ES2929906T3 - Derivado de 2,3-dihidro-isoindol-1-ona como supresor de cinasa BTK, y composición farmacéutica que lo incluye - Google Patents

Abstract

La presente invención proporciona un compuesto seleccionado del grupo que consiste en un compuesto de fórmula (I), sales, ésteres, profármacos, hidratos, solvatos e isómeros farmacéuticamente aceptables de los mismos; un uso del compuesto para el tratamiento, alivio o prevención de enfermedades provocadas por la activación incontrolada o absormal de la proteína quinasa, y un uso del compuesto para la fabricación de un medicamento para el tratamiento, alivio o prevención de las enfermedades; una composición farmacéutica que comprende el compuesto como ingrediente activo; y un método para el tratamiento, alivio o prevención de las enfermedades usando el compuesto. El compuesto inventivo es útil para el tratamiento, alivio o prevención de enfermedades provocadas por la activación anormal o incontrolada de la proteína quinasa. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Derivado de 2,3-dihidro-isoindol-1-ona como supresor de cinasa BTK, y composición farmacéutica que lo incluye

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a un compuesto seleccionado del compuesto que consiste en un compuesto de fórmula (I) y las sales, hidratos y solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo:

y R⁸ es hidrógeno, halógeno, o alquilo de C1-3;

R1 y R2 son, cada uno independientemente, hidrógeno o alquilo de C1-3; y

R3 a R7 son, cada uno independientemente, hidrógeno, halógeno, ciano, nitro, o haloalquilo de C1-3; y en la que R3 y R7 son, cada uno independientemente, halógeno, ciano, nitro, o haloalquilo de C1-3, y una composición farmacéutica que comprende el mismo como ingrediente activo, así como estos compuestos y composiciones para uso en el tratamiento del cáncer o la inflamación.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La tirosina cinasa de Bruton (BTK) es un miembro de la familia TEC de tirosina cinasas no receptoras, que consiste en 650 restos de aminoácidos y contiene el dominio con homología a pleckstrina (PH), la región de dedos de zinc, el dominio SH3, el dominio SH2 y el dominio de cinasa. Recientemente, el dominio de cinasa, entre dichos dominios, está ganando más intereses como diana farmacéutica.

La BTK se encuentra en las células B y en las células hematopoyéticas, en lugar de algunas células T, células asesinas naturales, células plasmáticas, etc. Cuando la BTK es estimulada por las señales del receptor de membrana de las células B (BCR) que son causadas por diversas respuestas inflamatorias o cánceres, BTK juega un papel importante en la producción de citocinas tales como TNF-a, IL-6, etc., así como también en NF-kB, iniciando la señalización aguas abajo, tal como la fosfolipasa C gamma 2 (PLCy2).

En el tratamiento de la inflamación, BTK es conocida por mediar las respuestas de los receptores de membrana, por ejemplo los receptores de antígenos de células B que detectan sustancias inductoras de inflamación, CD40, TLR-4, Fcg y similares. Además, BTK tiene una fuerte influencia en el mecanismo de señalización de la inflamación causada por la estimulación de mastocitos, células B y macrófagos. Por lo tanto, la inhibición de BTK puede bloquear la señalización de IgE, lo que puede ralentizar la progresión de enfermedades causadas por la activación anormal de BTK. Este mecanismo de señalización es una vía de señalización complicada de la secreción de inmunosustancias. En este procedimiento, la fosforilación y desfosforilación de proteínas se lleva a cabo en un procedimiento de múltiples etapas, y debido a que BTK es una de las etapas de alto nivel en la ruta de señalización, junto con la tirosina cinasa del bazo (SYK) y, de este modo, es más eficaz para prevenir la activación de factores que causan respuestas inmunes que otras dianas de cinasa.

Además, en el tratamiento del cáncer, se sabe que BTK modifica las proteínas de superficie de células B y BCR que generan señales de antisuicida. De este modo, la inhibición de BTK puede provocar efectos anticancerígenos contra los cánceres que están asociados con la señalización de BCR, tal como el linfoma. De hecho, el Ibrutinib (PCI-32765) desarrollado por Pharmacyclics Inc. fue aprobado recientemente como un agente contra el cáncer para el tratamiento de la leucemia linfocítica crónica (CLL), y hay actualmente en curso un ensayo en fase III de AVL-292 desarrollado por Avila Therapeutics para leucemia linfocítica de células pequeñas (SLL) y la CLL. Se ha comprobado que estos compuestos son bastante efectivos contra SLL y CLL, que son tipos de cáncer relativamente raros. Sin embargo, no lograron resultados satisfactorios contra el linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), que es el tipo de linfoma más prevalente. De este modo, hay una creciente demanda de un nuevo fármaco.

El mecanismo de acción del inhibidor de BTK como agente antiinflamatorio así como agente contra el cáncer se describe detalladamente en la referencia [Nature Chemical Biology 7, (2011), 4].

En el documento WO2012/047017 se proporcionan ejemplos de derivados de 2,3-dihidro-isoindol-1-ona que actúan como inhibidores de cinasa.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

En consecuencia, es un objeto de la presente invención proporcionar un compuesto seleccionado del grupo que consiste en un compuesto de fórmula (I) a continuación, y sales, hidratos y solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo:

en la que

• A es

y R⁸ es hidrógeno, halógeno o alquilo de C1-3,

• R1 y R2 son, cada uno independientemente, hidrógeno o alquilo de C1-3, y

• R3 a R7 son, cada uno independientemente, hidrógeno, halógeno, ciano, nitro o haloalquilo de C1-3, y

• en la que R3 y R7 son, cada uno independientemente, halógeno, ciano, nitro o haloalquilo de C1-3.

Según otro aspecto de la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende la misma y el compuesto o composición para uso en el tratamiento del cáncer o la inflamación.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

Las realizaciones de la presente invención se explican en detalle a continuación.

En la presente invención, se proporciona un compuesto seleccionado del grupo que consiste en un compuesto de fórmula (I) a continuación, y sales, hidratos y solvatos farmacéuticamente aceptablesdel mismo:

en la que

A es

y R⁸ es hidrógeno, halógeno o alquilo de C1-3,

Ri y R2 son, cada uno independientemente, hidrógeno o alquilo de C1-3,

R3 a R7 son, cada uno independientemente, hidrógeno, halógeno, ciano, nitro o haloalquilo de C1-3,

y en la que R3 y R7 son, cada uno independientemente, halógeno, ciano, nitro o haloalquilo de C1-3.

En un ejemplo, dichos R3 a R7 son, cada uno independientemente, hidrógeno, fluoro, cloro, bromo, yodo, ciano, nitro, difluorometilo o trifluorometilo.

En una realización específica, R⁸ es hidrógeno o fluoro;

R1 es metilo o hidrógeno;

R2 es hidrógeno o metilo;

R3 es fluoro, cloro, ciano o trifluorometilo;

R4 es fluoro, cloro, ciano o trifluorometilo;

R5 es hidrógeno, fluoro, cloro, ciano o trifluorometilo;

R⁶ es hidrógeno, fluoro, cloro, ciano o trifluorometilo; y

R7 es fluoro, cloro, ciano o trifluorometilo.

En otra realización específica,

dichos R1 y R2 son, cada uno independientemente, hidrógeno o metilo;

R³ a R⁷ son, cada uno independientemente, hidrógeno, fluoro, cloro, ciano o trifluorometilo; y

R⁸ es hidrógeno o fluoro;

en la que

R3 es fluoro, cloro, ciano o trifluorometilo, y

R7 es fluoro, cloro, ciano o trifluorometilo.

El término “halo” o “halógeno”, como se usa aquí, se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo, a menos que se indique lo contrario.

El término “alquilo”, como se usa aquí, se refiere a restos hidrocarbonados lineales o ramificados, a menos que se indique lo contrario.

El compuesto de fórmula (I) según la presente invención puede formar una sal farmacéuticamente aceptable derivada de un ácido inorgánico u orgánico, y dicha sal puede ser una sal de adición de ácido no tóxica farmacéuticamente aceptable que contiene un anión. Por ejemplo, la sal puede incluir sales de adición de ácido formadas por ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido bromhídrico, ácido yodhídrico, y similares; ácidos carbónicos orgánicos tales como ácido tartárico, ácido fórmico, ácido cítrico, ácido acético, ácido tricloroacético, ácido trifluoroacético, ácido glucónico, ácido benzoico, ácido láctico, ácido fumárico, ácido maleico, y similares; y ácidos sulfónicos tales como ácido metanosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido ptoluenosulfónico, ácido naftalensulfónico, y similares. Entre ellos, se prefieren las sales de adición de ácido formadas por ácido sulfúrico, ácido metanosulfónico o ácido hidrohalogénico, y similares.

La “sal farmacéuticamente aceptable” del compuesto de fórmula (I) se puede preparar mediante métodos convencionales bien conocidos en la técnica. Específicamente, la “sal farmacéuticamente aceptable” según la presente invención se puede preparar, por ejemplo, disolviendo el compuesto de fórmula (I) en un disolvente orgánico miscible en agua, tal como acetona, metanol, etanol o acetonitrilo y similares; añadiendo una cantidad excesiva de ácido orgánico o una disolución acuosa de ácido inorgánico; precipitando o cristalizando la mezcla así obtenida. Además, se puede preparar evaporando posteriormente el disolvente o el exceso de ácido del mismo; y secando entonces la mezcla o filtrando el extracto usando un filtro de succión.

El término “éster”, como se usa aquí, se refiere a un resto químico que tiene una estructura química de -(R)n-COOR’, en la que R y R’ se seleccionan, cada uno independientemente, del grupo que consiste en alquilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo (conectado a átomo de oxígeno mediante anillo aromático) y heteroalicíclico (conectado mediante anillo aromático), y n es 0 o 1, a menos que se indique lo contrario.

El término “profármaco”, como se usa aquí, se refiere a un compuesto precursor que sufrirá activación metabólica in vivo para producir el fármaco parental. Los profármacos a menudo son útiles porque pueden administrarse fácilmente en comparación con sus fármacos parentales en algunos casos. Por ejemplo, algunos profármacos están biodisponibles a través de la administración oral, a diferencia de los fármacos parentales de los mismos que a menudo muestran una escasa biodisponibilidad. Además, los profármacos pueden mostrar una solubilidad mejorada en la composición farmacéutica en comparación con sus fármacos parentales. Por ejemplo, el compuesto de fórmula (I) puede administrarse en forma de un profármaco de éster para aumentar la eficacia de administración del fármaco, ya que la solubilidad de un fármaco puede afectar negativamente a la permeabilidad a través de la membrana celular. Entonces, una vez que el compuesto en forma de profármaco de éster entra en una célula diana, puede hidrolizarse metabólicamente en un ácido carboxílico y una entidad activa.

Los hidratos o solvatos del compuesto de fórmula (I) están incluidos dentro del alcance de la presente invención.

Además, el compuesto de fórmula (I) como se describe aquí puede tener un centro de carbono asimétrico, y por lo tanto puede estar presente en forma de isómero, incluyendo enantiómero, diastereómero o mezcla racémica.

Los ejemplos particulares del compuesto de fórmula (I) de la presente invención son los siguientes; también se enumeran e identifican los ejemplos comparativos:

• 1 -(2,6-dicloro-fenil)-3-{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-4-il]-fenil}-urea;

• 1 -{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-4-il]-fenil}-3-(2-trifluorometil-fenil)-urea (ejemplo comparativo);

• 1 -(2,6-difluoro-fenil)-3-{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-4-il]-fenil}-urea;

• 1 -(2-cloro-6-fluoro-fenil)-3-{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-4-il]-fenil}-urea;

• 1 -(2,6-bis-trifluorometil-fenil)-3-{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-4-il]-fenil}-urea;

• 1 -{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-4-il]-fenil}-3-(2-fluoro-6-trifluorometil-fenil)-urea;

• 1 -{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-4-il]-fenil1 -3-(2,4,6-trifluoro-fenil)-urea;

• 1 -(2,6-difluoro-fenil)-3-{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-4-il]-fenil}-1 -metilurea;

• 1 -{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-4-il]-fenil}-3-pentafluorofenil-urea;

• 1-(2,5-difluorofenil)-3-(3-fluoro-4-(7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1-oxoisoindolin-4-il)fenil)urea (ejemplo comparativo);

• 1 -(2,4-difluoro-fenil)-3-{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-4-il]-fenil}-urea (ejemplo comparativo);

• 1 -{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-4-il]-fenil}-3-(2,3,6-trifluoro-fenil)-urea;

• 1 -(3,5-difluoro-fenil)-3-{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-4-il]-fenil}-urea (ejemplo comparativo);

• 1 -(3,4-difluoro-fenil)-3-{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-4-il]-fenil}-urea (ejemplo comparativo);

• 1 -(4-ciano-3-fluorofenil)-3-(3-fluoro-4-(7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1 -oxoisoindolin-4-il)fenil)urea (ejemplo comparativo);

• 1 -(4-cloro-3-(trifluorometil)fenil)-3-(3-fluoro-4-(7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1 -oxoisoindolin-4-il)fenil)urea (ejemplo comparativo);

• 1 -(3-cloro-2,6-difluorofenil)-3-(3-fluoro-4-(7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1 -oxoisoindolin-4-il)fenil)urea;

• 1 -(2-cloro-3,6-difluorofenil)-3-(3-fluoro-4-(7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1 -oxoisoindolin-4-il)fenil)urea;

• 1 -(4-cloro-2,6-difluoro-fenil)-3-{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-4-il]-fenil}-urea; y

• 1 -{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-1 -oxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-4-il]-fenil}-3-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenil)-urea.

El compuesto seleccionado del grupo que consiste en el compuesto de fórmula (I), sales, hidratos y solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo se pueden usar para el tratamiento, alivio o prevención de enfermedades causadas por la activación anormal o no controlada de proteína cinasa tal como ABL (tirosina cinasa de Abelson), ACK (cinasa asociada con cdc42 activada), AXL, Aurora, BLK (tirosina cinasa linfoide B), BMX (cinasa ligada al cromosoma X de la médula ósea), BTK (tirosina cinasa de Bruton), CDK (cinasa dependiente de ciclina), CSK (cinasa C-Src), DDR (receptor del dominio de discoidina), EPHA (cinasa receptora de la efrina tipo A), FER (tirosina cinasa Fer (relacionada con fps/fes)), FES (oncogén del sarcoma felino), FGFR (receptor del factor de crecimiento de fibroblastos), FGR, FLT (tirosina cinasa similar a Fms), FRK (cinasa relacionada con Fyn), FYN, HCK (cinasa de células hematopoyéticas), IRR (receptor relacionado con el receptor de insulina), ITK (cinasa de células T inducible por interleucina 2), JAK (Janus cinasa), KDR (receptor del dominio de inserción de cinasa), KIT, LCK (proteína tirosina cinasa específica de linfocitos), LYN, MAPK (proteína cinasa activada por mitógenos), MER (tirosina cinasa del protooncogén c-Mer), MET, MINK (cinasa tipo Misshapen), MNK (cinasa que interactúa con MAPK), MST (cinasa tipo mamífero estéril 20), MUSK (cinasa específica de los músculos), PDGFR (receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas), PLK (cinasa tipo polo), RET (reorganizado durante la transfección), RON, SRC (coactivador del receptor de esteroides), SRM (espermidina sintasa), TIE (tirosina cinasa con repeticiones de inmunoglobulina y EGF), SYK (tirosina cinasa del bazo), TNK1 (tirosina cinasa, no receptora, 1), TRK (cinasa receptora de tropomiosina), TNIK (cinasa de interacción con TRAF2 y NCK), y similares.

Por consiguiente, se describe aquí un uso del compuesto de fórmula (I), sales, ésteres, profármacos, hidratos, solvatos e isómeros farmacéuticamente aceptables del mismo para el tratamiento, alivio o prevención de enfermedades causadas por la activación anormal o incontrolada de la proteína cinasa, y un uso del compuesto para la fabricación de un medicamento para el tratamiento, alivio o prevención de las enfermedades.

Además, la presente descripción proporciona una composición farmacéutica para el tratamiento, alivio o prevención de enfermedades causadas por la activación anormal o descontrolada de la proteína cinasa en un mamífero, que comprende el compuesto de fórmula (I), sales, ésteres, profármacos, hidratos, hidratos, solvatos e isómeros farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Las mencionadas enfermedades relacionadas con la actividad de cinasa pueden incluir cualquier enfermedad causada por la activación anormal o no controlada de la proteína cinasa. Los ejemplos específicos de las mismas pueden ser cáncer, inflamación asociada con artritis reumatoide y osteoartrosis, asma, alergia, dermatitis atópica, o psoriasis, pero no se limitan a ellas.

Los ejemplos de dicho cáncer incluyen linfoma, leucemia, cáncer de sangre, cáncer de estómago, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de hígado, cáncer colorrectal, cáncer de intestino delgado, cáncer de páncreas, cáncer de cerebro, cáncer de huesos, melanoma, cáncer de mama, adenosis esclerosante, cáncer uterino, cáncer cervical, cáncer de ovario, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de esófago, cáncer de tiroides, cáncer de paratiroides, cáncer de riñón, sarcoma, cáncer de próstata, cáncer de uretra, cáncer de vejiga, fibroadenoma, o glioblastoma, pero no se limita a ellos.

La composición farmacéutica puede comprender además al menos un aditivo seleccionado del grupo que consiste en antibiótico, agente alquilante, antimetabolito, agente hormonal, agente inmunológico, agente de tipo interferón, y agente anticanceroso.

La composición farmacéutica de la presente invención se puede formular directamente, o contener además aditivos farmacéuticamente aceptables no tóxicos convencionales, por ejemplo un vehículo y un excipiente, para formularse de acuerdo con cualquiera de los métodos convencionales bien conocidos en la técnica.

El método para el tratamiento, alivio o prevención puede incluir, por ejemplo, administrar una cantidad eficaz de la composición farmacéutica que comprende el compuesto de la presente invención a un sujeto que sufre o tiene riesgo de insuficiencia renal crónica, diabetes, cáncer, SIDA, radioterapia, quimioterapia, diálisis renal, o anemia causada por cirugía. En un ejemplo, el sujeto es preferiblemente mamífero, y más preferiblemente, un ser humano.

La cantidad efectiva de la composición farmacéutica de la presente invención se puede determinar realizando un ensayo normal para encontrar la vía de administración más efectiva y el método de preparación adecuado. La composición farmacéutica de la presente invención se puede preparar en cualquier tipo de formulación y sistema de administración de fármacos usando cualquiera de los métodos convencionales bien conocidos en la técnica. La composición farmacéutica inventiva puede formularse en formulaciones inyectables, que pueden administrarse por vías que incluyen intratecal, intraventricular, intravenosa, intraperitoneal, intranasal, intraocular, intramuscular, subcutánea, o intraósea. Asimismo, también puede administrarse por vía oral, o parenteralmente a través del recto, los intestinos o la mucosa de la cavidad nasal (véase Gennaro, A.R., ed. (1995) Remington’s Pharmaceutical Sciences). Preferiblemente, la composición se administra por vía tópica, en lugar de por vía entérica. Por ejemplo, la composición se puede inyectar o administrar a través de un sistema de administración de fármacos dirigido, tal como una formulación de depósito o una formulación de liberación sostenida.

La formulación farmacéutica de la presente invención se puede preparar mediante cualquier método bien conocido en la técnica, tales como procedimientos de mezclamiento, disolución, granulación, fabricación de grageas, levigación, emulsionamiento, encapsulamiento, atrapamiento, o liofilización. Como se mencionó anteriormente, las composiciones de la presente invención pueden incluir uno o más vehículos fisiológicamente aceptables, tales como excipientes y adyuvantes que facilitan el procesamiento de moléculas activas en preparaciones para uso farmacéutico.

La formulación adecuada depende de la vía de administración escogida. Para inyección, por ejemplo, la composición puede formularse en una disolución acuosa, preferiblemente en amortiguadores fisiológicamente compatibles tales como disolución de Hank, disolución de Ringer, o amortiguador salino fisiológico. Para la administración transmucosal o nasal, en la formulación se usan penetrantes apropiados para la barrera a atravesar. Dichos penetrantes son generalmente conocidos en la técnica. En una realización preferida de la presente invención, el compuesto inventivo se puede preparar en una formulación oral. Para la administración oral, los compuestos se pueden formular fácilmente combinando los compuestos activos con vehículos farmacéuticamente aceptables conocidos en la técnica. Dichos vehículos permiten que los compuestos de la invención se formulen como comprimidos, píldoras, grageas, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, lechadas, suspensiones, y similares, para la ingestión oral por parte de un sujeto. Los compuestos también pueden formularse en composiciones rectales tales como supositorios o enemas de retención, por ejemplo, que contienen bases de supositorios convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos.

Las preparaciones farmacéuticas para uso oral se pueden obtener como excipientes sólidos, opcionalmente moliendo una mezcla resultante y procesando la mezcla de gránulos, después de añadir adyuvantes adecuados, si se desea, para obtener comprimidos o núcleos de grageas. Los excipientes adecuados pueden ser, en particular, cargas tales como azúcares, que incluyen lactosa, sacarosa, manitol, o sorbitol; formulación de celulosa tal como almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de patata, gelatina, goma de tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, y/o formulación de polivinilpirrolidona (PVP). Además, se pueden emplear agentes disgregantes, tales como polivinilpirrolidona reticulada, agar, o ácido algínico o una de sus sales, tal como alginato sódico. También se pueden añadir agentes humectantes, tales como dodecilsulfato de sodio y similares.

Los núcleos de grageas están provistos de recubrimientos adecuados. Para ello se pueden usar disoluciones concentradas de azúcar, que opcionalmente pueden contener goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenglicol, y/o dióxido de titanio, disoluciones de laca, y disolventes orgánicos o mezclas de disolventes adecuados. Se pueden añadir materias colorantes o pigmentos a los comprimidos o recubrimientos de grageas, para la identificación o para caracterizar diferentes combinaciones de dosis de compuestos activos.

Las formulaciones farmacéuticas para la administración oral pueden incluir cápsulas de cierre a presión hechas de gelatina, así como cápsulas blandas selladas hechas de gelatina y un plastificante, tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas de cierre a presión pueden contener los ingredientes activos mezclados con carga tal como lactosa, aglutinantes tales como almidones, y/o lubricantes tales como talco o estearato de magnesio y, opcionalmente, estabilizantes. En cápsulas blandas, los compuestos activos pueden disolverse o suspenderse en líquidos adecuados, tales como aceites grasos, parafina líquida, o polietilenglicoles líquidos. Además, se pueden añadir estabilizantes. Todas las formulaciones para administración oral deben estar en dosis adecuadas para dicha administración.

En una realización, los compuestos de la presente invención se pueden administrar por vía transdérmica, tal como a través de un parche para la piel, o por vía tópica. En un aspecto, las formulaciones transdérmicas o tópicas de la presente invención pueden comprender adicionalmente uno o múltiples potenciadores de la penetración u otros efectores, incluyendo agentes que potencian la migración del compuesto administrado. Preferiblemente, se puede usar la administración transdérmica o tópica, por ejemplo en situaciones en las que se desea una administración en un lugar específico.

Para la administración por inhalación, los compuestos de la presente invención pueden administrarse convenientemente en forma de una presentación de rociador de aerosol de paquetes presurizados o un nebulizador, con el uso de un propulsor adecuado, por ejemplo diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono, o cualquier otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación adecuada puede determinarse proporcionando una válvula para administrar una cantidad medida. Para uso en un inhalador o insufladores, pueden formularse cápsulas y cartuchos de, por ejemplo, gelatina. Estos contienen típicamente una mezcla de polvo del compuesto y una base de polvo adecuada tal como lactosa o almidón. Las composiciones formuladas para administración parenteral por inyección, por ejemplo por inyección en bolo o infusión continua, pueden presentarse en forma de dosificación unitaria, por ejemplo en ampollas o en envases multidosis, con un conservante añadido. Las composiciones pueden adoptar formas tales como suspensiones, disoluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes. Las formulaciones para administración parenteral incluyen disoluciones acuosas u otras composiciones en forma soluble en agua.

También se pueden preparar suspensiones de los compuestos activos, como suspensiones de inyección oleosas apropiadas. Los disolventes o vehículos lipófilos adecuados pueden incluir aceites grasos tales como aceite de sésamo y ésteres de ácidos grasos sintéticos, tales como oleato de etilo o triglicéridos, o liposomas. Las suspensiones acuosas para inyección pueden contener sustancias que aumentan la viscosidad de la suspensión, tales como carboximetilcelulosa sódica, sorbitol, o dextrano. Opcionalmente, la suspensión también puede contener estabilizantes o agentes adecuados que aumenten la solubilidad de los compuestos para permitir la preparación de disoluciones altamente concentradas. Alternativamente, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para la reconstitución con un vehículo adecuado, por ejemplo agua estéril libre de pirógenos, antes de su uso.

Como se mencionó anteriormente, las composiciones de la presente invención también se pueden formular como una formulación de depósito. Dichas formulaciones de acción prolongada pueden administrarse por implantación (por ejemplo, subcutánea o intramuscular) o por inyección intramuscular. Así, por ejemplo, los compuestos de la invención pueden formularse con materiales poliméricos o hidrófobos adecuados (por ejemplo, una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o como derivados poco solubles, por ejemplo una sal poco soluble.

Para cualquier composición usada en los presentes métodos de tratamiento una dosis terapéuticamente eficaz , se puede estimar inicialmente usando una variedad de técnicas bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, según la información obtenida de un ensayo de cultivo celular, se puede formular una dosis en modelos animales para lograr un intervalo de concentración circulante que incluya la IC50. De manera similar, los intervalos de dosificación apropiados para sujetos humanos pueden determinarse, por ejemplo, usando datos obtenidos de ensayos de cultivos celulares y otros estudios en animales.

Una dosis terapéuticamente eficaz de un agente se refiere a la cantidad del agente que da como resultado una mejora de los síntomas o una prolongación de la supervivencia en un sujeto. La toxicidad y la eficacia terapéutica de dichas moléculas pueden determinarse mediante procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o animales de experimentación, por ejemplo determinando la LD50 (la dosis letal para el 50% de la población) y la ED50 (la dosis terapéuticamente efectiva en el 50% de la población). La relación de dosis entre efectos tóxicos y terapéuticos es el índice terapéutico, que se puede expresar como la relación LD50/ED50. Se prefieren los agentes que exhiben altos índices terapéuticos.

Las dosis caen preferiblemente dentro de un intervalo de concentraciones circulantes que incluye la ED50 con poca o ninguna toxicidad. Las dosis pueden variar dentro de este intervalo dependiendo de la forma de dosificación empleada y la vía de administración utilizada. La formulación exacta, la vía de administración, y la dosificación deben escogerse de acuerdo con métodos bien conocidos en la técnica, en vista de las especificaciones de la afección del sujeto.

Además, la cantidad de agente o composición administrada dependerá de una variedad de factores, que incluyen la edad, el peso, el sexo, el estado de salud, el grado de enfermedad del sujeto que se está tratando, la gravedad de la afección, la forma de administración, y el juicio del médico prescriptor.

A continuación, se explica un método ejemplar para preparar el compuesto de la presente invención.

Diversos materiales de partida se pueden preparar de acuerdo con métodos sintéticos convencionales bien conocidos en la técnica. Algunos de los materiales de partida están comercialmente disponibles de fabricantes y proveedores de reactivos, tales como Aldrich, Sigma, TCI, Wako, Kanto, Fluorchem, Acros, Abocado, Alfa, Fluka, etc., pero sin limitarse a ellos.

Los compuestos de la presente invención se pueden preparar a partir de materiales de partida fácilmente disponibles mediante los métodos y procedimientos convencionales a continuación. También se pueden usar diferentes métodos para fabricar los compuestos inventivos, a menos que se especifique lo contrario como condiciones de procedimiento típicas o preferidas (es decir, temperatura de reacción, tiempo, relación molar de reactivos, disolventes, presiones, etc.). Las condiciones de reacción óptimas pueden variar dependiendo de los reactivos o disolventes particulares empleados. Tales condiciones, sin embargo, pueden ser determinadas por el experto en la técnica mediante un procedimiento de optimización convencional.

Además, los expertos en la técnica reconocen que algunos grupos funcionales pueden protegerse/desprotegerse usando diversos grupos protectores antes de que tenga lugar una determinada reacción. Las condiciones adecuadas para proteger y/o desproteger un grupo funcional específico y el uso de grupos protectores son bien conocidos en la técnica.

Por ejemplo, en T. W. Greene y G.M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, segunda edición, Wiley, Nueva York, 1991, y otras referencias citadas anteriormente, se describen diversos tipos de grupos protectores.

En una realización de la presente invención, el compuesto de fórmula (I) de la presente invención se puede preparar sintetizando un intermedio, el Compuesto D, de acuerdo con el Esquema 1 de Reacción como se muestra a continuación, y sometiendo entonces el Compuesto D al procedimiento del Esquema 2 o 3 de Reacción. Sin embargo, el método para sintetizar el Compuesto D anterior no se limita al Esquema 1 de Reacción.

El método para preparar el material de partida del Esquema 1 de Reacción, es decir, el Compuesto A, se describe en la publicación de patente internacional WO2012/014017, y el Compuesto D se prepara mediante los siguientes métodos.

<1-1> Síntesis del Compuesto B

El compuesto A (40 g, 168 mmol) se dispersó en ácido acético (400 ml), se añadió agua (400 ml) y piridina (800 ml), y después, la temperatura de la mezcla así formada se redujo hasta 10°C. A la mezcla se añadió monohidrato monobásico de fosfato de sodio (280 g, 2,01 mol), y después se añadió además Ni Raney (101 g) en agua (70 ml) para formar una disolución de reacción. La disolución de reacción se calentó hasta 50°C, y se dejó reaccionar durante 2 horas. Una vez completada la reacción, la disolución se enfrió y se filtró. La disolución se lavó con acetato de etilo (EA, 2,5 l), y al filtrado se añadió agua (800 ml) para la extracción. Se separó una capa orgánica así formada, y se concentró a presión reducida. Se le añadió agua enfriada (800 ml), y el sólido así obtenido se filtró y se secó para obtener el Compuesto B (26,7 g, rendimiento: 66%).

Espectro de RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe): 11,10 (s, 1H), 9,15 (s, 1H), 7,95 (d, J =8,1 Hz, 1H), 7,78 (d, J =8,1 Hz, 1H), 4,41 (s, 2H)

LCMS [M+1]: 241,1

<1-2> Síntesis del Compuesto C

El Compuesto B (26,7 g, 111 mmol) se dispersó en etanol (800 ml), y se le añadieron disoluciones acuosas de metil glioxal al 48% (67 ml) y amoníaco al 28% (75 ml). La disolución de reacción así formada se calentó hasta 90°C, y se agitó durante 3 horas. Una vez completada la reacción, la disolución se concentró a presión reducida para reducir el volumen de la disolución de reacción hasta alrededor de 200 ml, y el sólido así formado se filtró. El sólido se lavó con etanol (50 ml) para obtener el Compuesto C (17,2 g, rendimiento: 53%).

Espectro de RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe): 14,21-14,12 (m, 1H), 9,48 (s, 1H), 8,27 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,83 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,07-6,82 (m, 1H), 4,39 (s, 2H), 2,27-2,18 (m, 3H)

LCMS [M+1]: 293,1

<1-3> Síntesis del Compuesto D

El Compuesto C (17,2 g, 58,9 mmol), 3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenilamina (19,5 g, 82 mmol), LiCl (6,9 g, 165 mmol) y Pd (PPh3)4 (6,8 g, 5,9 mmol) se dispersaron en una disolución mixta de tolueno (589 ml) y etanol (589 ml), a los que se añadió una disolución acuosa de Na2CO31 N (117 ml), y se dejaron reaccionar a 85°C durante 12 horas. Una vez completada la reacción, la disolución de reacción se concentró por completo a presión reducida. Se le añadió una disolución mixta de acetona (1,2 l) y acetonitrilo (1,2 l), y la disolución de reacción se agitó durante 2 horas a 80°C, se enfrió, se filtró, y después se lavó con acetonitrilo (0,5 l). La disolución filtrada se concentró a presión reducida para reducir el volumen de la disolución de reacción hasta alrededor de 150 ml, y después se filtró.

Un sólido así obtenido se lavó a presión reducida con acetonitrilo (60 ml), n-hexano (100 ml) y agua (100 ml), respectivamente, y se secó para producir el Compuesto D, 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)isoindolin-1-ona (13,31 g, rendimiento: 70%).

Espectro de RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe): 14,44-14,34 (m, 1H), 9,36 (s, 1H), 8,36 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,16 (t, J = 8,7 Hz, 1H), 7,04-6,79 (m, 1H), 6,49-6,42 (m, 2H), 5,65 (s, 2H), 4,36 (s, 2H), 2,28-2,18 (m, 3H)

LCMS [M+1]: 323,3

A fin de preparar diversos compuestos que pueden representarse mediante la fórmula (I) de la presente invención, en los Esquemas 2 y 3 de Reacción siguientes se describe específicamente un método para sintetizar tales compuestos usando el Compuesto D intermedio. Sin embargo, este es un ejemplo representativo de la preparación del compuesto de fórmula (I) usando el Compuesto D intermedio, y por lo tanto, el método de preparación del compuesto de fórmula (I) no se limita a él.

El compuesto E descrito en el Esquema 2 de Reacción se preparó mediante los siguientes métodos.

<2-1> Síntesis del Compuesto E según el Esquema 2 de Reacción

La 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)isoindolin-1-ona (Compuesto D, 1 equivalente) se dispersó en DMF/THF (1:4) para formar una disolución (0,08 m), y después se le añadieron piridina (1,15 equivalentes) y cloroformiato de 4-nitrofenilo (1,15 equivalentes), seguido de agitación durante 4 horas. Una vez completada la reacción (TLC), se le añadió n-hexano (mismo volumen que THF, la disolución de reacción), seguido de agitación durante 30 minutos. El sólido así formado se lavó con una mezcla de disolventes de n-hexano:THF = 1:1 (cuatro veces el volumen de THF, disolución de reacción), se filtró, y después se secó. El compuesto seco se dispersó en DMF para formar una disolución (0,1 m), se añadió fenilamina sustituida (6 a 15 equivalentes), y después se agitó durante 20 minutos en condiciones de microondas (250 W, 250 psi, 150°C). La disolución de reacción se diluyó con acetato de etilo que contenía metanol al 5%, y después se lavó con una disolución acuosa saturada de NaHCO3 y agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro (MgSO4), y después se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el Compuesto E.

El Compuesto E obtenido en el Esquema 2 de Reacción también puede sintetizarse mediante el Esquema 3 de Reacción a continuación.

Se dispersó ácido benzoico sustituido (2 equivalentes) en éter dietílico para formar una mezcla (0,08 m), se añadió pentacloruro de fósforo (PCl5, 2,2 equivalentes), y después se agitó durante 2 horas. Una vez completada la reacción, el disolvente orgánico se concentró a presión reducida por debajo de la temperatura ambiente, y entonces la disolución de reacción se diluyó (0,08 m) añadiendo acetona al agente reaccionante. Posteriormente, se añadió lentamente gota a gota azida de sodio (NaN3, 2,4 equivalentes) en agua (1/12 volumen de acetona) a la disolución de reacción a 0°C. Después de agitar durante 2 horas a temperatura ambiente, el agente reaccionante se diluyó con acetato de etilo y después con agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro (MgSO4), se dispersó en THF para formar una disolución (0,04 m), se le añadió 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)isoindolin-1-ona (Compuesto D, 1 equivalente), y se agitó durante 4 horas a 90°C. Una vez completada la reacción, el disolvente se concentró a presión reducida, y después se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el Compuesto E.

El compuesto E sintetizado en el Esquema 2 de Reacción anterior también se puede sintetizar usando otro método según el Esquema 3 de Reacción.

<3-2> (B) Síntesis del Compuesto E según el Esquema 3 de Reacción

Se dispersó ácido benzoico sustituido (2 equivalentes) en THF para formar una disolución (0,05 m), y después se le añadieron trietilamina (4 equivalentes) y difenilfosforazidato (DPPA, 2,3 equivalentes), seguido de agitación durante 2 horas a temperatura ambiente. A la disolución de reacción se añadió 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)isoindolin-1-ona (Compuesto D, 1 equivalente), y después se agitó durante 4 horas a 90°C. Posteriormente, la disolución de reacción se diluyó con acetato de etilo que contenía metanol al 5%, y se lavó con agua y una disolución acuosa saturada de NaHCO3. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro (MgSO4), y después se concentró a presión reducida. El concentrado así obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el Compuesto E.

Aquí en lo sucesivo, la presente invención se describe más específicamente mediante los siguientes Ejemplos, pero estos se proporcionan únicamente con fines ilustrativos, y la presente invención no se limita a ellos.

Ejemplo 1: Preparación de 1-(2,6-d¡cloro-fen¡l)-3-{3-fluoro-4-[7-(5-met¡l-1H-¡m¡dazol-2-il)-1-oxo-2,3-d¡h¡dro-1H-isoindol-4-il]-fenil}-urea

4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)isoindolin-1-ona (Compuesto D, 0,1 g, 0,31 mmol) se dispersó en DMF (0,8 ml) y THF (3,4 ml), se añadió piridina (0,03 ml) y cloroformiato de 4-nitrofenilo (0,07 g, 0,36 mmol), y después se agitó durante 4 horas. Tras confirmar la finalización de la reacción por TLC, se le añadió n-hexano (3 ml), y se agitó durante 30 minutos. El sólido así formado se lavó con una mezcla de disolventes de n-hexano : THF = 1:1 (12 ml), se filtró, y después se secó. El compuesto seco se dispersó en DMF (3 ml), se añadió 2,6-dicloroanilina (0,34 g, 2,08 mmol), y después se agitó durante 20 minutos en condiciones de microondas (250 W, 250 psi, 150°C). La disolución de reacción se diluyó con acetato de etilo que contenía metanol al 5%, y después se lavó secuencialmente con una disolución acuosa saturada de NaHCO3 y agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se concentró, y después se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,03 g, rendimiento: 19%).

Espectro de RMN 1H (300 MHz, DMSO-ds): 9,54 (s, 1H), 9,36 (s, 1H), 8,58 (s, 1H), 8,43 (d, J =8,1Hz, 1H), 7,59 (m, 3H), 7,47 (t, J=8,4 Hz, 1 H), 7,32 (m, 2 H), 7,08 (s, 1 H), 4,41 (s, 2 H), 2,25 (m, 3 H)

LCMS [M+1]: 511

Ejemplo Comparativo 2: Preparación de 1-{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1H-¡m¡dazol-2-il)-1-oxo-2,3-d¡h¡dro-1H-¡so¡ndol-4-¡l]-fen¡l}-3-(2-tr¡fluoromet¡l-fen¡l)-urea

4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)isoindolin-1-ona (Compuesto D, 0,1 g, 0,31 mmol) se dispersó en DMF (0,8 ml) y THF (3,4 ml), se añadió piridina (0,03 ml) y cloroformiato de 4-nitrofenilo (0,07 g, 0,36 mmol), y después se agitó durante 4 horas. Posteriormente, se añadió n-hexano (3 ml) a la mezcla, y se agitó durante 30 minutos. Un sólido así formado se lavó con una disolución mixta de n-hexano:THF = 1:1 (12 ml), se filtró, y después se secó. El compuesto seco se dispersó en DMF (2 ml), se añadió 2-trifluorometilanilina (0,74 g, 4,65 mmol), y después se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. A la disolución de reacción se añadió secuencialmente metanol (6 ml) y una disolución acuosa saturada de NaHCO3, y se agitó durante 30 minutos. Un sólido así formado se filtró y se lavó con agua. Después de secar el sólido lavado, el sólido se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,07 g, rendimiento: 44%).

Espectro de RMN 1H (300 MHz, DMSO-afe): 9,54 (s, 1H), 9,36 (s, 1H), 8,58 (s, 1H), 8,43 (d, J =8,1Hz, 1H), 7,59 (m, 3H), 7,47 (t, J =8,4 Hz, 1 H), 7,32 (m, 2 H), 7,08 (s, 1 H), 4,41 (s, 2 H), 2,25 (m, 3 H)

LCMS [M+1]: 510,0

Ejemplo 3: Preparación de 1-(2,6-difluoro-fen¡l)-3-{3-fluoro-4-[7-(5-met¡l-1H-¡m¡dazol-2-¡l)-1-oxo-2,3-d¡hidro-1H-¡so¡ndol-4-¡l]-fen¡l}-urea

Se dispersó ácido 2,6-difluorobenzoico (0,04 g, 0,248 mmol) en éter dietílico (3 ml), se añadió lentamente pentacloruro de fósforo (PCl5, 0,057 g, 0,273 mmol), y después se agitó durante 1 hora. Una vez completada la reacción, el disolvente orgánico se concentró a presión reducida por debajo de la temperatura ambiente, y entonces la disolución de reacción se diluyó añadiendo acetona (2 ml). Posteriormente, se añadió lentamente gota a gota azida de sodio (NaN3, 0,019 g, 0,298 mmol) disuelta en agua (0,2 ml) a la disolución de reacción a 0°C. Después de agitar la disolución de reacción durante 2 horas a temperatura ambiente, la azida de 2,6-difluoro-benzoilo así formada se diluyó con acetato de etilo, y después se lavó con agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se dispersó en THF (1 ml), se añadió THF (4 ml) que contenía 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)isoindolin-1 -ona (Compuesto D, 0,04 g, 0,124 mmol), y después se agitó durante 4 horas a 90°C. Una vez completada la reacción, el disolvente se concentró a presión reducida, y después se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,025 g, rendimiento: 42%).

Espectro de RMN 1H (300 MHz, DMSO-ds): 14,45-14,36 (m, 1H), 9,40-9,36 (m, 2H), 8,42 (d, J =8,1 Hz, 1H), 8,33 (s, 1H), 7,62-7,57 (m, 2H), 7,48 (t, J =8,4Hz, 1H), 7,37-7,26 (m, 2H), 7,20-6,82 (m, 3H), 4,40 (s, 2H), 2,29-2,19 (m, 3H)

LCMS [M+1]: 478,4

Ejemplo 4: Preparación de 1-(2-cloro-6-fluoro-fen¡l)-3-{3-fluoro-4-[7-(5-met¡l-1H-¡m¡dazol-2-¡l)-1-oxo-2,3-d¡hidro-1H-¡so¡ndol-4-¡l]-fen¡l}-urea

Se dispersó ácido 2-cloro-6-fluorobenzoico (0,054 g, 0,31 mmol) en éter dietílico (3 ml), se añadió lentamente pentacloruro de fósforo (PC5 0,074 g, 0,357 mmol), y después se agitó durante 1 hora. Una vez completada la reacción, el disolvente orgánico se concentró a presión reducida por debajo de la temperatura ambiente, y entonces la disolución de reacción se diluyó añadiendo acetona (2 ml). Posteriormente, se añadió lentamente gota a gota azida de sodio (NaN ³ , 0,024 g, 0,372 mmol) disuelta en agua (0,2 ml) a la disolución de reacción a 0°C. Después de agitar la disolución de reacción durante 2 horas a temperatura ambiente, la disolución de reacción se diluyó con acetato de etilo, y se lavó con agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se dispersó en THF (1 ml), se añadió THF (4 ml) que contenía 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)isoindolin-1-ona (Compuesto D, 0,05 g, 0,155 mmol), y después se agitó durante 3 horas a 90°C. Una vez completada la reacción, el disolvente se concentró a presión reducida, y después se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,029 g, rendimiento del 42%).

Espectro de RMN 1H (300 MHz, DMSO-ds): 14,45-14,35 (m, 1H), 9,40-9,35 (m, 2H), 8,42 (d, J =8,1 Hz, 1H), 8,33 (s, 1H), 7,63-7,58 (m, 2H), 7,47 (t, J =8,4Hz, 1H), 7,41-7,26 (m, 4H), 7,07-6,82 (m, 1H), 4,40 (s, 2H), 2,30-2,20 (m, 3H)

LCMS [M+1]: 494,4

Ejemplo 5: Preparac¡ón de 1-(2,6-b¡s-tr¡fluoromet¡l-fen¡l)-3-{3-fluoro-4-[7-(5-met¡l-1H-¡m¡dazol-2-¡l)-1-oxo-2,3-d¡h¡dro-1 H-¡so¡ndol-4-¡l]-fen¡l}-urea

Se dispersó ácido 2,6-bis-trifluorometilbenzoico (0,088 g, 0,31 mmol) en éter dietílico (3 ml), se añadió lentamente pentacloruro de fósforo (PCl5, 0,068 g, 0,326 mmol), y después se agitó durante 1 hora. Una vez completada la reacción, el disolvente orgánico se concentró a presión reducida por debajo de la temperatura ambiente, y entonces la disolución de reacción se diluyó añadiendo acetona (2 ml). Posteriormente, se añadió lentamente gota a gota azida de sodio (NaN3, 0,024 g, 0,372 mmol) disuelta en agua (0,2 ml) a la disolución de reacción a 0°C. Después de agitar la disolución de reacción durante 2 horas a temperatura ambiente, la azida de 2,6-bis-trifluorometilbenzoilo así formada se diluyó con acetato de etilo, y después se lavó con agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se dispersó en THF (1 ml), se añadió THF (4 ml) que contenía 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)isoindolin-1-ona (Compuesto D, 0,05 g, 0,155 mmol), y después se agitó durante 3 horas a 90°C. Una vez completada la reacción, el disolvente se concentró a presión reducida y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,018 g, rendimiento: 20%).

Espectro de RMN 1H (300 MHz, DMSO-afe): 8,40 (d, J =8,4Hz, 1H), 8,09-8,06 (m, 2H), 7,76 (t, J =8,1Hz, 1H), 7,63 (d, J =8,1 Hz, 1H), 7,54 (d, J =12,9Hz, 1H), 7,38 (t, J =8,4Hz, 1H), 7,24 (d/d, J=8,4 Hz, 1H), 6,94 (s, 1H), 4,43 (s, 2H), 2,33 (s, 3H)

LCMS [M+1]: 578,4

Ejemplo 6: Preparac¡ón de 1-{3-fluoro-4-[7-(5-met¡l-1H-¡m¡dazol-2-¡l)-1-oxo-2,3-d¡h¡dro-1H-¡so¡ndol-4-¡l]-fen¡l}-3-(2-fluoro-6-tr¡fluoromet¡l-fen¡l)-urea

Se dispersó ácido 2-fluoro-6-trifluorometilbenzoico (0,058 g, 0,279 mmol) en éter dietílico (3 ml), se añadió lentamente pentacloruro de fósforo (PCl5, 0,064 g, 0,307 mmol), y después se agitó durante 1 hora. Una vez completada la reacción, el disolvente orgánico se concentró a presión reducida por debajo de la temperatura ambiente, y entonces la disolución de reacción se diluyó añadiendo acetona (2 ml). Posteriormente, se añadió lentamente gota a gota azida de sodio (NaN3, 0,024 g, 0,363 mmol) disuelta en agua (0,2 ml) a la disolución de reacción a 0°C. Después de agitar la disolución de reacción durante 2 horas a temperatura ambiente, la disolución de reacción se diluyó con acetato de etilo, y después se lavó con agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se dispersó en THF (1 ml), y después se introdujo en un matraz que contenía 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2il)isoindolin-1-ona (Compuesto D, 0,045 g, 0,14 mmol) diluida en THF (4 ml), seguido de agitación durante 4 horas a 902C. Una vez completada la reacción, el disolvente se concentró a presión reducida, y después se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,023 g, rendimiento: 32%).

Espectro de RMN ¹H (300 MHz, DMSO-afe): 8,41-8,39 (m, 1H), 7,64-7,50 (m, 5H), 7,39 (t, J =8,4Hz, 1H), 7,25 (m, J=8,4 Hz, 1H), 6,94 (s, 1H), 4,43 (s, 2H), 2,33 (s, 3H)

LCMS [M+1]: 528,4

Ejemplo 7: Preparación de 1-{3-fluoro-4-[7-(5-met¡l-1H-¡m¡dazol-2-¡l)-1-oxo-2,3-d¡h¡dro-1H-¡so¡ndol-4-¡l]-fenil}-3-(2,4,6-trifluoro-fenil)-urea

Se dispersó ácido 2,4,6-trifluorobenzoico (0,08 g, 0,45 mmol) en éter dietílico (5,7 ml), se añadió lentamente pentacloruro de fósforo (PCl⁵, 0,11 g, 0,52 mmol), y después se agitó durante 1 hora. Una vez completada la reacción, el disolvente orgánico se concentró a presión reducida por debajo de la temperatura ambiente, y entonces la disolución de reacción se diluyó añadiendo acetona (3,8 ml). Posteriormente, se añadió lentamente gota a gota azida de sodio (NaN³, 0,035 g, 0,545 mmol) disuelta en agua (0,28 ml) a la disolución de reacción a 0°C. Después de agitar durante 2 horas a temperatura ambiente, la azida de 2,4,6-trifluorobenzoilo así formada se diluyó con acetato de etilo, y después se lavó con agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se dispersó en THF (2 ml), se añadió THF (7,5 ml) que contenía 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)isoindolin-1 -ona (Compuesto D, 0,073 g, 0,23 mmol), y después se agitó durante 3 horas a 90°C. Una vez completada la reacción, el disolvente se concentró a presión reducida, y después se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,026 g, rendimiento: 23%).

Espectro de RMN ¹H (300 MHz, DMSO-ds): 14,46-14,37 (m 1H), 9,47-9,45 (br m, 1H), 9,37 (s, 1H), 8,45 (d, J =1,8 Hz, 1H), 8,30-8,27 (br-m, 1H), 7,63-7,46 (m, 3H), 7,31-7,26 (m, 3H), 7,09-6,84 (m, 1H), 4,42 (s, 2H) , 2,31-2,21 (m, 3H)

LCMS [M+1]: 496,3

Ejemplo 8: Preparación de 1-(2,6-difluoro-fen¡l)-3-{3-fluoro-4-[7-(5-met¡l-1H-¡m¡dazol-2-¡l)-1-oxo-2,3-d¡hidro-1H-¡so¡ndol-4-¡l]-fen¡l}-1-metil-urea

4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)isoindolin-1-ona (Compuesto D, 0,1 g, 0,31 mmol) se dispersó en una disolución mixta de DMF (0,8 ml) y THF (4 ml), y después se le añadieron piridina (0,05 ml) y cloroformiato de 4-nitrofenilo (0,07 g, 0,36 mmol), seguido de agitación durante 4 horas. Una vez completada la reacción, se añadió nhexano (3 ml) a la mezcla resultante, seguido de agitación durante 30 minutos. El sólido así formado se lavó con una mezcla de disolventes de n-hexano:THF = 1:1 (12 ml), se filtró, y después se secó. El compuesto seco se dispersó en DMF (4 ml), se añadió 2,6-difluorometilanilina (0,294 g, 2,05 mmol), y después se agitó durante 12 horas a 100°C. La disolución de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo que contenía metanol al 5%, y se lavó con una disolución acuosa saturada de NaHCO³ y agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró. Finalmente, la capa orgánica se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,018 g, rendimiento: 18%).

Espectro de RMN ¹H (300 MHz, DMSO-afe): 14,45-14,36 (m, 1H), 9,36 (s, 1H), 8,91 (s, 1H), 8,42 (d, J =8,1 Hz, 1H), 7,61-7,34 (m, 5H), 7,26-7,21 (m, 2H), 7,07-6,82 (m, 1H), 4,40 (s, 2H), 3,20 (s, 3H), 2,30- 2,20 (m, 3H)

LCMS [M+1]: 492,4

Ejemplo 9: Preparación de 1-{3-fluoro-4-[7-(5-met¡l-1H-im¡dazol-2-¡l)-1-oxo-2,3-d¡h¡dro-1H-¡so¡ndol-4-¡l]-fen¡l}-3-pentafluorofen¡l-urea

Se dispersó ácido pentafluorobenzoico (0,066 g, 0,31 mmol) en éter dietílico (3 ml), se añadió lentamente pentacloruro de fósforo (PCl⁵, 0,071 g, 0,341 mmol), y después se agitó durante 40 minutos. Una vez completada la reacción, el disolvente orgánico se concentró a presión reducida por debajo de la temperatura ambiente, y entonces la disolución de reacción se diluyó añadiendo acetona (3 ml). Posteriormente, se añadió lentamente gota a gota azida de sodio (NaN³, 0,026 g, 0,403 mmol) disuelta en agua (0,2 ml) a la disolución de reacción a 0°C. Después de agitar la disolución de reacción durante 1 hora a temperatura ambiente, la disolución de reacción se diluyó con acetato de etilo, y después se lavó con agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se dispersó en THF (1 ml), y después se introdujo en un matraz que contenía 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)isoindolin-1-ona (Compuesto D, 0,050 g, 0,155 mmol) diluida en THF (3 ml), seguido de agitación durante 3 horas a 90°C. Una vez completada la reacción, el disolvente se concentró a presión reducida, y después se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,023 g, rendimiento: 28%).

Espectro de RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe): 14,45-14,36 (m, 1H), 9,60 (s, 1H), 9,36 (s, 1H), 8,83 (br s, 1H), 8,43 (d, J =8,1Hz, 1H), 7,62-7,57 (m, 2H), 7,50 (t, J=8,4Hz, 1H), 7,30 (d, J =8,4 Hz, 1H), 7,08-6,83 (m, 1H), 4,40 (s, 2H), 2,30­ 2,20 (m, 3H)

LCMS [M+1]: 532,4

Ejemplo Comparativo 10: Preparación de 1-(2,5-difluorofenil)-3-(3-fluoro-4-(7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)-1-oxoisoindolin-4-il)fenil)urea

Se dispersó ácido 2,5-difluorobenzoico (0,05 g, 0,32 mmol) en THF (4 ml), y después se le añadieron trietilamina (0,088 ml, 0,63 mmol) y difenilfosforazidato (DPPA, 0,08 ml, 0,36 mmol), seguido de agitación durante 2 horas a temperatura ambiente. Después de comprobar que se había formado azida de 2,5-difluorobenzoilo, se le añadió el Compuesto D (0,051 g, 0,16 mmol), seguido de agitación durante 4 horas a 90°C. Una vez completada la reacción, la disolución de reacción se diluyó con acetato de etilo que contenía metanol al 5%, y después se lavó con una disolución acuosa saturada de NaHCO3. Posteriormente, la capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y después se concentró a presión reducida. El concentrado así obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,026 g, rendimiento: 34%).

Espectro de RMN 1H (300 MHz, DMSO-ds): 14,47-14,37 (m, 1H), 9,58 (s, 1H), 9,37 (s, 1H), 8,96 (s, 1H), 8,45 (d, J =8,4 Hz, 1H), 8,06-7,99 (m, 1H), 7,67-7,49 (m, 3H), 7,36-7,09 (m, 2H), 6,89-6,84 (m, 1H), 4,43 (s, 2H), 2,31-2,22 (m, 3H)

LCMS [M+1]: 478,4

Ejemplo Comparativo 11: Preparación de 1-(2,4-difluoro-fenil)-3-{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)-1-oxo-2.3- dihidro-1H-isoindol-4-il]-fenil}-urea

Se dispersó ácido 2,4-difluorobenzoico (0,04 g, 0,248 mmol) en THF (3 ml), y después se le añadieron trietilamina (0,069 ml, 0,496 mmol) y difenilfosforazidato (DPPA, 0,075 g, 0,273 mmol), seguido de agitación durante 2 horas a temperatura ambiente. Se añadió 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)isoindolin-1-ona (Compuesto D, 0,040 g, 0,124 mmol) a la mezcla, seguido de agitación durante 4 horas a 90°C. Una vez completada la reacción, la disolución de reacción se diluyó con acetato de etilo que contenía metanol al 5%, y después se lavó con agua y una disolución acuosa saturada de NaHCO ³ . Posteriormente, la capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y después se concentró a presión reducida. El concentrado así obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,024 g, rendimiento: 42%).

Espectro de RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe): 14,45-14,36 (m, 1H), 9,39-9,35 (m, 2H), 8,64 (s, 1H), 8,43 (d, J =8,1Hz, 1H), 8,09-8,00 (m, 1H), 7,65-7,59 (m, 2H), 7,49 (t, J =8,4 Hz, 1H), 7,35-7,21 (m, 2H), 7,08-6,83 (m, 2H), 4,41 (s, 2H), 2,30-2,20 (m, 3H)

LCMS [M+1]: 478,4

Ejemplo 12: Preparación de 1-{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-4-il]-fenil}-3-(2,3,6-trifluoro-fenil)-urea

Se dispersó 2,3,6-ácido trifluorobenzoico (0,044 g, 0,248 mmol) en éter dietílico (4 ml), se añadió lentamente pentacloruro de fósforo (PCl5, 0,057 g, 0,273 mmol), y después se agitó durante 40 minutos. Una vez completada la reacción, el disolvente orgánico se concentró a presión reducida por debajo de la temperatura ambiente, y entonces la disolución de reacción se diluyó añadiendo acetona (3 ml). Posteriormente, se añadió lentamente gota a gota azida sódica (NaN3, 0,021 g, 0,322 mmol) en agua (0,2 ml) a la disolución de reacción a 0°C. Después de agitar la disolución de reacción durante 1 hora a temperatura ambiente, la disolución de reacción se diluyó con acetato de etilo, y después se lavó con agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se dispersó en THF (1 ml), y después se introdujo en un matraz que contenía 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)isoindolin-1-ona (Compuesto D, 0,040 g, 0,124 mmol) diluida en THF (3 ml), seguido de agitación durante 6 horas a 90°C. Una vez completada la reacción, el disolvente se concentró a presión reducida, y después se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,022 g, rendimiento: 36%).

Espectro de RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe): 14,45-14,35 (m, 1H), 9,51 (br s, 1H), 9,35 (s, 1H), 8,62 (br s, 1H), 8,43 (d, J =8,1Hz, 1H), 7,62-7,57 (m, 2H), 7,48 (t, J=8,4 Hz, 1H), 7,44-7,34 (m, 1H), 7,31-7,20 (m, 2H), 7,07-6,83 (m, 1H), 4,40 (s, 2H), 2,30-2,20 (m, 3H)

LCMS [M+1]: 496,4

Ejemplo Comparativo 13: Preparación de 1-(3,5-difluoro-fenil)-3-{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)-1-oxo-2.3- dihidro-1H-isoindol-4-il]-fenil}-urea

Se dispersó ácido 3,5-difluorobenzoico (0,04 g, 0,248 mmol) en THF (4 ml), y después se le añadieron trietilamina (0,069 ml, 0,496 mmol) y difenilfosforazidato (DPPA, 0,075 g, 0,273 mmol), seguido de agitación durante 1 hora a temperatura ambiente. Se añadió 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)isoindolin-1-ona (Compuesto D, 0,040 g, 0,124 mmol) a la disolución de reacción, seguido de agitación durante 4 horas a 90°C. La disolución de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo, y después se lavó con agua y una disolución acuosa saturada de NaHCܳ. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y después se concentró a presión reducida. El concentrado así obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,032 g, rendimiento: 55%).

Espectro de RMN ¹H (300 MHz, DMSO-ds): 14,45-14,36 (m, 1H), 9,50 (s, 2H), 9,36 (s, 1H), 8,43 (d, J =8,1Hz, 1H), 7,64-7,60 (m, 2H), 7,50 (t, J=8,4 Hz, 1H), 7,30-7,20 (m, 3H), 7,08-6,77 (m, 2H), 4,41 (s, 2H), 2,30-2,20 (m, 3H)

LCMS [M+1]: 478,3

Ejemplo Comparativo 14: Preparación de 1-(3,4-difluoro-fenil)-3-{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-4-il]-fenil}-urea

El ácido 3,4-difluorobenzoico (0,05 g, 0,32 mmol) se dispersó en THF (4 ml), y después se le añadieron trietilamina (0,088 ml, 0,63 mmol) y difenilfosforazidato (DPPA, 0,08 ml, 0,36 mmol), seguido de agitación durante 2 horas a temperatura ambiente. Después de comprobar que se había formado azida 3,4-difluorobenzoílica, se le añadió 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)isoindolin-1-ona (Compuesto D, 0,051 g, 0,16 mmol), seguido de agitación durante 4 horas a 90°C. Una vez completada la reacción, la disolución de reacción se diluyó con acetato de etilo que contenía metanol al 5%, y después se lavó con una disolución acuosa saturada de NaHCO³. Posteriormente, la capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y después se concentró a presión reducida. El concentrado así obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,035 g, rendimiento: 46%).

Espectro de RMN ¹H (300 MHz, DMSO-afe): 14,40 (br s, 1H), 9,37 (s, 1H), 9,13-9,03 (m, 2H), 8,44 (d, J =8,1 Hz, 1H), 7,71-7,47 (m, 4H), 7,41-7,27 (m, 3H), 7,18-7,16 (m, 1H), 7,00 (s, 1H), 4,43 (s, 2H), 2,26 (s, 3H)

LCMS [M+1]: 478,4

Ejemplo Comparativo 15: Preparación de 1-(4-ciano-3-fluorofenil)-3-(3-fluoro-4-(7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)-1-oxoisoindolin-4-il)fenil)urea

Se dispersó ácido 4-ciano-3-fluorobenzoico (0,08 g, 0,48 mmol) en THF (6,1 ml), se añadió trietilamina (0,14 ml, 0,97 mmol) y difenilfosforazidato (DPPA, 0,12 ml, 0,56 mmol), y después se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. Después de comprobar que se formó azida 4-ciano-3-fluorobenzoílica, se le añadió 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)isoindolin-1-ona (Compuesto D, 0,078 g, 0,24 mmol), seguido de agitación durante 4 horas a 90°C. Una vez completada la reacción, la disolución de reacción se diluyó con acetato de etilo que contenía metanol al 5%, y después se lavó con una disolución acuosa saturada de NaHCOa. Posteriormente, la capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y después se concentró a presión reducida. El concentrado así obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,012 g, rendimiento: 10%).

Espectro de RMN ¹H (300 MHz, DMSO-cfe): 14,40 (br s, 1H), 9,89 (s, 1H), 9,64 (s, 1H), 9,37 (s, 1H), 8,44 (d, J=8,7 Hz, 1H), 7,94-7,15 (m, 7H), 7,01-6,99 (m, 1H), 4,43 (s, 2H), 2,26 (s, 3H)

LCMS [M+1]: 485,4

Ejemplo Comparativo 16: Preparación de 1-(4-cloro-3-(trifluorometil)fenil)-3-(3-fluoro-4-(7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)-1-oxoisoindolin-4-il)fenil)urea

Se dispersó ácido 4-cloro-3-trifluorometilbenzoico (0,08 g, 0,35 mmol) en THF (4,5 ml), y después se le añadieron trietilamina (0,1 ml, 0,71 mmol) y difenilfosforazidato (DPPA, 0,09 ml, 0,41 mmol), seguido de agitación durante 2 horas a temperatura ambiente. Después de comprobar que se había formado azida 4-cloro-3-trifluorometilbenzoílica, se le añadió 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)isoindolin-1-ona (Compuesto D, 0,057 g, 0,18 mmol), seguido de agitación durante 4 horas a 90°C. Una vez completada la reacción, la disolución de reacción se diluyó con acetato de etilo que contenía metanol al 5%, y después se lavó con una disolución acuosa saturada de NaHCO3. Posteriormente, la capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y después se concentró a presión reducida. El concentrado así obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,012 g, rendimiento: 12%).

Espectro de RMN ¹H (300 MHz, DMSO-afe): 14,47-14,37 (m, 1H), 9,36-9,32 (m, 2H), 9,25 (s, 1H), 8,45 (d, J =8,1 Hz, 1H), 8,12-8,05 (m, 1H), 7,71-7,61 (m, 4H), 7,54-7,48 (m, 1H), 7,33-7,29 (m, 1H), 7,09-6,85 (m, 1H), 4,42 (s, 2H), 2,32­ 2,22 (m, 3H)

LCMS [M+1]: 544,3

Ejemplo 17: Preparación de 1-(3-cloro-2,6-d¡fluorofen¡l)-3-(3-fluoro-4-(7-(5-metil-1H-¡m¡dazol-2-¡l)-1-oxoisoindolin-4-il)fenil)urea

Se dispersó ácido 3-cloro-2,6-difluorobenzoico (0,08 g, 0,41 mmol) en éter dietílico (5,2 ml), se añadió lentamente pentacloruro de fósforo (PCl⁵, 0,099 g, 0,48 mmol), y después se agitó durante 1 hora. Una vez completada la reacción, el disolvente orgánico se concentró a presión reducida por debajo de la temperatura ambiente, y entonces la disolución de reacción se diluyó añadiendo acetona (3,5 ml). Posteriormente, se añadió lentamente gota a gota azida de sodio (NaN³, 0,032 g, 0,50 mmol) disuelta en agua (0,25 ml) a la disolución de reacción a 0°C. Después de agitar la disolución de reacción durante 2 horas a temperatura ambiente, la azida 3-cloro-2,6-difluorobenzoílica así formada se diluyó con acetato de etilo, seguido de lavado con agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se dispersó en THF (1,6 ml), se añadió THF (1,6 ml) que contenía 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)isoindolin-1 -ona (Compuesto D, 0,067 g, 0,21 mmol), y después se agitó durante 3 horas a 90°C. Una vez completada la reacción, el disolvente se concentró, y después se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,017 g, rendimiento: 16%).

Espectro de RMN ¹H (300 MHz, DMSO-ds): 14,47-14,38 (m, 1H), 9,49-9,39 (m, 2H), 8,53 (s, 1H), 8,44 (d, J =8,1 Hz, 1H), 7,63-7,47 (m, 4H), 7,31 -7,24 (m, 2H), 7,09-6,84 (m, 1H), 4,42 (s, 2H), 2,31 -2,21 (m, 3H)

LCMS [M+1]: 512,3

Ejemplo 18: Preparación de 1-(2-cloro-3,6-difluorofen¡l)-3-(3-fluoro-4-(7-(5-met¡l-1H-im¡dazol-2-¡l)-1-oxoisoindolin-4-il)fenil)urea

Se dispersó ácido 2-cloro-3,6-difluorobenzoico (0,08 g, 0,41 mmol) en éter dietílico (5,2 ml), se añadió lentamente pentacloruro de fósforo (PCl⁵, 0,099 g, 0,48 mmol), y después se agitó durante 1 hora. Una vez completada la reacción, el disolvente orgánico se concentró a presión reducida por debajo de la temperatura ambiente, y entonces la disolución de reacción se diluyó añadiendo acetona (3,5 ml). Posteriormente, se añadió lentamente gota a gota azida de sodio (NaN³, 0,032 g, 0,50 mmol) disuelta en agua (0,25 ml) a la disolución de reacción a 0°C. Después de agitar la disolución de reacción durante 2 horas a temperatura ambiente, la azida 2-cloro-3,6-difluorobenzoílica así formada se diluyó con acetato de etilo, seguido de lavado con agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se dispersó en THF (1,6 ml), se añadió THF (7 ml) que contenía 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)isoindolin-1-ona (Compuesto D, 0,067 g, 0,21 mmol), y después se agitó durante 3 horas a 90°C. Una vez completada la reacción, el disolvente se concentró a presión reducida, y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,038 g, rendimiento: 36%).

Espectro de RMN ¹H (300 MHz, DMSO-afe): 14,46-14,37 (m, 1H), 9,51 (s, 1H), 9,37 (s, 1H), 8,58 (s, 1H), 8,44 (d, J =8,1 Hz, 1H), 7,63-7,59 (m, 2H), 7,52-7,29 (m, 4H), 7,09-6,84 (m, 1H), 4,42 (s, 2H), 2,31-2,21 (m, 3H)

LCMS [M+1]: 512,3

Ejemplo 19: Preparación de 1-(4-cloro-2,6-difluoro-fen¡l)-3-{3-fluoro-4-[7-(5-met¡l-1H-im¡dazol-2-¡l)-1-oxo-2,3-dih¡dro-1H-¡soindol-4-¡l[-fen¡l}-urea

Se dispersó ácido 4-cloro-2,6-difluorobenzoico (0,060 g, 0,31 mmol) en éter dietílico (4 ml), se añadió lentamente pentacloruro de fósforo (PCl⁵, 0,071 g, 0,341 mmol), y después se agitó durante 40 minutos. Una vez completada la reacción, el disolvente orgánico se concentró a presión reducida por debajo de la temperatura ambiente, y entonces la disolución de reacción se diluyó añadiendo acetona (3 ml). Posteriormente, se añadió lentamente gota a gota azida de sodio (NaN³, 0,026 g, 0,403 mmol) disuelta en agua (0,2 ml) a la disolución de reacción a 0°C. Después de agitar la disolución de reacción durante 1 hora a temperatura ambiente, la disolución de reacción se diluyó con acetato de etilo, y después se lavó con agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se dispersó en THF (1 ml), y después se introdujo en un matraz que contenía 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)isoindolin-1 -ona (Compuesto D, 0,050 g, 0,155 mmol) disuelta en THF (3 ml), seguido de agitación durante 4 horas a 90°C. Una vez completada la reacción, el disolvente se concentró a presión reducida, y después se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,024 g, rendimiento: 30%).

Espectro de RMN ¹H (300 MHz, DMSO-afe): 14,46-14,37 (m, 1H), 9,86 (s, 1H), 9,38 (s, 1H), 8,82 (s, 1H), 8,41 (d, J =8,1 Hz, 1H), 7,63-7,59 (m, 2H), 7,52-7,29 (m, 4H), 6,97 (s, 1H), 4,42 (s, 2H), 2,21 (s, 3H)

LCMS [M+1]: 512,3

Ejemplo 20: Preparación de 1-{3-fluoro-4-[7-(5-met¡l-1H-¡m¡dazol-2-¡l)-1-oxo-2,3-d¡h¡dro-1H-¡so¡ndol-4-¡l]-fenil}-3-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenil)-urea

Se diluyó 2,3,5,6-ácido tetrafluorobenzoico (0,08 g, 0,41 mmol) en éter dietílico (5,2 ml), se añadió lentamente pentacloruro de fósforo (PCl⁵, 0,099 g, 0,48 mmol), y después se agitó durante 1 hora. Una vez completada la reacción, el disolvente orgánico se concentró a presión reducida por debajo de la temperatura ambiente, y entonces la disolución de reacción se diluyó añadiendo acetona (3,4 ml). Posteriormente, se añadió lentamente gota a gota azida de sodio (NaN3, 0,032 g, 0,50 mmol) disuelta en agua (0,25 ml) a la disolución de reacción a 0°C. Después de agitar la disolución de reacción durante 2 horas a temperatura ambiente, la azida 2,3,5,6-tetrafluorobenzoílica así formada se diluyó con acetato de etilo, y después se lavó con agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se dispersó en THF (1,6 ml), se añadió THF (7 ml) que contenía 4-(4-amino-2-fluorofenil)-7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)isoindolin-1-ona (Compuesto D, 0,066 g, 0,21 mmol), y después se agitó durante 3 horas a 90°C. Una vez completada la reacción, el disolvente se concentró a presión reducida, y después se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloruro de metileno:metanol = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,014 g, rendimiento: 13%). Espectro de RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 8,45 (d, J =8,1 Hz, 1H), 7,69-7,61 (m, 2H), 7,48-7,33 (m, 3H), 7,00 (s, 1H), 4,48 (s, 2H), 2,38 (s, 3H)

LCMS [M+1]: 514,3

Los compuestos obtenidos en los Ejemplos 1 a 20 están representados por la siguiente fórmula estructural, como se muestra en la Tabla 1 a continuación. Los compuestos 2, 10, 11, 13, 14, 15 y 16 son ejemplos comparativos.

[Tabla 1]

Los compuestos preparados a partir de Ejemplos se evaluaron para ensayos biológicos de la siguiente manera.

La evaluación de las actividades biológicas de los compuestos según la presente invención se puede llevar a cabo mediante cualquier método convencional conocido en la técnica. Los métodos de ensayo apropiados son bien conocidos en la técnica. Los siguientes ensayos son ejemplos para estudiar los efectos de los compuestos de la invención sobre diversas cinasas, que no se limitan a ellas. Los compuestos de la presente invención muestran sus actividades en al menos uno de los siguientes ensayos.

Ejemplo Experimental 1: ensayo para la actividad de inhibición de BTK (método de ELISA)

A fin de evaluar la actividad de los compuestos de la presente invención como un inhibidor de BTK, para este experimento se usó BTK (Promega) comercialmente disponible. Específicamente, se realizó una reacción enzimática mezclando 0,4 nM de enzima BTK, 40 pM de péptido sustrato de biotina-Sl y 50 pM de ATP en un amortiguador de reacción (Tris-HCl 15 mM (pH 7,5), MgCl220 mM, MnCl22 mM, DTT 2 mM, BSA 0,1 mg/ml). La mezcla se trató con los compuestos de ensayo a concentraciones predeterminadas, y se dejó reaccionar durante 20 minutos a 30°C. Una vez completada la reacción, las actividades de los compuestos de ensayo se midieron mediante el método de ELISA. El valor de absorbancia de una muestra no tratada se usó como control (control del 100%). Las actividades de la enzima BTK se midieron después del tratamiento con diversas concentraciones de los compuestos de ensayo, y la concentración de los compuestos de ensayo que dio como resultado una inhibición del 50% de la enzima BTK en comparación con el control se determinó como IC50 del inhibidor de BTK.

Las actividades de inhibición de BTK de varios compuestos entre los compuestos de la invención se ensayaron aleatoriamente. Los resultados se muestran en la Tabla 2 a continuación.

[Tabla 2] Resultados de las actividades de inhibición de BTK de compuestos representativos. Los compuestos 14 y 15 son ejemplos comparativos.

Ejemplo Experimental 2: ensayo de liberación de histamina

Según Kawakami et al., la inhibición de la actividad de BTK en mastocitos reduce la producción de un mediador (por ejemplo, histamina) y un mediador de lípidos, o secreción de citocina. (Referencia [J Immunol. 1 agosto 2000; 165(3):1210-9. Redundant and opposing functions of two tyrosine kinases, Btk and Lyn, in mast cell activation. Kawakami Y, Kitaura J, Satterthwaite AB, Kato RM, Asai K, Hartman SE, Maeda-Yamamoto M, Lowell CA, Rawlings DJ, Witte ON, Kawakami T]).

Los ensayos de liberación de histamina se realizaron con referencia al método descrito en el artículo, FEBS Lett. 11 septiembre 2002; 527(1-3):274-8. Silencing of Bruton’s tyrosine kinase (Btk) using short interfering RNA duplexes (siRNA). Heinonen JE, Smith CI, Nore BF, y la cantidad de histamina se midió mediante un inmunoensayo enzimático.

La línea celular RBL-2H3, adquirida de KCLB (Korean Cell Line Bank), se cultivó en un medio DMEM suplementado con FBS al 10% (v/v) a 37°C en una incubadora con CO2 al 5% durante 72 horas. Las células se transfirieron a placas de 96 pocillos a una densidad de 10.000 células/pocillo, y se cultivaron a 37°C en una incubadora con CO2 al 5% durante 24 horas.

Las células se trataron con 500 ng/ml de anticuerpo monoclonal anti-DNP (sigma) y cada uno de 0,001,0,01,0,1, 1,0 y 10 mM del compuesto de ensayo en dimetilsulfóxido (DMSO) al 100% (v/v). Las células se trataron solo con DMSO al 100% (v/v), que se usó como control. Las muestras tratadas se cultivaron a 37°C en la incubadora con CO2 al 5% durante 24 horas. Después, la liberación de histamina se midió según las instrucciones del fabricante (kit de histamina EIA, immunotech). Cada pocillo se trató con 50 ml de un amortiguador de liberación de histamina, y se dejó reaccionar durante 30 minutos a 37°C. Una vez completada la reacción, se transfirieron 100 ml de una muestra de cada pocillo a una nueva placa, y después se mezclaron completamente con 25 ml de un amortiguador de acetilación y 25 ml de un reactivo de acetilación. Se transfirieron 50 ml de la muestra de acetilación preparada de este modo a una placa recubierta con un anticuerpo, se mezclaron con 200 ml de conjugado de histamina fosfatasa alcalina, y después se dejó reaccionar durante 18 horas a 4°C. Una vez que se completa la reacción, se retira la muestra de la placa, y después se añaden 200 ml de un amortiguador de lavado para lavar tres veces. Se le añadieron 200 ml de un sustrato, y la mezcla se dejó reaccionar a temperatura ambiente durante 30 minutos. La reacción se terminó añadiendo 50 ml de una disolución de parada, y la absorbancia de las muestras se leyó a 406 nm usando Benchmark Plus (Biorad). El nivel de liberación de histamina se calculó en función de la absorbancia del grupo de ensayo frente a la del grupo de control. Los valores de EC50 (mM), en los que los compuestos de ensayo reducen la liberación de histamina en un 50%, se determinaron usando el programa gráfico de Microsoft Excel.

A fin de evaluar las eficacias de los compuestos de la invención como un fármaco antiinflamatorio, se realizaron aleatoriamente esayos de liberación de histamina de varios compuestos entre ellos. Los valores de EC50 de los compuestos se resumen en la Tabla 3. Los resultados indican que los compuestos obtenidos en los Ejemplos según la presente invención tienen una eficacia excelente.

[Tabla 3] Resultados del ensayo de liberación de histamina de compuestos representativos. Los compuestos 14 y 15 son ejemplos comparativos.

Ejemplo Experimental 3: ensayo MTS basado en ensayo antiproliferación

Se realizó un ensayo de MTS para evaluar las actividades antiproliferativas de los compuestos de la invención a través de la inhibición de la cinasa regulada por señal extracelular (Barltrop, JA et al., (1991) 5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4,5-dimethylthiazoly)-3-(4-sulfophenyl) tetrazolium, inner salt (MTS) and related analog of 3-(4,5-dimethylthiazolyl)-2,5,-diphenyltetrazolium bromide (MTT) reducing to purple water soluble formazans as cell-viability indicators. Bioorg. Med. Chem. Lett. 1, 611-4; Cory, A.H. et al., (1991) Use of an aqueous soluble tertrazolium/formazan assay for cell growth assays in culture. Cancer Comm. 3, 207-12).

Para el ensayo, se usaron líneas celulares de linfoma humano Jeko-1 (ATCC), Mino (ATCC), H9 (Korean Cell Line Bank) y SR (ATCC), y líneas celulares de leucemia humana MV4-11 (ATCC), Molm-13 (d SmZ) y Ku812 (ATCC), según el procedimiento que se muestra a continuación.

Cada una de las células Jeko-1, Mino, H9, SR, MV4-11, Molm-13 y Ku812 se transfirieron a placas de 96 pocillos que contenían medio RPMI1640 (GIBCO, Invitrogen) suplementado con FBS al 10%, a una densidad de 10.000 células/pocillo, y después se incubaron durante 24 horas en condiciones de 37°C y CO2 al 5%. Los pocillos se trataron con cada uno de 0,2, 1,5, 25 y 100 mM de los compuestos de ensayo. El pocillo se trató con DMSO en una cantidad de 0,08% en peso, que es la misma cantidad que en los compuestos de ensayo, que se usó como control. Las células resultantes se incubaron durante 48 horas.

Los ensayos de MTS están disponibles comercialmente, e incluyen el ensayo de proliferación celular no radiactivo acuoso Promega CellTiter 96®. Se realizaron ensayos de MTS para evaluar la viabilidad celular de los compuestos de ensayo. Se añadieron a cada pocillo 20 pl de una disolución mixta de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazolio, sal interna (“MTS”) y metosulfato de fenazina (PMS), y después se incubaron durante 2 horas a 37°C. Después, la absorbancia de las muestras se leyó a 490 nm. El nivel de actividad antiproliferación se calculó basándose en la absorbancia de los compuestos de ensayo frente a la del grupo de control no tratado. Se calcularon los valores de EC50 (pM), en los cuales los compuestos de ensayo reducen el crecimiento de las células cancerosas en un 50%.

Se llevó a cabo un ensayo para determinar la actividad antiproliferativa usando células de linfoma Jeko-1, Mino, H9 y SR para evaluar la eficacia de los compuestos de la invención como agente antiinflamatorio así como agente contra el cáncer. Los valores de EC50 de los mismos se muestran en la Tabla 4 a continuación.

[Tabla 4] Ensayo antiproliferación de los compuestos representativos contra células de linfoma. Los compuestos 14 y 15 son ejemplos comparativos.

Además, algunos compuestos de la invención que han exhibido excelentes eficacias contra células de linfoma se sometieron adicionalmente a un ensayo antiproliferación contra células de leucemia para confirmar sus excelentes eficacias. Los valores de EC50 de los mismos se muestran en la Tabla 5 a continuación.

[Tabla 5] Ensayo antiproliferación de los compuestos representativos contra células de leucemia.

Claims (11)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en un compuesto de fórmula (I), y sales, hidratos y solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo:

en la que,

A es

y R⁸ es hidrógeno, halógeno, o alquilo de C1-3;

R1 y R2 son, cada uno independientemente, hidrógeno o alquilo de C1-3; y

R3 a R7 son, cada uno independientemente, hidrógeno, halógeno, ciano, nitro, o haloalquilo de C1-3; y en la que R3 y R7 son, cada uno independientemente, halógeno, ciano, nitro, o haloalquilo de C1-3.

2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que

A es

y R⁸ es hidrógeno o fluoro;

R1 es metilo o hidrógeno;

R2 es hidrógeno o metilo;

R3 es fluoro, cloro, ciano o trifluorometilo;

R4 es fluoro, cloro, ciano o trifluorometilo;

R5 es hidrógeno, fluoro, cloro, ciano o trifluorometilo;

R⁶ es hidrógeno, fluoro, cloro, ciano o trifluorometilo; y

R7 es fluoro, cloro, ciano o trifluorometilo.

3. El compuesto de la reivindicación 1, en el que

A es

y R⁸ es hidrógeno o fluoro;

Ri es metilo o hidrógeno;

R2 es hidrógeno o metilo;

R3 a R7 son, cada uno independientemente, hidrógeno, fluoro, cloro, ciano o trifluorometilo; en la que R3 es fluoro, cloro, ciano o trifluorometilo, y

R7 es fluoro, cloro, ciano o trifluorometilo.

4. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-3.

5. El compuesto o composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, para uso en el tratamiento del cáncer.

6. El compuesto o composición farmacéutica para uso de la reivindicación 5, en el que el cáncer es un linfoma.

7. El compuesto o composición farmacéutica para uso de la reivindicación 5, en el que el cáncer es leucemia.

8. El compuesto o composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, para uso en el tratamiento de inflamación.

9. El compuesto o composición farmacéutica para uso de la reivindicación 8, en el que la inflamación está asociada con artritis reumatoide y osteoartritis, asma, alergia, dermatitis atópica, o psoriasis.

10. El compuesto para uso de una cualquiera de las reivindicaciones 5-9, en el que el compuesto se selecciona del grupo que consiste en 1-{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-4-il]-fenil}-3-(2,4,6-trifluoro-fenil)-urea, y una sal, hidrato y solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

11. La composición farmacéutica para uso de una cualquiera de las reivindicaciones 8-9, en la que el compuesto se selecciona del grupo que consiste en 1-{3-fluoro-4-[7-(5-metil-1H-imidazol-2-il)-1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-4-il]-fenil}-3-(2,4,6-trifluoro-fenil)-urea, y una sal, hidrato y solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.