOALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRTGDPAPNGSKS GSK.MPLSYQHFRK.LLLLDDEAGPLEEELPRLADEGLNRRVAEDLNLGNLNVS1PWTHK.V GNFTGLASSTVPVFNPEWQTPSFPHIHLQEDIINRCQQYVGPLTVNEK.RRLKLIMPARFYP NLTKYLPLDKGIKPYYPEHAVNHYFKTRH YLHTLWKAGILYKRETTRSASFCGSPYSWE QELQHGRLVFQTSTRHGDESFCSQSSGILSRSPVGPCVRSQLKQSRLGLQPQQGSLARGKS GRSGSIRARVHPTTRRSFGVEPSGSGHIDNSASSTSSCLHQSAVRKTAYSHLSTSKRQSSSG HAVELHNIPPSSARSQSEGPIFSAWWLQFRNSKPASDYALTHIVNLLEDWGPATEHGEHNI RIPRTPARVTGGVFLVDK.NPHNTTESRLVVDFSQFSRGSTH VSWPK.FAVPNLQSLTNLLSS NLSWLSLDVSAAFYHIPLHPAAMPHLLVGSSGLPRYVARLSSTSRNINYQHGTMQDLHDS CSRNLYVSLLLLYKTFGRKLHLYSHPI1LGFRK.IPMGVGLSPFLLAQFTSAICSVVRRAFPH CLAFSYMDD VVLGAKSVQHLESLFTS1TNFLLSLG1HLNPNKTKRWGYSLNFMGYV1GSW GTLPQEHIVLK.IKQCFRKLPVNRPIDWK.VCQRI VGLLGFAAPFTQCGYPALMPLYACIQSK QAFTFSPTYKAFLCKQYLNLYPVARQRSGLCQVFADATPTGWGLAIGHRAMRGTFVAPL PIHTAELLAACFARSRSGAK.L1GTDNSVVLSRKYTSFPWLLGCAANWILRGTSFVYVPSAL NPAADPSAGRLGLYRPLLHLPFRPTTGRTSLYAVSPSVPSHLPDRVHFASPLH VAWRPPSK SPGSGPPMQLFHLCLIJSCSCPTVQASKLCLGWLWGMD1DPYK.EFGASVELLSFLPSDFFP SIRDLLDTASALYREALESPEHCSPHHTALRQAILCWGELMNLATWVGSNLEDPASRELV VSYVNVNMGLKIRQLLWFHISCLTFGRETVLEYLVSFGVWIRTPPAYRPPNAPILSTLPET TVVRRRGRSPRRRTPSPRRRRSQSPRRRRSQSRESQC
MGGWSSK.PRQGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPNKDHWPEANQV GASKGGKSGMENTTSGFLGPLLVLOAGFFLLTRILTIPOSLDSWWTSLNFLGGAPTCPGO NSQSPTSNHSPTSCPPICPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLLPGTS TTSTGPCKTCT1PAQGTSMFPSCCCTKPSDGNCTC1P1PSSWAFARFLWEWAS VRFSWLSL L VPFVQWFVGLSPTVWLSVIWMMWY WGPSLYNILSPFLPLLPIFFCLWVYI
5.3.MVA-SIi-VHB-PreS-P<mut>-C-S(sh): Descripción de las secuencias de aminoácidos del inmunógeno de VHB
5.3.1.1. Primer aminoácido del polipéptido = M
5.3.1.2. Cadena invariante de tiburón (SIi) =
SLLWGGVTVLAAMLIAGQVASVVFLV (SEQ ID NO: 4)
5.3.1.3. Enlazador =SKSGPPSGKS(SEQ ID NO: 31)
5.3.1.4. NAPreS1 y PreS2 =
NSNNPDWDFNPNKDHWPEANQVGAGAFGPGFTPPHGGLLGWS
PQAQGILTTVPAAPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQW
NSTTFHQALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRT GDPAPN (SEQ ID NO: 15)
5.3.1.5. Enlazador =GSKSGSK(SEQ ID NO: 32)
5.3.1.6. Pmut = (mutaciones: Y63A, C323A, C334A, C338A, C352A, R714A, D788A, R792A) MPLSYQHFRKLLLLDDEAGPLEEELPRLADEGLNRRVAEDLNL GNLNVSIPWTHKVGNFTGLASSTVPVFNPEWQTPSFPHIHLQED IINRCQQYVGPLTVNEKRRLKLIMPARFYPNLTKYLPLDKGIKP YYPEHAVNHYFKTRHYLHTLWKAGILYKRETTRSASFCGSPYS WEQELQHGRLVFQTSTRHGDESFCSQSSGILSRSPVGPCVRSQL KQSRLGLQPQQGSLARGKSGRSGSIRARVHPTTRRSFGVEPSGS GHIDNSASSTSSCLHQSAVRKTAYSHLSTSKRQSSSGHAVELHN IPPSSARSQSEGPIFSAWWLQFRNSKPASDYALTHIVNLLEDWG PATEHGEHNIRIPRTPARVTGGVFLVDKNPHNTTESRLVVDFSQ FSRGSTHVSWPKFAVPNLQSLTNLLSSNLSTFGRKLHLYSHPIIL GFRKIPMGVGLSPFLLAQFTSAICSVVRRAFPHCLAFSYMDDVV LGAKSVQHLESLFTSITNFLLSLGIHLNPNKTKRWGYSLNFMGY VIGSWGTLPQEHIVLKIKQCFRKLPVNRPIDWKVCQRIVGLLGF AAPFTQCGYPALMPLYACIQSKQAFTFSPTYKAFLCKQYLNLYP VARQRSGLCQVFADATPTGWGLAIGHRAMRGTFVAPLPIHTAE LLAACFARSRSGAKLIGTDNSVVLSRKYTSFPWLLGCAANWILR GTSFVYVPSALNPAADPSAGRLGLYRPLLHLPFRPTTGRTSLYA VSPSVPSHLPDRVHFASPLHVAWRPP (SEQ ID NO: 8)
5.3.1.7. Enlazador =SKSPGSGPP(SEQ ID NO: 33)
5.3.1.8. C =
5.3.1.8.1. Prenúcleo
MQLFHLCLIISCSCPTVQASKLCLGWLWG (SEQ ID NO: 16)
5.3.1.8.2. Núcleo =
MDIDPYKEFGASVELLSFLPSDFFPSIRDLLDTASALYREALESP
EHCSPHHTALRQAILCWGELMNLATWVGSNLEDPASRELVVSY VNVNMGLKIRQLLWFHISCLTFGRETVLEYLVSFGVWIRTPPAY RPPNAPILSTLPETTVVRRRGRSPRRRTPSPRRRRSQSPRRRRSQS RESQC (SEQ ID NO: 6)
5.3.19.S(sh)
5.3.1.9.1. CAPreS1 =
MGGWSSKPRQGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNN PDWDFNPNKDHWPEANQVG
5.3.1.9.2. Enlazador =
ASKGGKSG(SEQ ID NO: 34)
5.3.1.9.3. Superficie =MENTTSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNFL GGAPTCPGQNSQSPTSNHSPTSCPPICPGYRWMCLRRFIIFLF ILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLLPGTSTTSTGPCKTCTIPA
QGTSMFPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSSWAFARFLWEWASVR FSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLSVIWMMWYWGPSLYNI LSPFLPLLPIFFCLWVYI (SEQ ID NO: 18)
5.4. La secuencia de nucleótidos de MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-S (sh) se proporciona como SEQ ID NO: 24.
5.5. Descripción de las secuencias de nucleótidos de MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut -C-S (sh):
5.5.1. Flanco izquierdo de F11 = bases 1 - 1097 (SEQ ID NO: 35)
5.5.2. SIi-VHB-PreS-Pmut-C = bases 1098 - 4838 (SEQ ID NO: 37)
5.5.3. Secuencia terminadora de la transcripción = bases 4839 - 4845
TTTTTGT
5.5.4. promotor mH5 = bases 4846 - 4942 (SEQ ID NO: 28)
5.5.5. S(sh) = bases 4943 - 5824 (SEQ ID NO: 38)
5.5.6. Flanco derecho de F11 = bases 5825 - 7143 (SEQ ID NO: 36)
6.SIi-VHB-CP<mut>PreS-TPA-S(sh)
6.1. SIi-VHB-CPmutPreS-TPA-S(sh): El diseño del inmunógeno se muestra en la Figura 10F
6.2. SIi-VHB-CPmutPreS-TPA-S(sh): Secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 25) MSLLWGGVTVLAAMLIAGQVASVVFLVKGGGPGGGMQLFHLCLllSCSCPT VQASKLCLGWLWGMDIDPYKEFGASVELLSFLPSDFFPSIRDLLDTASALYRE ALESPEHCSPHHTALRQAILCWGELMNLATWVGSNLEDPASRELVVSYVNV NMGLKIRQLLWFHISCLTFGRETVLEYLVSFGVWIRTPPAYRPPNAPILSTLPE TTVVRRRGRSPRRRTPSPRRRRSOSPRRRRSQSRESOCGGGSGGGMPLSYOH FRKLLLLDDEAGPLEEELPRLADEGLNRRVAEDLNLGNLNVSIPWTHKVGNF TGLASSTVPVFNPEWQTPSFPHIHLQEDIINRCQQYVGPLTVNEKRRLKLIMPARFYPNLTKYLPLDKGIKPYYPEHAVNHYFKTRHYLHTLWKAGILYKRETTRSASFCGSPYSWEQELQHGRLVFQTSTRHGDESFCSQSSGILSRSPVGPCVRSQL KQSRLGLQPQQGSLARGKSGRSGSIRARVHPTTRRSFGVEPSGSGHIDNSASST SSCLHQSAVRK.TAYSHLSTSK.RQSSSGHAVELHNIPPSSARSQSEGPIFSAWWL QFRNSKPASDYALTHIVNLLEDWGPATEHGEHNIRIPRTPARVTGGVFLVDKN PHNTTESRLVVDFSQFSRGSTHVSWPKFAVPNLQSLTNLLSSNLSTFGRKLHL YSHPIILGFRKIPMGVGLSPFLLAQFTSAICSVVRRAFPHCLAFSYMDDVVLGA KSVQHLESLFTSITNFLLSLGIHLNPNKTKRWGYSLNFMGYVIGSWGTLPQEHIVLK1KQCFRKLPVNRP1DWKVCQRIVGLLGFAAPFTQCGYPALMPLYACIQS KQAFTFSPTYKAFLCKQYLNLYPVARQRSGLCQVFADATPTGWGLAIGHRAMRGTFVAPLPIHTAELLAACFARSRSGAKLIGTDNSVVLSRKYTSFPWLLGCA
ANWILRGTSFVYVPSALNPAADPSAGRLGLYRPLLHLPFRPTTGRTSLYAVSP SVPSHLPDRVHFASPLHVAWRPPKSPNSNNPDWDFNPNKDHWPEANQVGAG AFGPGFTPPHGGLLGWSPQAQGILTTVPAAPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDS HPQAMQWNSTTFHQALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRT GDPAPNGSKGKRKRRAPVKOTLNFDLLKLAGPVESNPGPMPAMkRGLCC VLLLCGAVFVSPSOEIHARFRRMGGWSSKPROGMGTNLSVPNPI.GFFPDHOL DPAFGANSNNPDWDFNPNKDHWPEANQVGLEGGSGGMENTTSGFLGPLLV LQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNFLGGAPTCPGQNSQSPTSNHSPTSCPPIC PGYRWMCLRRFllFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLLPGTSTTSTGPC'KTC TIPAQGTSMFPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSSWAFARFLWEWASVRFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLSVIWMMWYWGPSLYNILSPFLPLLPIFFCLWVYI
6.3.SIi-VHB-CP<mut>PreS-TPA-S(sh): Descripción de las secuencias de aminoácidos del inmunógeno de VHB
6.3.1. Primer aminoácido del polipéptido = M
6.3.2. La cadena invariante de tiburón (SIi) = SLLWGGVTVLAAMLIAGQVASVVFLV (SEQ ID NO: 4) 6.3.3. Enlazador =KGGGPGGG(SEQ ID NO: 5)
6.3.4. C =
6.3.4.1. Prenúcleo
MQLFHLCLIISCSCPTVQASKLCLGWLWG (SEQ ID NO: 16)
6.3.4.2. Núcleo =
MDIDPYKEFGASVELLSFLPSDFFPSIRDLLDTASALYREALESP EHCSPHHTALRQAILCWGELMNLATWVGSNLEDPASRELVVSY VNVNMGLKIRQLLWFHISCLTFGRETVLEYLVSFGVWIRTPPAY RPPNAP1LSTLPETTVVRRRGRSPRRRTPSPRRRRSQSPRRRRSQS RESQC (SEQ ID NO: 6)
6.3.5. Enlazador =GGGSGGG(SEQ ID NO: 7)
6.3.6. Pmut = (mutaciones: Y63A, C323A, C334A, C338A, C352A, R714A, D788A, R792A)
MPLSYQHFRKLLLLDDEAGPLEEELPRLADEGLNRRVAEDLNLGNLNVSIP WTHKVGNFTGLASSTVPVFNPEWQTPSFPHIHLQEDIINRCQQYVGPLTVNE KRRLKLIMPARFYPNLTKYLPLDKGIKPYYPEHAVNHYFKTRHYLHTLWKA GILYKRETTRSASFCGSPYSWEQELQHGRLVFQTSTRHGDESFCSQSSGILSR SPVGPCVRSQLKQSRLGLQPQQGSLARGKSGRSGSIRARVHPTTRRSFGVEP SGSGHIDNSASSTSSCLHQSAVRKTAYSHLSTSKRQSSSGHAVELHNIPPSSA RSQSEGPIFSAWWLQFRNSKPASDYALTHIVNLLEDWGPATEHGEHNIRIPR TPARVTGGVFLVDKNPHNTTESRLVVDFSQFSRGSTHVSWPKFAVPNLQSL TNLLSSNLSTFGRKLHLYSHPIILGFRKIPMGVGLSPFLLAQFTSAICSVVRRA FPHCLAFSYMDDVVLGAKSVQHLESLFTS1TNFLLSLGIHLNPNKTKRWGYS LNFMGYVIGSWGTLPQEHIVLKIK.QCFRKLPVNRPIDWKVCQRIVGLLGFA APFTQCGYPALMPLYACIQSKQAFTFSPTYKAFLCKQYLNLYPVARQRSGL CQVFADATPTGWGLAIGHRAMRGTFVAPLPIHTAELLAACFARSRSGAKLI GTDNSVVLSRKYTSFPWLLGCAANWILRGTSFVYVPSALNPAADPSAGRLG LYRPLLHLPFRPTTGRTSLYAVSPSVPSHLPDRVHFASPLHVAWRPP (SEQ ID NO: 8)
6.3.7. Enlazador =KSP
6.3.8. NAPreSI y PreS2 =
NSNNPDWDFNPNKDHWPEANQVGAGAFGPGFTPPHGGLLGWSPQA QGILTTVPAAPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWNSTTFHQ ALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRTGDPAPN (SEQ ID NO; 15)
6.3.9. Enlazador =GSKGK(SEQ ID NO: 20)
6.3.10. Furina 2A (F2A) =RKRRAPVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP(SEQ ID NO: 9)
6.3.11. TPA = MDAMKRGLCCVLLLCGAVFVSPSQEIHARFRR (SEQ ID NO: 30)
6.3.12. S(sh) =
6.3.12.1. CAPreS1 =
MGGWSSKPRQGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPD WDFNPNKDHWPEANQVG (SEQ ID NO: 21)
6.3.12.2. Enlazador =LEGGSGG(SEQ ID NO: 22)
6.3.12.3. Superficie (S) =
MENTTSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNFLGGAPTCPGQN SQSPTSNHSPTSCPPICPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPV CPLLPGTSTTSTGPCKTCTIPAQGTSMFPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSSWAFAR FLWEWAS VRFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLSVIWMMWYWGPSLYNIL SPFLPLLPIFFCLWVYI (SEQ ID NO: 18)
La secuencia de nucleótidos Sli-VHB-CPmutPreS-TPA-S (sh) se proporciona como SEQ ID NO: 49.
7.MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-TPA-S(sh)
7.1. MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-TPA-S(sh): El diseño del inmunógeno se muestra en la Figura 10G 7.2. MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-TPA-S(sh): Secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 26)
MSLLWGGVTVLAAML1AGOVASVVFLVSKSGPPSGKSNSNNPDWDFNPNK.DHWPEAN
QVGAGAFGPGFTPPHGGLLGWSPQAQGILTTVPAAPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHP
QAMQVVNSTTFHQALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRTGDPAPNGSKS
GSKMPLSYOHFRKLLLLDDEAGPLEEELPRLADEGLNRRVAEDLNLGNLNVS1PWTHKV
GNFTGLASSTVPVFNPEWQTPSFPHIHLQEDIINRCQQYVGPLTVNEKRRLKL1MPARFYP
NLTKYLPLDKGIKPYYPEHAVNHYFKTRHYLHTLWKAGILYKRETTRSASFCGSPYSWE
QELQHGRLVFQTSTRHGDESFCSQSSG1LSRSPVGPCVRSQLKQSRLGLQPQQGSLARGKS
GRSGSIRARVHPTTRRSFGVEPSGSGHIDNSASSTSSCLHQSAVRKTAYSHLSTSKRQSSSG
HAVELHNIPPSSARSQSEGP1FSAWWLQFRNSK.PASDYALTH1VNLLEDWGPATEHGEHNI
RIPRTPARVTGGVFLVDK.NPHNTTESRLVVDFSQFSRGSTHVSWPK.FAVPNLQSLTNLLSS
NLSWLSLDVSAAFYHIPLHPAAMPHLLVGSSGLPRYVARLSSTSRNINYQHGTMQDLHDS
CSRNLYVSLLLLYKTFGRKLHLYSHPIILGFRKIPMGVGLSPFLLAQFTSAICSVVRRAFPH
CLAFSYMDDVVLGAKSVQHLESLFTSITNFLLSLGIHLNPNKTKRWGYSLNFMGYVIGSW
GTLPQEFUVLKIKQCFRKLPVNRPIDWKVCQRIVGLLGFAAPFTQCGYPALMPLYACIQSK
QAFTFSPTYKAFLCKQYLNLYPVARQRSGLCQVFADATPTGWGLAIGHR AMRGTFVAPL
P1HTAELLAACFARSRSGAKLIGTDNSVVLSRK.YTSFPWLLGCAANWILRGTSFVYVPSAL
NPAADPSAGRLGLYRPLLHLPFRPTTGRTSLYAVSPSVPSHLPDRVHFASPLHVAWRPPSK
SPCSGPPMOLFHLCLI1SCSCPTVOASKLCLGWLWGMDIDPYKEFGASVELLSFLPSDFFP
SIRDLLDTASALYREALESPEHCSPHHTALRQAILCWGELMNLATWVGSNLEDPASRELV
VSYVNVNMGLKIRQLLWFHISCLTFGRETVLEYLVSFGVWIRTPPAYRPPNAPILSTLPET
TVVRRRGRSPRRRTPSPRRRRSOSPRRRRSOSRESQCMDAMKRGLCCVLLLCGAVFVSPS
OE1HARFRRMGGWSSK.PROGMGTNLSVPNPLGFFPDHOLDPAFGANSNNPDWDFNPNKD
HWPEANOVGASKGGKSGMENTTSGFLGPLLVLOAGFFLLTR1LTIPOSLDSWWTSLNFL
GGAPTCPGONSQSPTSNHSPTSCPPICPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLP
VCPLLPGTSTTSTGPCKTCTIPAQGTSMFPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSSWAFARFLWEWAS
VRFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLSVIWMMWYWGPSLYNILSPFLPLLPIFFCLWVYI
7.3.MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-TPA-S(sh): Descripción de las secuencias de aminoácidos del inmunógeno de VHB
7.3.1.1. Primer aminoácido del polipéptido = M
7.3.1.2. Cadena invariante de tiburón (Sli) =
SLLWGGVTVLAAMLIAGQVASVVFLV (SEQ ID NO: 4)
7.3.1.3. Enlazador =SKSGPPSGKS(SEQ ID NO: 31)
7.3.1.4. NAPreSI y PreS2 =NSNNPDWDFNPNKDHWPEANQVGAGAFGPGFTPPHGGLLGWS PQAQGILTTVPAAPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQW NSTTFHQALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRT GDPAPN (SEO ID NO: 15)
7.3.1.5. Enlazador =GSKSGSK(SEQ ID NO: 32)
7.3.1.6. Pmut = (mutaciones: Y63A, C323A, C334A, C338A, C352A, R714A, D788A, R792A)MPLSYQHFRKLLLLDDEAGPLEEELPRLADEGLNRRVAEDLNL GNLNVSIPWTHKVGNFTGLASSTVPVFNPEWQTPSFPHIHLQED
1INRCQQYVGPLTVNEKRRLKLIMPARFYPNLTKYLPLDKG1KP YYPEHAVNHYFKTRHYLHTLWKAGILYKRETTRSASFCGSPYS WEQELQHGRLVFQTSTRHGDESFCSQSSGILSRSPVGPCVRSQL KQSRLGLQPQQGSLARGKSGRSGSIRARVHPTTRRSFGVEPSGS GHIDNSASSTSSCLHQSAVRKTAYSHLSTSKRQSSSGHAVELHN
1PPSSARSQSEGPIFSAWWLQFRNSKPASDYALTHIVNLLEDWG PATEHGEHNIRIPRTPARVTGGVFLVDKNPHNTTESRLVVDFSQ FSRGSTHVSWPKFAVPNLQSLTNLLSSNLSTFGRKLHLYSHP1IL GFRKIPMGVGLSPFLLAQFTSAICSVVRRAFPHCLAFSYMDDVV
LGAKSVQHLESLFTSITNFLLSLGIHLNPNKTKRWGYSLNFMGY VIGSWGTLPQEHIVLKIKQCFRKLPVNRPIDWKVCQRIVGLLGF AAPFTQCGYPALMPLYACIQSKQAFTFSPTYKAFLCKQYLNLYP VARQRSGLCQVFADATPTGWGLAIGHRAMRGTFVAPLPIHTAE LLAACFARSRSGAKLIGTDNSVVLSRKYTSFPWLLGCAANWILR GTSFVYVPSALNPAADPSAGRLGLYRPLLHLPFRPTTGRTSLYA VSPSVPSHLPDRVHFASPLHVAWRPP (SEQ ID NO: 8)
7.3.1.7. Enlazador =SKSPGSGPP(SEQ ID NO: 33)
7.3.1.8. C =
7.3.1.8.1, Prenúcleo =
MQLFHLCLIISCSCPTVQASKLCLGWLWG (SEQ ID NO: 16)
7.3.1.8.2. Núcleo =
MDIDPYKEFGASVELLSFLPSDFFPSIRDLLDTASALYREALESP EHCSPHHTALRQAILCWGELMNLATWVGSNLEDPASRELVVSY VNVNMGLKIRQLLWFHISCLTFGRETVLEYLVSFGVWIRTPPAY RPPNAPILSTLPETTVVRRRGRSPRRRTPSPRRRRSQSPRRRRSQS RESQC (SEQ ID NO: 6)
7.3.1.9. TPA = MDAMKRGLCCVLLLCGAVFVSPSQEIHARFRR (SEQ ID NO: 30)
7.3.1.10. S(sh)_ =
7.3.1.10.1. CAPreSI =MGGWSSKPRQGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPD WDFNPNKDHWPEANQVG (SEQ ID NO: 21)
7.3.1.10.2. Enlazador =ASKGGKSG(SEQ ID NO: 34)
7.3.1.10.3. Superficie (S) =MENTTSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNF LGGAPTCPGQNSQSPTSNHSPTSCPPICPGYRWMCLRRFIIF LFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLLPGTSTTSTGPCKTCTI PAQGTSMFPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSSWAFARFLWEWAS VRFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLSVIWMMWYWGPSL YNILSPFLPLLPIFFCLWVYI (SEQ ID NO: 18)
7.4. Las secuencias de nucleótidos de MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-TPA-S (sh) se proporcionan como SEQ ID NO: 27
7.5. Descripción de las secuencias de nucleótidos de MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut -C-TPA-S (sh):
7.5.1. Flanco izquierdo de F11 = bases 1 - 1097 (SEQ ID NO: 35)
7.5.2. SIi-VHB-PreS-Pmut-C = bases 1098 - 4838 (SEQ ID NO: 37)
7.5.3. Secuencia terminadora de la transcripción = bases 4839 - 4845
TTTTTGT
7.5.4. promotor mH5 = bases 4846 - 4942 (SEQ ID NO: 28)
7.5.5. TPA = bases 4943 - 5038 (SEQ ID NO: 29)
7.5.6. S(sh) = bases 5039 - 5920 (SEQ ID NO: 38)
7.5.7. Flanco derecho de F11 = bases 5921 - 7239 (SEQ ID NO: 36)
8. Las secuencias de nucleótidos de la versión de bajo contenido de GC MVA-Sli-VHB-PreS-Pmut-C-TPA-S (sh) (SEQ ID NO: 58):
gtaatctattcgatatat:tg1:tgctaatagtata£:tgg[:tcaataaí:tgtggatggaaaat:ctataataata£attaatatc a tccgü tggtgctaggg ttü tttgga tgga tgcg tü taaa ttU cttgcgg tttü tctttü caagactü ttg ttü tca ttgggg tagcaaaccagagagccgacca ttcga tttaa taaaaaaa tcaga tgctaaacgcaa ttctaaa tcg ttgg tcaaagaa t c ta tggca tccttgaaa tccttg tacgaggca ttcgagacacaa tcaggagcg ttagaag ttttaa tgag tcca tg tagga tg ttttcg ttttc ta g a a ta g a a g a ca tg ttc tta a cta g tg tca tta a ta g a g ta tccg a g a a ta ctg g a a tg g g g a tg ta t ta tcc tactaacga ta ta f;t;ttc tcta ttta tcgaatta tcta tctg tctagatta ta tta tagtaaataatcaggaa itccaa caaü ta tcg ta tcaaa tctg ttc tcgata tca tttc ttcü aaacaatü ccctgcaggü cgtcccaü ctü cgttaaü aatggt a ca a a a g g a a a g tta ta ta tcgcg ttg tg taaag ttaccg tacctactaacgacca ta ttccag tag ttta tcacga tga tg acaatactaccacctttattacagtattgacgtccgtcgatattgaaactgctatcagagcaggatattcgatagtcgaatt a g g g g c ttta ca a tggga taa taa ta ttccagaacttaaaaacgg tttac tgga tag ta tcaaga tga ttta tgacttgaa cg ca g tta ca a ca a a ta a ttta ttg g a a ca g ctca ta g a a a a ta tta a cttta a ca a ctc ta g ta ta a tttcg ttg tttta ta catttgcf;a ttagtta ttgc£;gagcattca tttactcaatta tggaaacta tagatc:cggtg ta ta ta tcttag ttcagtta ta a a g a a tta ta cg ttag tagctc tta taaaga ta ttaa tgaa tcca tgag tcaga tgg taaaa tta taaaaag tgaaaaac aatattatttttatcgttggttgttacattATGTCACTTCTTTGGGGCGGAGTTACAGTTCTTGCTGCTATGCTTATTGCTGGACAAGTTGCTTCTGTTGTGTTTCTTGTTTCTAAArCTGGACCTCCTTCTGGAAAATC T A ATT CT A A CAATC CT G ATTG G G A TTTC AATC CT A A C A A AG AT C ATTG G C CT G A A G C TA AT C A AG TTG G AG CTG GT G CTTTTG G A C C TG G TTTT AC A C CTCCT C AT G G T G G ATTG CTTG G ATG GTCACCTCAAGCTCAGGGAATTCTTACAACAGTTCCAGCTGCTCCTCCTCCTGCTTCTACAAATAGACAATCTGGTAGACAACCTACACCTATTTCTCCACCTCTTAGAGATTCTCATCCTCAAGCTATGCAATGGAATTCTACTACATTTCATCAAGCTTTGCTTGATCCTAGAGTTAGAGGACTTTATTTTCCTGCT G G TG G A A GTTCTT CTG G A A C AGTT A ATC C TG TTCCT A C A A C A G CTTCT C C A ATTTCTTCT AT AT TTTCT A G A A C A G G C G ATC CT G CTC C T A AT G G ATC A A AATC TG G ATC A A A A ATG C CT CTG TCTTAT C A A C A CTTT AG A A A ATT G CT G CTTCTTG AT G ATG A AG CTG G A C CTCTT G A A G A AG A ATT G C CT AGACTTGCTGATGAAGGACTTAATAGAAGAGTTGCTGAAGATCTTAATCTGGGAAATCTTAATGTTTCTATTCCTTGGACACACAAAGTTGGAAATTTCACAGGACTTGCATCTTCTACAGTGCCTGTTT TTAATCCTGAATGGCAAACACCTTCTTTTCCACATATTCATCTGCAAGAGGATATCATCAATAGA TGTCAACAATATGTTGGACCACTGACAGTTAATGAGAAGAGAAGGCTTAAACTTATTATGCCTGCTAGATTCTATCCTAATCTTACAAAGTATTTGCCTCTGGATAAGGGAATCAAACCTTATTATCCTGAACATGCTGTGAATCACTACTTTAAAACAAGACATTATCTGCATACACTGTGGAAAGCTGGTA TTCTTTACAAAAGAGAAACAACAAGATCTGCTTCATTTTGTGGATCTCCATATTCTTGGGAACAA GAACTTCAACATGGTAGACTTGTTTTTCAAACATCTACAAGACATGGGGATGAATCATTTTGTT CTCAAAGTTCTG G A ATTCTTTCT AG ATCTC CTG TTGGA CCTTGTGTT AGATC TCAACTTAAA CAA TCTAGACTTGGACTTCAACCTCAACAAGGATCTCTTGCTAGAGGAAAAAGTGGAAGATCTGGA TCTATTAG AGCTA GA GTTCATCCTAC A ACTA GA AG ATCTTTTG G A GTTG AACCTTCT GGATCTG GACATATTGATAATTCTGCCTCTTCTACATCTTCTTGTCTGCATCAATCTGCTGTTAGAAAGACA GCTT ATT CT CATTT GTCTACTTCTAAGAG ACAATCATCTTCTGGACATGCTGTTGAACTT CAT AAT ATTtCTCCAAGTAGTGCTAGAAGTCAATCTGAAGGACCAATATTTTCAGCTTGGTGGCTTCAAT TC A G AAATTCT A A AC CTGCTTCTG ATT AT G CTCTG AC AC ATAT A G TTAATTTG CTT G A AG ATTGG GGACCTGCTACAGAACATGGCGAACACAATATTAGAATACCTAGAACTCCTGCTAGAGTTACA GG CG G AGT CTTTTTGGTT G AT AAG A AT CCTC ATA A TAC CA C A G A ATC A A G ACTTGTTGTTG ATT TTTCA CA GTTTTCT AG AG G AT CTAC ACAT GTTTCTTGG CCTAAATTTG C TGTTC CA AATC TTC A AT CTCTTACAAATTTGCTTTCATCTAATCTTTCTTGGCTGTCTCTTGATGTTTCTGCTGCCTTTTATCA TATTCCTCTTCATCCTGCTGCAATGCCTCATTTGCTTGTTGGATCATCTGGACTTCCAAGATATGT TGCTAG ACTTAGCT CTACATCT AG AAAT ATC AATTATCAGCAT GG AACAAT GCAGG ATCTTCAC GATTCTTGTAGTAGGAATCTGTATGTTTCTTTGCTTCTGCTGTATAAGACATTTGGAAGAAAACT TC ATCT GTATTCTC AC C CTATTATTC TG G GTTTT AG A A AG ATTCCTAT GGGAGTTG GACTTTCTC CTTTTTT G CTTG CTC A ATTC AC ATCTG CT ATTTGTTCTGTTGTTAG A AG G G CTTTTC CTCATTGTC TT GCATTTTCTT ATATGGAT GATGTTGTTCTTGG AGCT AAATCTGTTCA ACATCTTG AAAGTCTG T I TACCTCTA1 TACTAAT I TT CTGCTTTCTCTGGGAAT fCATCTGAATCCAAACAAAACAAAGAG ATGGGGATATTCTCTTAATTTCATGGGATATGTT ATTGG ATCTTGGGGAACACTTCCTCAAGAA C AT ATC GTTTTG AA AATC A AG C AATG TTTC AG A A AACTG CCTGTG A ATA G AC CT ATTG ATTG G A A AGTTTGTCAAAGAATTGTGGG ACTTCTTGG ATTTGCTGCTCCTTTT AC AC AATGT GGAT ATCCT GCTCTTATGCCACTTTATGCTTGTATTCAATCTAAACAGGCTTTTACAT’l 11 CTCCAAC ATACA AA GCTTTTCTGTGTAA ACAGT ATCTG AATCTTTAT CCTGTGGCTAGACAAAG ATCT GGTCTTTGTCA AGTTTTTGCTGATGCTACACCAACAGGATGGGGACTTGCTATTGGACATAGAGCTATGAGAGG A AC ATTTGTTGCTCCATT GCCTATTCATACAGCTGAATT GCTT GCT GCTTGTTTT GCTAG ATCT A GAAGCGGAG C A AA ACTT AT TG G T AC AG ATA ATA GTG TT GTCCTG AG T AG A AA GT A C AC A.T CT T TTCCATGGTTGTTGGGATGTGCTGCTAATTGGATTCTT AGAGGAACTTCTTTTGTTTATGTTCCT TCTG CT CTT AATCCT G CA G CT GATCCAT CTGCTG GTAG ATTGGG ACTGTAT AGA CCACTTCTTCA TTTGCCTTTTAGACCAACAACTGGAAGAACATCTCTTTATGCTGTTTCTCCTTCTGTTCCATCTCA TTTGCCTG AT AG AG T TC ATTTTG C TTCT CCACTTC ATG TTG CT TG G A GGCC AC CATCTA AATC TCCAGGTTCTGGACCACCTATGCAACTTTTTCATTTGTGTTTGATCATTAGCTGTTCTTGTCCTACA GTTCAAGCTTCTAAACTTTGTCTTGGATGGCTTTGGGGAATGGATATTGATCCATACAAAGAAT TTGG AGCTAGTGTTG AATTGCT GTC ATTT CTTCCAT CTG ATTTTTTCCCTT CT ATTCGTG ATCTTC
T i GATACAGCATCTGCTCTGTATAGAGAAGC T CT TGAATCTCCTGAACACTGTTCTCCACATCAT A CA GC A CTTA G ACAA G CTATTCTTT GTTG G G G A GA ACTT A T G AAT CTTG C T AC ATG G GTTG G AT CT A a t t t g G aag atc c a g c ttc ta g a ga a ttg g tg g t t t c t t a t g TT A ATGTG A ATATGGG A CT GAAAATTAGACAACTGCTTTGGTTTCATATCTCTTGTCTTACATTTGGTAGAGAAACAGTTTTGG AAT AT 1TGG1 TTCTTTT GGCGTTTGG ATTAGAACACCTCCAGtTTATAÜ AtCTCCTAATGtTCCT ATTTTGTCTACACTTCCTGAAACAACAGTCGTTAGAAGAAGAGGAAGATCTCCAAGAAGAAGA A CA CCAA GT CCTAG AA G A A G A AGATCTC A ATC A CC AAG AAGAAGAAG AAG TCA AT CTA G A G A AT CTC A A TGTTG ATTTTTG TTC G A C ATT A A A AATTG AA A AT A AAT A CAAA G GT T CTT GA G G GTT GTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAATATGATTCAGGTGAC6GATCCATGGATGCTA TGAAGCGAGGACTTTG1 TGTGTTTTGCTTCTTTGTGGTGCTGTGT T í GTTTCTCCATCTCAAGAA ATTCATGCCAGATTCAGAAGAATGGGAGGCTGGTCATCTAAACCTAGACAAGGCATGGGAACA AATCTTTCT GTT CCTAATCCTTTGGGATTCTTTCCTGATC ATCAATTGGATCCAGCATTTGG AGC A AATA GTAAC AATCC AG ATTG G G AC TTT A ACC C A A AC AAA G AT C ATTG G CCAG AAG CTA ATC A A GTTG G AG C ATCTA AAG G TGG AA AAAGTGG A ATG G AAAA CA CTA CATCTGG ATTTCTT GGACC TTTGCTT GTTCTTCAAGCTGG ATTTTTCCT GTTGACAAG AAT ACTT ACAATTCCTCAATCACTGG ATTCTT G GTGGA C A AGT CTTA ATTTTCT TG G AG G TG CTCCTACAT GT CC T G G AC AAAAT T CT C A A TCTCCA ACTT CTA ATCATTCTCC TAC ATCTTGTCCTCCAATTTGTCCTGGATATAGATGGATGTGT CTTAGA AG ATTG ATT AT CTTT CTTTT CAT ACTG CTG CTGTGTCTG ATTTTC CTT CTTG TTTTGTTGGATT ATC AG G G AAT GCTT CCT GTTTGT CCTTTG CTTCCTG G A ACTT CT ACAA CAA GT A C A G G AC CT TGTAAAACATGTACA ATTCCAGCACAGGGAACATCTATG11 T CCAA G TT GT TGTTG TACA AAA C CTTCTGATGGAAATTGCACATGTATTCCTATTCCAAGTTCTTGGGCATTTGCTAGATTTCTTTGG GA ATG G G CTT CTG TT A GATTC A GTTGGTTGT CTCTTTTG GTTC C ATTTGTTC A GTG GTTTGTTG G ATTGTCT CCTAC AG TTTG G CTTTCTG TTATTTG G ATG ATGTG GTATTGGGG A CCTTCTCTTT A CA ATAT TTTGAGTCUI I I I CTCCCTTTGCTGCCAAT f íTCTTTTGTCl 1 rGGGTTTACATTTGAttaatc gagtttctgcattattgtaattcgtatgctggcaccjtcjjagaatcacttctaaaagatatcaatatcacjcjtjcjjata ttactaccctattgaatgagacagccaaggttatcaagttagtaaaatctrtggtagataaagaagatactgatattgtga alaatttcattaccaaagaaattaaaaacagagacaaaatagttaatagtttgtctctatcaaacctggactttcgtttgta aattggggctTtttgtacaataaatgggtgttgccaatgattcatcccctgaatatcaatggatgtctccccatagattatca gata ctgtt ata tt a gga g a c i g t tt gt atttt a a c a at at a a tgtcc caattagattta cacea a a a ttgggctc catea gt tagattgttaaattattttaagaattttaataaggaaacactactaaagatagaagagaatgattacattaattcatcctttttcc a a c a a a a g g a ta a a cg a tttta tc c ta ta a a cg a cg a ttttta tca ca ta tc ta ca g g a g g a ta tg g ta ta g tc ttta a g a ta g a ta a c ta tg ta g ta a a a tttg ta ttcg a g g cca ca a a a tta ta ta g tccca tg g a a a c ta cg g cg g a g ttca ca g t a ccca a a tttc ta ta ca a ca a tc ta a a g g g a g a tg a a a a a a a a tta a tcg tg tg tg cg tg g g cca tg g g a tta a a c ta ta a a tta a c a ttttta c a ta c tc tg ta ta a a c g tg ttc ttc a ta tg ttg c ta tta ttg a ta c a a a c ta tg g a tg g tc a g g a a c ta t ca ttg a g a ta ttc ttc ta a a g ttttttta a a g g c g ttta a c g a g a g a a a g g a ca g ta tca a a ttcg tg a a a tta c ta tc c ca c tttta tc c g g c a g tta tta a c a g ta a ta tta a tg tta ta a a c ta tttta a c cg c a tg tttca c tttttc g a a c a tg a a a a g a g a a c ta a c ta cg a a ta cg a a a g a g g a a a ta tta ta a tttttcccc ta g ca c tg ta ttcg g ca g a ta a a g ta g a ta ccg a g c t a g c ta tc a a a tta g g a ttta a a tc tttg g ta ca a ta c a ta a a g ttta tc ttttta c a g a tg g c tc tg tta ta c a tta a a a ttta cg a a c ta cca tg c tg cg a ca a c ttttta c a c g ca g a tc tta a a c cc g a ta a ta tc tta c tttttg a ttc ca a tg a a c c a a ta a ta a ttca tc ta a a g g a ta a a a a g tttg ttttta a tg a a cg ta tta a a tc g g ca tta a a c g a c tttg a c ttttc c ca a g
8.1 Descripción de las secuencias de nucleótidos de la versión de bajo contenido de GC deMVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-S (sh):
8.1.1 Flanco izquierdo de F11 = bases 1 - 1097 (SEQ ID NO: 35)
8.1.2 SIi-VHB-PreS-Pmut-C = bases 1098 - 4838 (SEQ ID NO: 59)
8.1.3 Secuencia de terminación de la transcripción = bases 4839 - 4845
TTTTTGT
8.1.4 promotor mH5 = bases 4846 - 4942 (SEQ ID NO: 28)
8.1.5 TPA = bases 4943 - 5038 (SEQ ID NO: 60)
8.1.6 S(sh) = bases 5039 - 5920 (SEQ ID NO: 61)
8.1.7 Flanco derecho de F11 = bases 5921 - 7239 (SEQ ID NO: 36)
La secuencia de polimerasa de VHB de tipo salvaje se proporciona como SEQ ID NO: 19.
Secuencia ChAdOx1
La secuencia ChAdOx1 5' con respecto al casete de inmunógeno se proporciona como SEQ ID NO: 39.
La secuencia ChAdOx1 3' con respecto al casete de inmunógeno se proporciona como SEQ ID NO: 40.
Secuencia ChAdOx2
La secuencia ChAdOx25' con respecto al casete de inmunógeno se proporciona como SEQ ID NO: 41.
La secuencia ChAdOx23' con respecto al casete de inmunógeno se proporciona como SEQ ID NO: 42.
Secuencia de MVA
La secuencia de MVA 5' con respecto al casete de inmunógeno se proporciona como SEQ ID NO: 44. La secuencia de MVA 3' con respecto al casete de inmunógeno se proporciona como SEQ ID NO: 45
El promotor largo de CMV con secuencia de operador de tetrón se proporciona como SEQ ID NO: 50. El promotor corto de CMV con secuencia de operador de tetrón se proporciona como SEQ ID NO: 51.
Secuencia PreS1 (SEQ ID NO: 52):
MGGWSSKPRQGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPNKDHWP
EANQVGAGAFGPGFTPPHGGLLGWSPQAQGILTTVPAAPPPASTNRQSGRQPTPI
SPPLRDSHPQA
Secuencia PreS2 (SEQ ID NO: 53):
MQWNSTTFHQALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRTGDPAPN

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Una vacuna de vector viral de inmunógeno multi-VHB comprendiendo:
un vector viral comprendiendo un casete de expresión de inmunógeno, donde la expresión de una proteína codificada por el casete de expresión está dispuesta para ser dirigida por un promotor, donde el casete de expresión de inmunógeno codifica:
a) núcleo de VHB;
b) una polimerasa de VHB modificada (Pmut), donde la modificación es una mutación a la polimerasa de VHB de tipo salvaje para eliminar sustancialmente la función de la polimerasa;
c) antígeno de superficie de VHB (HbsAg); y
d) una secuencia intergénica que está dispuesta para causar la expresión de al menos el antígeno de superficie de VHB (HbsAg) como una proteína separada del núcleo de VHB y la polimerasa de VHB modificada (Pmut), donde la secuencia intergénica está cadena abajo (3') de las secuencias que codifican el núcleo de VHB y la polimerasa de VHB modificada (Pmut) y cadena arriba (5') de la secuencia que codifica el antígeno de superficie de VHB (HbsAg).
2. La vacuna de vector viral de inmunógeno multi-VHB según la reivindicación 1, donde la secuencia intergénica comprende un dominio de escisión, un Sitio interno de entrada ribosomal(Interna! Ribosomal Entry Site,IRES), una señal de empalme o un promotor secundario; o donde la secuencia intergénica comprende un dominio de escisión;
opcionalmente, donde el dominio de escisión comprende un dominio de escisión de omisión de ribosoma; además, opcionalmente, donde el dominio de escisión comprende o consiste en una secuencia peptídica de furina-2A (F2A) o una variante funcional de la misma; o
donde la secuencia intergénica comprende un promotor secundario para promover la expresión de al menos el antígeno de superficie (HbsAg).
3. La vacuna de vector viral de inmunógeno multi-VHB según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el casete de expresión de inmunógeno codifica además el prenúcleo (PreC) de VHB; y/o donde el casete de expresión de inmunógeno codifica además PreS1 de VHB, y/o una forma truncada del mismo.
4. La vacuna de vector viral de inmunógeno multi-VHB según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el casete de expresión de inmunógeno codifica además PreS2 de VHB.
5. La vacuna de vector viral de inmunógeno multi-VHB según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el casete de expresión de inmunógeno codifica prenúcleo (PreC) de VHB y PreS1 de VHB, y una forma truncada de PreS1.
6. La vacuna de vector viral de inmunógeno multi-VHB según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el núcleo de VHB y la polimerasa modificada (Pmut) están dispuestos para expresarse como una proteína de fusión.
7. La vacuna de vector viral de inmunógeno multi-VHB según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el casete de expresión de inmunógeno comprende ácido nucleico comprendiendo la secuencia de:
La SEQ ID NO: 46 (SIi-VHB-CPmutS) o una variante de la misma;
La SEQ ID NO: 47 (SIi-VHB-SCPmut) o una variante de la misma;
La SEQ ID NO: 48 (SIi-VHB-CPmutPreS-S(sh)) o una variante de la misma;
La SEQ ID NO: 49 (SIi-VHB-CPmutPreS-TPA-S(sh)) o una variante de la misma; La SEQ ID NO: 24 (MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-S(sh)) o una variante de la misma; o
La SEQ ID NO: 27 o SEQ ID NO: 58 (MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-TPA-S(sh)) o una variante de la misma; y/o donde el vector viral codifica la secuencia de aminoácidos de:
La SEQ ID NO: 3 (SIi-VHB-CPmutS) o una variante de la misma.
La SEQ ID NO: 11 (SIi-VHB-SCPmut) o una variante de la misma.
La SEQ ID NO: 13 (SIi-VHB-CPmutPreS-S(sh)) o una variante de la misma.
La SEQ ID NO: 25 (SIi-VHB-CPmutPreS-TPA-S(sh)) o una variante de la misma.
La SEQ ID NO: 23 (MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-S(sh)) o una variante de la misma.
La SEQ ID NO: 26 (MVA-SIi-VHB-PreS-Pmut-C-TPA-S(sh)) o una variante de la misma.
8. La vacuna con vector viral inmunógeno multi-VHB según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la polimerasa de VHB modificada (Pmut) no es una forma truncada de la polimerasa de VHB; y/o donde la polimerasa de VHB modificada (Pmut) comprende o consiste en la secuencia de SEQ ID NO: 8 o una variante de la misma; y/o donde el HbsAg comprende o consiste en una secuencia de HbsAg de tipo salvaje de longitud completa, o una variante de la misma.
9. La vacuna con vector viral inmunógeno multi-VHB según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el casete de expresión de inmunógeno codifica una forma truncada de PreS1 de VHB y la PreS1 truncada está dispuesta para expresar una proteína de fusión con el antígeno de superficie de VHB (S / HbsAg); y opcionalmente comprende además una secuencia enlazadora proporcionada entre la PreS1 truncada y el antígeno de superficie (S / HbsAg); y/o donde la PreS1 truncada con un antígeno de superficie fusionado está codificada cadena abajo (3') de la secuencia intergénica.
10. La vacuna de vector viral de inmunógeno multi-VHB según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el casete de expresión codifica una secuencia de fusión NAPreSI y PreS2; y opcionalmente donde la secuencia de fusión NAPreSI y PreS2 codificada está codificada cadena arriba (5') de la secuencia intergénica; y además opcionalmente donde la secuencia de fusión NAPreSI y PreS2 codificada está fusionada adicionalmente con la polimerasa modificada (Pmut); y además opcionalmente donde se proporciona una secuencia enlazadora entre la PreS2 y la polimerasa modificada (Pmut).
11. La vacuna de vector viral de inmunógeno multi-VHB según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el casete de expresión de inmunógeno codifica además un adyuvante peptídico; opcionalmente donde el adyuvante peptídico comprende Activador de plasminógeno tisular(Tissue Plasminogen Activator,TPA) o una cadena invariante (li) humana o no humana, o un fragmento de la misma.
12. Un ácido nucleico comprendiendo o consiste en un casete de expresión de inmunógeno de VHB, donde el casete de expresión de inmunógeno codifica:
a) núcleo de VHB;
b) una polimerasa de VHB modificada (Pmut), donde la modificación es una mutación a la polimerasa de VHB de tipo salvaje para eliminar sustancialmente la función de la polimerasa;
c) antígeno de superficie de VHB (HbsAg); y
d) una secuencia intergénica que está dispuesta para causar la expresión de al menos el antígeno de superficie de VHB (HbsAg) como una proteína separada del núcleo de VHB y la polimerasa de VHB modificada (Pmut), donde la secuencia intergénica está cadena abajo (3') de las secuencias que codifican el núcleo de VHB y la polimerasa de VHB modificada (Pmut) y cadena arriba (5') de la secuencia que codifica el antígeno de superficie de VHB (HbsAg).
13. Una composición comprendiendo el vector viral según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o el ácido nucleico según la reivindicación 12, opcionalmente donde la composición es una composición farmacéuticamente aceptable.
14. La composición según la reivindicación 13, el vector viral según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o el ácido nucleico según cualquiera de las reivindicaciones 12, para su uso en la profilaxis o el tratamiento de la infección por VHB en un sujeto; opcionalmente donde el uso es como una vacuna.
15. Un kit de vacunación de refuerzo de primado comprendiendo
- una vacuna de primado comprendiendo la composición según la reivindicación 13, el vector viral según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o el ácido nucleico según la reivindicación 12; y
- una vacuna de refuerzo comprendiendo la composición según la reivindicación 13, el vector viral según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o el ácido nucleico según la reivindicación 12.
ES18719248T 2017-04-10 2018-04-10 Hbv vaccine Active ES3036962T3 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB1705765.4A GB201705765D0 (en) 2017-04-10 2017-04-10 HBV vaccine
PCT/GB2018/050948 WO2018189522A1 (en) 2017-04-10 2018-04-10 Hbv vaccine

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES3036962T3 true ES3036962T3 (en) 2025-09-25

Family

ID=58744773

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES18719248T Active ES3036962T3 (en) 2017-04-10 2018-04-10 Hbv vaccine

Country Status (15)

Country Link
US (2) US20200113998A1 (es)
EP (1) EP3609535B1 (es)
JP (1) JP7326157B2 (es)
KR (1) KR102700586B1 (es)
CN (2) CN118576699A (es)
AU (1) AU2018251241B2 (es)
CA (1) CA3059290A1 (es)
DK (1) DK3609535T3 (es)
ES (1) ES3036962T3 (es)
GB (1) GB201705765D0 (es)
MX (1) MX2019012101A (es)
MY (1) MY202396A (es)
PH (1) PH12019502310A1 (es)
SG (1) SG11201909353VA (es)
WO (1) WO2018189522A1 (es)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11389531B2 (en) 2017-12-19 2022-07-19 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Methods and apparatus for the delivery of hepatitis B virus (HBV) vaccines
US11021692B2 (en) 2017-12-19 2021-06-01 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Hepatitis B virus (HBV) vaccines and uses thereof
US11020476B2 (en) 2017-12-19 2021-06-01 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Methods and compositions for inducing an immune response against Hepatitis B Virus (HBV)
JP2022524007A (ja) * 2019-03-05 2022-04-27 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム Ｂ型肝炎免疫化レジメンおよび組成物
AU2020297008A1 (en) * 2019-06-18 2022-02-17 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Combination of hepatitis B virus (HBV) vaccines and HBV-targeting RNAi
EP3986458A1 (en) * 2019-06-20 2022-04-27 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Self-replicating rna molecules for hepatitis b virus (hbv) vaccines and uses thereof
KR20220090497A (ko) 2019-08-29 2022-06-29 비르 바이오테크놀로지, 인코포레이티드 B형 간염 바이러스 백신
US11497808B2 (en) * 2019-09-30 2022-11-15 Gilead Sciences, Inc. HBV vaccines and methods treating HBV
WO2021243149A2 (en) * 2020-05-28 2021-12-02 President And Fellows Of Harvard College Protein covariance networks reveal interactions important to the emergence of sars coronaviruses as human pathogens
CA3188801A1 (en) * 2020-07-08 2022-01-13 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Rna replicon vaccines against hbv
TW202229556A (zh) 2020-10-02 2022-08-01 國立大學法人大阪大學 針對SARS-CoV-2之改良型DNA疫苗
WO2022133230A1 (en) * 2020-12-18 2022-06-23 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for treating hepatitis b virus infection
CN115595312A (zh) * 2021-06-28 2023-01-13 中国农业大学（Cn） 一种重组腺病毒及其应用
WO2023086961A1 (en) * 2021-11-12 2023-05-19 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Sars-cov-2 spike fused to a hepatitis b surface antigen
WO2023105221A1 (en) 2021-12-07 2023-06-15 Vaccitech (Uk) Limited Vaccine boost methods and compositions
IL322666A (en) * 2023-03-17 2025-10-01 Helmholtz Zentrum M?Nchen Deutsches Forschungszentrum F?R Gesundheit Und Umwelt Gmbh A preparation containing HBV antigen for the treatment of hepatitis B
GB202317925D0 (en) 2023-11-23 2024-01-10 Spybiotech Ltd Vaccines
CN118593695B (zh) * 2024-08-07 2024-10-22 山东兴瑞生物科技有限公司 一种用于治疗HBV感染的siRNA和mRNA联合疫苗

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005017149A1 (en) * 2003-06-03 2005-02-24 Cell Genesys, Inc. Compositions and methods for enhanced expression of recombinant polypeptides from a single vector using a peptide cleavage site
EP2057268B1 (en) * 2006-08-14 2014-08-13 Postech Foundation A dna vaccine for curing chronic hepatitis b and a method of preparing same
BR112012002628B1 (pt) * 2009-08-07 2021-09-08 Transgene Sa Composição imunogênica, molécula de ácido nucleico, vetor, partícula viral infecciosa, micro-organismo transgênico, composição, usos da composição imunogênica e kit de partes
AU2012214394B2 (en) * 2011-02-12 2016-08-11 Globeimmune, Inc. Yeast-based therapeutic for chronic hepatitis B infection
TWI575070B (zh) * 2011-07-12 2017-03-21 傳斯堅公司 Ｈｂｖ聚合酶突變體
CN103173492B (zh) * 2013-03-12 2014-08-13 中国人民解放军白求恩国际和平医院 携带外源基因的复制型hbv载体、其转染后产生的重组hbv，和相应的制备方法与应用
GB201321384D0 (en) * 2013-12-04 2014-01-15 Isis Innovation Molecular adjuvant

Also Published As

Publication number Publication date
CA3059290A1 (en) 2018-10-18
MX2019012101A (es) 2019-12-11
JP7326157B2 (ja) 2023-08-15
CN110913899B (zh) 2024-04-19
EP3609535B1 (en) 2025-06-25
AU2018251241A1 (en) 2019-10-31
SG11201909353VA (en) 2019-11-28
US20200113998A1 (en) 2020-04-16
WO2018189522A1 (en) 2018-10-18
JP2020516264A (ja) 2020-06-11
PH12019502310A1 (en) 2020-09-21
US20240115694A1 (en) 2024-04-11
GB201705765D0 (en) 2017-05-24
KR102700586B1 (ko) 2024-08-30
EP3609535A1 (en) 2020-02-19
DK3609535T3 (da) 2025-08-18
CN118576699A (zh) 2024-09-03
AU2018251241B2 (en) 2025-04-17
MY202396A (en) 2024-04-25
KR20200024130A (ko) 2020-03-06
CN110913899A (zh) 2020-03-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES3036962T3 (en) Hbv vaccine
US11998597B2 (en) Vaccine against RSV
ES2376010T3 (es) Prote�?na de fusión de transcriptasa inversa de la telomerasa, nucleótidos que la codifican y usos de la misma.
ES2685922T3 (es) Vacunas poxvirales mejoradas
US10227385B2 (en) Chimeric poly peptides and the therapeutic use thereof against a flaviviridae infection
ES2253675T3 (es) Proteina de fusion de proteinas reguladoras/accesorias de hiv.
JP2020536489A5 (es)
CN111741766A (zh) 用于诱导针对乙型肝炎病毒(hbv)的免疫应答的方法和组合物
AU2022368453A1 (en) Chimeric betacoronavirus spike polypeptides
US9676825B2 (en) Chimeric vaccine antigens against hepatitis C virus
ES2282156T3 (es) Vacuna de acido nucleico.
US11154613B2 (en) HCV vaccines
TWI336626B (en) Flavivirus ns1 subunit vaccine
KR20240053097A (ko) 사스 코로나바이러스 2 베타 변이주 항원 및 이를 포함하는 고효능 백신 조성물
EP4499137A1 (en) Immunogenic compositions for the prevention of influenza a