ES2914243T3 - Anticuerpos dirigidos contra el receptor de la interleuquina 36 (IL-36R) - Google Patents

Abstract

Un agente de unión al receptor de interleuquina 36 (IL-36R) que comprende (a) una región variable de la cadena pesada de inmunoglobulina de SEQ ID NO: 22; y (b) una región variable de la cadena ligera de inmunoglobulina de SEQ ID NO: 44.

Description

DESCRIPCIÓN

Anticuerpos dirigidos contra el receptor de la interleuquina 36 (IL-36R)

Antecedentes de la invención

Las citoquinas interleuquinas 36 (IL-36) IL-36a, IL-36p e IL-36y (anteriormente IL-1F6, IL-1F8 e IL-1F9) son miembros de la familia de interleuquina-1 (IL-1) que se unen al receptor de IL-36 (IL-36R) (anteriormente IL-1 Rrp2 o IL-1 RL2) y usan la proteína accesoria del receptor de IL-1 (IL-1 RAcP) como correceptor para estimular señales intracelulares similares a las inducidas por la IL-1 (Towne et al., J. Biol. Chem., 279(14): 13677-13688 (2004)). La IL-1F5 es un miembro de la familia de IL-1 que se ha mostrado que actúa como un antagonista del IL-36R y ahora se conoce como IL-36Ra (Dinarello et al., Nat. Inmunol., 11(11): 973 (2010)).

La IL-36a, IL-36p e IL-36y son altamente expresadas en varios tejidos, incluidos los tejidos epiteliales internos que han estado expuestos a patógenos, y en la piel. La expresión de IL-36Ra e IL-36a está significativamente regulada por aumento en queratinocitos humanos estimulados con IL-1p/TNF-a, y los ARNm de IL-36Ra e IL-36y están sobreexpresados en lesiones cutáneas de psoriasis. También se ha observado expresión elevada de proteína y ARNm de IL-36a en la enfermedad renal crónica (Ichii et al., Lab Invest., 90(3): 459-475 (2010)). Tanto las células dendríticas derivadas de la médula ósea (BMDC) murinas como los linfocitos T CD4+ expresan constitutivamente el IL-36R y responden directamente a la IL-36a, IL-36p e IL-36y mediante la producción de citoquinas proinflamatorias (p. ej., IL-12, IL-1 p, IL-6, TNF-a e IL-23) que inducen un efecto estimulador más potente que otras citoquinas IL-1 (Vigne et al., Blood, 118(22): 5813-5823 (2011)).

Los ratones transgénicos que sobreexpresan la IL-36a en los queratinocitos presentan un trastorno inflamatorio transitorio de la piel al nacer que vuelve a los ratones altamente susceptibles a una patología de la piel inducida por 12-O-tetradecanoilforbol-13-acetato que se asemeja a la psoriasis humana (Blumberg et al., J. Exp. Med., 204(11): 2603-2614 (2007); y Blumberg et al., J. Immunol, 185(7):4354-4362 (2010)). Además, los ratones deficientes en IL-36R están protegidos de la dermatitis psoriasiforme inducida por imiquimod (Tortola et al., J. Clin. Invest., 122(11): 3965-3976 (2012)). Estos resultados sugieren fuertemente un papel para la IL-36 en ciertos trastornos inflamatorios de la piel.

Las citoquinas IL-36 también se han implicado en ciertas formas graves de psoriasis, incluida la psoriasis pustulosa, la psoriasis pustulosa generalizada (GPP) y la pustulosis palmoplantar (PPP)) (véase, p. ej., Town, J.E. y Sims, J.E., Curr. Opin. Pharmacol, 12(4): 486-90 (2012); y Naik, H. B. y Cowen, E.W., Dermatol Clin., 31(3): 405-425 (2013)). La psoriasis pustulosa es una forma rara de psoriasis caracterizada por pústulas blancas rodeadas de piel roja. La psoriasis pustulosa generalizada es una forma sistémica grave de psoriasis pustulosa que tiene un alto riesgo de muerte, mientras que la pustulosis palmoplantar es una forma crónica de psoriasis pustulosa que afecta a las palmas de las manos y las plantas de los pies. Los tratamientos actuales para la psoriasis pustulosa, la GPP y la PPP incluyen retinoides orales y esteroides tópicos, pero estos tratamientos muestran poca eficacia y efectos secundarios graves.

El documento US 2013/236471 A1 describe compuestos de unión anti-IL-36R, en particular nuevos anticuerpos anti-IL-36R y métodos y composiciones terapéuticas y de diagnóstico para usar los mismos.

Existe la necesidad de antagonistas de IL-36R (p. ej., un anticuerpo) que se unan a IL-36R con gran afinidad y neutralicen eficazmente la actividad de IL-36R. La invención proporciona dichos agentes de unión al IL-36R.

Breve resumen de la invención

La invención se expone en el conjunto de reivindicaciones adjunto. Las realizaciones y/o ejemplos de la siguiente descripción que no están cubiertos por las reivindicaciones adjuntas no se consideran parte de la presente invención. Cualquier referencia en la descripción a métodos de tratamiento se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para usar en un método para el tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o para diagnóstico).

La presente invención se refiere a un agente de unión al receptor de interleuquina 36 (IL-36R) que comprende (a) una región variable de la cadena pesada de inmunoglobulina de SEQ ID NO: 22; y (b) una región variable de la cadena ligera de inmunoglobulina de SEQ ID NO: 44.

La descripción proporciona un polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina aislado que comprende la secuencia de aminoácidos de Gln Val Gln Xaa1 Xaa2 Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Xaa3 Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Xaa4 Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Xaa5 Asp Xaa6 Ser Ala Xaa7 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Xaa8 Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Xaa9 Cys Thr Arg Ser Phe Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID NO: 56), en donde (a) Xaa1 es leucina (Leu) o fenilalanina (Phe), (b) Xaa2 es valina (Val), metionina (Met) o leucina (Leu), (c) Xaa3 es arginina (Arg) o glicina (Gly), (d) Xaa4 es glicina (Gly), serina (Ser) o alanina (Ala), (e) Xaa5 es arginina (Arg) o alanina (Ala), (f) Xaa6 es treonina (Thr) o lisina (Lys), (g) Xaa7 es serina ( Ser) o asparagina (Asn), (h) Xaa8 es serina (Ser) o alanina (Ala), e (i) Xaa9 es tirosina (Tyr) o fenilalanina (Phe).

La descripción proporciona un polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina aislado que comprende la secuencia de aminoácidos de Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Xaa1 Met Xaa2 Trp Val Arg Gln Ala Pro Xaa3 Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Met Phe Xaa4 Pro Xaa5 Xaa6 Xaa7 Val Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe Lys Asp Val Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Thr Ser Met Ile Ile Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID NO: 15), en donde (a) Xaa1 es triptófano (Trp) o tirosina (Tyr), (b) Xaa2 es histidina (His), asparagina (Asn) o tirosina (Tyr), (c) Xaa3 es glicina (Gly) o arginina (Arg), (d) Xaa4 es ácido aspártico (Asp), ácido glutámico (Glu) o histidina (His), (e) Xaa5 es serina (Ser), treonina (Thr) o tirosina (Tyr), (f) Xaa6 es asparagina (Asn) o glicina (Gly), y (g) Xaa7 es serina (Ser), alanina (Ala) o ácido aspártico (Asp).

La descripción proporciona un polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina aislado que comprende la secuencia de aminoácidos de Xaa1 Xaa2 Gln Xaa3 Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Xaa4 Xaa5 Tyr Ser Ile Thr Xaa6 Asp Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Xaa7 Pro Gly Xaa8 Xaa9 Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Xaa10 Xaa11 Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Xaa12 Tyr Xaa13 Cys Ala Ile Arg Gly Pro Tyr Ser Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Xaa14 (SEQ ID n O: 57), en donde Xaa1 es glutamina (Gln) o ácido aspártico (Asp); Xaa2 es valina (Val) o leucina (Leu); Xaa3 es leucina (Leu) o fenilalanina (Phe); Xaa4 es treonina (Thr) o serina (Ser); Xaa5 es glicina (Gly) o arginina (Arg); Xaa6 serina (Ser) o alanina (Ala); Xaa7 es prolina (Pro) o fenilalanina (Phe); Xaa8 es lisina (Lys) o asparagina (Asn); Xaa9 es glicina (Gly) o lisina (Lys); Xaa10 es serina (Ser) o treonina (Thr); Xaa11 es valina (Val) o arginina (Arg); Xaa12 es treonina (Thr) o valina (Val); Xaa13 es tirosina (Tyr) o fenilalanina (Phe); y Xaa14 es alanina (Ala) o está ausente.

La descripción proporciona un polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina aislado que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 o SEQ ID NO: 35.

La descripción proporciona un polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina aislado que comprende la secuencia de aminoácidos de Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Xaa1 Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Xaa2 Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Xaa3 Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys (SEQ ID n O: 36), en donde (a) Xaa1 es glicina (Gly) o alanina (Ala), (b) Xaa2 es fenilalanina (Phe) o tirosina (Tyr) y (c) Xaa3 es tirosina (Tyr) o serina (Ser).

La descripción proporciona un polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina aislado que comprende la secuencia de aminoácidos de Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Xaa1 Asn Xaa2 Ile Thr Tyr Phe Tyr Trp Tyr Leu Xaa3 Lys Pro Gly Gln Pro Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys (SEQ ID NO: 40), (a) Xaa1 es serina (Ser) o arginina (Arg) , (b) Xaa2 es glicina (Gly) o alanina (Ala), y (c) Xaa3 es glutamina (Gln) o histidina (His).

La descripción proporciona un polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina aislado que comprende la secuencia de aminoácidos de Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Xaa1 Ile Asn Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Xaa2 Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Xaa3 Ser Gly Ser Gly Xaa4 Asp Xaa5 Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Xaa6 Xaa7 (SEQ iD NO: 58), en donde (a) Xaa1 es ácido aspártico (Asp) o triptófano (Trp), (b) Xaa2 es arginina (Arg) o metionina (Met), (c) Xaa3 es glicina (Gly), serina (Ser) o prolina (Pro), (d) Xaa4 es treonina (Thr) o asparaginas (Asn), (e) Xaa5 es fenilalanina (Phe) o tirosina (Tyr), (f) Xaa6 es arginina (Arg) o está ausente, y (g) Xaa7 es treonina (Thr) o está ausente.

La descripción proporciona un polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina aislado que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID n O: 48, SEQ ID NO: 49 o SEQ ID NO: 50.

Además, la descripción proporciona secuencias de ácidos nucleicos aisladas o purificadas que codifican los polipéptidos de inmunoglobulina anteriores, vectores que comprenden tales secuencias de ácidos nucleicos, agentes de unión al IL-36R que comprenden los polipéptidos de inmunoglobulina anteriores, secuencias de ácidos nucleicos que codifican dichos agentes de unión al IL-36R, vectores que comprenden tales secuencias de ácidos nucleicos, células aisladas que comprenden dichos vectores, composiciones que comprenden dichos agentes de unión al IL-36R o dichos vectores con un vehículo farmacéuticamente aceptable, y métodos para tratar un trastorno que responde a la inhibición del IL-36R mediante la administración de cantidades eficaces de dichas composiciones para mamíferos.

Breve descripción de las varias vistas del(de los) dibujo(s)

La figura 1A es un gráfico que representa los resultados del ensayo de indicador de luciferasa de IL-36R/IL-8 humano en HEK descrito en el Ejemplo 1 tras la estimulación de células con hIL-36Y.

La figura 1B es un gráfico que representa los resultados del ensayo de indicador de luciferasa de IL-36R/IL-8 humano en HEK descrito en el Ejemplo 1 tras la estimulación de células con hIL-36p.

La figura 1C es un gráfico que representa los resultados del ensayo de indicador de luciferasa de IL-36R/IL-8 humano ^{en HEK descrito en el Ejemplo 1 tras la estimulación de células con hIL-36}a ^.

La figura 1D es un gráfico que representa los resultados del ensayo de indicador de luciferasa de IL-36R/IL-8 humano ^{en HEK descrito en el Ejemplo 1 tras la estimulación de células con 50 ng/ml de hIL-36}a ^.

La figura 1E es un gráfico que representa los resultados del ensayo de indicador de luciferasa de IL-36R/IL-8 humano ^{en HEK descrito en el Ejemplo 1 tras la estimulación de células con 20 ng/ml de hIL-36}p^.

La figura 1F es un gráfico que representa los resultados del ensayo de indicador de luciferasa de IL-36R/IL-8 humano ^{en HEK descrito en el Ejemplo 1 tras la estimulación de células con 600 ng/ml de hIL-36}Y^.

La figura 2A es un gráfico que representa los resultados del ensayo de indicador de luciferasa de IL-36R/IL-8 de ^{macaco en HEK descrito en el Ejemplo 1 tras la estimulación de células con 2 ug/ml de macacoIL-36}a ^.

La figura 2B es un gráfico que representa los resultados del ensayo de indicador de luciferasa de IL-36R/IL-8 de ^{macaco en HEK descrito en el Ejemplo 1 tras la estimulación de células con 10 ug/ml de macacoIL-36}p^.

La figura 2C es un gráfico que representa los resultados del ensayo de indicador de luciferasa de IL-36R/IL-8 de ^{macaco en HEK descrito en el Ejemplo 1 tras la estimulación de células con 300 ng/ml de macacoIL-36}Y^.

La figura 3A es un gráfico que representa datos experimentales que ilustran la curva del anticuerpo denominado APE5281 que se une al IL-36R humano según lo determinado por el ensayo KINEXA™ descrito en el Ejemplo 2. La figura 3B es un gráfico que representa datos experimentales que ilustran la curva para el anticuerpo denominado APE6194 que se une al IL-36R humano según lo determinado por el ensayo BIACORE™ descrito en el Ejemplo 2. La figura 3C es un gráfico que representa datos experimentales que ilustran la curva para el anticuerpo denominado APE7247 que se une al IL-36R humano según lo determinado por el ensayo KINEXA™ descrito en el Ejemplo 2. La figura 4A es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en queratinocitos humanos ^{primarios descrito en el Ejemplo 3 utilizando 10 ng/ml de hIL-36}a ^.

La figura 4B es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en queratinocitos humanos ^{primarios descrito en el Ejemplo 3 utilizando 1 ng/ml de hIL-36}p^.

La figura 4C es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en queratinocitos humanos ^{primarios descrito en el Ejemplo 3 usando 100 ng/ml de hIL-36}Y^.

La figura 4D es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en queratinocitos humanos ^{primarios descrito en el Ejemplo 3 usando 10 ng/ml de hIL-36}a ^.

La figura 4E es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en queratinocitos humanos ^{primarios descrito en el Ejemplo 3 usando 1 ng/ml de hIL-36}p^.

La figura 4F es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en queratinocitos humanos ^{primarios descrito en el Ejemplo 3 utilizando 100 ng/ml de hIL-36}Y^.

La figura 4G es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en queratinocitos humanos ^{primarios descrito en el Ejemplo 3 utilizando 10 ng/ml de hIL-36}a ^.

La figura 4H es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en queratinocitos humanos ^{primarios descrito en el Ejemplo 3 utilizando 1 ng/ml de hIL-36}p^.

La figura 4I es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en queratinocitos humanos ^{primarios descrito en el Ejemplo 3 utilizando 100 ng/ml de hIL-36}Y^.

La figura 5A es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en queratinocitos primarios ^{de macaco descrito en el Ejemplo 4 usando 50 ng/ml de IL-36}a ^macaco.

La figura 5B es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en queratinocitos primarios ^{de macaco descrito en el Ejemplo 4 usando 10 ng/ml de IL-36}p ^macaco.

La figura 5C es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en queratinocitos primarios de macaco descrito en el Ejemplo 4 usando 250 ng/ml de IL-36y macaco.

La figura 5D es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en queratinocitos primarios ^{de macaco descrito en el ejemplo 4 utilizando 50 ng/ml de IL-36}a ^macaco.

La figura 5E es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en queratinocitos primarios ^{de macaco descrito en el ejemplo 4 utilizando 10 ng/ml de IL-36}p ^macaco.

La figura 5F es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en queratinocitos primarios de macaco descrito en el Ejemplo 4 utilizando 250 ng/ml de IL-36y macaco.

La figura 6A es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en monocitos primarios ^{humanos descrito en el Ejemplo 5 usando 5 ng/ml de IL-36}p^.

La figura 6B es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en monocitos primarios ^{humanos descrito en el Ejemplo 5 usando 500 ng/ml de IL-36}p^.

La figura 7A es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en células mononucleares ^{humanas de sangre periférica (PBMC) primarias descritas en el Ejemplo 6 utilizando 10 ng/ml de IL-36}a ^.

La figura 7B es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en células mononucleares ^{humanas de sangre periférica (PBMC) primarias descritas en el Ejemplo 6 utilizando 1 ng/ml de IL-36}p^.

La figura 7C es un gráfico que representa los resultados del ensayo de secreción de IL-8 en células mononucleares humanas de sangre periférica (PBMC) primarias descritas en el Ejemplo 6 utilizando 100 ng/ml de IL-36y.

La figura 8A es un gráfico que representa los resultados del ensayo de unión de competición cruzada anticuerpo/antígeno descrito en el Ejemplo 8 según lo determinado por el ensayo BIACORE™ usando APE5100 como anticuerpo primario.

La figura 8B es un gráfico que representa los resultados del ensayo de unión de competición cruzada anticuerpo/antígeno descrito en el Ejemplo 8 según lo determinado por el ensayo BIACORE™ usando APE6155 como anticuerpo primario.

La figura 9A es un gráfico que representa los resultados del ensayo de unión competitiva descrito en el Ejemplo 9 utilizando células CHO-K que coexpresan de forma estable IL-36R humano e IL-1 RAcP humano.

La figura 9B es un gráfico que representa los resultados del ensayo de unión competitiva descrito en el Ejemplo 9 usando células CHO-K que coexpresan de forma estable la variante 1 de IL-36R de macaco cangrejero e IL-1 RAcP de macaco cangrejero.

La figura 10A es un gráfico que representa los resultados del ensayo de indicador de luciferasa descrito en el Ejemplo ^{1 utilizando la variante 2 de IL-36R de macaco/IL-8 en células HEK estimuladas con 20 ng/ml de macacoIL-36}Y^. La figura 10B es un gráfico que representa los resultados del ensayo de indicador de luciferasa descrito en el Ejemplo ^{1 utilizando la variante 1 de IL-36R de macaco/IL-8 en células HEK estimuladas con 300 ng/ml de macacoIL-36}Y^. La figura 10C es un gráfico que representa los resultados del ensayo indicador de luciferasa descrito en el Ejemplo 1 ^{utilizando la variante 3 de IL-36R de macaco/IL-8 en células HEK estimuladas con 100 ng/ml de macacoIL-36}Y^. La figura 10D es un gráfico que representa los resultados del ensayo de indicador de luciferasa descrito en el Ejemplo ^{1 utilizando la variante de 2IL-36R de macaco/IL-8 en células HEK estimuladas con 300 ng/ml de macacoIL-36}Y^. La figura 10E es un gráfico que representa los resultados del ensayo indicador de luciferasa descrito en el Ejemplo 1 utilizando la variante 3 de IL-36R de macaco/IL-8 en células HEK estimuladas con 300 ng/ml de macaco IL-36y. La figura 10F es un gráfico que representa los resultados del ensayo de indicador de luciferasa descrito en el Ejemplo ^{1 utilizando la variante 4 de IL-36R /IL-8 en células HEK estimuladas con 300 ng/ml de macacoIL-36}Y^.

Descripción detallada de la invención

La descripción proporciona un polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina aislado y/o un polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina aislado, o un fragmento (p. ej., fragmento de unión al antígeno) del mismo. El término "inmunoglobulina" o "anticuerpo", como se usa en el presente documento, se refiere a una proteína que se encuentra en la sangre u otros fluidos corporales de los vertebrados, que el sistema inmunitario usa para identificar y neutralizar objetos extraños, tales como bacterias y virus. El polipéptido está "aislado" en el sentido de que se separa de su entorno natural. En una realización preferida, una inmunoglobulina o anticuerpo es una proteína que comprende al menos una región determinante de la complementariedad (CDR). Las CDR forman la "región hipervariable" de un anticuerpo, que es responsable de la unión al antígeno (discutido más adelante). Una inmunoglobulina completa normalmente consiste en cuatro polipéptidos: dos copias idénticas de un polipéptido de la cadena pesada (H) y dos copias idénticas de un polipéptido de la cadena ligera (L). Cada una de las cadenas pesadas contiene una región variable N-terminal (V^h) y tres regiones constantes C-terminales (C^h1, C^h2, y C^h3), y cada cadena ligera contiene una región variable N-terminal (V^l) y una región constante C-terminal (C^l). Las cadenas ligeras de anticuerpos se pueden asignar a uno de dos tipos distintos, ^{ya sea kappa (}k^{) o lambda (}A^{), basado en las secuencias de aminoácidos de sus dominios constantes. En una} inmunoglobulina típica, cada cadena ligera está unida a una cadena pesada por enlaces disulfuro, y las dos cadenas pesadas están unidas entre sí por enlaces disulfuro. La región variable de la cadena ligera está alineada con la región variable de la cadena pesada y la región constante de la cadena ligera está alineada con la primera región constante de la cadena pesada. Las regiones constantes restantes de las cadenas pesadas están alineadas entre sí.

Las regiones variables de cada par de cadenas ligera y pesada forman el sitio de unión al antígeno de un anticuerpo. Las regiones V^h y V^l tienen la misma estructura general, comprendiendo cada región cuatro regiones armazón (FW o FR). El término "región armazón", como se usa en el presente documento, se refiere a las secuencias de aminoácidos relativamente conservadas dentro de la región variable que están ubicadas entre las regiones hipervariables o determinantes complementarias (CDR). Hay cuatro regiones armazón en cada dominio variable, que se denominan FR1, FR2, FR3 y FR4. Las regiones armazón forman las láminas p que proporcionan el armazón estructural de la región variable (véase, p. ej., C.A. Janeway et al. (eds.), Inmunobiology, 5.a edición, Garland Publishing, Nueva York, NY (2001)).

Las regiones armazón están conectadas por tres regiones determinantes de complementariedad (CDR). Como se discutió anteriormente, las tres CDR, conocidas como CDR1, CDR2 y CDR3, forman la "región hipervariable" de un anticuerpo, que es responsable de la unión al antígeno. Las CDR forman bucles que conectan y, en algunos casos, forman parte de la estructura de lámina beta formada por las regiones armazón. Aunque las regiones constantes de las cadenas ligera y pesada no están directamente implicadas en la unión del anticuerpo a un antígeno, las regiones constantes pueden influir en la orientación de las regiones variables. Las regiones constantes también presentan varias funciones efectoras, tales como la participación en la lisis mediada por el complemento dependiente de anticuerpos o la toxicidad celular dependiente de anticuerpos a través de interacciones con moléculas y células efectoras.

El polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina aislado y el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina aislado se unen deseablemente al receptor de interleuquina 36 (IL-36R), anteriormente conocido como IL-1Rrp2. IL-36R es un receptor de la familia de IL-1R y se une a los ligandos IL-36a (anteriormente IL-1F6), IL-36p (anteriormente IL-1F8) e IL-36y (anteriormente IL-1 F9) (véase, p. ej., Vigne et al., Blood, 118(22): 5813-5823 (2011)). IL-36a, IL-36p e IL-36y son miembros de la familia de citoquinas IL-1 y se unen al IL-36R y usan la proteína accesoria del receptor de IL-1 (IL-1 RAcP) como correceptor para estimular señales intracelulares similares a las inducidas por IL-1 (Towne et al., J. Biol. Chem, 279(14): 13677-13688 (2004)). Las citoquinas IL-36 y el IL-36R son altamente expresados en los queratinocitos y otros tipos de células epiteliales, así como en células dendríticas y células T CD4+ vírgenes (Towne et al., véase antes; Vigne et al., Blood, 118(22): 5813-5823 (2011); y Vigne et al., Blood, 120(17): 3478-3487 (2012))

El polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina aislado y el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina aislado pueden formar un agente que se une a IL-36R y otro antígeno, lo que da como resultado un agente de unión "reactivo dual" (p. ej., un anticuerpo reactivo dual).

Ciertos otros anticuerpos que se unen al IL-36R, y componentes del mismo, son conocidos en la técnica (véase, p. ej., Publicación de patente de EE. UU. 2013/0236471). Los anticuerpos anti-IL-36R también están disponibles comercialmente de fuentes tales como, por ejemplo, Abcam (Cambridge, MA) y R&D Systems, Inc. (Minneapolis, MN).

La descripción proporciona un polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina aislado que comprende, consiste en o consiste esencialmente en la secuencia de aminoácidos de Gln Val Gln Xaa1 Xaa2 Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Xaa3 Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Xaa4 Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Xaa5 Asp Xaa6 Ser Ala Xaa7 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Xaa8 Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Xaa9 Cys Thr Arg Ser Phe Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID NO: 56), en donde (a) Xaa1 es leucina (Leu) o fenilalanina (Phe), (b) Xaa2 es valina (Val), metionina (Met) o leucina (Leu), (c) Xaa3 es arginina (Arg) o glicina (Gly), (d) Xaa4 es glicina (Gly), serina (Ser) o alanina (Ala), (e) Xaa5 es arginina (Arg) o alanina (Ala), (f) Xaa6 es treonina (Thr) o lisina (Lys), (g) Xaa7 es serina (Ser) o asparagina (Asn), (h) Xaa8 es serina (Ser) o alanina (Ala), e (i) Xaa9 es tirosina (Tyr) o fenilalanina (Phe). En algunas realizaciones, el polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina aislado comprende, consiste en, o consiste esencialmente en la secuencia de aminoácidos Gln Val Gln Xaa1 Xaa2 Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Xaa3 Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Xaa4 Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Xaa5 Asp Xaa6 Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Xaa7 Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Xaa8 Cys Thr Arg Ser Phe Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID NO: 1), en donde (a) Xaa1 es leucina (Leu) o fenilalanina (Phe), (b) Xaa2 es valina (Val), metionina (Met) o leucina (Leu), (c) Xaa3 es arginina (Arg) o glicina (Gly), (d) Xaa4 es glicina (Gly), serina (Ser) o alanina (Ala), (e) Xaa5 es arginina (Arg) o alanina (Ala), (f) Xaa6 es treonina (Thr) o lisina (Lys), (g) Xaa7 es serina (Ser) o alanina (Ala), y (h) Xaa8 es tirosina (Tyr) o fenilalanina (Phe).

El polipéptido de la cadena pesada puede comprender, consistir en o consistir esencialmente en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56 o SEQ ID NO: 1 con una cualquiera de las sustituciones de aminoácidos mencionadas anteriormente en cualquier combinación adecuada. En una realización, el polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina comprende, consiste en o consiste esencialmente en una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13 y SEQ ID NO: 14.

La descripción también proporciona un polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina aislado que comprende, consiste en, o consiste esencialmente en la secuencia de aminoácidos Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Xaa1 Met Xaa2 Trp Val Arg Gln Ala Pro Xaa3 Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Met Phe Xaa4 Pro Xaa5 Xaa6 Xaa7 Val Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe Lys Asp Val Arg Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Thr Ser Met Ile Ile Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID NO: 15), en donde (a) Xaa1 es triptófano (Trp) o tirosina (Tyr), (b) Xaa2 es histidina (His), asparagina (Asn) o tirosina (Tyr), (c) Xaa3 es glicina (Gly) o arginina (Arg), (d) Xaa4 es ácido aspártico (Asp), ácido glutámico (Glu) o histidina (His), (e) Xaa5 es serina (Ser), treonina (Thr) o tirosina (Tyr), (f) Xaa6 es asparagina (Asn) o glicina (Gly), y (g) Xaa7 es serina (Ser), alanina (Ala) o ácido aspártico (Asp).

El polipéptido de la cadena pesada puede comprender, consistir en o consistir esencialmente en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 15 con una de las sustituciones de aminoácidos mencionadas anteriormente en cualquier combinación adecuada. En una realización, el polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina comprende, consiste en, o consiste esencialmente en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23 o SEQ ID NO: 24.

La descripción también proporciona un polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina aislado que comprende, consiste en, o consiste esencialmente en la secuencia de aminoácidos de Xaa1 Xaa2 Gln Xaa3 Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Xaa4 Xaa5 Tyr Ser Ile Thr Xaa6 Asp Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Xaa7 Pro Gly Xaa8 Xaa9 Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Xaa10 Xaa11 Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Xaa12 Tyr Xaa13 Cys Ala Ile Arg Gly Pro Tyr Ser Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Xaa14 (SEQ ID NO: 57), en donde Xaa1 es glutamina (Gln) o ácido aspártico (Asp); Xaa2 es valina (Val) o leucina (Leu); Xaa3 es leucina (Leu) o fenilalanina (Phe); Xaa4 es treonina (Thr) o serina (Ser); Xaa5 es glicina (Gly) o arginina (Arg); Xaa6 serina (Ser) o alanina (Ala); Xaa7 es prolina (Pro) o fenilalanina (Phe); Xaa8 es lisina (Lys) o asparagina (Asn); Xaa9 es glicina (Gly) o lisina (Lys); Xaa10 es serina (Ser) o treonina (Thr); Xaa11 es valina (Val) o arginina (Arg); Xaa12 es treonina (Thr) o valina (Val); Xaa13 es tirosina (Tyr) o fenilalanina (Phe); y Xaa14 es alanina (Ala) o está ausente. En algunas realizaciones, el polipéptido de inmunoglobulina de cadena pesada aislado comprende, consiste en, o consiste esencialmente en la secuencia de aminoácidos Xaa1 Val Gln Xaa2 Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Xaa3 Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Xaa4 Pro Gly Xaa5 Xaa6 Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Xaa7 Xaa8 Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Xaa9 Cys Ala Ile Arg Gly Pro Tyr Ser Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID NO: 25), en donde (a) Xaa1 es glutamina (Gln) o ácido aspártico (Asp), (b) Xaa2 es leucina (Leu) o fenilalanina (Phe), (c) Xaa3 es treonina (Thr) o serina (Ser), (d) Xaa4 es prolina (Pro) o fenilalanina (Phe), (e) Xaa5 es lisina (Lys) o asparagina (Asn), (f) Xaa6 es glicina (Gly) o lisina (Lys), (g) Xaa7 es serina (Ser) o treonina (Thr), (h) Xaa8 es valina (Val) o arginina (Arg), e (i) Xaa9 es tirosina (Tyr) o fenilalanina (Phe).

El polipéptido de la cadena pesada puede comprender, consistir en o consistir esencialmente en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 57 o SEQ ID NO: 25 con una o más de las sustituciones de aminoácidos mencionadas anteriormente en cualquier combinación adecuada. En una realización, el polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina comprende, consiste en o consiste esencialmente en una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53 o SEQ ID NO: 54.

En otra realización, la descripción proporciona un polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina aislado que comprende, consiste en o consiste esencialmente en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 o SEQ ID NO: 35

Cuando el polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina consiste esencialmente en una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO: 1-SEQ ID NO: 35, se pueden incluir componentes adicionales en el polipéptido que no afecten materialmente al polipéptido, p. ej., influyendo en la afinidad del polipéptido de la cadena pesada por IL-36R. Los ejemplos de dichos componentes incluyen, por ejemplo, restos de proteína tales como biotina que facilitan la purificación o el aislamiento, mutaciones pasajeras, secuencias exentas de sitios problemáticos que incluyen cisteínas libres, sitios de glicosilación adicionales y sitios de desamidación o isomerización de alta probabilidad.

Cuando el polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina consiste en una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO: 1-SEQ ID NO: 35, el polipéptido no comprende ningún componente adicional (es decir, componentes que no son endógenos al polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina).

La descripción proporciona un polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina aislado que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 90% idéntica (p. ej., al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% idéntica) a una cualquiera de SEQ ID NO: 1-SEQ ID NO: 35. La "identidad " de secuencia de ácido nucleico o de aminoácidos, como se describe en el presente documento, puede determinarse comparando una secuencia de ácido nucleico o de aminoácidos de interés con una secuencia de ácido nucleico o de aminoácidos de referencia. El porcentaje de identidad es el número de nucleótidos o restos de aminoácidos que son iguales (es decir, que son idénticos) entre la secuencia de interés y la secuencia de referencia dividido entre la longitud de la secuencia más larga (es decir, la longitud de la secuencia de interés o la secuencia de referencia, la que sea más larga). Se conocen una serie de algoritmos matemáticos para obtener el alineamiento óptimo y calcular la identidad entre dos o más secuencias y se incorporan en una serie de programas de software disponibles. Ejemplos de dichos programas incluyen CLUSTAL-W, T-Coffee y ALIGN (para el alineamiento de secuencias de ácidos nucleicos y aminoácidos), programas BLAST (p. ej., BLAST 2.1, BL2s Eq y versiones posteriores de los mismos) y programas FASTA (p. ej., FASTA3x, FASTM y SSEARCH) (para alineamiento de secuencias y búsquedas de similitud de secuencias). Los algoritmos de alineamiento de secuencias también se describen, por ejemplo, en Altschul et al., J. MolecularBiol., 215(3): 403-410 (1990), Beigert et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 106(10): 3770-3775 (2009), Durbin et al., eds., Biological Sequence Analysis: Probabalistic Models of Proteins and Nucleic Acids, Cambridge University Press, Cambridge, Reino Unido (2009), Soding, Bioinformatics, 21(7): 951-960 (2005), Altschul et al., Nucleic Acids Res, 25(17): 3389-3402 (1997), y Gusfield, Algorithms on Strings, Trees and Sequences, Cambridge University Press, Cambridge Reino Unido (1997)).

En otra realización, la descripción proporciona un polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina que comprende, consiste en o consiste esencialmente en la secuencia de aminoácidos Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Xaa1 Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Xaa2 Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Xaa3 Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys (SEQ ID NO: 36), en donde (a) Xaa1 es glicina (Gly) o alanina (Ala), (b) Xaa2 es fenilalanina (Phe) o tirosina (Tyr), y (c) Xaa3 es tirosina (Tyr) o serina (Ser).

El polipéptido de la cadena ligera puede comprender, consistir en o consistir esencialmente en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 36 con una o más de las sustituciones de aminoácidos mencionadas anteriormente en cualquier combinación adecuada. En una realización, el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina aislado comprende, consiste en o consiste esencialmente en una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38 o SEQ ID NO: 39.

La descripción también proporciona un polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina que comprende, consiste en o consiste esencialmente en la secuencia de aminoácidos Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Xaal Asn Xaa2 Ile Thr Tyr Phe Tyr Trp Tyr Leu Xaa3 Lys Pro Gly Gln Pro Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys (SEQ ID NO: 40), (a) Xaa1 es serina (Ser) o arginina (Arg), (b) Xaa2 es glicina (Gly) o alanina (Ala), y (c) Xaa3 es glutamina (Gln) o histidina (His).

El polipéptido de la cadena ligera puede comprender, consistir en o consistir esencialmente en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 40 con una o más de las sustituciones de aminoácidos mencionadas anteriormente en cualquier combinación adecuada. En una realización, el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina aislado comprende, consiste en o consiste esencialmente en una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43 o SEQ ID NO: 44.

La descripción proporciona un polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina aislado que comprende, consiste en o consiste esencialmente en la secuencia de aminoácidos de Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Xaal Ile Asn Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Xaa2 Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Xaa3 Ser Gly Ser Gly Xaa4 Asp Xaa5 Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Xaa6 Xaa7 (SEQ ID NO: 58), en donde (a) Xaa1 es ácido aspártico (Asp) o triptófano (Trp), (b) Xaa2 es arginina (Arg) o metionina (Met), (c) Xaa3 es glicina (Gly), serina (Ser) o prolina (Pro), (d) Xaa4 es treonina (Thr) o asparaginas (Asn), (e) Xaa5 es fenilalanina (Phe) o tirosina (Tyr), (f) Xaa6 es arginina (Arg) o está ausente, y (g) Xaa7 es treonina (Thr) o está ausente. En algunas realizaciones, el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina comprende, consiste en o consiste esencialmente en la secuencia de aminoácidos Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Xaa1 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Xaa2 Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys (SEQ ID NO: 45), en donde (a) Xaa1 es serina (Ser) o prolina (Pro), y (b) Xaa2 es fenilalanina (Phe) o tirosina (Tyr).

El polipéptido de la cadena ligera puede comprender, consistir en o consistir esencialmente en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 58 o SEQ ID NO: 45 con una o más de las sustituciones de aminoácidos mencionadas anteriormente en cualquier combinación adecuada. En una realización, el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina aislado comprende, consiste en o consiste esencialmente en una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 o SEQ ID NO: 55.

En otra realización, la descripción proporciona un polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina aislado que comprende, consiste en o consiste esencialmente en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49 o SEQ ID NO: 50

Cuando el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina consiste esencialmente en una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO: 36-SEQ ID NO: 50, se pueden incluir componentes adicionales en el polipéptido que no afecten materialmente al polipéptido, tales como los descritos en el presente documento. Cuando el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina consiste en una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO: 36-SEQ ID NO: 50, el polipéptido no comprende ningún componente adicional (es decir, componentes que no son endógenos al polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina).

La descripción proporciona un polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina aislado que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 90% idéntica (p. ej., al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% idéntica) a una cualquiera de SEQ ID NO: 36-SEQ ID NO: 50. La "identidad" de secuencias de ácidos nucleicos o de aminoácidos puede determinarse usando los métodos descritos en el presente documento.

Uno o más aminoácidos de los polipéptidos de la cadena pesada y/o polipéptidos de la cadena ligera de inmunoglobulina mencionados anteriormente se pueden reemplazar o sustituir por un aminoácido diferente. Un "reemplazo" o "sustitución" de aminoácido se refiere al reemplazo de un aminoácido en una posición dada o resto por otro aminoácido en la misma posición o resto dentro de una secuencia polipeptídica.

Los aminoácidos se agrupan ampliamente como "aromáticos" o "alifáticos". Un aminoácido aromático incluye un anillo aromático. Los ejemplos de aminoácidos "aromáticos" incluyen histidina (H o His), fenilalanina (F o Phe), tirosina (Y o Tyr) y triptófano (W o Trp). Los aminoácidos no aromáticos se agrupan ampliamente como "alifáticos". Los ejemplos de aminoácidos "alifáticos" incluyen glicina (G o Gly), alanina (A o Ala), valina (V o Val), leucina (L o Leu), isoleucina (I o Ile), metionina (M o Met), serina (S o Ser), treonina (T o Thr), cisteína (C o Cys), prolina (P o Pro), ácido glutámico (E o Glu), ácido aspártico (D o Asp), asparagina (N o Asn), glutamina (Q o Gln), lisina (K o Lys) y arginina (R o Arg).

Los aminoácidos alifáticos pueden subdividirse en cuatro subgrupos. El " subgrupo de alifáticos no polares grandes" consiste en valina, leucina e isoleucina. El "subgrupo de alifáticos ligeramente polares" consiste en metionina, serina, treonina y cisteína. El "subgrupo de alifáticos polares/cargados" consiste en ácido glutámico, ácido aspártico, asparagina, glutamina, lisina y arginina. El "subgrupo de restos pequeños" consiste en glicina y alanina. El grupo de aminoácidos cargados/polares se puede subdividir en tres subgrupos: el "subgrupo con carga positiva" que consiste en lisina y arginina, el "subgrupo con carga negativa" que consiste en ácido glutámico y ácido aspártico, y el "subgrupo de polares" que consiste en asparagina y glutamina.

Los aminoácidos aromáticos se pueden subdividir en dos subgrupos: el "subgrupo de anillo con nitrógeno" que consiste en histidina y triptófano y el "subgrupo de fenilo" que consiste en fenilalanina y tirosina.

El reemplazo o sustitución de aminoácidos puede ser conservador, semiconservador o no conservador. La frase "sustitución conservadora de aminoácidos" o "mutación conservadora" se refiere a la sustitución de un aminoácido por otro aminoácido con una propiedad común. Una forma funcional de definir propiedades comunes entre aminoácidos individuales es analizar las frecuencias normalizadas de cambios de aminoácidos entre proteínas correspondientes de organismos homólogos (Schulz y Schirmer, Principies of Protein Structure, Springer-Verlag, Nueva York (1979)). De acuerdo con dichos análisis, se pueden definir grupos de aminoácidos donde los aminoácidos dentro de un grupo se intercambian preferiblemente entre sí y, por lo tanto, se parecen más entre sí en su impacto en la estructura proteica general (Schulz y Schirmer, véase antes).

Los ejemplos de sustituciones conservadoras de aminoácidos incluyen sustituciones de aminoácidos dentro de los subgrupos descritos anteriormente, por ejemplo, arginina por lisina y viceversa, de modo que se puede mantener una carga positiva, ácido aspártico por ácido glutámico y viceversa, de modo que se puede mantener una carga negativa, treonina por serina de modo que se puede mantener un -OH libre y asparagina por glutamina de modo que se puede mantener un -NH² libre.

Las "mutaciones semiconservadoras" incluyen sustituciones de aminoácidos dentro de los mismos grupos enumerados anteriormente, pero no dentro del mismo subgrupo. Por ejemplo, la sustitución de asparagina por ácido aspártico, o lisina por asparagina, implica aminoácidos dentro del mismo grupo, pero diferentes subgrupos. Las "mutaciones no conservadoras" implican sustituciones de aminoácidos entre diferentes grupos, por ejemplo, triptófano por lisina o serina por fenilalanina, etc.

Además, se pueden insertar uno o más aminoácidos en los polipéptidos de la cadena pesada y/o polipéptidos de la cadena ligera de inmunoglobulina antes mencionados. Puede insertarse cualquier número de cualesquiera aminoácidos adecuados en la secuencia de aminoácidos del polipéptido de la cadena pesada y/o polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina. En relación con esto, se puede insertar al menos un aminoácido (p. ej., 2 o más, 5 o más, o 10 o más aminoácidos), pero no más de 20 aminoácidos (p. ej., 18 o menos, 15 o menos, o 12 o menos aminoácidos), en la secuencia de aminoácidos del polipéptido de la cadena pesada y/o polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina. Preferiblemente, se insertan 1-10 aminoácidos (p. ej., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 aminoácidos) en la secuencia de aminoácidos del polipéptido de la cadena pesada y/o polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina. En relación con esto, el(los) aminoácido(s) puede(n) insertarse en uno cualquiera de los polipéptidos de la cadena pesada y/o polipéptidos de la cadena ligera de inmunoglobulina antes mencionados en cualquier posición adecuada. Preferiblemente, el(los) aminoácido(s) se insertan en una CDR (p. ej., CDR1, CDR2 o CDR3) del polipéptido de la cadena pesada y/o polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina.

El polipéptido de la cadena pesada y los polipéptidos de la cadena ligera de inmunoglobulina aislados no se limitan a polipéptidos que comprenden las secuencias de aminoácidos específicas descritas en el presente documento. De hecho, el polipéptido de la cadena pesada o polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina puede ser cualquier polipéptido de la cadena pesada o polipéptido de la cadena ligera que compita con el polipéptido de la cadena pesada o polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina para unirse al IL-36R. En relación con esto, por ejemplo, el polipéptido de la cadena pesada o polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina puede ser cualquier polipéptido de la cadena pesada o polipéptido de la cadena ligera que se una al mismo epítopo de IL-36R reconocido por los polipéptidos de la cadena pesada y ligera descritos en el presente documento. La competencia de anticuerpos se puede ensayar usando ensayos de competición de péptidos de rutina que utilizan métodos ELISA, transferencia Western o inmunohistoquímicos (véase, por ejemplo, Patentes de EE. UU. 4828981 y 8568 992; y Braitbard et al., Proteome Sci., 4: 12 (2006)).

La descripción proporciona un agente de unión al IL-36R que comprende, consiste esencialmente en o consiste en una o más de las secuencias de aminoácidos aisladas descritas en el presente documento. Por "agente de unión al IL-36R" se entiende una molécula, preferiblemente una molécula proteica, que se une específicamente a la proteína IL-36R. Preferiblemente, el agente de unión al IL-36R es un anticuerpo o un fragmento (p. ej., fragmento de unión al antígeno) del mismo. El agente de unión al IL-36R comprende, consiste esencialmente en o consiste en el polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina y/o el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina. En una realización, el agente de unión al IL-36R comprende, consiste esencialmente en o consiste en el polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina o el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina. En otra realización, el agente de unión al IL-36R comprende, consiste esencialmente en o consiste en el polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina y el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina.

Cualquier resto de aminoácido del polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina y/o el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina puede reemplazarse, en cualquier combinación, por un resto de aminoácido diferente, o puede eliminarse o insertarse, siempre que la actividad biológica del agente de unión al IL-36R no disminuya materialmente (p. ej., aumenta o mejora) como resultado de los reemplazos, inserciones y/o eliminaciones de aminoácidos.

La "actividad biológica" de un agente de unión al IL-36R se refiere, por ejemplo, a la afinidad de unión por un epítopo del IL-36R en particular, la neutralización o inhibición de la unión del IL-36R a su(s) receptor(es), la neutralización o inhibición de la actividad del IL-36R in vivo (por ejemplo, CI⁵⁰), farmacocinética y reactividad cruzada (p. ej., con homólogos u ortólogos no humanos de la proteína IL-36R, o con otras proteínas o tejidos). En ciertas realizaciones, el agente de unión al receptor de interleuquina 36 (IL-36R) de la invención presenta deseablemente una o más de las siguientes actividades biológicas: (a) inhibe la interacción entre IL-36R e IL-36a, IL-36p y/o IL-36y, (b) inhibe la señalización intracelular mediada por IL-36R, y/o (c) reacciona de forma cruzada con e inhibe la actividad de IL-36R humano y de primate no humano (p. ej., macaco). Otras propiedades biológicas o características de un agente de unión al antígeno reconocidas en la técnica incluyen, por ejemplo, avidez, selectividad, solubilidad, plegamiento, inmunotoxicidad, expresión y formulación. Las propiedades o características antes mencionadas pueden observarse, medirse y/o evaluarse utilizando técnicas estándar que incluyen, pero no se limitan a ELISA, ELISA competitivo, análisis de resonancia de plasmón superficial (BIACORE™), o KINEXA™, ensayos de neutralización in vitro o en vivo, ensayos de unión de receptor-ligando, ensayos de producción y/o secreción de citoquinas o factores de crecimiento, y ensayos de transducción de señales e inmunohistoquímica.

Los términos "inhibir" o "neutralizar", como se usan en el presente documento con respecto a la actividad de un agente de unión a IL-36R, se refieren a la capacidad de antagonizar, prohibir, prevenir, restringir, ralentizar, interrumpir, alterar, eliminar, detener sustancialmente, o revertir la progresión o gravedad de, por ejemplo, la actividad biológica de IL-36R, o una enfermedad o afección asociada con el IL-36R. El agente de unión al IL-36R inhibe o neutraliza preferiblemente la actividad del IL-36R en al menos aproximadamente 20%, aproximadamente 30%, aproximadamente 40%, aproximadamente 50%, aproximadamente 60%, aproximadamente 70%, aproximadamente 80%, aproximadamente 90%, aproximadamente 95%, aproximadamente 100%, o un intervalo definido por dos cualesquiera de los valores anteriores.

El agente de unión al IL-36R puede ser un anticuerpo completo, como se describe en el presente documento, o un fragmento de anticuerpo. Las expresiones "fragmento de un anticuerpo", "fragmento de anticuerpo" y "fragmento funcional de un anticuerpo" se usan indistintamente en el presente documento para referirse a uno o más fragmentos de un anticuerpo que conservan la capacidad de unirse específicamente a un antígeno (véase, en general, Holliger et al., Nat. Biotech., 23(9): 1126-1129 (2005)). El agente de unión al IL-36R puede contener cualquier fragmento de anticuerpo de unión al IL-36R. El fragmento de anticuerpo comprende deseablemente, por ejemplo, una o más CDR, la región variable (o partes de la misma), la región constante (o partes de la misma) o combinaciones de las mismas. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen, pero no se limitan a, (i) un fragmento Fab, que es un fragmento monovalente que consiste en los dominios VL, VH, CL y CH¹ , (ii) un fragmento F(ab')² , que es un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab unidos por un puente disulfuro en la región bisagra, (iii) un fragmento Fv que consiste en los dominios VL y VH de un solo brazo de un anticuerpo, (iv) un fragmento Fab', que resulta de romper el puente disulfuro de un fragmento F(ab')² utilizando condiciones reductoras suaves, (v) un fragmento Fv estabilizado con disulfuro (dsFv) y (vi) un anticuerpo de dominio (dAb), que es un polipéptido de dominio de región variable única (VH o VL) de anticuerpo que se une específicamente al antígeno.

En realizaciones donde el agente de unión al IL-36R comprende un fragmento del polipéptido de la cadena pesada o de la cadena ligera de inmunoglobulina, el fragmento puede ser de cualquier tamaño siempre que el fragmento se una a, y preferiblemente inhiba la actividad de IL-36R. En relación con esto, un fragmento del polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina comprende deseablemente entre aproximadamente 5 y 18 (p. ej., aproximadamente 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, o un intervalo definido por dos cualesquiera de los valores anteriores) aminoácidos. De manera similar, un fragmento del polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina comprende deseablemente entre aproximadamente 5 y 18 (p. ej., aproximadamente 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 o un intervalo definido por dos cualesquiera de los valores anteriores) aminoácidos.

Cuando el agente de unión al IL-36R es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende deseablemente una región constante de la cadena pesada (F^c) de cualquier clase adecuada. Preferiblemente, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una región constante de la cadena pesada que se basa en anticuerpos IgG1, IgG2 o IgG4 de tipo natural, o variantes de los mismos. Se apreciará que cada clase de anticuerpo, o isotipo, implica a un conjunto distinto de mecanismos efectores para desechar o neutralizar el antígeno una vez reconocido. Así pues, en algunas realizaciones, cuando el agente de unión al IL-36R es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo, puede presentar una o más funciones efectoras, tales como la participación en la lisis mediada por el complemento dependiente de anticuerpos o la toxicidad celular dependiente de anticuerpos a través de interacciones con moléculas y células efectoras (p. ej., activación del sistema del complemento).

El agente de unión al IL-36R también puede ser un fragmento de anticuerpo monocatenario. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpos monocatenarios incluyen, pero no se limitan a (i) un Fv monocatenario (scFv), que es una molécula monovalente que consiste en los dos dominios del fragmento Fv (es decir, V^l y V^h) unidos por un conector sintético que permite que los dos dominios se sinteticen como una sola cadena polipeptídica (véase, por ejemplo, Bird et al., Science, 242: 423-426 (1988); Houston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 5879-5883 (1988); y Osbourn et al., Nat. Biotechnol., 16: 778 (1998)) y (ii) un diacuerpo, que es un dímero de cadenas polipeptídicas, en donde cada cadena polipeptídica comprende un V^h conectado a un V^l por un conector peptídico que es demasiado corto para permitir el emparejamiento entre el V^h y V^l en la misma cadena polipeptídica, dirigiendo así el emparejamiento entre los dominios complementarios en diferentes cadenas polipeptídicas V^h -V^l para generar una molécula dimérica que tiene dos sitios de unión al antígeno funcionales. Los fragmentos de anticuerpos son conocidos en la técnica y se describen con más detalle en, p. ej., la Publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2009/0093024 A1.

El agente de unión al IL-36R también puede ser un intracuerpo o un fragmento del mismo. Un intracuerpo es un anticuerpo que se expresa y que funciona intracelularmente. Los intracuerpos normalmente carecen de enlaces disulfuro y son capaces de modular la expresión o la actividad de los genes diana a través de su actividad de unión específica. Los intracuerpos incluyen fragmentos de un solo dominio, tales como dominios V^h y V^l aislados y scFv. Un intracuerpo puede incluir señales de tráfico subcelular unidas al extremo N o C del intracuerpo para permitir la expresión en altas concentraciones en los compartimentos subcelulares donde se encuentra una proteína diana. Tras la interacción con un gen diana, un intracuerpo modula la función de la proteína diana y/o logra la inactivación fenotípica/funcional mediante mecanismos tales como acelerar la degradación de la proteína diana y secuestrar la proteína diana en un compartimento subcelular no fisiológico. Otros mecanismos de inactivación génica mediada por el intracuerpo pueden depender del epítopo al que se dirige el intracuerpo, tal como la unión al sitio catalítico en una proteína diana o a epítopos que están implicados en interacciones proteína-proteína, proteína-ADN o proteína-ARN.

El agente de unión al IL-36R también puede ser un conjugado de anticuerpo. En relación con esto, el agente de unión al IL-36R puede ser un conjugado de (1) un anticuerpo, un armazón alternativo o fragmentos del mismo, y (2) un resto proteico o no proteico que comprende el agente de unión al IL-36R. Por ejemplo, el agente de unión al IL-36R puede ser todo o parte de un anticuerpo conjugado con un péptido, una molécula fluorescente o un agente quimioterapéutico.

El agente de unión al IL-36R puede ser, o puede obtenerse a partir de, un anticuerpo humano, un anticuerpo no humano o un anticuerpo quimérico. Un anticuerpo "quimérico" es un anticuerpo o fragmento del mismo que comprende regiones tanto humanas como no humanas. Preferiblemente, el agente de unión al IL-36R es un anticuerpo humanizado. Un anticuerpo "humanizado" es un anticuerpo monoclonal que comprende un armazón de anticuerpo humano y al menos una CDR obtenida o derivada de un anticuerpo no humano. Los anticuerpos no humanos incluyen anticuerpos aislados de cualquier animal no humano, tal como, por ejemplo, un roedor (p. ej., un ratón o una rata). Un anticuerpo humanizado puede comprender una, dos o tres CDR obtenidas o derivadas de un anticuerpo no humano. En una realización de la descripción, la CDRH3 del agente de unión al IL-36R se obtiene o deriva de un anticuerpo monoclonal de ratón, mientras que las regiones variables restantes y la región constante del agente de unión al IL-36R se obtienen o derivan de un anticuerpo monoclonal humano.

Un anticuerpo humano, un anticuerpo no humano, un anticuerpo quimérico o un anticuerpo humanizado se pueden obtener por cualquier medio, incluyendo a través de fuentes in vitro (p. ej., un hibridoma o una línea celular que produce un anticuerpo de forma recombinante) y fuentes in vivo (p. ej., roedores). Los métodos para generar anticuerpos son conocidos en la técnica y se describen, por ejemplo, en Kohler y Milstein, Eur. J. Immunol., 5: 511-519 (1976); Harlow y Lane (eds.), Antibodies:A Laboratory Manual, CSH Press (1988); y Janeway et al. (eds.), Immunobiology, 5.a edición, Garland Publishing, Nueva York, NY (2001)). En ciertas realizaciones, se puede generar un anticuerpo humano o un anticuerpo quimérico utilizando un animal transgénico (p. ej., un ratón) en donde uno o más genes de inmunoglobulina endógenos se reemplazan por uno o más genes de inmunoglobulina humanos. Los ejemplos de ratones transgénicos en donde los genes de anticuerpos endógenos se reemplazan eficazmente por genes de anticuerpos humanos incluyen, pero no se limitan al Medarex HUMAB-MOUSE™, el Kirin TC MOUSE™, y el Kyowa Kirin KM-MOUSE™ (véase, p. ej., Lonberg, Nat. Biotechnol., 23(9): 1117-25 (2005), y Lonberg, Handb. Exp. Pharmacol., 181: 69-97 (2008)). Se puede generar un anticuerpo humanizado utilizando cualquier método adecuado conocido en la técnica (véase, p. ej., An, Z. (ed.), Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic, John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, Nueva Jersey (2009)), incluido, p. ej. , el injerto de CDR no humanas en un armazón de anticuerpo humano (véase, p. ej., Kashmiri et al., Methods, 36(1): 25-34 (2005); y Hou et al., J. Biochem., 144(1): 115-120 (2008)). En una realización, se puede producir un anticuerpo humanizado usando los métodos descritos en, p. ej., la Publicación de solicitud de patente de EE. UU. 2011/0287485 A1.

En una realización, una CDR (p. ej., CDR1, CDR2 o CDR3) o una región variable del polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina y/o el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina descritos en el presente documento se pueden trasplantar (es decir, injertar) a otra molécula, tal como un anticuerpo o un polipéptido que no es un anticuerpo, usando química de proteínas o tecnología de ADN recombinante. En relación con esto, la descripción proporciona un agente de unión al IL-36R que comprende al menos una CDR de un polipéptido de la cadena pesada y/o cadena ligera de inmunoglobulina como se describe en el presente documento. El agente de unión al IL-36R puede comprender una, dos o tres CDR de una región variable de la cadena pesada y/o cadena ligera de inmunoglobulina como se describe en el presente documento.

En una realización preferida, el agente de unión al IL-36R se une a un epítopo del IL-36R que bloquea la unión del IL-36R a cualquiera de sus ligandos (p. ej., IL-36a, IL-36p e IL-36y) e inhibe la señalización mediada por IL-36R. La descripción también proporciona un epítopo aislado o purificado de IL-36R que bloquea la unión de IL-36R a cualquiera de sus ligandos de forma indirecta o alostérica.

La descripción también proporciona una o más secuencias de ácidos nucleicos aisladas o purificadas que codifican el polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina, el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina y el agente de unión al IL-36R de la invención.

La expresión "secuencia de ácido nucleico" pretende abarcar un polímero de ADN o ARN, es decir, un polinucleótido, que puede ser monocatenario o bicatenario y que puede contener nucleótidos no naturales o alterados. Las expresiones "ácido nucleico" y "polinucleótido" tal como se utilizan en el presente documento se refieren a una forma polimérica de nucleótidos de cualquier longitud, ya sea ribonucleótidos (ARN) o desoxirribonucleótidos (ADN). Estos términos se refieren a la estructura primaria de la molécula y, por lo tanto, incluyen ADN bicatenario y monocatenario, y ARN bicatenario y monocatenario. Las expresiones incluyen, como equivalentes, análogos de ARN o ADN elaborados a partir de análogos de nucleótidos y polinucleótidos modificados tales como, aunque no limitados a polinucleótidos metilados y/o protegidos terminalmente. Los ácidos nucleicos normalmente se unen a través de enlaces fosfato para formar secuencias de ácido nucleico o polinucleótidos, aunque en la técnica se conocen muchos otros enlaces (p. ej., fosforotioatos, boranofosfatos y similares).

La descripción proporciona además un vector que comprende una o más secuencias de ácidos nucleicos que codifican el polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina, el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina y/o el agente de unión al IL-36R de la invención. El vector puede ser, por ejemplo, un plásmido, episoma, cósmido, vector viral (p. ej., retroviral o adenoviral) o fago. Los vectores adecuados y los métodos de preparación de vectores son bien conocidos en la técnica (véase, p. ej., Sambrook et al., Molecular Cloning, a Laboratory Manual, 3.a edición, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001), y Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates y John Wiley & Sons, Nueva York, N.Y. (1994)).

Además de la secuencia de ácido nucleico que codifica el polipéptido pesado de inmunoglobulina, el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina y/o el agente de unión al IL-36R de la invención, el vector preferiblemente comprende secuencias de control de la expresión, tales como promotores, potenciadores, señales de poliadenilación, terminadores de transcripción, péptidos señal (p. ej., el péptido señal de osteonectina), sitios internos de entrada al ribosoma (IRES) y similares, que proporcionan la expresión de la secuencia codificante en una célula hospedante. Las secuencias de control de la expresión de ejemplo se conocen en la técnica y se describen, por ejemplo, en Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology, vol. 185, Academic Press, San Diego, California (1990).

Un gran número de promotores, incluyendo promotores constitutivos, inducibles y reprimibles, de una variedad de fuentes diferentes son bien conocidos en la técnica. Las fuentes representativas de promotores incluyen, por ejemplo, virus, mamíferos, insectos, plantas, levaduras y bacterias, y los promotores adecuados de estas fuentes están fácilmente disponibles, o pueden fabricarse sintéticamente, basándose en secuencias disponibles públicamente, por ejemplo, de depósitos tales como la ATCC, así como otras fuentes comerciales o individuales. Los promotores pueden ser unidireccionales (es decir, iniciar la transcripción en una dirección) o bidireccionales (es decir, iniciar la transcripción bien en una dirección 3' o bien 5'). Los ejemplos no limitantes de promotores incluyen, por ejemplo, el sistema de expresión bacteriano T7, el sistema de expresión bacteriano pBAD (araA), el promotor de citomegalovirus (CMV), el promotor SV40 y el promotor RSV. Los promotores inducibles incluyen, por ejemplo, el sistema Tet (Patentes de EE. UU. 5464758 y 5 814618), el sistema inducible de ecdisona (No et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 93: 3346-3351 (1996)), el sistema Y-REX™ (Invitrogen, Carlsbad, CA), sistema LACSWITCH™ (Stratagene, San Diego, CA), y el sistema de recombinasa inducible por tamoxifeno Cre-ERT (Indra et al., Nuc. Acid. Res., 27: 4324-4327 (1999); Nuc. Acid. Res., 28: e99 (2000); Patente de EE. UU. 7112715; y Kramer y Fussenegger, Methods Mol. Biol., 308: 123-144 (2005)).

El término "potenciador", como se usa en el presente documento, se refiere a una secuencia de ADN que aumenta la transcripción de, por ejemplo, una secuencia de ácido nucleico a la que está unida operativamente. Los potenciadores se pueden ubicar a muchas kilobases de distancia de la región codificante de la secuencia de ácido nucleico y pueden mediar la unión de factores reguladores, patrones de metilación del ADN o cambios en la estructura del ADN. Un gran número de potenciadores de una variedad de fuentes diferentes son bien conocidos en la técnica y están disponibles como o dentro de polinucleótidos clonados (de, p. ej., depósitos tales como la ATCC, así como otras fuentes comerciales o individuales). Una serie de polinucleótidos que comprenden promotores (tales como el promotor de CMV de uso común) también comprenden secuencias potenciadoras. Los potenciadores se pueden ubicar secuencia arriba, dentro o secuencia abajo de las secuencias codificante.

El vector también puede comprender un "gen de marcador seleccionable". La expresión "gen de marcador seleccionable", como se usa en el presente documento, se refiere a una secuencia de ácido nucleico que permite que las células que expresan la secuencia de ácido nucleico sean seleccionadas específicamente a favor o en contra, en presencia de un agente selectivo correspondiente. Los genes de marcadores seleccionables adecuados se conocen en la técnica y se describen, p. ej., en las publicaciones de solicitudes de patentes internacionales WO 1992/008796 y WO 1994/028143; Wigler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 3567-3570 (1980); O'Hare et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78: 1527-1531 (1981); Mulligan y Berg, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78: 2072-2076 (1981); Colberre-Garapin et al., J. Mol. Biol., 150: 1-14 (1981); Santerre et al., Gene, 30: 147-156 (1984); Kent et al., Science, 237: 901-903 (1987); Wigler et al., CeU, 11: 223-232 (1977); Szybalska y Szybalski, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 48: 2026-2034 (1962); Lowy et al., Cel/, 22: 817-823 (1980); y Patentes de EE. UU. 5122464 y 5770359.

En algunas realizaciones, el vector es un "vector de expresión episomal" o "episoma", que es capaz de replicarse en una célula hospedante y persiste como un segmento extracromosómico de ADN dentro de la célula hospedante en presencia de una presión selectiva adecuada (véase, p.ej., Conese et al., Gene Therapy, 11: 1735-1742 (2004)). Los vectores de expresión episomales comercialmente disponibles representativos incluyen, pero no se limitan a plásmidos episomales que utilizan el antígeno nuclear 1 de Epstein Barr (EBNA1) y el origen de replicación (oriP) del virus de Epstein Barr (EBV). Los vectores pREP4, pCEP4, pREP7 y pcDNA3.1 de Invitrogen (Carlsbad, c A) y pBK-CMV de Stratagene (La Jolla, CA) representan ejemplos no limitantes de un vector episomal que utiliza el antígeno T y el origen de replicación de SV40 en lugar de EBNA1 y oriP.

Otros vectores adecuados incluyen vectores de expresión de integración, que pueden integrarse aleatoriamente en el ADN de la célula hospedante, o pueden incluir un sitio de recombinación para permitir la recombinación específica entre el vector de expresión y el cromosoma de la célula hospedante. Dichos vectores de expresión de integración pueden utilizar las secuencias de control de la expresión endógenas de los cromosomas de la célula hospedante para efectuar la expresión de la proteína deseada. Los ejemplos de vectores que se integran de una manera específica del sitio incluyen, por ejemplo, componentes del sistema Flp-In de Invitrogen (Carlsbad, CA) (p. ej., pcDNA™5/FRT), o el sistema Cre-lox, como el que se puede encontrar en los vectores centrales pExchange-6 de Stratagene (La Jolla, CA). Los ejemplos de vectores que se integran aleatoriamente en los cromosomas de la célula hospedante incluyen, por ejemplo, pcDNA3.1 (cuando se introduce en ausencia del antígeno T) de Life Technologies (Carlsbad, CA), UCOE de Millipore (Billerica, MA) y pCI o pFN10A (ACT) FLEXI™ de Promega (Madison, WI).

También se pueden usar vectores virales. Los vectores de expresión viral comercialmente disponibles representativos incluyen, pero no se limitan al sistema Per.C6 disponible de Crucell, Inc. (Leiden, Países Bajos), el pLP1 basado en lentivirus de Invitrogen (Carlsbad, CA) y los vectores retrovirales pFB-ERV más pCFB-EGSH de Stratagene (La Jolla, CA).

Las secuencias de ácidos nucleicos que codifican las secuencias de aminoácidos se pueden proporcionar a una célula en el mismo vector (es decir, en cis). Puede usarse un promotor unidireccional para controlar la expresión de cada secuencia de ácido nucleico. En otra realización, se puede usar una combinación de promotores bidireccionales y unidireccionales para controlar la expresión de múltiples secuencias de ácidos nucleicos. Las secuencias de ácidos nucleicos que codifican los polipéptidos se pueden proporcionar alternativamente a la población de células en vectores separados (es decir, en trans). Cada una de las secuencias de ácidos nucleicos en cada uno de los vectores separados puede comprender secuencias de control de expresión iguales o diferentes. Los vectores separados se pueden proporcionar a las células de forma simultánea o secuencial.

El(los) vectores que comprenden el(los) ácidos nucleicos que codifican los polipéptidos pueden introducirse en una célula hospedante que es capaz de expresar los polipéptidos codificados por el(los) mismo(s), incluida cualquier célula procariota o eucariota adecuada. Como tal, la invención proporciona una célula aislada que comprende el vector de la invención. Las células hospedantes preferidas son aquellas que se pueden cultivar de manera fácil y fiable, tienen tasas de crecimiento razonablemente rápidas, tienen sistemas de expresión bien caracterizados y se pueden transformar o transfectar de manera fácil y eficiente.

Los ejemplos de células procariotas adecuadas incluyen, pero no se limitan a, células del género Bacillis (tales como Bacillus subtilis y Bacillus brevis), Escherichia (tal como E. coli), Pseudomonas, Streptomyces, Salmonella, y Erwinia. Las células procariotas particularmente útiles incluyen las diversas cepas de Escherichia coli (p. ej., K12, HB101 (ATCC n.° 33694), DH5a, DH10, MC1061 (ATCC n.° 53338) y CC102).

Preferiblemente, el vector se introduce en una célula eucariota. Las células eucariotas adecuadas se conocen en la técnica e incluyen, por ejemplo, células de levadura, células de insecto y células de mamífero. Los ejemplos de células de levadura adecuadas incluyen las de los géneros Kluyveromyces, Pichia, Rhinosporidium, Saccharomyces y Schizosaccharomyces. Las células de levadura preferidas incluyen, por ejemplo, Saccharomyces cerivisae y Pichia pastoris.

Se describen células de insecto adecuadas, por ejemplo, en Kitts et al., Biotechniques, 14: 810-817 (1993); Lucklow, Curr. Opin. Biotechnol., 4: 564-572 (1993); y Lucklow et al., J. Virol., 67: 4566-4579 (1993). Las células de insecto preferidas incluyen Sf-9 y HI5 (Invitrogen, Carlsbad, CA).

Preferiblemente, en la invención se utilizan células de mamífero. Se conocen en la técnica una serie de células hospedantes de mamífero adecuadas, y muchas están disponibles en la American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA). Los ejemplos de células de mamífero adecuadas incluyen, pero no se limitan a, células de ovario de hámster chino (CHO) (ATCC N.° CCL61), células CHO DHFR (Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97: 4216­ 4220 (1980)), células de riñón embrionario humano (HEK) 293 o 293T (ATCC N.° CRL1573) y células 3T3 (ATCC N.° CCL92). Otras líneas celulares de mamífero adecuadas son las líneas celulares de mono COS-1 (ATCC N.° CRL1650) y COS-7 (ATCC N.° CRL1651), así como la línea celular CV-1 (ATCC N.° CCL70). Otras células hospedantes de mamífero de ejemplo incluyen líneas celulares de primates y líneas celulares de roedores, incluidas líneas celulares transformadas. También son adecuadas las células diploides normales, las cepas celulares derivadas del cultivo in vitro de tejido primario, así como los explantes primarios. Otras líneas celulares de mamíferos adecuadas incluyen, pero no se limitan a, células N2A de neuroblastoma de ratón, HeLa, células L-929 de ratón y líneas celulares de hámster BHK o HaK, todas las cuales están disponibles en la ATCC. Los métodos para seleccionar células hospedantes de mamífero adecuadas y los métodos para la transformación, cultivo, amplificación, selección y purificación de células son conocidos en la técnica.

En una realización, la célula de mamífero es una célula humana. Por ejemplo, la célula de mamífero puede ser una línea celular linfoide humana o derivada de linfoide, tal como una línea celular de origen de linfocitos pre-B. Ejemplos de líneas celulares linfoides humanas incluyen, pero no se limitan a RAMOS (CRL-1596), Daudi (CCL-213), EB-3 (CCL-85), DT40 (CRL-2111), 18-81 (Jack et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 1581-1585 (1988)), células Raji (CCL-86), células PER.C6 (Crucell Holland B.V., Leiden, Países Bajos) y derivados de las mismas.

Una secuencia de ácido nucleico que codifica la secuencia de aminoácidos puede introducirse en una célula mediante "transfección", "transformación" o "transducción". "Transfección", "transformación" o "transducción", como se usan en el presente documento, se refieren a la introducción de uno o más polinucleótidos exógenos en una célula hospedante usando métodos físicos o químicos. Se conocen en la técnica muchas técnicas de transfección e incluyen, por ejemplo, coprecipitación de ADN con fosfato de calcio (véase, p. ej., Murray E. J. (ed.), Methods in MolecularBiology, vol. 7, Gene Transfer and Expression Protocols, Humana Press (1991)); DEAE-dextrano; electroporación; transfección mediada por liposomas catiónicos; bombardeo de micropartículas facilitado por partículas de tungsteno (Johnston, Nature, 346: 776­ 777 (1990)); y coprecipitación de ADN con fosfato de estroncio (Brash et al., Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987)). Los vectores virales o de fagos se pueden introducir en las células hospedantes, después del crecimiento de partículas infecciosas en células de empaquetamiento adecuadas, muchas de las cuales están disponibles comercialmente.

La descripción proporciona una composición que comprende una cantidad eficaz del polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina, el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina, el agente de unión al IL-36R de la invención, la secuencia de ácido nucleico que codifica cualquiera de los anteriores, o el vector de la invención que comprende la secuencia del ácido nucleico de la invención. Preferiblemente, la composición es una composición farmacéuticamente aceptable (p. ej., fisiológicamente aceptable), que comprende un vehículo, preferiblemente un vehículo farmacéuticamente aceptable (p. ej., fisiológicamente aceptable), y las secuencias de aminoácidos, el agente de unión al IL-36R o el vector. Puede usarse cualquier vehículo adecuado dentro del contexto de la invención, y dichos vehículos son bien conocidos en la técnica. La elección del vehículo estará determinada, en parte, por el sitio particular en el que se puede administrar la composición y el método particular utilizado para administrar la composición. La composición puede ser opcionalmente estéril. La composición se puede congelar o liofilizar para su almacenamiento y reconstituir en un vehículo estéril adecuado antes de su uso. Las composiciones se pueden generar de acuerdo con técnicas convencionales descritas en, p. ej., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21.a edición, Lippincott Williams & Wilkins, Filadelfia, Pa (2001).

La descripción proporciona además un método para tratar un trastorno en un mamífero que responde a la inhibición o neutralización del IL-36R. El método comprende administrar la composición antes mencionada a un mamífero que tiene un trastorno que responde a la inhibición o neutralización del IL-36R, después de lo cual se trata el trastorno en el mamífero. Un trastorno que "responde a la inhibición del IL-36R" o "responde a la neutralización del IL-36R" se refiere a cualquier enfermedad o trastorno en el que una disminución en los niveles o actividad de IL-36R tiene un beneficio terapéutico en mamíferos, preferiblemente seres humanos, o la expresión inadecuada (p. ej., sobreexpresión) o actividad aumentada de IL-36R causa o contribuye a los efectos patológicos de la enfermedad o trastorno. Los trastornos que responden a la inhibición de IL-36R incluyen, por ejemplo, enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunitarias, enfermedades respiratorias, trastornos metabólicos y cáncer.

Los trastornos inflamatorios incluyen, por ejemplo, inflamación alérgica de la piel, pulmones y tracto gastrointestinal, dermatitis atópica (también conocida como eccema atópico), asma (alérgica y no alérgica), inflamación mediada por el epitelio, fibrosis (p. ej., fibrosis pulmonar idiopática, esclerodermia, fibrosis renal y cicatrización), rinitis alérgica, alergias alimentarias (p. ej., alergias a los cacahuetes, huevos, productos lácteos, mariscos, frutos secos, etc.), alergias estacionales y otras alergias.

El método se puede usar para tratar cualquier tipo de enfermedad autoinmunitaria (es decir, como enfermedad o trastorno causado por hiperactividad del sistema inmunitario en la que el cuerpo ataca y daña sus propios tejidos), tales como las descritas, por ejemplo, en MacKay I.R. y Rose N.R., eds., The Autoimmune Diseases, quinta edición, Academic Press, Waltham, m A (2014). Los ejemplos de enfermedades autoinmunitarias que pueden tratarse con el método incluyen, pero no se limitan a, esclerosis múltiple, asma, diabetes mellitus tipo 1, artritis reumatoide, esclerodermia, enfermedad de Crohn, psoriasis vulgar (comúnmente conocida como psoriasis), psoriasis pustulosa, psoriasis pustulosa generalizada (GPP), pustulosis palmoplantar (PPP), enfermedad inflamatoria intestinal, artritis psoriásica, esclerosis múltiple, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico (LES), colitis ulcerosa y espondilitis anquilosante. En una realización preferida, el método se usa para tratar la psoriasis pustulosa, la psoriasis pustulosa generalizada, la pustulosis palmoplantar (PPP) o la psoriasis vulgar.

La psoriasis pustulosa es una forma rara de psoriasis caracterizada por pústulas blancas rodeadas de piel roja. La psoriasis pustulosa generalizada (PPG) es una enfermedad potencialmente mortal caracterizada por episodios repentinos y repetidos de fiebre alta, erupción cutánea generalizada y pústulas diseminadas, con hiperleucocitosis y niveles séricos elevados de proteína C reactiva, que pueden ser causados por una deficiencia en el antagonista del receptor de la interleuquina-36 (interleuquina-36Ra) (Marrakchi et al., N. Engl. J. Med., 365(7):620-628 (2011)). La GPP a menudo se presenta en pacientes con psoriasis vulgar (PV) existente o previa; sin embargo, la GPP puede desarrollarse en pacientes sin antecedentes de PV (Sugiura et al., J. Invest. Derm., 133: 2514-2521 (2013)). La pustulosis palmoplantar es una enfermedad inflamatoria crónica de la piel caracterizada por pústulas estériles y piel enrojecida y escamosa en palmas y plantas de los pies que deteriora considerablemente la calidad de vida de las personas afectadas (de Waal, A.C. y van de Kerkhof, P.C.M., J Dermatological Treatment, 22(2): 102-105 (2011)).

Los ejemplos de enfermedades respiratorias que pueden tratarse mediante el método incluyen, pero no se limitan a, asma, fibrosis quística, enfisema, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y síndrome de dificultad respiratoria aguda. Los ejemplos de trastornos metabólicos que pueden tratarse mediante el método incluyen, pero no se limitan a obesidad, diabetes de tipo 2, aterosclerosis y enfermedad cardiovascular.

El método se puede usar para tratar cualquier tipo de cáncer conocido en la técnica, incluyendo, pero no limitados a melanoma, carcinoma de células renales, cáncer de pulmón, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de cuello uterino, cáncer de colon, cáncer de vesícula biliar, cáncer de laringe, cáncer de hígado, cáncer de tiroides, cáncer de estómago, cáncer de glándulas salivales, cáncer de próstata, cáncer de páncreas, leucemia, linfoma y carcinoma de células de Merkel (véase, p. ej., Bhatia et al., Curr. Oncol. Rep., 13(6): 488-497 (2011)).

La administración de una composición que comprende el polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina, el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina, el agente de unión al IL-36R de la invención, la secuencia de ácido nucleico que codifica cualquiera de los anteriores, o el vector de la invención que comprende la secuencia de ácido nucleico de la invención induce una respuesta inmunitaria en un mamífero. Una "respuesta inmunitaria" puede implicar, por ejemplo, la producción de anticuerpos y/o la activación de células efectoras inmunitarias (p. ej., células T).

Como se usa en el presente documento, los términos "tratamiento", "tratar" y similares se refieren a la obtención de un efecto farmacológico y/o fisiológico deseado. Preferiblemente, el efecto es terapéutico, es decir, el efecto cura parcial o completamente una enfermedad y/o un síntoma adverso atribuible a la enfermedad. Con este fin, el método comprende administrar una "cantidad terapéuticamente eficaz" del agente de unión al IL-36R. Una "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad eficaz, en las dosis y durante los períodos de tiempo necesarios, para lograr un resultado terapéutico deseado. La cantidad terapéuticamente eficaz puede variar según factores tales como el estado de la enfermedad, edad, sexo y peso del individuo, y la capacidad del agente de unión al IL-36R para provocar una respuesta deseada en el individuo. Por ejemplo, una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente de unión al IL-36R de la invención es una cantidad que disminuye la bioactividad del IL-36R en un ser humano.

Alternativamente, el efecto farmacológico y/o fisiológico puede ser profiláctico, es decir, el efecto previene completa o parcialmente una enfermedad o síntoma de la misma. En relación con esto, el método comprende administrar una "cantidad profilácticamente eficaz" del agente de unión al IL-36R. Una "cantidad profilácticamente eficaz" se refiere a una cantidad eficaz, en las dosis y durante los períodos de tiempo necesarios, para conseguir un resultado profiláctico deseado (p. ej., prevención de la aparición de la enfermedad).

Una dosis típica puede estar, por ejemplo, en el intervalo de 1 pg/kg a 20 mg/kg de peso corporal animal o humano; sin embargo, las dosis por debajo o por encima de este intervalo de ejemplo están dentro del alcance de la invención. La dosis parenteral diaria puede ser de aproximadamente 0.00001 pg/kg a aproximadamente 20 mg/kg de peso corporal total (p. ej., aproximadamente 0.001 pg/kg, aproximadamente 0.1 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 5 pg/kg, aproximadamente 10 pg/kg, aproximadamente 100 pg/kg, aproximadamente 500 pg/kg, aproximadamente 1 mg/kg, aproximadamente 5 mg/kg, aproximadamente 10 mg/kg, o un intervalo definido por dos cualesquiera de los valores anteriores), preferiblemente de aproximadamente 0.1 pg/kg a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal total (p. ej., aproximadamente 0.5 pg/kg, aproximadamente 1 pg/kg, aproximadamente 50 pg/kg, aproximadamente 150 pg/kg, aproximadamente 300 pg/kg, aproximadamente 750 pg /kg, aproximadamente 1.5 mg/kg, aproximadamente 5 mg/kg, o un intervalo definido por dos cualesquiera de los valores anteriores), más preferiblemente de aproximadamente 1 pg/kg a 5 mg/kg de peso corporal total (p. ej., aproximadamente 3 pg/kg, aproximadamente 15 pg/kg, aproximadamente 75 pg/kg, aproximadamente 300 pg/kg, aproximadamente 900 pg/kg, aproximadamente 2 mg/kg, aproximadamente 4 mg/kg, o un intervalo definido por dos cualesquiera de los valores anteriores), e incluso más preferiblemente de aproximadamente 0.5 a 15 mg/kg de peso corporal por día (p. ej., aproximadamente 1 mg/kg, aproximadamente 2.5 mg/kg, aproximadamente 3 mg/kg, aproximadamente 6 mg/kg, aproximadamente 9 mg/kg, aproximadamente 11 mg/kg, aproximadamente 13 mg/kg, o un intervalo definido por dos cualesquiera de los valores anteriores). La eficacia terapéutica o profiláctica puede controlarse mediante la evaluación periódica de los pacientes tratados. Para administraciones repetidas durante varios días o más, dependiendo de la afección, el tratamiento puede repetirse hasta que se produzca la supresión deseada de los síntomas de la enfermedad, o alternativamente, el tratamiento puede continuarse durante toda la vida del paciente. Sin embargo, otras pautas posológicas pueden ser útiles y están dentro del alcance de la invención. La dosis deseada se puede suministrar mediante la administración en un bolo único de la composición, mediante administraciones en bolos múltiples de la composición o mediante la administración por infusión continua de la composición.

La composición que comprende una cantidad eficaz del polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina, el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina, el agente de unión al IL-36R de la invención, la secuencia de ácido nucleico que codifica cualquiera de los anteriores, o el vector de la invención que comprende la secuencia de ácido nucleico de la invención se puede administrar a un mamífero utilizando técnicas de administración convencionales, que incluyen administración oral, intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, pulmonar, transdérmica, intramuscular, intranasal, bucal, sublingual o en supositorios. La composición preferiblemente es adecuada para administración parenteral. El término "parenteral", como se usa en el presente documento, incluye la administración intravenosa, intramuscular, subcutánea, rectal, vaginal e intraperitoneal. Más preferiblemente, la composición se administra a un mamífero usando administración sistémica periférica mediante inyección intravenosa, intraperitoneal o subcutánea.

Una vez administrado a un mamífero (p. ej., un ser humano), la actividad biológica del agente de unión al IL-36R de la invención puede medirse mediante cualquier método adecuado conocido en la técnica. Por ejemplo, la actividad biológica se puede evaluar determinando la estabilidad de un agente de unión al IL-36R particular. En una realización de la invención, el agente de unión al IL-36R (p. ej., un anticuerpo) tiene una semivida in vivo entre aproximadamente 30 minutos y 45 días (p. ej., aproximadamente 30 minutos, aproximadamente 45 minutos, aproximadamente 1 hora, aproximadamente 2 horas, aproximadamente 4 horas, aproximadamente 6 horas, aproximadamente 10 horas, aproximadamente 12 horas, aproximadamente 1 día, aproximadamente 5 días, aproximadamente 10 días, aproximadamente 15 días, aproximadamente 25 días, aproximadamente 35 días, aproximadamente 40 días, aproximadamente 45 días, o un intervalo definido por dos cualesquiera de los valores anteriores). En otra realización, el agente de unión al IL-36R tiene una semivida in vivo entre aproximadamente 2 horas y 20 días (p. ej., aproximadamente 5 horas, aproximadamente 10 horas, aproximadamente 15 horas, aproximadamente 20 horas, aproximadamente 2 días, aproximadamente 3 días, aproximadamente 7 días, aproximadamente 12 días, aproximadamente 14 días, aproximadamente 17 días, aproximadamente 19 días, o un intervalo definido por dos cualquiera de los valores anteriores). En otra realización, el agente de unión al IL-36R tiene una semivida in vivo entre aproximadamente 10 días y aproximadamente 40 días (p. ej., aproximadamente 10 días, aproximadamente 13 días, aproximadamente 16 días, aproximadamente 18 días, aproximadamente 20 días, aproximadamente 23 días, aproximadamente 26 días, aproximadamente 29 días, aproximadamente 30 días, aproximadamente 33 días, aproximadamente 37 días, aproximadamente 38 días, aproximadamente 39 días, aproximadamente 40 días, o un intervalo definido por dos cualesquiera de los valores anteriores).

La estabilidad del agente de unión al IL-36R de la invención se puede medir en términos del valor del punto medio de transición (Tm), que es la temperatura donde el 50% de la secuencia de aminoácidos está en su conformación nativa, y el otro 50% está desnaturalizado. En general, cuanto mayor sea la Tm, más estable es la proteína. En una realización de la invención, el agente que se une al IL-36R de la invención comprende un valor de punto medio de transición (Tm) in vitro de aproximadamente 60-100°C. Por ejemplo, el agente de unión al IL-36R de la invención puede comprender un Tm in vitro de aproximadamente 65-80°C (p. ej., 66°C, 68°C, 70°C, 71°C, 75°C o 79°C), aproximadamente 80-90°C (p. ej., aproximadamente 81°C, 85°C u 89°C), o aproximadamente 90-100°C (por ejemplo, aproximadamente 91°C, aproximadamente 95°C o aproximadamente 99°C).

La estabilidad del agente de unión al IL-36R de la invención se puede medir utilizando cualquier otro ensayo adecuado conocido en la técnica, tal como, por ejemplo, la medición de la semivida en suero, calorimetría diferencial de barrido (DSC), ensayos de cambio térmico y ensayos de pulso y caza. Otros métodos para medir la estabilidad de las proteínas in vivo e in vitro que se pueden utilizar en el contexto de la invención se describen, por ejemplo, en Protein Stability and Folding, B.A. Shirley (ed.), Human Press, Totowa, Nueva Jersey (1995); Protein Structure, Stability, and Interactions (Methods in Molecular Biology), Shiver J.W. (ed.), Humana Press, Nueva York, NY (2010); y Ignatova, Microb. CellFací, 4: 23 (2005).

La actividad biológica de un agente de unión al IL-36R particular también puede evaluarse determinando su afinidad de unión al IL-36R o un epítopo del mismo. El término "afinidad" se refiere a la constante de equilibrio para la unión reversible de dos agentes y se expresa como la constante de disociación (K^d). La afinidad de un agente de unión a un ligando, tal como la afinidad de un anticuerpo por un epítopo, puede ser, por ejemplo, de aproximadamente 1 picomolar (pM) a aproximadamente 100 micromolar (pM) (p. ej., de aproximadamente 1 picomolar (pM) a aproximadamente 1 nanomolar (nM), de aproximadamente 1 nM a aproximadamente 1 micromolar (pM), o de aproximadamente 1 pM a aproximadamente 100 pM). En una realización, el agente de unión al IL-36R puede unirse a una proteína IL-36R con una K^d menor o igual a 1 nanomolar (p. ej., 0.9 nM, 0.8 nM, 0.7 nM, 0.6 nM, 0.5 nM, 0.4 nM, 0.3 nM, 0.2 nM, 0.1 nM, 0.05 nM, 0.025 nM, 0.01 nM, 0.001 nM, o un intervalo definido por dos cualesquiera de los valores anteriores). En otra realización, el agente de unión al IL-36R puede unirse al IL-36R con una K^d menor o igual a 200 pM (p. ej., 190 pM, 175 pM, 150 pM, 125 pM, 110 pM, 100 pM, 90 pM, 80 pM, 75 pM, 60 pM, 50 pM, 40 pM, 30 pM, 25 pM, 20 pM, 15 pM, 10 pM, 5 pM, 1 pM o un intervalo definido por dos cualesquiera de los valores anteriores). La afinidad de la inmunoglobulina por un antígeno o epítopo de interés se puede medir utilizando cualquier ensayo reconocido en la técnica. Dichos métodos incluyen, por ejemplo, separación de células activadas por fluorescencia (FACS), perlas separables (p. ej., perlas magnéticas), resonancia de plasmones superficiales (SPR), competición en fase de solución (KINEXA™), análisis de antígenos, ensayos de unión competitiva y/o ELISA (véase, p. ej., Janeway et al. (eds.), Immunobiology, 5.a ed., Garland Publishing, Nueva York, NY, 2001).

El agente de unión al IL-36R de la invención se puede administrar solo o en combinación con otros fármacos. Por ejemplo, el agente de unión al IL-36R se puede administrar en combinación con otros agentes para el tratamiento o la prevención de las enfermedades descritas en el presente documento, tales como un agente antiinflamatorio que incluye, por ejemplo, corticosteroides (p. ej., prednisona y fluticasona), medicamentos antiinflamatorios no esteroideos (AINE) (p. ej., aspirina, ibuprofeno y naproxeno), productos biológicos (p. ej., infliximab (REMICADE™), adalimumab (HUMIRA™), o etanercept (ENBREL™)), metotrexato (MTX), un retinoide oral (p. ej., acitretina (SORIATa Ne™)), y esteroides tópicos.

Además de los usos terapéuticos, el agente de unión al IL-36R descrito en el presente documento puede usarse en aplicaciones de diagnóstico o investigación. En relación con esto, el agente de unión al IL-36R puede usarse en un método para diagnosticar un trastorno o enfermedad en el que la expresión inadecuada (p. ej., sobreexpresión) o el aumento de la actividad del IL-36R provoca o contribuye a los efectos patológicos de la enfermedad o trastorno. De manera similar, el agente de unión al IL-36R se puede usar en un ensayo para controlar los niveles de proteína IL-36R en un sujeto que se somete a prueba para detectar una enfermedad o trastorno que responde a la inhibición de IL-36R. Las aplicaciones de investigación incluyen, por ejemplo, métodos que utilizan el agente de unión al IL-36R y un marcador para detectar una proteína IL-36R en una muestra, p. ej., en un fluido corporal humano o en un extracto de tejido o célula. El agente de unión al IL-36R puede usarse con o sin modificación, tal como marcaje covalente o no covalente con un resto detectable. Por ejemplo, el resto detectable puede ser un radioisótopo (p. ej., 3H, 14C, 32P, 35S, o 125I), un compuesto fluorescente o quimioluminiscente (p. ej., isotiocianato de fluoresceína, rodamina o luciferina), una enzima (p. ej., fosfatasa alcalina, beta-galactosidasa o peroxidasa de rábano picante) o grupos prostéticos. En el contexto de la invención puede emplearse cualquier método conocido en la técnica para conjugar por separado un agente de unión al antígeno (p. ej., un anticuerpo) con un resto detectable (véase, p. ej., Hunter et al., Nature, 194: 495-496 (1962); David et al., Biochemistry, 13: 1014-1021 (1974); Pain et al., J. Immunol. Meth., 40: 219-230 (1981); y Nygren, J. Histochem. and Cytochem., 30: 407-412 (1982)).

Los niveles de proteína IL-36R pueden medirse utilizando el agente de unión al IL-36R de la invención mediante cualquier método adecuado conocido en la técnica. Dichos métodos incluyen, por ejemplo, radioinmunoensayo (RIA) y FACS. Los valores de expresión normales o estándar de IL-36R se pueden establecer usando cualquier técnica adecuada, por ejemplo, mediante la combinación de una muestra que comprende, o se sospecha que contiene, IL-36R con un anticuerpo específico para IL-36R en condiciones adecuadas para formar un complejo de antígenoanticuerpo. El anticuerpo se marca directa o indirectamente con una sustancia detectable para facilitar la detección del anticuerpo unido o no unido. Sustancias detectables adecuadas incluyen varias enzimas, grupos prostéticos, materiales fluorescentes, materiales luminiscentes y materiales radiactivos (véase, p. ej., Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, CRC Press, Inc. (1987)). A continuación, se compara la cantidad de polipéptido IL-36R expresada en una muestra con un valor estándar.

El agente de unión a IL-36R se puede proporcionar en un kit, es decir, una combinación envasada de reactivos en cantidades predeterminadas con instrucciones para realizar un ensayo de diagnóstico. Si el agente de unión al IL-36R está marcado con una enzima, el kit incluye deseablemente sustratos y cofactores requeridos por la enzima (p. ej., un precursor de sustrato que proporciona un cromóforo o fluoróforo detectable). Además, se pueden incluir otros aditivos en el kit, tales como estabilizantes, tampones (p. ej., un tampón de bloqueo o tampón de lisis) y similares. Las cantidades relativas de los diversos reactivos se pueden variar para proporcionar concentraciones en solución de los reactivos que optimicen sustancialmente la sensibilidad del ensayo. Los reactivos pueden proporcionarse como polvos secos (típicamente liofilizados), que incluyen excipientes que, al disolverse, proporcionarán una solución de reactivo con la concentración adecuada.

Los siguientes ejemplos ilustran adicionalmente la invención pero, por supuesto, no deben interpretarse como limitantes de ningún modo de su alcance.

Ejemplo 1

Este ejemplo demuestra que los polipéptidos de la cadena pesada (HC) y cadena ligera (LC) de inmunoglobulina pueden formar anticuerpos que se unen y bloquean la señalización del IL-36R humano in vitro.

Células HEK293T/17 (ATCC CRL-11268) se transfectaron de manera estable con una construcción de plásmido que codifica IL-36R humano (hIL-36R) o IL-36R de macaco (cynoIL-36R) junto con un promotor de IL-8 (Promega Corp., Madison, WI), y se eligió un solo clon celular para todos los ensayos posteriores.

Las células HEK293 se cultivaron, con 3 x 106 células/matraz, en un matraz de cultivo T75 en 10 ml de DMEM FBS al 10% y se incubaron durante la noche a 37°C. A la mañana siguiente, se añadieron 24 gl de FUGENE™ HD (Promega Corporation, Madison, WI) a 500 gl de medio OPTI-MEM™ (Life Technologies, Carlsbad, CA) y se incubó a temperatura ambiente durante cinco minutos. Se añadieron a la mezcla ADN que codificaba IL-36R (2 gl) y ADN que codificaba el promotor IL8 (2 gl) y se dejó incubar durante 25 minutos más a temperatura ambiente. La variación alélica de IL-36R de macaco se examinó mediante secuenciación de Sanger, y se identificaron cuatro variantes alélicas distintas dentro de las poblaciones de macacos cangrejeros. Las líneas celulares HEK que expresan cada variante alélica de IL-36R de macaco se generaron por separado. Para las líneas celulares indicadoras de IL-8 tanto humana como de macaco cangrejero, se utilizó la IL1RAcP humana expresada de forma endógena en HEK. Esta mezcla ADN/FUGENO™ se añadió suavemente a las células gota a gota para la transfección y se incubó durante la noche a 37°C. 24 horas después de la transfección, las células se dividieron y se pusieron en higromicina y puromicina que contenían DMEM FBS al 10% durante cuatro semanas para la selección. Después de 4 semanas, las células estabilizadas se colocaron en placas con 1 célula/pocillo, en placas de fondo transparente de 96 pocillos (5 placas/línea celular). Se seleccionaron clones de células individuales para determinar la expresión superficial de IL-36R y se expandieron, las células con un bajo número de pases (es decir, 1-3) se usaron para el ensayo descrito a continuación.

Las líneas celulares estables variantes HEK293-humanoIL36R/IL8 o HEK293-macacoIL36R/IL8 se recolectaron con Accutase y se sembraron a 0.06 x 106 células/pocillo en 100 gl de DMEM+FBS al 10% en una placa de fondo transparente de 96 pocillos durante la noche a 37°C, CO² al 5%. A la mañana siguiente, las placas se invirtieron en el fregadero para eliminar el medio y se golpearon suavemente sobre una toalla de papel para secarlas. Se prepararon anticuerpos diluidos que comprendían varias combinaciones de los polipéptidos de HC y LC de la invención (véase la Tabla 1), IL-36Ra (R&D Systems, Minneapolis, MN) y un anticuerpo de control de isotipo negativo en DMEM FBS al 10% (Life Technologies, Carlsbad, CA) en las concentraciones deseadas mediante series de diluciones de dos veces, se añadieron inmediatamente a los pocillos (50 gl/pocillo) y se dejaron incubar durante 20 minutos a 37°C, CO² al 5%.

Tabla 1

Posteriormente, las células se estimularon con 50 gl de ligandos IL36a, IL36p o IL36y (R&D Systems, Minneapolis, MN) y se dejaron incubar durante 24 horas adicionales a 37°C, CO² al 5%. La CE⁵⁰ de cada una de las citoquinas individuales se determinó empíricamente antes del ensayo. La actividad de luciferasa se determinó usando el sistema de ensayo de luciferasa STEADY-GLO™ (Promega, n.° Cat E2520, Madison, WI). Se añadieron 100 gl de una mezcla 1:1 de sustrato de ensayo de luciferasa:tampón a cada pocillo, se incubaron durante cinco minutos a temperatura ambiente y se transfirieron (150 ul) a placas de fondo transparente de paredes negras de 96 pocillos. Las placas se leyeron en el lector de placas ENVISION™ (PerkinElmer, Waltham, WA) para determinar la luminiscencia (retraso de 60 s). Los datos se analizaron usando el Software GraphPad PRISM™ 5 (GraphPad, San Diego, CA).

Los resultados del ensayo con indicador de luciferasa de IL-8 contra IL-36R humano y de macaco se muestran en las Figuras 1A-1F (IL-36R humano), Figuras 2A-2C (IL-36R macaco), Figuras 10A-10C (IL-36R macaco) y Figuras 10D-10F (IL-36R humano). Las potencias medidas (CI⁵⁰) de cada uno de los anticuerpos ensayados se exponen en las Tablas 2 y 3.1 y 3.2.

Tabla 2 - Ensayo con indicador de luciferasa de IL-8 - IL-36R humano en HEK

Tabla 3.1 - Ensayo con indicador de luciferasa de IL-8 - IL-36R de macaco en HEK

Tabla 3.2

Los resultados de este ejemplo demuestran que los polipéptidos de la cadena pesada (HC) y cadena ligera (LC) de inmunoglobulina de la invención pueden formar anticuerpos que se unen e inhiben la señalización de IL-36R humano in vitro.

Ejemplo 2

Este ejemplo demuestra que los polipéptidos de la cadena pesada (HC) y cadena ligera (LC) de inmunoglobulina pueden formar anticuerpos que se unen al IL-36R humano in vitro.

Se prepararon muestras de ADN que codifican varios polipéptidos de la cadena pesada (HC) y cadena ligera (LC) de inmunoglobulina como se describe en el presente documento combinando lo siguiente: ADN Maxi-prepped (que contiene 6 gg de plásmido de HC y 6 gg de plásmido de LC), 1 ml de OPTIMEM™ (Life Technologies, Carlsbad, CA), y 72 gl de reactivo de transfección FUGENE™ HD (Promega, Fitchburg, WI). Todos los reactivos se precalentaron. Después de mezclar completamente e incubar durante 25 minutos a temperatura ambiente, se añadió 1 ml de mezcla de reactivo/ADN a 8x106 células HEK293-c18 (ATCC CRL-10852) en cada matraz de cultivo T225. 18 horas antes de la transfección, las células se sembraron en matraces de cultivo T225 con 20 ml de DMEM (Life Technologies, Carlsbad, CA) con FBS al 10% (Life Technologies, Carlsbad, CA) por matraz y se incubaron a 37°C en CO² al 5% durante la noche. Después de la transfección, las células se devolvieron a 37°C en CO² al 5%. Al día siguiente, el medio de cada matraz se intercambió con 25 ml de medio 293 Freestyle (Life Technologies, Carlsbad, CA) y las células se trasladaron a una incubadora con CO² al 8%. La producción de anticuerpos se llevó a cabo durante 7-12 días. Se recogieron los líquidos sobrenadantes de cada matraz, se centrifugaron a 3000 rpm durante 10 minutos y se esterilizaron por filtración en tubos nuevos.

Para la purificación de anticuerpos, aproximadamente 20-30 ml de líquidos sobrenadantes de cultivos celulares que contenían los anticuerpos de interés se pasaron a través de una columna de gravedad empaquetada con 1-2 ml de resina MAB SELECT SURE™ LX (GE Healthcare, Waukesha, WI) preequilibrada con tampón de PBS (fosfato 11.9 mM, NaCl 137 mM, KCl 2.7 mM, pH 7.4) (Fisher Bioreagents, Waltham, MA). La columna se lavó con cinco volúmenes de columna de tampón de PBS. Los anticuerpos unidos se eluyeron de la resina con 5-10 volúmenes de columna de glicina 0.1 M, pH 3.0. El eluato que contenía los anticuerpos se concentró hasta una concentración de anticuerpos de aproximadamente 0.1-2 mg/ml en concentradores Amicon Ultra 10K (Millipore, Billerica, MA), y el tampón se intercambió tres veces por tampón de PBS. La concentración de anticuerpos se determinó en un espectrofotómetro Nanodrop 2000c (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) y la pureza se evaluó mediante análisis por SDS-PAGE.

Las afinidades de unión de varios anticuerpos purificados que comprendían polipéptidos de la cadena pesada (HC) y cadena ligera (LC) de inmunoglobulina descritos en el presente documento se evaluaron utilizando ensayos BIACORE™ T200 (Sapidyne Instruments, Boise, Idaho). El software de evaluación BIACORE™ T200 (GE Healthcare, Buckinghamshire, Reino Unido) se utiliza para determinar la cinética y la afinidad de la unión anticuerpo-antígeno. El dominio extracelular del IL-36R humano se inmovilizó en aproximadamente 100 RU en un chip sensor CM5 (GE Healthcare, Waukesha, WI) usando química de acoplamiento de amina. Se usó tampón HBS-EP+ (HEPES 0.01 M, NaCl 0.15 M, EDTA 3 mM, polisorbato al 0.05 %, pH 7.6) (Teknova, Hollister, CA) para reconstituir cada anticuerpo en varias concentraciones. Luego, se inyectó cada concentración de anticuerpo durante dos o tres minutos sobre el antígeno inmovilizado con un caudal de 30 gl/min, y se dejó disociar durante 15 minutos. La superficie se regeneró con 60 gl de MgCl² 3 M después de cada ciclo. Las constantes cinéticas de asociación y disociación (kon y koff) se ajustaron globalmente usando un modelo de unión 1:1 con transporte de masa con el software de evaluación BIACORE™ T200 con el fin de dar las velocidades de asociación y disociación (ka y kd, respectivamente), así como afinidades (KD).

Las afinidades de unión de varios anticuerpos purificados que comprenden polipéptidos de la cadena pesada (HC) y cadena ligera (LC) de inmunoglobulina descritos en el presente documento también se evaluaron usando un ensayo KINEXA® 3000 (Sapidyne Instruments, Boise, Idaho). La tecnología KINEXA® mide la cantidad de molécula de anticuerpo no unida/libre en la fase de solución después de la incubación con concentraciones variables de antígeno. La medición de los sucesos de unión en la fase de solución con microesferas para una superficie maximizada evita las limitaciones del transporte de masa y los efectos de movilidad inherentes a los métodos que miden la unión a una fase sólida. Para cada experimento, 50 gg de dominio extracelular de IL-36R humano o de macaco soluble se acoplaron por amina a 50 mg de perlas UltraLink Biosupport (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). Se incubó una concentración constante de anticuerpo (suficiente para producir 0.8 V-1.2 V de señal) durante un período de tiempo suficiente para acercarse o alcanzar el equilibrio (el tiempo de incubación varía para cada anticuerpo y depende de la afinidad) con antígeno titulado en el tampón de muestra (1x PBS, pH 7.4, NaN3 al 0.02%, BSA al 0.1%). A continuación, la solución de anticuerpo-antígeno se hizo fluir sobre las perlas con antígeno acoplado a una velocidad de 0.25 ml/min. El anticuerpo libre capturado por perlas se detectó utilizando anticuerpo de burro anti-IgG (H+L) humana AffiniPure conjugado con ALEXA FLUOR™ 647 (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) (500 ng/ml). La KD y/o ABC (concentración de unión activa) del anticuerpo se obtuvo a partir del análisis de regresión no lineal utilizando un modelo de unión homogénea de un sitio en el Software KINEXA™ Pro.

Los valores KD resultantes del ensayo de los ensayos BIACORE™ T200 y KINEXA® 3000 se exponen en la Tabla 4 y la Figura 3A (datos de KinExA para 1D9 humanizado), Figura 3B (Biacore para 5D3 APE6194) y Figura 3C (datos de KinExA para 18D4 humanizado).

Tabla 4

Estos datos demuestran que los anticuerpos que comprenden diferentes combinaciones de los polipéptidos de la HC y LC de inmunoglobulina descritos en el presente documento pueden unirse al IL-36R humano con altas afinidades.

Ejemplo 3

Este ejemplo demuestra que los polipéptidos de la cadena pesada (HC) y cadena ligera (LC) de inmunoglobulina de la invención pueden formar anticuerpos que se unen al IL-36R humano in vitro e inhiben la señalización celular y la liberación de citoquinas (p. ej., IL-8) por las células queratinocitos primarios humanos que expresan de forma endógena IL-36R.

Los anticuerpos utilizados en este ensayo se produjeron y purificaron como se describe anteriormente. Los queratinocitos epidérmicos humanos normales (NHEK) se adquirieron de Lonza Clonetics (n.° cat. 00192627). Las células se cultivaron y expandieron utilizando el medio de cultivo recomendado (medio Lonza KBM Gold, n.° cat.

00192151 con suplementos Lonza KGM Gold SingleQuot, n.° cat. 0092152) en una incubadora con CO² al 5% a 37°C. Las células se congelaron en nitrógeno líquido en el pase 2 en múltiples partes alícuotas de un solo uso.

Las células del pase 2 se descongelaron y diluyeron a una densidad de 100000 células por ml en el medio de cultivo recomendado anteriormente y se sembraron 100 pl de células por pocillo en placas estándar de cultivo de tejidos de 96 pocillos de fondo plano para una densidad celular final de 10 000 células por pocillo. Los pocillos exteriores se llenan con 200 pl de solución salina tamponada con fosfato por pocillo para evitar efectos de borde. Las células se cultivaron durante la noche en una incubadora con CO² al 5% a 37°C para permitir la adherencia.

Al día siguiente, se añadieron anticuerpos en concentraciones desde 10 pg/ml o 1 pg/ml hasta 0 mediante diluciones semilogarítmicas en medio de cultivo. Después de 30 minutos, se añadieron ligandos IL-36 humana recombinante en concentraciones de aproximadamente CE⁵⁰ (previamente determinadas empíricamente para cada ligando) en medio de cultivo. Las concentraciones de anticuerpo y ligando se hicieron 4x de las concentraciones finales deseadas y se añadieron 50 pl por pocillo para un volumen total final en cada pocillo de 200 pl. Los líquidos sobrenadantes se eliminaron aproximadamente 48 horas más tarde después de una centrifugación de las placas de tres minutos, se transfirieron a placas limpias y se analizaron inmediatamente o se almacenaron a -80°C hasta su posterior análisis.

Los niveles de IL-8 humana en los líquidos sobrenadantes celulares se evaluaron por ELISA utilizando el Kit de ELISA DUO-SET™ R&D Systems (n.° cat DY208) siguiendo un protocolo estándar proporcionado por el fabricante. Los datos se representaron gráficamente y los valores de CI⁵⁰ se calcularon utilizando el software GraphPad PRISM™.

Los resultados de este ensayo se muestran en la Tabla 5 y las Figuras 4A-4I.

Tabla 5

Los resultados de este ejemplo demuestran que los anticuerpos compuestos por combinaciones de HC y LC descritos en el presente documento inhiben la liberación de citoquinas inflamatorias (IL-8) de queratinocitos primarios humanos que expresan IL-36R y estimulados con citoquinas IL-36a, IL-36p e IL-36y de una manera dependiente de la dosis.

Ejemplo 4

Este ejemplo demuestra que los polipéptidos de la cadena pesada (HC) y cadena ligera (LC) de inmunoglobulina pueden formar anticuerpos que se unen a IL-36R de macaco (IL-36R macaco) in vitro e inhiben la señalización celular dependiente de IL-36 y la liberación de citoquinas (p. ej., IL-8) por las células de queratinocitos primarios que expresan IL-36R de forma endógena.

Los anticuerpos utilizados en este ensayo se produjeron y purificaron como se describe en el Ejemplo 3. Se adquirieron querotinocitos epidérmicos de macaco cangrejero normales de CellBiologics (Chicago, IL; n.° cat MK-6066K). Las células se cultivaron y expandieron utilizando el medio de cultivo recomendado (medio epitelial de CellBiologics, n.° cat. M6621 con suplementos de medio de células epiteliales de CellBiologics, n.° cat. M6621 -kit) en una incubadora con CO² al 5% a 37°C. Las células se congelaron en nitrógeno líquido en el pase 2 en múltiples partes alícuotas de un solo uso.

Las células del pase 2 se descongelaron y diluyeron a una densidad de 100000 células por ml en el medio de cultivo descrito anteriormente, y se sembraron 100 pl de células por pocillo en placas de cultivo de tejido de 96 pocillos de fondo plano estándar para una densidad celular final de 10000 células por pocillo. Los pocillos exteriores se llenaron con 200 pl de PBS por pocillo para evitar efectos de borde. Las células se cultivaron durante la noche en una incubadora con CO² al 5% a 37°C para permitir la adherencia.

Al día siguiente, se añadieron anticuerpos en concentraciones desde 10 pg/ml o 1 pg/ml hasta 0 mediante diluciones semilogarítmicas en medio de cultivo. Después de 30 minutos, se añadieron ligandos IL-36 de macaco recombinantes en concentraciones de aproximadamente CE⁵⁰ (previamente determinadas empíricamente para cada ligando) en medio de cultivo. Las concentraciones de anticuerpo y ligando se hicieron a 4x las concentraciones finales deseadas y se añadieron 50 pl por pocillo para un volumen total final en cada pocillo de 200 pl. Los líquidos sobrenadantes se eliminaron aproximadamente 48 horas más tarde después de una centrifugación de las placas de tres minutos, se transfirieron a placas limpias y se analizaron inmediatamente o se almacenaron a -80°C hasta su posterior análisis.

Los niveles de IL-8 de macaco en los líquidos sobrenadantes celulares se evaluaron por ELISA utilizando un kit ELISA platino para IL-8 de mono de eBioscience (San Diego, CA) (n.° cat. BMS640/3) siguiendo un protocolo estándar proporcionado por el fabricante. Los datos se representaron gráficamente y los valores de CI⁵⁰ se calcularon utilizando el software GraphPad PRISM™.

Los resultados de este ensayo se muestran en la Tabla 6 y las Figuras 5A-5F.

Tabla 6

Los resultados de este ejemplo demuestran que los anticuerpos compuestos por combinaciones de HC y LC descritos en el presente documento inhiben la liberación de citoquinas inflamatorias (IL-8) de los queratinocitos primarios de macacos que expresan IL-36R y estimulados con las citoquinas IL-36a, IL-36p e IL-36y de una manera dependiente de la dosis.

Ejemplo 5

Este ejemplo demuestra la capacidad de los anticuerpos compuestos por HC y LC descritos en el presente documento para bloquear, de manera dependiente de la dosis, la liberación de IL-8 mediada por IL-36 humana de monocitos humanos que expresan IL-36R.

Se obtuvo una unidad del Sistema de Reducción de Leucocitos procesada a partir de una unidad de sangre completa de un donante del Banco de Sangre de San Diego. Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se prepararon mediante métodos convencionales utilizando la separación por centrifugación por densidad de Ficoll (Sigma HISTOPAQUE™ n.° cat. 10771). Los monocitos se aislaron de las PBMC con el kit de aislamiento de monocitos humanos II (Miltenyi Biotec, San Diego, CA; n.° cat. 130-091-153).

Los monocitos se diluyeron a una densidad de 500 000 células/ml en medio RPMI 1640 que contenía suero bovino fetal al 10% y penicilina/estreptomicina, y se sembraron 100 pl de células por pocillo en placas de cultivo de tejido estándar de 96 pocillos de fondo plano para obtener una densidad celular final de 50000 por pocillo. Los pocillos exteriores se llenaron con 200 pl de PBS por pocillo para evitar efectos de borde. Las células sembradas se incubaron durante 2-3 horas en una incubadora con CO² al 5% a 37°C para permitir la recuperación.

Después de aproximadamente 2-3 horas de cultivo, se añadieron anticuerpos en concentraciones de 10 pg/ml o 1 pg/ml hasta 0 por medio de diluciones semilogarítmicas en medio de cultivo. Después de 30 minutos, se añadieron ligandos IL-36 humana recombinante a concentraciones de aproximadamente CE⁵⁰ (previamente determinadas empíricamente para cada ligando) en medio de cultivo. Las concentraciones de anticuerpo y ligando se hicieron a 4x las concentraciones finales deseadas y se añadieron 50 pl por pocillo para un volumen total final en cada pocillo de 200 pl. Los líquidos sobrenadantes se eliminaron aproximadamente 48 horas más tarde después de una centrifugación de las placas de tres minutos, se transfirieron a placas limpias y se analizaron inmediatamente o se almacenaron a -80°C hasta su posterior análisis.

Los niveles de IL-8 humana en los líquidos sobrenadantes celulares se evaluaron por ELISA utilizando el Kit de ELISA DUO-SET™ de R&D Systems (n.° cat. DY208) siguiendo un protocolo estándar proporcionado por el fabricante. Los datos se representaron gráficamente y los valores de CI⁵⁰ se calcularon utilizando el software GraphPad PRISM™.

Los resultados de estos experimentos se exponen en la Tabla 7 y las Figuras 6A y 6B.

Tabla 7

Los resultados de este ejemplo demuestran que los anticuerpos compuestos por combinaciones de HC y LC descritos en el presente documento inhiben la liberación de citoquinas inflamatorias (IL-8) de monocitos primarios humanos que expresan IL-36R y estimulados con citoquinas IL-36a, IL-36p e IL-36y de una manera dependiente de la dosis.

Ejemplo 6

Este ejemplo demuestra que los polipéptidos de la cadena pesada (HC) y cadena ligera (LC) de inmunoglobulina de la invención descritos en el presente documento pueden formar anticuerpos que inhiben la liberación de citoquinas dependientes de IL-36 de células mononucleares primarias de sangre periférica humana.

Se obtuvo una unidad del Sistema de Reducción de Leucocitos procesada a partir de una unidad de sangre completa de un donante del Banco de Sangre de San Diego. Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se prepararon por métodos convencionales utilizando la separación por centrifugación por densidad de Ficoll (Sigma HISTOPAQUE™ n.2 cat. 10771).

Las PBMC se diluyeron a una densidad de 1 x 106 células/ml en medio RPMI 1640 que contenía suero bovino fetal al 10% y penicilina/estreptomicina, y se sembraron 100 gl de células por pocillo en placas de cultivo de tejido estándar de 96 pocillos de fondo plano para una densidad celular final de 100000 por pocillo. Los pocillos exteriores se llenaron con 200 gl de PBS por pocillo para evitar efectos de borde. Las células sembradas se incubaron durante 2-3 horas en una incubadora con CO² al 5% a 37°C para permitir la recuperación.

Después de aproximadamente 2-3 horas de cultivo, se añadieron anticuerpos en concentraciones de 10 gg/ml o 1 gg/ml hasta 0 por medio de diluciones semilogarítmicas en medio de cultivo. Después de 30 minutos, se añadieron ligandos IL-36 humana recombinante en concentraciones de aproximadamente CE⁵⁰ (previamente determinadas empíricamente para cada ligando) en medio de cultivo. Las concentraciones de anticuerpo y ligando se hicieron en 4x las concentraciones finales deseadas y se añadieron 50 gl por pocillo para un volumen total final en cada pocillo de 200 gl. Los líquidos sobrenadantes se separaron aproximadamente 48 horas más tarde después de una centrifugación de las placas de tres minutos, se transfirieron a placas limpias y se analizaron inmediatamente o se almacenaron a -80°C hasta su posterior análisis.

Los niveles de IL-8 humana en los líquidos sobrenadantes celulares se evaluaron por ELISA utilizando el Kit de ELISA DUO-SET™ de R&D Systems (n.° cat. DY208) siguiendo un protocolo estándar proporcionado por el fabricante. Los datos se representaron gráficamente y los valores de CI⁵⁰ se calcularon utilizando el software GraphPad PRISM™.

Los resultados de este ensayo se muestran en las Figuras 7A-7C y demuestran que los anticuerpos compuestos por combinaciones de HC y LC descritos en el presente documento inhiben la liberación de citoquinas inflamatorias (IL-8) de células mononucleares de sangre periférica primaria humana que expresan IL-36R y estimuladas con citoquinas IL-36a, IL-36p e IL-36y de forma dependiente de la dosis.

Ejemplo 7

Este ejemplo demuestra que los polipéptidos de la cadena pesada (HC) y cadena ligera (LC) de inmunoglobulina de la invención descritos en el presente documento pueden formar anticuerpos que inhiben la liberación de citoquinas dependientes de IL-36 de células mononucleares primarias de sangre periférica de macacos.

Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se prepararon por métodos convencionales utilizando la separación por centrifugación de densidad de Ficoll (Sigma HISTOPAQUE™; n.° cat. 10771) a partir de sangre completa normal de macaco cangrejero obtenida de Biotox Sciences (San Diego, CA).

Las PBMC se diluyeron a una densidad de 1 x 106 células/ml en medio RPMI 1640 que contenía suero bovino fetal al 10% y penicilina/estreptomicina, y se sembraron 100 gl de células por pocillo en placas de cultivo de tejido estándar de 96 pocillos de fondo plano para una densidad celular final de 100000 por pocillo. Los pocillos exteriores se llenan con 200 gl de PBS por pocillo para evitar efectos de borde. Las células sembradas se incubaron durante 2-3 horas en una incubadora con CO² al 5% a 37°C para permitir la recuperación.

Después de aproximadamente 2-3 horas de cultivo, se añadieron anticuerpos en concentraciones desde 10 gg/ml o 1 gg/ml hasta 0 por medio de diluciones semilogarítmicas en medio de cultivo. Después de 30 minutos, se añadieron ligandos IL-36 de macaco recombinantes en concentraciones de aproximadamente CE⁵⁰ (previamente determinadas empíricamente para cada ligando) en medio de cultivo. Las concentraciones de anticuerpo y ligando se hicieron en 4x las concentraciones finales deseadas y se añadieron 50 gl por pocillo para un volumen total final en cada pocillo de 200 gl. Los líquidos sobrenadantes se separaron aproximadamente 48 horas más tarde después de una centrifugación de las placas de tres minutos, se transfirieron a placas limpias y se analizaron inmediatamente o se almacenaron a -80°C hasta su posterior análisis.

Los niveles de IL-8 de macaco en los líquidos sobrenadantes celulares se evaluaron por ELISA utilizando el kit de ELISA platino para IL-8 de mono eBioscience (San Diego, CA; n.° cat. BMS640/3) siguiendo un protocolo estándar proporcionado por el fabricante. Los datos se representaron gráficamente y los valores de CI⁵⁰ se calcularon utilizando el software GraphPad PRISM™. Los resultados de este ensayo se exponen en la Tabla 8.

Tabla 8

Los resultados de este ejemplo demuestran que los anticuerpos compuestos por combinaciones de HC y LC descritos en el presente documento inhiben la liberación de citoquinas inflamatorias (IL-8) de células mononucleares primarias de sangre periférica de macaco que expresan IL-36R y estimuladas con citoquinas IL-36a, IL-36p e IL-36y de forma dependiente de la dosis.

Ejemplo 8

Este ejemplo demuestra que los polipéptidos de la cadena pesada (HC) y cadena ligera (LC) de inmunoglobulina de la invención descritos en el presente documento pueden formar anticuerpos que compiten de manera cruzada para unirse al IL-36R humano.

La unión de competición cruzada del IL-36R objetivo por anticuerpos que comprenden varios polipéptidos de HC y LC descritos en el presente documento se determinó usando un sistema BIACORE™ T200 (GE Healthcare, Little Chalfont, Buckinghamshire, Reino Unido). En cada ensayo, el anticuerpo primario se capturó sobre la superficie del chip y los sitios de captura no utilizados se bloquearon posteriormente por adición de cantidades de saturación de un anticuerpo de control negativo que no se une al IL-36R humano. A esta etapa le siguió la unión de IL-36R y la posterior adición del anticuerpo secundario para determinar si los anticuerpos competían por el mismo sitio de unión en el antígeno monomérico. Si los anticuerpos se unieran al mismo epítopo, no se observaría unión secundaria; si se utilizan sitios de unión diferentes en el IL-36R, el anticuerpo secundario se uniría al complejo antígeno/anticuerpo primario.

Se inmovilizó anticuerpo anti-IgG humana (específico de Fc; GE Healthcare, Chalfont St. Giles, Reino Unido) en la superficie de un Chip CM5 BIACORE™ en ~8000 RU usando la química de acoplamiento activada por EDC. Los anticuerpos anti-IL-36R que comprenden varias combinaciones de los polipéptidos de HC y LC de la invención descritos en el presente documento (10 pg/ml; tiempo de contacto de 60 s con un caudal de 10 pl/min) se capturaron entonces en la superficie del chip a 25°C produciendo ~500 RU de anticuerpo capturado. La superficie se bloqueó usando un anticuerpo de control negativo de isotipo coincidente no específico contra el objetivo (APE4909 a 100 pg/ml; tiempo de contacto de 60 segundos con un caudal de 10 pl/min). Posteriormente, se pasó IL-36R (a 1 pM) diluido en tampón de análisis (HBS-EP+, pH 7.6; GE Healthcare, Chalfont St. Giles, Reino Unido) sobre la superficie del chip (300 segundos con un caudal de 30 pl/min), y le siguió inmediatamente un anticuerpo secundario. Se examinaron los sensogramas resultantes generados mediante la resonancia de plasmones superficiales (SPR) que vigilan indirectamente los cambios de masa en la superficie del chip para determinar la competición cruzada entre los anticuerpos.

Los resultados de los ensayos de unión competitiva para los anticuerpos anti-IL-36R de la invención se muestran en la Tabla 9 y las Figuras 8A y 8B.

Tabla 9

Los resultados de este ejemplo demuestran que los anticuerpos APE6155 (5D3) y APE3847 (18D4) compiten por unirse al mismo epítopo en IL-36R humano, pero no compiten con el anticuerpo APE5100 por unirse a IL-36R, lo que sugiere que ni APE6155 ni APE3847 comparten un epítopo con APE5100. Los resultados de la competición fueron consistentes e independientes del orden de unión del anticuerpo primario y secundario al antígeno.

Ejemplo 9

Este ejemplo demuestra que los polipéptidos de la cadena pesada (HC) y cadena ligera (LC) de inmunoglobulina de la invención descritos en el presente documento pueden unirse a células que expresan el IL-36R humano y de macaco cangrejero con IL-1 RAcP.

Se examinó la unión de anticuerpos a células CHO-K que coexpresaban de forma estable IL-36R humano e IL-1 RAcP humano. La variación alélica de IL-36R de macaco se examinó mediante secuenciación de Sanger, y se identificaron cuatro variantes alélicas distintas dentro de las poblaciones de macacos cangrejeros. También se examinó la unión de anticuerpos a células CHO-K que coexpresaban establemente la variante 1 de IL-36R de macaco cangrejero e IL-1 RAcP de macaco cangrejero para APE6155 y APE7247. Cada anticuerpo se incubó con células CHO recolectadas usando Accutase, se lavaron y se sembraron 500000 células por pocillo. Las células se incubaron con anticuerpos en concentraciones que oscilaban entre 33 nM y 16 pM durante 30 minutos a 4°C y se lavaron tres veces con tampón de tinción FACS. Las células se centrifugaron y aspiraron, y luego se incubaron con 100 gl de paraformaldehído durante 10 minutos a temperatura ambiente. Las células se lavaron, aspiraron y tiñeron nuevamente con 100 gl de anti-IgG humana Alexa 647 durante 20 minutos a 4°C. Las células se resuspendieron en 100 gl de tampón de análisis FACS antes del análisis en el FACS Array (BD Biosciences).

Los resultados de los ensayos de unión competitiva para los anticuerpos anti-IL-36R de la invención se muestran en las Figuras 9A y 9B. La Figura 9A muestra la unión de los anticuerpos APE06155 y APE07247 a células CHO que expresan de manera estable IL-36R humano e IL-36R humano, y la Figura 9B muestra la unión de los mismos anticuerpos a células CHO que expresan de manera estable la variante 1 de IL-36R e IL-1 RAcP de macaco cangrejero. Los datos se ajustaron utilizando el software Graphpad Prism, con valores de CE50 para APE6155 determinados como 1.5 nM y 2.4 nM para células CHO que expresan IL-36R humano y de macaco respectivamente, y 2.8 nM y 3.3 nM para la unión de Ab APE7247 de respaldo a células CHO que expresan IL-36R humano y de macaco, respectivamente. El anticuerpo de control de isotipo coincidente negativo APE00422 no mostró unión a ninguna línea celular.

Ejemplo 10

Este ejemplo demuestra que los polipéptidos de la cadena pesada (HC) y cadena ligera (LC) de inmunoglobulina de la invención descritos en el presente documento pueden usarse in vivo en macacos cangrejeros con buenas características farmacocinéticas y biodisponibilidad subcutánea. Se administró ANB019 a macacos cangrejeros como una inyección intravenosa (IV) o subcutánea (SC) de dosis única. Se recogieron muestras de sangre de los monos en el estudio de dosis única de 0.5 a 672 horas (4 semanas) después de la administración. Las muestras de suero derivadas se analizaron en AnaptysBio, Inc. (San Diego, CA) utilizando un método interno basado en ELISA. Se realizaron análisis farmacocinéticos de la concentración sérica de ANA020 frente a datos de tiempo por AnaptysBio, Inc.

Los perfiles de concentración sérica frente al tiempo de ANB019 se comportaban normalmente para ambas vías de administración, IV y SC, con niveles que caían rápidamente desde Tmáx hasta el punto de tiempo de 24 horas para la administración IV, seguido de una disminución en línea con el comportamiento esperado de un anticuerpo monoclonal en un primate no humano. Las estimaciones de los parámetros farmacocinéticos a partir de los valores de concentración sérica de ANB019 se obtuvieron de un análisis no compartimental y se dan en la Tabla 10. Las estimaciones de los parámetros eran consistentes con la farmacocinética anticipada para un anticuerpo monoclonal de armazón IgG4 en el mono. La semivida de ANB019 se estimó en ~270 h después de la inyección IV y ~330 h después de la inyección SC. La biodisponibilidad después de la inyección SC era de 60%.

Tabla 10

El uso de los términos "un" y "una" y "el" y "la" y "al menos uno" y referencias similares en el contexto de la descripción de la invención (especialmente en el contexto de las siguientes reivindicaciones) deben interpretarse para cubrir tanto el singular y plural, a menos que se indique lo contrario en este documento o que el contexto lo contradiga claramente. El uso de la expresión "al menos uno" seguido de una lista de uno o más elementos (por ejemplo, "al menos uno de A y B") debe interpretarse que significa un elemento seleccionado de los elementos enumerados (A o B) o cualquier combinación de dos o más de los elementos enumerados (A y B), a menos que se indique lo contrario en el presente documento o que el contexto lo contradiga claramente. Los términos "que comprende", "que tiene", "que incluye" y "que contiene" deben interpretarse como términos abiertos (es decir, que significan "que incluye, pero no se limita a") a menos que se indique lo contrario. La enumeración de los intervalos de valores en el presente documento tiene la intención meramente de servir como un método abreviado para referirse individualmente a cada valor separado que se encuentra dentro del intervalo, a menos que se indique lo contrario en el presente documento, y cada valor separado se incorpora en la memoria descriptiva como si se mencionara individualmente en el presente documento. Todos los

Claims (10)

REIVINDICACIONES

1. Un agente de unión al receptor de interleuquina 36 (IL-36R) que comprende (a) una región variable de la cadena pesada de inmunoglobulina de SEQ ID NO: 22; y (b) una región variable de la cadena ligera de inmunoglobulina de SEQ ID NO: 44.

2. El agente de unión al receptor de interleuquina 36 (IL-36R) de la reivindicación 1, en donde el agente de unión presenta una o más de las siguientes actividades biológicas:

(a) inhibe la interacción entre IL-36R e IL-36a, IL-36p y/o IL-36y,

(b) inhibe la señalización intracelular mediada por IL-36R.

3. El agente de unión al IL-36R de una cualquiera de las reivindicaciones 1 -2, que es un anticuerpo, un conjugado de anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno del mismo.

4. El agente de unión al IL-36R de la reivindicación 3, que es un fragmento F(ab')2, un fragmento Fab', un fragmento Fab, un fragmento Fv, un fragmento scFv, un fragmento dsFv o un polipéptido de unión monocatenario.

5. El agente de unión al IL-36R de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde el agente de unión al IL-36R se une al IL-36R humano con una K^d entre 1 picomolar (pM) y 1 nanomolar (nM).

6. Un ácido nucleico aislado que codifica el polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina y el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina del agente de unión al receptor de interleuquina 36 (IL-36R) de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, opcionalmente en un vector.

7. Una célula aislada que comprende el ácido nucleico o vector de la reivindicación 6, o que comprende vectores separados con secuencias de ácidos nucleicos que codifican el polipéptido de la cadena pesada de inmunoglobulina y el polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina, respectivamente, del agente de unión al IL-36R de cualquiera de las reivindicaciones 1-5.

8. Una composición que comprende (a) el agente de unión al IL-36R de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5 o un ácido nucleico que lo codifica, y (b) un vehículo farmacéuticamente aceptable.

9. La composición de la reivindicación 8 para uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria, una enfermedad autoinmunitaria, una enfermedad respiratoria, un trastorno metabólico, un trastorno inflamatorio mediado por el epitelio, fibrosis o cáncer en un mamífero.

10. La composición para su uso según la reivindicación 9, en donde el trastorno es psoriasis vulgar, psoriasis pustulosa, psoriasis pustulosa generalizada (GPP), pustulosis palmoplantar (PPP), dermatitis atópica, artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa.