ES2914333T3 - Compuestos de 1,3,4-tiadiazol y su uso para tratar cáncer - Google Patents

Compuestos de 1,3,4-tiadiazol y su uso para tratar cáncer Download PDF

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Abstract

Un compuesto de Fórmula (I): **(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: Q es 1,2,4-triazin-3-ilo, piridazin-3-ilo, 6-metilpiridazin-3-ilo, o 6-fluoropiridazin-3-ilo; R1 es metoxi, trifluorometoxi, oxetan-3-ilo, 3-fluoroazetidin-1-ilo, 3-metoxiazetidin-1-ilo, o 3,3-difluoroazetidin-1-ilo; R2 es hidrógeno o fluoro; R3 es hidrógeno o metoxi; y R4 es metoxi, etoxi, o metoximetilo; con la condición de que cuando R1 es metoxi o trifluorometoxi, entonces R3 no es hidrógeno, y/o R4 es metoximetilo.

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos de 1,3,4-tiadiazol y su uso para tratar cáncer
CAMPO TÉCNICO
La memoria descriptiva se refiere generalmente a compuestos de 1,3,4-tiadiazol sustituidos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Estos compuestos actúan sobre la enzima glutaminasa 1 ("GLS1"), y, por tanto, la memoria descriptiva también se refiere al uso de tales compuestos y sales de los mismos para tratar o prevenir enfermedades mediadas por GLS1, incluyendo cáncer. Además, la memoria descriptiva se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden tales compuestos y sales; kits que comprenden tales compuestos y sales; métodos para fabricar tales compuestos y sales; intermedios útiles en la elaboración de tales compuestos y sales; y métodos para tratar enfermedades mediadas por GLS1, incluyendo cáncer, usando tales compuestos y sales.
ANTECEDENTES
La glutamina es el aminoácido plasmático más abundante y está involucrada en muchas vías promotoras del crecimiento. En particular, la glutamina está involucrada en la oxidación en el ciclo de los TCA y en el mantenimiento del equilibrio redox celular, y también proporciona nitrógeno para la síntesis de nucleótidos y aminoácidos (Curi et al., Front. Biosci. 2007, 12, 344-57; DeBerardinis y Cheng, Oncogene 2010, 313-324). Muchas células cancerosas dependen del metabolismo de la glutamina como consecuencia de cambios metabólicos en la célula, incluyendo el efecto Warburg, donde el piruvato glicolítico se convierte en ácido láctico en lugar de usarse para crear acetil CoA (Koppenol et al., Nature Reviews 2011, 11, 325-337). Como consecuencia de esta dependencia del metabolismo de la glutamina, tales células cancerosas son sensibles a cambios en los niveles de glutamina exógena. Además, las evidencias existentes sugieren que la glutaminólisis desempeña un papel fundamental en ciertos tipos de cáncer (Hensley et al., J. Clin. Invest. 2013, 123, 3678-3684), y está asociada a inductores oncogénicos conocidos tales como Myc (Dang, Cancer Res. 2010, 70, 859- 863).
La primera etapa del catabolismo de la glutamina a glutamato está catalizada por la glutaminasa, que existe como dos isoformas, GLS1 y GLS2, identificadas originalmente como expresadas en riñón e hígado, respectivamente. Se sabe que la glutaminasa renal (GLS1) se expresa más ubicuamente que la glutaminasa hepática (GLS2), y tiene 2 variantes de corte y empalme, KGA y la isoforma GAC más corta, ambas ubicadas en la mitocondria (Elgadi et al., Physiol. Genomics 1999, 1, 51-62; Cassago et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 2012, 109, 1092-1097). La expresión de GLS1 está asociada a crecimiento tumoral y neoplasia maligna en una serie de tipos de enfermedades (Wang et al., Cancer Cell 2010, 18, 207-219; van der Heuval et al., Cancer Bio. Ther. 2012, 13, 1185-1194). Los documentos de Patente WO2015101957, WO2013078123 y WO2015181539 desvelan compuestos de 1,3,4-tiadiazol sustituidos como inhibidores de GLS1. Por tanto, se espera que algunos inhibidores de GLS1 sean útiles en el tratamiento de cáncer, como monoterapia o en combinación con otros agentes anticáncer.
SUMARIO
En un aspecto, la invención proporciona un compuesto de Fórmula (I):
Figure imgf000002_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde:
Q es 1,2,4-triazin-3-ilo, piridazin-3-ilo, 6-metilpiridazin-3-ilo, o 6-fluoropiridazin-3-ilo;
R1 es metoxi, trifluorometoxi, oxetan-3-ilo, 3-fluoroazetidin-1-ilo, 3-metoxiazetidin-1-ilo, o 3,3-difluoroazetidin-1-ilo; R2 es hidrógeno o fluoro;
R3 es hidrógeno o metoxi; y
R4 es metoxi, etoxi, o metoximetilo;
con la condición de que cuando R1 es metoxi o trifluorometoxi, entonces R3 no es hidrógeno, y/o R4 es metoximetilo.
En otro aspecto, la invención proporciona un compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, seleccionado entre el grupo que consiste en:
(2R)-2-[4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; y
(2s)-2-[4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida.
En otro aspecto, una composición farmacéutica incluye un compuesto como se ha descrito anteriormente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto, se proporciona un compuesto como se ha descrito anteriormente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en terapia.
En otro aspecto, se proporciona un compuesto como se ha descrito anteriormente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento de cáncer.
También se describe el uso de un compuesto como se ha descrito anteriormente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer.
También se describe un método para tratar cáncer en un animal de sangre caliente que necesita tal tratamiento, incluyendo el método administrar, al animal de sangre caliente, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto como se ha descrito anteriormente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otros aspectos serán evidentes a partir de la memoria descriptiva y las reivindicaciones.
DESCRIPCIÓN DETALLADA
A lo largo de la memoria descriptiva se detallan muchas realizaciones y serán evidentes para un lector experto en la materia. La invención no debe interpretarse como limitada a cualquier realización o realizaciones particulares de la misma.
Se proporciona un compuesto de Fórmula (I):
Figure imgf000003_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde:
Q es 1,2,4-triazin-3-ilo, piridazin-3-ilo, 6-metilpiridazin-3-ilo, o 6-fluoropiridazin-3-ilo;
R1 es metoxi, trifluorometoxi, oxetan-3-ilo, 3-fluoroazetidin-1-ilo, 3-metoxiazetidin-1-ilo, o 3,3-difluoroazetidin-1-ilo; R2 es hidrógeno o fluoro;
R3 es hidrógeno o metoxi; y
R4 es metoxi, etoxi, o metoximetilo;
con la condición de que cuando R1 es metoxi o trifluorometoxi, entonces R3 no es hidrógeno, y/o R4 es metoximetilo. Los anillos de 1,2,4-triazin-3-ilo, piridazin-3-ilo, 6-metilpiridazin-3-ilo, y 6-fluoropiridazin-3-ilo tienen las siguientes estructuras:
Figure imgf000004_0001
Los anillos de oxetan-3-ilo, 3-fluoroazetidin-l-ilo, 3-metoxiazetidin-l-ilo, y 3,3-difluoroazetidin-l-ilo tienen las siguientes estructuras:
Figure imgf000004_0002
En algunas realizaciones, el compuesto de Fórmula (I) tiene la siguiente Fórmula (Ia):
Figure imgf000004_0003
en donde Q, R1, R2, R3, y R4 son como se han definido anteriormente.
También se proporciona un compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, seleccionado entre el grupo que consiste en:
(2R)-2-[4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; y
(2s)-2-[4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida.
La expresión "farmacéuticamente aceptable" se usa para especificar que un objeto (por ejemplo una sal, forma de dosificación, diluyente o vehículo) es adecuado para uso en pacientes. Una lista a modo de ejemplo de sales farmacéuticamente aceptables puede encontrarse en Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, P. H. Stahl y C. G. Wermuth, editores, Weinheim/Zürich: Wiley-VCH/VHCA, 2002. Una sal farmacéuticamente aceptable adecuada de un compuesto de Fórmula (I) es, por ejemplo, una sal de adición de ácido. Una sal de adición de ácido de un compuesto de Fórmula (I) puede formarse poniendo el compuesto en contacto con un ácido inorgánico u orgánico adecuado en condiciones conocidas por la persona experta. Una sal de adición de ácido puede formarse usando, por ejemplo, un ácido inorgánico tal como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, y ácido fosfórico. Una sal de adición de ácido también puede formarse usando, por ejemplo, un ácido orgánico tal como ácido trifluoroacético, ácido metanosulfónico, o ácido bencenosulfónico.
Por tanto, en una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido trifluoroacético, ácido metanosulfónico, o ácido bencenosulfónico.
En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de ácido clorhídrico o ácido bromhídrico.
Una sal farmacéuticamente aceptable adecuada adicional de un compuesto de Fórmula (I) es una sal de adición de base. Una sal de adición de base de un compuesto de Fórmula (I) puede formarse poniendo el compuesto en contacto con una base inorgánica u orgánica adecuada en condiciones conocidas por la persona experta. Por ejemplo, una sal de adición de base puede formarse usando, por ejemplo, una base inorgánica tal como un hidróxido de metal alcalino (tal como hidróxido sódico, potásico, o de litio) o un hidróxido de metal alcalinotérreo (tal como hidróxido cálcico o hidróxido de magnesio). Una sal de adición de base también puede formarse usando, por ejemplo, una base orgánica tal como metilamina, dimetilamina, trimetilamina, piperidina, morfolina, o tris-(2-hidroxietil)amina.
Por tanto, en una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de hidróxido sódico, hidróxido potásico, hidróxido de litio, hidróxido cálcico, hidróxido de magnesio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, piperidina, morfolina, o tris-(2-hidroxietil)amina.
En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido trifluoroacético, ácido metanosulfónico, ácido bencenosulfónico, hidróxido sódico, hidróxido potásico, hidróxido de litio, hidróxido cálcico, hidróxido de magnesio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, piperidina, morfolina, o tris-(2-hidroxietil)amina.
Una realización adicional proporciona cualquiera de las realizaciones definidas en el presente documento (por ejemplo, la realización de la reivindicación 1) con la condición de que se supriman individualmente uno o más Ejemplos específicos (por ejemplo uno, dos o tres Ejemplos específicos, o alternativamente un Ejemplo específico) seleccionados entre el grupo que consiste en los Ejemplos 1(a), 1(b), 2(a), 2(b), 3(a), 3(b), 4(a), 4(b), 5(a), 5(b), 6(a), 6(b), 7(a), 7(b), 8(a), 8(b), 9(a), 9(b), 10(a), 10(b), 11(a), 11(b), 12(a), 12(b), 13(a), 13(b), 14(a), 14(b), 15(a), 15(b), 16(a), 16(b), 17(a), 17(b), 18(a), 18(b), 19(a), 19(b), 20(a), 20(b), 21(a), 21 (b), 22(a), 22(b), 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45(a), 45(b), 46(a), 46(b), 47(a), 47(b), 48(a), 48(b), 49(a), 49(b), 50(a), 50(b), 51(a), 51(b), 52(a), 52(b), 53(a), 53(b), 54(a), y 54(b).
Algunos valores de grupos variables en la Fórmula (I) son como sigue a continuación. Tales valores pueden usarse en combinación con cualquiera de las definiciones, reivindicaciones (por ejemplo, reivindicación 1), o realizaciones definidas en el presente documento para proporcionar realizaciones adicionales.
R1 puede ser metoxi o trifluorometoxi.
R1 puede ser metoxi y R3 puede ser metoxi.
R1 puede ser oxetan-3-ilo, 3-fluoroazetidin-1-ilo, 3-metoxiazetidin-1-ilo, o 3,3-difluoroazetidin-1-ilo.
R1 puede ser oxetan-3-ilo.
R1 puede ser 3-fluoroazetidin-1-ilo.
R1 puede ser 3-metoxiazetidin-1-ilo.
R1 puede ser 3,3-difluoroazetidin-1-ilo.
R2 puede ser H.
R2 puede ser fluoro.
R3 puede ser metoxi.
R4 puede ser metoxi o etoxi.
R4 puede ser metoxi.
R4 puede ser metoximetilo.
Q puede ser 1,2,4-triazin-3-ilo o piridazin-3-ilo.
Q puede ser 1,2,4-triazin-3-ilo.
Q puede ser piridazin-3-ilo.
Q puede ser 6-metilpiridazin-3-ilo o 6-fluoropiridazin-3-ilo.
Q puede ser 6-metilpiridazin-3-ilo.
Q puede ser 6-fluoropiridazin-3-ilo.
Se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde:
Q es 1,2,4-triazin-3-ilo, piridazin-3-ilo, 6-metilpiridazin-3-ilo, o 6-fluoropiridazin-3-ilo;
R1 es metoxi, trifluorometoxi, oxetan-3-ilo, 3-fluoroazetidin-1-ilo, 3-metoxiazetidin-1-ilo, o 3,3-difluoroazetidin-1-ilo; R2 es hidrógeno o fluoro;
R3 es hidrógeno o metoxi; y
R4 es metoxi, etoxi, o metoximetilo;
con la condición de que cuando R1 es metoxi o trifluorometoxi, entonces R3 no es hidrógeno, y/o R4 es metoximetilo.
En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde:
Q es piridazin-3-ilo; y
R1 es metoxi o trifluorometoxi.
En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde:
Q es piridazin-3-ilo; y
R1 es oxetan-3-ilo, 3-fluoroazetidin-1-ilo, 3-metoxiazetidin-1-ilo, o 3,3-difluoroazetidin-1-ilo.
En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde:
Q es piridazin-3-ilo;
R1 es metoxi; y
R3 es metoxi.
En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde:
Q es 6-metilpiridazin-3-ilo o 6-fluoropiridazin-3-ilo; y
R1 es 3-fluoroazetidin-1-ilo, 3-metoxiazetidin-1-ilo, o 3,3-difluoroazetidin-1-ilo.
En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en:
(2S)-2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-2-(3,5-dimetoxifenil)-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-2-[3-(3,3-difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-2-(3,5-dimetoxifenil)-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2R)-3-metoxi-2-(3-metoxifenil)-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]propanamida; (2s)-2-(3,5-dimetoxifenil)-2-etoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-2-[4-fluoro-3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[(3R)-3-(piridazin-3-ilamino)pirrolidin-1-il]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-W-[5-[[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]acetamida;
(2s)-2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)-5-metoxi-fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-2-metoxi-2-[3-metoxi-5-(trifluorometoxi)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2R)-2-metoxi-2-[3-metoxi-5-(trifluorometoxi)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-2-(4-fluorofenil)-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(5-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2s)-2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2S)-2-[4-fluoro-3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-iljacetamida;
(2s)-2-[3-(3,3-difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2S)-2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; y
(2s)-2-metoxi-2-[3-(oxetan-3-il)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida. En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en:
(2R)-2-[4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; y
(2s)-2-[4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida.
Algunos compuestos y sales descritos en la presente memoria descriptiva pueden existir en formas solvatadas y formas no solvatadas. Por ejemplo, una forma solvatada puede ser una forma hidratada, tal como un hemihidrato, un monohidrato, un dihidrato, un trihidrato o una cantidad alternativa de las mismas. La presente invención abarca todas estas formas solvatadas y no solvatadas de los compuestos de Fórmula (I).
Algunos átomos de los compuestos y sales descritos en la presente memoria descriptiva pueden existir en diferentes formas isotópicas. La presente invención abarca todas las formas isotópicas de los compuestos de Fórmula (I), incluyendo un carbono 11C o 13C y un hidrógeno 1H, 2H (deuterio) o 3H (tritio).
Algunos compuestos y sales descritos en la presente memoria descriptiva pueden existir como una mezcla de tautómeros. Los "tautómeros" son isómeros estructurales que existen en equilibrio que resultan de la migración de un átomo de hidrógeno. La presente invención incluye todos los tautómeros de los compuestos de Fórmula (I).
Algunos compuestos de Fórmula (I) pueden prepararse en diferentes formas diastereoméricas. La presente invención incluye todas las formas diastereoméricas de los compuestos de Fórmula (I).
En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que es un diastereómero con un exceso diastereomérico (% de) > 95 %, > 98 % o > 99 %. En una realización, el diastereómero individual está presente con un exceso diastereomérico (% de) > 99 %.
Se espera que los compuestos que se cree que inhiben GLS1, es decir, los compuestos de Fórmula (I), y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, sean útiles en terapia, por ejemplo en el tratamiento de enfermedades o afecciones médicas mediadas, al menos en parte, por GLS1, incluyendo cáncer.
Cuando se menciona "cáncer", éste incluye tanto cáncer no metastásico así como cáncer metastásico, de modo que tratar el cáncer implica el tratamiento tanto de tumores primarios como también de metástasis tumorales.
En una realización el cáncer es cáncer metastásico.
En una realización el cáncer es cáncer no metastásico.
"Actividad inhibitoria de GLS1" se refiere a una disminución de la actividad de GLS1 como respuesta directa o indirecta a la presencia de un compuesto de Fórmula (I), o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, con respecto a la actividad de GLS1 en ausencia de compuesto de Fórmula (I), o sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Tal disminución de la actividad puede deberse a la interacción directa del compuesto de Fórmula (I), o sal farmacéuticamente aceptable del mismo con GLS1, o puede deberse a la interacción del compuesto de Fórmula (I), o sal farmacéuticamente aceptable del mismo con uno u otros factores más que a su vez influyen en la actividad de GLS1. Por ejemplo, el compuesto de Fórmula (I), o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, puede disminuir GLS1 al unirse directamente a GLS1; haciendo que (directa o indirectamente) otro factor disminuya la actividad de GLS1; o disminuyendo (directa o indirectamente) la cantidad de GLS1 presente en la célula u organismo.
El término "terapia" pretende tener su significado normal de tratar una enfermedad o corregir o compensar la patología subyacente. El término "terapia" también incluye "profilaxis", a menos que haya indicaciones específicas al contrario. Los términos "terapéutico" y "terapéuticamente" deberían interpretarse de manera correspondiente.
La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad de un compuesto de Fórmula (I), como se describe en cualquiera de las realizaciones en el presente documento, que es eficaz para proporcionar terapia a un sujeto. En el caso del cáncer, la cantidad terapéuticamente eficaz puede causar cualquiera de los cambios observables o medibles en un sujeto, como se ha descrito anteriormente en la definición de "terapia", "tratamiento" y "profilaxis". Por ejemplo, la cantidad eficaz puede reducir el número de células cancerosas o tumorales; reducir el tamaño tumoral global; inhibir o parar la infiltración de células tumorales en órganos periféricos incluyendo, por ejemplo, tejido blando y hueso; inhibir y parar metástasis tumorales; inhibir y parar el crecimiento tumoral; aliviar, en cierta medida, uno o más de los síntomas asociados al cáncer; reducir morbidez y mortalidad; mejorar la calidad de vida; o una combinación de tales efectos. Una cantidad eficaz puede ser una cantidad suficiente para disminuir los síntomas de una enfermedad sensible a la inhibición de la actividad de GLS1. Para terapia frente al cáncer, la eficacia in vivo puede medirse, por ejemplo, evaluando la duración de la supervivencia, tiempo transcurrido hasta progresión de la enfermedad (TTP), las tasas de respuesta (RR), duración de la respuesta, y/o calidad de vida. Como reconocen los expertos en la materia, las cantidades eficaces pueden variar dependiendo de la vía de administración, uso de excipiente, y uso simultáneo con otros agentes. Por ejemplo, cuando se usa una terapia de combinación, la cantidad del compuesto de Fórmula (I) o sal farmacéuticamente aceptable que se describe en la presente memoria descriptiva y la cantidad del otro u otros agentes farmacéuticamente activos son, cuando se combinan, eficaces conjuntamente para tratar un trastorno dirigido en el paciente animal. En este contexto, las cantidades combinadas están en una "cantidad terapéuticamente eficaz" si, cuando se combinan, son suficientes para disminuir los síntomas de una enfermedad sensible a inhibición de la actividad de GLS1 como se ha descrito anteriormente. Por lo general, un experto en la materia puede determinar tales cantidades, por ejemplo, partiendo del intervalo de dosificaciones que se describe en la presente memoria descriptiva para el compuesto de Fórmula (I) o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un intervalo o intervalos de dosificaciones aprobados o de otro modo publicados del otro u otros compuestos farmacéuticamente activos.
El término "profilaxis" pretende tener su significado normal e incluye profilaxis primaria para prevenir el desarrollo de la enfermedad y profilaxis secundaria cuando la enfermedad ya se ha desarrollado y el paciente está protegido temporal o permanentemente frente a exacerbación o empeoramiento de la enfermedad.
El término "tratamiento" se usa de forma sinónima con "terapia". De forma análoga, el término "tratar" puede contemplarse como aplicar terapia, donde "terapia" es como se ha definido en el presente documento.
En una realización se proporciona una composición farmacéutica que incluye el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable. En una realización, la composición farmacéutica incluye un compuesto de Fórmula (I) como base libre. En otra realización, la composición farmacéutica incluye a una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de Fórmula (I).
En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en terapia.
En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento de cáncer.
En una realización se proporciona el uso del compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer.
En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento de una enfermedad mediada por GLS1. En una realización, la enfermedad mediada por GLS1 es cáncer. En algunas realizaciones, el cáncer puede ser cáncer de mama (por ejemplo, cáncer de mama triple negativo), cáncer de pulmón (por ejemplo, cáncer de pulmón no microcítico), cáncer pancreático, cáncer renal, o cáncer hepatocelular.
"Cáncer de mama triple negativo" es cualquier cáncer de mama que no se expresa, o subexpresa, los genes para receptor de estrógenos, receptor de progesterona y Her2/neu.
En una realización se proporciona el uso del compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad mediada por GLS1. En una realización, la enfermedad mediada por GLS1 es cáncer. En algunas realizaciones, el cáncer puede ser cáncer de mama (por ejemplo, cáncer de mama triple negativo), cáncer de pulmón (por ejemplo, cáncer de pulmón no microcítico), cáncer pancreático, cáncer renal, o cáncer hepatocelular.
En una realización se proporciona el uso del compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer.
También se describe un método para inhibir GLS1 que incluye administrar un compuesto de Fórmula (I).
También se describe un método para tratar una enfermedad en la que la inhibición de GLS1 es beneficiosa en un animal de sangre caliente que necesita al tratamiento, que incluye administrar, al animal de sangre caliente, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Los "animales de sangre caliente" incluyen, por ejemplo, seres humanos.
También se describe un método para tratar cáncer en un animal de sangre caliente que necesita tal tratamiento, que incluye administrar, al animal de sangre caliente, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En algunas realizaciones, el cáncer puede ser cáncer de mama (por ejemplo, cáncer de mama triple negativo), cáncer de pulmón (por ejemplo, cáncer de pulmón no microcítico), cáncer pancreático, cáncer renal, o cáncer hepatocelular.
El tratamiento para cáncer descrito en la presente memoria descriptiva puede aplicarse como terapia única, o puede implicar, además de la administración del compuesto de Fórmula (I), cirugía convencional, radioterapia, o quimioterapia; o una combinación de tales terapias adicionales. Tal cirugía convencional, radioterapia, o quimioterapia puede administrarse de forma simultánea, secuencial, o separada al tratamiento con el compuesto de Fórmula (I).
Por tanto, en una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos una sustancia antitumoral adicional, para uso en el tratamiento de cáncer.
En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos una sustancia antitumoral adicional para uso en el tratamiento simultáneo, separado o secuencial de cáncer.
En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento de cáncer, donde el compuesto de Fórmula (I) se administra de forma simultánea, separada, o secuencial con al menos una sustancia antitumoral adicional.
También se describe un método para tratar cáncer en un animal de sangre caliente que necesita tal tratamiento, que incluye administrar, al animal de sangre caliente, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y al menos una sustancia antitumoral adicional, en donde las cantidades del compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y la sustancia antitumoral adicional son eficaces conjuntamente para producir un efecto anticáncer.
También se describe un método para tratar cáncer en un animal de sangre caliente que necesita tal tratamiento, que incluye administrar, al animal de sangre caliente, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y administrar, de forma simultánea, separada o secuencial, al menos una sustancia antitumoral adicional al animal de sangre caliente, en donde las cantidades del compuesto de Fórmula (I), o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y la sustancia antitumoral adicional son eficaces conjuntamente para producir un efecto anticáncer.
En cualquier realización, la sustancia antitumoral adicional es un taxano. En una realización, el taxano es paclitaxel. En una realización, el taxano es docetaxel.
En cualquier realización, la sustancia antitumoral adicional es una terapia de platino. En una realización, la terapia de platino es cisplatino, oxaliplatino, o carboplatino.
También se proporciona un kit que comprende:
a) un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en una primera forma de dosificación unitaria;
b) una segunda sustancia antitumoral en una segunda forma de dosificación unitaria;
c) un recipiente para contener la primera y la segunda formas de dosificación unitaria; y, opcionalmente, d) instrucciones de uso.
Los compuestos de Fórmula (I), y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, pueden administrarse como composiciones farmacéuticas, que comprenden uno o más diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables. Por consiguiente, en una realización se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
Las composiciones pueden estar en una forma adecuada para uso oral (por ejemplo, como comprimidos, pastillas para chupar, cápsulas duras o blandas, suspensiones acuosas u oleosas, emulsiones, polvos o gránulos dispersables, jarabes o elixires), para uso tópico (por ejemplo, como cremas, pomadas, geles, o soluciones o suspensiones acuosas u oleosas), para administración por inhalación (por ejemplo, como un polvo finamente dividido o un aerosol líquido), para administración por insuflación (por ejemplo, como un polvo finamente dividido) o para administración parenteral (por ejemplo, como una solución acuosa u oleosa estéril para dosificación intravenosa, subcutánea, intramuscular), o como supositorio. Las composiciones pueden obtenerse mediante procedimientos convencionales usando excipientes farmacéuticos convencionales. De ese modo, las composiciones destinadas a uso oral pueden contener, por ejemplo, uno o más agentes colorantes, edulcorantes, saborizantes, y/o conservantes.
En una realización se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable, para uso en terapia.
En una realización se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable, para uso en el tratamiento de cáncer. En algunas realizaciones el cáncer puede ser cáncer de mama (por ejemplo, cáncer de mama triple negativo), cáncer de pulmón (por ejemplo, cáncer de pulmón no microcítico), cáncer pancreático, cáncer renal, o cáncer hepatocelular.
El compuesto de Fórmula (I) se administrará normalmente a un animal de sangre caliente en una dosis unitaria en el intervalo de 5-5000 mg/m2 de área corporal del animal, es decir, aproximadamente 0,1-100 mg/kg, y esto proporciona normalmente una dosis terapéuticamente eficaz. Una forma de dosis unitaria tal como un comprimido o cápsula contendrá habitualmente, por ejemplo 1-250 mg de principio activo. La dosis diaria se variará necesariamente dependiendo del hospedador tratado, la vía de administración particular, cualquier terapia administrada conjuntamente, y la gravedad de la enfermedad que se está tratando. Por consiguiente, el facultativo que está tratando a cualquier paciente particular puede determinar la dosificación óptima.
Ejemplos
Las diversas realizaciones se ilustran mediante los siguientes Ejemplos. La invención no debe interpretarse como limitada a los Ejemplos.
Durante la preparación de los Ejemplos, generalmente:
a) las operaciones se realizaron a temperatura ambiente, es decir, en el intervalo de aproximadamente 17 a 30 °C y en una atmósfera de un gas inerte tal como nitrógeno, a menos que se indique de otro modo;
b) las evaporaciones se realizaron por evaporación rotatoria o utilizando el equipo Genevac al vacío y se realizaron procedimientos de tratamiento después de retirar residuos sólidos por filtración;
c) las purificaciones mediante cromatografía ultrarrápida se realizaron en un Isco Combiflash Companion automatizado usando columnas de sílice preempaquetadas Grace Resolve, y Rf Isco Combiflash (ultrarrápida en fase inversa) usando columnas RediSep Gold C18;
d) los rendimientos, cuando están presentes, no son necesariamente los máximos alcanzables;
e) las estructuras de los productos finales de Fórmula (I) se confirmaron por espectroscopía de resonancia magnética nuclear (RMN), con valores de desplazamiento químico de RMN medidos en la escala delta. Los espectros de resonancia magnética de protón se determinaron usando un instrumento Bruker Avance 700 (700 MHz), Bruker Avance 500 (500 MHz), Bruker 400 (400 MHz) o Bruker 300 (300 MHz); RMN 19F se determinó a 282 MHz o 376 MHz; RMN 13C se determinó a 75 MHz o 100 MHz; las mediciones se tomaron a aproximadamente 20 - 30 °C a menos que se especifique de otro modo; se usaron las siguientes abreviaturas: s, singlete; d, duplete; t, triplete; c, cuadruplete; m, multiplete; dd, duplete de dupletes; ddd, duplete de dupletes de dupletes; dt, duplete de tripletes; sa, señal ancha; f) los productos finales de Fórmula (I) también se caracterizaron por espectroscopía de masas seguida de cromatografía líquida (LCMS), usando un sistema de HPLC basado en un sistema Waters 2790/95 LC con un 2996 PDA y un espectrómetro de masas de cuadrupolo único ZQ de 2000 uma. Los disolventes usados fueron A = agua, B = acetonitrilo, C = acetonitrilo:agua 50:50 ácido fórmico al 0,1 % y D = acetonitrilo:agua 50:50 hidróxido de amonio al 0,1 %. A un caudal de 1,1 ml/min, se inyectaron 5 pl de muestra en una columna Phenomenex Gemini NX 50 x 2,1 5 pm. El gradiente se desarrolló del 95 % de A al 95 % de B durante 4,0 min con una infusión de C constante al 5 % (para análisis ácido, para análisis básico se usa D). El flujo se mantuvo al 95 % de B durante 0,5 min antes de volver a las condiciones de partida. Los datos se adquirieron de 150 a 850 uma en modo tanto positivo como negativo en el espectrómetro de masas y 220 - 320 nm en el PDA. También se realizó LCMS en un sistema de UPLC utilizando una bomba binaria Waters Acquity con gestor de muestras, Acquity PDA y un espectrómetro de masas SQD. Los disolventes usados fueron A1 = ácido fórmico al 0,1 % (ac.), B1 ácido fórmico al 0,1 % en acetonitrilo, A2 = hidróxido de amonio al 0,1 % (ac.) y B2 hidróxido de amonio al 0,1 % en acetonitrilo. A un caudal de 1 ml/min, se inyectó 1 pl de muestra en una columna Waters BEH 50 x 2,1 1,7 um (a 40 °C). El gradiente se desarrolló del 97 % de A1 al 97 % de B1 durante 1,30 min antes de mantenerse durante 0,2 min y volver a las condiciones de partida (para análisis básico sustituir A1 y B1 por A2 y B2). Los datos se adquirieron a 150 - 1000 uma en modo ion positivo y negativo en el espectrómetro de masas y 245 - 320 uma en el PDA;
g) generalmente, los intermedios no se caracterizaron totalmente y la pureza se evaluó mediante análisis cromatográfico en capa fina, espectral de masas, de HPLC y/o RMN;
h) se usaron las siguientes abreviaturas: h = hora u horas; t.a. = temperatura ambiente (~17-30 °C); conc. = concentrado; FCC = cromatografía en columna ultrarrápida usando sílice; AIBN = azob/sisobutironitrilo; DCM = diclorometano; DIPEA = diisopropiletilamina; DMA = W,W-dimetilacetamida; DMF = W,W-dimetilformamida; DMSO = dimetilsulfóxido; EDC = 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida; Et2Ü = dietil éter; EtOAc = acetato de etilo; EtOH = etanol; HATU = hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[b/s(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-bjpiridinio; HOBT = hidroxibenzotriazol; K2CO3 = carbonato potásico; MeOH = metanol; MeCN = acetonitrilo; MgSO4 = sulfato de magnesio anhidro; Na2SO4 = sulfato sódico anhidro; NBS = W-bromosuccinimida; TFA = ácido trifluoroacético; THF = tetrahidrofurano; sat. = solución acuosa saturada.
En una serie de los ejemplos que siguen a continuación, se describe un par diastereomérico de compuestos. Por ejemplo, los compuestos del Ejemplo 1(a) y el Ejemplo 1(b) representan un par diastereomérico de compuestos, formado como una mezcla en el producto de una sola reacción y separados posteriormente. En tales ejemplos, cualquier asignación de estereoquímica no es absoluta. A modo de ilustración, los Ejemplos 1(a) y 1(b) se refieren a los diastereómeros (2S,3R) y (2R,3R) del compuesto nombrado; sin embargo, no se pretende expresar que al Ejemplo 1(a) se le asigne definitivamente como el diastereómero (2S,3R) y al Ejemplo 1(b) como el diastereómero (2R,3R).
Ejemplo 1(a) y 1(b)
(2S)-2-[3-(3-Fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida y (2R)-2-[3-(3-Fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida
Figure imgf000011_0001
Se añadió HATU (351 mg, 0,92 mmol) a [2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetil]oxilitio (Intermedio 17, 170 mg, 0,71 mmol), /V2-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 1, 187 mg, 0,71 mmol) y DIPEA (0,372 ml, 2,13 mmol) en W-metil-2-pirrolidinona (2 ml) y DMF (3 ml) a t.a. La solución resultante se agitó a t.a. durante 45 minutos. Esta solución se diluyó con MeOH (15 ml) y se pasó a través de un cartucho SCX de 20 g, lavando abundantemente con MeOH seguido de NH3 1 N en MeOH para eluir el producto. El disolvente se evaporó a presión reducida para producir producto crudo que se disolvió en MeOH/DCM y se evaporó sobre gel de sílice. El residuo se purificó por FCC (S¡O2 , 0 a 12 % de MeOH en DCM). Las fracciones puras se evaporaron a sequedad para proporcionar la mezcla de diastereómeros como una goma (280 mg). Los diastereómeros se separaron por HPLC preparativa (columna Phenomenex Lux C4, 20 pm, 50 mm x 250 mm, MeOH a 120 ml/min) para dar:
Primer isómero eluido, ejemplo 1(a), 2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (65 mg, 23 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da, 30 °C) ó 2,07 (1H, dc), 2,23 - 2,32 (1H, m), 3,40 - 3,59 (3H, m), 3,71 - 3,78 (1H, m), 3,80 - 3,93 (2H, m), 4,14 (2H, dt), 4,37 (1H, dt), 4,87 (1H, s), 5,48 (1H, dtt), 6,43 (1H, dd), 6,58 (1H, s), 6,80 (1H, d), 6,85 (1H, dd), 7,17 (1H, t), 7,32 (1H, dd), 7,64 (1H, d), 8,47 (1H, dd), 12,10 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 485.
Segundo isómero eluido, ejemplo 1(b) 2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (68 mg, 24 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) ó 2,06 (1H, dd), 2,28 (1H, td), 3,42 - 3,59 (3H, m), 3,75 (1H, dd), 3,8 - 3,93 (2H, m), 4,14 (2H, dt), 4,37 (1H, dt), 4,88 (1H, s), 5,48 (1H, ddd), 6,44 (1H, dd), 6,57 - 6,61 (1H, m), 6,81 (1H, d), 6,86 (1H, dd), 7,18 (1H, t), 7,32 (1H, dd), 7,65 (1H, d), 8,47 (1H, dd), 12,12 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 485.
Ejemplo 2(a) y 2(b)
(2S)-2-[3-(3,3-Difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida y (2R)-2-[3-(3,3-Difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida
Figure imgf000012_0001
Se añadió HATU (225 mg, 0,59 mmol) a ácido 2-[3-(3,3-difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acético (Intermedio 22, 117 mg, 0,46 mmol), W2-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 1, 120 mg, 0,46 mmol) y DIPEA (0,239 ml, 1,37 mmol) en W-metil-2-pirrolidinona (2 ml) y DMF (3 ml) a t.a. La solución resultante se agitó a t.a. durante 45 minutos. Esta solución se diluyó con MeOH (15 ml) y se pasó a través de un cartucho SCX2 de 20 g, lavando abundantemente con MeOH para retirar impurezas, seguido de una solución de NH3 1 N en MeOH para eluir el producto. El disolvente se evaporó a presión reducida para producir producto crudo que se purificó por FCC (SiO2 , 0 a 6 % de MeOH en DCM). Las fracciones puras se evaporaron para proporcionar el producto como una mezcla de diastereómeros como una goma (135 mg). Los diastereómeros se separaron por HPLC preparativa (columna Phenomenex Lux C2, 20 pm, 50 mm x 250 mm, MeOH/EtOH a 120 ml/min) para dar:
Primer isómero eluido, ejemplo 2(a) 2-[3-(3,3-difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (55 mg, 41 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) ó 2,07 (1H, dt), 2,22 - 2,32 (1H, m), 3,48 (1H, dd), 3,51 - 3,59 (2H, m), 3,74 (1H, dd), 4,25 (4H, t), 4,37 (1H, dc), 4,89 (1H, s), 6,49 - 6,56 (1H, m), 6,67 (1H, d), 6,81 - 6,91 (2H, m), 7,21 (1H, t), 7,31 (1H, dd), 7,64 (1H, d), 8,46 (1H, dd), 12,11 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 503.
Segundo isómero eluido, ejemplo 2(b) 2-[3-(3,3-difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (61 mg, 45 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 2,00 - 2,11 (1H, m), 2,22 - 2,31 (1H, m), 3,48 (1H, dd), 3,52 - 3,59 (2H, m), 3,74 (1H, dd), 4,25 (4H, t), 4,36 (1H, dt), 4,88 (1H, s), 6,52 (1H, dd), 6,66 (1H, s), 6,82 - 6,91 (2H, m), 7,21 (1H, t), 7,31 (1H, dd), 7,61 (1H, d), 8,47 (1H, dd), 12,11 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 503.
Ejemplo 3(a) y 3(b)
(2S)-2-Metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida y (2R)-2-Metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida
Figure imgf000013_0001
Se añadió HATU (216 mg, 0,57 mmol) a ácido 2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]acético (Intermedio 25, 110 mg, 0,44 mmol), W2-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 1, 115 mg, 0,44 mmol) y DIPEA (0,229 ml, 1,31 mmol) en W-metil-2-pirrolidinona (2 ml) y DMF (3 ml) a t.a. La solución resultante se agitó a t.a. durante 45 minutos. Esta solución se diluyó con MeOH (15 ml) y se pasó a través de un cartucho SCX2 de 20 g, lavando abundantemente con MeOH para retirar impurezas, seguido de una solución de NH3 1 N en MeOH para eluir el producto. El disolvente se evaporó a presión reducida para producir producto crudo. El producto crudo se disolvió en MeOH/DCM y se evaporó sobre gel de sílice. El residuo se purificó por FCC (SiO2 , 0 a 10 % de MeOH en DCM). Las fracciones puras se evaporaron a sequedad para proporcionar el producto como una mezcla de diastereómeros (140 mg) como una goma. Los diastereómeros combinados se separaron por HPLC preparativa (columna Lux C4, 20 |jm, 50 mm x 250 mm, MeOH al 100 % a 120 ml/min) para dar:
Primer isómero eluido, ejemplo 3(a) 2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (74 mg, 15 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) ó 2,13 (1H, td), 2,3 - 2,38 (1H, m), 3,30 (3H, s), 3,35 (3H, s), 3,54 (1H, dd), 3,58 - 3,67 (4H, m), 3,81 (1H, dd), 4,05 - 4,12 (2H, m), 4,37 (1H, ddd), 4,44 (1H, dc), 4,92 (1H, s), 6,45 (1H, dd), 6,61 (1H, d), 6,82 (1H, d), 6,91 (1H, dd), 7,21 (1H, t), 7,38 (1H, dd), 7,71 (1H, d), 8,53 (1H, dd), 12,16 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 497.
Segundo isómero eluido, ejemplo 3(b) 2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (67 mg, 14 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) ó 2,11 (1H, dc), 2,33 (1H, dt), 3,29 (3H, s), 3,34 (3H, s), 3,54 (1H, dd), 3,58 - 3,66 (4H, m), 3,80 (1H, dd), 4,05 - 4,12 (2H, m), 4,36 (1H, ddd), 4,4 - 4,47 (1H, m), 4,91 (1H, s), 6,44 (1H, dd), 6,60 (1H, s), 6,82 (1H, d), 6,91 (1H, dd), 7,20 (1H, t), 7,37 (1H, dd), 7,69 (1H, d), 8,53 (1H, dd), 12,15 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 497.
Ejemplo 4(a) y 4(b)
(2S)-2-(3,5-Dimetoxifenil)-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida y (2R)-2-(3,5-Dimetoxifenil)-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida
Figure imgf000014_0001
Se añadió HATU (329 mg, 0,87 mmol) a ácido 2-(3,5-dimetoxifenil)-2-metoxiacético (Intermedio 28, 196 mg, 0,87 mmol), W2-[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 6, 200 mg, 0,72 mmol) y DIPEA (0,252 ml, 1,44 mmol) en DMF (6 ml) a 21 °C en una atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se agitó a 21 °C durante 2 horas. La mezcla cruda se purificó por cromatografía de intercambio iónico, usando una columna SCX. El producto deseado se eluyó de la columna usando NH3 1 M en MeOH y las fracciones puras se evaporaron a sequedad para proporcionar producto crudo que se purificó por FCC (SiO2 , 0 a 12 % de MeOH en DCM). Las fracciones puras se evaporaron a sequedad para proporcionar una goma marrón que se repurificó por FCC (SiO2 , 0 a 8 % de MeOH en DCM). Las fracciones puras se evaporaron a sequedad para proporcionar la mezcla de diastereómeros como una goma amarilla. Los diastereómeros se separaron por HPLC preparativa (columna Lux C2, 20 |jm, 50 mm x 250 mm, MeOH al 100 % a 120 ml/min) para dar:
Primer isómero eluido, ejemplo 4(a) 2-(3,5-dimetoxifenil)-2-metoxi-W[5-[[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (21 mg, 6 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 27 °C) ó 1,98 - 2,10 (1H, m), 2,18 - 2,31 (1H, m), 2,40 (3H, s), 3,30 (9H, s), 3,43 (1H, m), 3,47 - 3,61 (2H, m), 3,72 (1H, m), 4,36 (1H, m), 4,87 (1H, s), 6.45 (1H, t), 6,62 (2H, d), 6,81 (1H, d), 7,21 (1H, d), 7,64 (1H, s), 12,12 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 486.
Segundo isómero eluido, ejemplo 4(b) 2-(3,5-dimetoxifenil)-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (18 mg, 5 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 27 °C) ó 1,98 - 2,10 (1H, m), 2,18 - 2,31 (1H, m), 2,40 (3H, s), 3,30 (9H, s), 3,43 (1H, m), 3,47 - 3,61 (2H, m), 3,72 (1H, m), 4,36 (1H, m), 4,87 (1H, s), 6.45 (1H, t), 6,62 (2H, d), 6,81 (1H, d), 7,21 (1H, d), 7,64 (1H, s), 12,12 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 486.
Ejemplo 5(a) y 5(b)
(2R)-3-Metoxi-2-(3-metoxifenil)-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]propanamida y (2S)-3-Metoxi-2-(3-metoxifenil)-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]propanamida
Figure imgf000014_0002
Se añadieron DIPEA (0,1 ml, 0,57 mmol), HATU (173,28 mg, 0,456 mmol) y ácido 3-metoxi-2-(3 metoxifenil)propanoico (Intermedio 29, 0,09 g, 0,418 mmol) a una solución de W2-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-t¡ad¡azol-2,5-diam¡na (Intermedio 1, 0,1 g, 0,38 mmol) en DMF (4 ml). La mezcla se agitó a t.a. durante 18 h. Esto se diluyó con agua (5 ml), se extrajo en DCM (10 ml), se evaporó y se purificó por HPLC preparativa (columna SunFire C18, 5 pm, 50 mm x 19 mm, caudal 25 ml/min). Como fase móvil se usaron proporciones decrecientemente polares de agua y MeCN que contenía ácido fórmico al 0,1 %. Las fracciones puras se hicieron descender por un cartucho SCX lavando con metanol y a continuación eluyendo con NH32 M en MeOH. La fracción básica se evaporó a sequedad y la mezcla de diastereómeros se separó por SFC (columna Lux C1 5 pm, 21,2 mm x 250 mm, a 40 °C a un caudal de 50 ml/min, MeOH:CO250:50 que contenía un 0,1 % v/v de NH3) para dar:
Primer isómero eluido, ejemplo 5(a) 3-metoxi-2-(3-metoxifenil)-W[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]propanamida (25,3 mg, 14,6 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da, 25 °C) ó 2,00 - 2,12 (1H, m), 2,22 - 2,31 (1H, m), 3,25 (3H, s), 3,45 - 3,59 (4H, m), 3,71 - 3,79 (4H, m), 3,97 (1H, t), 4,03 - 4,10 (1H, m), 4,31 -4,43 (1H, m), 6,83 - 6,94 (4H, m), 7,26 (1H, t), 7,33 (1H, dd), 7,68 (1H, d), 8,48 (1H, dd), 12,23 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 456.
Segundo isómero eluido, ejemplo 5(b) 3-metoxi-2-(3-metoxifenil)-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]propanamida (22,3 mg, 12,8 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 25 °C) ó 2,00 - 2,14 (1H, m), 2,22 - 2,36 (1H, m), 3,25 (3H, s), 3,43 - 3,52 (2H, m), 3,52 - 3,61 (2H, m), 3,69 - 3,78 (4H, m), 3,97 (1H, t), 4,01 -4,10 (1H, m), 4,31 - 4,43 (1H, m), 6,79 - 6,95 (4H, m), 7,26 (1H, t), 7,33 (1H, dd), 7,68 (1H, d), 8,47 (1H, dd), 12,23 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 456.
Ejemplo 6(a) y 6(b)
(2S)-2-(3,5-Dimetoxifenil)-2-etoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida y (2R)-2-(3,5-Dimetoxifenil)-2-etoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida
Figure imgf000015_0001
Se disolvieron W2-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 1, 0,2 g, 0,76 mmol) y ácido 2-(3,5-dimetoxifenil)-2-etoxi-acético (Intermedio 33, 0,18 g, 0,76 mmol) en DMF (2 ml) a t.a. en atmósfera de N2. La mezcla se agitó durante 5 min antes de la adición de DIPEA (0,34 ml, 1,943 mmol) y HATU (0,29 g, 0,76 mmol), a continuación a t.a. durante 1 h. La mezcla cruda se pasó a través de una columna SCX de 5 g lavada con MeOH y a continuación se eluyó con NH32 N en MeOH. La fracción básica se purificó por HPLC preparativa (columna SunFire C18, 5 pm, 50 mm x 19 mm, caudal 25 ml/min). Como fase móvil se usaron proporciones decrecientemente polares de agua y MeCN que contenía ácido fórmico al 0,1 %. Las fracciones puras se evaporaron a presión reducida y se pasaron a través de una columna SCX de 2 g lavada con MeOH y a continuación se eluyó con NH32 N en MeOH. La fracción básica se evaporó a presión reducida para dar el producto como una mezcla de diastereómeros como una espuma beige. Los diastereómeros se separaron por SFC (columna Amy-C, 5 pm, 20 mm x 250 mm, MeOH/CO2 al 45 % que contiene NH3 como modificador a 50 ml/min) para dar:
Primer isómero eluido, ejemplo 6(a) 2-(3,5-dimetoxifenil)-2-etoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (70 mg, 19 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 21 °C) ó 1,16 (3H, t), 2,04 (1H, dc), 3,38 - 3,50 (3H, m), 3,51 - 3,58 (2H, m), 3,66 - 3,78 (7H, m), 4,35 (1H, c), 4,96 (1H, s), 6,44 (1H, t), 6,62 (2H, d), 6,84 (1H, dd), 7,30 (1H, dd), 7,67 (1H, d), 8,45 (1H, dd), 11,96 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 486.
Segundo isómero eluido, ejemplo 6(b) 2-(3,5-dimetoxifenil)-2-etoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (74 mg, 20 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 21 °C) ó 1,18 (3H, t), 2,07 (1H, dt), 2,27 (1H, dt), 3,60 - 3,39 (5H, m), 3,79 - 3,70 (6H, m), 4,38 (1H, c), 4,99 (1H, s), 6,47 (1H, t), 6,64 (2H, d), 6,88 (1H, dd), 7,34 (1H, dd), 7,71 (1H, d), 8,48 (1H, dd), 12,15 (1H, s). miz: ES+ [M+H]+ 486.
Ejemplo 7(a) y 7(b)
(2S)-2-[4-Fluoro-3-(3-metox¡azet¡d¡n-1-¡l)fen¡l]-2-metox¡-W-[5-[(3R)-3-(p¡r¡daz¡n-3-¡lam¡no)p¡rrol¡d¡n-1-¡l]-1,3,4-t¡ad¡azol-2-il]acetamida y (2R)-2-[4-Fluoro-3-(3-metox¡azet¡d¡n-1-¡l)fen¡l]-2-metox¡-W-[5-[(3R)-3-(p¡r¡daz¡n-3-¡lam¡no)p¡rrol¡d¡n-1-¡l]-1,3,4-t¡ad¡azol-2-¡l]acetam¡da
Figure imgf000016_0001
Se d¡solv¡eron W2-[(3R)-1-p¡r¡daz¡n-3-¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]-1,3,4-t¡ad¡azol-2,5-d¡am¡na (Intermed¡o 1, 108 mg, 0,41 mmol) y 2-[4-fluoro-3-(3-metox¡azet¡d¡n-1-¡l)fen¡l]-2-metox¡-acét¡co (Intermed¡o 34, 110 mg, 0,41 mmol) en DMF (3,5 ml) a t.a. en una atmósfera de n¡trógeno. La mezcla se agitó durante 5 m¡nutos antes de la ad¡c¡ón de DIPEA (0,11 ml, 0,61 mmol) y HATU (186 mg, 0,49 mmol) y a cont¡nuac¡ón se ag¡tó a t.a. durante una noche. La mezcla cruda se diluyó con agua (50 ml) y después se extrajo en DCM (3 x 50 ml). La fase orgán¡ca se secó (MgSÜ4), se f¡ltró y después se evaporó para dar una goma naranja que se pur¡f¡có por HPLC preparat¡va (columna SunF¡re C18, 5 pm, 50 mm x 19 mm, caudal 25 mlim¡n). Como fase móv¡l se usaron proporc¡ones decrec¡entemente polares de agua y MeCN que contenía ác¡do fórm¡co al 0,1 %. Las fracc¡ones que cont¡enen el producto deseado se comb¡naron, se evaporaron y se pasaron a través de una columna SCX de 5 g lavada con MeOH y a cont¡nuac¡ón se eluyó con NH3 2 M en MeOH. La fracc¡ón bás¡ca se evaporó para dar la mezcla de d¡astereómeros. A cont¡nuac¡ón, los d¡astereómeros se separaron por SFC (columna Lux C3, 5 pm, 21,2 mm x 250 mm, MeOHiCO2 al 30 % que cont¡ene el mod¡f¡cador NH3 , 50 mlim¡n) para dar:
Pr¡mer ¡sómero elu¡do, ejemplo 7(a) 2-[4-fluoro-3-(3-metox¡azet¡d¡n-1-¡l)fen¡l]-2-metox¡-W-[5-[(3R)-3-(p¡r¡daz¡n-3-¡lam¡no)p¡rrol¡d¡n-1-¡l]-1,3,4-t¡ad¡azol-2-¡l]acetam¡da (11 mg, 5 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 21 °C) ó 1,94 - 2,12 (1H, m), 2,19 - 2,36 (1H, m), 3,23 (3H, s), 3,27 (3H, s), 3,43 - 3,61 (3H, m), 3,62 - 3,77 (3H, m), 4,07 - 4,19 (2H, m), 4,22 - 4,30 (1H, m), 4,32 - 4,43 (1H, m), 4,87 (1H, s), 6,66 (1H, dd), 6,73 - 6,84 (1H, m), 6,86 (1H, dd), 7,04 (1H, dd), 7,32 (1H, dd), 7,70 (1H, d), 8,47 (1H, dd), 12,18 (1H, s). miz: ES+[M+H]+ 515.
Segundo ¡sómero elu¡do, ejemplo 7(b) 2-[4-fluoro-3-(3-metox¡azet¡d¡n-1-¡l)fen¡l]-2-metox¡-W-[5-[(3R)-3-(p¡r¡daz¡n-3-¡lam¡no)p¡rrol¡d¡n-1-¡l]-1,3,4-t¡ad¡azol-2-¡l]acetam¡da (11 mg, 5 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 21 °C) ó 2,00 - 2,13 (1H, m), 2,22 - 2,34 (1H, m), 3,23 (3H, s), 3,28 (3H, s), 3,42-3,60 (3H, m), 3,63 - 3,80 (3H, m), 4,09 - 4,18 (2H, m), 4,24 - 4,33 (1H, m), 4,43 - 4,45 (1H, m), 4,87 (1H, s), 6,67 (1H, dd), 6,75 - 6,83 (1H, m), 6,87 (1H, dd), 7,05 (1H, dd), 7,33 (1H, dd), 7,70 (1H, d), 8,48 (1H, dd), 12,18 (1H,s). miz: ES+[M+H]+ 515.
Ejemplo 8(a) y 8(b)
(2S)-2-[4-Fluoro-3-(3-fluoroazet¡d¡n-1-¡l)fen¡l]-2-metox¡-W-[5-[[(3R)-1-p¡r¡daz¡n-3-¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]am¡no]-1,3,4-t¡ad¡azol-2-¡l]acetam¡da y (2R)-2-[4-Fluoro-3-(3-fluoroazet¡d¡n-1-¡l)fen¡l]-2-metox¡-W-[5-[[(3R)-1-p¡r¡daz¡n-3-¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]am¡no]-1,3,4-t¡ad¡azol-2-¡l]acetam¡da
Figure imgf000017_0001
Se disolvieron W2-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 1, 100 mg, 0,38 mmol) y 2-[4-fluoro-3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetato de litio (Intermedio 38, 100 mg, 0,38 mmol) en DMF (2,0 ml) a t.a. en atmósfera de N2. La mezcla se agitó durante 5 minutos antes de la adición de DIPEA (0,10 ml, 0,57 mmol) y HATU (173 mg, 0,46 mmol) y a continuación se agitó a t.a. durante una noche. La mezcla cruda se pasó a través de una columna SCX de 5 g, se lavó con MeOH, a continuación se eluyó con NH32 M en MeOH. La fracción básica se evaporó para dar una goma naranja. El producto crudo se purificó por HPLC preparativa (columna SunFire C18, 5 pm, 50 mm x 19 mm a 25 ml/min). Como fase móvil se usaron proporciones decrecientemente polares de agua y MeCN que contenía ácido fórmico al 0,1 %. Las fracciones que contienen el producto se combinaron, se evaporaron y se pasaron a través de una columna SCX de 5 g lavada con MeOH y a continuación se eluyó con NH32 M en MeOH. La fracción básica se evaporó para dar la mezcla de diastereómeros como un sólido blanquecino (94 mg). Los diastereómeros se separaron por HPLC preparativa (columna Lux C4, 20 pm, 50 mm x 250 mm, MeOH/EtOH a 120 ml/min) para dar:
Primer isómero eluido, ejemplo 8(a) 2-[4-fluoro-3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (33 mg, 17 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO, 31 °C) 2,03 - 2,13 (1H, m), 2,24 - 2,33 (1H, m), 3,49 (1H, dd), 3,54 - 3,61 (2H, m), 3,75 (1H, dd), 3,97 (2H, dd), 4,19 - 4,31 (2H, m), 4,35 - 4,43 (1H, m), 4,89 (1H, s), 5,36 - 5,56 (1H, m), 6,71 (1H, dd), 6,8 - 6,89 (2H, m), 7,07 (1H, dd), 7,32 (1H, dd), 7,65 (1H, d), 8,48 (1H, dd), 12,13 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 503.
Segundo isómero eluido, ejemplo 8(b) 2-[4-fluoro-3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (34 mg, 18 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO, 30 °C) 2,01 -2,11 (1H, m), 2,24 - 2,34 (1H, m), 3,47 - 3,61 (3H, m), 3,76 (1H, dd), 3,97 (2H, dd), 4,18 - 4,32 (2H, m), 4,35 - 4,43 (1H, m), 4,88 (1H, s), 5,35 - 5,57 (1H, m), 6,71 (1H, dd), 6,81 - 6,89 (2H, m), 7,07 (1H, dd), 7,33 (1H, dd), 7,64 (1H, d), 8,48 (1H, d), 12,14 (1H, s), 21 H asignados: más los protones de OMe no observados - ocultados por el disolvente a 3,30 ppm. m/z: ES+ [M+H]+ 503.
Ejemplo 9(a) y 9(b)
(2S)-W-[5-[[(3R)-1-(6-Fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]acetamida y (2R)-W-[5-[[(3R)-1-(6-Fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]acetamida
Figure imgf000018_0001
Se disolvieron W2-[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 9, 0,11 g, 0,389 mmol) y [2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]acetil]oxilitio (Intermedio 24, 0,12 g, 0,466 mmol) Se disolvieron en DMF (2 ml) a t.a. en atmósfera de N2. La mezcla se agitó durante 5 min antes de la adición de DIPEA (0,34 ml, 1,943 mmol) y HATU (0,4 ml, 0,389 mmol), a continuación a t.a. durante 2 h. La mezcla cruda se dejó reposar durante una noche, a continuación se pasó a través de una columna SCX de 5 g lavada con MeOH y a continuación se eluyó con NH32 N en MeOH. La fracción básica se evaporó para dar una goma naranja que se purificó por HPLC preparativa (columna SunFire C18, 5 pm, 50 mm x 19 mm, caudal 25 ml/min). Como fase móvil se usaron proporciones decrecientemente polares de agua y MeCN que contenía ácido fórmico al 0,1 %. Las fracciones puras se combinaron, se evaporaron y se pasaron a través de una columna SCX de 1 g lavada con MeOH y a continuación se eluyó con NH32 N en MeOH para dar la mezcla de diastereómeros como un sólido blanquecino. La mezcla de diastereómeros se separó por HPLC preparativa quiral (columna Phenomenex Lux C4, 20 pm, 50 mm x 250 mm, eluyente MeOH a 120 ml/min) para dar:
Primer isómero eluido, ejemplo 9(a) W-[5-[[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]acetamida (39,1 mg, 19,5 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 21 °C) 62,07 (1H, dt), 2,27 (1H, dt), 3,24 (3H, s), 3,28 (3H, s), 3,46 (1H, dd), 3,50 - 3,61 (4H, m), 3,73 (1H, dd), 4,00 - 4,07 (2H, m), 4,27 - 4,42 (2H, m), 4,84 (1H, s), 6,39 (1H, dd), 6,55 (1H, s), 6,76 (1H, d), 7,12 - 7,20 (2H, m), 7,36 (1H, dd), 7,63 (1H, d), 12,16 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 515.
Segundo isómero eluido, ejemplo 9(b) W-[5-[[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]acetamida (42,8 mg, 21,4 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 21 °C) 62,05 (1H, td), 2,27 (1H, dt), 3,24 (3H, s), 3,28 (3H, s), 3,47 (1H, dd), 3,5 - 3,6 (4H, m), 3,73 (1H, dd), 3,99 - 4,07 (2H, m), 4,27 -4,4 (2H, m), 4,83 (1H, s), 6,39 (1H, dd), 6,55 (1H, d), 6,77 (1H, d), 7,12 - 7,2 (2H, m), 7,36 (1H, dd), 7,59 (1H, d), 12,17 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 515.
Ejemplo 10(a) y 10(b)
(2S)-2-[3-(3-Fluoroazetidin-1-il)-5-metoxi-fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida y (2R)-2-[3-(3-Fluoroazetidin-1-il)-5-metoxi-fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida
Figure imgf000019_0001
Se disolvieron W2-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 1, 134 mg, 0,51 mmol) y
2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)-5-metoxifenil]-2-metoxi-acetato de litio (Intermedio 40, 137 mg, 0,51 mmol) en DMF (2 ml) a
t.a. en atmósfera de N2. La mezcla se agitó durante 5 minutos antes de la adición de DIPEA (0,13 ml, 0,76 mmol) y
HATU (232 mg, 0,61 mmol), y a continuación se agitó a t.a. durante una noche. La mezcla cruda se pasó a través de
una columna SCX de 5 g, se lavó con MeOH, a continuación se eluyó con NH32 M en MeOH. La fracción básica se
evaporó para dar una goma naranja que se purificó por HPLc preparativa (columna SunFire C18, 5 pm,
50 mm x 19 mm, caudal 25 ml/min. Como fase móvil se usaron proporciones decrecientemente polares de agua y
MeCN que contenía ácido fórmico al 0,1 %. Las fracciones que contienen la masa deseada se combinaron, se
evaporaron y se pasaron a través de una columna SCX de 5 g, se lavó con MeOH, a continuación se eluyó con NH3
2 M en MeOH. La fracción básica se evaporó para dar la mezcla de diastereómeros como un sólido blanquecino
(123 mg). Los diastereómeros se separaron por HPLC preparativa (columna Lux C4, 20 pm, 50 mm x 250 mm, MeOH
al 100 % a 120 ml/min) para dar:
Primer isómero eluido, ejemplo 10(a) 2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)-5-metoxi-fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (45 mg, 17 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO, 22 °C) 2,07 (1H, dc),
2,28 (1H, dt), 3,28 (3H, s), 3,49 (1H, dd), 3,52 - 3,59 (2H, m), 3,71 (3H, s), 3,74 (1H, dd), 3,80 - 3,86 (1H, 3.92 (1H, m), 4,06 - 4,20 (2H, m), 4,37 (1H, dt), 4,82 (1H, s), 5,47 (1H, dtd), 5,98 (1H, t), 6,13 - 6,21 (1H, m), 6, 6,45 (1H, m), 6,86 (1H, dd), 7,33 (1H, dd), 7,67 (1H, d), 8,48 (1H, dd), 12,13 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 515.
Segundo isómero eluido, ejemplo 10(b) 2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)-5-metoxi-fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (46 mg, 17 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO, 22 °C) 2,06 (1H, dc),
2,27 (1H, dt), 3,28 (3H, s), 3,49 (1H, dd), 3,53 - 3,59 (2H, m), 3,71 (3H, s), 3,75 (1H, dd), 3,80 - 3,86 (1H, 3.92 (1H, m), 4,13 (2H, dt), 4,37 (1H, dt), 4,81 (1H, s), 5,47 (1H, dtt), 5,97 (1H, t), 6,13 - 6,23 (1H, m), 6,38 m), 6,87 (1H, dd), 7,33 (1H, dd), 7,64 (1H, d), 8,48 (1H, dd), 12,15 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 515.
Ejemplo 11 (a) y 11(b)
(2S)-2-Metoxi-2-[3-metoxi-5-(trifluorometoxi)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida y (2R)-2-metoxi-2-[3-metoxi-5-(trifluorometoxi)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il] amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida
Figure imgf000020_0001
Se disolvieron W2-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 1, 100 mg, 0,38 mmol) y ácido 2-metoxi-2-[3-metoxi-5-(trifluorometoxi)fenil]acético (Intermedio 44, 191 mg, 0,68 mmol) en DMF (3,5 ml) a t.a. en atmósfera de N2. La mezcla se agitó durante 5 minutos antes de la adición de DIPEA (0,1 ml, 0,57 mmol) y HATU (173 mg, 0,46 mmol), y a continuación se agitó a t.a. durante una noche. La mezcla cruda se diluyó con agua (50 ml) y se extrajo en DCM (50 ml x 2). La fase orgánica se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó para proporcionar una goma naranja que se purificó por HPLC preparativa (columna SunFire C18, 5 pm, 50 mm x 19 mm, caudal 25 ml/min). Como fase móvil se usaron proporciones decrecientemente polares de agua y MeCN que contenía ácido fórmico al 0,1 %. Las fracciones que contienen la masa deseada se combinaron, se evaporaron y se pasaron a través de una columna SCX de 5 g lavada con MeOH y a continuación se eluyó con NH32 M en MeOH. La fracción básica se evaporó para dar un sólido amarillo. La mezcla de diastereómeros se separó por HPLC preparativa (columna Phenomenex Lux C2, 20 pm, 50 mm x 250 mm, usando una mezcla 50/50 de EtOH/MeOH como eluyentes a 120 ml/min) para dar:
Primer isómero eluido, ejemplo 11 (a) 2-metoxi-2-[3-metoxi-5-(trifluorometoxi)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (9,1 mg, 4,5 %). RMN 1H (400 MHz, CDCla, 30 °C) 62,28 (1H, dd), 2,35 - 2,47 (1H, m), 3,48 (3H, s), 3,56 - 3,71 (2H, m), 3,73 - 3,83 (4H, m), 3,87 (1H, dd), 4,52 (1H, s), 4,84 (1H, s), 6,25 (1H, s), 6,56 (1H, dd), 6,71 - 6,76 (1H, m), 6,89 - 6,95 (2H, m), 7,11 (1H, dd), 8,48 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 526.
Segundo isómero eluido, ejemplo 11(b) 2-metoxi-2-[3-metoxi-5-(trifluorometoxi)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (10,2 mg 5,1 %). RMN 1H (400 MHz, CDCla, 30 °C) 62,20 - 2,31 (1H, m), 2,35 - 2,47 (1H, m), 3,47 (3H, s), 3,56 - 3,78 (3H, m), 3,80 (3H, s), 3,84 - 3,93 (1H, m), 4,50 (1H, s), 4,84 (1H, s), 6,14 (1H, s), 6,57 (1H, d), 6,73 (1H, s), 6,92 (2H, d), 7,12 (1H, dd), 8,49 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 526.
Ejemplo 12(a) y 12(b)
(2S)-2-Metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida y (2R)-2-Metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il] amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il] acetamida
Se disolvieron W2-[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 6, 0,11 g, 0,389 mmol) y [2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]acetil]oxilitio (Intermedio 24, 0,12 g, 0,466 mmol) en DMF (2 ml) a t.a. en atmósfera de N2. La mezcla se agitó durante 5 min antes de la adición de DIPEA (0,34 ml, 1,943 mmol) y HATU (0,4 ml, 0,389 mmol), a continuación a t.a. durante 2 h. La mezcla cruda se pasó a través de una columna SCX de 5 g lavada con MeOH, y a continuación se eluyó con NH32 N en MeOH. La fracción básica se evaporó y se purificó por HPLC preparativa (columna SunFire C18, 5 pm, 50 mm x 19 mm a 25 ml/min). Como fase móvil se usaron proporciones decrecientemente polares de agua y MeCN que contiene ácido fórmico al 0,1 %. Las fracciones puras se combinaron, se evaporaron y se pasaron a través de una columna SCX de 1 g lavada con MeOH y a continuación se eluyó con NH3 2 N en MeOH para dar la mezcla de diastereómeros como un sólido blanquecino (98 mg). Los diastereómeros se separaron por HPLC preparativa (columna Lux C4, 20 pm, 50 mm x 250 mm, MeOH al 100 % a 120 ml/min) para dar:
Primer isómero eluido, ejemplo 12(a) 2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (34 mg, 18 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO, 30 °C) 2,00 - 2,11 (1H, m), 2,30 (1H, dt), 2,41 (3H, s), 3,25 (3H, s), 3,45 (1H, dd), 3,49 - 3,62 (4H, m), 3,73 (1H, dd), 4,04 (2H, t), 4,28 - 4,41 (2H, m), 4,86 (1H, s), 6,40 (1H, d), 6,55 (1H, s), 6,77 (1H, d), 6,82 (1H, d), 7,15 (1H, t), 7,22 (1H, d), 7,62 (1H, d), 12,06 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 511.
Segundo isómero eluido, ejemplo 12(b) 2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-(6-metil-piridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (38 mg, 19 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO, 30 °C) 2,05 (1H, dt), 2,27 (1H, dt), 2,42 (3H, s), 3,25 (3H, s), 3,46 (1H, dd), 3,5 - 3,61 (4H, m), 3,74 (1H, dd), 4,04 (2H, t), 4,28 - 4,41 (2H, m), 4,85 (1H, s), 6,39 (1H, dd), 6,55 (1H, s), 6,77 (1H, d), 6,82 (1H, d), 7,15 (1H, t), 7,22 (1H, d), 7,58 (1H, d), 12,09 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 511.
Ejemplo 13(a) y 13(b)
(2S)-2-Metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida y (2R)-2-Metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida
Figure imgf000021_0001
En matraz de fondo redondo se pesaron 2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]acetil]oxilitio (Intermedio 24, 0,12 g, 0,475 mmol) y W2-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 12, 0,13 g, 0,475 mmol). Se añadieron d Mf (3 ml) y DIPEA (0,15 g, 1,187 mmol) seguido de HATU (0,18 g, 0,475 mmol) y la solución resultante se dejó en agitación a t.a. en atmósfera de N2 durante 15 h. La mezcla de reacción se añadió a un cartucho SCX y se lavó con MeOH y a continuación se eluyó con NH3 2 M en MeOH. Las fracciones básicas se evaporaron a presión reducida y el residuo se purificó por HPLC preparativa (columna SunFire C18, 5 pm, 50 mm x 19 mm a 25 ml/min). Como fase móvil se usaron proporciones decrecientemente polares de agua y MeCN que contenía ácido fórmico al 0,1 %. Las fracciones que contienen la masa deseada se evaporaron a presión reducida para dar la mezcla de diastereómeros as una goma naranja. Los diastereómeros se separaron por HPLC preparativa quiral (columna Lux C 1,5 pm, 21 mm x 250 mm, eluyente heptano:EtOH 20:80 a 21 ml/min que contiene NH3 al 0,1 %) para dar:
Primer isómero eluido, ejemplo 13(a) 2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (55,2 mg, 16,5 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 6 2,09 (1H, s), 2,30 (1H, d), 3,24 (3H, s), 3,29 (3H, s), 3,53 - 3,90 (6H, m), 4,03 (2H, tt), 4,27 - 4,42 (2H, m), 4,86 (1H, s), 6,40 (1H, ddd), 6,55 (1H, s), 6,74 - 6,80 (1H, m), 7,15 (1H, t), 7,70 (1H, d), 8,32 (1H, d), 8,61 (1H, d),12,17 (1H, s). miz: ES+ [M+H]+ 498.
Segundo isómero eluido, ejemplo 13(b) 2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-W[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (54,2 mg, 13,7 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) ó 1,98 -2,08 (1H, m), 2,19-2,28 (1H, m), 3,18 (3H, s), 3,22 (3H, s), 3,47 - 3,84 (6H, m), 3,93 - 4,02 (2H, m), 4,21 - 4,36 (2H, m), 4,80 (1H, s), 6,34 (1H, ddd), 6,49 (1H, s), 6,67 - 6,74 (1H, m), 7,09 (1H, t), 7,64 (1H, d), 8,26 (1H, d), 8,55 (1H, d), 12,11 (1H, s). miz: ES+ [M+H]+ 498.
Ejemplo 14(a) y 14(b)
(2S)-2-[3-(3,3-Difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida y (2R)-2-[3-(3,3-Difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida
Figure imgf000022_0001
En un matraz de fondo redondo se pesaron W2-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 12, 0,06 g, 0,232 mmol), [2-[3-(3,3-difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetil]oxilitio (Intermedio 21, 0,06 g, 0,232 mmol). Se añadieron DMF (2 ml) y DIPEA (0,1 ml, 0,579 mmol) seguido de HATU (0,09 g, 0,232 mmol) y la solución resultante se dejó en agitación a t.a. durante 15 horas. La mezcla de reacción se añadió a un cartucho SCX y se lavó con MeOH y a continuación se eluyó con NH32 M en MeOH. Las fracciones básicas se evaporaron a presión reducida y el residuo se purificó por HPLC preparativa (columna SunFire C18, 5 pm, 50 mm x 19 mm a 25 mlimin). Como fase móvil se usaron proporciones decrecientemente polares de agua y MeCN que contiene ácido fórmico al 0,1 %. El disolvente se retiró a presión reducida para dar la mezcla de diastereómeros como un sólido crema. Los diastereómeros se separaron por HPLC preparativa quiral (columna Amy C 5 pm, 20 mm x 250 mm, eluyente heptano:EtOH 20:80 que contiene NH3 al 0,1 % a 21 mlimin) para dar:
Primer isómero eluido, ejemplo 14(a) 2-[3-(3,3-difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (22,1 mg, 18,9 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) ó 2,02 -2.12 (1H, m), 2,23 - 2,34 (1H, m), 3,29 (3H, s), 3,77 (4H, s), 4,20 - 4,42 (5H, m), 4,89 (1H, s), 6,49 - 6,57 (1H, m), 6,67 (1H, t), 6,86 - 6,92 (1H, m), 7,22 (1H, t), 7,67 (1H, d), 8,32 (1H, d), 8,61 (1H, d), 12,19 (1H, s). miz: ES+ [M+H]+ 504.
Segundo isómero eluido, ejemplo 14(b) 2-[3-(3,3-difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (20,8 mg, 17,8 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) ó 2,02 -2.13 (1H, m), 2,24 - 2,35 (1H, m), 3,29 (3H, s), 3,77 (4H, s), 4,20 - 4,42 (5H, m), 4,89 (1H, s), 6,50 - 6,56 (1H, m), 6,65 - 6,69 (1H, m), 6,86 - 6,91 (1H, m), 7,22 (1H, t), 7,69 (1H, d), 8,31 (1H, d), 8,61 (1H, d), 12,19 (1H, s). miz: ES+ [M+H]+ 504.
Ejemplo 15(a) y 15(b)
(2S)-2-[3-(3-Fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida y (2R)-2-[3-(3-Fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il] acetamida
Figure imgf000023_0001
En un matraz de fondo redondo se pesaron W2-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 12, 0,05 g, 0,17 mmol), [2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetil]oxilitio (Intermedio 17, 0,04 g, 0,17 mmol). Se añadieron DMF (2 ml) y hAt U (0,06 g, 0,17 mmol) seguido de DIPEA (0,07 ml, 0,426 mmol) y la solución resultante se dejó en agitación a t.a. durante 15 h. La mezcla de reacción se añadió a un cartucho SCX y se lavó con MeOH y a continuación se eluyó con NH32 M en MeOH. Las fracciones básicas se evaporaron a presión reducida y el residuo se purificó por HPLC preparativa (columna SunFire C18, 5 pm, 50 mm x 19 mm a 25 ml/min). Como fase móvil se usaron proporciones decrecientemente polares de agua y MeCN que contenía ácido fórmico al 0,1 %. El disolvente se retiró a presión reducida para dar la mezcla de diastereómeros como un sólido crema. Los diastereómeros se separaron por HPLC preparativa quiral (columna Amy-C, 5 pm, 20 mm x 250 mm, eluyente heptano:EtOH 20:80 a 21 ml/min que contiene NH3 al 0,1 %) para dar:
Primer isómero eluido, ejemplo 15(a) 2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (17,9 mg, 21,7 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 62,04 - 2,13 (1H, m), 2,23 - 2,35 (1H, m), 3,28 (3H, s), 3,47 - 3,94 (6H, m), 4,06 - 4,20 (2H, m), 4,35 (1H, s), 4,84 (1H, s), 5,55 (1H, tt), 6,39 -6,46 (1H, m), 6,58 (1H, t), 6,80 (1H, dt), 7,16 (1H, t), 7,62 (1H, s), 8,31 (1H, d), 8,60 (1H, d), 12,18 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 486.
Segundo isómero eluido, ejemplo 15(b) 2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (19 mg, 23 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 62,03 -2,13 (1H, m), 2,23 - 2,34 (1H, m), 3,28 (s, 3H), 3,50 - 3,93 (6H, m), 4,08 - 4,21 (2H, m), 4,36 (1H, s), 4,87 (1H, s), 5,38 -5,58 (1H, m), 6,41 - 6,46 (1H, m), 6,58 (1H, t), 6,77 - 6,83 (1H, m), 7,17 (1H, t), 7,68 (1H, d), 8,32 (1H, d), 8,61 (1H, d), 12,18 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 486.
Ejemplo 16(a) y 16(b)
(2S)-2-(3,5-Dimetoxifenil)-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida y (2R)-2-(3,5-Dimetoxifenil)-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida Se añadió DIPEA (0,1 ml, 0,568 mmol) a ácido 2-(3,5-dimetoxifenil)-2-metoxiacético (Intermedio 28, 0,13 g, 0,568 mmol) y w2-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 12, 0,15 g, 0,568 mmol) en DMF (3 ml). Se añadió HATU (0,22 g, 0,568 mmol) a la solución y la mezcla de reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 24 h. El disolvente se retiró a presión reducida para proporcionar un aceite naranja oscuro que se disolvió en DCM, se absorbió sobre sílice y se purificó por FCC (SiO2 , 1-10 % de MeOH en DCM). Las fracciones puras se combinaron y el disolvente se retiró a presión reducida para proporcionar un aceite naranja oscuro que se purificó adicionalmente por HPLC preparativa (columna SunFire C18, 5 |jm, 50 mm x 19 mm, caudal 25 ml/min). Como fase móvil se usaron proporciones decrecientemente polares de agua y MeCN que contenía ácido fórmico al 0,1 %. Las fracciones puras se combinaron, se evaporaron a presión reducida y se pasaron a través de una columna SCX de 2 g lavada con MeOH y a continuación se eluyó con NH32 N en MeOH. La fracción básica se evaporó a sequedad para proporcionar la mezcla de diastereómeros como una espuma blanquecina (132 mg). Los diastereómeros se separaron por HPLC preparativa (columna Lux C4, 5 jm , 20 mm x 250 mm, eluyente MeOH que contiene el modificador dietanolamina a 21 ml/min). Los diastereómeros separados se disolvieron en DCM, se lavaron con agua y la fase orgánica se evaporó para dar:
Primer isómero eluido, ejemplo 16(a) 2-(3,5-dimetoxifenil)-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (23,2 mg, 8,6 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 21 °C) ó 2,09 (1H, d) 2,30 (1H, dd), 3,30 (3H, d), 3,74 (6H, s), 3,55 - 3,91 (4H, m), 4,38 (1H, s), 4,89 (1H, s), 6,47 (1H, t), 6,64 (2H, d), 7,71 (1H, d), 8,32 (1H, d), 8,61 (1H, d), 12,17 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 472.
Segundo isómero eluido, ejemplo 16(b) 2-(3,5-dimetoxifenil)-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (28,3 mg, 10,5 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 21 °C) ó 2,12 (1H, s), 2,31 (1H, d), 3,33 (3H, s), 3,60 - 3,73 (3H, m), 3,77 (6H, s), 3,80 - 3,89 (1H, m), 4,40 (1H, s), 4,92 (1H, s), 6,50 (1H, t), 6,67 (2H, d), 7,73 (1H, d), 8,35 (1H, d), 8,64 (1H, d), 12,19 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 472.
Ejemplo Comparativo 17(a) y 17(b)
(2S)-[3-(Difluorometoxi)fenil]-2-etoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida y (2R)-[3-(Difluorometoxi)fenil]-2-etoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida
Figure imgf000024_0001
En un matraz de fondo redondo se pesaron ácido 2-[3-(difluorometoxi)fenil]-2-etoxi-acético (Intermedio 47, 0,14 g, 0,57 mmol) y W2-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 1, 0,15 g, 0,57 mmol). Se añadieron DMF (3 ml) y DIPEA (0,18 g, 1,424 mmol) seguido de HATU (0,22 g, 0,57 mmol) y la solución resultante se dejó en agitación a t.a. en atmósfera de N2 durante 3 h. El disolvente se retiró a presión reducida. La goma residual se disolvió en DCM, se absorbió sobre sílice y se purificó por FCC (SiO2 , 1 a 8 % de MeOH en DCM). La evaporación de las fracciones puras a presión reducida dio una goma amarilla que se separó por SFC quiral preparativa (columna Amy-C, 5 jm , 20 mm x 250 mm, eluyente MeOH/CO2 que contiene NH3 al 40 % como modificador. El caudal fue 50 ml/min a una longitud de onda de 210 nm) para dar:
Primer isómero eluido, ejemplo 17(a) [3-(difluorometoxi)fenil]-2-etoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1.3.4- tiadiazol-2-il]acetamida (23 mg, 8,2 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) ó 1,19 (3H, t), 2,02 -2,10 (1H, m), 2,21 - 2,36 (1H, m), 3,37 - 3,63 (5H, m), 3,74 (1H, dd), 4,40 - 4,36 (1H, m), 5,12 (1H, s), 6,87 (1H, dd), 7,16 (1H, dd), 7,25 (1H, t), 7,28 - 7,29 (1H, m), 7,30 - 7,38 (2H, m), 7,45 (1H, t), 7,72 (1H, d), 8,48 (1H, dd), 12,27 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 492.
Segundo isómero eluido, ejemplo 17(b) [3-(difluorometoxi)fenil]-2-etoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1.3.4- tiadiazol-2-il]acetamida (0,025 g, 8,9 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) ó RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 8 1,19 (3H, t), 2,03 - 2,10 (1H, m), 2,24 - 2,32 (1H, m), 3,38 - 3,62 (5H, m), 3,74 (1H, dd), 4,36 - 4,40 (1H, m), 5,12 (1H, s), 6,86 (1H, dd), 7,16 (1H, t), 7,24 (1H, t), 7,26 - 7,38 (3H, m), 7,45 (1H, t), 7,72 (1H, d), 8,48 (1H, dd), 12,27 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 492.
Ejemplo 18(a) y 18(b)
(2S)-2-Metox¡-2-[3-(oxetan-3-¡l)fen¡l]-W-[5-[[(3R)-1-p¡r¡daz¡n-3-¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]am¡no]-1,3,4-t¡ad¡azol-2-¡l]acetam¡da y (2R)-2-Metox¡-2-[3-(oxetan-3-¡l)fen¡l]-W-[5-[[(3R)-1-p¡r¡daz¡n-3-¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]am¡no]-1,3,4-t¡ad¡azol-2-¡l]acetam¡da
Figure imgf000025_0001
Se añad¡ó HATU (520 mg, 1,37 mmol) a N2-[(3R)-1-p¡r¡daz¡n-3-¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]-1,3,4-t¡ad¡azol-2,5-d¡am¡na (Intermed¡o 1, 300 mg, 1,14 mmol), ác¡do 2-metox¡-2-[3-(oxetan-3-¡l)fen¡l]acét¡co (Intermed¡o 48, 304 mg, 1,37 mmol) y DIPEA (0,198 ml, 1,14 mmol) en DMF (8 ml) a 21 °C en atmósfera de N2. La soluc¡ón resultante se ag¡tó a 21 °C durante 2 horas. El producto crudo se pur¡f¡có por cromatografía de ¡ntercamb¡o ¡ón¡co, usando una columna SCX. El producto deseado se eluyó de la columna usando NH3 1 M en MeOH y las fracc¡ones puras se evaporaron. El producto crudo se purificó por FCC (SO 2 , 0 a 15 % de NH31 M en MeOH en EtOAc). Las fracc¡ones puras se evaporaron a sequedad para proporc¡onar un sól¡do. El producto crudo se pur¡f¡có por HPLC preparat¡va (columna Waters XBr¡dge OBD C18, 5 pm, 30 mm x 100 mm). Las mezclas de crec¡entemente polares de agua que cont¡ene NH4OH al 1 % y MeCN se usaron como fase móv¡l. Las fracc¡ones que cont¡enen el compuesto deseado se evaporaron a sequedad para produc¡r el producto como una mezcla de d¡astereómeros. Los d¡astereómeros se separaron por HPLC preparat¡va (columna Phenomenex Lux C4, 20 pm, 50 mm x 250 mm, MeOH/IPA 50/50 a 120 ml/m¡n) para dar:
Pr¡mer ¡sómero elu¡do, ejemplo 18(a) 2-metox¡-2-[3-(oxetan-3-¡l)fen¡l]-W-[5-[[(3R)-1-p¡r¡daz¡n-3-¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]am¡no]-1.3.4- t¡ad¡azol-2-¡l]acetam¡da (45 mg, 8 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO, 30 °C) 82,12 (1H, td), 2,23 - 2,40 (1H, m), 3,38 (3H, s), 3,46 - 3,69 (3H, m), 3,74 - 3,86 (1H, m), 4,26 - 4,35 (1H, m), 4,41 - 4,50 (1H, m), 4,65 (2H, ddd), 4,90 - 5,11 (3H, m), 6,91 (1H, dd), 7,27 - 7,49 (4H, m), 7,57 (1H, s), 7,70 (1H, d), 8,53 (1H, dd), 12,24 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 468.
Segundo ¡sómero elu¡do, ejemplo 18(b) 2-metox¡-2-[3-(oxetan-3-¡l)fen¡l]-N-[5-[[(3R)-1-p¡r¡daz¡n-3-¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]am¡no]-1.3.4- t¡ad¡azol-2-¡l]acetam¡da (38 mg, 7 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO, 30 °C) 82,12 (1H, td), 2,23 -2,40 (1H, m), 3,38 (3H, s), 3,46 - 3,69 (3H, m), 3,74 - 3,86 (1H, m), 4,26 - 4,35 (1H, m), 4,41 - 4,50 (1H, m), 4,65 (2H, ddd), 4,90 - 5,11 (3H, m), 6,91 (1H, dd), 7,27 - 7,49 (4H, m), 7,57 (1H, s), 7,70 (1H, d), 8,53 (1H, dd), 12,24 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 468.
Ejemplo Comparat¡vo 19(a) y 19(b)
(2S)-2-Etox¡-N-[5-[[(3R)-1-p¡r¡daz¡n-3-¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]am¡no]-1,3,4-t¡ad¡azol-2-¡l]-2-[3-(tr¡fluorometox¡)fen¡l]acetam¡da y (2R)-2-Etox¡-W-[5-[[(3R)-1-p¡r¡daz¡n-3-¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]am¡no]-1,3,4-t¡ad¡azol-2-¡l]-2-[3-(tr¡fluorometox¡)fen¡l]acetam¡da
Figure imgf000026_0001
Se añadieron DIPEA (0,15 ml, 0,85 mmol), HATU (260 mg, 0,68 mmol) y ácido 2-etoxi-2-[3-(trifluorometoxi)fenil]acético (Intermedio 51, 180 mg, 0,68 mmol) a una solución de W2-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 1, 150 mg, 0,57 mmol) en DMF (4 ml). La mezcla se agitó a t.a. durante 18 h. A continuación esto se diluyó con agua (5 ml) y después se extrajo en DCM (10 ml), se evaporó y se purificó por HPLC preparativa (columna XBridge OBD C18, 5 |jm, 50 mm x 19 mm, el caudal fue 25 ml/min). Como fase móvil se usaron proporciones decrecientemente polares de agua y MeCN que contenía 0,3 ml/l de NH4OH. Las fracciones puras se evaporaron y se pasaron a través de un cartucho SCX lavando con MeOH y a continuación eluyendo con NH32 M en MeOH. La fracción básica se evaporó y se secó al vacío para dar el producto como una mezcla de diastereómeros. A continuación, los diastereómeros se separaron por HPLC (columna Lux C4, 5 jm , 20 mm x 250 mm, MeOH que contiene el modificador NH3 , 21 ml/min) para dar:
Primer isómero eluido, ejemplo 19(a) 2-etoxi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoxi)fenil]acetamida, (46 mg, 16 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 21 °C) 6 1,19 (3H, t), 1,97 - 2,15 (1H, m), 2,18 - 2,36 (1H, m), 3,40 - 3,65 (5H, m), 3,65 - 3,81 (1H, m), 4,32 - 4,46 (1H, m), 5,17 (1H, s), 6,87 (1H, dd), 7,28 - 7,40 (2H, m), 7,40 - 7,59 (3H, m), 7,74 (1H, d), 8,48 (1H, dd), 12,32 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 510.
Segundo isómero eluido, ejemplo 19(b) 2-etoxi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoxi)fenil]acetamida (39 mg, 14 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 21 °C) 61,19 (3H, t), 2,06 (1H, m), 2,20 - 2,35 (1H, m), 3,39 - 3,63 (5H, m), 3,74 (1H, m), 4,34 - 4,44 (1H, m), 5,17 (1H, s), 6,88 (1H, dd), 7,28 - 7,41 (2H, m), 7,42 - 7,58 (3H, m), 7,73 (1H, d), 8,48 (1H, d), 12,32 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 510.
Ejemplo 20(a) y 20(b)
(2R)-2-[4-Fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida y (2S)-2-[4-Fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida
Figure imgf000026_0002
Se añadieron DIPEA (0,12 ml, 0,71 mmol), HATU (216 mg, 0,568 mmol) y ácido 2-[4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]-2-metoxi-acético (Intermedio 52, 0,13 g, 0,474 mmol) a una solución de W2-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 1, 0,12 g, 0,474 mmol) en DMF (4 ml). La mezcla se agitó a t.a. durante 18 h. A continuación esto se diluyó con agua (5 ml), se extrajo en DCM (10 ml), se evaporó y se purificó por HPLC preparativa (columna SunFire C18, 5 pm, 50 mm x 19 mm a 25 ml/min). Como fase móvil se usaron proporciones decrecientemente polares de agua y MeCN que contiene ácido fórmico al 0,1 %. Las fracciones puras se hicieron descender por un cartucho SCX lavando con MeOH y a continuación eluyendo con NH32 M en MeOH. La fracción básica se evaporó. Aún se observaba una impureza de modo que el material se volvió a purificar por HPLC preparativa (columna XBridge OBD C18, 5 pm, 50 mm x 19 mm, caudal 25 ml/min). Como fase móvil se usaron proporciones decrecientemente polares de agua y MeCN que contenía 0,3 ml/l de NH4OH. Las fracciones puras se evaporaron a sequedad y la mezcla de diastereómeros se separó por HPLC preparativa quiral (columna Phenomenex Lux C2, 20 pm, 50 mm x 250 mm, eluyente MeOH a 110 ml/min) para dar:
Primer isómero eluido, ejemplo 20(a) 2-[4-Fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (18,4 mg, 7,5 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da, 22 °C) 2,06 (1H, dc), 2,28 (1H, dt), 3,34 (3H, s), 3,45 - 3,60 (3H, m), 3,75 (1H, dd), 4,34 - 4,42 (1H, m), 5,03 (1H, s), 6,87 (1H, dd), 7,33 (1H, dd), 7,51 - 7,57 (2H, m), 7,60 - 7,69 (2H, m), 8,48 (1H, dd), 12,35 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 514.
Segundo isómero eluido, ejemplo 20(b) 2-[4-Fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (19,2 mg, 7,9 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 22 °C) 2,07 (1H, dd), 2,28 (1H, dt), 3,49 (1H, d), 3,53 - 3,60 (2H, m), 3,74 (1H, dd), 4,33 - 4,43 (1H, m), 5,04 (1H, s), 6,87 (1H, d), 7,33 (1H, dd), 7,52 - 7,57 (2H, m), 7,63 (1H, d), 7,68 (1H, d), 8,48 (1H, d), 12,35 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 514.
Ejemplo 21(a) y 21 (b)
(2S)-2-(3,5-Dimetoxifenil)-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida y (2R)-2-(3,5-Dimetoxifenil)-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida
Figure imgf000027_0001
Se añadió HATU (433 mg, 1,14 mmol) a ácido 2-(3,5-dimetoxifenil)-2-metoxiacético (Intermedio 28, 215 mg, 0,95 mmol), W2-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 1, 250 mg, 0,95 mmol) y DIPEA (0,332 ml, 1,90 mmol) en DMF (8 ml) a 21 °C en una atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se agitó a 21 °C durante 2 horas. El producto crudo se purificó por cromatografía de intercambio iónico, usando una columna SCX. El producto deseado se eluyó de la columna usando NH3 1 M/MeOH y las fracciones puras se evaporaron a sequedad para proporcionar producto crudo. El producto crudo se purificó por cromatografía en sílice ultrarrápida, (gradiente de elución del 0 al 12 % de NH31 M/MeOH en DCM). Las fracciones puras se evaporaron a sequedad para proporcionar una espuma beige. LCMS mostró un 9 % de impurezas químicas. El producto crudo se purificó adicionalmente por cromatografía en sílice ultrarrápida, (gradiente de elución del 0 al 8 % de MeOH en DCM). Las fracciones puras se evaporaron a sequedad para proporcionar el producto como una mezcla de diastereómeros. (180 mg).
Los diastereómeros se separaron por HPLC preparativa (columna Luc C4, sílice 20 pm, diámetro 50 mm, longitud 250 mm, MeOH al 100 % a 120 ml/min). Los diastereómeros separados se disolvieron en DCM, se lavó con agua y la fase orgánica se evaporó para dar:
Ejemplo 21(a) como primer isómero eluido (sólido, 74 mg, 16 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO, 27 °C) ó 2,06 (1H, m), 2.21 - 2,38 (1H, m), 3,30 (9H, d), 3,41 - 3,62 (3H, m), 4,28 - 4,47 (1H, m), 4,87 (1H, s), 6,46 (1H, t), 6,63 (2H, s), 6,85 (1H, d), 7,31 (1H, dd), 7,65 (1H, d), 8,47 (1H, dd), 12,13 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 472.
Ejemplo 21 (b) como segundo isómero eluido (sólido, 75 mg, 17 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO, 27 °C) ó 2,06 (1H, m), 2.21 - 2,38 (1H, m), 3,30 (9H, d), 3,41 - 3,62 (3H, m), 4,28 - 4,47 (1H, m), 4,87 (1H, s), 6,46 (1H, t), 6,63 (2H, s), 6,85 (1H, d), 7,31 (1H, dd), 7,65 (1H, d), 8,47 (1H, dd), 12,13 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 472.
Ejemplo 22(a) y 22(b)
(2S)-2-etoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-iljacetamida y (2R)-2-etoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida
Figure imgf000028_0001
Se disolvieron HATU (0,13 g, 0,332 mmol) y W2-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 1, 0,07 g, 0,276 mmol) en DMF (2 ml) a t.a. en atmósfera de N2. La mezcla se agitó durante 5 min antes de la adición de DIPEA (0,07 ml, 0,414 mmol) y a continuación se permitió la agitación de 2-etoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]acetato de litio (Intermedio 56, 0,07 g, 0,276 mmol) a t.a. durante una noche. La mezcla cruda se pasó a través de una columna SCX de 5 g lavada con MeOH y a continuación se eluyó con NH32 N en MeOH. La fracción básica se evaporó para dar el producto impuro como una goma naranja que se purificó por HPLC preparativa (columna SunFire C18, 5 pm, 50 mm x 19 mm a 25 ml/min). Como fase móvil se usaron proporciones decrecientemente polares de agua y MeCN que contenía ácido fórmico al 0,1 %. Las fracciones que contienen la masa deseada se combinaron, se evaporaron y se pasaron a través de una columna SCX de 5 g, lavando con MeOH y a continuación se eluyó con NH32 N en MeOH. El disolvente se retiró al vacío para dar una mezcla de diastereómeros que se separaron por HPLC preparativa quiral (columna Phenomenex Lux C4, sílice 20 pm, diámetro 50 mm, longitud 250 mm), EtOH/MeOH 50/50 a 120 ml/min. Las fracciones que contienen los compuestos deseados se evaporaron a sequedad para dar:
Ejemplo 22(a) como primer isómero eluido (sólido, 21,4 mg, 15 %).
Ejemplo 22(b) como segundo isómero eluido (sólido, 20,4 mg, 14 %).
Ejemplos adicionales
Los compuestos de los siguientes Ejemplos se prepararon de forma similar a los Ejemplos anteriores.
Figure imgf000028_0002
(continuación)
Figure imgf000029_0001
Ejemplo Comparativo 45(a) y 45(b)
(2S)-3-Metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-fenil-propanamida y (2R)-3-Metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-fenil-propanamida
Figure imgf000030_0001
Se disolvieron W2-[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Intermedio 6, 0,11 g, 0,389 mmol) y ácido 3-metoxi-2-fenil-propanoico (0,08 g, 0,433 mmol) en DMF (2 ml) a t.a. en atmósfera de N2. La mezcla se agitó durante 5 min antes de la adición de DIPEA (0,34 ml, 1,943 mmol), y a continuación se quejó que hexafluorofosfato de W-[(dimetilamino)(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-iloxi)metilideno]-W-metilmetilaminio, HATU (0,4 ml, 0,361 mmol), reposaran durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla cruda se pasó a través de una columna SCX-2 de 5 g, se lavó con MeOH y a continuación se eluyó con NH32 M en MeOH. Las fracciones puras se combinaron y el disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se purificó adicionalmente por HPLC preparativa (columna SunFire C18, 5 pm, 50 mm x 19 mm, caudal 25 ml/min). Como fase móvil se usaron proporciones decrecientemente polares de agua y MeCN que contiene ácido fórmico al 0,1 %. Las fracciones puras se combinaron, se evaporaron a presión reducida y se pasaron a través de una columna SCX-2 lavada con MeOH y a continuación se eluyó con NH3 2 M en MeOH. La fracción básica se evaporó a sequedad para proporcionar la mezcla de diastereómeros como un sólido amarillo pálido. Los diastereómeros se separaron por HPLC preparativa (columna Phenomonex Lux C1, sílice 20 pm, diámetro 50 mm, longitud 250 mm), usando una mezcla 95/5 de MeCN/MeOH como eluyentes a 120 ml/min. Las fracciones que contienen los compuestos deseados se evaporaron a sequedad para proporcionar:
Primer isómero eluido, ejemplo 45(a) 3-Metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-fenil-propanamida (31,7 mg, 20 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO, 30 °C) 1,95 - 2,12 (1H, m), 2,21 -2,35 (1H, m), 2,42 (3H, s), 3,26 (3H, s), 3,4 - 3,63 (4H, m), 3,74 (1H, dd), 3,98 (1H, t), 4,12 (1H, dd), 4,31 - 4,43 (1H, m), 6,82 (1H, d), 7,15 - 7,46 (6H, m), 7,62 (1H, d), 12,18 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 440.
Segundo isómero eluido, ejemplo 45(b) 3-Metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-fenil-propanamida (28,3 mg, 18 %).
RMN 1H (400 MHz, DMSO, 30 °C) 1,99 - 2,12 (1H, m), 2,2 - 2,36 (1H, m), 2,41 (3H, s), 3,26 (3H, s), 3,39 - 3,62 (4H, m), 3,73 (1H, dd), 3,98 (1H, t), 4,12 (1H, dd), 4,31 - 4,42 (1H, m), 6,82 (1H, d), 7,17 - 7,46 (5H, m), 7,62 (1H, d), 12,19 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 440.
Ejemplos adicionales
Los compuestos de los siguientes Ejemplos se prepararon de forma similar a los Ejemplos anteriores.
Figure imgf000030_0002
(continuación)
Figure imgf000031_0002
Intermedio 1
W-[(3R)-1-Piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina
Figure imgf000031_0001
En un matraz de fondo redondo de 1 l se puso una solución de diclorhidrato de (3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-amina (Intermedio 2, 10,5 g, 44,29 mmol) en DMF (400 ml), 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amina (7,94 g, 44,10 mmol) y DIPEA (17,07 g, 132,08 mmol). La solución se agitó durante 4 h a 80 °C. La mezcla resultante se concentró al vacío. El producto crudo se purificó por recristalización en etanol/EtOAc para dar W-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina como un sólido amarillo claro (11 g, 94 %). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) ó 2,04 (1H, td), 2,22 - 2,31 (1H, m), 3,43 - 3,62 (3H, m), 3,72 (1H, dd), 4,28 (1H, dc), 6,27 (2H, s), 6,86 (1H, dd), 7,07 (1H, d), 7,33 (1H, dd), 8,48 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 264,28.
El intermedio 1 también se preparó a gran escala de acuerdo con el siguiente procedimiento alternativo:
Se agitó (R)-1-(piridazin-3-il)pirrolidin-3-amina (Intermedio 3, forma de base libre, 25,5 g, 150,63 mmol) y 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amina (29,8 g, 165,70 mmol) con DIPEA (39,4 ml, 225,95 mmol) como una suspensión en MeOH (200 ml) a 45 °C. La suspensión se enfrió a 20 °C y el sólido se aisló por filtración al vacío. Se usaron 50 ml de MeOH como lavado de desplazamiento de la torta de filtro y a continuación se secó durante una noche en el horno de vacío a 40 °C. El intermedio 1 (32,9 g, 83 %) se obtuvo como un polvo beige de flujo libre.
Intermedio 2
Diclorhidrato de (3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-amina
Figure imgf000032_0001
En un matraz de fondo redondo de 1 l se puso una solución de W-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]carbamato de terc-butilo (Intermedio 4, 20 g, 75,66 mmol) en dioxano (200 ml) y HCl concentrado (100 ml). La solución se agitó durante 30 min a t.a. La mezcla resultante se concentró al vacío. El producto crudo se recristalizó a partir de MeOH/EtOAc en la proporción 1:2. Esto dio como resultado diclorhidrato de (3R)-1 -piridazin-3-ilpirrolidin-3-amina como un sólido blanquecino (13,4 g, 75 %). RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6, 26 °C) ó 2,25 - 2,43 (2H, m), 3,66 - 3,74 (1H, m), 3,78 -3,90 (3H, m), 4,02 - 4,10 (1H, m), 7,75 (1H, d), 7,94 (1H, dd), 8,66 (1H, d), 8,77-8,98 (3H, m a). m/z: ES+ [M+H]+ 165.
El intermedio 3 (forma de base libre) se preparó de acuerdo con el siguiente procedimiento:
Se mezcló W-[(3R)-1-(6-cloropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]carbamato de terc-butilo (Intermedio 5, 20 g, 107,38 mmol) en piridina (400 ml) con hidróxido de paladio sobre carbono (catalizador de Pearlman, 27,5 g, 25,84 mmol) y 1 -metil-1,4-ciclohexadieno (31,0 ml, 276,13 mmol) en MeOH (1375 ml). A continuación, la mezcla de reacción se calentó a 65 °C durante 90 minutos. Con conversión completa observada, la reacción se enfrió de nuevo a temperatura ambiente y el catalizador se retiró por filtración. A continuación se cargó HCl 3 M en MeOH (184 ml, 552,27 mmol) a la mezcla de reacción, y la solución se calentó a 65 °C durante 1 h. Con conversión completa observada, la solución de reacción se enfrió de nuevo a temperatura ambiente y se pasó a través de columnas SCX 10 x 50 g que se habían eluido previamente con MeOH. El compuesto se liberó de SCX usando NH3 1 M en MeOH. La solución resultante se diluyó con tolueno (1 l) y se concentró a sequedad mediante rotavapor para dar un sólido de flujo libre. Se aisló (3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-amina con un rendimiento de un 97 % p/p como base libre.
Intermedio 4
W-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]carbamato de terc-butilo
Figure imgf000032_0002
En un matraz de fondo redondo de 2 l se puso una solución de W-[(3R)-1-(6-cloropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]carbamato de terc-butilo (Intermedio 5, 23 g, 76,98 mmol) en MeOH (800 ml) y paladio sobre carbono (2 g). El sistema se purgó y se mantuvo con gas hidrógeno. La solución resultante se agitó durante 4 h a t.a. Los sólidos se retiraron por filtración. La mezcla resultante se concentró al vacío para dar W-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]carbamato de terc-butilo (20 g, 84 %) como un sólido amarillo. RMN 1H (300 MHz, CDCls, 24 °C) ó 1,44 (9H, s), 2,25 - 2,35 (2H, m), 3,48 - 3,56 (1H, m), 3,70 - 4,10 (3H, m), 4,35 - 4,42 (1H, m), 7,26 - 7,32 (1H, m), 7,70 - 7,75 (1H, m), 8,53 - 8,55 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 265.
Intermedio 5
W-[(3R)-1-(6-cloropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]carbamato de terc-butilo
Figure imgf000032_0003
En un matraz de fondo redondo de 1 l se puso una solución de W-[(3R)-pirrolidin-3-il]carbamato de terc-butilo (20 g, 107,38 mmol) en piridina (400 ml) y 3,6-dicloropiridazina (16 g, 107,40 mmol). La solución resultante se calentó a reflujo durante una noche. La mezcla resultante se concentró al vacío. El producto crudo se purificó por recristalización en etanol/Et2O en la proporción 1:3 para dar W-[(3R)-1-(6-cloropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]carbamato de terc-butilo (23 g, 72 %) como un sólido amarillo.
RMN 1H (400 MHz, CDCla, 30 °C) ó 1,45 (9H, s), 2,02 (1H, dc), 2,31 (1H, td), 3,41 (1H, dd), 3,54 - 3,70 (2H, m), 3,78 (1H, dd), 4,37 (1H, s), 4,76 (1H, s), 6,61 (1H, d), 7,17 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 299.
Intermedio 6
W2-[(3R)-1-(6-Metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]-1,3,4- tiadiazol-2,5-diamina
Figure imgf000033_0001
Se disolvieron 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amina (912 mg, 5,07 mmol), (3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-amina (Intermedio 7, 860 mg, 4,83 mmol) y DIPEA (0,924 ml, 5,31 mmol) en DMF (10 ml). La reacción se calentó a 100 °C durante 1 h y a continuación se dejó a t.a. durante una noche. El producto crudo se purificó por cromatografía de intercambio iónico, usando una columna SCX. El producto deseado se eluyó de la columna usando NH31 M en MeOH y las fracciones puras se evaporaron a sequedad para proporcionar producto crudo. Esto se disolvió en DCM/MeOH, se adsorbió sobre sílice y se purificó por FCC (SiO2 , 0 a 20 % de MeOH en DCM). Las fracciones puras se evaporaron a sequedad para proporcionar w2-[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (350 mg, 26 %) como una goma marrón. m/z: e S+ [M+H]+ 278.
Intermedio 7
(3R)-1-(6-Metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-amina
Figure imgf000033_0002
Se añadió ácido trifluoroacético (12 ml) a W[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]carbamato de ferc-butilo (Intermedio 8 , 2,1 g, 7,54 mmol), en DCM (60 ml) a 21 °C en una atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se agitó a 21 °C durante 2 h. El producto crudo se purificó por cromatografía de intercambio iónico, usando una columna SCX. El producto deseado se eluyó de la columna usando NH37 M en MeOH y las fracciones puras se evaporaron a sequedad para proporcionar (3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-amina (1,6 g, 119 %) como un aceite amarillo que solidificó después de un periodo de reposo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 6 1 , 5 6 - 1,8 (1H, m), 2,04 (1H, m), 2,39 (3H, s), 3,07 (1H, m), 3,37 - 3,43 (1H, m), 3,47 - 3,66 (3H, m), 4,08 (1H, s), 6,73 (1H, d), 7,19 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 179.
Intermedio 8
W-[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]carbamato de ferc-butilo
Figure imgf000033_0003
Una mezcla de DIPEA (8,49 ml, 48,62 mmol), W-[(3R)-pirrolidin-3-il]carbamato de ferc-butilo (3,62 g, 19,45 mmol), 3-cloro-6 -metilpiridazina (2,5 g, 19,45 mmol) y n-butanol (30 ml) se agitó a 130 °C durante 12 h y a continuación se dejo enfriar durante el fin de semana. La mezcla de reacción se evaporó y el producto crudo se purificó por FCC (SiO2, 0 a 10 % de NH31 M en MeOH en EtOAc). Las fracciones puras se evaporaron a sequedad para proporcionar N-[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]carbamato de ferc-butilo (2,1 g, 38,8 %) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 6 1,39 (9H, s), 1,88 (1H, m), 2,14 (1H, m), 2,40 (3H, s), 3,23 (1H, m), 3,37 - 3,45 (1H, m), 3,47 - 3,58 (1H, m), 3,61 (1H, m), 3,99 - 4,2 (1H, m), 6,77 (1H, d), 7,20 (2H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 279.
Intermedio 9
N2-[(3R)-1-(6-Fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina
Figure imgf000034_0001
Se añadió DIPEA (3,48 ml, 19,96 mmol) a 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amina (1,797 g, 9,98 mmol) y (3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-amina (Intermedio 10, 2 g, 10,98 mmol) en DMF anhidra (40 ml) a t.a. La solución resultante se agitó a 80 °C durante 4 h. El producto crudo se purificó por cromatografía de intercambio iónico, usando una columna SCX. El producto deseado se eluyó de la columna usando NH3 1 M en MeOH y las fracciones puras se evaporaron a sequedad para proporcionar W2-[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (2,9 g, 103 %) como un sólido marrón. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) ó 1,90 - 2,12 (1H, m), 2,23 (1H, dtd), 3,42 (1H, dd), 3,47 - 3,61 (2H, m), 3,69 (1H, dd), 4,25 (1H, dc), 6,25 (2H, s), 7,04 (1H, d), 7,14 (1H, dd), 7,33 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 282.
Intermedio 10
(3R)-1-(6-Fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-amina
Figure imgf000034_0002
Se añadió W-[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]carbamato de ferc-butilo (Intermedio 11, 6 g, 21,25 mmol) a DCM (70 ml) y TFA (14,00 ml) a 25 °C. La solución resultante se agitó a 25 °C durante 4 h. El producto crudo se purificó por cromatografía de intercambio iónico, usando una columna SCX. El producto deseado se eluyó de la columna usando NH3 1 M en MeOH y las fracciones puras se evaporaron a sequedad para proporcionar (3r )-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-amina (2,0 g, 52 %) como un sólido gomoso amarillo. r Mn 1H (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) ó 1,55 - 1,83 (1H, m), 1,98 - 2,13 (1H, m), 2,89 - 3,14 (1H, m), 3,29 - 3,43 (1H, m), 3,54 (3H, ddt), 7,06 (1H, dd), 7,30 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 183.
Intermedio 11
W-[(3R)-1-(6-Fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]carbamato de ferc-butilo
Figure imgf000034_0003
Una mezcla de 3,6-difluoropiridazina (6,06 g, 52,21 mmol), W-[(3R)-pirrolidin-3-il]carbamato de ferc-butilo (9,72 g, 52,21 mmol), DIPEA (22,80 ml, 130,53 mmol) y n-butanol (140 ml) se agitó a 130 °C durante 10 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (750 ml), y se lavó dos veces con agua (150 ml). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó para proporcionar producto crudo. A continuación esto se disolvió en DCM y el producto crudo se purificó por FCC (SiO2 , 30 - 65 % de EtOAc en heptanos). Las fracciones puras se evaporaron a sequedad para proporcionar W-[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]carbamato de ferc-butilo (15 g, 102 %) como un sólido crema. RMN 1H (400 MHz, CDCb, 30 °C) ó 1,46 (9H, s), 1,91 - 2,13 (1H, m), 2,32 (1H, dc), 3,40 (1H, dd), 3,56 - 3,72 (2H, m), 3,78 (1H, dd), 4,37 (1H, s), 4,70 (1H, s), 6,78 (1H, dd), 6,98 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 283.
Intermedio 12
W2-[(3R)-1-(1,2,4-Triazin-3-il)pirrolidin-3-il]-13,4-tiadiazol-2,5-diamina
Figure imgf000034_0004
HoN
HN
Se combinaron 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amina (1,31 g, 7,264 mmol) y (3Ro)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-amina (Intermedio 13, 1,2 g, 7,264 mmol) en DMF (15 ml) a t.a. en atmósfera de N2. La mezcla se agitó a t.a. durante una noche. A continuación se evaporó a sequedad y se purificó por FCC (SiO2 , 5-10 % de NH32 N en MeOH en DCM) para dar M2-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina como una espuma beige (1,7 g, 88 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO, 30 °C) ó 1,80 - 1,85 (1H, m), 1,98 - 2,05 (1H, m), 3,40 (4H, s a), 4,03 (1H, s a), 6,09 (2H, s), 6,88 (1H, d), 8,10 (1H, d), 8,38 (1H, d).
Intermedio 13
(3R)-1-(1,2,4-Triazin-3-il)pirrolidin-3-amina
Figure imgf000035_0001
Se disolvió W-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]carbamato de tere-butilo (Intermedio 14, 2,39 g, 9,01 mmol) en una mezcla de DCM (20 ml) y ácido trifluoroacético (5 ml) y se permitió que la solución reposara durante 1 h a t.a. antes de evaporarse a presión reducida. El residuo se disolvió en MeOH y se pasó a través de un cartucho SCX de 20 g lavando abundantemente con MeOH seguido de NH33 N en MeOH para obtener el producto. El disolvente se evaporó a presión reducida para producir (3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-amina (1,460 g, 98 %) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, CDCls, 27 °C) ó 1,80 - 1,92 (1H, m), 2,18 - 2,29 (1H, m), 3,45 (1H, s), 3,6 - 4,01 (4H, m), 8,13 (1H, d), 8,50 (1H, d). miz: ES+ [M+H]+ 166.
Intermedio 14
N-[(3R)-1 -(1,2,4-T riazin-3-il)pirrolidin-3-il]carbamato de tere-butilo
Figure imgf000035_0002
Se disolvieron 3-metilsulfanil-1,2,4-triazina (Intermedio 15, 1,5 g, 11,80 mmol) y W-[(3R)-pirrolidin-3-il]carbamato de tere-butilo (2,64 g, 14,15 mmol) en etanol (12 ml) y se selló en un tubo de microondas. La reacción se calentó a 100 °C durante 24 h en el reactor de microondas y se enfrió a t.a. LCiMS mostró un 61 % de producto y un 34 % de triazina sin reaccionar. Se añadió W-[(3R)-pirrolidin-3-il]carbamato de tere-butilo (0,52 g) adicional y el calentamiento a 100 °C en el microondas continuó durante 15 h. LCiMS mostró un 76 % de producto y un 18 % de triazina sin reaccionar. El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se repartió entre EtOAc y bicarbonato sódico acuoso. La fase acuosa se extrajo de nuevo con EtOAc reciente y los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO4), se filtró y se evaporó a presión reducida. El producto crudo se purificó por FCC (S¡O2 , 0 a 80 % de EtOAc en heptanos). Las fracciones relevantes se evaporaron para dar W-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]carbamato de tere-butilo (2,390 g, 76 %) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, CDCla, 27 °C) ó 1,46 (9H, s), 1,96 - 2,07 (1H, m), 2,26 -2,37 (1H, m), 3,55 (1H, s), 3,75 (2H, s), 3,90 (1H, s), 4,39 (1H, s), 4,69 (1H, s), 8,14 (1H, d), 8,53 (1H, d). miz: ES' [M-H]- 264.
Intermedio 15
3-Metilsulfanil-1,2,4-triazina
Figure imgf000035_0003
Una solución de yodhidrato de hidrazinacarbimidotioato de metilo (Intermedio 16, 7,5 g, 32,18 mmol) en hieloiagua (400 ml) se añadió a una solución agitada de oxalaldehído al 40 % (14,70 ml, 128,71 mmol) y bicarbonato sódico (6,76 g, 80,45 mmol) en hieloiagua (400 ml) enfriado a 0 °C. La solución resultante se agitó a 0 °C durante 5 h, y a continuación se extrajo con DCM (2 x 150 ml). Los extractos se combinaron, se lavaron con ácido cítrico 1 M (50 ml), se secaron (MgSO4) y se evaporaron para dar 3-metilsulfanil-1,2,4-triazina (3,60 g, 88 %) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, CDCls, 27 °C) ó 2,68 (3H, s), 8,38 (1H, d), 8,94 (1H, d).
Intermedio 16
Yodhidrato de hidrazinacarbimidotioato
Figure imgf000036_0001
Se añadió yodometano (0,623 ml, 10,00 mmol) a hidrazinacarbotioamida (0,911 g, 10 mmol), en etanol (10 ml). La mezcla resultante se agitó a 70 °C durante 30 minutos. La reacción se dejó enfriar a t.a. A continuación la mezcla de reacción se filtró a través de un embudo de filtro de nailon. A continuación el sólido resultante se lavó con Et2O y se secó al vacío durante una noche para dar yodhidrato de hidrazinacarbimidotioato de metilo (1,810 g, 78 %) como un sólido blanco que se usó sin purificación adicional.
Intermedio 17
[2-[3-(3-Fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetil]oxilitio
Figure imgf000036_0002
Se disolvieron 2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetato de metilo (Intermedio 18,
0,26 g, 1,034 mmol) e hidróxido de litio monohidratado (0,07 g, 1,552 mmol) en una mezcla de MeOH (5 ml) y agua (2 ml). La reacción se agitó durante 2 h a t.a. A continuación se evaporó y se secó al vacío durante el fin de semana para dar [2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetil]oxilitio como un sólido blanco (270 mg, 100 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 63,35 (3H, s), 4,08 - 3,91 (2H, m), 4,29 (2H, ddd), 4,42 (1H, s), 5,78 - 5,56 (1H, m), 6,50 (1H, ddd), 6,68 (1H, t), 6,93 (1H, dt), 7,25 (1H, t). m/z: ES+ [M+H]+ 240.
Intermedio 18
2-[3-(3-Fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetato de metilo
Figure imgf000036_0003
A una mezcla de 2-(3-bromofenil)-2-metoxiacetato de metilo (Intermedio 19, 500 mg, 1,93 mmol) y clorhidrato de 3-fluoroazetidina (215 mg, 1,93 mmol) en tolueno (20 ml) se añadió Ruphos cloruro de fenetilaminapaladio(II) (58,3 mg, 0,07 mmol), diciclohexil(2',6'-diisopropoxi-[1,1'-bifenil]-2-il)fosfina (29,7 mg, 0,06 mmol) y carbonato de cesio (2,20 mg, 6,75 mmol). La reacción se roció con nitrógeno durante ~5 minutos y después se calentó a 90 °C, agitando en una atmósfera de nitrógeno durante una noche. La reacción se enfrió a t.a. antes de diluirse con EtOAc y agua. La fase orgánica se secó (MgSO4), se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. La purificación se realizó por FCC (SiO2 , 0-25 % de EtOAc en heptanos). Las fracciones que contienen producto se evaporaron a presión reducida para producir 2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetato de metilo (330 mg, 67 %) como un aceite. RMN 1H (400 MHz, CDCla, 30 °C) 63,40 (3H, s), 3,72 (3H, s), 3,90 - 4,02 (2H, m), 4,19 (2H, ddd), 4,71 (1H, s), 5,30 - 5,51 (1H, m), 6,44 (1H, ddd), 6,54 - 6,56 (1H, m), 6,83 (1H, d), 7,21 (1H, t). m/z: ES+ [M+H]+ 254.
Intermedio 19
2-(3-Bromofenil)-2-metoxiacetato de metilo
Figure imgf000037_0001
Se disolvió sodio (0,345 g, 15,00 mmol) en MeOH seco (50 ml) en atmósfera de N2 y a esta solución se añadió una solución de 2-bromo-2-(3-bromofenil)acetato de metilo (Intermedio 20, 4,2 g, 13,64 mmol) en MeOH seco (10 ml). La mezcla de reacción se calentó a 40 °C durante 2 horas y después se evaporó a presión reducida. El residuo se trató con una solución acuosa de cloruro de amonio, y la mezcla se extrajo con EtOAc (50 ml x 2). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO4), se filtró y se evaporó a presión reducida para producir producto crudo que se purificó por FCC (SiO2 , 0 - 12 % de EtOAc en heptanos). Las fracciones que contienen producto se evaporaron a sequedad para proporcionar 2-(3-bromofenil)-2-metoxiacetato de metilo (2,95 g, 83 %) como un aceite. RMN 1H (400 MHz, CDCl3, 30 °C) ó 3,42 (3H, s), 3,74 (3H, s), 4,73 (1H, s), 7,24 (1H, t), 7,36 - 7,39 (1H, m), 7,47 (1H, ddd), 7,61 (1H, t). m/z: TOF MS EI+ 257,9880.
Intermedio 20
2-Bromo-2-(3-bromofenil)acetato de metilo
Figure imgf000037_0002
Una mezcla de 2-(3-bromofenil)acetato de metilo (4 g, 17,46 mmol) y NBS (3,26 g, 18,33 mmol) y (E)-2,2'-(diazeno-1,2-diil)bis(2-metilpropanonitrilo) (0,143 g, 0,87 mmol) en tetracloruro de carbono (50 ml) se calentó a reflujo durante 4 horas y a continuación se enfrió a t.a. El sólido se retiró por filtración y se descartó, el filtrado se evaporó a presión reducida. La purificación se realizó por FCC (SiO2 , 0-5 % de EtOAc en heptano). Las fracciones que contienen producto se evaporaron a presión reducida para producir 2-bromo-2-(3-bromofenil)acetato de metilo (4,2 g, 78 %) como un aceite. RMN 1H (400 MHz, CDCla, 30 °C) ó 3,80 (3H, s), 5,28 (1H, s), 7,21 - 7,26 (1H, m), 7,45 - 7,48 (1H, m), 7,48 - 7,5 (1H, m), 7,70 (1H, t). m/z: TOF MS EI+ 305,8891.
Intermedio 21
[2-[3-(3,3-Difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetil]oxilitio
Figure imgf000037_0003
2-[3-(3,3-difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetato de metilo (Intermedio 23, 0,08 g, 0,295 mmol) e hidróxido de litio monohidratado (0,01 g, 0,354 mmol) se disolvieron en una mezcla de metanol (3 ml) y agua (2 ml). La reacción se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se evaporó a presión reducida y se secó en el horno de vacío durante el fin de semana para dar [2-[3-(3,3-difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetil]oxilitio. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) ó 3,19 (3H, s), 4,24 - 4,17 (4H, m), 6,42 - 6,35 (1H, m), 6,57 (1H, s), 6,82 (1H, d), 7,09 (1H, t).
Intermedio 22
Ácido 2-[3-(3,3-Difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acético
Figure imgf000038_0001
Una solución de 2-[3-(3,3-difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetato (Intermedio 23, 270 mg, 1,00 mmol) en MeOH (4 ml) se trató con una solución de hidróxido de litio monohidratado (84 mg, 1,99 mmol) en agua (2 ml) y la mezcla se agitó a t.a. durante 2 horas. El MeOH se evaporó a presión reducida y la fase acuosa se diluyó con solución salina saturada acuosa (2 ml), se neutralizó con ácido acético y se extrajo con 2-metiltetrahidrofurano (4 x 5 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO4), se filtró y se evaporó a presión reducida para producir ácido 2-[3-(3,3-difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxiacético (130 mg, 50,8 %) como una goma. m/z: ES+ [M+H]+ 258.
Intermedio 23
2-[3-(3,3-Difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetato de metilo
Figure imgf000038_0002
A una mezcla de 2-(3-bromofenil)-2-metoxiacetato de metilo (Intermedio 19, 473 mg, 1,83 mmol) y clorhidrato de 3,3-difluoroazetidina (236 mg, 1,83 mmol) en tolueno (20 ml) se añadió Ruphos cloruro de fenetilaminapaladio(II) (55,2 mg, 0,07 mmol), diciclohexil(2',6'-diisopropoxi-[1,1'-bifenil]-2-il)fosfina (28,1 mg, 0,06 mmol) y carbonato de cesio (2,08 g, 6,39 mmol). La reacción se roció con N2 durante ~5 minutos y a continuación se calentó a 90 °C, con agitación en atmósfera de N2 durante una noche. La reacción se enfrió a t.a. antes de diluirse con EtOAc (20 ml) y agua (20 ml). La fase orgánica se secó (MgSO4), se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. La purificación se realizó por FCC, (SiO2 , 0-20 % de EtOAc en heptanos). Las fracciones que contienen producto se evaporaron a presión reducida para producir 2-[3-(3,3-difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetato de metilo (280 mg, 57 %) como un aceite. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) ó 3,62 (3H, s), 4,25 (4H, t), 4,82 (1H, s), 6,51 - 6,56 (2H, m), 6,79 (1H, d), 7,19 -7,25 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 272.
Intermedio 24
[2-Metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]acetil]oxilitio
Figure imgf000038_0003
Se disolvieron 2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]acetato de metilo (Intermedio 26, 0,24 g, 0,886 mmol) e hidróxido de litio monohidratado (0,06 g, 1,329 mmol) en una mezcla de metanol (5 ml) y agua (2 ml). La reacción se agitó durante 2 h a t.a., a continuación se evaporó a presión reducida y se secó al vacío durante el fin de semana. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) ó 2,96 (3H, s), 3,03 (3H, s), 3,37 - 3,26 (2H, m), 3,80 (2H, dd), 4,01 (1H, s), 4,09 (1H, tt), 6,06 (1H, dd), 6,25 (1H, t), 6,49 (1H, dt), 6,83 (1H, t).
Intermedio 25
Ácido 2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]acético
Figure imgf000039_0001
Una solución de 2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]acetato de metilo (Intermedio 26, 450 mg, 1,61 mmol) en MeOH (7 ml) se trató con una solución de hidróxido de litio monohidratado (135 mg, 3,22 mmol) en agua (3 ml) y la mezcla se agitó durante una noche a t.a. El MeOH se evaporó a presión reducida y el residuo acuoso se extrajo con éter. La fase acuosa se acidificó con ácido acético, se trató con cloruro sódico sólido para dar una solución saturada y se extrajo con EtOAc (3 x 10 ml). La fase orgánica se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó a presión reducida para producir ácido 2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]acético (236 mg, 58,3 %) como una goma. RMN 1H (400 Mh z , DMSO-d6, 30 °C) ó 3,23 (3H, s), 3,26 (3H, s), 3,51 - 3,59 (2H, m), 3,97 - 4,06 (2H, m), 4,26-4,34 (1H, m), 4,59 (1H, s), 6,38 (1H, dd), 6,43 (1H, s), 6,69 (1H, d), 7,13 (1H, t). m/z: ES+ [M+H]+ 252.
Intermedio 26
2-Metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]acetato de metilo
Figure imgf000039_0002
A una mezcla de 2-(3-bromofenil)-2-metoxiacetato de metilo (Intermedio 19, 524 mg, 2,02 mmol) y clorhidrato de 3-metoxiazetidina (250 mg, 2,02 mmol) en tolueno (20 ml) se añadió Ruphos cloruro de fenetilaminapaladio(II) (61,1 mg, 0,07 mmol), diciclohexil(2',6'-diisopropoxi-[1,1'-bifenil]-2-il)fosfina (31,2 mg, 0,07 mmol) y carbonato de cesio (2307 mg, 7,08 mmol). La reacción se roció con nitrógeno durante ~5 minutos y a continuación se calentó a 90 °C, agitando en una atmósfera de nitrógeno durante una noche. La reacción se enfrió a t.a. antes de diluirse con EtOAc y agua. La fase orgánica se secó (MgSO4), se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. La purificación por FCC (SiO2 , 0-25 % de EtOAc en heptanos) dio 2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]acetato de metilo (450 mg, 84 %) como un aceite. RMN 1H (400 MHz, CDCla, 30 °C) ó 3,33 (3H, s), 3,39 (3H, s), 3,68 - 3,74 (5H, m), 4,07 - 4,13 (2H, m), 4,29 - 4,36 (1H, m), 4,70 (1H, s), 6,43 (1H, ddd), 6,51 - 6,54 (1H, m), 6,79 (1H, d), 7,19 (1H, t). m/z: ES+ [M+H]+ 266.
Intermedio 27
Ácido 2-etoxi-2-(3-metoxifenil)acético
Figure imgf000039_0003
A una mezcla agitada de 3-metoxibenzaldehído (5,0 g, 36,72 mmol) y bromoformo (3,85 ml, 44,06 mmol) en etanol (40 ml) a 0 °C se añadió gota a gota durante un periodo de 1 hora una solución de hidróxido potásico (11,33 g, 201,98 mmol) en etanol (60 ml). Después de completar la adición, la mezcla se dejó en agitación a t.a. durante una noche. Se había formado un precipitado que se retiró por filtración, y el filtrado se evaporó para dar una pasta que se recogió en agua (100 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml). A continuación, la fase acuosa se acidificó a pH = 2 con HCl 2 M y se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO4), se filtró y se evaporó para dar un aceite marrón pálido. Esto se absorbió sobre sílice y se purificó por FCC (SiO2 , 5 % de MeOH en DCM) para dar ácido 2-etoxi-2-(3-metoxifenil)acético (3,1 g, 40 %) como un aceite marrón pálido. RMN 1H (400 MHz, CDCb, 21 °C) ó 1,28 (3H, t), 2,09 (1H, s), 3,64 - 3,52 (2H, m), 3,81 (3H, s) 4,86 (1H, s), 6,89 (1H, ddd), 6,99 (1H, m), 7,03 (1H, m), 7,29 (1H, t). m/z: ES' [M-H]- 209.
Intermedio 28
Ácido 2-(3,5-dimetoxifenil)-2-metoxi-acético
Figure imgf000040_0001
Una solución de hidróxido potásico (9,79 g, 174,43 mmol) en MeOH (80 ml) se añadió durante 2 h en pequeñas porciones a una mezcla agitada de 3,5-dimetoxibenzaldehído (5,27 g, 31,71 mmol) y bromoformo (3,33 ml, 38,06 mmol) en MeOH (40 ml) a 0 °C. A continuación, la mezcla se dejó calentar a t.a. y se dejó en agitación durante una noche. Los sólidos se filtraron a presión reducida, y se enjuagó con MeOH (40 ml). El filtrado se evaporó hasta una pasta blanca espesa y a continuación se redisolvió en agua (150 ml). Esto se lavó con Et2O (200 ml) y la porción acuosa se acidificó a pH = 2 con HCl 2 M. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (500 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO4), se filtró y se evaporó a presión reducida para dar ácido 2-(3,5-dimetoxifenil)-2-metoxi-acético como una goma amarilla (5,00 g, 70 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 27 °C) ó 3,72 (9H, s), 4,68 (1H, s), 6,45 (1H, s), 6,52 (2H, s).
Intermedio 29
Ácido 3-metoxi-2-(3-metoxifenil)propanoico
Figure imgf000040_0002
Se suspendió 3-metoxi-2-(3-metoxifenil)propanoato de etilo (Intermedio 30, 0,3 g, 1,259 mmol) en agua (5 ml) y se trató con hidróxido de litio (0,3 g, 12,59 mmol) y a continuación calentó a 60 °C durante 3 horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar a t.a. La parte acuosa se extrajo con EtOAc (20 ml) y las sustancias orgánicas se descartaron. La parte acuosa se acidificó con HCl 1 M a pH = 1 y se extrajo con EtOAc (2 x 20 ml). Los extractos orgánicos se secaron (MgSO4), se filtró y se evaporó a presión reducida para dar una goma incolora que se purificó por FCC (SiO2 , 0-100 % de EtOAc en ciclohexano). Las fracciones que contienen el compuesto deseado se combinaron y se evaporaron para dar ácido 3-metoxi-2-(3-metoxifenil)propanoico (88 mg, 33 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) ó 3,25 (s, 3H), 3,49 (1H, dd), 3,74 (3H, s), 3,88 - 3,76 (2H, m), 6,93 - 6,80 (3H, m), 7,32 - 7,17 (1H, m), 12,51 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 211.
Intermedio 30
3-Metoxi-2-(3-metoxifenil)propanoato de etilo
Figure imgf000040_0003
A una solución de 3-hidroxi-2-(3-metoxifenil)propanoato de etilo (Intermedio 31, 0,38 g, 1,695 mmol) en MeCN (2 ml) en un matraz de fondo redondo se añadió óxido de plata (0,5 g, 2,14 mmol). La solución se enfrió a 0 °C y se trató con yodometano (0,17 ml, 2,676 mmol). La mezcla de reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente en la oscuridad durante 2,5 días. El análisis de LCMS mostró una cierta cantidad de producto pero principalmente material de partida. Se añadieron 0,53 ml de yodometano y 0,15 g de óxido de plata adicionales y la agitación continuó durante 24 horas. La reacción había evolucionado de modo que se dejó en agitación durante otros 7 días. El análisis de LCMS mostró una conversión completa. La mezcla se filtró a través de Celite y el disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se adsorbió sobre sílice y se purificó por FCC (SiO2 , 0 - 40 % de EtOAc en ciclohexano). Las fracciones apropiadas se evaporaron a presión reducida para aislar 3-metoxi-2-(3-metoxifenil)propanoato de etilo como un aceite incoloro (0,3 g, 74 %). RMN 1H (400 MHz, CDCls, 21 °C) ó 1,23 (3H, t), 3,37 (3H, s), 3,58 (1H, dd), 3,80 (3H, s), 3,84 (1H, dd), 3,97 (1H, t), 4,24 - 4,08 (2H, m), 6,82 (1H, ddd), 6,95 - 6,85 (2H, m), 7,23 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 239.
Intermedio 31
3-Hidroxi-2-(3-metoxifenil)propanoato de etilo
Figure imgf000041_0001
Se pesó 2-(3-metoxifenil)acetato de etilo (1,0 g, 5,149 mmol) en un matraz de fondo redondo con hidrogenocarbonato sódico (0,02 g, 0,257 mmol). Se añadió DMSO (8 ml) seguido de paraformaldehído (0,39 ml, 5,149 mmol). La suspensión resultante se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 24 horas y a continuación la reacción se calentó a 60 °C durante 3 horas para dar una solución incolora. La mezcla de reacción se enfrió, se diluyó con agua (100 ml) y se neutralizó con HCl 0,5 M. La parte acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml), se secó (MgSO4) y se evaporó a presión reducida para dar un aceite incoloro que se purificó por FCC (SiO2 , 0 - 50 % de EtOAc en ciclohexano). El disolvente se retiró a presión reducida para proporcionar 3-hidroxi-2-(3-metoxifenil)propanoato de etilo como un aceite incoloro (0,38 g, 33 %). RMN 1H (400 MHz, CDCla, 21 °C) ó 1,23 (3H, t), 2,26 (1H, s), 3,86 - 3,76 (5H, m), 4,28 - 4,06 (3H, m), 6,89 - 6,79 (3H, m), 7,30 - 7,22 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 225.
Intermedio 32
Ácido 2-metoxi-2-[3-(trifluorometoxi)fenil]acético
Figure imgf000041_0002
Una solución de hidróxido potásico (1,851 g, 33,00 mmol) en MeOH (10 ml) se añadió durante 2 h en pequeñas porciones a una mezcla agitada de 3-(trifluorometoxi)benzaldehído (1,141 g, 6 mmol) y bromoformo (0,630 ml, 7,20 mmol) en MeOH (5,00 ml) a 0 °C. A continuación, la mezcla se dejó calentar a t.a. y se dejo en agitación durante una noche. En la mezcla de reacción se formó un precipitado blanco. Los sólidos se retiraron por filtración a presión reducida enjuagando la torta de filtro con MeOH (15 ml). El filtrado se evaporó hasta una pasta blanca espesa y a continuación se redisolvió en agua (50 ml). A continuación, esto se lavó con Et2O (50 ml). La fase acuosa se acidificó a pH = 2 (~5 ml de solución de HCl 2 M) y a continuación se extrajo en EtOAc (3 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO4), se filtró y se evaporó a presión reducida para dar un aceite transparente. El producto crudo se purificó por FCC (SiO2 , 10 - 50 % de EtOAc en heptanos). Las fracciones puras se evaporaron a sequedad para proporcionar ácido 2-metoxi-2-[3-(trifluorometoxi)fenil]acético (0,832 g, 55 %) como un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCla, 30 °C) ó 3,47 (3H, s), 4,81 (1H, s), 7,20-7,24 (1H, m), 7,33 (1H, s), 7,37 - 7,46 (2H, m). m/z: ES' [M-H]- 249,4.
Intermedio 33
Ácido 2-(3,5-dimetoxifenil)-2-etoxi-acético
Figure imgf000042_0001
A una mezcla agitada de 3,5-dimetoxibenzaldehído (2,16 ml, 15,04 mmol) y bromoformo (1,58 ml, 18,054 mmol) en etanol (15 ml) a 0 °C se añadió, gota a gota durante 30 min, una solución de hidróxido potásico (4,64 g, 82,747 mmol) en etanol (30 ml). Después de finalizar la adición de la mezcla, se dejó en agitación y se calentó a temperatura ambiente durante una noche. A la mañana siguiente, el precipitado se retiró por filtración. El filtrado se evaporó para dar una pasta que se recogió en agua (75 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 75 ml). A continuación, la fase acuosa sea cíclico a pH = 2 con HCl 2 N. Se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO4) y se evaporó para dar el producto crudo. La purificación fue por FCC (SiO2 , 0-5 % de MeOH en DCM). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a presión reducida para dar ácido 2-(3,5-dimetoxifenil)-2-etoxi-acético como una goma naranja (2,46 g, 68 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 25 °C) 61,15 (3H, t), 3,37 - 3,42 (1H, m), 3,48 - 3,55 (1H, m), 3,73 (6H, s), 4,78 (1H, s), 6,29 (1H, s), 6,53 (1H, s), 6,54 (1H, s), 12,76 (1H, s). m/z: ES' [M-H]-239.
Intermedio 34
Ácido 2-[4-fluoro-3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acético
Figure imgf000042_0002
Se suspendió 2-[4-fluoro-3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetato de metilo (Intermedio 35, 250 mg, 0,88 mmol) en agua (1,5 ml), se trató con hidróxido de litio (42 mg, 1,77 mmol) y se calentó a 40 °C durante 2 h. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y el MeOH se evaporó a presión reducida. La fase acuosa se diluyó con solución salina saturada (5 ml) y se ajustó a pH = 5 mediante la adición de ácido cítrico acuoso saturado. La parte acuosa se extrajo con DCM que contiene un 5 % de MeOH (3 x 10 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO4) y se filtró. La parte acuosa se acidificó adicionalmente a pH = 3 mediante la adición de ácido fórmico y a continuación se volvió a extraer con EtOAc (4 x 10 ml). Los extractos de EtOAc se combinaron, se secaron (MgSO4), se filtraron, se combinaron con los extractos de DCM/MeOH y a continuación se evaporaron a presión reducida. El residuo gomoso se concentró dos veces a partir de Et2O para dar ácido 2-[4-fluoro-3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acético (221 mg, 93 %) como un sólido vitreo amarillo pálido. RMN 1H (400 m Hz , CDCb, 21 °C) 6 3,33 (3H, s), 3,41 (3H, s), 3,80-3,83 (2H, m), 4,19 - 4,23 (2H, m), 4,29 - 4,33 (1H, m), 4,68 (1H, s), 6,50 (1H, dd), 6,75 (1H, ddd), 6,94 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 270,1.
Intermedio 35
2-[4-Fluoro-3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetato de metilo
Figure imgf000042_0003
Se pesó 2-(3-bromo-4-fluoro-fenil)-2-metoxi-acetato de metilo (Intermedio 36, 600 mg, 2,17 mmol) en un matraz de fondo redondo de 3 bocas equipado con un Suba-Seal, entrada de N2 y condensador de reflujo. El matraz se lavó abundantemente con N2 durante 5 minutos y a continuación se añadieron clorhidrato de 3-metoxiazetidina (0,27 g, 2,17 mmol) y carbonato de cesio (2,47 g, 7,58 mmol). En un matraz separado se disolvieron 2-diciclohexilfosfino-2,6-di-/so-propoxibifenilo, (Ruphos, 0,04 g, 0,087 mmol) y Ruphos Pd G2 (0,06 g, 0,077 mmol) en tolueno seco. La solución se desgasificó con N2 durante 5 minutos a través de una aguja y a continuación se añadió a los otros reactivos en el matraz de fondo redondo de 3 bocas a través del Suba-Seal. La mezcla de reacción se calentó a 90 °C durante 20 h. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc (20 ml) y agua (20 ml). La fase orgánica se recogió y la fase acuosa se lavó con una porción adicional de EtOAc (20 ml). Los extractos orgánicos se lavaron con solución salina saturada (50 ml), se separaron y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por FCC (SiO2 , 0 - 70 % de EtOAc en éter de petróleo). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a presión reducida para dar 2-[4-fluoro-3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetato de metilo (136 mg, 22 %) como un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCb, 21 °C) ó 3,33 (3H, s), 3,38 (3H, s), 3,72 (3H, s), 3,78 -3,83 (2H, m), 4,19 - 4,23 (2H, m), 4,29 - 4,33 (1H, m), 4,67 (1H, s), 6,55 (1H, dd), 6,75 (1H, ddd), 6,92 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 284,0.
Intermedio 36
2-(3-Bromo-4-fluoro-fenil)-2-metoxi-acetato de metilo
Figure imgf000043_0001
Se disolvió sodio (93 mg, 4,05 mmol) en MeOH (12 ml) en atmósfera de N2. Se añadió una solución de 2-bromo-2-(3-bromo-4-fluoro-fenil)acetato de metilo (Intermedio 37, 1,20 g, 3,68 mmol) en MeOH (3 ml) y la mezcla de reacción se calentó a 40 °C durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió a t.a. y se evaporó a presión reducida. El residuo se trató con NH4Cl saturado (ac.) (10 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 10 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO4), se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por FCC (SiO2 , 0 - 10 % de EtOAc en éter de petróleo). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a presión reducida para dar 2-(3-bromo-4-fluoro-fenil)-2-metoxi-acetato de metilo (616 mg, 60 %) como un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCb, 21 °C) ó 3,42 (3H, s), 3,74 (3H, s), 4,73 (1H, s), 7,12 (1H, t), 7,37 (1H, ddd), 7,67 (1H, dd).
Intermedio 37
2-Bromo-2-(3-bromo-4-fluoro-fenil)acetato de metilo
Figure imgf000043_0002
Se preparó una solución de 2-(3-bromo-4-fluoro-fenil)acetato de metilo (5,0 g, 20,24 mmol) en tetracloruro de carbono (50 ml) y se añadió W-bromosuccinimida (3,78 g, 21,25 mmol) seguido de 2,2'-azobis(2-metilpropionitrilo) (0,17 g, 1,01 mmol). La reacción se calentó a reflujo durante 4 horas y se permitió que enfriara a temperatura ambiente. El precipitado se retiró por filtración y la solución se evaporó a presión reducida. El residuo crudo se purificó por FCC (SiO2 , 0 - 10 % de EtOAc en éter de petróleo). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a presión reducida para dar 2-bromo-2-(3-bromo-4-fluoro-fenil)acetato de metilo (5,30 g, 80 %) como un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCla, 21 °C) ó 3,81 (3H, s), 5,28 (1H, s), 7,12 (1H, t), 7,49 (1H, ddd), 7,78 (1H, dd).
Intermedio 38
2-[4-Fluoro-3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetato de litio
Figure imgf000043_0003
Se suspendió hidróxido de litio (99,86 mg, 4,16 mmol) en agua (10 ml) y metanol (33 ml), se trató con 2-[4-fluoro-3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetato de metilo (Intermedio 39, 565 mg, 2,08 mmol) y se calentó a 45 °C en una atmósfera de nitrógeno durante 2 horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y el MeOH y agua se retiraron a presión reducida antes de secarse en un horno de vacío durante 1 día. Esto dio 2-[4-fluoro-3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetato de litio (0,60 g, 75 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) ó 3,18 (3H, s), 3,95 -3,50 (3H, m), 4,18 - 4,11 (1H, m), 4,21 (1H, s), 5,58 - 5,32 (1H, m), 6,60 (1H, dd), 6,77 - 6,70 (1H, m), 6,96 - 6,88 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 263,1.
Intermedio 39
2-[4-Fluoro-3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetato de metilo
Figure imgf000044_0001
En un matraz de fondo redondo de 2 bocas equipado con un Suba-Seal, barra de agitación magnética, entrada de nitrógeno y condensador de reflujo se añadió aducto de Ruphos Pd G1 metil-f-butiléter (0,16 g, 0,193 mmol), 2-diciclohexilfosfino-2,6-diisopropoxibifenilo, (Ruphos, 0,09 g, 0,193 mmol), clorhidrato de 3-fluoroazetidina (0,5 g, 4,461 mmol) y carbonato de cesio (4,24 g, 13,01 mmol). El matraz se lavó abundantemente con gas nitrógeno durante 5 minutos y a continuación, en un matraz de fondo redondo separado se puso 2-(3-bromo-4-fluoro-fenil)-2-metoxiacetato de metilo (Intermedio 36, 1,03 g, 3,717 mmol). El matraz se ajustó con un Suba-Seal y se añadió tolueno (25 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se desgasificó por burbujeo de nitrógeno a través del mismo durante 5 minutos y a continuación se añadió en atmósfera de nitrógeno al matraz de fondo redondo de 2 bocas que contenía los otros reactivos. La mezcla de reacción se calentó a 90 °C durante 48 horas y después se dejó enfriar a temperatura ambiente y se evaporó a presión reducida. El residuo se repartió entre EtOAc (100 ml) y agua (100 ml). La fase acuosa se extrajo con una porción adicional de EtOAc (200 ml). Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron con MgSO4, se filtraron y se evaporaron a presión reducida para producir un aceite marrón claro que se disolvió en EtOAc y se absorbió sobre sílice y a continuación se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida, eluyendo con un 0-100 % de EtOAc en ciclohexano. La evaporación de las fracciones apropiadas proporcionó 2-[4-fluoro-3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-acetato de metilo, (565 mg, 33 %) como un líquido amarillo pálido. r Mn 1H (400 MHz, DMSO-d6) ó 3,28 (3H, s), 3,63 (3H, s), 4,02 - 3,84 (2H, m), 4,31-4,17 (2H, m), 4,84 (1H, s), 5,57 - 5,31 (1H, m), 6,62 - 6,53 (1H, m), 6,79 - 6,71 (1H, m), 7,07 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 271,2.
Intermedio 40
2-[3-(3-Fluoroazetidin-1-il)-5-metoxi-fenil]-2-metoxi-acetato de litio
Figure imgf000044_0002
Se suspendió hidróxido de litio (0,02 g, 0,932 mmol) en agua (1 ml) y MeOH (3 ml) y se trató con 2-[3-(3-fluoroazetidin-1- il)-5-metoxi-fenil]-2-metoxiacetato de metilo (Intermedio 41, 0,13 g, 0,466 mmol) La mezcla se calentó a 45 °C en atmósfera de N2 durante 2 h. A continuación se permitió que se enfriara a t.a. y los disolventes se retiraron a presión reducida antes de secar al vacío durante 3 días para producir 2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)-5-metoxi-fenil]-2-metoxiacetato de litio (137 mg, 101 %). m/z: ES+ [M+H]+ 269,3.
Intermedio 41
2- [3-(3-Fluoroazetidin-1-il)-5-metoxi-fenil]-2-metoxi-acetato de metilo
Figure imgf000045_0001
En un matraz de fondo redondo se puso 2-(3-bromo-5-metoxi-fenil)-2-metoxi-acetato de metilo (Intermedio 42, 0,3 g, 1,038 mmol). El matraz se ajustó con un Suba-Seal y se añadió tolueno (6,5 ml) en atmósfera de N2. La solución resultante se desgasificó por burbujeo de N2 durante 5 minutos. En un matraz de fondo redondo de 2 bocas equipado con un Suba-Seal, barra de agitación magnética, entrada de nitrógeno y condensador de reflujo se añadió aducto de Ruphos Pd G1 metil-f-butiléter (0,04 g, 0,054 mmol), 2-diciclohexilfosfino-2,6-diisopropoxibifenilo, (Ruphos, 0,03 g, 0,054 mmol), clorhidrato de 3-fluoroazetidina (0,14 g, 1,245 mmol) y carbonato de cesio (1,18 g, 3,632 mmol). El matraz se lavó abundantemente con N2 durante 5 min antes de la adición de la solución desgasificada de 2-(3-bromo-5-metoxi-fenil)-2-metoxi-acetato de metilo (0,3 g, 1,038 mmol) en tolueno a través del Suba-Seal. La mezcla de reacción se calentó a 90 °C durante 48 horas y después se dejó enfriar a temperatura ambiente y se evaporó a presión reducida. El residuo se repartió entre EtOAc (100 ml) y agua (100 ml). La fase acuosa se extrajo con una porción adicional de EtOAc (200 ml). Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron (MgSO4), se filtraron y se evaporaron para producir un aceite marrón claro que se disolvió en EtOAc y se absorbió sobre sílice. Se purificó por FCC (SiO2, 0-50 % de EtOAc en ciclohexano). La evaporación de las fracciones apropiadas proporcionó 2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)-5-metoxi-fenil]-2-metoxi-acetato de metilo (132 mg, 42 %) como un líquido amarillo pálido. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 63,27 (3H, s), 3,62 (3H, s), 3,71 (3H, s), 3,78 - 3,96 (2H, m), 4,05 - 4,21 (2H, m), 4,77 (1H, s), 5,35 - 5,57 (1H, m), 5,98 (1H, s), 6,05 (1H, s), 6,29 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 283,3.
Intermedio 42
2-(3-Bromo-5-metoxi-fenil)-2-metoxi-acetato de metilo
Figure imgf000045_0002
Se disolvió ácido 2-(3-bromo-5-metoxi-fenil)-2-metoxi-acético (Intermedio 43, 2,77 g, 10,06 mmol) en MeOH (30 ml), se trató con ácido sulfúrico concentrado (0,17 ml, 2,014 mmol) , y después se calentó a 65 °C durante 2 h. La mezcla se enfrió a t.a. y se evaporó después se diluyó con agua (5 ml) seguido de bicarbonato sódico acuoso saturado (20 ml). La parte acuosa se extrajo en DCM seguido de EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se evaporaron y el material crudo se purificó por f Cc (SiO2 , 0-40 % de EtOAc en ciclohexano). Las fracciones que contienen el producto se evaporaron para dar 2-(3-bromo-5-metoxi-fenil)-2-metoxi-acetato de metilo (1,2 g, 41 %). (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 6 3,31 (s, 3H), 3,65 (3H, s), 3,78 (3H, s), 4,94 (1H, s), 6,90 - 6,95 (1H, m), 7,11 - 7,14 (1H, m), 7,15 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 290.
Intermedio 43
Ácido 2-(3-bromo-5-metoxi-fenil)-2-metoxi-acético
Figure imgf000045_0003
A una mezcla agitada de hidróxido potásico (2,87 g, 51,15 mmol) y bromoformo (0,98 ml, 11,16 mmol) en metanol (15 ml) a 0 °C se añadió, durante un periodo de 10 min una suspensión de 3-bromo-5-metoxi-benzaldehído (0,75 ml, 9,301 mmol) en metanol (60 ml). Después de añadir la mezcla, se dejó en agitación a medida que se calentaba a temperatura ambiente durante una noche. A continuación, la mezcla de reacción se trató con DCM (60 ml) y el precipitado se retiró por filtración. El filtrado se evaporó para dar una pasta que se recogió en agua (200 ml) y se extrajo con DCM (200 ml). A continuación, la fase acuosa se acidificó a pH 2 con HCl 2 M y se extrajo con DCM (2 x 100 ml) y EtOAc (2 x 100 ml). Los extractos orgánicos combinados se evaporaron a presión reducida y se sometió a cromatografía (SiO2 , 0-30 % de EtOAc-ciclohexano). Las fracciones que contenían el producto se evaporaron para dar ácido 2-(3-bromo-5-metoxi-fenil)-2-metoxi-acético (0,84 g, 33 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da) 53,30 (s, 3H) 3,77 (s, 3H), 4,78 (s, 1H), 6,94 - 6,91 (m, 1H), 7,14 - 7,10 (m, 2H), 13,04 (s, 1H). m/z: ES+ [M+H]+ 275,1.
Intermedio 44
Ácido 2-metoxi-2-[3-metoxi-5-(trifluorometoxi)fenil]acético
Figure imgf000046_0001
A una mezcla agitada de 3-metoxi-5-(trifluorometoxi)benzaldehído (Intermedio 45,
0,15 g, 0,681 mmol) y bromoformo (0,07 ml, 0,81 mmol) en MeOH (1 ml) a 0 °C se añadió, gota a gota durante 30 min, una solución de hidróxido potásico (0,207 g, 3,75 mmol) en MeOH (2 ml). La mezcla se agitó y se calentó a t.a. durante una noche. El precipitado resultante se retiró por filtración. El filtrado se evaporó para dar una pasta que se recogió en agua (100 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml) para retirar el aldehido sin reaccionar. A continuación, la fase acuosa se acidificó a pH = 2 con ácido clorhídrico 2 N y se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO4), se filtró y se evaporó a presión reducida para proporcionar producto crudo que se purificó por FCC (SiO2 , 0-10 % de MeOH en DCM) para dar ácido 2-metoxi-2-[3-metoxi-5-(trifluorometoxi)fenil]acético (191 mg, 34 %) como un sólido amarillo. m/z: ES+ [m H]+ 280.
Intermedio 45
3-Metoxi-5-(trifluorometoxi)benzaldehído
Figure imgf000046_0002
A una solución agitada de [3-metoxi-5-(trifluorometoxi)fenil]metanol (Intermedio 46, 330 mg, 1,49 mmol) en DCM (18 ml) se añadió dióxido de manganeso activado (646 mg, 7,43 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a t.a. durante 3 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (50 ml), se extrajo con DCM (3 x 50 ml), se lavó con solución salina saturada (100 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó a presión reducida para proporcionar producto crudo que se purificó por FCC (SiO2 , 0-50 % de EtOAc en ciclohexano) para dar 3-metoxi-5-(trifluorometoxi)benzaldehído, (0,15 g, 45 %) como un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 21 °C) 53,83 (3H, s), 7,24 - 7,27 (1H, m), 7,39 - 7,42 (1H, m), 7,46 - 7,48 (1H, m), 9,94 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 222.
Intermedio 46
[3-Metoxi-5-(trifluorometoxi)fenil]metanol
Figure imgf000046_0003
A una solución agitada de ácido 3-metoxi-5-(trifluorometoxi)benzoico (0,50 g, 2,12 mmol) en THF (10 ml) a 0 °C en una atmósfera de nitrógeno se añadió, gota a gota durante 10 min, hidruro de litio y aluminio (1 M en THF, 2,33 ml, 2,33 mmol). La mezcla de reacción se agitó y se calentó a t.a. en una atmósfera de nitrógeno durante 3 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (10 ml), seguido de una solución de NaOH 2 N (30 ml) y las sales formadas se retiraron por filtración. El filtrado se extrajo con DCM (3 x 100 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó a presión reducida para proporcionar producto crudo que se purificó por FCC (SiO2 , 0-50 % de EtOAc en ciclohexano) para dar [3-metoxi-5-(trifluorometoxi)fenil]metanol (0,33 g, 67 %) como un sólido blanco. m/z: ES+ [M+H]+ 222.
Intermedio 47
Ácido 2-[3-(difluorometoxi)fenil]-2-etoxi-acético
Figure imgf000047_0001
A una mezcla agitada de 3-(difluorometoxi)benzaldehído (2,0 g, 11,619 mmol) y bromoformo (1,22 ml, 13,94 mmol) en etanol (40 ml) a 0 °C se añadió, gota a gota durante 1 hora, una solución de hidróxido potásico (3,59 g, 63,90 mmol) en etanol (20 ml). Después de la adición, la mezcla se dejó en agitación y se calentó la t.a. durante una noche. El precipitado se retiró por filtración y el filtrado se evaporó a presión reducida para dar una pasta que se recogió en agua (100 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 75 ml). A continuación, la fase acuosa se acidificó a pH = 1 con HCl 2 M y se extrajo con EtOAc (2 x 75 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO4), se filtró y se evaporó para dar un aceite marrón pálido que se purificó por FCC (SiO2 , ciclohexano:EtOAc 95:5 ácido fórmico al 0,1 % aumentando a EtOAc:ciclohexano 8:2 ácido fórmico al 0,1 %). Las fracciones apropiadas se evaporaron a presión reducida para proporcionar ácido 2-[3-(difluorometoxi)fenil]-2-etoxi-acético como un aceite incoloro (1,8 g, 62 %). RMN 1H (400 MHz, CDCla, 21 °C) 61,29 (3H, t), 3,49-3,70 (2H, m), 4,89 (1H, s), 6,52 (1H, t), 7,07 - 7,15 (1H, m), 7,21 - 7,26 (1H, m), 7,28 -7,35 (1H, m), 7,34- 7,41 (1H, m). m/z: ES' [M-H]- 245.
Intermedio 48
Ácido 2-metoxi-2-[3-(oxetan-3-il)fenil]acético
Figure imgf000047_0002
Se añadió una solución de hidróxido potásico (1,427 g, 25,43 mmol) en MeOH (30 ml) durante 2 horas en porciones pequeñas a una mezcla agitada de 3-(oxetan-3-il)benzaldehído (Intermedio 49, 750 mg, 4,62 mmol) y bromoformo (0,485 ml, 5,55 mmol) en MeOH (15 ml) a 0 °C. A continuación, la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se dejó en agitación durante una noche. Los sólidos se filtraron a presión reducida, aclarando los sólidos con MeOH (15 ml). El filtrado se evaporó hasta una pasta blanca espesa y a continuación se redisolvió en agua (150 ml). Esto se lavó con Et2O (200 ml) y a continuación se acidificó a pH = 2 con 2 M. La fase acuosa se extrajo en EtOAc (300 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO4), se filtró y se evaporó a presión reducida para dar ácido 2-metoxi-2-[3-(oxetan-3-il)fenil]acético como un aceite incoloro (1,0 g, 97 %) que se usó sin purificación adicional. RMN 1H (400 MHz, DMSO, 30 °C) 63,31 (3H, s), 4,18 - 4,35 (1H, m), 4,58 (2H, m), 4,77 (1H, s), 4,94 (1H, m), 7,22 - 7,57 (4H, m).
Intermedio 49
3-(Oxetan-3-il)benzaldehído
Figure imgf000047_0003
Se añadió óxido de manganeso(IV) (14,30 g, 164,43 mmol) a (3-(oxetan-3-il)fenil)metanol (Intermedio 50, 1,5 g, 8,22 mmol) en DCM (70 ml) a 21 °C en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a 21 °C durante 16 horas. A continuación la reacción se filtró a través de Celite, se lavó con DCM y se evaporó hasta una goma. El producto crudo se purificó por FCC (SiO2 , 10 - 60 % de EtOAc en heptanos). Las fracciones puras se evaporaron a sequedad para proporcionar 3-(oxetan-3-il)benzaldehído (800 mg, 60 %) como una goma incolora. RMN 1H (400 MHz, DMSO, 30 °C) 64,21 - 4,51 (1H, m), 4,64 (2H, m), 4,98 (2H, m), 7,60 (1H, t), 7,74 (1H, d), 7,79 - 7,85 (1H, d), 7,94 (1H, s), 10,03 (1H, s).
Intermedio 50
(3-(Oxetan-3-il)fenil)metanol
Figure imgf000048_0001
Se añadió hidruro de litio y aluminio (1 M en THF, 1,94 ml, 1,95 mmol) gota a gota a 3-(oxetan-3-il)benzoato sódico (300 mg, 1,50 mmol) en THF (10 ml) a 0 °C en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 20 minutos, a continuación a 25 °C durante 18 horas. Se añadió HCl acuoso al 5 % y la mezcla se extrajo con EtOAc (100 ml), se lavó con solución acuosa de Na2CO32 M, antes de secar la fase orgánica (Na2SO4), se filtró y se evaporó. El producto crudo se purificó por FCC (SiO2 , 50 - 100 % de EtOAc en heptano seguido de un 10 % de NH3 1 M en MeOH en EtOAc). Las fracciones puras se evaporaron a sequedad para proporcionar (3-(oxetan-3-il)fenil)metanol (140 mg, 57 %) como una goma incolora. RMN 1H (400 MHz, DMSO, 30 °C) 64,20 (1H, m), 4,51 (2H, d), 4,62 (2H, m), 4,95 (2H, m), 5,16 (1H, t), 7,17 - 7,29 (2H, m), 7,31-7,41 (2H, m).
Intermedio 51
Ácido 2-etoxi-2-[3-(trifluorometoxi)fenil]acético
Figure imgf000048_0002
A una mezcla agitada de hidróxido potásico (1,62 g, 28,93 mmol) y bromoformo (0,55 ml, 6,31 mmol) en etanol (15 ml) a 0 °C se añadió, lentamente durante un periodo de 10 min, una solución de 3-(trifluorometoxi)benzaldehído (0,75 ml, 5,26 mmol) en etanol (30 ml). Después de la adición, la mezcla se dejó en agitación y se calentó a temperatura ambiente durante una noche. El precipitado se retiró por filtración. El filtrado se evaporó para dar una pasta que se recogió en agua (200 ml) y se extrajo con DCM (100 ml). Esto formó una emulsión, a continuación, la fase acuosa se acidificó con HCl 2 M (10 ml) y se separó. A continuación extrajo adicionalmente con EtOAc (100 ml). Los extractos orgánicos combinados se evaporaron a presión reducida y se purificó por FCC (SiO2 , 0-50 % de EtOAc en ciclohexano). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a presión reducida para dar ácido 2-etoxi-2-[3-(trifluorometoxi)fenil]acético (690 mg, 49 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 21 °C) 61,16 (3H, t), 3,38 - 3,50 (1H, m), 3,53 - 3,66 (1H, m), 4,99 (1H, s), 7,28 - 7,39 (2H, m), 7,45 (1H, d), 7,53 (1H, t), 13,04 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 265.
Intermedio 52
Ácido 2-[4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]-2-metoxi-acético
Figure imgf000048_0003
Se suspendió hidróxido de litio (0,02 g, 0,9 mmol) en agua (1 ml) y metanol (3 ml) y se trató con 2-[4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]-2-metoxi-acetato de etilo (Intermedio 53, 0,13 g, 0,45 mmol) y se calentó a 45 °C durante 2 horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y el MeOH se retiró a presión reducida. La fase acuosa se diluyó con solución salina saturada (20 ml) y se ajustó a pH 3 mediante la adición de ácido fórmico y a continuación se extrajo con EtOAc (3 x 20 ml). Los extractos de EtOAc combinados se lavaron con solución salina saturada (30 ml), se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se retiró a presión reducida para producir ácido 2-[4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]-2-metoxi-acético (0,127 g, 105 %). RMN 1H (400 MHz, CDCl3-d6, 25 °C) ó 3,47 (3H, s), 4,78 (1H, s), 7,23 (1H, dd), 7,37 - 7,46 (2H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 268,98.
Intermedio 53
2-[4-Fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]-2-metoxi-acetato de etilo
Figure imgf000049_0001
En un matraz de fondo redondo en atmósfera de N2 se añadió sodio (0,04 g, 1,66 mmol) a metanol seco (12 ml). A esta solución se le añadió 2-bromo-2-[4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]acetato de metilo (Intermedio 54, 0,5 g, 1,51 mmol) en metanol (3 ml) en atmósfera de N2. La mezcla de reacción se calentó a 40 °C durante 2 horas. El disolvente se retiró a presión reducida y la goma restante se repartió entre solución saturada de cloruro de amonio (50 ml) y EtOAc (50 ml). La fase acuosa se extrajo con una porción adicional de EtOAc (50 ml). Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron con MgSO4, se filtraron y el disolvente se retiró a presión reducida. El aceite residual se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con un 100 % de ciclohexano a un 15 % de EtOAc en ciclohexano. La evaporación de las fracciones apropiadas proporcionó 2-[4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]-2-metoxiacetato de etilo (0,127 g, 28 %). RMN 1H (400 MHz, CDCla-d6, 25 °C) ó 1,23 (3H, t), 3,44 (3H, s), 4,12 - 4,28 (2H, m), 4,74 (1H, d), 7,20 (1H, dd), 7,39 (1H, dddd), 7,42 -7,48 (m, 1H).
Intermedio 54
2-Bromo-2-[4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]acetato de metilo
Figure imgf000049_0002
Se pesaron 2-[4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]acetato de metilo (Intermedio 55, 0,65 g, 2,578 mmol) y N-bromosuccinimida (4,08 g, 22,919 mmol) en un matraz de fondo redondo y se añadieron 2,2-azobis(2-metilpropionitrilo), (AIBN, 0,02 g, 0,129 mmol) en tetracloruro de carbono (6 ml). La reacción se calentó a reflujo durante 4 horas y se permitió que enfriara a temperatura ambiente. El precipitado se retiró por filtración y la solución se trató con sílice y se evaporó a presión reducida y se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con un 100 % de ciclohexano aumentando gradualmente a un 30 % de EtOAc en ciclohexano. Las fracciones apropiadas se evaporaron a presión reducida para producir 2-bromo-2-[4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]acetato de metilo como un aceite amarillo pálido (1,1 g, 129 %).
RMN 1H (400 MHz, CDCla-d6, 25 °C) ó 3,81 (3H, s), 5,29 (1H, s), 7,17 - 7,24 (1H, m,), 7,46 - 7,52 (1H, m), 7,53 - 7,59 (1H, m).
Intermedio 55
2-[4-Fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]acetato de metilo
Figure imgf000049_0003
Se suspendió ácido 4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenilacético (1,0 g, 4,199 mmol) en metanol (10 ml) y se trató con ácido sulfúrico (0,07 ml, 0,84 mmol) y se calentó a 45 °C durante 2 horas. Se permitió que la mezcla de reacción se enfriara a temperatura ambiente y el metanol se retiró a presión reducida. El residuo se diluyó con solución salina saturada (20 ml) y a continuación se extrajo con EtOAc (3 x 20 ml). Los extractos de EtOAc combinados se lavaron con solución salina saturada (30 ml), se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se retiró a presión reducida para producir 2-[4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]acetato de metilo, (0,65 g, 61 %).
RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) ó 3,63 (3H, s), 3,78 (2H, s), 7,33 - 7,39 (1H, m), 7,42 - 7,53 (2H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 253.
Ensayos biológicos
Los siguientes ensayos se usaron para medir los efectos de los compuestos descritos en el presente documento: a) ensayo de potencia enzimática de GLS; b) ensayo de potencia celular de GLS; c) ensayo de proliferación celular de GLS. Durante la descripción de los ensayos, generalmente:
i. Se usaron las siguientes abreviaturas: CO2 = dióxido de carbono; DMEM = medio Eagle modificado por Dulbecco; DMSO = dimetilsulfóxido; EDTA = ácido etilendiamintetraacético; EGTA = ácido etilenglicoltetraacético; FCS = suero bovino fetal; h = hora u horas; NBS = superficie de no unión; SDS = dodecilsulfato sódico; TRIS = tris(hidroximetil)aminometano.
ii. Los valores de CI50 se calcularon usando un modelo de ajuste inteligente en Genedata. El valor de CI50 fue la concentración del compuesto de ensayo que inhibió un 50 % de la actividad biológica.
Ensayo a): ensayo de potencia enzimática de GLS
Se usó un ensayo acoplado a glutamato oxidasa/rojo Amplex para medir la capacidad de los compuestos para unirse e inhibir la actividad de GLS1 in vitro. La proteína GLS marcada con 6His (aminoácidos 63-669) expresada en E. Coli se purificó y se almacenó a -80 °C en alícuotas. Se diluyó GLS1 hasta 2 x concentración de trabajo y se incubó a temperatura ambiente para permitir que las formas tetraméricas/diméricas alcanzaran el estado estacionario. Las mediciones del ensayo se realizaron en tampón que comprendía TRIS 50 mM pH 7,8, NaPO4100 mM, pH 7,8, Tween 20 al 0,001 % v/v. La proteína GLS1 recombinante purificada se diluyó en tampón de ensayo a 12 nM y se preincubó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Los compuestos de ensayo se prepararon por dilución en DMSO al 100 % para dar el intervalo de dosis correcto para respuesta de concentración de 12 puntos y un volumen apropiado (2,5­ 60 nl) distribuido en microplacas de ensayo de 384 pocillos (Greiner, código de producto 784900) usando un distribuidor acústico Labcyte Echo 555. La concentración de DMSO se mantuvo al 2 % rellenando con solución de DMSO. A continuación, en cada pocillo se distribuyeron 3 pl de proteína GLS1 diluida (12 nM) usando un distribuidor automatizado BioRaptr (Beckman-Coulter) y se incubó durante 15 minutos a temperatura ambiente. A continuación se añadieron 3 pl de glutamina 100 mM diluida en tampón de ensayo y la reacción se incubó a temperatura ambiente durante 60 minutos. A continuación, la reacción se detuvo mediante la adición de 6-(2-bromoetinil)-2,3-dimetilquinazolin-4-ona 45 pM, rojo Amplex 75 pM, 0,375 unidades/ml de peroxidasa de rábano picante, 0,12 unidades/ml de glutamato oxidasa en TRIS 100 mM pH 7,5. Después de 30 minutos a temperatura ambiente en la oscuridad, la lectura de las placas se realizó en un Perkin Elmer EnVision usando filtros ópticos de 535/590 nm y los datos sin procesar se analizaron usando Genedata para generar valores de CI50. También se usó una versión de artefacto del ensayo donde la proteína GLS marcada con 6His y glutamina se reemplazaron con tampón de ensayo para excluir los efectos no específicos en los componentes de ensayo.
Ensayo b): ensayo de potencia celular de GLS
Se evaluó el potencial de los compuestos para inhibir la actividad de GLS celular usando un ensayo acoplado a PC3 que mide el agotamiento de glutamato celular. Los compuestos de ensayo se prepararon por dilución en DMSO al 100 % para dar el intervalo de dosis correcto para respuesta de concentración de 12 puntos y un volumen apropiado (5-120 nl) distribuido en microplacas de ensayo de 384 pocillos (Corning, código de producto 3712) usando un distribuidor acústico Labcyte Echo 555. La concentración de DMSO se mantuvo al 0,3 % rellenando con solución de DMSO. Las células se cultivaron PC3 en DMEM sin fenol, FCS dializado al 10 %, glutamina 2 mM y, tras dispersión por tripsinación, se sembraron en placas a 5,6 x 103 células por pocillo en 40 pl de medio de crecimiento directamente en las placas de ensayo de 384 pocillos que contenían compuesto distribuido. Tras incubación durante 6 h a 37 °C, el medio de crecimiento de CO2 al 5 % se aspiró y las células se sometieron a lisis en 15 pm de tampón que contenía TRIS 10 mM pH 7,4, NaCl 100 mM, EDTA 1 mM, EGTA 1 mM, NaF 1 mM, Na4P2Oy 20 mM, NaaVO42 mM, Triton X-100 al 1 %, glicerol al 10 %, SDS al 0,1 % y desoxicolato al 0,5 %. A continuación se transfirieron 4 pl de lisado celular a una placa NBS de 384 pocillos (Corning, código de producto 3575) y se añadieron 35 pl de rojo Amplex 27,5 pM, 0,1375 U/ml de peroxidasa de rábano picante, 0,044 U/ml de glutamato oxidasa, TRIS 100 mM pH 7,5. Tras 30 minutos a temperatura ambiente en la oscuridad, la lectura de las placas se realizó en un Perkin Elmer EnVision usando filtros ópticos de 535/590 nm y los datos sin procesar se analizaron usando software patentado para generar valores de CI50.
Ensayo c): ensayo de proliferación celular de GLS
La capacidad de los compuestos para inhibir el crecimiento celular se midió usando un ensayo de proliferación celular NCI-H1703 en placa de 384 pocillos. Las células NCI-H1703 se cultivaron en RPMI1640 sin rojo fenol, FCS al 10 % y glutamina 2 mM y se sembraron a una densidad de 750 células por pocillo en 40 pl de medio de crecimiento en placas de ensayo de 384 pocillos de fondo transparente (Corning, código de producto 3712) y se incubó durante 24 h a 37 °C, CO2 al 5 %. Los compuestos de ensayo se prepararon por dilución en DMSO al 100 % para dar el intervalo de dosis correcto para respuesta de concentración de 12 puntos y un volumen apropiado (5-120 nl) distribuido directamente en las placas de ensayo que contienen células sembradas en placas. La concentración de DMSO se mantuvo al 0,3 % rellenando con solución de DMSO. Las placas se incubaron durante 5 días a 37 °C, CO2 al 5 %, se añadieron verde Sytox y saponina a una concentración final de 2 pM y 0,25 % respectivamente y se incubó durante 6 h antes del análisis. La lectura de las placas se realizó en un Acumen eX3 (TTP Labtech) usando excitación a 488 nm y juego de filtros de FITC (500-530 nm) para emisión. Los valores de CI50 se calcularon ajustando la curva a la inhibición máxima de crecimiento de día cero usando el software de análisis GeneData.
Los resultados de los ensayos a) - c) se muestran en la Tabla 1. Los Ejemplos 17, 19 y 45 son ejemplos comparativos.
Tabla 1. Datos del ensa o
Figure imgf000051_0001
continuación
Figure imgf000052_0001
(continuación)
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Claims (12)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de Fórmula (I):
Figure imgf000054_0001
Q es 1,2,4-triazin-3-ilo, piridazin-3-ilo, 6-metilpiridazin-3-ilo, o 6-fluoropiridazin-3-ilo;
R1 es metoxi, trifluorometoxi, oxetan-3-ilo, 3-fluoroazetidin-1-ilo, 3-metoxiazetidin-1-ilo, o 3,3-difluoroazetidin-1-ilo; R2 es hidrógeno o fluoro;
R3 es hidrógeno o metoxi; y
R4 es metoxi, etoxi, o metoximetilo;
con la condición de que cuando R1 es metoxi o trifluorometoxi, entonces R3 no es hidrógeno, y/o R4 es metoximetilo.
2. El compuesto de la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R1 es metoxi y R3 es metoxi.
3. El compuesto de la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R1 es oxetan-3-ilo, 3-fluoroazetidin-1 -ilo, 3-metoxiazetidin-1-ilo, o 3,3-difluoroazetidin-1-ilo.
4. Compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R2 es H.
5. Compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R3 es metoxi.
6. Compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R4 es metoxi.
7. Compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Q es 1,2,4-triazin-3-ilo, o piridazin-3-ilo.
8. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en:
(2s)-2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-2-(3,5-dimetoxifenil)-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-2-[3-(3,3-difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-2-(3,5-dimetoxifenil)-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2R)-3-metoxi-2-(3-metoxifenil)-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]propanamida;
(2s)-2-(3,5-dimetoxifenil)-2-etoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-2-[4-fluoro-3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[(3R)-3-(piridazin-3-ilamino)pirrolidin-1-il]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-W-[5-[[(3R)-1-(6-fluoropiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]acetamida;
(2s)-2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)-5-metoxi-fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol 2-il]acetamida;
(2S)-2-metoxi-2-[3-metoxi-5-(trifluorometoxi)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2R)-2-metoxi-2-[3-metoxi-5-(trifluorometoxi)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-2-(4-fluorofenil)-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(5-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2s)-2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-(6-metilpiridazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2S)-2-[4-fluoro-3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-2-[3-(3,3-difluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-2-metoxi-2-[3-(3-metoxiazetidin-1-il)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-2-[3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida;
(2s)-2-metoxi-2-[3-(oxetan-3-il)fenil]-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; (2R)-2-[4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida; y
(2s)-2-[4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil]-2-metoxi-W-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirrolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida.
9. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
10. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en terapia.
11. Compuesto para el uso de acuerdo con la reivindicación 10, para el tratamiento de cáncer.
12. Compuesto para el uso de acuerdo con la reivindicación 11, en donde el cáncer es cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer pancreático, cáncer renal, o cáncer hepatocelular.
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