ES2921009T3 - Inhibidores de desmetilasas de histonas - Google Patents

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phenyl
pyrimidin
amino
pyrido
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Amogh Boloor
Toufike Kanouni
Jeffrey Stafford
James Veal
Michael Wallace
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Celgene Quanticel Research Inc
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

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Abstract

La presente invención se relaciona generalmente con las composiciones y métodos para tratar el cáncer y la enfermedad neoplásica. Proporcionados en este documento se sustituyen los compuestos derivados de pirido [3,4-D] pirimidina-4-one y composiciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos. Los compuestos y composiciones de sujetos son útiles para la inhibición de la histona desmetilasa. Además, los compuestos y composiciones sujetos son útiles para el tratamiento del cáncer, como el cáncer de próstata, el cáncer de mama, el cáncer de vejiga, el melanoma y similares. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Inhibidores de desmetilasas de histonas
Antecedentes
Existe una necesidad en la técnica de un tratamiento eficaz del cáncer y la enfermedad neoplásica. El documento WO 2016/044429 A1 describe inhibidores de desmetilasas de histonas.
Breve resumen de la invención
La invención se dirige a un compuesto derivado de pirido[3,4-d]pirimidin-4-ona sustituido seleccionado del grupo que consiste en:
2-(4-((4-isopropilfenil)(1-metilpiperidin-4-il)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-isopropilfenil)(propil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-isopropilfenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(isopropil(4-isopropilfenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(isobutil(4-isopropilfenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-isopropilfenil)(1-metilpiperidin-3-il)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(ciclopentil(4-isopropilfenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-isopropilfenil)(pirrolidin-3-il)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-isopropilfenil)(1-metilpirrolidin-3-il)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(5-metilindolin-1-il)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(5-metil-1H-indol-1-il)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-isopropilfenil)(piperidin-3-il)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-isopropilfenil)(metil)amino)-3-metilfenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((3-(4-isopropilpiperazin-1-il)fenil)(metil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(metil(3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-3-(trifluorometil)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(3-metil-4-(metil(3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-etil-3-metoxifenil)(metil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(metil(3-(4-metilpiperazin-1-il)-4-(2,2,2-trifluoroetoxi)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-etil-2-metoxifenil)(metil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((3-(4-etilpiperazin-1-il)fenil)(metil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(metil(3-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(metil(3-(1-metilpiperidin-4-il)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(etil(3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((ciclopropilmetil)(3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-isopropilfenil)(metil)amino)-3-(trifluorometil)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-etilfenil)(metil)amino)-3-metilfenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((2-metoxi-5-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)(metil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((2-etoxi-5-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)(metil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(metil(2-metil-5-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-(terc-butil)fenil)(metil)amino)-3-metilfenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol; y
2-(3-metil-4-(metil(4-propilfenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol.
Una composición farmacéutica puede comprender un compuesto como se describe anteriormente.
El compuesto como se describe anteriormente o la composición farmacéutica como se describe anteriormente puede usarse en la terapia del cáncer.
El compuesto como se describe anteriormente o la composición farmacéutica como se describe anteriormente puede usarse en la terapia del cáncer de próstata, el cáncer de mama, el cáncer de vejiga, el cáncer de pulmón y/o el melanoma.
Descripción detallada
Como se usa en la presente descripción y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "una" y "el/la" incluyen los referentes plurales a menos que el contexto lo indique claramente de cualquier otra manera. Por tanto, por ejemplo, la referencia a "un agente" incluye una pluralidad de tales agentes, y la referencia a "la célula" incluye la referencia a una o más células (o a una pluralidad de células) y los equivalentes de estas conocidas por los expertos en la técnica, etcétera. Cuando los intervalos se usan en la presente descripción para las propiedades físicas, tales como el peso molecular, o las propiedades químicas, tales como las fórmulas químicas, todas las combinaciones y las subcombinaciones de los intervalos y las modalidades específicas en ellas se destinan a estar incluidas. El término "aproximadamente" cuando se refiere a un número o un intervalo numérico significa que el número o el intervalo numérico al que se hace referencia es una aproximación dentro de la variabilidad experimental (o dentro del error experimental estadístico) y, por lo tanto, el número o el intervalo numérico puede variar entre el 1 % y el 15% del número o el intervalo numérico indicado. El término "que comprende" (y los términos relacionados tales como "comprenden" o "comprende" o "que tiene" o "que incluye") no pretende excluir que, en otras determinadas modalidades, por ejemplo, una modalidad de cualquier composición de materia, composición, método o proceso, o similares, que se describen en la presente descripción, puede "consistir en" o "consistir esencialmente en" las características que se describen.
Los compuestos que se describen en la presente descripción pueden contener uno o más centros asimétricos y, por lo tanto, pueden dar lugar a enantiómeros, diastereómeros y otras formas estereoisoméricas que pueden definirse, en términos de estereoquímica absoluta, como (R)- o (S)-. A menos que se declare de cualquier otra manera, se pretende que todas las formas estereoisoméricas de los compuestos descritos en la presente descripción estén contempladas en esta descripción. Cuando los compuestos que se describen en la presente descripción contienen dobles enlaces alqueno, y a menos que se especifique de cualquier otra manera, se pretende que esta descripción incluya isómeros geométricos tanto E como Z (por ejemplo, cis o trans). Asimismo, también se pretende incluir todos los isómeros posibles, así como sus formas racémicas y ópticamente puras y todas las formas tautoméricas. El término "isómero geométrico" se refiere a los isómeros geométricos E o Z (por ejemplo, cis o trans) de un enlace doble alqueno. El término "isómero de posición" se refiere a los isómeros estructurales alrededor de un anillo central, tales como orto-, meta- y para- isómeros alrededor de un anillo de benceno.
Un "tautómero" se refiere a una molécula en donde es posible un cambio de protones de un átomo de una molécula a otro átomo de la misma molécula. Los compuestos presentados en la presente descripción pueden, en determinadas modalidades, existir como tautómeros. En circunstancias donde es posible la tautomerización, existirá un equilibrio químico de los tautómeros. La relación exacta de los tautómeros depende de varios factores, que incluye el estado físico, la temperatura, el solvente y el pH. Algunos ejemplos de equilibrio tautomérico incluyen:
Figure imgf000003_0001
"Sal farmacéuticamente aceptable" incluye tanto las sales de adición de ácido y base. Una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los compuestos derivados de pirido[3,4-d]pirimidin-4-ona sustituidos que se describen en la presente descripción pretende abarcar cualquiera y todas las formas de sal farmacéuticamente adecuadas. Las sales farmacéuticamente aceptables preferentes de los compuestos que se describen en la presente descripción son las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables y las sales de adición de bases farmacéuticamente aceptables.
"Sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellas sales que retienen la eficacia biológica y las propiedades de las bases libres, que no son biológicamente, o de cualquier otra manera, indeseables, y que se forman con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido yodhídrico, ácido fluorhídrico, ácido fosforoso y similares. También se incluyen las sales que se forman con ácidos orgánicos tales como ácidos monocarboxílicos y dicarboxílicos alifáticos, ácidos alcanoicos sustituidos con fenilo, ácidos hidroxialcanoicos, ácidos alcanodioicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfónicos aromáticos y alifáticos, etc., e incluyen, por ejemplo, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácido salicílico y similares. Las sales ilustrativas incluyen, por lo tanto, sulfatos, pirosulfatos, bisulfatos, sulfitos, bisulfitos, nitratos, fosfatos, monohidrógenofosfatos, dihidrógenofosfatos, metafosfatos, pirofosfatos, cloruros, bromuros, yoduros, acetatos, trifluoroacetatos, propionatos, caprilatos, isobutiratos, oxalatos, malonatos, suberatos de succinato, sebacatos, fumaratos, maleatos, mandelatos, benzoatos, clorobenzoatos, metilbenzoatos, dinitrobenzoatos, ftalatos, bencenosulfonatos, toluenosulfonatos, fenilacetatos, citratos, lactatos, malatos, tartratos, metanosulfonatos y similares. También se contemplan sales de aminoácidos, tales como arginatos, gluconatos y galacturonatos (véase, por ejemplo, Berge y otros, Pharmaceutical Salts, J. Pharma. Sci., 66:1-19 (1997), que se incorpora al presente por referencia en su totalidad). Las sales de adición de ácido de los compuestos básicos pueden prepararse al poner en contacto las formas de base libre con una cantidad suficiente del ácido deseado para producir la sal de acuerdo con los métodos y las técnicas con los que un experto en la técnica está familiarizado.
"Sal de adición de base farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellas sales que retienen la eficacia biológica y las propiedades de los ácidos libres que no son biológicamente, o de cualquier otra manera, indeseables. Estas sales se preparan a partir de la adición de una base inorgánica o una base orgánica al ácido libre. Las sales de adición de bases farmacéuticamente aceptables pueden formarse con metales o aminas, tales como metales alcalinos y alcalinotérreos o aminas orgánicas. Las sales derivadas de bases inorgánicas incluyen, pero no se limitan a, sales de sodio, potasio, litio, amonio, calcio, magnesio, hierro, zinc, cobre, manganeso, aluminio y similares. Las sales derivadas de bases orgánicas incluyen, pero no se limitan a, sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas que incluyen aminas sustituidas de origen natural, aminas cíclicas y resinas básicas de intercambio iónico, por ejemplo, isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, etanolamina, dietanolamina, 2-dimetil-aminoetanol, 2-dietilaminoetanol, diciclohexilamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, procaína, N,N-dibenciletilendiamina, cloroprocaína, hidrabamina, colina, betaína, etilendiamina, etilendianilina, N-metilglucamina, glucosamina, metilglucamina, teobromina, purinas, piperazina, piperidina, N-etilpiperidina, resinas de poliamina y similares. Véase, Berge y otros, arriba.
Como se usa en la presente descripción, "tratamiento" o "tratar", "paliar" o "mejorar" se usan indistintamente en la presente descripción. Estos términos se refieren a un enfoque para obtener resultados beneficiosos o deseados que incluyen, pero no se limitan a, un beneficio terapéutico y/o un beneficio profiláctico. Por "beneficio terapéutico" se entiende la erradicación o la mejora del trastorno subyacente que se trata. También, se logra un beneficio terapéutico con la erradicación o la mejora de uno o más de los síntomas fisiológicos asociados con el trastorno subyacente, de manera que se observa una mejora en el paciente, a pesar de que el paciente todavía puede estar afectado por el trastorno subyacente. Para beneficio profiláctico, las composiciones pueden administrarse a un paciente con riesgo de desarrollar una enfermedad particular, o a un paciente que informa uno o más de los síntomas fisiológicos de una enfermedad, aunque no se haya hecho un diagnóstico de esta enfermedad.
Compuestos derivados de pirido[3,4-d]pirimidin-4-ona sustituidos
En la presente descripción se describen los compuestos derivados de pirido[3,4-d]pirimidin-4-ona sustituidos que inhiben una enzima desmetilasa de histonas. Estos compuestos, y las composiciones que comprenden estos compuestos, son útiles para el tratamiento del cáncer y la enfermedad neoplásica. Los compuestos que se describen en la presente descripción son útiles para tratar el cáncer de próstata, el cáncer de mama, el cáncer de vejiga, el cáncer de pulmón y/o el melanoma y similares.
La invención proporciona un compuesto, o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, elegido de:
2-(4-((4-isopropilfenil)(1-metilpiperidin-4-il)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-isopropilfenil)(propil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-isopropilfenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(isopropil(4-isopropilfenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(isobutil(4-isopropilfenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-isopropilfenil)(1-metilpiperidin-3-il)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(ciclopentil(4-isopropilfenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-isopropilfenil)(pirrolidin-3-il)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-isopropilfenil)(1-metilpirrolidin-3-il)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(5-isopropilindolin-1-il)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(5-isopropil-1H-indol-1-il)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-isopropilfenil)(piperidin-3-il)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-isopropilfenil)(metil)amino)-3-metilfenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((3-(4-isopropilpiperazin-1-il)fenil)(metil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((3-(4-isopropilpiperazin-1-il)fenil)(metil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(metil(3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-3-(trifluorometil)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(3-metil-4-(metil(3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-etil-3-metoxifenil)(metil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(metil(3-(4-metilpiperazin-1-il)-4-(2,2,2-trifluoroetoxi)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-etil-2-metoxifenil)(metil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((3-(4-etilpiperazin-1-il)fenil)(metil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(metil(3-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(metil(3-(l-metilpiperidin-4-il)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(etil(3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((cidopropilmetil)(3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-isopropilfenilXmetil)ammo)-3-(trifluorometil)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-etilfenil)(metil)amino)-3-metilfenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((2-metoxi-5-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)(metil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((2-etoxi-5-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)(metil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-(metil(2-metil-5-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
2-(4-((4-(terc-butil)fenil)(metil)amino)-3-metilfenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol; y
2-(3-metil-4-(metil(4-propilfenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol.
El compuesto descrito en la presente descripción puede tener una estructura proporcionada en la Tabla 1. Los Ejemplos 1-118 son ejemplos de referencia.
Figure imgf000005_0001
continuación
Figure imgf000006_0001
continuación
Figure imgf000007_0001
continuación
Figure imgf000008_0001
continuación
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continuación
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continuación
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continuación
Figure imgf000012_0001
continuación
Figure imgf000013_0001
continuación
Figure imgf000014_0001
continuación
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continuación
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continuación
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continuación
Figure imgf000018_0001
continuación
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continuación
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continuación
Figure imgf000021_0001
continuación
Figure imgf000022_0001
En algunas modalidades, el compuesto descrito en la presente descripción tiene una estructura proporcionada en la tabla 2.
Figure imgf000023_0001
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Preparación de los compuestos derivados de pirido[3,4-d]pirimidin-4-ona sustituidos
Los compuestos usados en las reacciones que se describen en la presente descripción se elaboran de acuerdo con las técnicas de síntesis orgánica conocidas por los expertos en esta técnica, a partir de productos químicos disponibles en el mercado y/o de compuestos que se describen en la literatura química. Los "productos químicos disponibles comercialmente" se obtienen de fuentes comerciales estándar que incluyen Acros Organics (Pittsburgh, PA), Aldrich Chemical (Milwaukee, WI, que incluyen Sigma Chemical y Fluka), Apin Chemicals Ltd. (Milton Park, Reino Unido), Avocado Research (Lancashire, Reino Unido), BDH Inc. (Toronto, Canadá), Bionet (Cornwall, Reino Unido), Chemservice Inc. (West Chester, PA), Crescent Chemical Co. (Hauppauge, NY), Eastman Organic Chemicals, Eastman Kodak Company (Rochester, NY), Fisher Scientific Co. (Pittsburgh, PA), Fisons Chemicals (Leicestershire, Reino Unido), Frontier Scientific (Logan, UT), ICN Biomedicals, Inc. (Costa Mesa, CA), Key Organics (Cornwall, Reino Unido), Lancaster Synthesis (Windham, NH), Maybridge Chemical Co. Ltd. (Cornwall, Reino Unido), Parish Chemical Co. (Orem, UT), Pfaltz & Bauer, Inc. (Waterbury, CN), Polyorganix (Houston, TX), Pierce Chemical Co. (Rockford, IL), Riedel de Haen AG (Hannover, Alemania), Spectrum Quality Product, Inc. (Nuevo Brunswick, NJ), TCI America (Portland, OR), Trans World Chemicals, Inc. (Rockville, MD) y Wako Chemicals USA, Inc. (Richmond, VA).
Los métodos conocidos por un experto en la técnica se identifican a través de varios libros de referencia y bases de datos. Los libros y tratados de referencia adecuados que detallan la síntesis de reactivos útiles en la preparación de los compuestos que se describen en la presente descripción, o proporcionan referencias a artículos que describen la preparación, incluyen, por ejemplo, SYNTHETIC ORGANIC CHEM. (John Wiley & Sons, Inc., Nueva York); Sandler y otros, ORGANIC FUNCTIONAL GROUP PREP. (2da Ed., Acad. Press, NY, 1983); House, MODERN SYNTHETIC REACTIONS (2da Ed., W.A. Benjamin, Inc., Menlo Park, CA 1972); Gilchrist, HETEROCYCLIC CHEM. (2da Ed., John Wiley & Sons, Nueva York, 1992); March, ADVANCED ORGANIC CHEM.: REACTIONS, MECHANISMS & STRUCTURE (4ta Ed., Wiley-Intersci., Nueva York, 1992). Los libros y tratados de referencia adecuados adicionales que detallan la síntesis de los reactivos útiles en la preparación de los compuestos que se describen en la presente descripción, o proporcionan referencias a artículos que describen la preparación, incluyen, por ejemplo, Fuhrhop y Penzlin, ORGANIC SYNTHESIS: CONCEPTS, METHODS, STARTING MATERIALS, SECOND, REVISED & ENLARGED ED. (John Wiley & Sons ISBN: 3-527-29074-5, 1994); Hoffman, ORGANIC CHEMISTRY, INTERMEDIATE TEXT (Oxford Univ. Press, ISBN 0-19-509618-5, 1996); Larock, COMPREHENSIVE ORGANIC TRANSFORMATIONS: A GUIDE TO FUNCTIONAL GROUP PREPARATIONS (2da Ed., Wiley-VCH, ISBN: 0-471­ 19031-4, 1999); Otera (ed.), MODERN CARBONYL CHEMISTRY (Wiley-VCH, ISBN: 3-527-29871-1, 2000; Patai, PATAI'S 1992 GUIDE TO THE CHEMISTRY OF FUNCTIONAL GROUPS (Interscience ISBN: 0-471-93022-9); Solomons, ORGANIC CHEMISTRY (7ma Ed. John Wiley & Sons, ISBN: 0-471-19095-0, 2000); Stowell, INTERMEDIATE ORGANIC CHEMISTRY (2da Ed.,Wiley-Interscience, ISBN: 0-471-57456-2,1993); INDUSTRIAL ORGANIC CHEM.: STARTING MATS. & INTERMEDIATES: ULLMANN'S ENCYCLO. (John Wiley & Sons, ISBN: 3-527-29645-X, 1999) (en ocho volúmenes); ORGANIC REACTIONS (1942-2000) (John Wiley & Sons) (en más de 55 volúmenes); y CHEM. OF FUNCT. GROUPS (John Wiley & Sons) (en 73 volúmenes).
Los reactivos específicos y análogos también pueden identificarse a través de los índices de sustancias químicas conocidas preparados por el Chemical Abstract Service de la American Chemical Society, que están disponibles en la mayoría de las bibliotecas públicas y universitarias, así como también a través de las bases de datos en línea (puede contactarse con la American Chemical Society, Washington, DC, para obtener más detalles). Los productos químicos que se conocen, pero no están disponibles comercialmente en los catálogos, pueden prepararse por empresas de síntesis química personalizada, donde muchas de las empresas de suministro de productos químicos estándar (por ejemplo, las enumeradas más arriba) proporcionan los servicios de síntesis personalizados. Una referencia para la preparación y la selección de sales farmacéuticas de los compuestos derivados de pirido[3,4-d]pirimidin-4-ona sustituidos que se describen en la presente descripción es Stahl & Wermuth, HANDBOOK OF p Ha RM. (Verlag Helvetica Chimica Acta, Zúrich, 2002).
Los compuestos derivados de pirido[3,4-d]pirimidin-4-ona sustituidos se preparan mediante las rutas de síntesis general que se describen más abajo en el esquema 1.
Figure imgf000048_0001
Al hacer referencia al esquema 1, el compuesto A se convierte en el compuesto B por condensación con urea. El compuesto B de azaquinazolindiona se convierte en el compuesto C mediante el uso de un agente de cloración apropiado, tal como POCl3. El compuesto C se hidroliza selectivamente para formar el compuesto D en una variedad de condiciones básicas, tales como la hidrólisis en una solución de NaOH. La sustitución nucleofílica del cloruro en el compuesto D se lleva a cabo con un alcohol, tal como el G-OH, en una variedad de condiciones básicas para formar el compuesto F. Por ejemplo, el compuesto D puede tratarse con la sal de sodio del alcohol E. Además, el compuesto D puede calentarse con el alcohol o el fenol G-OH en la presencia de CuI y CsCO3 en un disolvente apropiado para formar el compuesto F.
En cada uno de los procedimientos o esquemas de reacción anteriores, los diversos sustituyentes pueden seleccionarse entre los diversos sustituyentes que se enseñan de cualquier otra manera en la presente descripción.
Composiciones farmacéuticas
En ciertas modalidades, un compuesto derivado de pirido[3,4-d]pirimidin-4-ona sustituido como se describe en la fórmula (I)-(XI) se administra como un reactivo químico puro. En otras modalidades, el compuesto derivado de pirido[3,4-d]pirimidin-4-ona sustituido como se describe en la fórmula (I)-(XI) se combina con un portador farmacéuticamente adecuado o aceptable (también denominado en la presente descripción como excipiente farmacéuticamente adecuado (o aceptable), excipiente fisiológicamente adecuado (o aceptable), o portador fisiológicamente adecuado (o aceptable)) que se selecciona sobre la base de una ruta de administración elegida y práctica farmacéutica estándar como se describe, por ejemplo, en REMINGTON: SCIENCE & PRACTICE o F PHARMACY (Gennaro, 21ra Ed. Mack Pub. Co., Easton, PA, 2005), cuya descripción se incorpora en la presente descripción como referencia, en su totalidad.
Por consiguiente, en la presente descripción se proporciona una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto derivado de pirido[3,4-d]pirimidin-4-ona sustituido, o un estereoisómero, sal, hidrato, solvato o N-óxido farmacéuticamente aceptable de este, junto con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables. El portador o los portadores (o excipiente(s)) es(son) aceptable(s) o adecuado(s) si el portador es compatible con los otros ingredientes de la composición y no es perjudicial para el receptor (es decir, el sujeto) de la composición.
Una modalidad proporciona una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de este. Una modalidad proporciona una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la fórmula (II) o una sal farmacéuticamente aceptable de este. Una modalidad proporciona una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la fórmula (III) o una sal farmacéuticamente aceptable de este. Una modalidad proporciona una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la fórmula (IV) o una sal farmacéuticamente aceptable de este. Una modalidad proporciona una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la fórmula (V) o una sal farmacéuticamente aceptable de este. Una modalidad proporciona una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la fórmula (VI) o una sal farmacéuticamente aceptable de este. Una modalidad proporciona una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la fórmula (VII) o una sal farmacéuticamente aceptable de este. Una modalidad proporciona una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la fórmula (VIII) o una sal farmacéuticamente aceptable de este. Una modalidad proporciona una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la fórmula (IX) o una sal farmacéuticamente aceptable de este. Una modalidad proporciona una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la fórmula (X) o una sal farmacéuticamente aceptable de este. Una modalidad proporciona una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la fórmula (XI) o una sal farmacéuticamente aceptable de este.
En determinadas modalidades, el compuesto derivado de pirido[3,4-d]pirimidin-4-ona sustituido como se describe en la fórmula (I)-(XI) es sustancialmente puro, ya que contiene menos de aproximadamente 5 %, o menos de aproximadamente 1 %, o menos de aproximadamente 0,1 %, de otras moléculas orgánicas pequeñas, tales como intermediarios o subproductos contaminantes que se generan, por ejemplo, en una o más de las etapas de un método de síntesis.
Las formas de dosificación oral adecuadas incluyen, por ejemplo, comprimidos, píldoras, sobres o cápsulas de gelatina dura o blanda, metilcelulosa u otro material adecuado fácil de disolver en el tracto digestivo. Pueden usarse portadores sólidos no tóxicos adecuados que incluyen, por ejemplo, grados farmacéuticos de manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina de sodio, talco, celulosa, glucosa, sacarosa, carbonato de magnesio y similares. Véase, por ejemplo, REMINGTON, 2005.
La dosis de la composición que comprende al menos un compuesto derivado de pirido [3,4-d]pirimidin-4-ona sustituido como se describe en la presente descripción, puede ser diferente, en dependencia del estado del paciente (por ejemplo, humano), es decir, la etapa de la enfermedad, el estado general de salud, la edad y otros factores que un experto en la técnica médica usará para determinar la dosis.
Las composiciones farmacéuticas pueden administrarse de una manera apropiada para la enfermedad a tratar (o prevenir) según lo determinen las personas expertas en las técnicas médicas. Una dosis apropiada y una duración y frecuencia de administración adecuadas se determinarán por factores tales como la condición del paciente, el tipo y la gravedad de la enfermedad del paciente, la forma particular del ingrediente activo y el método de administración. En general, una dosis y un régimen de tratamiento apropiados proporcionan la composición o composiciones en una cantidad suficiente para proporcionar un beneficio terapéutico y/o profiláctico (por ejemplo, un resultado clínico mejorado, tales como remisiones parciales o completas más frecuentes, o más tiempo libre de enfermedad y/o supervivencia general, o una disminución de la gravedad de los síntomas. Las dosis óptimas generalmente pueden determinarse mediante el uso de modelos experimentales y/o ensayos clínicos. La dosis óptima puede depender de la masa corporal, el peso o el volumen sanguíneo del paciente.
Las dosis orales generalmente pueden variar de aproximadamente 1,0 mg a aproximadamente 1000 mg, de una a cuatro veces, o más, por día.
Desmetilasa de histonas
La cromatina es el complejo de ADN y proteína que forma los cromosomas. Las histonas son el principal componente proteico de la cromatina, que actúan como carretes alrededor de los cuales se enrolla el ADN. Los cambios en la estructura de la cromatina se ven afectados por las modificaciones covalentes de las proteínas histonas y por las proteínas de unión no histonas. Se conocen varias clases de enzimas que pueden modificar covalentemente las histonas en varios sitios.
Las proteínas pueden modificarse postraduccionalmente por metilación en los grupos amino de lisinas y grupos guanidino de argininas o carboximetilarse en aspartato, glutamato o en el extremo C-terminal de la proteína. La metilación postraduccional de las proteínas está implicada en diversos procesos celulares, tales como el procesamiento del ARN, la señalización mediada por receptores y la diferenciación celular. Se conoce ampliamente que la metilación postraduccional de las proteínas ocurre en las histonas, dichas reacciones son catalizadas por las histonas metiltransferasas, que transfieren grupos metilo de la S-adeniosilmetionina (SAM) a las histonas. Se sabe que la metilación de histonas participa en un intervalo diverso de procesos biológicos que incluyen la formación de la heterocromatina, la inactivación del cromosoma X y la regulación transcripcional (Lachner y otros, (2003) J. Cell Sci.
116: 2117-2124; Margueron y otros, (2005) Curr. Opin. Genet. Dev. 15: 163-176).
A diferencia de la acetilación, que generalmente se correlaciona con la activación transcripcional, el hecho de que la metilación de las histonas conduzca a la activación o a la represión de la transcripción depende del sitio particular de metilación y del grado de metilación (por ejemplo, si un residuo de lisina de la histona en particular es mono-, di- o trimetilado). Sin embargo, en general, la mutilación en H3K9, H3K27 y H4K20 está unida al silenciamiento de genes, mientras que la metilación en H3K4, H3K36 y H3K79 generalmente se asocia con la expresión activa de genes. Además, la tri- y dimetilación de H3K4 generalmente marca los sitios de inicio de la transcripción de genes transcritos activamente, mientras que la monometilación de H3K4 se asocia con las secuencias potenciadoras.
Una "desmetilasa" o " desmetilasa de proteína", como se denomina en la presente descripción, se refiere a una enzima que elimina al menos un grupo metilo de una cadena lateral de aminoácido. Algunas desmetilasas actúan sobre las histonas, por ejemplo, actúan como una desmetilasa de histona H3 o H4. Por ejemplo, una desmetilasa H3 puede desmetilar una o más de H3K4, H3K9, H3K27, H3K36 y/o H3K79. Alternativamente, una desmetilasa H4 puede desmetilar la histona H4K20. Se conocen desmetilasas que pueden desmetilar sustratos mono, di y/o trimetilados. Además, las desmetilasas de histonas pueden actuar sobre un sustrato metilado de histona central, un sustrato mononucleosómico, un sustrato dinucleosómico y/o un sustrato oligonucleosómico, sustrato peptídico y/o cromatina (por ejemplo, en un ensayo basado en células).
La primera desmetilasa de lisina descubierta fue la desmetilasa 1 específica de lisina (LSD1/KDM1), que desmetila H3K4 o H3K9 monometiladas o dimetiladas, mediante el uso de la flavina como cofactor. Se predijo una segunda clase de dominio Jumonji C (JmjC) que contenía desmetilasas de histonas, y se confirmó cuando se encontró una desmetilasa de H3K36 mediante el uso de un ensayo de liberación de formaldehído, que se denominó dominio JmjC que contenía desmetilasa 1 de histona (JHDM1/KDM2A).
Subsecuentemente se identificaron más proteínas que contienen el dominio JmjC y pueden agruparse filogenéticamente en siete subfamilias: JHDM1, JHDM2, JHDM3, JMJD2, JARID, PHF2/PHF8, UTX/UTY y el dominio JmjC solo.
Familia JMJD2
La familia de proteínas JMJD2 es una familia de desmetilasas de histonas que se sabe que desmetilan H3-K9 trimetiladas y dimetiladas y fueron las primeras desmetilasas de histonas trimetiladas identificadas. En particular, se encontró que la expresión ectópica de los miembros de la familia JMJD2 disminuye drásticamente los niveles de H3-K9 trimetilada y dimetilada, mientras que aumenta los niveles de H3-K9 monometilada, que deslocaliza la proteína heterocromatina 1 (HP1) y reduce los niveles generales de heterocromatina in vivo. Los miembros de la subfamilia JMJD2 de proteínas jumonji incluyen JMJD2C y sus homólogos JMJD2A, JMJD2B, JMJD2D y JMJD2E. Las características estructurales comunes que se encuentran en la subfamilia JMJD2 de proteínas Jumonji incluyen las secuencias JmjN, JmjC, PHD y Tdr.
JMJD2C, también conocido como GASC1 y KDM4C, se sabe que desmetila a H3K9 y H3K36 trimetiladas. La desmetilación de histonas por JMJD2C ocurre mediante una reacción de hidroxilación dependiente del hierro y acetoglutarato, en donde la descarboxilación oxidativa del a-cetoglutarato por JMJD2C produce dióxido de carbono, succinato y ferrilo y el ferrilo posteriormente hidroxila un grupo metilo de la lisina de H3K9, lo que libera formaldehído. Se sabe que JMJD2C modula la regulación de la adipogénesis mediante el receptor nuclear PPAR y se sabe que participa en la regulación de la autorrenovación en células madre embrionarias.
Familia JARID
Como se usa en la presente descripción, una "proteína JARID" incluye proteínas de la subfamilia JARID 1 (por ejemplo, proteínas JARID 1A, JARID 1B, JARID 1C y JARID 1D) y la subfamilia JARID2, así como homólogos de los mismos. Puede encontrarse una descripción adicional y listado de las proteínas JARID en Klose y otros, (2006) Nature Reviews/Genetics 7:715-727. La familia JARID1 contiene varios dominios conservados: JmjN, ARID, JmjC, PHD y un dedo de zinc C5HC2.
JARID 1A, también denominada KDM5A o RBP2, se encontró inicialmente como un par de unión de la proteína del retinoblastoma (Rb). Posteriormente, se encontró que JARID1A funciona como una desmetilasa de H3K4 trimetilada y dimetilada, y se ha encontrado que promueve el crecimiento celular, mientras que inhibe la senescencia y la diferenciación. Por ejemplo, la abrogación de JARID1A de las células de ratón inhibe el crecimiento celular, induce la senescencia y la diferenciación y provoca la pérdida de la pluripotencia in vitro de las células madre embrionarias. Se ha descubierto que JARID1A se sobreexpresa en el cáncer gástrico y se ha descubierto que la pérdida de JARID1A reduce la tumorigénesis en un modelo de cáncer de ratón. Además, los estudios han demostrado que la pérdida de la desmetilasa de histonas de la proteína 2 de unión al retinoblastoma (RBP2) suprime la tumorigénesis en ratones que carecen de Rb1 o Men1 (Lin y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 16 de agosto de 2011, 108(33), 13379-86; doi: 10.1073/ pnas. 1110104108) y concluyeron que los fármacos inhibidores de RBP2 tendrían actividad anticancerígena.
JARID1B, también denominado como KDM5B y PLU1, se encontró originalmente en los experimentos para descubrir genes regulados por la tirosina quinasa HER2. Se ha encontrado consistentemente que JARID 1B se expresa en líneas celulares de cáncer de mama, aunque se ha encontrado restricción de JARID 1B en los tejidos adultos normales, con la excepción de los testículos. Además, se ha encontrado que el 90 % de los carcinomas ductales invasivos expresan JARID1B. Además, se ha encontrado que JARID1B está regulado positivamente en los cánceres de próstata, mientras que tiene una expresión más limitada en la próstata benigna y también se ha encontrado que está regulado positivamente en el cáncer de vejiga y el cáncer de pulmón (tanto SCLC como NSCLC). También se ha encontrado que JARID1B reprime los genes supresores de tumores tales como BRCA1, CAVI y 14-3-3o, y se encontró que la atenuación de JARID1B aumenta los niveles de H3K4 trimetilada en estos genes.
Otras modalidades y usos serán evidentes para los expertos en la técnica a la luz de las presentes descripciones. Los siguientes ejemplos se proporcionan meramente como ilustrativos de diversas modalidades y no deben interpretarse como una limitación de la invención de ninguna manera.
Ejemplos
I. Síntesis química
A menos que se observe de cualquier otra manera, los reactivos y los solventes se usaron tal como se recibieron de los suministradores comerciales. Los solventes anhidros y la cristalería secada al horno se usaron para las transformaciones de síntesis sensibles a la humedad y/o al oxígeno. Los rendimientos no se optimizaron. Los tiempos de reacción son aproximados y no se optimizaron. La cromatografía en columna y la cromatografía en capa fina (TLC) se realizaron sobre gel de sílice a menos que se observe de cualquier otra manera. Los espectros se dan en ppm (5) y las constantes de acoplamiento J se informan en hercios. Para los espectros de protones se usó el pico del solvente como el pico de referencia. Los Ejemplos 1-118 son ejemplos de referencia.
Preparación I: 2-cloropirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000051_0001
A una solución de 3-aminopiridin-4-carboxamida (5 g, 36,5 mmol) en THF (100 ml) se le añadió trifosgeno (11,9 g, 40,1 mmol) y TEA (7,4 g, 73 mmol). La mezcla de reacción se sometió a reflujo durante 2 h. La solución se concentró al vacío y el residuo se trituró en agua. El sólido se filtró y se lavó con agua y THF. El sólido se secó para proporcionar 4,1 g (70 %) del compuesto del título. 1H NMR (400 MHz, DMSO-da): 5 11,62 (s, 1H), 11,58 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 8,40 (d, 1H, J = 5,2 Hz), 7,80 (d, 1H, J = 5,2 Hz).
Etapa B: 2,4-dicloropirido[3,4-d]pirimidina
Figure imgf000051_0002
A una mezcla de pirido[3,4-d]piridin-2,4(1H,3H)-diona (2 g, 12,3 mmol) en tolueno (50 ml) se le añadió DIEA (3,15 g, 25 mmol) y POCh (9,5 g, 61,4 milimoles). La mezcla de reacción se sometió a reflujo durante toda la noche. La solución se concentró al vacío y el residuo se recogió en acetato de etilo y se lavó con solución acuosa NaHCO3 y salmuera. Los orgánicos se secaron y concentraron. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (25 % EA:PE) para proporcionar 1 g (41 %) del compuesto del título. 1H NMR (400 MHz, DMSO-da): 59,50 (s, 1H), 8,90 (d, 1H, J = 5,2 Hz), 8,02 (d, 1H, J = 5,2 Hz).
Etapa C: 2-cloropirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000052_0001
A una solución de 2,4-didoropirido[3,4-d]pirimidina (1 g, 5 mmol) en THF (20 ml) se le añadió una solución de NaOH (0,5 g, 12,5 mmol) en agua (20 ml). La mezcla de reacción se agitó a r.t. durante 2 h. La solución se ajustó a pH=2 mediante el uso de HCl 5 N y el precipitado resultante se filtró y se lavó con agua y THF y se secó para proporcionar 0,8 g (88 %) del compuesto del título. 1H NMR (400 MHz, DIVISOR): 5 13,61 (s, 1H), 8,99 (s, 1H), 8,69 (d, 1H, J = 5,2 Hz), 7,94 (d, 1H, J = 5,2 Hz).
Preparación 1A: (4-metoxi-fenil)-piridin-2-il-amina
Figure imgf000052_0002
Una mezcla de 2-bromo-piridina (2,00 g, 12,7 mmol), 4-metoxi-fenilamina (1,56 g, 12,7 mmol), Pd(OAc)2 (290 mg, 1,27 mmol), BINAP (791 mg, 1,27 mmol) y t-BuOK (2,84 g, 25,3 mmol) en tolueno (30 ml) se agitó en atmósfera de nitrógeno durante 4 h a 125 °C. La mezcla de reacción se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA = 15:1) para dar 1,78 g (70 %) del compuesto del título. 1H NMR (400 MHz, CDCla): 53,81 (s, 3H), 6,47 (s, 1H), 6,67-6,68 (m, 2H), 6,88-6,92 (m, 2H), 7,21-7,26 (m, 2H), 7,41-7,45 (m, 1H), 8,14 (d, J = 4,0 Hz, 1 H). [M+H] Calculado para C19H15N5O2, 201 ; Encontrado, 201.
Preparación 1B: (4-metoxi-fenil)-metil-piridin-2-il-amina
Figure imgf000052_0003
A una solución de (4-metoxi-fenil)-piridin-2-il-amina (1,78 g, 8,9 mmol) en DMF (20 ml) se añadió t -BuOK (2,0 g, 17,8 mmol) a 0 °C. Después de agitar durante 30 min, se añadió gota a gota Mel (2,53 g, 17,8 mmol) durante 10 min y la mezcla de reacción se agitó a rt durante toda la noche. La mezcla de reacción se diluyó con agua (100 ml), se extrajo con DCM (30 ml*3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (150 ml*3), salmuera (150 ml), se secó sobre Na2sO 4 y se concentró para dar 1,47 g (77 %) del producto del título. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 53,42 (s, 3H), 3,83 (s, 3H), 6,37 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,54-6,57 (m, 1H), 6,93-6,95 (m, 2H), 7,16-7,19 (m, 2H), 7,26-7,28 (m, 1H), 8,19-8,21 (m, 1H). [M+H] Calculado para C13H14N2O, 215; Encontrado, 215.
Preparación 1C: 4-(metil-piridin-2-il-amino)-fenol
Figure imgf000052_0004
A una solución de (4-metoxi-fenil)-metil-piridin-2-il-amina (600 mg, 2,8 mmol) en DCM (12 ml) se le añadió gota a gota BBr3 (28 ml, 28 mmol, 1 M en DCM) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 30 min y se inactivó cuidadosamente con MeOH a 0 °C. Los volátiles se concentraron al vacío. El residuo se disolvió en DCM (20 ml), se lavó con una solución saturada de NaHCO3 (50 ml) y salmuera (50 ml), se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar 450 mg (80 %) del producto del título. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 53,41 (s, 3H), 6,41 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,56­ 6,59 (m, 1H), 6,85-6,87 (m, 2H), 7,08-7,11 (m, 2H), 7,29-7,33 (m, 1H), 8,17-8,19 (m, 1H). [M+H] Calculado para C12H12N2O, 200; Encontrado, 201.
Ejemplo 1: 2-[4-(metil-piridin-2-il-amino)-fenoxi]-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000053_0001
Una mezcla de 2-doro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol (408 mg, 2,25 mmol), 4-(metil-piridin-2-il-amino)-fenol (450 mg, 2,25 mmol), CS2CO3 (734 mg, 2,25 mmol) y CuI (428 mg, 2,25 mmol) en DMF (5 ml) se agitó a 130 °C en atmósfera de nitrógeno durante toda la noche. La mezcla de reacción se concentró. El residuo se purificó por HPLC para obtener 156 mg (20 %) del compuesto del título. 1H NMR (400 MHz, DMSO-da): 53,43 (s, 3H), 6,63 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,70­ 6,73 (m, 2H), 7,38-7,40 (m, 4H), 7,48-7,52 (m, 1H), 8,02-8,11 (m, 1H), 8,17 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,62-8,7 (m, 1H), 13,14 (s, 1 h ). [M+H] Calculado para C19H15N5O2, 346; Encontrado, 346.
Preparación 2A: 5-benciloxi-1-metil-1H-indol
Figure imgf000053_0002
A una solución de 5-benciloxi-1H-indol (2,23 g, 10 mmol) en DMF (20 ml) a 0 °C se le añadió NaH (480 mg, en aceite mineral, 60 %, 12 mmol) en porciones y la mezcla se agitó durante 30 min. Luego se añadió Mel y la mezcla se agitó a rt durante toda la noche. La mezcla de reacción se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con DCM (30 ml*3). Los orgánicos se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA = 50:1) para dar 1,97 g (83 %) del producto del título. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 53,77 (s, 3H), 5,11 (s, 2H), 6,39 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,97 (dd, J = 2,4, 8,8 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,17 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,22 (J = 10,8 Hz, 1H), 7,31 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,39 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 7,48 (d, J = 7,2 Hz, 2H). [M+H] Calculado para C16H15N0 , 238; Encontrado, 238.
Preparación 2B: 1-metil-1H-indol-5-ol
Figure imgf000053_0003
Una mezcla de 5-benciloxi-1-metil-1H-indol (1,97 g, 8,31 mmol) y Pd/C (0,5 g, 10 % húmedo) en EtOH se agitó durante toda la noche en atmósfera de H2. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de Celite. El filtrado se concentró para dar 1,2 g (98 %) del producto del título. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 53,75 (s, 3H), 6,35 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,80 (dd, J = 2,4, 8,8 Hz, 1H), 7,01-7,03 (m, 2H), 7,17 (d, J = 8,8 Hz, 1H). [M+H] Calculado para C9H9NO, 148; Encontrado, 148.
Ejemplo 2: 2-(1-metil-1H-indol-5-iloxi)-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000053_0004
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 2,5 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y 1-metil-1H-indol-5-ol de acuerdo con la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-CÍ6): 53,83 (s, 3H), 6,45 (d, J = 2,8 Hz,1H), 7,07 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,40-7,43 (m, 2H), 7,48 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 7,84 (d, J= 4,8 Hz, 1H), 8,44 (d, J= 4,4 Hz, 1H), 8,59 (s, 1H). [M+H] Calculado para C16H12N4O2, 293; Encontrado, 293.
P rep a ra c ió n 3A: 5 -b e n c ilo x i-1 -fe n e til-1 H -in d o l
Figure imgf000054_0001
Una mezcla de 5-bendloxMH-indol (3,0 g, 13,5 mmol), (2-bromo-etil)-benceno (3,0 g, 16,1 mmol) y KOH (2,7 g, 40,4 mmol) en DMSO (25 ml) se agitó a 100 °C durante toda la noche. La mezcla de reacción se diluyó con agua (50 ml) y se extrajo con EA (20 ml*3). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua (30 ml*3), se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA 50:1) para dar 1,9 g (43 %) del producto del título. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 53,08 (t, J= 7,2 Hz, 2H), 4,29 (t, J= 7,2 Hz, 2H), 5,10 (s, 2H), 6,33 (d, J= 2,8 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,94 (dd, J = 2,8, 8,8 Hz, 1H), 7,07 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 7,16 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,21-7,26 (m, 4H), 7,31 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,38 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 7,47 (d, J = 7,6 Hz, 2H). [M+H] Calculado para C23H21NO, 328; Encontrado, 328.
Preparación 3B: 1-fenetil-1H-indol-5-ol
Figure imgf000054_0002
Una mezcla de 5-benciloxi-1-fenetil-1H-indol (1,9 g, 5,8 mmol) y Pd/C (0,5 g, 10 % húmedo) en EtOH se agitó en atmósfera de H2 durante toda la noche. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de Celite. El filtrado se concentró para dar 1,2 g (87 %) del producto del título. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 53,08 (t, J= 7,2 Hz, 2H), 4,29 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 6,29 (d, J= 2,8 Hz, 1H), 6,79 (dd, J= 2,4, 8,8 Hz, 1H), 6,88 (d, J= 2,8 Hz, 1H), 7,02 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 7,06-7,08 (m, 2H), 7,16-7,29 (m, 5H). [M+H] Calculado para C16H15NO, 238; Encontrado, 238.
Ejemplo 3: 2-(1-fenetil-1H-indol-5-iloxi)-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000054_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 6 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d] pirimidin-4-ol y 1-fenetil-1H-indol-5-ol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de): 53,10 (t, J= 7,0 Hz, 2H), 4,44 (t, J= 7,0 Hz, 2H), 6,43 (s, 1H), 7,06 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,21-7,26 (m, 5H), 7,39 (s, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,56 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,87 (t, J= 2,0 Hz, 1H), 8,48 (d, J= 4,8 Hz, 1H), 8,63 (s, 1H). [M+H] Calculado para C23H18N4O2, 383; Encontrado, 383.
P rep a ra c ió n 4A: 1 -b e n c il-5 -m e to x i-1 H -in d o l
Figure imgf000055_0001
A una solución de 5-metoxi-1H-indol (1,50 g, 10 mmol) en DMF (20 ml) a 0 °C se le añadió NaH (480 mg, en aceite mineral, 60 %, 12 mmol) en porciones, y la mezcla se agitó durante 30 min. Luego se añadió BnBr (2,09 g, 12 mmol) y la mezcla se agitó a RT durante toda la noche. La mezcla de reacción se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con DCM (30 ml*3). Los orgánicos se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA 20:1) para dar 2,40 g (99 %) del producto del título. [M+H] Calculado para Ci 6Hi 5NO, 238; Encontrado, 238.
Ejemplo 4B: 1-bencil-1H-indol-5-ol
Figure imgf000055_0002
A una solución de 1-bencil-5-metoxi-1H-indol (2,40 g, 10 mmol) en DCM (20 ml) se le añadió BBr3 (40 ml, 1,0 M en DCM, 40 mmol) en porciones a 0 °C y la mezcla se agitó a RT durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua (30 ml), se basificó hasta pH 5 con una solución saturada de Na2CO3, y se extrajo con DCM (30 ml*3). Los orgánicos se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA 10:1) para dar 1,20 g (53 %) del producto del título. [M+H] Calculado para C15H13NO, 224; Encontrado, 224. Ejemplo 4: 2-(1-bencil-1H-indol-5-iloxi)-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000055_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 19 % a partir de 2-cloro-pirido [3,4-d]pirimidin-4-ol y 1-bencil-1H-indol-5-ol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H Nm R (300 MHz, DMSO-de): 55,45 (s, 2H), 6,53 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 7,04-7,08 (m, 1H), 7,24-7,36 (m, 5H), 7,49-7,55 (m, 2H), 7,63 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 7,85-7,89 (m, 1H), 8,15 (brs, 2H), 13,04 (s, 1H). [M+H] Calculado para C22H16N4O2, 369; Encontrado, 369. Preparación 5A: 4-(metil-fenil-amino)-fenol
Figure imgf000055_0004
A una suspensión de 4-bromo-fenol (2,00 g, 12 mmol), metil-fenil-amina (1,48 g, 14 mmol), Pd2(dba)3 (267 mg, 0,29 mmol) y 2-diciclohexifosfino-bifenilo (121 mg, 0,35 mmol) en tolueno (40 ml) se añadieron LiHMDS (25 ml, 1,0 M en THF, 25 mmol) en porciones en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó a 65 °C durante toda la noche, se acidificó a pH 6 con HCl I N, se lavó con salmuera (50 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante una columna de gel de sílice (PE:EA 10:1) para dar 2 g (87 %) del producto del título.
[M+H] Calculado para C13H13NO, 200; Encontrado, 200.
Ejemplo 5: 2-[4-(metil-fenil-amino)-fenoxi]-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000056_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 18 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y 4-(metil-fenil-amino)-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de): 53,30 (s, 3H), 6,97-7,08 (m, 5H), 7,23-7,25 (m, 2H), 7,30-7,34 (m, 2H), 7,90-7,92 (m, 1H), 8,51-8,78 (m, 2 H), 13,06 (s, 1 H). [M+H] Calculado para C20H16N4O2, 345; Encontrado, 345.
Preparación 6 A: 4-(bencil-metil-amino)-fenol
Figure imgf000056_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 41 % a partir de 4-bromo-fenol y bencil-metil-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 5A. [M+H] Calculado para C14H15NO, 214; Encontrado, 214.
Ejemplo 6 : 2-[4-(bencil-metil-amino)-fenoxi]-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000056_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 5 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y 4-(bencil-metil-amino)-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (300 MHz, DMSO-de): 53,04 (s, 3H), 4,56 (s, 2H), 6,75-6,77 (m, 2H), 7,09-7,12 (m, 2H), 7,20-7,36 (m, 5H), 7,91-7,95 (m, 1H), 8,47-8,96 (m, 2H), 12,98 (s, 1H). [M+H] Calculado para C21H18N4O2, 359; Encontrado, 359.
Preparación 7A: 3-(metil-fenil-amino)-fenol
Figure imgf000057_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 78 % a partir de 3-bromo-fenol y metil-fenil-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 5A. [M+H] Calculado para C13H13NO, 200; Encontrado, 200.
Ejemplo 7: 2-[3-(metil-fenil-amino)-fenoxi]-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000057_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 26 % a partir de 2-cloro-pirido [3,4-d]pirimidin-4-ol y 3-(metil-fenil-amino)-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de): 53,31 (s, 3H), 6,79-6,86 (m, 3H), 7,05 (t, J= 7,2 Hz, 1H), 7,17-7,19 (m, 2H), 7,32-7,36 (m, 3H), 7,88-7,95 (m, 1H), 8,45-8,73 (m, 2H), 13,03 (s, 1H). [M+H] Calculado para C20H16N4O2, 345; Encontrado, 345.
Ejemplo 8 : 2-(1-bencil-1H-indol-6-iloxi)-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000057_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 16 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y 1-bencil-1H-indol-6-ol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de): 55,41 (s, 2H), 6,55 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,98-7,01 (m, 1H), 7,23-7,32 (m, 5H), 7,50-7,52 (m, 1H), 7,57-7,62 (m, 2H), 7,87-7,94 (m, 1H), 8,52-8,63 (m, 2H), 13,07 (s, 1H). [M+H] Calculado para C22H16N4O2, 369; Encontrado, 369.
P re p a ra c ió n 9A: 3 -(b e n c il-m e til-a m in o )-fe n o l
Figure imgf000058_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 24 % a partir de 3-bromo-fenol y bencil-metil-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 5A. [M+H] Calculado para C14H15NO, 214; Encontrado, 214.
Ejemplo 9: 2-[3-(bencil-metil-amino)-fenoxi]-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000058_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 19 % a partir de 2-cloro-pirido [3,4-d]pirimidin-4-ol y 3-(bencil-metil-amino)-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de): 53,03 (s, 3H), 4,59 (s, 2H), 6,55-6,57 (m, 1H), 6,64-6,69 (m, 2H), 7,23-7,32 (m, 7H), 7,92-8,20 (br, 2H), 13,02 (s, 1H). [M+H] Calculado para C21H18N4O2, 359; Encontrado, 359.
Preparación 10A: 3-fluoro-4-(metil-fenil-amino)-fenol
Figure imgf000058_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 18 % a partir de 4-bromo-3-fluoro-fenol y metil-fenil-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 5A. [M+H] Calculado para C13H12FNO, 218; Encontrado, 218. Ejemplo 10: 2-[3-fluoro-4-(metil-fenil-amino)-fenoxi]-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000058_0004
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 4 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d] pirimidin-4-ol y 3-fluoro-4-(metil-fenil-amino)-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 5. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de): 5 3,32 (s, 3H), 6,68-6,77 (m, 5H), 7,17-7,20 (m, 4H), 7,34-7,42 (m, 2H). [M+H] Calculado para C20H15FN4O2, 363 ; Encontrado, 363.
Preparación 11A: 1-bencil-6-metoxi-1H-indazol
Figure imgf000059_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 62 % a partir de 6-metoxi-1H-indazol y bromometilbenceno de acuerdo con el procedimiento de la preparación 4A. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 53,85 (s, 3H), 5,53 (s, 2H), 6,76-6,78 (m, 1H), 6,98 (s, 1H), 7,26-7,37 (m, 5H), 7,47-7,49 (m, 1H), 7,78 (s, 1H). [M+H] Calculado para C15H14N2O, 239; Encontrado, 239.
Preparación 11B: 1-bencil-1H-indazol-6-ol
Figure imgf000059_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 69 % a partir de 1-bencil-6-metoxi-1H-indazol de acuerdo con el procedimiento de la preparación 4B. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de): 55,51 (s, 2H), 6,65-6,68 (m, 1H), 6,79 (s, 1H), 7,15-7,32 (m, 5H), 7,54 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,91 (s, 1H), 9,63 (s, 1H). [M+H] Calculado para C14H12N2O, 225; Encontrado, 225.
Ejemplo 11: 2-(1-bencil-1H-indazol-6-iloxi)-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000059_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 16 % a partir de 2-cloro-pirido [3,4-d]pirimidin-4-ol y 1-bencil-1H-indazol-6-ol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (300 MHz, DMSO-de): 5 5,64 (s, 2H), 7,13-7,16 (m, 1H), 7,25-7,33 (m, 5H), 7,79-7,91 (m, 3H), 8,17 (m, 1H), 8,44-8,78 (m, 2H), 13,20 (s, 1H). [M+H] Calculado para C21H15N5O2, 370; Encontrado, 370.
P re p a ra c ió n 12A: 2 -b e n c il-6 -m e to x i-1 H -in d a zo l
Figure imgf000060_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 31 % a partir de 6-metoxi-IH-indazol y bromometilbenceno de acuerdo con el procedimiento de la preparación 4A. [M+H] Calculado para C15H14N2O, 239; Encontrado, 239.
Preparación 12B: 2-bencil-1H-indazol-6-ol
Figure imgf000060_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 74 % a partir de 2-bencil-6-metoxi-1H-indazol de acuerdo con el procedimiento de la preparación 4B. [M+H] Calculado para C14H12N2O, 225; Encontrado, 225.
Ejemplo 12: 2-(2-bencil-2H-indazol-6-iloxi)-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000060_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 1 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y 2-bencil-1H-indazol-6-ol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (300 MHz, d Ms O-cÍ6): 5 5,66 (s, 2H), 7,01-7,05 (m, 1H), 7,29-7,37 (m, 5H), 7,52 (s, 1H), 7,79-7,88 (m, 2H), 8,49-8,65 (m, 3H), 13,11 (s, 1H).
[M+H] Calculado para C21H15N5O2, 370; Encontrado, 370.
Preparación 13A: 4-[metil(2-feniletil)amino]fenol
Figure imgf000060_0004
A una solución de 4-bromofenol (2,0 g, 11,56 mmol) y metil(2-feniletil)amina (1,88 g, 13,9 mmol) en tolueno (20 ml) se añadió Pd 2 (dba) 3 (110 mg, 0,12 mmol) y diciclohexil(2-fenilfenil)fosfina (98 mg, 0,28 mmol), luego se añadió LiHMDS (25,4 ml, 25,4 mmol) bajo nitrógeno. La mezcla se agitó durante toda la noche a 65 °C bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se filtró y se concentró. El residuo se purificó por HPLC preparativa para dar 1,52 g (58 %) del producto del título. [M+H] Calculado para C15H17NO, 228; Encontrado, 228.
Ejemplo 13: 2-{4-[metil(2-feniletil)amino]fenoxi}piridino[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000061_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 17 % a partir de 2-doro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y 4-[metil(2-feniletil)amino]fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de): 52,82 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,90 (s, 3H), 3,56 (t, J= 7,8 Hz, 2H), 6,76 (d, J= 9,2 Hz, 2H), 7,13 (d, J= 8,8 Hz, 2H), 7,20-7,23 (m, 1H), 7,28-7,31 (m, 4H), 7,86 (d, J= 4,8 Hz, 1H), 8,49 (d, J= 4,8 Hz, 1H), 8,68 (s, 1H). [M+H] Calculado para C22H20N4O2, 373; Encontrado, 373.
Preparación 14A y 15A: 5-metoxi-2-bencil-2H-indazol y 5-metoxi-1-bencil-1H-indazol
Figure imgf000061_0002
A una solución de 5-metoxi-1H-indazol (1,0 g, 6,76 mmol) en DMF (10 ml) se le añadió Cs2CO3 (2,2 g, 6,76 mmol) y BnBr (1,38 g, 8,1 mmol). La mezcla se agitó a RT durante 3 h, se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con EA. Los orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El residuo se purificó por HPLC preparativa para dar 576 mg del producto 14A (54 %) y 863 mg del producto 15A (36 %). 14A: 1H NMR (400 MHz, CDCl3): 53,81 (s, 3H), 5,56 (s, 2H), 6,84 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 6,99 (dd, J= 2,0, 7,2 Hz, 1H), 7,25-7,28 (m, 2H), 7,31­ 7,37 (m, 3H), 7,61 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,75 (s, 1H). 15A: 1H NMR (400 MHz, CDCh): 53,84 (s, 3H), 5,57 (s, 2H), 7,00 (dd, J= 2,8, 6,4 Hz, 1H), 7,08 (d, J= 2,0 Hz, 1H), 7,17-7,19 (m, 1H), 7,21-7,29 (m, 5H), 7,94 (s, 1H).
Preparación 14B: 2-bencil-2H-indazol-5-ol
Figure imgf000061_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 47 % a partir de 5-metoxi-2-bencil-2H-indazol de acuerdo con el procedimiento de la preparación 1C. [M+H] Calculado para C14H12N2O, 225; Encontrado 225.
Ejemplo 14: 2-[2-bencil-2H-indazol-5-iloxi]piridino[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000061_0004
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 16 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y 2-benil-2H-indazol-5-ol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de): 55,66 (s, 2H), 7,19 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 7,32-7,37 (m, 5H), 7,59 (d, J= 1,6 Hz, 1H), 7,66 (d, J= 9,6 Hz, 1H), 7,84 (d, J= 4,8 Hz, 1H), 8,45 (d, J= 4,8 Hz, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,62 (s, 1H). [M+H] Calculado para C21H15N5O2, 370; Encontrado, 370.
P re p a ra c ió n 15B: 1 -b e n c il-1 H -in d a zo l-5 -o l
Figure imgf000062_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 75 % a partir de 5-metoxM-benciMH-indazol de acuerdo con el procedimiento de la preparación 1C. [M+H] Calculado para C14H12N2O, 225; Encontrado, 225.
Ejemplo 15: 2-(1-bencil-1H-indazol-5-iloxi)-piridino[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000062_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 16 % a partir de 2-cloro-pirido [3,4-d]pirimidin-4-ol y 1-bencil-1H-indazol-5-ol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (300 MHz, DMSO-de): 5 5,71 (s, 2H), 7,22-7,41 (m, 9H), 7,78-7,83 (m, 2H), 7,16 (s, 1H), 13,12 (s, 1H). [M+H] Calculado para C21H15N5O2, 370; Encontrado, 370.
Preparación 16A: 4-[(4-metoxi-fenil)-metil-amino]-fenol
Figure imgf000062_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 34 % a partir de 4-bromo-fenol y bencil-metil-amina de acuerdo con la preparación 5A. [M+H] Calculado para C14H15NO2, 230; Encontrado, 230.
Ejemplo 16: 2-{4-[(4-metoxi-fenil)-metil-amino]-fenoxi}-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000062_0004
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 15 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y 1-bencil-1H-indazol-5-ol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de): 53,26 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 6,76 (d, J= 9,2 Hz, 2H), 6,97 (d, J= 9,2 Hz, 2H), 7,12-7,16 (m, 4H), 7,89 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 13,02 (s, 1H). [M+H] Calculado para C21H18N4O3, 375; Encontrado, 375.
Preparación 17A: 4-[(3-metoxi-fenil)-metil-amino]-fenol
Figure imgf000062_0005
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 34 % a partir de 4-bromo-fenol y bencil-metil-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 5A. [M+H] Calculado para C14H15NO2, 230; Encontrado, 230.
Ejemplo 17: 2-{4-[(3-metoxi-fenil)-metil-amino]-fenoxi}-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000063_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 5 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d] pirimidin-4-ol y 1-bendMH-indazol-5-ol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de): 53,29 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 6,54-6,61 (m, 3H), 7,08-7,27 (m, 5H), 7,89 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 13,08 (s, 1h). [M+H] Calculado para C21H18N4O3, 375; Encontrado, 375.
Preparación 18A: metil-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina
Figure imgf000063_0002
Una solución de 4-morfolin-4-il-fenilamina (4 g, 22,5 mmol) en HCOOH (40 ml) se calentó a 110 °C durante toda la noche. La solución se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con DCM (30 ml x 3). Los orgánicos se lavaron con H2O y salmuera, se secaron sobre Na2SO4, y se concentraron al vacío. Al residuo en THF (100 ml) a 0 °C se le añadió una solución de LiAlH42M (33 ml) y la mezcla se agitó a RT durante 2 h. Se añadió H2O (3 ml) a 0 °C, seguido de solución de NaOH al 10 % (6 ml). La mezcla se filtró y el filtrado se extrajo con DCM (50 ml x 2). Los extractos se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA 2:1) para dar 4 g (93 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C11H16N2O, 193; Encontrado, 193.
Preparación 18B: 4-[metil-(4-morfolin-4-il-fenil)-amino]-fenol
Figure imgf000063_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 34 % a partir de 4-bromo-fenol y metil-(4-morfolin-4-flfenil)-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 5A. [M+H] Calculado para C17H20N2O2, 285; Encontrado, 285.
Ejemplo 18: 2-{4-[metil-(4-morfolin-4-il-fenil)-amino]-fenoxi}-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000063_0004
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 2 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d] pirimidin-4-ol y 4-[metil-(4-morfolin-4-il-fenil)-amino]-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (300 MHz, DMSO-da): 53,05-3,10 (m, 4H), 3,19 (s, 3H), 3,73-3,78 (m, 4H), 6,75 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 6,97 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 7,06 -7 ,12 (m, 4H), 7,86 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,49-8,53 (m, 1H), 8,69 (s, 1H), 13,03 (s, 1H). [M+H] Calculado para C24H55N5O3, 430; Encontrado, 430.
Preparación 19A: metil-(3-morfolin-4-il-fenil)-amina
Figure imgf000064_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 90 % a partir de 3-morfolin-4-il-fenilamina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 18. [M+H] Calculado para C11H16N2O, 193; Encontrado, 193.
Preparación 19B: 4-[metil-(3-morfolin-4-il-fenil)-amino]-fenol
Figure imgf000064_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 45 % a partir de 4-bromo-fenol y metil-(3-morfolin-4-ilfenil)-amina de acuerdo con el procedimiento de preparación de 5A. [M+H] Calculado para C17H20N2O2, 285; Encontrado, 285.
Ejemplo 19: 2-{4-[metil-(3-morfolin-4-il-fenil)-amino]-fenoxi}-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000064_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 3 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d] pirimidin-4-ol y 4-[metil-(3-morfolin-4-il-fenil)-amino]-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (300 MHz, DMSO-da): 5 3,06-3,09 (m, 4H), 3,29 (s, 3H), 3,71-3,73 (m, 4H), 6,53-6,55 (m, 1H), 6,62-6,64 (m, 2H), 6,97-6,99 (m, 2H), 7,16-7,21 (m, 3H), 7,87 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,51 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,69 (s, 1H), 13,03 (s, 1H).
[M+H] Calculado para C24H55N5O3, 43o; Encontrado, 430.
Preparación 20: 4-(metil-p-tolil-amino)-fenol
Figure imgf000065_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 53 % a partir de 4-bromo-fenol y metil-p-tolil-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 5A. [M+H] Calculado para C14H15NO, 214; Encontrado, 214.
Ejemplo 20: 2-[4-(metil-p-tolil-amino)-fenoxi]-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000065_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 18 % a partir de 2-cloro-pirido [3,4-d]pirimidin-4-ol y 4-(metil-p-tolil-amino)-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-da): 52,33 (s, 3H), 3,26 (s, 3H), 6,90 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,99 (d, J = 9,6 Hz, 2H), 7,15-7,22 (m, 4H), 7,86 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,69 (s, 1H), 13,07 (s, 1H). [M+H] Calculado para C21H18N4O2, 359; Encontrado, 359.
Preparación 21: 4-(metil-m-tolil-amino)-fenol
Figure imgf000065_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 53 % a partir de 4-bromo-fenol y metil-m-tolil-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 5A. [M+H] Calculado para C14H15NO, 214; Encontrado, 214.
Ejemplo 21: 2-[4-(metil-m-tolil-amino)-fenoxi]-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000066_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 15 % a partir de 2-doro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y 4-(metil- m -tolil-amino)-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DIVISOR): 52,28 (s, 3H), 3,29 (s, 3H), 6,82-6,88 (m, 3H), 7,01 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,19-7,23 (m, 3H), 7,87 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,51 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,71 (s, 1H). [M+H] Calculado para C21H18N4O2, 359; Encontrado, 359.
Preparación 22A: (3-cloro-fenil)-(4-metoxi-fenil)-metil-amina
Figure imgf000066_0002
A una solución de (3-cloro-fenil)-metil-amina (10 g, 71 mmol) en tolueno se le añadió 1-bromo-4-metoxi-benceno (14,0 g, 74,5 mmol), bifenil-2-il-diciclohexil-fosfano (270 mg, 0,71 mmol), Pd 2 (dba) 3 (650 mg, 0,71 mmol), t -BuOK (12,0 g, 106,5 mmol) y la mezcla se sometió a reflujo durante toda la noche en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se enfrió hasta RT y el solvente se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA 50:1) para dar 15 g (86 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C14H14CINO, 248; Encontrado, 248.
Preparación 22B: (4-metoxi-fenil)-metil-[3-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina
Figure imgf000066_0003
A una solución de ((3-cloro-fenil)-(4-metoxi-fenil)-metil-amina (2,0 g, 8,1 mmol) en tolueno se añadió 1-metilpiperazina (0,97 g, 9,7 mmol), bifenil-2 -il-diciclohexil-fosfano (155 mg, 0,4 mmol), Pd2(dba)3 (450 mg, 0,48 mmol), t-BuOK (2,5 g, 22,3 mmol) y la mezcla se sometió a reflujo durante toda la noche en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se enfrió hasta RT y el solvente se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (DCM:MeOH, 20:1) para dar 1,1 g (48 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C19H25N3O, 312; Encontrado, 312.
P re p a ra c ió n 22C : 4 -{m e til-[3 -(4 -m e til-p ip e ra z in -1 - il) - fe n il]-a m in o }-fe n o l
Figure imgf000067_0001
A una solución de (4-metoxi-fenil)-metil-[3-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina (1,0 g, 3,2 mmol) en DCM (10 ml) se le añadió BBr3 (20 ml, 1 M) a -20 °C y la mezcla se agitó a RT durante 1 h. Luego, la mezcla se calentó hasta 0 °C, se inactivó con MeOH y el PH de la solución se neutralizó con NaHCO3 acuoso. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM:MeOH, 10:1) para dar 370 mg (39 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C18H23N3O, 298; Encontrado, 298.
Ejemplo 22: 2-(4-{metil-[3-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amino}-fenoxi)-pirido [3,4-d] pirimidin-4-ol
Figure imgf000067_0002
Una mezcla de 2-cloro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol (200 mg, 1,1 mmol), 4-{metil-[3-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amino}-fenol (370 mg, 1,24 mmol), Cs2CO3 (400 mg, 1,22 mmol) y CuI (230 mg, 1,22 mmol) en DMF (10 ml) se agitó durante toda la noche a 130 °C en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se concentró y el residuo se purificó mediante HPLC preparativa para dar 30 mg (6 %) del producto del título. 1H NMR (400 MHz, DMSO-CÍ6): 5 2,24 (s, 3H), 2,47-2,49 (m, 4H), 3,10-3,12 (m, 4H), 3,26 (s, 3H), 6,49 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 6,96-7,17 (m, 5H), 7,84 (d, J = 6 ,8 Hz, 1H), 8,46 (d, J = 6 ,8 Hz, 1H), 8,67 (s, 1H). [M+H] Calculado para C25H26N6O2, 443; Encontrado, 443.
Preparación 23A: éster terc-butílico del ácido (1-{3-[(4-metoxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-piperidin-4-il)-carbámico
Figure imgf000067_0003
A una solución de ((3-cloro-fenil)-(4-metoxi-fenil)-metil-amina (3,0 g, 12,1 mmol) en tolueno se añadió éster tercbutílico del ácido piperidin-4-il-carbámico (3,65 g, 18,2 mmol), S-Phos (250 mg, 0,61 mmol), Pd2(dba)3 (670 mg, 0,73 mmol), t-BuOK (2,74 g, 24,5 mmol) y la mezcla se agitó durante toda la noche a 95 °C bajo atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se enfrió hasta RT y el solvente se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (DCM:MeOH, 10:1) para dar 0,65 g (27 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C24H33N3O3, 412; Encontrado, 412.
P re p a ra c ió n 23B : 4 -{ [3 -(4 -a m in o -p ip e rid in -1 - il) - fe n il]-m e til-a m in o }-fe n o l
Figure imgf000068_0001
A una solución de éster terc-butílico del ácido (1-{3-[(4-metoxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-piperidin-4-il)-carbámico (650 mg, 1,58 mmol) en DCM (10 ml) se añadió BBr3 (10 ml, 1 M) a -20 °C y la mezcla se agitó a RT durante 1 h. Luego, la mezcla se calentó hasta 0 °C, se inactivó con MeOH y el PH de la solución se neutralizó con NaHCO3 acuoso. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM:MeOH, 10:1) para dar 360 mg (77 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C18H23N3O, 298; Encontrado, 298.
Preparación 23B: éster terc-butílico del ácido (1-{3-[(4-hidroxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-piperidin-4-il)-carbámico
Figure imgf000068_0002
A una solución del compuesto 4-{[3-(4-amino-piperidin-1-il)-fenil]-metil-amino}-fenol (360 mg, 1,21 mmol) en MeOH (5 ml) se añadió 1N NaOH (2,42 ml) y (Boc)2O (287 mg, 1,32 mmol) y la mezcla se agitó a RT durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con DCM (3x). Los orgánicos se concentraron y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (p E:EA, 5:1) para dar 400 mg (83 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C23H31N3O3, 398; Encontrado, 398.
Ejemplo 23: 2-(4-{[4-(4-amino-piperidin-1-il)-fenil]-metil-amino}-fenoxi)-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000068_0003
Una mezcla de 2-cloro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol (150 mg, 0,83 mmol), éster terc-butílico del ácido (1-{3-[(4-hidroxifenil)-metil-amino]-fenil}-piperidin-4-il)-carbámico (400 mg, 1,24 mmol), Cs2CO3 (300 mg, 0,92 mmol) y CuI (175 mg, 0,92 mmol) en DMF (10 ml) se agitó durante toda la noche a 130 °C en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM:MeOH, 10:1) para dar 30 mg de producto protegido con boc, que posteriormente se recogió en DCM (10 ml). Se añadió TfA (2 ml) a la solución y la mezcla se agitó a RT durante 1 h. El solvente se concentró y el residuo se purificó por HPLC preparativa para dar 10 mg (3 %) del producto del título. [M+H] Calculado para C25H26N6O2, 443; Encontrado, 443.
P re p a ra c ió n 24A : N -(4 -m e to x i- fe n il)-N -m e til-2 -fe n il-a c e ta m id a
Figure imgf000069_0001
Se añadió cloruro de fenilacetilo (2,0 g, 1,31 mmol) a 0 °C a una solución de (4-metoxi-fenil)-metil-amina (1,5 g, 1,1 mmol) y TEA (2,2 g, 2,2 mmol) en DCM (20 ml). La mezcla se agitó a RT durante 2 h y se inactivó con NH4CL La mezcla se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA, 5:1) para dar 2,0 g (71 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C16H17NO2, 256; Encontrado, 256.
Preparación 24B: N-(4-hidroxi-fenil)-N-metil-2-fenil-acetamida
Figure imgf000069_0002
A una solución de N-(4-metoxi-fenil)-N-metil-2-fenil-acetamida (2,0 g, 10 mmol) en DCM (20 ml) se añadió BBr3 (40 ml, 1,0 M en DCM, 40 mmol) en porciones a 0 °C, y la mezcla se agitó a RT durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua (30 ml), se basificó hasta pH 5 con una solución saturada de Na2CO3 y se extrajo con DCM (30 ml*3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA, 2:1) para dar 1,5 g (94 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C15H15NO2, 242; Encontrado, 242.
Ejemplo 24: N-[4-(4-hidroxi-pirido[3,4-d]pirimidin-2-iloxi)-fenil]-N-metil-2-fenil-acetamida
Figure imgf000069_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 28 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y N-(4-hidroxi-fenil)-N-metil-2-fenil-acetamida de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H n Mr (400 MHz, DMSO-da): 53,20 (s, 2H), 3,44 (s, 3H), 7,05-7,40 (m, 9H), 7,87 (d, J = 6 ,8 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 8,67 (s, 1H), 13,07 (s, 1H). [M+H] Calculado para C22H18N4O3, 387; Encontrado, 387.
Preparación 25A: 1-(-metoxi-fenil)-3-fenil-piperidina
Figure imgf000069_0004
A una solución de 1-bromo-4-metoxi-benceno (0,5 g, 2,9 mmol) en tolueno se añadió 3-fenil-piperidina (0,5 g, 3,2 mmol), S-Phos (60 mg, 0,15 mmol), Pd2(dba)3 (160 mg, 0,17 mmol), t -BuOK (0,81 g, 7,23 mmol) y la mezcla se agitó durante toda la noche a 95 °C en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se enfrió hasta RT y el so lv e n te se concen tró . El res idu o se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en gel de s ílice (P E :E A , 10 :1) pa ra da r 0 ,5 g (52 % ) de l co m p u e s to de l títu lo . [M H ] C a lcu la d o pa ra C 18H 21NO, 268; E ncon trado , 268.
Preparación 25B: 4-(3-fenil-piperidin-1-il)-fenol
Figure imgf000070_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 53 % a partir de 1-(4-metoxi-fenil)-3-fenil-piperidina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 22C. [M+H] Calculado para C17H19NO, 254; Encontrado, 254.
Ejemplo 25: 2-[4-(3-fenil-piperidin-1-il)-fenoxi]-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000070_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 15 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y 4-(3-fenil-piperidin-1-il)-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-da): 5 1,62-1,94 (m, 4H), 2,72-2,83 (m, 3H), 3,69-3,76 (m, 2H), 7,00 (d, J = 12,0Hz, 2H), 7,13 (d, J = 12,0Hz, 2H), 7,19-7,35 (m, 5H), 7,84 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 8,47 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 8,65 (s, 1H). [M+H] Calculado para C24H22N4O2, 399; Encontrado, 399.
Preparación 26A: 4-(4-benciloxi-fenil)-2-fenil-morfolina
Figure imgf000070_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 80 % a partir de 2-fenilmorfolina y 1-(benciloxi)-4-bromobenceno de acuerdo con el procedimiento para la Preparación 25a . [M+H] Calculado para C23H23NO2, 346; Encontrado, 346.
P re p a ra c ió n 26B : 4 -(2 -fe n il-m o rfo lin -4 -il)-fe n o l
Figure imgf000071_0001
A una solución de 4-(4-benciloxi-fenil)-2-fenil-morfolina (1,5 g, 3,9 mmol) en MeOH (20 ml) se le añadió Pd/C (0,15 g) y la mezcla se agitó durante toda la noche bajo atmósfera de H2. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado y se concentró para dar 0,99 g (99 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C16H17NO2, 256; Encontrado, 256. Ejemplo 26: 2-[4-(2-fenil-morfolin-4-il)-fenoxi]-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000071_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 32 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y 4-(2-fenil-morfolin-4-il)-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-da): 52,25-2,63 (m, 1H), 2,79-2,87 (m, 1H), 3,27-3,86 (m, 3H), 4,09-4,14 (m, 1H), 4,62-4,66 (m, 1H), 7,06 (d, J = 12,8Hz, 2H), 7,17 (d, J = 12,4Hz, 2H), 7,29-7,48 (m, 5H), 7,84 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 8,47 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 8,65 (s, 1H), 13,07 (s, 1H). [M+H] Calculado para C23H20N4O3, 401; Encontrado, 401.
Preparación 27A: éster terc-butílico del ácido (5-bromo-piridin-3-il)-metil-carbámico
Figure imgf000071_0003
Se añadió una solución de éster terc-butílico del ácido (5-bromo-piridin-3-il)-carbámico (3,4 g, 12,5 mmol) en THF (10 ml) a una solución de NaH (0,75 g, 18,8 mmol, 60 % en aceite mineral) en THF (15 ml) y la mezcla se agitó a RT durante 10 min. Se añadió CH3I (2,13 g, 15,0 mmol) y la mezcla se agitó a RT durante 2 h. La reacción se inactivó con NH4Cl acuoso y se extrajo con EtOAc (3x). Los orgánicos se combinaron, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA, 10:1) para dar 2,7 g (76 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para Cn H^BrN2O2, 287; Encontrado, 287.
Preparación 27B: metil-(5-morfolin-4-il-piridin-3-il)-amina
Figure imgf000071_0004
A una solución de éster terc-butílico del ácido (5-bromo-piridin-3-il)-metil-carbámico (200 mg, 0,7 mmol) en tolueno se añadió morfolina (120 mg, 1,4 mmol), BINAp (87 mg, 0,14 mmol), Pd(OAc)2 (16 mg, 0,07 mmol), Cs2CO3 (2,5 g, 2,1 mmol) y la mezcla se sometió a reflujo durante toda la noche en atmósfera de N2. El disolvente se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA, 1:1) para dar un producto protegido con boc, que se disolvió en DCM (2 ml). Se añadió TFA a la solución y la mezcla se agitó a RT durante 1 h. La solución se concentró para dar 100 mg (74 %) del compuesto del título como la sal de TFA. [M+H] Calculado para C10H15N3O, 194; Encontrado, 194.
P re p a ra c ió n 27C : 4 -[m e til-(5 -m o rfo lin -4 - il-p ir id in -3 - il) -a m in o ]-fe n o l
Figure imgf000072_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 34 % a partir de 4-bromo-fenol y metil-(5-morfolin-4-ilpiridin-3-il)-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 5A. [M+H] Calculado para C16H19N3O2, 286; Encontrado, 286.
Ejemplo 27: 2-{4-[metil-(5-morfolin-4-il-piridin-3-il)-amino]-fenoxi}-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000072_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 10 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y 4-[metil-(5-morfolin-4-il-piridin-3-il)-amino ]-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-da): 5 3,12-3,13 (m, 4H), 3,20 (s, 3H), 3,71-3,73 (m, 4H), 6,90 (s, 1H), 7,07-7,09 (m, 2H), 7,23-7,26 (m, 2H), 7,75 (s, 1H), 7,86-7,90 (m, 2H), 8,49 (s, 1H), 8,67 (s, 1H). [M+H] Calculado para C23H22N6O3, 431; Encontrado, 431.
Preparación 28A: ácido 1,2,3,4-tetrahidro-naftaleno-1-carboxílico (4-metoxi-fenil)-metil-amida
Figure imgf000072_0003
Se añadió SOCl2 (2 ml) a una solución de ácido 1,2,3,4-tetrahidro-naftaleno-1-carboxílico (0,6 g, 3,4 mmol) en DCM (10 ml) y la mezcla se sometió a reflujo durante 2 h. El solvente se concentró y el residuo se añadió a una mezcla de (4-metoxi-fenil)-metilamina (470 mg, 3,4 mmol) y TEA (2 ml) en DCM (10 ml). La mezcla de reacción se agitó a RT durante 5 h y se inactivó con HCl IN (10 ml). La capa orgánica se separó, se lavó con agua, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA, 4:1) para dar 630 mg (63 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C19H21NO2, 296; Encontrado, 296.
Preparación 28B: (4-metoxi-fenil)-metil-(1,2,3,4-tetrahidro-naftalen-1-ilmetil)-amina
Figure imgf000072_0004
A una solución de (4-metoxifenil)-metil-amida del ácido 1,2,3,4-tetrahidro-naftaleno-1-carboxílico (600 mg, 2,0 mmol) en THF (10 ml) se añadió BH3 (8 ml, I N en Me2S). La mezcla se agitó a 40 °C durante 2 h, se enfrió hasta RT y se inactivó con MeOH. La solución se ajustó hasta PH=9 con NaOH I N y se extrajo con EA (3x). Los orgánicos se combinaron, se lavaron con agua, se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA, 10:1) para dar 300 mg (53 %) del compuesto del título.
[M+H] Calculado para C19H23NO, 282; Encontrado, 282.
P re p a ra c ió n 28C : 4 -[m e til-(1 ,2 ,3 ,4 -te tra h id ro -n a fta le n -1 - ilm e til) -a m in o ]-fe n o l
Figure imgf000073_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 82 % a partir de 4-bromo-fenol y (4-metoxi-fenil)-metil-(1,2,3,4-tetrahidro-naftalen-1-ilmetil)-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 5A. [M+H] Calculado para Ci 8H2i NO, 268; Encontrado, 268.
Ejemplo 28: 2-{4-[metil-(1,2,3,4-tetrahidro-naftalen-1-ilmetil)-amino]-fenoxi}-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000073_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 20 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y 4-[metil-(1,2,3,4-tetrahidro-naftalen-1-ilmetil) -amino]-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-da): 5 1,65-1,89 (m, 4H), 2,67-2,74 (m, 2H), 2,96 (s, 3H), 3,29-3,56 (m, 3H), 6,78 (d, J = 11,2Hz, 2H), 7,07-7,22 (m, 6 H), 7,86 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 12,99 (s, 1H). [M+H] Calculado para C25H24N4O2, 413; Encontrado, 413.
Preparación 29A: éster metílico del ácido 2-(4-bromo-fenil)-propiónico
Figure imgf000073_0003
A una solución de éster metílico del ácido (4-bromo-fenil)-acético (1,0 g, 4,37 mmol) en THF se añadió LDA (4,4 ml, I N) a -78 °C en atmósfera de N2 y la mezcla se agitó a esta temperatura durante 10 min. Se añadió CH3I (0,74 g, 5,2 mmol) y la mezcla se agitó a RT durante 1 h, se inactivó con NH4Cl acuoso y se extrajo con EA (3x). Los orgánicos se combinaron, se lavaron con agua, se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA, 20:1) para dar 0,6 g (57 %) del compuesto del título. [M H] Calculado para C^HnBrO 2, 242; Encontrado, 242.
Preparación 29B: éster metílico del ácido 2-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-propiónico
Figure imgf000073_0004
A una solución de éster metílico del ácido 2-(4-bromo-fenil)-propiónico (0,6 g, 2,47 mmol) en tolueno se añadió (4-benciloxi-fenil)-metil-amina (526 mg, 2,47 mmol), X-Phos (140 mg, 0,29 mmol), Pd(oAc)2 (33 mg, 0,15 mmol), Cs2CO3 (3,2 g, 9,8 mmol) y la mezcla se sometió a reflujo durante toda la noche. El solvente se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA, 10:1) para dar 0,7 g (76 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C24H25NO3, 376; Encontrado, 376.
Preparación 29C: 2-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-propan-1-ol
Figure imgf000073_0005
A una solución de éster metílico del ácido 2-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-propiónico (0,7 g, 1,87 mmol) en THF (15 ml) se añadió LAH (1,6 ml, 1N) a 0 °C en atmósfera de N2 y la mezcla se agitó a esta temperatura durante 2h. La reacción se calentó hasta RT, se inactivó con agua y se extrajo con EA (3x). Los orgánicos se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4y se concentraron para dar 0,6 g (92 %) del compuesto del título.
[M+H] Calculado para C23H25NO2, 348; Encontrado, 348.
Preparación 29D: (4-benciloxi-fenil)-[4-(2-metoxi-1-metil-etil)-fenil]-metil-amina
Figure imgf000074_0001
A una solución de 2-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-propan-1-ol (1,5 g, 4,3 mmol) en DMF (20 ml) se añadió NaH (0,32 g, 7,8 mmol, 60 % en aceite mineral) a 0 °C. Después de agitar durante 30 min, se añadió gota a gota MeI (0,92 g, 6,5 mmol) durante 10 min y la mezcla de reacción se agitó a RT durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua (100 ml), se extrajo con EA (10 ml*3). Los orgánicos combinados se lavaron con agua (150 ml*3), salmuera (150 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se concentraron para dar 1,47 g (77 %) del producto del título. [M+H] Calculado para C24H27NO2, 362; Encontrado, 362.
Preparación 29E: 4-{[4-(2-metoxi-1-metil-etil)-fenil]-metil-amino}-fenol
Figure imgf000074_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 100 % a partir de (4-benciloxi-fenil)-[4-(2-metoxi-1-metiletil)-fenil]-metil-amina de acuerdo con el procedimiento para la Preparación 26B. [M+H] Calculado para C17H21NO2, 272; Encontrado, 272.
Ejemplo 29: 2-(4-{[4-(2-metoxi-1-metil-etil)-fenil]-metil-amino}-fenoxi)-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000074_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 20 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y 4-{[4-(2 -metoxi-1 -metil-etil)-fenil]-metil -amino}-fenol según el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H n Mr (400 MHz, DMSO-da): 51,17 (t, J = 9,2 Hz,3 H), 2,91-2,95 (m, 1H), 3,20 (s, 3H), 3,30 (s, 3H), 3,35-3,38 (m, 2H), 6,93 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 7,01 (m, J = 11,2 Hz, 2H), 7,16-7,19 (m, 4H), 7,86 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 8,48 (d, J= 6,4 Hz, 1H), 8 ,67 (s, 1 H). [M+H] Calculado para C24H24N4O3, 417; Encontrado, 417.
Preparación 30A: éster 2-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-propílico del ácido metanosulfónico
Figure imgf000074_0004
A una solución de 2-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-propan-1-ol (1,5 g, 4,32 mmol) en DCM (20 ml) se añadió TEA (0,72 g, 6,5 mmol) y MsCl (0,65 g, 5,6 mmol) a 0 °C y la mezcla se agitó a RT durante 2 h. La mezcla de reacción se lavó con NH4Cl acuoso, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en ge l de s ílice (P E :E A , 3 :1 ) pa ra d a r 1,4 g (76 % ) de l co m p u e s to de l títu lo . [M H ] C a lcu la d o pa ra C 24H27N O 4S, 426; E ncon trado , 426.
Preparación 30B: 3-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-butironitrilo
Figure imgf000075_0001
A una solución de éster 2-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-propílico del ácido metanosulfónico (1,35 g, 3,17 mmol) en DMSO (20 ml) se añadió KCN (0,4 g, 6,34 mmol) y 18-corona-6 (0,84 g, 3,17 mmol), y la mezcla se agitó durante toda la noche a 65 °C. La mezcla de reacción se enfrió hasta RT, se inactivó con agua y se extrajo con EA (3x). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA, 5:1) para dar 0,56 g (50 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C24H24N2O, 357; Encontrado, 357.
Preparación 30C: 3-{4-[(4-hidroxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-butironitrilo
Figure imgf000075_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 88 % a partir de 3-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-butironitrilo de acuerdo con el procedimiento de la preparación 26B. [M+H] Calculado para C17H18N2O, 267; Encontrado, 267.
Ejemplo 30: 3-(4-{[4-(4-hidroxi-pirido[3,4-d]pirimidin-2-iloxi)-fenil]-metil-amino}-fenil)-butironitrilo
Figure imgf000075_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 17 % a partir de 2-cloro-pirido [3,4-d]pirimidin-4-ol y 3-{4-[(4-hidroxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-butironitrilo de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-da): 5 1,28 (d, J = 9,2 Hz, 3H), 2,77 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 3,05-3,09 (m, 1H), 3,27 (s, 3H), 6,95-6,99 (m, 4H), 7,19-7,27 (m, 4H), 7,86 (d, J = 6 ,8 Hz, 1H), 8,49 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 8,70 (s, 1H). [M+H] Calculado para C24H21N5O2, 412; Encontrado, 412.
Preparación 31A: 1-ciclopentil-5-metoxi-1H-indol
Figure imgf000075_0004
A una solución de 5-metoxi-1H-indol (1,5 g, 10 mmol) en DMF (20 ml) a 0 °C se le añadió NaH (480 mg, en aceite mineral, 60 %, 12 mmol) en porciones y la mezcla se agitó durante 30 min. Luego se añadió bromo-ciclopentano (2,3 g, 15 mmol) y la mezcla se agitó durante toda la noche a 90 °C. La mezcla de reacción se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con DCM (30 ml*3). Los orgánicos se combinaron, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El re s id u o se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en ge l de s ílice (P E :E A , 20 :1 ) pa ra d a r 450 m g (21 % ) de l co m p u e s to de l títu lo . [M H ] C a lcu la d o pa ra C 14H 17NO, 216; E ncon trado , 216.
Preparación 31B: 1-ciclopentil-1H-indol-5-ol
Figure imgf000076_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 21 % a partir de 1-ciclopentil-5-metoxi-1H-indol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 4B. [M+H] Calculado para C13H15NO, 202; Encontrado, 202.
Ejemplo 31: 2-(1-ciclopentil-1H-indol-5-iloxi)-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000076_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 3 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y 1-ciclopentil-1H-indol-5-ol según el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-da): 5 1,72-1,76 (m, 2H), 1,87-1,91 (m, 4H), 2,15-2,21 (m, 2H), 4,92 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 6,49 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,08 (dd, J = 1,6, 7,2 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,54-7,59 (m, 2H), 7,88 (s, 1H), 8,51 (brs, 1H), 8,64 (brs, 1H). [M+H] Calculado para C20H18N4O2, 347; Encontrado, 347.
Preparación 32A: 5-benciloxi-1-fenil-1H-indol
Figure imgf000076_0003
Una mezcla de yodobenceno (1,83 g, 8,97 mmol), 5-benciloxi-1H-indol (2,0 g, 8,97 mmol), Cul (171 mg, 0,90 mmol) y Cs2CO3 (5,8 g, 17,94 mmol) en DMF (17 ml) se calentó durante toda la noche a 120 °C. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (PE:EA, 15:1 a 10:1) para dar 1,29 g (49 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C21H17NO, 300; Encontrado, 300.
P re p a ra c ió n 32B : 1 -fen il-1 H -in d o l-5 -o l
Figure imgf000077_0001
A una solución de 5-benciloxM-feniMH-indol (100 mg, 0,33 mmol) en EtOH (20 ml) se añadió Pd/C (20 mg) y la mezcla se agitó durante toda la noche a RT en atmósfera de H2. La mezcla de reacción se filtró sobre celite y se concentró para dar 70 mg (100 %) del producto bruto del título. [M+H] Calculado para C14H11NO, 210; Encontrado, 210.
Preparación 32C: 1-fenil-2,3-dihidro-1H-indol-5-ol
Figure imgf000077_0002
A una solución de 1-fenil-1H-indol-5-ol (500 mg, 2,4 mmol) en AcOH (10 ml) se le añadió NaBH3 CN (1,2 g, 19,1 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante toda la noche a RT. La reacción se diluyó con agua (10 mL), se basificó hasta pH 8 con una solución saturada de Na2CO3 y se extrajo con EA (3x). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para dar 200 mg (40 %) del producto bruto del título. [M+H] Calculado para C15H15NO, 226; Encontrado, 226.
Ejemplo 32: 2-(1-fenil-2,3-dihidro-1H-indol-5-iloxi)-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000077_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 16 % a partir de 2-cloro-pirido [3,4-d]pirimidin-4-ol y 1-fenil-2,3-dihidro-1H-indol-5-ol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-da): 53,14 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 4,00 (t, J = 8,4 Hz, 2H), 6,97 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 7,11 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,16 (s, 1H), 7,27 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,35-7,39 (m, 2H), 7,87 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,70 (s, 1H), 13,04 (brs, 1H). [M+H] Calculado para C21H16N4O2, 357; Encontrado, 357.
Preparación 33A: 6-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-1,2,3,4-tetrahidro-quinolina
Figure imgf000077_0004
A una solución de 1,2,3,4-tetrahydro-quinolin-6-ol (1,0 g, 6,7 mmol) e imidazol (1,4 g, 20,1 mmol) en DCM (20 ml) se añadió TBSCl (1,7 g, 7,4 mmol) a temperatura de baño helado y la reacción se agitó a RT durante 3 h. La reacción se diluyó con agua y se extrajo con eA (3x). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (PE:EA, 20:1) para dar 1,7 g (97 %) del producto del título.
Preparación 33B: 6-(ferc-butil-dimetil-silaniloxi)-1-fenil-1,2,3,4-tetrahidro-quinolina
Figure imgf000078_0001
A una suspensión de 6-(ferc-butil-dimetil-silaniloxi)-1,2,3,4-tetrahidro-quinolina (100 mg, 0,38 mmol), yodobenceno (78 mg, 0,38 mmol), BiNa P (24 mg, 0,038 mmol) y Cs2CO3 (248 mg, 0,76 mmol) en tolueno (10 ml) se añadió Pd2(dba)3 (18 mg, 0,019 mmol) en atmósfera de N2. La reacción se agitó a reflujo durante toda la noche, se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE) para dar 100 mg (78 %) del producto del título. [M+H] Calculado para C21H29NOSi, 340; Encontrado, 340.
Preparación 33C: 1-fenil-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-6-ol
Figure imgf000078_0002
A una solución de 6-(ferc-butil-dimetil-silaniloxi)-1-fenil-1,2,3,4-tetrahidro-quinolina (700 g, 2,1 mmol) en THF (20 ml) se añadió TBAF (4,1 ml, 1,0 M en THF, 4,1 mmol) a RT y la reacción se agitó a RT durante 30 min. La reacción se diluyó con agua, se extrajo con EA (3x). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA, 6:1) para dar 250 mg (54 %) del producto del título. [M+H] Calculado para C15H15NO, 226; Encontrado, 226.
Ejemplo 33: 2-(1-fenil-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-6-iloxi)-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000078_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 26 % a partir de 2-cloro-pirido [3,4-d]pirimidin-4-ol y 1-fenil-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-6-ol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (300 MHz, DMSO-da): 51,96-1,98 (m, 2H), 2,80 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,57 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 6,61 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,84 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,98 (s, 1H), 7,08-7,12 (m, 1H), 7,24 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,34-7,39 (m, 2H), 7,84 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 8,48 (brs, 1H), 8,68 (brs, 1H). [M+H] Calculado para C22H18N4O2, 371; Encontrado, 371.
Preparación 34A: 2-doro-5-isopropenil-piridina
Figure imgf000079_0001
A una suspensión de 2-doro-5-yodo-piridina (100 mg, 0,42 mmol), 2-isopropenil-4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolano (75 mg, 0,42 mmol), S-Phos (17 mg, 0,042 mmol) y K3PO4 (178 mg, 0,84 mmol) en tolueno (10 ml) se añadió Pd2(dba)3 (8 mg, 0,008 mmol) en atmósfera de N2. La reacción se agitó a reflujo durante toda la noche, se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA, 50:1) para dar 30 mg (47 %) del producto del título. [M+H] Calculado para C8H8ClN, 154; Encontrado, 154.
Preparación 34B: (5-isopropenil-piridin-2-il)-(4-metoxi-fenil)-metil-amina
Figure imgf000079_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 77 % a partir de 2-cloro-5-isopropenil-piridin y (4-metoxifenil)-metil-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 34A. [M+H] Calculado para C16H18N2O, 255; Encontrado, 255.
Preparación 34C: (5-isopropil-piridin-2-il)-(4-metoxi-fenil)-metil-amina
Figure imgf000079_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 99 % a partir de (5-isopropenil-piridin-2-il)-(4-metoxi-fenil)-metil-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 32B. [M+H] Calculado para C16H20N2O, 257; Encontrado, 257.
Preparación 34D: 4-[(5-isopropil-piridin-2-il)-metil-amino]-fenol
Figure imgf000079_0004
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 59 % a partir de (5-isopropil-piridin-2-il)-(4-metoxi-fenil)-metil-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 4B. [M+H] Calculado para C15H18N2O, 243; Encontrado, 243.
Ejemplo 34: 2-{4-[(5-isopropil-piridin-2-il)-metil-amino]-fenoxi}-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000080_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 28 % a partir de 2-cloro-pirido [3,4-d]pirimidin-4-ol y 4-[(5-isopropil-piridin-2-il)-metil-amino]-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (300 MHz, DMSO-CÍ6): 5 1,16 (d, J = 6 ,6 Hz, 6 H), 2,77-2,82 (m, 1H), 3,38 (s, 3H), 6,62 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,34 (s, 4H), 7,41 (dd, J = 2,7, 9,0 Hz, 1H), 7,87 (d, J= 5,1 Hz, 1H), 8,04 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 8,51 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 8,72 (s, 1H), 13,12 (s, 1H). [M+H] Calculado para C22H21N5O2, 388; Encontrado, 388.
Preparación 35A: (4-isopropil-3-nitro-fenil)-(4-metoxi-fenil)-metil-amina
Figure imgf000080_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 81 % a partir de (4-metoxi-fenil)-metilamina y 4-bromo-1-isopropil-2-nitro-benceno de acuerdo con el procedimiento de la preparación 27B. [M+H] Calculado para C17H20N2O3, 301; Encontrado, 301.
Preparación 35B: 4-isopropil-N1-(4-metoxi-fenil)-N1-metil-benceno-1,3-diamina
Figure imgf000080_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 96 % a partir de (4-isopropil-3-nitrofenil)-(4-metoxi-fenil)-metil-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 32B. [M+H] Calculado para C17H22N2O, 271; Encontrado, 271.
P re p a ra c ió n 35C : (4 - is o p ro p il-3 -m o rfo lin -4 - il- fe n il)-(4 -m e to x i- fe n il)-m e til-a m in a
Figure imgf000081_0001
A una suspensión de 4-isopropil-N1-(4-metoxi-fenil)-N1-metil-benceno-1,3-diamina (2,0 g, 7,4 mmol), K2CO3 (5,1 g, 37,1 mmol) y Nal (2,0 g) en DMF (1o0 ml) se añadió 1-cloro-2-(2-cloro-etoxi)-etano (1,1 g, 7,4 mmol) y la reacción se agitó durante toda la noche a RT. La reacción se diluyó con agua y se extrajo con EA (3x). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA, 20:1) para dar 1,5 g (60 %) del producto del título. [M+H] Calculado para C21H28N2O2, 341; Encontrado, 341.
Preparación 35D: 4-[(4-isopropil-3-morfolin-4-il-fenil)-metil-amino]-fenol
Figure imgf000081_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 59 % a partir de (4-isopropil-3-morpholin-4-il-fenil)-(4-metoxi-fenil)-metil-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 4B. [M+H] Calculado para C20H26N2O2, 327; Encontrado, 327.
Ejemplo 35: 2-{4-[(4-isopropil-3-morfolin-4-il-fenil)-metil-amino]-fenoxi}-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000081_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 23 % a partir de 2-cloro-pirido [3,4-d]pirimidin-4-ol y 4-[(5-isopropil-piridin-2-il)-metil-amino]-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H n Mr (400 MHz, DMSO-CÍ6): 51,17 (d, J = 6,8 Hz, 6H), 2,78 (t, J = 4,0 Hz, 4H), 3,28 (s, 3H), 3,34-3,41 (m, 1H), 3,72 (t, J = 4,0 Hz, 4H), 6,84-6,86 (m, 2H), 6,96 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,18-7,25 (m, 3H), 7,88 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,51 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,70 (s, 1H), 13,06 (brs, 1H). [M+H] Calculado para C27H29N5O3, 472; Encontrado, 472.
P rep a ra c ió n 36A : 1 -[4 -(4 -b e n c ilo x i- fe n ila m in o )-fe n il]-e ta n o n a
Figure imgf000082_0001
Una mezcla de 1-(4-bromo-fenil)-etanona (10 g, 0,05 mol), 4-benciloxi-fenilamina (12 g, 0,06 mol), X-Phos (1,2 g, 2,5 mmol), Pd2(dba)3 (1,16 g, 1,26 mmol) y K3PO4 (16 g, 0,075 mol) en tolueno (200 ml) se sometió a reflujo durante toda la noche en atmósfera de N2. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (PE:EA, 5:1) para dar 11,7 g del producto del título. [M+H] Calculado para C21H19NO2, 318; Encontrado, 318.
Preparación 36B: 1-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-etanona
Figure imgf000082_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 68 % a partir de 1-[4-(4-benciloxi-fenilamino)-fenil]-etanona de acuerdo con el procedimiento de la preparación 27A. [M+H] Calculado para C22H21NO2, 332; Encontrado, 332.
Preparación 36C: 1-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-etanol
Figure imgf000082_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 99 % a partir de 1-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-etanona de acuerdo con el procedimiento de la preparación 29C. [M+H] Calculado para C22H23NO2, 334; Encontrado, 334.
Preparación 36D: (4-benciloxi-fenil)-[4-(1-metoxi-etil)-fenil]-metil-amina
Figure imgf000082_0004
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 45 % a partir de 1-[4-(4-benciloxi-fenilamino)-fenil]-etanona de acuerdo con el procedimiento de la preparación 29D. [M+H] Calculado para C23H25NO2, 348; Encontrado, 348.
P rep a ra c ión 36E : 4 -{ [4 -(1 -m e to x i-e til) - fe n il]-m e til-a m in o }-fe n o l
Figure imgf000083_0001
A una solución de (4-benciloxi-fenil)-[4-(1-metoxi-etil)-fenil]-metil-amina (0,947 g, 2,73 mmol) en THF (20 ml) se añadió Pd/C (0,10 g) y la mezcla se agitó durante toda la noche en atmósfera de H2. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró para dar 0,34 g (50 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C16H19NO2, 258; Encontrado, 258.
Ejemplo 36: 2-(4-{[4-(1-metoxi-etil)-fenil]-metil-amino}-fenoxi)-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000083_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 23 % a partir de 2-cloro-pirido [3,4-d]pirimidin-4-ol y 4-{[4-(1 -metoxi-etil)-fenil]-metil-amino}-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H n Mr (300 MHz, DMSO-da): 5 1,41 (d, J = 6 ,6 Hz, 3H), 3,07 (s, 3H), 3,27 (s, 3H), 4,23-4,25 (m, 1H), 7,01-7,04 (m, 4H), 7,20-7,24 (m, 4H), 7,86 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 8,69 (s, 1H). [M+H] Calculado para C23H22N4O3, 403; Encontrado, 403.
Preparación 37A: éster 2-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-propílico del ácido metanosulfónico
Figure imgf000083_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 60 % a partir de 2-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-propan-1-ol de acuerdo con el procedimiento de la preparación 30A. [M+H] Calculado para C24H27NO4S, 426; Encontrado, 426.
Preparación 37B: [4-(2-amino-isopropil)fenil]metil[4-(fenilmetoxi)fenil]amina
Figure imgf000083_0004
Una solución de éster 2-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-propílico del ácido metanosulfónico (3,5 g, 8,24 mmol) en NH3/THF (20 ml) se agitó durante toda la noche a 148 °C en un tubo sellado. La reacción se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM:MeOH, 10:1) para dar 1,71 g (60 %) del producto del título. [M+H] Calculado para C23H26N2O, 347; Encontrado, 347.
P re p a ra c ió n 37C : é s te r te rc -b u tílic o de l á c ido (2 -{4 -[(4 -b e n c ilo x i- fe n il)-m e til-a m in o ]-fe n il} -p ro p il)-c a rb á m ic o
Figure imgf000084_0001
Una solución de [4-(2-amino-isopropil)fenil]metil[4-(fenilmetoxi)fenil]amina (1,7 g, 4,91 mmol), (Boc)2O (1,29 g, 5,90 mmol) y TEA (744 mg, 7,37 mmol) en THF (20 ml) se agitó durante 2 h a RT. La mezcla de reacción se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA, 10:1) para dar 1,67 g (76 %) del producto del título. [M+H] Calculado para C28H34N2O3, 447; Encontrado, 447.
Preparación 37D: éster terc-butílico del ácido (2-{4-[(4-hidroxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-propil)-carbámico
Figure imgf000084_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 88 % a partir de éster terc-butílico del ácido (2-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-propil)-carbámico de acuerdo con el procedimiento de la preparación 36E. [M+H] Calculado para C21H28N2O3, 357; Encontrado, 357.
Ejemplo 37: 2-(4-{[4-(2-amino-1-metil-etil)-fenil]-metil-amino}-fenoxi)-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000084_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 3,3 % a partir de éster terc-butílico del ácido 2-cloropirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y (2-{4-[(4-hidroxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-propil)-carbámico de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 23. 1H NMR (300 MHz, CD3 OD-C/4): 51,28 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 2,73-2,96 (m, 2H), 3,32 (s, 3H), 3,41-3,50 (m, 1H), 7,04-7,08 (m, 4H), 7,17-7,24 (m, 4H), 7,98 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,47 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,73 (s, 1h ). [M+H] Calculado para C23H23N5O2, 402; Encontrado, 402.
Preparación 38A: (4-{2-[(2-metoxietil)amino]-isopropil}fenil)metil [4-(fenilmetoxi)fenil]amina
Figure imgf000084_0004
Una mezcla de éster del ácido 2-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-propil metanosulfónico (1,22 g, 2,88 mmol), 2-metoxi-etilamina (1,08 g, 14,4 mmol) y NaHCO3 (720 mg, 8,64 mmol) se agitó en ACN (20 ml) durante toda la noche a 70 °C. La mezcla de reacción se concentró y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (DCM:MeOH, 10:1) para dar 1,14 g (100 %) del producto del título. [M+H] Calculado para C26H32N2O2, 405; Encontrado, 405.
Preparación 38B: (4-{2-[(2-metoxietil)metilamino]-isopropil}fenil)metil[4-(fenilmetoxi)fenil]amina
Figure imgf000085_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 25 % a partir de (4-{2-[(2-metoxietil)amino]-isopropil}fenil)metil[4 (fenilmetoxi)fenil]amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 27A. [M+H] Calculado para C27H34N2O2, 419; Encontrado, 419.
Preparación 38C: 4-[(4-{2-[(2-metoxi-etil)-metil-amino]-1-metil-etil}-fenil) metil-amino]-fenol
Figure imgf000085_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 100 % a partir de (4-{2-[(2-metoxietil) metilamino]-isopropil}fenil)metil[4-(fenilmetoxi)fenil]amina de acuerdo con el procedimiento para la preparación 36E. [M+H] Calculado para C20H28N2O2, 329; Encontrado, 329.
Ejemplo 38: 2-{4-[(4-{2-[(2-metoxi-etil)-metil-amino]-1-metil-etil}-fenil)-metil-amino]-fenoxi}-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000085_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 23 % a partir de 2-cloro-pirido [3,4-d]pirimidin-4-ol y 4-[(4-{2 -[(2 -metoxi-etil)-metil-amino]-1 -metil-etil}-fenil)-metil-amino]-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4): 5 1,12-1,14 (m, 3H), 2,59-2,60 (m, 1H), 2,72 (s, 3H), 3,04-3,66 (m, 12H), 6,94-7,12 (m, 8H), 7,90-7,95 (m, 1H), 8,34-8,35 (m, 1H), 8,73-8,74 (m, 1H). [M+H] Calculado para C27H31N5O3, 474; Encontrado, 474.
P rep a ra c ió n 39A : 1 -(4 -b ro m o -fe n il)-1 -c ic lo p ro p il-e ta n o l
Figure imgf000086_0001
A una solución de (4-bromo-fenil)-cidopropil-metanona (225 mg, 1 mmol) en THF (10 ml) se le añadió CHaMgBr (0,4 ml, 1,1 mmol) a 0 °C y la mezcla se agitó durante 2 h a RT. La reacción se inactivó con NH4Cl acuoso, se extrajo con EA (3x), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:e A, 10 :1 ) para dar 179 mg (75 %) del producto del título. [M+H] Calculado para CnH^BrO, 241; Encontrado, 241.
Preparación 39B: 1-bromo-4-(1-ciclopropil-etil)-benceno
Figure imgf000086_0002
A una solución de 1-(4-bromo-fenil)-1-ciclopropil-etanol (138 mg, 0,575 mmol) en DCM (5 ml) a -78 °C se le añadió EtaSiH (87 mg, 0,75 mmol) y TFA (131 mg, 1,15 mmol) en atmósfera de N2 y la mezcla se agitó durante toda la noche a RT. La reacción se inactivó con NaHCO3 acuoso, se extrajo con EA (3x), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE) para dar 120 mg (94 %) del producto del título. [M+H] Calculado para C nH i3Br, 225; Encontrado, 225.
Preparación 39C: [4-(1-ciclopropil-etil)-fenil]-metil-amina
Figure imgf000086_0003
Una mezcla de 1-bromo-4-(1-ciclopropil-etil)-benceno (3,7 g, 16,52 mmol) y Cu (53 mg, 0,825 mmol) en una solución de metilamina (40 % en peso en H2O, 35 ml) se agitó durante toda la noche a 100 °C en un tubo sellado. La reacción se enfrió hasta RT, se diluyó con H2O y se extrajo con EA (3x). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA, 10:1) para dar 440 mg (15 %) del producto del título. [M+H] Calculado para C12H17N,, 176; Encontrado, 176.
Preparación 39D: 4-{[4-(1-ciclopropil-etil)-fenil]-metil-amino}-fenol
Figure imgf000086_0004
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 35 % a partir de [4-(1-ciclopropil-etil)-fenil]-metil-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 5A. [M+H] Calculado para C18H21NO, 268; Encontrado, 268.
Ejemplo 39: 2-(4-{[4-(1-ciclopropil-etil)-fenil]-metil-amino}-fenoxi)-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000087_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 15 % a partir de 2-doro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y 4-{[4-(1-cidopropil-etil)-fenil]-metil-amino}- fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (300 MHz, DIVISOR): 50,10-0,20 (m, 2H), 0,35-0,38 (m, 1H), 0,46-0,50 (m, 1H), 0,89-0,93 (m, 1H), 1,25 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,91-1,97 (m, 1H), 3,23 (s, 3H), 6,93 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,04 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,16-7,25 (m, 4H), 7,86 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,49 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,69 (s, 1H), 13,02 (s, 1H). [M+H] Calculado para C25H24N4O2, 413; Encontrado, 413.
Preparación 40A: 3-(4-metoxi-fenilamino)-benzonitrilo
Figure imgf000087_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 55 % a partir de 1-bromo-4-metoxibenceno y 3-aminobenzonitrilo de acuerdo con el procedimiento de la preparación 1A. [M+H] Calculado para C14H12N2O, 225; Encontrado, 225.
Preparación 40B: 3-[(4-metoxi-fenil)-metil-amino]-benzonitrilo
Figure imgf000087_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 67 % a partir de 3-(4-metoxi-fenilamino)-benzonitrilo de acuerdo con el procedimiento de la preparación 1B. [M+H] Calculado para C15H14N2O, 239; Encontrado, 239.
Preparación 40C: 3-[(4-hidroxi-fenil)-metil-amino]-benzonitrilo
Figure imgf000087_0004
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 39 % a partir de 3-[(4-metoxi-fenil)-metil-amino]-benzonitrilo de acuerdo con el procedimiento de la preparación 4B. [M+H] Calculado para C14H12N2O, 225; Encontrado, 225.
Ejemplo 40: 3-{[4-(4-hidroxi-pirido[3,4-d]pirimidin-2-iloxi)-fenil]-metil-amino}-benzonitrilo
Figure imgf000088_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 37 % a partir de 2-cloro-pirido [3,4-d]pirimidin-4-ol y 3-[(4-hidroxi-fenil)-metil-amino]-benzonitrilo de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (300 MHz, DMSO-CÍ6): 5 3,30 (s, 3H), 7,16-7,29 (m, 5H), 7,35-7,44 (m, 3H), 7,89 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 8,53 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,72 (s, 1H). [M+H] Calculado para C21H15N5O2, 370; Encontrado, 370.
Preparación 41A: 1-metil-4-(3-nitro-bencil)-piperazina
Figure imgf000088_0002
Una mezcla de 1-bromometil-3-nitro-benceno (5,0 g, 23 mmol), 1-metil-piperazina (2,3 g, 23 mmol) y K2CO3 (6,4 g, 46 mmol) en DMF (80 ml) se agitó durante toda la noche a RT. La mezcla de reacción se diluyó con agua y la mezcla se extrajo con EA (3x). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y concentraron para dar 3,2 g (59 %) del producto del título sin purificación adicional. [M+H] Calculado para C12H17N3O2, 236; Encontrado, 236.
Preparación 41B: 3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-fenilamina
Figure imgf000088_0003
Una mezcla de 1-metil-4-(3-nitro-bencil)-piperazina (3,20 g, 13,6 mmol), Fe (7,60 g, 136 mmol), NH4Cl (364 mg, 6,81 mmol) en EtOH (40 ml) y H2O (10 ml) se agitó durante 2 h a 80 °C. La mezcla se concentró, se volvió a disolver en metanol y se filtró a través de celite. El filtrado se concentró para dar 1,3 g (46 %) del producto del título sin purificación adicional. [M+H] Calculado para C12H19N3, 206; Encontrado, 206.
Preparación 41C: metil-[3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-fenil]-amina
Figure imgf000089_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 57 % a partir de 3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-fenilamina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 18A.
Preparación 41D: (4-benciloxi-fenil)-metil-[3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-fenil]-amina
Figure imgf000089_0002
A una solución de metil-[3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-fenil]-amina (1,0 g, 4,6 mmol) en tolueno (5 ml) se añadió 1-benciloxi-4-bromo-benceno (1,26 g, 4,79 mmol), bifenil-2-il-diciclohexil-fosfano (16 mg, 0,046 mmol), Pd2(dba)3 (42 mg, 0,046 mmol) y t -BuOK (767 mg, 6,85 mmol), y la mezcla se agitó durante toda la noche a 110 °C en atmósfera de N2. La mezcla de reacción se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA, 20:1) para dar 1,29 g (70 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C26H31N3O, 402; Encontrado, 402.
Preparación 41E: 4-{metil-[3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-fenil]-amino}-fenol
Figure imgf000089_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 36 % a partir de (4-benciloxi-fenil)-metil-[3-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-fenil]-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 36E. [M+H] Calculado para C19H25N3O, 312; Encontrado, 312.
Ejemplo 41: 2-(4-{metil-[3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-fenil]-amino}-fenoxi)-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000090_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 8 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d] pirimidin-4-ol y 4-{metil-[3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-fenil]-amino}-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (300 MHz, D M S O ^): 52,29 (s, 3H), 2,38-2,57 (m, 8H), 3,20 (s, 3H), 3,44 (s, 2H), 6,86-7,04 (m, 5H), 7,16-7,26 (m, 3H), 7,82 (d, J= 5,1 Hz, 1H), 8,44 (d, J= 5,1 Hz, 1H), 8,67 (s, 1H). [M+H] Calculado para C26H28N6O2, 457; Encontrado, 457.
Preparación 42A: (4-bromo-fenoxi)-terc-butil-dimetil-silano
Figure imgf000090_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 90 % a partir de 4-bromo-fenol de acuerdo con el procedimiento de la preparación 33A. [M+H] Calculado para C^H^BrOSi, 288; Encontrado, 288.
Preparación 42B: [4-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-fenil]-(4-ciclopropil-fenil)-metil-amina
Figure imgf000090_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 38 % a partir de (4-bromo-fenoxi)-terc-butil-dimetil-silano y (4-ciclopropil-fenil)-metil-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 41D. [M+H] Calculado para C22H31NoSi, 354; Encontrado, 354.
Preparación 42C: 4-[(4-ciclopropil-fenil)-metil-amino]-fenol
Figure imgf000090_0004
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 28 % a partir de [4-(ferc-butil-dimetil-silaniloxi)-fenil]-(4-cidopropil-fenil)-metil-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 33C. [M+H] Calculado para C16H17NO, 240; Encontrado, 240.
Ejemplo 42: 2-{4-[(4-ciclopropil-fenil)-metil-amino]-fenoxi}-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000091_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 3 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d] pirimidin-4-ol y 4-[(4-ciclopropil-fenil)-metil-amino]-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (300 MHz, DMSO-CÍ6): 5 0,60-0,63 (m, 2H), 0,86-0,90 (m, 2H), 1,86-1,88 (m, 1H), 3,23 (s, 3H), 6,88-7,16 (m, 8 H), 7,84­ 7,86 (m, 1H), 8,47-8,49 (m, 1H), 8,68 (s, 1H). [M+H] Calculado para C23H20N4O2, 385; Encontrado, 385,
Figure imgf000091_0002
continuación
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Figure imgf000106_0002
Preparación 114A: 2,2,2-trifluoro-N-(4-isopropil-fenil)-acetamida
Figure imgf000106_0001
A una solución de 4-isopropil-fenilamina (1,0 g, 7,4 mmol) en DCM (60 ml) se le añadió piridina (1,8 g, 22,2 mmol) y TFAA (1,9 g, 8,9 mmol) a 0 °C y la mezcla se agitó durante 2 h a RT. La reacción se inactivó con NaHCO3 acuoso y la mezcla se extrajo con EA (80 ml x 3). Los orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (PE:EtOAc, 30:1) para dar el compuesto del título (1,6 g, 94 %) como un aceite amarillo. [M+H] Calculado para C11H12F3NO, 232; Encontrado, 232.
Preparación 114B: (4-isopropil-fenil)-(2,2,2-trifluoro-etil)-amina
Figure imgf000107_0001
A una solución de 2,2,2-trifluoro-N-(4-isopropil-fenil)-acetamida (1,6 g, 7,0 mmol) en THF (70 ml) se añadió DMSB (7 ml, 14,0 mmol) y la mezcla se sometió a reflujo durante 2 h. La reacción se inactivó con H2O (70 ml), se extrajo con éter (80 ml x 3). Los orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (PE:EtOAc, 50:1) para dar el compuesto del título (800 mg, 53 %) como un aceite amarillo. [M+H] Calculado para Ch Hi 4F3N, 218; Encontrado, 218.
Preparación 114C: 4-[(4-isopropil-fenil)-(2,2,2-trifluoro-etil)-amino]-fenol
Figure imgf000107_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 73 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y (4-isopropil-fenil)-(2,2,2-trifluoro-etil)-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 33C. [M+H] Calculado para C17H18F3NO, 310; Encontrado, 310.
Ejemplo 114: 2-{4-[(4-isopropil-fenil)-(2,2,2-trifluoro-etil)-amino]-fenoxi}-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000107_0003
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 11 % a partir de 2-cloro-pirido [3,4-d]pirimidin-4-ol y 4-[(4-isopropil-fenil)-(2,2,2-trifluoro-etil)-amino]-fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1; 1H NMR (300 MHz, DMSO-de): 5 1,20-1,22 (m, 6 H), 2,88-2,89 (m, 1H), 4,59-4,62 (m, 2H), 6,94 (d, J= 5,4 Hz, 2H), 7,07-7,10 (d, J= 8,4 Hz, 2H), 7,25 (m, 4H), 7,86-7,88 (d, J= 4,5 Hz, 1H), 8,51 (d, J= 5,1 Hz, 1H), 8,70 (s, 1 H). [M+H] Calculado para C24H21F3N4O2, 455; Encontrado, 455.
Preparación 115A: [4-(3-amino-1-metilpropil)fenil]metil[4-(fenilmetoxi)fenil]amina
Figure imgf000107_0004
A una solución de 3-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-butironitrilo (1,0 g, 2,8 mmol) en THF (10 ml) se añadió LAH (2,3 ml, 2,4 M) a 0 °C, y la mezcla se agitó a RT durante 2 h. La reacción se inactivó con agua y se extrajo con EA (3x). Los orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4 y se concentraron para dar 0,68 g (68 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C24H28N2O, 361; Encontrado, 361.
Preparación 115B: éster terc-butílico del ácido (3-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-butil)-carbámico
Figure imgf000108_0001
A una solución de [4-(3-amino-1-metilpropil)fenil]metil[4-(fenilmetoxi) fenil]amina (0,68 g, 1,9 mmol) en DCM (5 ml) se añadió (Boc)2O (0,5 g, 2,3 mmol) y TEA (0,38 g, 3,8 mmol) y la mezcla se agitó a RT durante 2 h. La reacción se inactivó con NH4Cl acuoso y se extrajo con DCM (3x). Los orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4 y se concentraron para dar 0,83 g (95 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C29H36N2O3, 461; Encontrado, 461.
Preparación 115C: éster terc-butílico del ácido (3-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-butil)-metil-carbámico
Figure imgf000108_0002
A una solución de éster terc-butílico del ácido (3-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-butil)-carbámico (1,9 g, 4,1 mmol) en THF (20 ml) se añadió NaH (0,25 g, 6,15 mmol) a 0 °C y la mezcla se agitó a RT durante 30 min a 0 °C. Se añadió CH3I (0,7 g, 4,92 mmol) y la mezcla se agitó a 45 °C durante 2 h. La reacción se inactivó con NH4Cl acuoso y se extrajo con EA (3x). Los orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4 y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (EA:PE, 1:10) para dar 1,2 g (61 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C30H38N2O3, 475; Encontrado, 475.
Preparación 115D: 4-{[4-(3-dimetilamino-1-metil-propil)-fenil]-metil-amino}-fenol
Figure imgf000108_0003
A una solución de éster terc-butílico del ácido (3-{4-[(4-benciloxi-fenil)-metil-amino]-fenil}-butil)-metil-carbámico (0,89 g, 1,88 mmol) en THF (10 ml) se añadió LAH (1,2 ml, 2,4 M) a 0 °C y la mezcla se sometió a reflujo durante toda la noche. La reacción se inactivó con agua y se extrajo con EA (3x). Los orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4 y se concentraron. El residuo se disolvió en MeOH y se añadió Pd/C (30 mg). La mezcla se agitó durante toda la noche a RT en atmósfera de H2 y se filtró. El filtrado se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (MeOH:DCM, 1:10) para dar 0,4 g (72 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C19H26N2O, 299; Encontrado, 299.
Ejemplo 115: 2-(4-{[4-(3-dimetilamino-1-metil-propil)-fenil]-metil-amino}-fenoxi)-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000108_0004
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 5 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d] pirimidin-4-ol y N-(4-hidroxi-fenil)-N-metil-2-fenil-acetamida de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-da): 51,02 (d, J = 8,4 Hz, 3H), 2,25-2,27 (m, 1H), 2,44-2,52 (m, 1H), 2,67-2,73 (m, 1H), 2,88 (d, J= 26,0 Hz, 6 H), 3,04-3,08 (m, 2H), 3,30 (s, 3H), 7,00-7,20 (m, 8H), 7,87 (d, J= 6 ,8 Hz, 1H), 8,50 (d, J= 6 ,8 Hz, 1H), 8,67 (s, 1H). [M+H] Calculado para C26H29N5O2, 444; Encontrado, 444.
Preparación 116A: 1-bromo-2-(2-metil-aliloxi)-4-nitro-benceno
Figure imgf000109_0001
A una solución de 2-bromo-5-nitro-fenol (0,5 g, 2,3 mmol) en acetona (20 ml) se añadió 3-bromo-2-metil-propeno (465 mg, 3,4 mmol) y K2CO3 (633 mg, 4,6 mmol) y la mezcla se sometió a reflujo durante toda la noche. La mezcla de reacción se enfrió hasta RT y el solvente se concentró. El residuo se disolvió en EA, se lavó con agua, se lavó con salmuera. Los orgánicos se concentraron y purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (EA: PE, 1:20) para dar 0,5 g (80 %) del compuesto del título. [M H] Calculado para C^H^BrNO 3, 271; Encontrado, 271.
Preparación 116B: éster terc-butílico del ácido [4-bromo-3-(2-metil-aliloxi)-fenil]-carbámico
Figure imgf000109_0002
A una solución de 1-bromo-2-(2-metil-aliloxi)-4-nitro-benceno (3,1 g, 114 mmol) en metanol (100 ml) se le añadió polvo de hierro (1,95 g, 343 mmol) y NH4Cl (2,0 g, 37 mmol), y la mezcla se sometió a reflujo durante toda la noche, el solvente se concentró. El residuo se ajustó con NaHCO3 acuoso a PH~8 , se extrajo con EA (3x). Los orgánicos combinados se secaron y se concentraron. El residuo se disolvió en THF (50 ml), se añadieron (Boc)2O (3,0 g, 137 mmol) y TEA (2,5 g, 228 mmol), y la mezcla se sometió a reflujo durante toda la noche. La mezcla de reacción se enfrió hasta RT y el solvente se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (EA:PE, 1:20) para dar 3,0 g (77 %) del compuesto del título. [M H] Calculado para C i5H20BrNO3, 342; Encontrado, 342.
Preparación 116C: éster terc-butílico del ácido (3,3-dimetil-2,3-dihidro-benzofuran-6-il)-carbámico
Figure imgf000109_0003
A una solución de éster terc-butílico del ácido [4-bromo-3-(2-metil-aliloxi)-fenil]-carbámico (340 mg, 1 mmol) en tolueno (10 ml) se le añadió AIBI (16,5 mg, 0,1 mmol) e hidruro de tributilestaño (360 mg, 1,2 mmol), y la mezcla se agitó durante toda la noche a 110 °C. La mezcla de reacción se enfrió hasta RT, se añadieron EA y solución de KF al 10 % y la mezcla se agitó durante 2 h. La capa orgánica se lavó con agua, se lavó con salmuera y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA, 20:1) para dar 150 mg (57 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C15H21NO3, 264; Encontrado, 264.
Preparación 116D: (3,3-dimetil-2,3-dihidro-benzofuran-6-il)-metil-amina
Figure imgf000109_0004
A una solución de éster terc-butílico del ácido (3,3-dimetil-2,3-dihidro-benzofuran-6-il)-carbámico (1,0 g, 3,8 mmol) en DMF (10 ml) se añadió NaH (0,23 g, 5,7 mmol) a 0 °C, y la mezcla se agitó durante 30 min a 0 °C. Se añadió CH3I (0,65 g, 4,5 mmol) y la mezcla se agitó a RT durante 2 h, se inactivó con NH4Cl acuoso y se extrajo con EA (3x). Los orgánicos combinados se lavaron con agua, se lavaron con salmuera, se secaron y se concentraron. El residuo se disolvió en DCM (10 ml), se añadió TFA (2 ml) y la mezcla se agitó a RT durante 1 h. Los orgánicos se concentraron y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (EA:PE, 1:20) para dar 600 mg (94 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para Ch Hi5NO, 178; Encontrado, 178.
Preparación 116E: 4-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-benzofuran-6-il)-metil-amino]-fenol
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Una solución de (3,3-dimetil-2,3-dihidro-benzofuran-6-il)-metil-amina (300 mg, 1,7 mmol), 1-benciloxi-4-bromobenceno (535 mg, 2,0 mmol), S-Phos (35 mg, 0,085 mmol), Pd2(dba)3 (80 mg, 0,085 mmol), t -BuOK (475 mg, 4,25 mmol) en tolueno (10 ml) se sometió a reflujo durante toda la noche bajo atmósfera de nitrógeno. El solvente se concentró y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (EA:PE, 1:20) para dar (4-benciloxi-fenil)-(3,3-dimetil-2,3-dihidro-benzofuran-6-il)-metil-amina (600 mg, 99 %). Este producto protegido con bencilo se disolvió a su vez en THF/MeOH y se añadió Pd/C (50 mg). La mezcla se agitó durante toda la noche a RT en atmósfera de H2. La mezcla se filtró sobre celite y el filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (EA:PE, 1:10) para dar 430 mg (94 %) del compuesto del título. [M+H] Calculado para C17H19NO2, 270; Encontrado, 270.
Ejemplo 116: (3,3-dimetil-2,3-dihidro-benzofuran-6-il)-metil-[4-(4-metil-pirido [3,4-d]pirimidin-2-iloxi)-fenil]-amina
Figure imgf000110_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 48 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y N-(4-hidroxi-fenil)-N-metil-2-fenil-acetamida de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-da): 51,26 (s, 6 H), 3,22 (s, 3H), 4,19 (s, 2H), 6,46-6,57 (m, 2H), 6,97 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 7,19 (d, J = 10,8 Hz, 2H), 7,86 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 8,69 (s, 1H), 13,04 (s, 1H). [M+H] Calculado para C22H18N4O3, 387; Encontrado, 387.
Preparación 117A: 4-(benciloxi)-N-(4-isopropilfenil)anilina
Figure imgf000110_0003
Una mezcla de 4-(benciloxi)anilina (7,8 g, 39,03 mmol), 1-bromo-4-isopropilbenceno (8,5 g, 42,93 mmol), X-Phos (2,3 g, 4,68 mmol), Pd(OAc)2 (0,53 g, 2,34 mmol) y CS2CO3 (50,9 g, 156,12 mmol) en tolueno (150 ml) se purgó con N2 y luego se sometió a reflujo durante toda la noche. La mezcla de reacción se enfrió hasta RT y se filtró. El filtrado se concentró y se purificó mediante cromatografía en columna de sílice (PE:EA, 20:1) para dar 7,1 g (57 %) del compuesto del título. 1H NMR (CDCh, 300 MHz): 51,23 (d, J= 6,9 Hz, 6 H), 2,77-2,92 (m, 1H), 5,04 (s, 2H), 6,87-6,94 (m, 4H), 7,01-7,04 (m, 2H), 7,08-7,10 (m, 2H), 7,31-7,46 (m, 5H). [M+H] Calculado para C22H23NO, 318; Encontrado, 318.
Preparación 117B: 4-(benciloxi)-N-etil-N-(4-isopropilfenil)anilina
Figure imgf000110_0004
A una solución del compuesto 4-(benciloxi)-N-(4-isopropilfenil)anilina (0,5 g, 1,58 mmol) en DMF (5 ml) se le añadió NaH (189 mg, 4,73 mmol) y la mezcla se agitó a 0° C durante 30 min. Luego se añadió yodoetano (761 mg, 4.9 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante toda la noche a RT. La mezcla se inactivó con una solución acuosa de NH4Cl y se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (3 x 10 ml), se lavaron con salmuera (10 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para dar 350 mg (64 %) del compuesto del título como un líquido marrón. 1H NMR (CDCh, 300 MHz): 5 1,19 (t, J= 6,9 Hz, 3H), 1,22 (d, J = 6.9 Hz, 6 H), 2,76-2,90 (m, 1H), 3,69 (q, J = 6,9 Hz, 2H), 5,06 (s, 2H), 6,72-6,76 (m, 2H), 6,93-6,98 (m, 2H), 7,00-7,08 (m, 4H), 7,31-7,47 (m, 5H). [M+H] Calculado para C24H27NO, 346; Encontrado, 346.
Preparación 117C: 4-(etil(4-isopropilfenil)amino)fenol
Figure imgf000111_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 85 % a partir de 4-(benciloxi)-N-etil-N-(4-isopropilfenil)anilina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 26B. [M+H] Calculado para C17H21NO, 256; Encontrado, 256.
Ejemplo 117: 2-(4-(etil(4-isopropilfenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000111_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 5 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol y 4-(etil(4-isopropilfenil)amino)fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 5 1,23-1,28 (m, 9H), 2,87-2,94 (m, 1H), 3,77 (q, J= 6 ,8 Hz, 2H), 6,88 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 7,05-7,11 (m, 4H), 7,20 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 8,01 (brs, 1H), 8,59 (brs, 1H), 8,93 (s, 1H), 9,69 (brs, 1H). [M+H] Calculado para C24H24N4O2, 401; Encontrado, 401.
Preparación 118A: N-(4-isopropilfenil)tetrahidro-2H-piran-4-amina
Figure imgf000111_0003
A una solución del compuesto 4-isopropilanilina (1,0 g, 7,4 mmol), dihidro-2H-piran-4(3H)-ona (1,5 g, 14,8 mmol) en DMF (10 ml) se le añadió AcOH (2 ml). Después de agitar a RT durante 30 min, la mezcla de reacción se enfrió hasta 0 °C y se añadió lentamente triacetoxiborohidruro de sodio (3,2 g, 14,8 mmol). La mezcla se agitó a RT durante 2 h y luego se enfrió hasta 0 °C, se inactivó con una solución de Na2CO3 y se extrajo con EA (2 x 20 ml). Los orgánicos combinados se lavaron con agua (2 x 10 ml), se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de sílice (PE:EA = 10: 1) para dar 1,5 g (93 %) del compuesto del título como un aceite incoloro. 1H NMR (CDCh, 300 MHz): 51,20 (d, J = 7,2 Hz, 6 H), 1,39­ 1,53 (m, 2H), 2,00-2,05 (m, 2H), 2,75-2,85 (m, 1H), 3,41-3,55 (m, 3H), 3,96-4,03 (m, 2H), 6,57 (d, J= 8,4 Hz, 2H), 7,04 (d, J= 8,4 Hz, 2H). [M+H] Calculado para C14H21NO, 220; Encontrado, 220.
Preparación 118B: 4-((4-isopropilfenil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)fenol
Figure imgf000112_0001
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 30 % a partir de N-(4-isopropilfenil)tetrahidro-2H-piran-4-amina de acuerdo con el procedimiento de la preparación 5A. [M+H] Calculado para C20H2SNO2, 312; Encontrado, 312.
Ejemplo 118: 2-(4-((4-isopropilfenil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol
Figure imgf000112_0002
El compuesto del título se preparó con un rendimiento del 8 % a partir de 2-cloro-pirido[3,4-d] pirimidin-4-ol y 4-((4-isopropilfenil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)fenol de acuerdo con el procedimiento para la preparación del Ejemplo 1. 1H NMR (400 MHz, CDCla): 5 1,28 (d, J = 6,8 Hz, 6 H), 1,54-1,66 (m, 2H), 1,91-1,92 (m, 2H), 2,90-2,97 (m, 1H), 3,50-3,57 (m, 2H), 4,01-4,12 (m, 3H), 6,71 (d, J= 9,2 Hz, 2H), 6,97 (d, J= 8,4 Hz, 2H), 7,08 (d, J= 9,2 Hz, 2H), 7,24 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 8,02 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,58 (d,. J = 4,8 Hz, 1H), 8,90 (s, 1H), 9,09 (brs, 1H). [M+H] Calculado para C27H28N4O3, 457; Encontrado, 457.
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II. Evaluación biológica
Ejemplo 1: Ensayo de inhibición enzimática in vitro
Este ensayo determina la capacidad de un compuesto de prueba para inhibir la actividad de la desmetilasa JMJD2C. Se adquirió JMJD2C expresada en baculovirus (número de acceso a GenBank BC 143571, AA 2-372) de BPS Bioscience (Cat # 50105).
Ensayo de JMJD2C
La capacidad de los compuestos de prueba para inhibir la actividad de JMJD2C se determinó en formato de placa de 384 pocillos en las siguientes condiciones de reacción: JMJD2C 0,3 nM, péptido H3K9me3 marcado con biotina 300 nM (Anaspec cat # 64360), ácido alfa-cetoglutárico 2 |j M en tampón de ensayo de HEPES 50 mM, pH 7,3, Brij35 al 0,005 %, TCEP 0,5 mM, BSA 0,2 mg/ml, L-ascorbato de sodio 50 j M y sulfato de hierro (II) amonio 2 j M. El producto de reacción se determinó cuantitativamente mediante TR-FRET después de la adición del reactivo de detección Phycolink estreptavidina-aloficocianina (Prozyme) y anticuerpo anti-histona H3 lisina 9 dimetilada (H3K9me2) con Europio (PerkinElmer) en presencia de EDTA 5 mM en tampón de detección LANCE (PerkinElmer) a una concentración final de 50 nM y 1 nM, respectivamente.
La reacción del ensayo se inició mediante lo siguiente: se añadieron 2 j l de la mezcla de péptido H3K9me3 marcado con biotina 900 nM y ácido alfa-cetoglutárico 6 j M con 2 j l de inhibidor diluido en serie de 11 puntos en DMSO al 3 % a cada pocillo de la placa, seguido de la adición de 2 j l de JMJD2C 0,9 nM para iniciar la reacción. La mezcla de reacción se incubó a temperatura ambiente durante 30 min y se terminó mediante la adición de 6 j l de EDTA 5 mM en tampón de detección LANCE que contenía Phycolink estreptavidina-aloficocianina 100 nM y anticuerpo anti-H3K9me2 con Europio 2 nM. Las placas se leyeron mediante el lector EnVisionMultilabel en modo TR-FRET (excitación a 320 nm, emisión a 615 nm y 665 nm) después de 1 h de incubación a temperatura ambiente. Se calculó una relación (665/615) para cada pocillo y se ajustó para determinar la constante de inhibición (IC50).
Se cuantificó la capacidad de los compuestos que se describen en la presente descripción para inhibir la actividad de desmetilasa y se determinó el respectivo valor de IC50. La tabla 3 proporciona los valores de IC50 celulares de diversos compuestos descritos en la presente descripción.
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Ejemplo 2: Ensayo basado en células in vitro
El ensayo celular primario para la inhibición de JMJD2C es un ensayo que mide la proliferación celular mediante la incorporación de bromodesoxiuridina (BrdU) después de 168 h de incubación del compuesto. Las líneas celulares probadas incluyen la línea celular KYSE-150 con el gen JMJD2C amplificado. Este es un ensayo ELISA cuantitativo que mide la incorporación de BrdU en el ADN durante la fase S como una lectura directa de la proliferación celular.
Principio del ensayo: Esto es un inmunoensayo colorimétrico para la cuantificación de la proliferación celular. Las células tratadas durante 168 h con los compuestos de prueba se analizan para determinar su capacidad para pasar a través de la fase S como una medida de su potencial proliferativo.
Método de ensayo: La línea celular de carcinoma de esófago KYSE-150 humana (SMAD4 mut, TP53 mut) se sembró a 2000 células/pocillo en una placa tratada de cultivo de tejidos de 96 pocillos. Después de una incubación durante toda la noche, las células se trataron con el compuesto en una serie de diluciones de 11 puntos con concentraciones finales en el intervalo de 100 pM a 2 nM. A continuación, las células se incubaron en presencia del compuesto durante 168 h. Después de la incubación del compuesto, las células se analizaron mediante el uso de un ELISA de proliferación celular con BrdU (Roche). Las células se incubaron primero con el reactivo de marcaje BrdU durante 2 h. Después de 2 h, las células incorporadas con BrdU se fijaron y desnaturalizaron, se probaron con un anticuerpo anti-BrdU-peroxidasa durante 1,5 h y se lavaron. Finalmente, se añadió un sustrato de tetrametilbencidina peroxidasa a cada pocillo durante 15 min. seguido de una solución de parada de H2SO4. La placa se leyó a 450 nm y los datos de densidad óptica sin procesar se transfirieron a XLFit (IDBS) para el cálculo de 1C50 mediante el uso de la fórmula: fit = (D+((Vmax*(xAn))/((xAn)+(Km"n)))).
La tabla 4 proporciona los valores de IC50 celulares de diversos compuestos descritos en la presente descripción.
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Ejemplo 3: Estudio xenográfico in vivo
Los gránulos de liberación prolongada que contienen 0,72 mg de 17-p Estradiol se implantan subcutáneamente en ratones nu/nu. Las células Mc F-7 se cultivan en RPMI que contiene FBS al 10 % en CO2 al 5 %, 37 °C. Las células se centrifugan y se resuspenden en RPMI al 50 % (sin suero) y Matrigel al 50 % a 1X107 células/ml. Las células MCF-7 se inyectan por vía subcutánea (100 jil/animal) en el costado derecho, 2-3 días después de la implantación de los gránulos y el volumen del tumor (longitud x anchura2/2) se controla cada dos semanas. Cuando los tumores alcanzan un volumen promedio de ~200 mm3, los animales se asignan al azar y se inicia el tratamiento. Los animales se tratan con el vehículo o el compuesto diariamente durante 4 semanas. El volumen del tumor y el peso corporal se controlan cada dos semanas durante todo el estudio. Al final del período de tratamiento, se toman muestras del plasma y el tumor para los análisis farmacocinéticos y farmacodinámicos, respectivamente.
III. Preparación de formas de dosificación farmacéuticas
Ejemplo 1: Comprimido oral
Se prepara un comprimido mediante la mezcla del 48 % en peso de un compuesto de la Fórmula (I) o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, el 45 % en peso de celulosa microcristalina, el 5 % en peso de hidroxipropilcelulosa de baja sustitución y el 2 % en peso del estearato de magnesio. Los comprimidos se preparan por compresión directa. El peso total de los comprimidos se mantiene a 250-500 mg.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    Un compuesto derivado de pirido[3,4-d]pirimidin-4-ona sustituido seleccionado del grupo que consiste en:
    2-(4-((4-isopropilfenil)(1-metilpiperidin-4-il)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-((4-isopropilfenil)(propil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-((4-isopropilfenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-(isopropil(4-isopropilfenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-(isobutil(4-isopropilfenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-((4-isopropilfenil)(1-metilpiperidin-3-il)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-(ciclopentil(4-isopropilfenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-((4-isopropil1^enil)(pirrolidin-3-il)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-((4-isopropilfenil)(1-metilpirrolidin-3-il)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-(5-metilindolin-1-il)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-(5-metil-1H-indol-1-il)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-((4-isopropilfenil)(piperidin-3-il)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-((4-isopropilfenil)(metil)amino)-3-metilfenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-((3-(4-isopropilpiperazin-1-il)fenil)(metil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-(metil(3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-3-(trifluorometil)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(3-metil-4-(metil(3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-((4-etil-3-metoxifenil)(metil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-(metil(3-(4-metilpiperazin-1-il)-4-(2,2,2-trifluoroetoxi)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol; 2-(4-((4-etil-2-metoxifenil)(metil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-((3-(4-etilpiperazin-1-il)fenil)(metil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-(metil(3-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-(metil(3-(1-metilpiperidin-4-il)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-(etil(3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-((ciclopropilmetil)(3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-((4-isopropilfenil)(metil)amino)-3-(trifluorometil)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-((4-etilfenil)(metil)amino)-3-metilfenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-((2-metoxi-5-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)(metil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-((2-etoxi-5-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)(metil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-(metil(2-metil-5-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol;
    2-(4-((4-(terc-butil)fenil)(metil)amino)-3-metilfenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol; y
    2-(3-metil-4-(metil(4-propilfenil)amino)fenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol.
    Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1.
    El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 2 para usar en la terapia del cáncer.
    El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 2 para usar en la terapia del cáncer de próstata, el cáncer de mama, el cáncer de vejiga, el cáncer de pulmón y/o el melanoma.
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