ES2952139T3 - Firma proteica para el diagnóstico de cáncer colorrectal y/o etapa precancerosa del mismo - Google Patents
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Abstract
La presente invención se refiere a un método in vitro para el diagnóstico de cáncer colorrectal y/o estadio precanceroso del mismo. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
Description
DESCRIPCIÓN
Firma proteica para el diagnóstico de cáncer colorrectal y/o etapa precancerosa del mismo
Campo de la invención
La presente invención se relaciona con el diagnóstico de cáncer colorrectal o una etapa precancerosa del mismo utilizando la firma proteica [Flt3L y CYFRA21-1] en sangre, suero o plasma.
Estado de la técnica
El cáncer colorrectal (CRC) (también conocido como cáncer de colon, cáncer de recto o cáncer de intestino) es el desarrollo de cáncer en el colon o el recto (partes del intestino grueso). La gran mayoría de los cánceres colorrectales son adenocarcinomas. Esto se debe a que el colon tiene numerosas glándulas dentro del tejido. Cuando estas glándulas experimentan una serie de cambios a nivel genético, proceden de manera predecible a medida que pasan de un cáncer de colon benigno a uno invasivo y maligno. Los adenomas de colon, particularmente el adenoma colorrectal (AA) avanzado, son una versión benigna de los adenocarcinomas malignos pero aún con potencial maligno si no se extirpan (generalmente se extirpan debido a su tendencia a malignizarse y provocar cáncer de colon).
El cribado es una forma eficaz de prevenir y disminuir las muertes por cáncer colorrectal y se recomienda a partir de los 50 a los 75 años. La prueba de cribado más conocida y utilizada con mayor frecuencia para el cáncer colorrectal se llama prueba inmunoquímica fecal (FIT). La FIT detecta sangre en las muestras de heces que pueden ser un signo de precáncer o cáncer. Si se obtienen resultados anormales, generalmente se recomienda una colonoscopia que le permite al médico observar el interior del colon y el recto para hacer un diagnóstico. Durante la colonoscopia, se pueden extirpar pequeños pólipos si se encuentran. Si se encuentra un pólipo grande o un tumor, se puede realizar una biopsia para verificar si es canceroso. El gastroenterólogo utiliza una colonoscopia para encontrar y extirpar estos adenomas y pólipos para evitar que sigan adquiriendo cambios genéticos que conducirán a un adenocarcinoma invasivo.
Aunque, como se ha explicado anteriormente, la FIT se utiliza actualmente para el cribado del cáncer colorrectal, es importante señalar que la FIT ofrece una baja sensibilidad para AA (alrededor del 20-30 % dependiendo de la literatura), lo que significa que la mayoría de este tipo de pacientes pueden ser mal evaluados. clasificado como que no tienen la enfermedad. En consecuencia, la FIT no puede identificar adenomas debido a su baja sensibilidad. Además, dado que la FIT utiliza muestras de heces, ofrece un cumplimiento bajo. Por otro lado, la colonoscopia es una técnica invasiva en la que la complicación más grave suele ser la perforación gastrointestinal. Por otro lado, la colonoscopia es hoy en día un procedimiento anestésico, y los laxantes que se suelen administrar durante la preparación intestinal para la colonoscopia se asocian a diversos problemas digestivos.
Es importante señalar que los métodos utilizados hoy en día para el cribado de población general con riesgo de padecer CRC o AA se asocian a una alta tasa de falsos positivos. En consecuencia, hoy en día se realizan una gran cantidad de colonoscopias de seguimiento innecesarias.
Chen et al. (Clin Epidemiol. 2017; 9: 517-526) divulga un panel de marcadores múltiples de 5 marcadores de proteínas basados en sangre para diagnosticar el cáncer colorrectal: factor de diferenciación de crecimiento 15 (GDF-15), anfiregulina (AREG), ligando de antígeno Fas (FasL), ligando de tirosina quinasa 3 relacionado con Fms (FLT3L) y autoanticuerpo TP53.
La presente invención ofrece una solución clara a los problemas citados anteriormente porque está enfocada a un método in vitro para identificar o cribar sujetos humanos con riesgo de padecer cáncer colorrectal o adenomas colorrectales (particularmente adenomas colorrectales avanzados), a partir del nivel de concentración de biomarcadores proteicos aislados de muestras mínimamente invasivas tales como sangre, suero o plasma. Dado que el método de la invención se basa en muestras de sangre, suero o plasma, se espera que mejore el cumplimiento del cribado del cáncer colorrectal. Además, el método de la invención ofrece una alta sensibilidad y especificidad, lo que significa que es un método sólido y rentable para la detección tanto de cáncer colorrectal como de adenomas colorrectales.
Descripción de la invención
La presente invención se refiere a un método in vitro para diagnosticar, identificar o cribar sujetos humanos con riesgo de padecer cáncer colorrectal y/o adenomas colorrectales avanzados, a partir del nivel de concentración de biomarcadores proteicos aislados de sangre, suero o plasma. El método de la invención ofrece alta sensibilidad y especificidad, lo que significa que es un método sólido y rentable para la detección tanto de cáncer colorrectal como de adenomas colorrectales.
Dado que el método de la invención tiene una mayor sensibilidad y especificidad en comparación con el método actualmente utilizado (FIT) para el cribado de población general con riesgo de padecer CRC o AA, se asocia a un menor porcentaje de falsos positivos. En consecuencia el método descrito en la presente invención ayuda claramente a reducir el número de colonoscopias de seguimient nados
o diagnosticados en la actualidad. Una vez realizado el método de la invención, si se determina que los pacientes pueden estar padeciendo cáncer colorrectal y/o etapa precancerosa, el resultado debe ser confirmado por colonoscopia. Sin embargo, si no se determina que el paciente podría estar padeciendo cáncer colorrectal y/o etapa precancerosa, no hay necesidad de realizar una colonoscopia y se recomiendan pruebas de rutina con el método de la invención definido a continuación.
En particular, la primera realización de la presente invención se refiere a un método in vitro (en adelante "método de la invención") de acuerdo con la reivindicación independiente 1.
El método de la invención comprende medir el nivel de concentración de al menos la combinación [Flt3L y CYFRA21-1] en una muestra biológica obtenida del sujeto. Otras firmas de biomarcadores que no comprenden esta doble combinación se describen aquí pero no se reivindican.
Al respecto, es importante considerar que todas las firmas más confiables reivindicadas en la presente invención comprenden [Flt3L y CYFRA21-11, obteniendo así varias firmas de biomarcadores que comprenden [Flt3L y CYFRA21-1], tal como [Flt3L y CYFRA21-1 y AREG], [Flt3L y CYFRA21-1 y AREG y ErbB4] o [Flt3L y CYFRA21-1 y AREG y CLEC2C] con un área bajo la curva (AUC) de alrededor de 0.9 para la detección de CRC y con un buen rendimiento también para la detección de AA (véase Tabla 12). Aunque cualquiera de las firmas que componen [Flt3L y CYFRA21-1], se puede usar eficientemente de acuerdo con la presente invención, las siguientes firmas que comprenden [Flt3L y CYFRA21-11, son especialmente preferidas ya que ofrecen un valor de AUC superior a 0.9 para la detección de CRC y un buen rendimiento para la detección de Aa : [Flt3L y CYFRA21-1 y AREG y ErbB4] (AUC para CRC = 0.931) o [Flt3L y CYFRA21-1 y AREG y CLEC2C] (AUC para CRC = 0.915) (véase Tabla 12).
La segunda realización de la presente invención se refiere al uso de un kit de acuerdo con la reivindicación independiente 6.
De acuerdo con el método de la invención, después de medir el nivel de concentración de cualquiera de las combinaciones de biomarcadores citadas anteriormente, se obtiene un valor de puntuación para la firma y este valor de puntuación se compara con un valor umbral que define la regla de diagnóstico. Si este valor de puntuación es mayor que el umbral, entonces la muestra correspondiente se clasifica como muestra positiva, lo que es una indicación de que el paciente podría estar sufriendo de cáncer colorrectal y/o etapa precancerosa del mismo. El valor umbral se ha definido para optimizar los valores de sensibilidad y especificidad. En consecuencia, en una realización preferida, el método de la invención comprende: a) medir el nivel de concentración de cualquiera de las combinaciones de biomarcadores citadas anteriormente, en una muestra biológica obtenida del sujeto, b) procesar los valores de concentración con el fin de obtener una puntuación de riesgo y c) en el que si se identifica una desviación o variación del valor de puntuación de riesgo obtenido para cualquiera de las combinaciones de biomarcadores citadas anteriormente, en comparación con un valor de referencia, esto es indicativo de que el sujeto padece cáncer colorrectal y/o una etapa precancerosa.
La tercera realización de la presente invención se refiere al uso in vitro de cualquiera de los biomarcadores o firmas citados anteriormente para el diagnóstico de cáncer colorrectal y/o una etapa precancerosa del mismo.
En una realización preferida, la etapa precancerosa del cáncer colorrectal es un adenoma colorrectal avanzado.
En una realización preferida, el diagnóstico del cáncer colorrectal y/o una etapa precancerosa del mismo se debe confirmar mediante una técnica de imagen, preferiblemente colonoscopia.
En una realización preferida, la presente invención de acuerdo con el método de la invención se refiere además a un método in vitro para detectar cáncer colorrectal y/o una etapa precancerosa del mismo, comprendiendo dicho método: a) obtener una muestra de plasma de un paciente humano; y b) detectar si alguno de los biomarcadores o firmas de proteínas citados anteriormente está presente en la muestra de plasma poniendo en contacto la muestra de plasma con un anticuerpo dirigido contra dichos biomarcadores o firmas de proteínas y detectando la unión entre las proteínas y el anticuerpo.
Para los fines de la presente invención se definen los siguientes términos:
• El término "cáncer colorrectal" es una afección médica caracterizada por el cáncer de las células del tracto intestinal debajo del intestino delgado (es decir, el intestino grueso (colon), incluido el ciego, el colon ascendente, el colon transverso, el colon descendente, el colon sigmoide y recto).
• La expresión "adenoma colorrectal" se refiere a los adenomas del colon, también llamados pólipos adenomatosos, que es una etapa benigna y precancerosa del cáncer colorrectal pero aún con alto riesgo de progresión a cáncer colorrectal.
• La expresión "adenoma colorrectal avanzado" se refiere a adenomas que tienen un tamaño de al menos 10 mm o que histológicamente tienen un alto grado de displasia o un componente velloso superior al 20%.
• La expresión "muestra biológica mínimamente invasiva" se refiere a cualquier muestra que se extrae del cuerpo del paciente sin necesidad de utilizar instrumentos nocivos, distintos de las finas agujas utilizadas para extraer la sangre del paciente y, por tanto, sin ser perjudicial para el paciente. Específicamente, muestra biológica mínimamente invasiva se refiere en la presente invención a: muestras de sangre, suero o plasma.
• La expresión "nivel de concentración de referencia medido en sujetos de control sanos" se refiere a un "valor de referencia" del nivel de concentración de las proteínas. Si se determina una desviación del nivel de concentración de las proteínas con respecto a dicho "nivel de concentración de referencia medido en sujetos de control sanos", esto es una indicación de cáncer colorrectal o etapa precancerosa del mismo. Particularmente, si el nivel de concentración de los biomarcadores o firmas de la presente invención son significativamente más altos o más bajos con respecto a dicho "valor de referencia", esto es una indicación de cáncer colorrectal o etapa precancerosa del mismo.
• La expresión "puntaje de riesgo" se refiere a un valor de riesgo obtenido después de procesar uno o más valores de concentración en un solo valor (o valor de riesgo), que representa la probabilidad de enfermedad para el individuo. Este valor de riesgo se comparará con un valor de referencia para evaluar si el paciente podría estar padeciendo cáncer colorrectal y/o estadio precanceroso del mismo.
• Un "valor de referencia" puede ser un valor de umbral o un valor de corte. Típicamente, un "valor de umbral" o "valor de corte" se puede determinar experimental, empírica o teóricamente. También se puede seleccionar arbitrariamente un valor umbral con base en las condiciones experimentales y/o clínicas existentes, como reconocería un experto en la técnica. El valor umbral debe determinarse para obtener la sensibilidad y especificidad óptimas de acuerdo con la función de la prueba y el balance beneficio/riesgo (consecuencias clínicas de falsos positivos y falsos negativos). Preferiblemente, el experto en la técnica puede comparar los niveles (o puntuaciones) de biomarcadores obtenidos de acuerdo con el método de la invención con un valor umbral definido. Típicamente, la sensibilidad y la especificidad óptimas (y, por lo tanto, el valor umbral) se pueden determinar mediante una curva de característica operativa del receptor (ROC) basada en datos experimentales. Por ejemplo, después de determinar los niveles de los biomarcadores en un grupo de referencia, se puede utilizar el análisis algorítmico para el tratamiento estadístico de las concentraciones medidas de biomarcadores en las muestras biológicas que se van a analizar, y así obtener un estándar de clasificación que tenga importancia para la clasificación de la muestra. El nombre completo de la curva ROC es curva característica del operador del receptor, que también se conoce como curva característica de operación del receptor. Se utiliza principalmente para pruebas diagnósticas bioquímicas clínicas. La curva ROC es un indicador completo que refleja las variables continuas de la tasa de verdaderos positivos (sensibilidad) y la tasa de falsos positivos (1-especificidad). Revela la relación entre sensibilidad y especificidad con el método de composición de imágenes. Una serie de diferentes valores de corte (umbrales o valores críticos, valores límite entre los resultados normales y anormales de la prueba de diagnóstico) se establecen como variables continuas para calcular una serie de valores de sensibilidad y especificidad. Luego, la sensibilidad se usa como la coordenada vertical y la especificidad se usa como la coordenada horizontal para dibujar una curva. Cuanto mayor sea el área bajo la curva (AUC), mayor será la precisión del diagnóstico. En la curva ROC, el punto más cercano al extremo superior izquierda del diagrama de coordenadas es un punto crítico que tiene valores de alta sensibilidad y alta especificidad. El valor AUC de la curva ROC está entre 1.0 y 0.5. Cuando AUC>0.5, el resultado del diagnóstico mejora cada vez más a medida que el AUC se acerca a 1. Cuando AUC está entre 0.5 y 0.7, la precisión es baja. Cuando AUC está entre 0.7 y 0.9, la precisión es buena. Cuando AUC es superior a 0.9, la precisión es bastante alta. Este método algorítmico se realiza preferiblemente con un ordenador. El software o los sistemas existentes en la técnica se pueden usar para dibujar la curva ROC, tal como por ejemplo: Software de estadística médica MedCalc 9.2.0.1, SPSS 9.0.
• Por "comprender" se entiende que incluye, pero no se limita a, todo lo que sigue a la palabra "comprender". Por tanto, el uso del término "comprender" indica que los elementos enumerados son necesarios u obligatorios, pero que otros elementos son opcionales y pueden o no estar presentes.
• Por "que consiste en" se entiende "que incluye y se limita a", todo lo que sigue a la expresión" que consiste en". Por lo tanto, la expresión "que consiste en" indica que los elementos enumerados son requeridos u obligatorios, y que no puede haber otros elementos presentes.
A los efectos de la presente invención se identifican las siguientes proteínas de acuerdo con la base de datos Uniprot:
Breve descripción de las figuras
Figura 1. Curva de características operativas del receptor (ROC) para: A) [Flt3L y CYFRA21-1] en cáncer colorrectal. Årea bajo la curva (AUC) = 0.865. B) [Flt3L y CYFRA21-1] en adenoma colorrectal avanzado. Årea bajo la curva (AUC) = 0.606. El eje X representa la Especificidad. El eje Y representa la sensibilidad.
Figura 2. Curva de características operativas del receptor (ROC) para: A) [Flt3L y CYFRA21-1 y AREG] en cáncer colorrectal. Årea bajo la curva (AUC) = 0.899. B) [Flt3L y CYFRA21-1 y AReG] en adenoma colorrectal avanzado. Årea bajo la curva (AUC) = 0.720. El eje X representa la Especificidad. El eje Y representa la sensibilidad.
Figura 3. Curva de características operativas del receptor (ROC) para: A) [Flt3L y CYFRA21-1 y AREG y ErbB4] en cáncer colorrectal. Årea bajo la curva (AUC) = 0.931. b ) [Flt3L y CYFRA21-1 y AREG y ErbB4] en adenoma colorrectal avanzado. Årea bajo la curva (AUC) = 0.707. El eje X representa la Especificidad. El eje Y representa la sensibilidad.
Figura 4. Curva de características operativas del receptor (ROC) para: A) [Flt3L y CYFRA21-1 y AREG y CLEC2C] en cáncer colorrectal. Årea bajo la curva (AUC) = 0.915. B) [Flt3L y Cy FrA21-1 y AREG y CLEC2C] en adenoma colorrectal avanzado. Årea bajo la curva (AUC) = 0.727. El eje X representa la Especificidad. El eje Y representa la sensibilidad.
Figura 5. Curva de características operativas del receptor (ROC) para: A) [AREG y CYFRA21-1] en cáncer colorrectal. Årea bajo la curva (AUC) = 0.878. B) [AREG y CYFRA21-1] en adenoma colorrectal avanzado. Årea bajo la curva (AUC) = 0.722. El eje X representa la Especificidad. El eje Y representa la sensibilidad.
Figura 6. Curva de características operativas del receptor (ROC) para: A) [AREG y CYFRA21-1 y Flt3L y ErbB4] en cáncer colorrectal. Årea bajo la curva (AUC) = 0.931. b ) [AREG y CYFRA21-1 y Flt3L y ErbB4] en adenoma colorrectal avanzado. Årea bajo la curva (AUC) = 0.707. El eje X representa la Especificidad. El eje Y representa la sensibilidad.
Figura 7. Curva de características operativas del receptor (ROC) para: A) [AREG y CYFRA21-1 y Flt3L y CLEC2C] en cáncer colorrectal. Årea bajo la curva (AUC) = 0.915. B) [AREG y CYFRA21-1 y Flt3L y CLEC2C] en adenoma colorrectal avanzado. Årea bajo la curva (AUC) = 0.727. El eje X representa la Especificidad. El eje Y representa la sensibilidad.
Figura 8. Curva de características operativas del receptor (ROC) para: A) [AREG y CYFRA21-1 y CD147 y HGFR] en cáncer colorrectal. Årea bajo la curva (AUC) = 0.888. B) [AREG y cYfRA21-1 y CD147 y HGFR] en adenoma colorrectal avanzado. Årea bajo la curva (AUC) = 0.769. El eje X representa la Especificidad. El eje Y representa la sensibilidad.
Descripción detallada de la invención
Ejemplo 1. MATERIAL Y MÉTODOS.
Ejemplo 1.1. Población de estudio.
En este estudio se incluyeron prospectivamente un total de 96 sujetos de ocho hospitales españoles: (Hospital de Burgos, Hospital de Vigo, Hospital de Donosti, Hospital de Ourense, Hospital del Bierzo, Hospital de Beltvigte y Hospital de Zaragoza): 64 pacientes recién diagnosticados de neoplasia colorrectal esporádica (32 con CRC y 32 con AA) y 32 individuos sanos sin antecedentes personales de ningún tipo de cáncer y con colonoscopia reciente confirmando la ausencia de lesiones neoplásicas colorrectales. Los pacientes con AA eran aquellos con adenomas de al menos 10 mm de tamaño o histológicamente con displasia de alto grado o >20% de componente velloso. Las características de los participantes se muestran en Tabla 1. Se recogieron muestras de sangre antes de la endoscopia o cirugía en todos los individuos.
Características clínico-patológicas de la cohorte de estudio
El estudio fue aprobado por el Comité de Ética Institucional de cada Hospital y se obtuvo el consentimiento informado por escrito de todos los participantes de acuerdo con la Declaración de Helsinki.
Ejemplo 1.2. Preparación de la muestra.
Se recogieron diez ml de sangre entera de cada participante en tubos que contenían EDTA K2. Las muestras de sangre se colocaron a 4°C hasta la separación del plasma. Las muestras se centrifugaron a 1,600 x g durante 10 minutos a 4 °C para girar las células sanguíneas y el plasma se transfirió a tubos nuevos, seguido de una centrifugación adicional a 16,000 x g durante 10 minutos a 4 °C para eliminar por completo los componentes celulares.
Ejemplo 1.3. Análisis molecular.
La concentración de los biomarcadores en las muestras de plasma se estableció mediante las pruebas comerciales ELISA (ensayo inmunoabsorbente enlazado a enzimas) y CLIA (inmunoensayo de quimioluminiscencia) y siguiendo su correspondiente manual de instrucciones. HGFR y ErbB4 se analizaron con el kit ELISA de Cloud clone Corp. El nivel de CD147, CLEC2C, Flt3L y FasL se midió usando el kit ELISA de Elabscience. En el caso del IFNgamma se utilizó el kit ELISA de Abcam. En relación con la prueba CLIA, CYFRA21-1 y AREG se analizaron con la prueba CLIA de Cloud Clone Corp.
Ejemplo 1.4. Cuantificación de datos.
Para el paso de cuantificación de proteínas, las muestras se procesaron con el kit correspondiente (ELISA/CLIA) y se distribuyeron en placas experimentales. Cada placa r una
curva estándar. Los datos de fluorescencia obtenidos de cada ejecución (expresados como números enteros) se han corregido en segundo plano para cada muestra y se han cuantificado mediante una curva estándar generada mediante un modelo de regresión polinomial de 2 grados.
Ejemplo 1.5. Análisis estadístico.
En el análisis se consideraron tres grupos de individuos. CRC (Individuos diagnosticados con cáncer colorrectal), AA (Individuos diagnosticados con adenoma avanzado) y CTL (Individuos sin enfermedad).
Los datos de cuantificación sin procesar se han transformado aplicando la función de raíz cuadrada y luego centrándolos y escalando para que, después de la transformación, cada medida de proteína tenga una media de 0 y una desviación estándar de 1. Los valores de cuantificación se resumen en Tabla 2 y Tabla 3, donde cada proteína se describe como mediana y rango intercuartílico en los diferentes grupos considerados.
La no normalidad de los datos se confirmó mediante la prueba de Shapiro-Wilk y, en consecuencia, se utilizó la prueba de suma de rangos de Wilcoxon para comparar los casos de CRC o los casos de AA con los individuos de CTL.
El rendimiento diagnóstico de las proteínas individuales y algunas de sus combinaciones se ha evaluado mediante sus curvas de características operativas del receptor (ROC) y el área bajo las curvas ROC (AUC). Además, las sensibilidades, especificidades, valores predictivos positivos y negativos (PPV y NPV) para las diferentes pruebas se calcularon en el punto de corte óptimo definido por el mejor Índice de Youden (o de manera equivalente, el punto de la ROC que maximiza la suma de sensibilidad y especificidad).
Las puntuaciones utilizadas para derivar las ROC-AUC y el resto de los valores de rendimiento se obtuvieron utilizando un modelo de regresión logística univariante para las proteínas individuales y modelos de regresión logística multivariante para las diferentes combinaciones de proteínas consideradas. El CI del 95% para las AUC se obtuvo con la metodología DeLong tanto en marcadores individuales como en combinación de ellos.
Ejemplo 2. RESULTADOS.
Ejemplo 2.1. Resultados de marcadores individuales.
Se determinaron diferentes métricas para evaluar las proteínas individuales, permitiendo además las siguientes comparaciones: CRC/AA vs CTL. Puede verse que AREG, CYFRA21-1 y Flt3L son significativamente diferentes entre los grupos CRC y CTL y su AUC es significativamente diferente de 0.5 (ya que su intervalo de confianza del 95 % no incluye 0.5). En el caso del grupo AA, AREG también muestra diferencias estadísticamente en comparación con el grupo CTL.
La Tabla 2 y Tabla 3 muestran métricas para proteínas individuales, incluido el valor p de la prueba de Wilcoxon (p.Wilc), el área bajo la curva ROC (AUC) y la Sensibilidad (Sens.), la Especificidad (Espec.) y valores predictivos positivo (VPP) y negativo (VPN) calculados en el punto de corte de la curva ROC con el mejor índice de Youden. La columna de signos indica, para los biomarcadores con un valor de p ≤ 0.25, si los niveles altos del marcador aumentan o disminuyen el riesgo de enfermedad (+ y - respectivamente).
Tabla 2
Tabla 3
Ejemplo 2.2. Mejores combinaciones de biomarcadores.
Con el objetivo de mejorar la capacidad diagnóstica individual, se han explorado combinaciones de proteínas con el siguiente procedimiento: Con base en marcadores con p≤0.25 en CRC.vs.CTL (Tabla 3) o AA.vs.CTL (Tabla 4), se utilizó regresión logística multivariante para explorar todas las combinaciones posibles de dos, tres y cuatro de estas proteínas tomadas al mismo tiempo.
La Tabla 4, Tabla 5, Tabla 5 bis, Tabla 6 y Tabla 6 bis muestran el AUC logrado para las combinaciones de dos, tres y cuatro biomarcadores respectivamente, discriminando CRC vs CTL.
La Tabla 7, Tabla 8 y Tabla 9 muestran el AUC logrado para las combinaciones de dos, tres y cuatro biomarcadores respectivamente, discriminando AA vs CTL.
Con base en sus respectivas AUC, se han seleccionado los mejores modelos. La Tabla 10 y Tabla 10bis muestran los mejores resultados para CRC. La Tabla 11 y Tabla 11bis muestran los mejores resultados para AA. Se incluyen las métricas para las mejores combinaciones de proteínas, que comprenden el área bajo la curva ROC (AUC), la sensibilidad (Sens.), la especificidad (Epec.) y los valores predictivos positivo (PPV) y negativo (NPV) calculados en el punto de corte de la curva ROC con el mejor índice de Youden.
Finalmente, la Tabla 12 y Tabla 12bis han sido diseñadas para mostrar la superposición de las firmas más importantes reivindicadas en la presente invención. Se muestra claramente que todas las mejores firmas de firma comprenden [Flt3L y CYFRA21-1] y [AREG y CYFRA21-1].
Tabla 12
Tabla 12 bis
Claims (7)
1. Método in vitro para el diagnóstico de cáncer colorrectal y/o una etapa precancerosa del mismo que comprende: a) Medir el nivel de concentración de la combinación [Flt3L y CYFRA21-1] en una muestra biológica obtenida del sujeto seleccionada de sangre, suero o plasma; y b) en el que si se identifica una desviación o variación del nivel de concentración de al menos la combinación [Flt3L y CYFRA21-1], en comparación con el nivel de concentración de referencia medido en sujetos de control sanos, esto es indicativo de que el sujeto sufre de cáncer colorrectal y/o una etapa precancerosa.
2. Método in vitro para el diagnóstico de cáncer colorrectal y/o un estadio precanceroso del mismo, de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende: a) Medir el nivel de concentración de al menos la combinación [Flt3L y CYFRA21-1 y AREG], o la combinación [Flt3L y CYFRA21-1 y AREG y ErbB4] o la combinación [Flt3L y CYFRA21-1 y AREG y CLEC2C] en una muestra biológica obtenida del sujeto seleccionada de sangre, suero o plasma; y b) en el que si se identifica una desviación o variación del nivel de concentración de al menos una combinación citada en el paso a), en comparación con el nivel de concentración de referencia medido en sujetos de control sanos, esto es indicativo de que el sujeto padece cáncer colorrectal. y/o una etapa precancerosa.
3. Método in vitro, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la etapa precancerosa del cáncer colorrectal es un adenoma colorrectal avanzado.
4. Uso in vitro de la combinación [Flt3L y CYFRA21-1] en una muestra biológica obtenida del sujeto seleccionada de sangre, suero o plasma para el diagnóstico de cáncer colorrectal y/o una etapa precancerosa del mismo.
5. Uso in vitro de la combinación [Flt3L y CYFRA21-1 y AREG], o [Flt3L y CYFRA21-1 y AREG y ErbB4], o [Flt3L y CYFRA21-1 y AREG y CLEC2C] en una muestra biológica obtenida del sujeto seleccionada de sangre, suero o plasma, de acuerdo con la reivindicación 4, para el diagnóstico de cáncer colorrectal y/o un estadio precanceroso del mismo.
6. Uso in vitro de un kit que comprende reactivos adaptados para la determinación del nivel
de concentración de al menos una firma seleccionada de la lista: [Flt3L y CYFRA21-1], o [Flt3L y CYFRA21-1 y AREG], o [Flt3L y CYFRA21-1 y AREG y ErbB4], o [Flt3L y CYFRA21-1 y AREG y CLEC2C] en una muestra biológica obtenida del sujeto seleccionada de sangre, suero o plasma para el diagnóstico de cáncer colorrectal y/o una etapa precancerosa del mismo.
7. Uso in vitro, de acuerdo con la reivindicación 6, en el que la etapa precancerosa del cáncer colorrectal es un adenoma colorrectal avanzado.
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