ES2965365T3 - Cepa bacteriana y el uso de la misma - Google Patents
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Abstract
La presente solicitud se refiere a una cepa bacteriana y un cultivo biológicamente activo de la misma, así como a los usos de dicha cepa bacteriana y dicho cultivo biológicamente activo en alimentos o sustancias de calidad para piensos, alimentos o composiciones para piensos y alimentos o productos para piensos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
Description
DESCRIPCIÓN
Cepa bacteriana y el uso de la misma
Campo técnico
La presente solicitud se refiere a una cepa bacteriana y un cultivo biológicamente activo de la misma, así como también a los usos de dicha cepa bacteriana y dicho cultivo biológicamente activo en una sustancia de calidad alimentaria o de pienso, una composición de alimento o pienso y un producto de alimento o pienso.
Antecedentes
Está bien aceptado en la técnica que los probióticos son microorganismos vivos que contribuyen a la salud y/o el bienestar de un sujeto, tal como un ser humano o un animal, cuando se consumen. Por ejemplo, se ha observado la influencia de los probióticos en el intestino, el bienestar y el equilibrio del sistema inmunológico de un sujeto. También se ha sugerido su efecto sobre el metabolismo, incluyendo la superación y prevención de enfermedades, la protección del cuerpo contra la microbiota dañina e incluso efectos positivos sobre la salud mental.
El documento EP 2311 473 A1 describe las cepas deLactobacillus plantarumCECT 7527, 7528 y 7529, que han sido aisladas de heces humanas. El documento de Gheziel Chahira y otros (Probiotics and antimicrobial proteins, vol. 11, núm. 1, 19 de febrero de 2018, págs. 113-123) describe las cepas deL plantarumderivadas de heces infantiles, por ejemplo la cepa LSC3 L plantarum. El documento de Goossens DAM. y otros (Alimentary Pharmacology & Therapeutics, vol. 23, núm. 2, 1 de enero de 2006, páginas 255-263) describe la cepa 299v deL plantarumy una bebida probiótica que comprende la cepa. El documento de Cebeci Aysun y otros (Food Microbiology, vol. 20, núm. 5, 1 de octubre de 2003, págs. 511-518) describe varias cepas deL plantarum,por ejemplo cepas HU, NCIMB 1193, 80, DSM 20174. El documento de Bosch M. y otros (Letters in Applied Microbiology, vol. 54, núm. 3,10 de febrero de 2012, págs. 240-246) describe las cepas CECT 7314 y 7316 deL plantarum, que han sido aislados de heces humanas.
Sin embargo, los probióticos no siempre son eficaces para mejorar la microbiota intestinal ni son capaces de contribuir a la calidad de la sustancia de alimento o pienso a la que se añaden. Además, en muchos casos es necesaria una mezcla de varias cepas de probióticos para conseguir un efecto.
Por tanto, existe una necesidad continua de nuevos probióticos.
Resumen
Un objetivo de la invención es proporcionar una cepa bacteriana o un cultivo para uso probiótico y otros usos versátiles, así como también proporcionar métodos para usar dicha cepa o cultivo.
Por tanto, un aspecto de la invención es una cepa bacteriana deLactiplantibacillus plantarumProvege, depositada el 24 de agosto de 2021 en DSMZ con el número DSM 33989. DSMZ significa Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Colección Alemana de Microorganismos y Cultivos Celulares GmbH. Otro aspecto de la invención es un cultivo biológicamente activo que comprende la cepa deLactiplantibacillus plantarumProvege, depositada el 24 de agosto de 2021 en DSMZ con el número DSM 33989. El cultivo biológicamente activo comprende la cepa y un medio de cultivo o residuos del mismo.
Otro aspecto de la invención es un producto encapsulado, tal como un polvo liofilizado, un comprimido o una cápsula, que comprende la cepa deLactiplantibacillus plantarumProvege, depositada el 24 de agosto de 2021 en DSMZ con el número DSM 33989. El cultivo biológicamente activo se puede obtener mediante la incubación de la cepa en un medio de cultivo a 30 °C durante toda la noche, y preferentemente la centrifugación del medio de cultivo para obtener un sedimento y redisolución del sedimento en otro medio de cultivo o residuos del mismo, por ejemplo, agua de peptona que contiene 0,1 % de peptona.
Otro aspecto de la invención es una composición de alimento o pienso, un producto de alimento o pienso, una formulación para el enriquecimiento de alimentos o piensos, un complemento de alimento o pienso, o una formulación nutracéutica, que comprende la cepa, el cultivo biológicamente activo o el producto encapsulado de acuerdo con la invención actualmente descrita.
Otro aspecto de la invención es un método para fabricar una composición de alimento o pienso probiótico. Dicho método comprende preparar, y preferentemente también fermentar, una mezcla de composición de alimento o pienso y la cepa, el cultivo biológicamente activo o el producto encapsulado de acuerdo con la invención actualmente descrita.
Otro aspecto de la invención es un método para aumentar el valor nutricional de una sustancia de calidad alimentaria o de pienso. Dicho método comprende fermentar una mezcla de sustancia de calidad alimentaria o de pienso y la cepa, el cultivo biológicamente activo o el producto encapsulado de acuerdo con la invención actualmente divulgada.
Otro aspecto de la invención es un método para prolongar la vida útil de un producto de alimento o pienso. Dicho método comprende fermentar una mezcla de un producto de alimento o pienso o un material de partida de un producto de alimento o pienso y la cepa, el cultivo biológicamente activo o el producto encapsulado de acuerdo con la invención actualmente descrita.
Otro aspecto de la invención es el uso de la cepa, el cultivo biológicamente activo o el producto encapsulado como se describe en la presente descripción, por ejemplo en la fabricación de una composición de alimento o pienso, un producto de alimento o pienso, una formulación para el enriquecimiento de alimentos o piensos, un complemento de alimento o pienso, o una formulación nutracéutica.
Las modalidades principales se caracterizan en las reivindicaciones independientes. Varias modalidades se describen en las reivindicaciones dependientes y en la descripción. Las características enumeradas en las reivindicaciones dependientes y en las modalidades se pueden combinar libremente entre sí a menos que se indique explícitamente de cualquier otra manera.
Breve descripción de las Figuras
La Figura 1 muestra una vista microscópica de L plantarum Provege.
La Figura 2a - Figura 2d muestra los efectos deLactiplantibacillus plantarum Provegeen una creciente abundancia de bacterias intestinalesFusicatenibacter, Tyzzerella, Oscillospirayeubacteria,respectivamente. La Figura 3a - Figura 3d muestra los efectos deLactiplantibacillus plantarum Provegeen la disminución de la abundancia de bacterias intestinalesPrevotella 2, Prevotella7,aloprevotellayTyzzerella 4,respectivamente. La Figura 4 muestra los niveles de enterobacterias y bacterias del ácido láctico en el intestino antes, durante y después del consumo de batidos que contienenLactiplantibacillus plantarum Provege.
La Figura 5 muestra los niveles de enterobacterias y bacterias del ácido láctico en el intestino antes, durante y después del consumo de batidos sinLactiplantibacillus plantarum Provege.
La Figura 6 muestra las curvas de crecimiento de moho en panes fermentados Prevege y muestras de control. Depósitos
La siguiente deposición de cepas de acuerdo con el Tratado de Budapest sobre el Reconocimiento Internacional del Depósito de Microorganismos a efectos del Procedimiento de Patentes se realizó en la German Collection of Microorganisms and Cell Cultures GmbH, Mascherroder Weg l-Lb 38123 Braunschweig, Alemania (DE) el 24 de agosto de 2021:Lactiplantibacillus plantarumProvege asignó el número de acceso DSM 33989. Dicha cepa bacterianaLactiplantibacillus plantarumProvege en la presente descripción se hace referencia como una cepa bacteriana de acuerdo con la presente invencióno L plantarumProvege, o simplemente Provege. La cepa fue depositada por Probitat Oy, Kuopio, Finlandia. En la presente descripción, la German Collection of Microorganisms and Cell Cultures GmbH se denomina DSMZ, que representa su nombre alemán Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH.
Descripción detallada
A menos que se especifique de manera diferente, la unidad "% en vol.", como se usa en la presente descripción en toda la especificación, se refiere a volumen/porcentaje en volumen, o fracción en volumen expresada en porcentaje, definida como el volumen de un constituyente dividido por el volumen de todos los constituyentes de la mezcla antes de mezclar, expresada en porcentaje. La presente invención se refiere a una nueva cepa bacteriana deLactiplantibacillus plantarumProvege, aislada de las heces de humanos. Se ha demostrado sorprendentemente que la cepa tiene beneficios versátiles en diversos usos, tales como el uso de probióticos, especialmente para mejorar la digestibilidad y la salud intestinal de los humanos, para aumentar el valor nutricional de la sustancia de calidad alimentaria o de pienso y para prolongar la vida útil de los productos de alimento o pienso.
Por lo tanto, la presente descripción incluye la cepa bacteriana actualmente descrita deL plantarumProvege, así como también sus formas mutantes o derivados que posean las mismas propiedades que elL plantarumProvege. ElL plantarumProvege definido anteriormente se hace referencia en la presente descripción como la cepa bacteriana de acuerdo con la presente invención.
Un aspecto de la presente descripción proporciona un cultivo biológicamente activo que comprende la cepaL plantarumProvege o un mutante o derivado del mismo. La actividad biológica como se usa en la presente descripción se refiere especialmente a las propiedades de viabilidad y adhesión de la cepa o del cultivo. La expresión "viable" significa que las células están vivas y viables en el cuerpo, tal como en el intestino, de un sujeto, durante al menos el tiempo de tránsito intestinal estándar (normalmente de 12 a 48 horas). La viabilidad se define como el número de bacterias (ufc g_1) que permanecen viables en su sitio de acción para producir un efecto beneficioso para la salud del huésped. El número de bacterias se puede calcular mediante el uso de métodos convencionales, por ejemplo basándose en recuentos de microbios en una placa de Petri. La expresión "capacidad de adhesión" significa que la cepa o cultivo es capaz de adherirse a la mucosa intestinal o a otro objetivo deseado en el cuerpo de un sujeto. Una buena adherencia prolonga el tiempo que dicha cepa puede estar activa en el organismo del sujeto.
El cultivo biológicamente activo puede prepararse a partir de una cepa congelada de la cepa o de un polvo liofilizado.
Para preparar un cultivo tan biológicamente activo,Lactiplantibacillus plantarumProvege se puede incubar en un medio de cultivo, por ejemplo un medio de cultivo selectivo, a 30 °C durante la noche, con centrifugación del medio de cultivo para obtener un sedimento y redisolución del sedimento en otro medio de cultivo, tal como un medio de cultivo no selectivo. Los expertos en la técnica conocen bien los tipos de medios de cultivo para microorganismos. Por ejemplo, la cepa puede inocularse mediante el uso de un asa de 1 pl para raspar un stock bacteriano congelado y agregarlo a 10 ml de caldo MRS (Lab M, Bury, Lancashire, Reino Unido) e incubarse a 30 °C durante la noche. Luego se centrifuga el caldo durante toda la noche, se descarta el sobrenadante y el sedimento se redisuelve en agua de peptona (peptona al 0,1 %) o cloruro de sodio al 0,9 %. El cultivo biológicamente activo que contiene la cepa según la presente invención está así listo para su uso posterior.
El polvo liofilizado de la cepa de acuerdo con la presente invención se puede preparar mediante el uso de métodos convencionales. La liofilización de bacterias es un proceso de varios pasos que implica cultivar los microbios, suspenderlos en un medio/tampón de liofilización, someterlos al proceso de liofilización y subsecuentemente almacenarlos adecuadamente.
Además de las bacterias liofilizadas, se pueden preparar otras formas almacenadas de productos de las cepas bacterianas de acuerdo con la presente invención, tales como cápsulas, comprimidos o productos similares, que se denominan colectivamente productos encapsulados.
Por lo tanto, la presente descripción proporciona un producto encapsulado que comprende la cepa deL plantarumProvege o un mutante o derivado del mismo. El producto encapsulado puede ser, por ejemplo, un polvo liofilizado, un comprimido, una cápsula, un comprimido efervescente, etc.
El término encapsulación se refiere a un proceso de atrapar una sustancia, es decir, la bacteria en la presente solicitud, en otra sustancia, que produce partículas en la escala nanométrica, micrométrica o milimétrica. Una sustancia usada para encapsular se llama membrana de recubrimiento, cubierta, material portador o de pared, fase externa o matriz. Para procesos de encapsulación específicos tales como la liofilización, las sustancias usadas para encapsular también se denominan crioprotectores. El material de pared usado en productos o procesos alimentarios debe ser de calidad alimentaria y debe poder formar una barrera entre el agente activo y su entorno. Los expertos en la técnica conocen las tecnologías de encapsulación usadas para mantener viables las células probióticas durante el almacenamiento, la comercialización y el uso en productos alimenticios.
[uso probiótico]
Como se mencionó, un objeto de la invención es proporcionar la cepa de bacterias como se describe en la presente descripción para uso probiótico.
Está demostrado que una composición de alimento o pienso que comprende cepas bacterianas de acuerdo con la presente invención aumenta el nivel de muchos tipos de bacterias intestinales, cuya existencia tiene una influencia positiva en algunas condiciones de salud, mientras que disminuye el nivel de muchos tipos de bacterias intestinales, cuya existencia tiene influencia negativa sobre ciertas condiciones en un sujeto, tal como un humano o un animal, especialmente humanos y mascotas. Por tanto, las cepas bacterianas de acuerdo con la presente invención contribuyen al estado de salud de la microbiota intestinal de un sujeto, tal como un ser humano o un animal, especialmente seres humanos y mascotas. En consecuencia, la presente invención proporciona un método para fabricar una composición de alimento o pienso probiótico.
Los ejemplos de bacterias intestinales mencionadas anteriormente que tienen una influencia positiva en algunas condiciones de salud incluyen, pero no se limitan a,Fusicatenibacter, Tyzzerella, OscillospirayEubacteria.Al aumentar el nivel de bacterias intestinales se pretende aumentar la cantidad de dichas bacterias intestinales desde un nivel existente naturalmente en un sujeto. La significación estadística se determina mediante el uso de la prueba t de Student.
Los ejemplos de bacterias intestinales mencionadas anteriormente que tienen una influencia negativa en algunas condiciones de salud incluyen, pero no se limitan a,Prevotella 2, Prevotella7,aloprevotellayTyzzerella 4.Al disminuir el nivel de bacterias intestinales se pretende disminuir la cantidad de dichas bacterias intestinales desde un nivel existente naturalmente en un sujeto. La significación estadística se determina mediante el uso de la prueba t de Student.
Una composición de alimento o pienso como se describe en la presente descripción se refiere a una composición consumible que comprende al menos una sustancia de calidad alimentaria o de pienso. Una sustancia de calidad alimentaria o de pienso es una sustancia no tóxica y segura para el consumo, consumible para proporcionar soporte nutricional a un sujeto, por ejemplo humanos y animales. Todos los ingredientes comprendidos en una composición de alimento o pienso como se describe en la presente descripción no son tóxicos y son seguros para el consumo del sujeto que va a consumir dicha composición. Por lo tanto, una sustancia de calidad alimentaria o de pienso puede ser alimento para humanos o pienso para animales, o en la expresión sinónima tal como alimento para humanos, forraje para ganado o alimento/pienso para mascotas. Una sustancia de calidad alimentaria o de pienso puede ser de origen vegetal, animal o fúngico y contener nutrientes, tales como carbohidratos, grasas, proteínas, vitaminas y/o minerales. Una sustancia de calidad alimentaria o de pienso de acuerdo con la presente invención incluye, pero no se limita a, una sustancia originaria de lácteos, cereales, legumbres/leguminosas, verduras, frutas, bayas, hongos, pescado o material a base de carne. El término "material de base" se define en la presente descripción como que la sustancia de calidad alimentaria o de pienso se produce a partir de una materia prima específica tal como lácteos, cereales, legumbres/leguminosas, verduras, frutas, bayas, hongos, pescado o carne, y preferentemente la sustancia de calidad alimentaria o de pienso contiene al menos el 70 % de las materias primas. La sustancia de calidad alimentaria o de pienso puede estar basada en una mezcla de diferentes materias primas, por ejemplo, una mezcla de lácteos y cereales o una mezcla de carne y fruta. La sustancia de calidad alimentaria o de pienso puede estar en su forma natural o procesada, como fermentada, horneada, cocida, etc. Una composición de alimento o pienso probiótico se refiere a una composición de alimento o pienso que tiene propiedades probióticas. Una composición de alimento o pienso probiótico de acuerdo con la presente invención comprende al menos una sustancia de calidad alimentaria o de pienso y la cepa bacteriana de acuerdo con la presente invención, el cultivo biológicamente activo o el producto encapsulado de acuerdo con la presente invención.
La presente invención proporciona además un producto de alimento o pienso, una formulación para el enriquecimiento de alimentos o piensos, un complemento de alimento o pienso, o una formulación nutracéutica, que comprende la cepa de acuerdo con la presente invención, el cultivo biológicamente activo o el producto encapsulado de acuerdo con la presente invención.
Un producto de alimento o pienso como se describe en la presente descripción se refiere a un producto destinado a estar disponible comercialmente para los consumidores, y dicho producto comprende la composición de alimento o pienso como se define. Un producto de alimento o pienso o una composición de alimento o pienso puede estar en forma de sólido, semisólido, gel o líquido. Ejemplos de producto de alimento o pienso incluyen, pero no se limitan a, queso, mantequilla, pan, avena, jugo, batido, yogur, leche, pudín, café o similares.
Dichos alimentos o piensos se pueden preparar de una manera conocida per se, por ejemplo mediante la adición del producto encapsulado, el cultivo biológicamente activo o la cepa bacteriana de acuerdo con la presente invención a un alimento o pienso o sustancia de calidad alimentaria o de pienso adecuados, en una cantidad adecuada. Por ejemplo, la cepa bacteriana de acuerdo con la presente invención, o el cultivo biológicamente activo o el producto encapsulado de acuerdo con la presente invención se pueden usar de una manera conocida per se para la preparación de un alimento o pienso fermentado o sustancia de calidad alimentaria o de pienso, por ejemplo de una manera conocida per se para la preparación de productos de alimento o pienso fermentados mediante el uso de la cepa bacteriana de acuerdo con la presente invención, el cultivo biológicamente activo o el producto encapsulado de acuerdo con la presente invención. En tales métodos, la cepa bacteriana de acuerdo con la presente invención, el cultivo biológicamente activo o el producto encapsulado de acuerdo con la presente invención se pueden usar además del microorganismo usado habitualmente, y/o pueden reemplazar uno o más o parte del microorganismo usado habitualmente. Por ejemplo, en la preparación de productos fermentados tales como batidos, la cepa bacteriana de acuerdo con la presente invención, el cultivo biológicamente activo o el producto encapsulado de acuerdo con la presente invención se pueden añadir o usar como parte de un cultivo iniciador o se pueden añadido adecuadamente durante dicha fermentación.
En consecuencia, de acuerdo con la presente invención se proporciona un método para fabricar una composición de alimento o pienso probiótico, que comprende las etapas:
- a) poner en contacto la cepa bacteriana de acuerdo con la presente invención, el cultivo biológicamente activo o el producto encapsulado de acuerdo con la presente invención con una composición de alimento o pienso;
- b) opcionalmente, fermentar la composición de alimento o pienso obtenida en la etapa a).
En una modalidad preferida, el método comprende la etapa b) fermentar la composición de alimento o pienso obtenida en la etapa a)
Dicha composición de alimento o pienso que tiene propiedades probióticas se puede preparar, por ejemplo, mediante la adición de las cepas bacterianas de acuerdo con la presente invención a una composición de alimento o pienso y proceder a la fermentación. Por ejemplo, la composición de alimento o pienso que tiene propiedades probióticas se puede preparar mediante la adición del cultivo biológicamente activo como se describe en la presente descripción al alimento, pienso o bebida en una concentración de 0,01 -10,00 % en vol. A menos que se especifique de manera diferente, la unidad "% en vol.", como se usa en la presente descripción en toda la especificación, se refiere a volumen/porcentaje en volumen, o fracción en volumen expresada en porcentaje, definida como el volumen de un constituyente dividido por el volumen de todos los constituyentes del mezcla antes de mezclar, expresada en porcentaje. Así, en este caso, la expresión “añadir el cultivo biológicamente activo al alimento, pienso o bebida en una concentración de 0,01 - 10,00 % en vol.” se refiere al volumen del aditivo/constituyente, es decir, el cultivo biológicamente activo, en el volumen de toda la composición, en este caso composición de alimento o pienso, por ejemplo alimento o pienso o bebida, y el cultivo biológicamente activo.
También es posible usar bolsitas liofilizadas de cepas bacterianas de acuerdo con la presente invención para preparar dicha composición de alimento o pienso probiótico. La composición de alimento o pienso que comprende la cepa puede luego fermentarse, para obtener de esta manera la composición de alimento o pienso probiótico, la composición de alimento o pienso tiene las propiedades probióticas. Cabe señalar que la concentración de cepa bacteriana añadida a la composición de alimento o pienso puede adaptarse de acuerdo con las aplicaciones. Igualmente, el tiempo de incubación/fermentación también puede adaptarse de acuerdo con las aplicaciones reales. Por ejemplo, el alimento o pienso inoculado se puede incubar a 30 °C durante 4-48 horas. Se encuentra que una dosis final de 106 ufc deLactiplantibacillus plantarumProvege es suficiente para proporcionar efecto probiótico. En algunos ejemplos, la composición de alimento o pienso probiótico contiene 107-109 ufc/ml deLactiplantibacillus plantarumProvege. En algunos ejemplos preferidos, una dosis final de 109 ufc deLactiplantibacillus plantarumProvege puede recomendarse a consumidores que deseen mejorar las condiciones intestinales.
En algunas modalidades, la composición de alimento o pienso que tiene las propiedades probióticas se puede preparar mediante las etapas de:
- añadir el cultivo biológicamente activo de acuerdo con la presente invención a una composición de alimento o pienso en una concentración del 0,01 al 10,00 % en vol., basado en el volumen total de toda la composición a la que se ha añadido el cultivo activo, preferentemente del 0,05 al 5,00 % en vol., con mayor preferencia 0,10 -1,00 % en vol., y mezclar, para obtener de esta manera una mezcla,
- opcionalmente, incubar la mezcla a 25 - 40°C, preferentemente 30 - 35°C, durante 4-48 horas, preferentemente 6-24 horas.
Para tener el efecto probiótico, las bacterias deben permanecer viables en el producto al menos hasta su consumo. Por tanto, la temperatura de incubación no deberá exceder los 40 °C.
En algunos ejemplos, el cultivo biológicamente activo de acuerdo con la presente invención se añade a la composición de alimento o pienso en una concentración de 0,10 -1,00 % en vol., de acuerdo con el volumen total de toda la composición que tiene el cultivo activo añadido, y la incubación de tiempo es de 6 - 24 horas a 30 °C, para obtener de esta manera la composición de alimento o pienso probiótico.
[aumento del valor nutricional de una sustancia de calidad alimentaria o de pienso]
Se ha descubierto que la cepa de bacterias de acuerdo con la presente invención contribuye al nivel de nutrientes de una sustancia de calidad alimentaria o de pienso. En consecuencia, la invención proporciona las cepas de bacterias descritas en la presente descripción para aumentar el valor nutricional de una sustancia de calidad alimentaria o de pienso. Por tanto, se proporciona un método para aumentar el valor nutricional de una sustancia de calidad alimentaria o de pienso, mediante la fermentación de una mezcla de la sustancia de calidad alimentaria o de pienso y la cepa bacteriana de acuerdo con la presente invención.
Se ha definido el significado de sustancia de calidad alimentaria o de pienso. Otros ejemplos de sustancias de buena calidad incluyen, pero no se limitan a, cultivos como alimento para humanos, forraje para ganado o alimento/pienso para mascotas, incluidos cereales o legumbres/leguminosas, como avena, quinua o habas.
La frase "aumentar el valor nutricional" se refiere a la cantidad de nutrientes, incluido al menos un aminoácido y/o al menos un mineral y/o al menos una vitamina en la sustancia de calidad alimentaria o de pienso, que aumenta con respecto a los niveles existentes naturalmente en la sustancia de calidad alimentaria o de pienso no procesada. Además, cabe señalar que con el presente método también se puede aumentar la cantidad de ácido a-aminobutírico (GABA), vitamina B12 y ácido fólico. Cabe señalar que, aunque a veces el GABA no se clasifica como un aminoácido en la técnica, aquí el GABA está cubierto por el significado de aminoácido de la invención reivindicada. De acuerdo con algunas modalidades del presente método, al menos los siguientes nutrientes pueden aumentarse simultánea y significativamente: Alanina, Arginina, Ácido Aspártico, Ácido Glutámico, Glicina, Histidina, Isoleucina, Leucina, Lisina, Metionina, Fenilalanina, Prolina, Serina, Taurina, Treonina, Tirosina, Valina y GABA.
De acuerdo con algunas modalidades del presente método, al menos los siguientes nutrientes pueden aumentarse simultánea y significativamente: Alanina, Ácido Aspártico, Cisteína, Ácido Glutámico, Glicina, Histidina, Isoleucina, Leucina, Lisina, Metionina, Ornitina, Fenilalanina, Prolina, Serina, Taurina, Treonina, Valina y GABA.
De acuerdo con algunas modalidades del presente método, al menos los siguientes nutrientes pueden aumentarse simultánea y significativamente: calcio, hierro y zinc.
Dicha sustancia de calidad alimentaria o de pienso que tiene un valor nutricional aumentado se puede preparar, por ejemplo, al añadir las cepas bacterianas de acuerdo con la presente invención a una sustancia de calidad alimentaria o de pienso y proceder a la fermentación. Por ejemplo, la sustancia de calidad alimentaria o de pienso que tiene un mayor valor nutricional se puede preparar mediante la adición del cultivo biológicamente activo como se describe en la presente descripción a una sustancia de calidad alimentaria o de pienso, por ejemplo, cereales integrales o legumbres/leguminosas, en una concentración de 0,01 a 10,00 % en vol., basado en el volumen total de la sustancia completa a la que se le ha añadido el cultivo activo.
Cabe señalar que la cantidad de cepa bacteriana añadida a la sustancia de calidad alimentaria o de pienso puede adaptarse de acuerdo con las aplicaciones. Igualmente, el tiempo de incubación/fermentación también puede adaptarse de acuerdo con las aplicaciones reales. Por ejemplo, el alimento o pienso inoculado se puede incubar a 30 °C durante 4 - 48 horas.
En algunas modalidades, el método para aumentar el valor nutricional de una sustancia de calidad alimentaria o de pienso puede comprender
- agregar el cultivo biológicamente activo de acuerdo con la presente invención a una sustancia de calidad alimentaria o de pienso en una cantidad de 0,01 - 10,00 % en vol., basado en el volumen total de la sustancia completa a la que se ha añadido el cultivo activo, preferentemente 0,05 - 5,00 % en vol., con mayor preferencia 0,10-1,00 % en vol., para obtener de esta manera una mezcla;
- fermentar la mezcla a 25 - 40 °C, preferentemente 30 - 35°C, durante 4-48 horas, preferentemente 12-24 horas; - secar la mezcla fermentada a 40 - 120 °C, preferentemente 50 - 80 °C, con mayor preferencia 60 - 70 °C, durante 4- 96 horas, con mayor preferencia 24 - 48 horas.
La sustancia de calidad alimentaria o de pienso puede recibir un tratamiento previo. Por ejemplo, la sustancia de calidad alimentaria o de pienso puede esterilizarse, por ejemplo mediante ebullición, a partir de bacterias endógenas.
En algunas modalidades, el cultivo biológicamente activo de acuerdo con la presente invención se añade a la sustancia de calidad alimentaria o de pienso en una concentración de 0,10 - 1,00 % en vol., basado en el volumen total de la sustancia completa a la que se ha añadido el cultivo activo, y el tiempo de incubación es de 12 - 24 horas a 30 °C, y el tiempo de secado es de 24 - 48 horas a 65 °C.
[prolongación de la vida útil de los productos de alimento o pienso]
Se ha descubierto que las cepas de bacterias de acuerdo con la presente invención contribuyen a la vida útil de un producto de alimento o pienso o de un material de partida de un producto de alimento o pienso. Se ha descubierto que las cepas de bacterias de acuerdo con la presente invención tienen actividad antifúngica. En consecuencia, la invención proporciona las cepas de bacterias descritas en la presente descripción para prolongar la vida útil de un producto de alimento o pienso o un material de partida de un producto de alimento o pienso. Por lo tanto, se proporciona un método que prolonga la vida útil de un producto de alimento o pienso, mediante la fermentación de una mezcla del producto de alimento o pienso o un material de partida del producto de alimento o pienso y las cepas bacterianas de acuerdo con la presente invención. El término "material de partida de un producto de alimento o pienso" se refiere a un ingrediente o material que se usa para fabricar un producto de alimento o pienso. Un material de partida puede ser una materia prima no procesada o un material procesado destinado a un uso posterior en la elaboración del producto de alimento o pienso. Un material de partida puede ser una sustancia de calidad alimentaria o de pienso como se define en la presente descripción. Por ejemplo, cereales o legumbres/leguminosas, o harina o masa de cereales o legumbres/leguminosas, entran dentro del significado de material de partida de un producto de alimento o pienso que puede ser pan, productos horneados, etc. Cabe señalar que en este ejemplo la harina como tal también entra dentro del significado de buen producto.
Se sabe que cuando un producto de alimento o pienso o un material de partida de un producto de alimento o pienso fermentado con la cepa bacteriana de acuerdo con la presente invención o con el cultivo biológicamente activo o el producto encapsulado de acuerdo con la presente invención, el proceso de moldeo del producto de alimento o pienso se suprime mucho. Por ejemplo, después del contacto con una fuente de hongos, el producto de alimento o pienso fermentado con la cepa bacteriana de acuerdo con la presente invención puede comenzar a desarrollar moho al menos un día más tarde que aquellos sin la cepa bacteriana de acuerdo con la presente invención. Además, la velocidad de crecimiento del moho del producto de alimento o pienso fermentado con la cepa bacteriana de acuerdo con la presente invención puede ser dos veces más lenta que aquellos sin la cepa bacteriana de acuerdo con la presente invención. Por tanto, mediante el uso de la cepa bacteriana de acuerdo con la presente invención no hay necesidad de añadir conservantes al producto de alimento o pienso.
Dicho producto de alimento o pienso que tiene una vida útil prolongada se puede preparar, por ejemplo, al añadir las cepas bacterianas de acuerdo con la presente invención a un producto y proceder a la fermentación. Por ejemplo, la sustancia del producto de alimento o pienso que tiene una vida útil prolongada se puede preparar mediante la adición del cultivo biológicamente activo como se describe en la presente descripción a un producto de alimento o pienso, por ejemplo, harina, en una concentración del 0,01 - 10,00 % en vol., basado en el volumen total de todo el producto al que se le ha añadido el cultivo activo.
Cabe señalar que la cantidad de cepa bacteriana añadida al producto de alimento o pienso puede adaptarse de acuerdo con las aplicaciones. Igualmente, el tiempo de incubación/fermentación también puede adaptarse de acuerdo con las aplicaciones reales. Por ejemplo, el alimento o pienso inoculado se puede incubar a 30 °C durante 4 - 48 horas.
En algunas modalidades, el método para prolongar la vida útil de un producto de alimento o pienso puede comprender
- añadir el cultivo biológicamente activo de acuerdo con la presente invención a un producto de alimento o pienso en una cantidad del 0,01 - 10,00 % en vol., basado en el volumen total del producto completo al que se le ha añadido el cultivo activo, preferentemente del 0,05 - 5,00 % en vol., con mayor preferencia 0,10 - 1,00 % en vol., para obtener de esta manera una mezcla;
- fermentar la mezcla a 25 - 40 °C, preferentemente 30 - 35 °C, durante 4 - 48 horas, preferentemente 12- 24 horas.
El producto de alimento o pienso puede estar previamente tratado. Por ejemplo, el producto de alimento o pienso puede esterilizarse, por ejemplo mediante ebullición, a partir de bacterias endógenas.
En algunas modalidades, el cultivo biológicamente activo de acuerdo con la presente invención se añade a la sustancia de calidad alimentaria o de pienso en una concentración de 0,10 - 1,00 % en vol., basado en el volumen total de la sustancia completa a la que se ha añadido el cultivo activo, y el tiempo de incubación es de 12 - 24 horas a 30 °C, y el tiempo de secado es de 24 - 48 horas a 65 °C. Posteriormente, la sustancia de calidad alimentaria o de pienso se convierte en un producto de alimento o pienso.
Ejemplos
La presente invención se describe además mediante los siguientes ejemplos, que no deben considerarse limitantes del alcance de la invención.
Ejemplo 1: Cultivo e identificación deLactiplantibacillus PlantarumProvege
Preparación de las muestras
Se mezclaron 10 g de heces humanas con 90 ml de agua de peptona (0,1 % de peptona o 0,85 % de NaCI) y se homogeneizaron en una batidora Waring (Stomacher 400). Esta fue la dilución 10-1.
Dilución de la muestra
Se prepararon diluciones diez veces mayores de cada muestra mediante el uso de agua de peptona.
Medios selectivos
Se usó agar De Mann, Rogosa y Sharpe (MRS) (Lab M, Bury, Lancashire, Reino Unido) para preparar placas de agar. Este medio permite el crecimiento de bacterias del ácido láctico.
Inoculación
Los números bacterianos se determinaron mediante la siembra de 0,1 ml de tres diluciones apropiadas, por duplicado, en placas de agar MRS y se incubaron a 30 °C durante 48 horas.
Selección de especies
Se seleccionaron 100 colonias bacterianas de aspecto diferente y se reinocularon en placas de agar MRS y se incubaron para su purificación.
Identificación de especies
Se usaron tiras API 50 CH y medio API 50 CHL (Bio Mé'rieux, Marcy-l'Etoile, Francia) para identificar bacterias del ácido láctico a nivel de especie.
Identificación de cepas
El ADN genómico se extrajo con el kit Nucleo®Tissue (Macherey-Nagel, Duren, Alemania) mediante el uso del protocolo de soporte para bacterias.
La diversidad genética de los 100 aislados se analizó mediante Amplificación Aleatoria de ADN Polimórfico (RAPD-PCR) con los cebadores P2 (50-GAT CGG ACGG-30), P16 (50-TCG CCA GCC A-30) y P17 (50-CAG ACA AGC C-30). Las huellas dactilares RAPD se analizaron mediante el uso del software GELCOMPAR II (Applied Maths, Versión 6.5, Sint-Martens-Latem, Bélgica). Los dendrogramas RAPD se obtuvieron con análisis de conglomerados jerárquicos (UPGMA, Unweighted Pair Group Method with Arithmetic Mean). La similitud de los perfiles de las bandas se calculó con base en el coeficiente de correlación de Pearson.
Se eligió al menos un representante de cada grupo de RAPD para su identificación mediante secuenciación del gen 16S ARNr. Se usaron los cebadores 27f (50-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-30) y 685r (50-TCT ACG CAT TTC ACC GCT AC-30) para obtener un fragmento de aprox. 650 pb. Los productos de PCR se purificaron con el kit NucleoSpin®Extract II (Macherey-Nagel) antes de la secuenciación (lGc Genomics GmbH, Berlín, Alemania). La identificación de los aislados se obtuvo a través de la base de datos de ADN GenBank mediante el uso del algoritmo BLAST (http://www.ncbi.nlm.mnih.gov). Se aceptan secuencias que muestren al menos un 99 % de niveles de similitud.
Una cepa deLactiplantibacillus plantarumfue identificada de esta manera y nombradaLactiplantibacillu plantarumProvege (LplantarumProvege)
La Figura 1 muestra una vista microscópica de 100X deL plantarumProvege bajo un microscopio óptico.
Ejemplo 2: Resultados de microbiota intestinal -1
Método
Se obtuvieron muestras de heces de todos los participantes (grupos control y probióticos) antes (preparación), durante y después (lavado) del consumo del batido de quinua, con y sin 109 ufc/ml de Lactiplantibacillus plantarum Provege.
Las muestras de heces se mantuvieron congeladas después de su recolección a -20 °C hasta su entrega al laboratorio y luego se almacenaron a -80 °C hasta su análisis.
La extracción de ADN se realizó mediante el uso del kit de ADN KingFisher e InviMag® Taburete (Invitek GmbH, Berlín, Alemania). El ADN se recogió mediante el uso de un sistema automático de purificación de partículas magnéticas, KingFisher (tipo: 700, Thermo Fischer Scientific Oy, Vantaa, Finlandia).
La región V3-V4 del gen 16S ADNr se amplificó por PCR mediante el uso de las secuencias de nucleótidos salientes del adaptador IIlumina siguiendo los protocolos de Illumina. Después de la amplificación del gen 16S ADNr, la etapa de multiplexación se realizó mediante el uso del kit Nextera XT Index. Se verificó 1 pl del producto de PCR con un chip Bioanalyzer DNA 1000 y las bibliotecas se secuenciaron mediante el uso de un experimento de extremo emparejado de 2x300 pb (kit MiSeq Reagent v3) en una plataforma MiSeq-lllumina (servicio de secuenciación FISAB<i>O, Valencia, España).
Se verificó la quimera de las secuencias filtradas por calidad y las secuencias no quiméricas se procesaron mediante el uso de una canalización QIIME (versión 1.9.0). Las secuencias se agruparon con un 97 % de identidad en unidades taxonómicas operativas (OTU), y las secuencias representativas se clasificaron taxonómicamente según la base de datos de genes de ARNr 16S Greengenes (versión 13.8).
Las diferencias microbianas entre las dos etapas de desarrollo y los dos grupos de tratamiento se analizaron mediante el uso de Calypso versión 8.56 con datos normalizados mediante escalamiento de suma acumulativa, que corrige el sesgo en la evaluación de la abundancia diferencial introducido por la normalización de la suma total. Para el análisis multivariado de géneros bacterianos, se realizó un análisis discriminante de componentes principales (DAPC) que considera los grupos según la etapa de desarrollo y el tratamiento con GBH. Se usó una prueba de análisis de varianza (ANOVA) para analizar las diferencias entre las abundancias relativas de grupos microbianos en el escarabajo de la patata de Colorado y entre el índice de diversidad de Shannon, la riqueza de especies y el índice de Chaol.
Resultados
A continuación se muestran los resultados de las muestras tomadas durante el consumo del batido de quinua.
Figura 2a - Figura 2d muestra los efectos deLactiplantibacillus plantarum Provege, esdecir, mayor abundancia de bacterias intestinalesFusicatenibacter, Tyzzerella, Oscillospirayeubacteria,respectivamente. La significación estadística se calculó mediante el uso de la prueba t de Student. La barra gris, denotada con 0, es el resultado del grupo de control, donde los participantes consumieron el batido de quinua sinLactiplantibacillus plantarumProvege. La barra negra, indicada con 1, es el resultado del grupo de probióticos, donde los participantes consumieron el batido de quinua que contenía 109 ufc/ml deLactiplantibacillus plantarumProvege.
En pacientes con colitis ulcerosa hubo una disminución significativa en el géneroFusicatenibacter.Nosotros encontramos un aumento deFusicatenibacteren el grupo de probióticos al consumir la cepa probiótica como se muestra en la Figura 2a. Esto podría indicar que el consumo de esta cepa tiene un efecto protector contra la colitis ulcerosa.
También se ha asociado a una disminución enTyzzerellayFusicatenibacteren pacientes con cáncer de esófago y, por tanto, un aumento de estas bacterias en el grupo consumidor de probióticos podría tener un efecto protector. Encontramos un aumento deTyzzerellaen el grupo de probióticos al consumir la cepa probiótica como se muestra en la Figura 2b.
Recientemente, varias investigaciones sobre la microbiota intestinal humana han detectadooscilospiray demostró su importancia subyacente para la salud del huésped. Se informó queOscilospiraque era menos abundante en pacientes con enfermedad inflamatoria intestinal y esteatohepatitis no alcohólica pediátrica.
Encontramos queOscilospiraestá estrechamente relacionada con la salud humana porque su abundancia se correlacionó positivamente con la diversidad microbiana, las lipoproteínas de alta densidad y el tiempo de sueño, y se correlacionó inversamente con la presión arterial diastólica, la presión arterial sistólica, la glucosa en sangre en ayunas, los triglicéridos, el ácido úrico y el tipo de heces Bristol. Además, el análisis forestal aleatorio con validación cruzada quíntuple mostró queoscilospirapodría ser un predictor de BMI bajo y estreñimiento en el subconjunto. Encontramos un aumento deOscilospiraen el grupo de probióticos al consumir la cepa probiótica como se muestra en la Figura 2c.
El género se compone de especies filogenéticamente y con bastante frecuencia fenotípicamente diversas, lo que haceeubacteriaun género taxonómicamente único y desafiante. Varios miembros del género producen butirato, que desempeña un papel fundamental en la homeostasis energética, la motilidad del colon, la inmunomodulación y la supresión de la inflamación en el intestino.Eubacteriaspp también lleva a cabo transformaciones de ácidos biliares y colesterol en el intestino, contribuyendo de esta manera a su homeostasis. La disbiosis intestinal y, en consecuencia, una representación modificada de especies deeubacteriaen el intestino, se han relacionado con diversas enfermedades humanas. Encontramos un aumento deeubacteriaen el grupo de probióticos al consumir la cepa probiótica como se muestra en la Figura 2d.
La Figura 3a - Figura 3d muestra los efectos deLactiplantibacillus plantarumProvege en la disminución de la abundancia de bacterias intestinalesPrevotella 2, Prevotella7,aloprevotellayTyzzerella 4,respectivamente. La significación estadística se calculó mediante el uso de la prueba t de Student. La barra gris, denotada con 0, es el resultado del grupo de control, donde los participantes consumieron el batido de quinua sinLactiplantibacillus plantarumProvege. La barra negra, indicada con 1, es el resultado del grupo de probióticos, donde los participantes consumieron el batido de quinua que contenía 109 ufc/ml deLactiplantibacillus plantarumProvege.
Se ha sugerido quePrevotellaes una bacteria beneficiosa ya que está asociada con una dieta rica en plantas; sin embargo, los altos niveles dePrevotellatambién se han relacionado con la obesidad y se han asociado significativamente con el BMI, la resistencia a la insulina en personas no diabéticas, la hipertensión y la enfermedad del hígado graso no alcohólico. Además,Prevotellatambién se ha relacionado con la presión arterial alta y el metabolismo alterado de la glucosa.Prevotella 2, Prevotella 7 AlloprevotellayTyzzerella 4también se han asociado con el riesgo de enfermedad cardiovascular (CVD).
Por lo tanto, una reducción en la abundancia dePrevotella 2, Prevotella7AlloprevotellayTyzzerella 4en el grupo que consumeL plantarum Provegepodría sugerir una mejora en su microbiota intestinal, como se muestra en la Figura 3a a la Figura 3d.
Ejemplo 3: Resultados de la microbiota intestinal - 2
Resultados del grupo (todos los participantes)
Durante la intervención del batido de quinua se estudió el equilibrio de la microbiota intestinal. La intervención consistió en dos grupos. El primer grupo consumió un batido de quinua probiótico y el segundo, un batido de quinua de control. La única diferencia entre los dos grupos fueron las bacterias probióticas agregadas. Los niveles de bacterias en el batido probiótico fueron 109 ufc/ml.
Las Figuras 4 y 5 muestran los resultados del equilibrio microbiano intestinal como la media de todos los participantes de cada grupo. La Figura 4 muestra los resultados de los participantes que consumieron el batido probiótico y la Figura 5 los participantes que consumieron el batido de control. Los resultados se muestran en 3 etapas:
- Antes del consumo (visita 1 y 2)
- Durante el consumo (visita 3 y 4)
- Después del consumo (visita 5)
Este estudio se realizó mediante el uso de un método dependiente del cultivo basado en el cultivo y la selección de microbios y se centró en las enterobacterias, que se sabe que tienen una influencia negativa en la microbiota intestinal, y las bacterias del ácido láctico, que se sabe que tienen una influencia positiva en la microbiota intestinal. Los resultados para el grupo consumidor de probióticos mostraron:
Antes de consumir:
Las enterobacterias se encuentran en cantidades mayores que las bacterias del ácido láctico, lo que indica un estado normal de la microbiota intestinal.
Durante el consumo:
La cantidad de enterobacterias se reduce mientras que la cantidad de bacterias del ácido láctico aumenta.
Después del consumo:
Las bacterias del ácido láctico permanecen en grandes cantidades.
Los resultados sugieren que el efecto beneficioso del consumo de bacterias probióticas seguía presente al menos dos semanas después de suspender su consumo. Por lo tanto, consumir el probiótico estimula las bacterias beneficiosas y esta estimulación está presente incluso después de que el probiótico ya no esté presente.
La Figura 4 muestra los niveles de bacterias ácido lácticas y Enterobacterias antes de consumir el batido probiótico, durante un mes de consumo y dos semanas después de suspender el consumo del batido. Los grupos que comparten la letra en superíndice (dentro de la misma bacteria) no son significativamente diferentes (p<0,05) Los resultados para el grupo de control mostraron:
Antes de consumir:
Las enterobacterias se encuentran en cantidades mayores que las bacterias del ácido láctico, lo que indica un estado normal de la microbiota intestinal.
Durante el consumo:
La cantidad de enterobacterias se reduce mientras que la cantidad de bacterias del ácido láctico aumenta.
Estos resultados no fueron estadísticamente significativos. Esto significa que hay una tendencia a reducir las enterobacterias y aumentar las bacterias del ácido láctico, pero la diferencia es muy pequeña.
Después del consumo:
Las bacterias del ácido láctico todavía se encuentran en grandes cantidades.
Este resultado tampoco es estadísticamente significativo, por lo que las bacterias del ácido láctico se mantuvieron en niveles más altos que en los originales, pero la diferencia es muy pequeña.
La Figura 5 muestra los niveles de bacterias ácido lácticas y Enterobacterias antes de consumir el batido control, durante un mes de consumo y dos semanas después de suspender el consumo del batido. No se observaron diferencias estadísticamente significativas.
Conclusión: El consumo del batido probiótico de quinua que contieneLactiplantibacillus plantarumProvege puede estimular las bacterias intestinales buenas y proteger al sujeto de cualquier desregulación intestinal. Esta estimulación sigue presente incluso después de que el probiótico ya no esté presente. Del grupo de control, podemos concluir que incluso sin el probiótico, la microbiota intestinal tiende a reducir las enterobacterias y aumentar las bacterias del ácido láctico.
Este efecto probablemente se debe a la quinua, que contiene fibra (prebiótica). El prebiótico es el “alimento” que las bacterias del ácido láctico necesitan para ser estimuladas también.
Cuando se estimulan las bacterias ácido lácticas de la microbiota intestinal (en cantidades superiores a lo normal), el intestino queda más protegido ante diferentes alteraciones (estrés, infecciones, etc.).
Ejemplo 4:Lactiplantibacillus PlantarumProvege usado para aumentar el valor nutricional
Mayor valor nutricional de cereales y legumbres/leguminosas:
Se hervían cereales o legumbres/leguminosas para esterilizarlos de cualquier bacteria endógena. Los granos húmedos o legumbres/leguminosas se inocularon con 1 % de Lactiplantibacillus plantarum Provege y se incubaron a 30 °C durante 12 - 24 horas. Después de la etapa de fermentación, se secaron a 65 °C durante 24 - 48 horas. Una vez secos, se molían hasta convertirlos en harina.
Las harinas se analizaron en Eurofins Scientific Finland.
Aumentado en aminoácidos libres:
Quínoa g/100 g Alubia verde g/100 g
NFQ FQ NFFB FFB
Alanina 0,018 0,253 Alanina 0,014 0,354 Arginina 0,071 0,085 Arginina 0,584 0,15
Ácido aspártico 0,028 0,292 Ácido aspártico 0,06 0,274 Cisteína <0,007 <0,007 Cisteína <0,007 0,014
Ácido glutámico 0,049 0,297 Ácido glutámico 0,089 0,505 Glicina <0,01 0,98 Glicina <0,01 0,072 Histidina <0,018 0,032 Histidina <0,018 0,043 Isoleucina <0,018 0,109 Isoleucina <0,018 0,175 Leucina <0,008 0,19 Leucina <0,008 0,311
Lisina <0,007 0,064 Lisina 0,01 0,105 Metionina <0,008 0,043 Metionina <0,008 0,018 Ornitina <0,01 <0,01 Ornitina <0,01 0,052 Fenilalanina <0,016 0,104 Fenilalanina <0,016 0,179 Prolina <0,01 0,195 Prolina 0,021 0,199 Serina <0,008 0,099 Serina <0,008 0,083 Taurina <0,009 0,96 Taurina <0,009 0,248 Treonina <0,003 0,08 Treonina 0,003 0,056 Tirosina <0,012 0,079 Tirosina 0,012 <0,012 Valina 0,008 0,133 Valina <0,008 0,197 Triptófano Triptófano
libre 0,012 0,021 libre <0,01 0,022
Gaba (g/kg) 0,07 0,988 GABA (g/kg) <0,05 0,434
Aumentado en minerales:
Quínoa mg/kg Alubia verde mg/kg
NFQ FQ NFFB FFB
Calcio 520 730 Calcio 1200 1400
Hierro 39 44 Hierro 49 58
Zinc 27 32 Zinc 47 54
NFQ: quinua no fermentada
FQ: quinua fermentada
NFFB: alubia verde no fermentada
FFB: alubia verde fermentada
Ejemplo 5:Lactiplantibacillus PlantarumProvege usada para aumentar la vida útil
1. Actividad antifúngica en placas de agar:
Método:
Las LAB se inocularon en placas de agar MRS como líneas de dos centímetros de largo. Después de 24 horas de incubación a 30 °C, las placas se cubrieron con 10 ml de LB agar blando (2,5 % LB, 0,7 % agar) que se inoculó con 0,1 % de mohos (Apergillus oryzae 1011 o Aspergullus oryzae 66222). A continuación, las placas se incubaron a 30 °C durante 48 horas. Se examinaron las zonas claras de inhibición alrededor de las líneas bacterianas en las placas y se midieron las áreas de las zonas claras.
Resultados:
Aspergillus oryzae 1011 Aspergillus oryzae 66222 Diámetro (cm) Diámetro (cm)
L. plantarum Provege0,79L. plantarum Provege0,93
L. casei0,51L. casei0,69
L. crustorum0,13L. crustorum0,22
Ln. citreum0,18Ln. citreum0
L. plantarum0,53L. plantarum0,74
Como muestran los resultados, las placas conL plantarum Provegetenían las zonas claras más grandes en comparación con otras cepas probadas, lo que sugiere la actividad antifúngica deL plantarum Provege.
2. Actividad antifúngica enL. plantarumProvege de pan de quinua fermentado
Se prepararon pan negro y pan blanco de acuerdo con una receta comúnmente conocida en la industria, mediante el uso de harinas con y sin fermentación Provege obtenidas de acuerdo con el ejemplo 4.
Las rodajas de panes se estudiaron de acuerdo con su capacidad para resistir el crecimiento de hongos. Se realizaron duplicados de cada muestra. Las rodajas fueron inoculadas con 50 pl de una suspensión deAspergillus orizae(un asa de molde diluida en 1 ml de agua de peptona). Las placas se recubrieron y almacenaron en bolsas de plástico. Las muestras se incubaron a temperatura ambiente. Las muestras sin inoculación sirvieron como controles y se almacenaron de la misma forma. El crecimiento del moho se examinó todos los días durante ocho días mediante la observación de la apariencia y medición del diámetro de crecimiento, como se muestra en la Figura 6. Como se puede ver en la Figura 7, los panes fermentados Provege (indicados con los símbolos ■, ▲) comenzaron a desarrollar moho más tarde y más lentamente que las muestras de control (indicadas con los símbolos □, A).
Claims (14)
1. Una cepa bacteriana deLactiplantibacillus plantarumProvege, depositada el 24 de agosto de 2021 en DSMZ con el número DSM 33989.
2. Un cultivo biológicamente activo que comprende la cepa de acuerdo con la reivindicación 1, y un medio de cultivo o residuos del mismo, por ejemplo agua de peptona que contiene 0,1 % de peptona.
3. Un producto encapsulado, tal como un polvo liofilizado, un comprimido o una cápsula, que comprende la cepa de acuerdo con la reivindicación 1.
4. Una composición de alimento o pienso, un producto de alimento o pienso, una formulación para el enriquecimiento de alimentos o piensos, un complemento de alimento o pienso, o una formulación nutracéutica, que comprende la cepa de acuerdo con la reivindicación 1, el cultivo biológicamente activo de acuerdo con la reivindicación 2, o el producto encapsulado de acuerdo con la reivindicación 3.
5. Un método para fabricar una composición de alimento o pienso probiótico, que comprende las etapas:
- a) poner en contacto la cepa bacteriana de acuerdo con la reivindicación 1, el cultivo biológicamente activo de acuerdo con la reivindicación 2, o el producto encapsulado de acuerdo con la reivindicación 3, con una composición de alimento o pienso;
opcionalmente,
- b) fermentar la composición de alimento o pienso obtenida en la etapa a).
6. El método de acuerdo con la reivindicación 5, en donde
- la etapa a) comprende agregar el cultivo biológicamente activo de acuerdo con la reivindicación 2 a la composición de alimento o pienso en una concentración de 0,01 -10,00 % en vol., basado en el volumen total de toda la composición a la que se ha añadido el cultivo activo, preferentemente 0,05 - 5,00 % en vol., con mayor preferencia 0,10 -1,00 % en vol., y mezclar, para obtener de esta manera una mezcla; y
- la etapa b) comprende incubar la mezcla a 25 - 40 °C, preferentemente 30 - 35 °C, durante 4 - 48 horas, preferentemente 6 - 24 horas.
7. Un método para aumentar el valor nutricional de una sustancia de calidad alimentaria o de pienso, que comprende:
- fermentar una mezcla de una sustancia de calidad alimentaria o de pienso y la cepa bacteriana de acuerdo con la reivindicación 1, el cultivo biológicamente activo de acuerdo con la reivindicación 2, o el producto encapsulado de acuerdo con la reivindicación 3.
8. El método de acuerdo con la reivindicación 7, en donde el valor nutricional incluye el valor cuantitativo de al menos un aminoácido y/o al menos un mineral y/o al menos una vitamina, y
- la mezcla comprende el cultivo biológicamente activo de acuerdo con la reivindicación 2 en una concentración de 0,01 -10,00 % en vol., basado en el volumen total de la mezcla, preferentemente 0,05 - 5,00 % en vol., con mayor preferencia 0,10 -1,00 % en vol. en la sustancia de calidad alimentaria o de pienso; y
- la fermentación de la mezcla se realiza a 25 - 40 °C, preferentemente 30 - 35 °C, durante 4 - 48 horas, preferentemente 12-24 horas; y el método opcionalmente comprende además
- secar la mezcla fermentada a 40 - 120 °C, preferentemente 50 - 80 °C, con mayor preferencia 60 - 70 °C, durante 4- 96 horas, con mayor preferencia 24 - 48 horas.
9. El método de acuerdo con la reivindicación 7 u 8, en donde la sustancia de calidad alimentaria o de pienso es cereales o legumbres/leguminosas, tales como avena, quinua o alubias verdes.
10. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, en donde el aminoácido es alanina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, treonina, tirosina o valina.
11. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10, en donde el mineral es calcio, hierro o zinc.
12. Un método para prolongar la vida útil de un producto de alimento o pienso, que comprende fermentar una mezcla de un producto de alimento o pienso o un material de partida de un producto de alimento o pienso y la cepa bacteriana de acuerdo con la reivindicación 1, el cultivo biológicamente activo de acuerdo con la reivindicación 2, o el producto encapsulado de acuerdo con la reivindicación 3.
13. El método de acuerdo con la reivindicación 12, en donde
- la mezcla comprende el cultivo biológicamente activo de acuerdo con la reivindicación 2 en una concentración de 0,01 - 10,00%en vol., basado en el volumen total de la mezcla, preferentemente 0,05 - 5,00%en vol., con mayor preferencia 0,10 -1,00 % en vol., y
- la fermentación de la mezcla se realiza a 25 - 40 °C, preferentemente 30 - 35 °C, durante 4 - 48 horas, preferentemente 12-24 horas.
14. Uso de la cepa de acuerdo con la reivindicación 1, el cultivo biológicamente activo de acuerdo con la reivindicación 2, o el producto encapsulado de acuerdo con la reivindicación 3, en la fabricación de una composición de alimento o pienso, un producto de alimento o pienso, una formulación para el enriquecimiento de alimentos o piensos, un complemento de alimento o pienso, o una formulación nutracéutica.
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