JP2023040236A - インターロイキン３６受容体（ｉｌ－３６ｒ）に対する抗体 - Google Patents

Abstract

【課題】がん、感染性疾患、又は自己免疫疾患等のインターロイキン３６受容体（ＩＬ－３６Ｒ）の阻害に反応する障害又は疾患を治療するための、ＩＬ－３６Ｒによってコードされるタンパク質に結合する、単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを提供する。【解決手段】特定のアミノ酸配列を含む、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド及び免疫グロブリン重鎖ポリペプチド、前記免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む、ＩＬ－３６Ｒ結合剤を提供する。本発明はまた、関連するベクター、組成物、及び例えばがん、感染性疾患、又は自己免疫疾患等のＩＬ－３６Ｒの阻害に反応する障害又は疾患を治療するためにＩＬ－３６Ｒ結合剤を使用する方法も提供する。【選択図】図１Ａ

Description

電子提出された物件の参照による組み込み
本明細書と同時提出され以下のとおり特定される、コンピューターで読み取り可能なヌクレオチド／アミノ酸配列表は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：70,258バイトのASCII（テキスト）ファイル1件、名称「723558_ST25.txt」、2016年4月13日作成。

発明の背景
インターロイキン36（IL-36）サイトカインであるIL-36α、IL-36β、及びIL-36γ（以前はIL-1F6、IL-1F8、及びIL-1F9）は、IL-36受容体（IL-36R）（以前はIL-1Rrp2又はIL-1RL2）に結合し、IL-1受容体アクセサリータンパク質（IL-1RAcP）を共受容体として使用して、IL-1によって誘導されるシグナルと同様の細胞内シグナルを刺激する、インターロイキン1（IL-1）ファミリーのメンバーである（Towne et al., J. Biol. Chem., 279(14): 13677-13688 (2004)）。IL-1F5は、IL-36Rのアンタゴニストとして作用することが示されているIL-1ファミリーのメンバーであり、現在はIL-36Raと呼ばれている（Dinarello et al., Nat. Immunol., 11(11): 973 (2010)）。

IL-36α、IL-36β、及びIL-36γは、病原体に曝されてきた内部の上皮組織を含むいくつ
かの組織、及び皮膚において、高発現している。IL-36Ra及びIL-36αの発現は、IL-1β/TNF-α刺激ヒトケラチノサイトにおいて有意に上方制御され、IL-36Rα及びIL-36γ mRNA
は、乾癬の皮膚病変において過剰発現している。上昇したIL-36α mRNA及びタンパク質発現はまた、慢性腎臓病においても観察されてきた（Ichii et al., Lab Invest., 90(3): 459-475 (2010)）。マウス骨髄由来樹状細胞（BMDC）及びCD4+ Tリンパ球の両方が、IL-36Rを構成的に発現し、他のIL-1サイトカインよりも強力な刺激効果を誘導する炎症性サイトカイン（例えば、IL-12、IL-1β、 IL-6、TNF-α、及びIL-23）を産生することによっ
てIL-36α、IL-36β、及びIL-36γと直接反応する（Vigne et al., Blood, 118(22): 5813-5823 (2011)）。

ケラチノサイトにおいてIL-36αを過剰発現するトランスジェニックマウスは、出生時に
一過性の炎症性皮膚障害を示し、それによってマウスは、ヒト乾癬に似ている、12-O-テ
トラデカノイルホルボール13アセテート誘導性の皮膚病変に非常にかかりやすくなる（Blumberg et al., J. Exp. Med., 204(11): 2603-2614 (2007);及びBlumberg et al., J. Immunol., 185(7):4354-4362 (2010)）。さらに、IL-36R欠損マウスは、イミキモド誘導性の乾癬様皮膚炎から保護される（Tortola et al., J. Clin. Invest., 122(11): 3965-3976 (2012)）。これらの結果は、一定の皮膚の炎症性障害におけるIL-36の役割を強く示唆する。

IL-36サイトカインはまた、膿疱性乾癬、汎発性膿疱性乾癬（GPP）、及び掌蹠膿疱症（PPP）を含む、一定の重症型の乾癬と関連付けられてきた（例えば、Town, J.E. and Sims, J.E., Curr. Opin. Pharmacol., 12(4): 486-90 (2012);及びNaik, H.B. and Cowen, E.W., Dermatol Clin., 31(3): 405-425 (2013)を参照）。膿疱性乾癬は、赤い皮膚によって囲まれた白い膿疱によって特徴づけられる、珍しい型の乾癬である。汎発性膿疱性乾癬は、重症で、全身型の膿疱性乾癬であり、高リスクの致死率を有し、一方で掌蹠膿疱症は、慢性型の膿疱性乾癬であり、手のひら及び足底に発症する。膿疱性乾癬、GPP、及びPPPのための現在の治療としては、レチノイド経口薬及びステロイド外用薬が挙げられるが、これらの治療は、効果が不十分であり、重篤な副作用を示す。

IL-36Rと高親和性で結合し、IL-36R活性を効率的に中和するIL-36Rアンタゴニスト（例えば、抗体）のニーズがある。本発明は、そのようなIL-36R結合剤を提供する。

発明の簡単な要旨
本発明は、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、Gln Val Gln Xaa1 Xaa2 Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Xaa3 Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Xaa4 Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Xaa5 Asp Xaa6 Ser Ala Xaa7 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Xaa8 Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Xaa9 Cys Thr Arg Ser Phe Tyr Thr Met
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (配列番号56)のアミノ酸配列
を含み、ここで(a)Xaa1は、ロイシン(Leu)又はフェニルアラニン(Phe)であり、(b)Xaa2は、バリン(Val)、メチオニン(Met)、又はロイシン(Leu)であり、(c)Xaa3は、アルギニン(Arg)又はグリシン(Gly)であり、(d)Xaa4は、グリシン(Gly)、セリン(Ser)、又はアラニン(Ala)であり、(e)Xaa5は、アルギニン(Arg)又はアラニン(Ala)であり、(f)Xaa6は、スレオニン(Thr)又はリジン(Lys)であり、(g)Xaa7は、セリン(Ser)又はアスパラギン(Asn)であ
り、(h)Xaa8は、セリン(Ser)又はアラニン(Ala)であり、かつ(i)Xaa9は、チロシン(Tyr)
又はフェニルアラニン(Phe)である、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを提供
する。

本発明は、単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチドであって、Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Xaa1 Met Xaa2 Trp Val Arg Gln Ala Pro Xaa3 Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Met Phe Xaa4 Pro Xaa5 Xaa6 Xaa7 Val Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Thr Ser Met Ile Ile Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser (配列番号15)
のアミノ酸配列を含み、ここで(a)Xaa1は、トリプトファン(Trp)又はチロシン(Tyr)であ
り、(b)Xaa2は、ヒスチジン(His)、アスパラギン(Asn)、又はチロシン(Tyr)であり、(c)Xaa3は、グリシン(Gly)又はアルギニン(Arg)であり、(d)Xaa4は、アスパラギン酸(Asp)、
グルタミン酸(Glu)、又はヒスチジン(His)であり、(e)Xaa5は、セリン(Ser)、スレオニン(Thr)、又はチロシン(Tyr)であり、(f)Xaa6は、アスパラギン(Asn)又はグリシン(Gly)で
あり、かつ(g)Xaa7は、セリン(Ser)、アラニン(Ala)、又はアスパラギン酸(Asp)である、単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチドを提供する。

本発明は、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、Xaa1 Xaa2 Gln Xaa3 Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Xaa4 Xaa5 Tyr Ser Ile Thr Xaa6 Asp Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Xaa7 Pro Gly Xaa8 Xaa9 Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Xaa10 Xaa11 Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys
Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Xaa12 Tyr Xaa13 Cys Ala Ile Arg Gly Pro
Tyr Ser Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Xaa14 (配列番号57)のアミノ酸配列を含み、ここで、Xaa1は、グルタミン(Gln)又はアスパラギン酸(Asp)
であり；Xaa2は、バリン(Val)又はロイシン(Leu)であり；Xaa3は、ロイシン(Leu)又はフ
ェニルアラニン(Phe)であり；Xaa4は、スレオニン(Thr)又はセリン(Ser)であり；Xaa5は
、グリシン(Gly)又はアルギニン(Arg)であり；Xaa6は、セリン(Ser)又はアラニン(Ala)であり；Xaa7は、プロリン(Pro)又はフェニルアラニン(Phe)であり；Xaa8は、リジン(Lys)
又はアスパラギン(Asn)であり；Xaa9は、グリシン(Gly)又はリジン(Lys)であり；Xaa10は
、セリン(Ser)又はスレオニン(Thr)であり；Xaa11は、バリン(Val)又はアルギニン(Arg)
であり；Xaa12は、スレオニン(Thr)又はバリン(Val)であり；Xaa13は、チロシン(Tyr)又
はフェニルアラニン(Phe)であり；かつXaa14は、アラニン(Ala)であるか又は存在しない
、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを提供する。

本発明は、配列番号33、配列番号34、又は配列番号35のアミノ酸配列を含む、単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチドを提供する。

本発明は、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Xaa1 Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Xaa2 Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Xaa3 Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu
Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly
Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys (配列番号36)のアミノ酸配列を含み、ここで(a)Xaa1は、グリシン(Gly)又はアラニン(Ala)であり、(b)Xaa2は、フェニルアラニン(Phe)又はチロシン(Tyr)であり、かつ(c)Xaa3は、チロシン(Tyr)又はセリン(Ser)である、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを提供する。

本発明は、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Xaa1 Asn Xaa2 Ile Thr Tyr Phe Tyr Trp Tyr Leu Xaa3 Lys Pro Gly Gln Pro Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys (配列番号40)のアミノ酸配列を含み、ここで(a)Xaa1は、セリン(Ser)又はアルギニン(Arg)であり、(b)Xaa2は、グリシン(Gly)又はアラニン(Ala)であり、かつ(c)Xaa3は、グルタミン(Gln)又はヒスチジン(His)である、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを提供する。

本発明は、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Xaa1 Ile Asn Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Xaa2 Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Xaa3 Ser Gly Ser Gly Xaa4 Asp Xaa5 Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
Glu Ile Lys Xaa6 Xaa7 (配列番号58)のアミノ酸配列を含み、ここで(a)Xaa1は、アスパラギン酸(Asp)又はトリプトファン(Trp)であり、(b)Xaa2は、アルギニン(Arg)又はメチオニン(Met)であり、(c)Xaa3は、グリシン(Gly)、セリン(Ser)又はプロリン(Pro)であり、(d)Xaa4は、スレオニン(Thr)又はアスパラギン(Asn)であり、(e)Xaa5は、フェニルアラニ
ン(Phe)又はチロシン(Tyr)であり、(f)Xaa6は、アルギニン(Arg)であるか又は存在せず、かつ(g)Xaa7は、スレオニン(Thr)であるか又は存在しない、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを提供する。

本発明は、配列番号48、配列番号49、又は配列番号50のアミノ酸配列を含む、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを提供する。

さらに、本発明は、前記免疫グロブリンポリペプチドをコードする単離又は精製された核酸配列、かかる核酸配列を含むベクター、前記免疫グロブリンポリペプチドを含むIL-36R結合剤、かかるIL-36R結合剤をコードする核酸配列、かかる核酸配列を含むベクター、か
かるベクターを含む単離された細胞、かかるIL-36R結合剤又はかかるベクターを医薬上許容される担体とともに含む組成物、及びかかる組成物の有効量を哺乳動物に投与することによる、IL-36Rの阻害に反応する障害を治療する方法、を提供する。

図面の各図の簡単な説明
図1Aは、hIL-36γでの細胞の刺激にあたり、実施例1に記載されるHEKヒトIL-36R/IL-8ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。 図1Bは、hIL-36βでの細胞の刺激にあたり、実施例1に記載されるHEKヒトIL-36R/IL-8ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。 図1Cは、hIL-36αでの細胞の刺激にあたり、実施例1に記載されるHEKヒトIL-36R/IL-8ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。 図1Dは、50 ng/mLのhIL-36αでの細胞の刺激にあたり、実施例1に記載されるHEKヒトIL-36R/IL-8ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。 図1Eは、20 ng/mLのhIL-36βでの細胞の刺激にあたり、実施例1に記載されるHEKヒトIL-36R/IL-8ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。 図1Fは、600 ng/mLのhIL-36γでの細胞の刺激にあたり、実施例1に記載されるHEKヒトIL-36R/IL-8ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。 図2Aは、2 μg/mLのcynoIL-36αでの細胞の刺激にあたり、実施例1に記載されるHEKカニクイザルIL-36R/IL-8ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。 図2Bは、10 μg/mLのcynoIL-36βでの細胞の刺激にあたり、実施例1に記載されるHEKカニクイザルIL-36R/IL-8ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。 図2Cは、300 ng/mLのcynoIL-36γでの細胞の刺激にあたり、実施例1に記載されるHEKカニクイザルIL-36R/IL-8ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。 図3Aは、実施例2に記載されるKINEXA^TMアッセイによって決定されるように、ヒトIL-36RへのAPE5281と名付けられた抗体の結合についての曲線を説明する実験データを示すグラフである。 図3Bは、実施例2に記載されるBIACORE^TMアッセイによって決定されるように、ヒトIL-36RへのAPE6194と名付けられた抗体の結合についての曲線を説明する実験データを示すグラフである。 図3Cは、実施例2に記載されるKINEXA^TMアッセイによって決定されるように、ヒトIL-36RへのAPE7247と名付けられた抗体の結合についての曲線を説明する実験データを示すグラフである。 図4Aは、10 ng/mLのhIL-36αを使用した実施例3に記載される初代ヒトケラチノサイトにおけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図4Bは、1 ng/mLのhIL-36βを使用した実施例3に記載される初代ヒトケラチノサイトにおけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図4Cは、100 ng/mLのhIL-36γを使用した実施例3に記載される初代ヒトケラチノサイトにおけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図4Dは、10 ng/mLのhIL-36αを使用した実施例3に記載される初代ヒトケラチノサイトにおけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図4Eは、1 ng/mLのhIL-36βを使用した実施例3に記載される初代ヒトケラチノサイトにおけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図4Fは、100 ng/mLのhIL-36γを使用した実施例3に記載される初代ヒトケラチノサイトにおけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図4Gは、10 ng/mLのhIL-36αを使用した実施例3に記載される初代ヒトケラチノサイトにおけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図4Hは、1 ng/mLのhIL-36βを使用した実施例3に記載される初代ヒトケラチノサイトにおけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図4Iは、100 ng/mLのhIL-36γを使用した実施例3に記載される初代ヒトケラチノサイトにおけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図5Aは、50 ng/mLのcynoIL-36αを使用した実施例4に記載される初代カニクイザルケラチノサイトにおけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図5Bは、10 ng/mLのcynoIL-36βを使用した実施例4に記載される初代カニクイザルケラチノサイトにおけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図5Cは、250 ng/mLのcynoIL-36γを使用した実施例4に記載される初代カニクイザルケラチノサイトにおけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図5Dは、50 ng/mLのcynoIL-36αを使用した実施例4に記載される初代カニクイザルケラチノサイトにおけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図5Eは、10 ng/mLのcynoIL-36βを使用した実施例4に記載される初代カニクイザルケラチノサイトにおけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図5Fは、250 ng/mLのcynoIL-36γを使用した実施例4に記載される初代カニクイザルケラチノサイトにおけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図6Aは、5 ng/mLのIL-36βを使用した実施例5に記載される初代ヒト単球におけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図6Bは、500 ng/mLのIL-36βを使用した実施例5に記載される初代ヒト単球におけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図7Aは、10 ng/mLのIL-36αを使用した実施例6に記載される初代ヒト末梢血単核細胞（PBMC）におけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図7Bは、1 ng/mLのIL-36βを使用した実施例6に記載される初代ヒト末梢血単核細胞（PBMC）におけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図7Cは、100 ng/mLのIL-36γを使用した実施例6に記載される初代ヒト末梢血単核細胞（PBMC）におけるIL-8分泌アッセイの結果を示すグラフである。 図8Aは、一次抗体としてAPE5100を使用するBIACORE^TMアッセイによって決定されるように、実施例8に記載される抗体／抗原交差競合的（cross-competition）結合アッセイの結果を示すグラフである。 図8Bは、一次抗体としてAPE6155を使用するBIACORE^TMアッセイによって決定されるように、実施例8に記載される抗体／抗原競合的結合アッセイの結果を示すグラフである。 図9Aは、ヒトIL-36RとヒトIL-1RAcPとを安定的に同時発現するCHO-K細胞を使用した実施例9に記載される競合的結合アッセイの結果を示すグラフである。 図9Bは、カニクイザルIL-36Rバリアント1とカニクイザルIL-1RAcPとを安定的に同時発現するCHO-K細胞を使用した実施例9に記載される競合的結合アッセイの結果を示すグラフである。 図10Aは、20 ng/mLのcynoIL-36γで刺激したHEKカニクイザルIL-36Rバリアント2／IL-8細胞を使用した実施例1に記載されるルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。 図10Bは、300 ng/mLのcynoIL-36γで刺激したHEKカニクイザルIL-36Rバリアント1／IL-8細胞を使用した実施例1に記載されるルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。 図10Cは、100 ng/mLのcynoIL-36γで刺激したHEKカニクイザルIL-36Rバリアント3／IL-8細胞を使用した実施例1に記載されるルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。 図10Dは、300 ng/mLのcynoIL-36γで刺激したHEKカニクイザルIL-36Rバリアント2／IL-8細胞を使用した実施例1に記載されるルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。 図10Eは、300 ng/mLのcynoIL-36γで刺激したHEKカニクイザルIL-36Rバリアント3／IL-8細胞を使用した実施例1に記載されるルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。 図10Fは、300 ng/mLのcynoIL-36γで刺激したHEKカニクイザルIL-36Rバリアント4／IL-8細胞を使用した実施例1に記載されるルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。

発明の詳細な説明
本発明は、単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／若しくは単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド、又はそのフラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を提供する。本明細書で使用する場合、用語「免疫グロブリン」又は「抗体」とは、脊椎動物の血液又は他の体液中で見られるタンパク質をいい、細菌及びウイルスなどの異物を特定し中和するために免疫系によって使用される。ポリペプチドは、その天然環境から取り出されるという点で「単離される」。好ましい実施態様において、免疫グロブリン又は抗体は、少なくとも1つの相補性決定領域（CDR）を含むタンパク質である。CDRは、抗体
の「超可変領域」を形成し、これは抗原結合に関与する（以下にさらに記載する）。免疫グロブリン全体は、典型的には、4つのポリペプチドからなる：重（H）鎖ポリペプチドの2つの同一コピー及び軽（L）鎖ポリペプチドの2つの同一コピー。重鎖の各々は、1つのN
末端可変（V_H）領域及び3つのC末端定常（C_H1、C_H2及びC_H3）領域を含み、各軽鎖は、1つのN末端可変（V_L）領域及び1つのC末端定常（C_L）領域を含む。抗体の軽鎖は、それらの
定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、2つの別個のタイプのうちの1つ（カッパ（κ）又はラムダ（λ）のいずれか）に割り当てられ得る。典型的な免疫グロブリンにおいて、各軽鎖は、ジスルフィド結合により重鎖と連結され、2つの重鎖は、ジスルフィド結合に
より互いに連結される。軽鎖可変領域は、重鎖の可変領域と整列し、軽鎖定常領域は、重鎖の第1の定常領域と整列する。重鎖の残りの定常領域は、互いに整列する。

軽鎖及び重鎖の各ペアの可変領域は、抗体の抗原結合部位を形成する。V_H及びV_L領域は、同じ全体的構造を有し、各領域は、4つのフレームワーク（FW又はFR）領域を含む。本明
細書で使用する場合、用語「フレームワーク領域」とは、超可変又は相補性決定領域（CDR）間に位置する、可変領域内の比較的保存されたアミノ酸配列をいう。各可変ドメイン
には4つのフレームワーク領域が存在し、これらはFR1、FR2、FR3及びFR4と表される。フ
レームワーク領域は、可変領域の構造的フレームワークを提供するβシートを形成する（例えば、C.A. Janeway et al.（eds.）, Immunobiology, 5th Ed., Garland Publishing,
New York, NY（2001）を参照）。

フレームワーク領域は、3つの相補性決定領域（CDR）によりつながれている。上述のように、3つのCDR（CDR1、CDR2及びCDR3として知られる）は、抗体の「超可変領域」を形成し、これは抗原結合に関与する。CDRは、フレームワーク領域により形成されるβシート構
造をつなぐ（場合によってはその一部を含む）ループを形成する。軽鎖及び重鎖の定常領域は、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、定常領域は、可変領域の配置に影響を及ぼし得る。定常領域はまた、様々なエフェクター機能（例えば、エフェクター分子及び細胞との相互作用を介した、抗体依存性の補体媒介性溶解（complement-mediated lysis）
又は抗体依存性の細胞傷害（cellular toxicity）への関与など）も呈する。

本発明の、単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは望ましくは、以前はIL-1Rrp2として知られていたインターロイキン36受容体（IL-36R)に結合する。IL-36Rは、IL-1Rファミリーの受容体であり、IL-36αリガン
ド（以前はIL-1F6)、IL-36βリガンド（以前はIL-1F8)、及びIL-36γリガンド（以前はIL-1F9)に結合する（例えば、Vigne et al., Blood, 118(22): 5813-5823 (2011)を参照)。IL-36α、IL-36β、及びIL-36γは、サイトカインのIL-1ファミリーのメンバーであり、I
L-36Rに結合し、IL-1受容体アクセサリータンパク質（IL-1RAcP）を共受容体として使用
して、IL-1によって誘導されるシグナルと同様の細胞内シグナルを刺激する（Towne et al., J. Biol. Chem., 279(14): 13677-13688 (2004))。IL-36サイトカイン及びIL-36Rは
、ケラチノサイト及び他の上皮細胞型並びに樹状細胞及びナイーブCD4+ T細胞によって高発現される（Towne et al., supra; Vigne et al., Blood, 118(22): 5813-5823 (2011);及びVigne et al., Blood, 120(17): 3478-3487 (2012))。

本発明の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び本発明の単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、IL-36Rと別の抗原とに結合する剤を形成し得、その結果、「二重反応性（dual reactive）」の結合剤（例えば、二重反応性の抗体）がもたらされ得る
。

IL-36Rに結合する一定の他の抗体、及びその構成成分が当分野において公知である（例えば、米国特許出願公報第2013/0236471号参照）。抗IL-36R抗体はまた、例えば、Abcam（Cambridge, MA)、及びR&D Systems, Inc. （Minneapolis, MN)等の供給源から市販されて
いる。

本発明は、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、Gln Val Gln Xaa1 Xaa2 Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Xaa3 Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Xaa4 Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Xaa5 Asp Xaa6 Ser Ala Xaa7 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Xaa8 Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Xaa9 Cys Thr Arg Ser Phe Tyr Thr Met
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (配列番号56)のアミノ酸配列
を含むか、該アミノ酸配列からなるか、又は本質的に該アミノ酸配列からなり、ここで(a)Xaa1は、ロイシン(Leu)又はフェニルアラニン(Phe)であり、(b)Xaa2は、バリン(Val)、
メチオニン(Met)、又はロイシン(Leu)であり、(c)Xaa3は、アルギニン(Arg)又はグリシン(Gly)であり、(d)Xaa4は、グリシン(Gly)、セリン(Ser)、又はアラニン(Ala)であり、(e)Xaa5は、アルギニン(Arg)又はアラニン(Ala)であり、(f)Xaa6は、スレオニン(Thr)又はリジン(Lys)であり、(g)Xaa7は、セリン(Ser)又はアスパラギン(Asn)であり、(h)Xaa8は、
セリン(Ser)又はアラニン(Ala)であり、かつ(i)Xaa9は、チロシン(Tyr)又はフェニルアラニン(Phe)である、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを提供する。いくつかの
実施態様において、単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、Gln Val Gln Xaa1 Xaa2 Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Xaa3
Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Xaa4 Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Xaa5 Asp Xaa6 Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Xaa7 Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Xaa8 Cys Thr Arg Ser Phe Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (配列番号1)のアミノ酸配列
を含むか、該アミノ酸配列からなるか、又は本質的に該アミノ酸配列からなり、ここで(a)Xaa1は、ロイシン(Leu)又はフェニルアラニン(Phe)であり、(b)Xaa2は、バリン(Val)、
メチオニン(Met)、又はロイシン(Leu)であり、(c)Xaa3は、アルギニン(Arg)又はグリシン(Gly)であり、(d)Xaa4は、グリシン(Gly)、セリン(Ser)、又はアラニン(Ala)であり、(e)Xaa5は、アルギニン(Arg)又はアラニン(Ala)であり、(f)Xaa6は、スレオニン(Thr)又はリジン(Lys)であり、(g)Xaa7は、セリン(Ser)又はアラニン(Ala)であり、かつ(h)Xaa8は、
チロシン(Tyr)又はフェニルアラニン(Phe)である。

本発明の重鎖ポリペプチドは、配列番号56又は配列番号1のアミノ酸配列を含むか、該ア
ミノ酸配列からなるか、又は本質的に該アミノ酸配列からなり得、前記のアミノ酸置換のいずれか1つを任意の適切な組み合わせで有し得る。一実施態様において、免疫グロブリ
ン重鎖ポリペプチドは、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配
列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、
及び配列番号14のいずれか1つのアミノ酸配列を含むか、該アミノ酸配列からなるか、又
は本質的に該アミノ酸配列からなる。

本発明はまた、単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチドであって、Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Xaa1 Met Xaa2 Trp Val Arg Gln Ala Pro Xaa3 Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Met Phe Xaa4 Pro Xaa5 Xaa6 Xaa7 Val Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Thr Ser Met Ile Ile Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser (配列番号15)のアミノ酸配列を含むか、該アミノ酸配列からなるか、又は本質的に該アミノ酸配列
からなり、ここで(a)Xaa1は、トリプトファン(Trp)又はチロシン(Tyr)であり、(b)Xaa2は、ヒスチジン(His)、アスパラギン(Asn)、又はチロシン(Tyr)であり、(c)Xaa3は、グリシン(Gly)又はアルギニン(Arg)であり、(d)Xaa4は、アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸(Glu)、又はヒスチジン(His)であり、(e)Xaa5は、セリン(Ser)、スレオニン(Thr)、又はチ
ロシン(Tyr)であり、(f)Xaa6は、アスパラギン(Asn)又はグリシン(Gly)であり、かつ(g)Xaa7は、セリン(Ser)、アラニン(Ala)、又はアスパラギン酸(Asp)である、単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチドを提供する。

本発明の重鎖ポリペプチドは、配列番号15のアミノ酸配列を含むか、該アミノ酸配列からなるか、又は本質的に該アミノ酸配列からなり得、前記のアミノ酸置換の1つを任意の適
切な組み合わせで有し得る。一実施態様において、免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、配列番号23、又は配列番号24のいずれか1つのアミノ酸配列を含むか、該アミノ酸配
列からなるか、又は本質的に該アミノ酸配列からなる。

本発明はまた、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、Xaa1 Xaa2 Gln Xaa3 Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Xaa4 Xaa5 Tyr Ser Ile Thr Xaa6 Asp Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Xaa7 Pro Gly Xaa8 Xaa9 Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Pro
Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Xaa10 Xaa11 Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Xaa12 Tyr Xaa13 Cys Ala Ile Arg Gly
Pro Tyr Ser Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Xaa14 (配列番号57)のアミノ酸配列を含むか、該アミノ酸配列からなるか、又は本質的に該アミノ酸
配列からなり、ここでXaa1は、グルタミン(Gln)又はアスパラギン酸(Asp)であり；Xaa2は、バリン(Val)又はロイシン(Leu)であり；Xaa3は、ロイシン(Leu)又はフェニルアラニン(Phe)であり；Xaa4は、スレオニン(Thr)又はセリン(Ser)であり；Xaa5は、グリシン(Gly)
又はアルギニン(Arg)であり；Xaa6は、セリン(Ser)又はアラニン(Ala)であり；Xaa7は、
プロリン(Pro)又はフェニルアラニン(Phe)であり；Xaa8は、リジン(Lys)又はアスパラギ
ン(Asn)であり；Xaa9は、グリシン(Gly)又はリジン(Lys)であり；Xaa10は、セリン(Ser)
又はスレオニン(Thr)であり；Xaa11は、バリン(Val)又はアルギニン(Arg)であり；Xaa12
は、スレオニン(Thr)又はバリン(Val)であり；Xaa13は、チロシン(Tyr)又はフェニルアラニン(Phe)であり；かつXaa14は、アラニン(Ala)であるか又は存在しない、単離された免
疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを提供する。いくつかの実施態様において、単離された重鎖免疫グロブリンポリペプチドは、Xaa1 Val Gln Xaa2 Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Xaa3 Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Xaa4 Pro Gly Xaa5 Xaa6 Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Xa
a7 Xaa8 Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Xaa9 Cys Ala Ile Arg Gly Pro Tyr Ser Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser (配列番号25)のアミノ酸配列を含むか、該アミノ酸配列
からなるか、又は本質的に該アミノ酸配列からなり、ここで(a)Xaa1は、グルタミン(Gln)又はアスパラギン酸(Asp)であり、(b)Xaa2は、ロイシン(Leu)又はフェニルアラニン(Phe)であり、(c)Xaa3は、スレオニン(Thr)又はセリン(Ser)であり、(d)Xaa4は、プロリン(Pro)又はフェニルアラニン(Phe)であり、(e)Xaa5は、リジン(Lys)又はアスパラギン(Asn)で
あり、(f)Xaa6は、グリシン(Gly)又はリジン(Lys)であり、(g)Xaa7は、セリン(Ser)又は
スレオニン(Thr)であり、(h)Xaa8は、バリン(Val)又はアルギニン(Arg)であり、かつ(i)Xaa9は、チロシン(Tyr)又はフェニルアラニン(Phe)である。

本発明の重鎖ポリペプチドは、配列番号57又は配列番号25のアミノ酸配列を含むか、該アミノ酸配列からなるか、又は本質的に該アミノ酸配列からなり得、前記のアミノ酸置換の1つ以上を任意の適切な組み合わせで有し得る。一実施態様において、免疫グロブリン重
鎖ポリペプチドは、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29、配列番号30、配列番号31、配列番号32、配列番号51、配列番号52、配列番号53、又は配列番号54のいずれか1つのアミノ酸配列を含むか、該アミノ酸配列からなるか、又は本質的に該アミノ酸配
列からなる。

別の実施態様において、本発明は、配列番号33、配列番号34、又は配列番号35のアミノ酸配列を含むか、該アミノ酸配列からなるか、又は本質的に該アミノ酸配列からなる、単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチドを提供する。

本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチドが、本質的に配列番号1～配列番号35のいずれ
か1つのアミノ酸配列からなる場合、（例えば、IL-36Rに対する本発明の重鎖ポリペプチ
ドの親和性に影響することによって）ポリペプチドに物質的影響を及ぼさない追加の構成要素がポリペプチドに含まれ得る。そのような構成要素の例としては、例えば、精製又は単離を促進するビオチンなどのタンパク質部分、パッセンジャー変異、遊離システインを含む問題部位を有さない配列、追加の糖鎖付加部位、及び脱アミド又は異性化の可能性が高い部位、等が挙げられる。

本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチドが、配列番号1～配列番号35のいずれか1つのアミノ酸配列からなる場合、ポリペプチドは、いずれの追加の構成要素（すなわち、本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチドに対して内因性でない構成要素）も含まない。

本発明は、配列番号1～配列番号35のいずれか1つと少なくとも90％同一である（例えば、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、又は100％同一で
ある）アミノ酸配列を含む、単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチドを提供する。本明細書に記載されるように、核酸又はアミノ酸配列の「同一性」は、目的の核酸又はアミノ酸配列と、参照核酸又はアミノ酸配列とを比較することにより決定され得る。同一性パーセントは、目的の配列と参照配列との間で同じである（すなわち、同一である）ヌクレオチド又はアミノ酸残基の数を、最も長い配列の長さ（すなわち、目的の配列又は参照配列のいずれかの長さであって、いずれか長い方）で除したものである。2以上の配列間で
の最適なアラインメントの取得及び同一性計算のための数多くの数学的アルゴリズムが既知であり、数多くの利用可能なソフトウェアプログラムに組み込まれている。そのようなプログラムの例としては、CLUSTAL-W、T-Coffee及びALIGN（核酸及びアミノ酸配列のアラインメントのため）、BLASTプログラム（例えば、BLAST 2.1、BL2SEQ、及びその後のバージョン）及びFASTAプログラム（例えば、FASTA3x、FASTM及びSSEARCH）（配列アラインメント及び配列類似性検索のため）が挙げられる。配列アラインメントアルゴリズムはまた
、例えば、Altschul et al., J. Molecular Biol., 215(3): 403-410 (1990)、Beigert et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 106(10): 3770-3775 (2009)、Durbin et al., eds., Biological Sequence Analysis: Probabalistic Models of Proteins and Nucleic Acids, Cambridge University Press, Cambridge, UK (2009)、Soding, Bioinformatics, 21(7): 951-960 (2005)、Altschul et al., Nucleic Acids Res., 25(17): 3389-3402 (1997)、及びGusfield, Algorithms on Strings, Trees and Sequences, Cambridge University Press, Cambridge UK (1997)）においても開示されている。

別の実施態様において、本発明は、免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Xaa1 Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Xaa2 Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Xaa3 Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Phe
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys (配列番号36)のアミノ酸配列を含むか
、該アミノ酸配列からなるか、又は本質的に該アミノ酸配列からなり、ここで(a)Xaa1は
、グリシン(Gly)又はアラニン(Ala)であり、(b)Xaa2は、フェニルアラニン(Phe)又はチロシン(Tyr)であり、かつ(c)Xaa3は、チロシン(Tyr)又はセリン(Ser)である、免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを提供する。

本発明の軽鎖ポリペプチドは、配列番号36のアミノ酸配列を含むか、該アミノ酸配列からなるか、又は本質的に該アミノ酸配列からなり得、前記のアミノ酸置換の1つ以上を任意
の適切な組み合わせで有し得る。一実施態様において、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号37、配列番号38、又は配列番号39のいずれか1つのアミノ酸配列
を含むか、該アミノ酸配列からなるか、又は本質的に該アミノ酸配列からなる。

本発明はまた、免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Xaa1 Asn Xaa2 Ile Thr Tyr Phe Tyr Trp Tyr Leu Xaa3 Lys Pro Gly
Gln Pro Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly
Thr Lys Val Glu Ile Lys (配列番号40)のアミノ酸配列を含むか、該アミノ酸配列から
なるか、又は本質的に該アミノ酸配列からなり、ここで(a)Xaa1は、セリン(Ser)又はアルギニン(Arg)であり、(b)Xaa2は、グリシン(Gly)又はアラニン(Ala)であり、かつ(c)Xaa3
は、グルタミン(Gln)又はヒスチジン(His)である、免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを提供する。

本発明の軽鎖ポリペプチドは、配列番号40のアミノ酸配列を含むか、該アミノ酸配列からなるか、又は本質的に該アミノ酸配列からなり得、前記のアミノ酸置換の1つ以上を任意
の適切な組み合わせで有し得る。一実施態様において、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号41、配列番号42、配列番号43、又は配列番号44のいずれか1つの
アミノ酸配列を含むか、該アミノ酸配列からなるか、又は本質的に該アミノ酸配列からなる。

本発明は、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Xaa1 Ile Asn Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Xaa2 Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Xaa3 Ser Gly Ser Gly Xaa4 Asp Xaa5 Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
Glu Ile Lys Xaa6 Xaa7 (配列番号58)のアミノ酸配列を含むか、該アミノ酸配列からな
るか、又は本質的に該アミノ酸配列からなり、ここで(a)Xaa1は、アスパラギン酸(Asp)又はトリプトファン(Trp)であり、(b)Xaa2は、アルギニン(Arg)又はメチオニン(Met)であり、(c)Xaa3は、グリシン(Gly)、セリン(Ser)又はプロリン(Pro)であり、(d)Xaa4は、スレ
オニン(Thr)又はアスパラギン(Asn)であり、(e)Xaa5は、フェニルアラニン(Phe)又はチロシン(Tyr)であり、(f)Xaa6は、アルギニン(Arg)であるか又は存在せず、かつ(g)Xaa7は、スレオニン(Thr)であるか又は存在しない、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド
を提供する。いくつかの実施態様において、免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Xaa1 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Xaa2 Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys (配列番号45)のアミノ酸配列を含むか、該アミノ酸配列からなるか、又は本質的に該アミノ酸配列からなり、ここで(a)Xaa1は、セリン(Ser)又はプロリン(Pro)であり、かつ(b)Xaa2は、フェニルアラニン(Phe)又はチロシン(Tyr)である。

本発明の軽鎖ポリペプチドは、配列番号58又は配列番号45のアミノ酸配列を含むか、該アミノ酸配列からなるか、又は本質的に該アミノ酸配列からなり得、前記のアミノ酸置換の1つ以上を任意の適切な組み合わせで有し得る。一実施態様において、単離された免疫グ
ロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号46、配列番号47、又は配列番号55のいずれか1つ
のアミノ酸配列を含むか、該アミノ酸配列からなるか、又は本質的に該アミノ酸配列からなる。

別の実施態様において、本発明は、配列番号48、配列番号49、又は配列番号50のアミノ酸配列を含むか、該アミノ酸配列からなるか、又は本質的に該アミノ酸配列からなる単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを提供する。

本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドが、本質的に配列番号36～配列番号50のいずれか1つのアミノ酸配列からなる場合、本明細書に記載されるような、ポリペプチドに実質
的に影響を及ぼさない追加の構成要素がポリペプチドに含まれ得る。本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドが、配列番号36～配列番号50のいずれか1つのアミノ酸配列からな
る場合、ポリペプチドは、いずれの追加の構成要素（すなわち、本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドに対して内因性でない構成要素）も含まない。

本発明は、配列番号36～配列番号50のいずれか1つと少なくとも90％同一である（例えば
、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、又は100％同一
である）アミノ酸配列を含む、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを提供する。核酸又はアミノ酸配列の「同一性」は、本明細書に記載される方法を使用して決定され得る。

上記免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は軽鎖ポリペプチドの1つ以上のアミノ酸
は、異なるアミノ酸と置換（replaced）又は置換（substituted）され得る。アミノ酸「
置換（replacement）」又は「置換（substitution）」とは、ポリペプチド配列内の所与
の位置又は残基における1アミノ酸の、同じ位置又は残基における別のアミノ酸による置
換をいう。

アミノ酸は、「芳香族」又は「脂肪族」として大きく分類される。芳香族アミノ酸は、芳
香環を含む。「芳香族」アミノ酸の例としては、ヒスチジン（H又はHis）、フェニルアラニン（F又はPhe）、チロシン（Y又はTyr）及びトリプトファン（W又はTrp）が挙げられる。非芳香族アミノ酸は、「脂肪族」として大きく分類される。「脂肪族」アミノ酸の例としては、グリシン（G又はGly）、アラニン（A又はAla）、バリン（V又はVal）、ロイシン（L又はLeu）、イソロイシン（I又はIle）、メチオニン（M又はMet）、セリン（S又はSer）、スレオニン（T又はThr）、システイン（C又はCys）、プロリン（P又はPro）、グルタミン酸（E又はGlu）、アスパラギン酸（A又はAsp）、アスパラギン（N又はAsn）、グルタミン（Q又はGln）、リジン（K又はLys）及びアルギニン（R又はArg）が挙げられる。

脂肪族アミノ酸は、4つのサブグループに細分され得る。「大きな脂肪族非極性サブグル
ープ」は、バリン、ロイシン及びイソロイシンからなる。「脂肪族微極性サブグループ」は、メチオニン、セリン、スレオニン及びシステインからなる。「脂肪族極性／荷電サブグループ」は、グルタミン酸、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン、リジン及びアルギニンからなる。「小さな残基サブグループ」は、グリシン及びアラニンからなる。荷電／極性アミノ酸のグループは、3つのサブグループに細分され得る：リジン及びアル
ギニンからなる「正荷電サブグループ」、グルタミン酸及びアスパラギン酸からなる「負荷電サブグループ」、並びにアスパラギン及びグルタミンからなる「極性サブグループ」。

芳香族アミノ酸は、2つのサブグループに細分され得る：ヒスチジン及びトリプトファン
からなる「窒素環サブグループ」、並びにフェニルアラニン及びチロシンからなる「フェニルサブグループ」。

アミノ酸の置換（replacement）又は置換（substitution）は、保存的、半保存的又は非
保存的であり得る。フレーズ「保存的アミノ酸置換（substitution）」又は「保存的変異」とは、1つのアミノ酸の、共通の特性を備えた別のアミノ酸による置換をいう。個々の
アミノ酸間の共通の特性を定義する機能的な方法は、相同的な生物の対応するタンパク質間のアミノ酸変化の正規化された頻度を分析することである（Schulz and Schirmer, Principles of Protein Structure, Springer-Verlag, New York（1979））。そのような分
析により、グループ内のアミノ酸が優先的に互いを交換し、それ故、タンパク質の全体構造への影響において互いに最も類似するアミノ酸のグループが定義され得る（Schulz and
Schirmer, 同上）。

保存的アミノ酸置換（substitutions）の例としては、上記サブグループ内でのアミノ酸
の置換、例えば、アルギニンのリジンでの置換及びその逆（正電荷が維持され得るように）、アスパラギン酸のグルタミン酸での置換及びその逆（負電荷が維持され得るように）、スレオニンのセリンでの置換（遊離-OHが維持され得るように）、並びにアスパラギン
のグルタミンでの置換（遊離-NH₂が維持され得るように）、が挙げられる。

「半保存的変異」は、上に列挙した同一グループ内ではあるが、同一サブグループ内ではないアミノ酸のアミノ酸置換を含む。例えば、アスパラギンのアスパラギン酸での置換、又はリジンのアスパラギンでの置換は、同一グループ内ではあるが、サブグループが異なるアミノ酸を伴う。「非保存的変異」は、異なるグループ間のアミノ酸置換、例えば、トリプトファンのリジンでの置換、又はセリンのフェニルアラニンでの置換などを伴う。

さらに、1つ以上のアミノ酸が、前記免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は軽鎖ポ
リペプチドに挿入され得る。任意の数の任意の適切なアミノ酸が、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は軽鎖ポリペプチドのアミノ酸配列に挿入され得る。これに関して、少なくとも1つのアミノ酸（例えば、2以上、5以上、又は10以上のアミノ酸）であるが、20以下のアミノ酸（例えば、18以下、15以下、又は12以下のアミノ酸）が、免疫グロブリ
ン重鎖ポリペプチド及び／又は軽鎖ポリペプチドのアミノ酸配列に挿入され得る。好ましくは、1～10のアミノ酸（例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10のアミノ酸）が、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は軽鎖ポリペプチドのアミノ酸配列に挿入される。これに関して、アミノ酸（複数可）は、任意の適切な場所において、前記免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は軽鎖ポリペプチドのいずれか1つに挿入され得る。好まし
くは、アミノ酸（複数可）は、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は軽鎖ポリペプチドのCDR（例えば、CDR1、CDR2又はCDR3）に挿入される。

本発明の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドは、本明細書に記載の特定のアミノ酸配列を含むポリペプチドに限定されない。実際に、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド又は軽鎖ポリペプチドは、IL-36Rとの結合について、本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド又は軽鎖ポリペプチドと競合する任意の重鎖ポリペプチド又は軽鎖ポリペプチドであり得る。これに関して、例えば、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド又は軽鎖ポリペプチドは、本明細書に記載の重鎖及び軽鎖ポリペプチドにより認識されるIL-36Rエピトープと同じエピトープと結合する任意の重鎖ポリペプチド又は軽鎖ポリペプチドであり得る。抗体競合は、ELISA、ウエスタンブロット又は免疫組織化学方法を利用
するルーチンなペプチド競合アッセイを用いてアッセイされ得る（例えば、米国特許第4,828,981号及び同第8,568,992号；並びにBraitbard et al., Proteome Sci., 4：12（2006）を参照）。

本発明は、本明細書に記載される本発明の単離されたアミノ酸配列の1つ以上を含むか、
本質的に該配列の1つ以上からなるか、又は該配列の1つ以上からなる、IL-36R結合剤を提供する。「IL-36R結合剤」とは、IL-36Rタンパク質と特異的に結合する分子、好ましくはIL-36Rタンパク質と特異的に結合するタンパク性分子を意味する。好ましくは、IL-36R結合剤は、抗体又はそのフラグメント（例えば、抗原結合性フラグメント）である。本発明のIL-36R結合剤は、本発明の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は本発明の単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含むか、本質的に該ポリペプチドからなるか、又は該ポリペプチドからなる。一実施態様において、IL-36R結合剤は、本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド又は本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含むか、本質的に該ポリペプチドからなるか、又は該ポリペプチドからなる。別の実施態様において、IL-36R結合剤は、本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含むか、本質的に該ポリペプチドからなるか、又は該ポリペプチドからなる。

IL-36R結合剤の生物学的活性がアミノ酸の置換、挿入及び／又は欠失の結果として実質的に低下しない（例えば、高められるか又は改善される）限り、本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドの任意のアミノ酸残基は、任意の組み合わせで、異なるアミノ酸残基に置換され得、或いは欠失又は挿入され得る。

IL-36R結合剤の「生物学的活性」とは、例えば、特定のIL-36Rエピトープに対する結合親和性、IL-36Rのその受容体（複数可）との結合の中和又は阻害、in vivoにおけるIL-36R
活性の中和又は阻害（例えば、IC₅₀）、薬物動態、並びに交差反応性（例えば、IL-36Rタンパク質の非ヒトホモログ若しくはオーソログとの、又は他のタンパク質若しくは組織との）をいう。一定の実施態様において、本発明のインターロイキン36受容体（IL-36R）結合剤は望ましくは、以下の1つ以上の生物学的活性を示す：(a)IL-36Rと、IL-36α、IL-36β、及び／又はIL-36γとの間の相互作用を阻害する、(b)IL-36Rによって媒介される細胞内シグナルを阻害する、並びに／あるいは(c）ヒト及び非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）IL-36Rの活性と交差反応しかつ阻害する。当分野で認識される抗原結合剤の他の生物学的特性又は特徴には、例えば、アビディティ、選択性、溶解性、フォールディング、
免疫毒性、発現、及び剤形（formulation）が含まれる。前記の特性又は特徴は、標準的
な技術（ELISA、競合ELISA、表面プラズモン共鳴分析（BIACORE^TM）又はKINEXA^TM、in vitro又はin vivo中和アッセイ、受容体－リガンド結合アッセイ、サイトカイン又は増殖因子の産生及び／又は分泌アッセイ、並びにシグナル伝達及び免疫組織化学アッセイを含むが、これらに限定されない）を用いて、観察、測定及び／又は評価され得る。

用語「阻害する」又は「中和する」とは、IL-36R結合剤の活性に関して本明細書で使用する場合、例えば、IL-36Rの生物学的活性の又はIL-36Rと関連する疾患若しくは状態の進行又は重症度を、実質的に拮抗、防止、予防、制限、遅延、中断、変更、排除、停止、又は逆転させる能力をいう。本発明のIL-36R結合剤は、好ましくは、IL-36Rの活性を少なくとも約20％、約30％、約40％、約50％、約60％、約70％、約80％、約90％、約95％、約100
％、又は前記値のいずれか2つによって規定される範囲に阻害又は中和する。

本発明のIL-36R結合剤は、本明細書に記載されるように、抗体全体（whole antibody）、又は抗体フラグメントであり得る。用語「抗体のフラグメント」、「抗体フラグメント」及び「抗体の機能的フラグメント」は、本明細書において互換的に使用され、抗原と特異的に結合する能力を保持する、抗体の1つ以上のフラグメントを意味する（一般に、Holliger et al., Nat. Biotech., 23（9）：1126-1129（2005）を参照）。IL-36R結合剤は、
任意のIL-36R結合抗体フラグメントを含み得る。抗体フラグメントは、望ましくは、例えば、1つ以上のCDR、可変領域（又はその部分）、定常領域（又はその部分）、又はその組み合わせを含む。抗体フラグメントの例としては、（i）V_L、V_H、C_L及びCH₁ドメインからなる一価のフラグメントであるFabフラグメント、（ii）ヒンジ領域においてジスルフィ
ド架橋によって連結された2つのFabフラグメントを含む二価のフラグメントであるF（ab
’）₂フラグメント、（iii）抗体の単一アームのV_L及びV_HドメインからなるFvフラグメント、（iv）穏和な還元条件を用いたF（ab’）₂フラグメントのジスルフィド架橋の切断（breaking）から生じるFab’フラグメント、（v）ジスルフィド安定化Fvフラグメント（dsFv）、並びに（vi）抗原と特異的に結合する抗体シングル可変領域ドメイン（VH又はVL）ポリペプチドであるドメイン抗体（dAb）が挙げられるが、これらに限定されない。

IL-36R結合剤が免疫グロブリン重鎖又は軽鎖ポリペプチドのフラグメントを含む実施態様において、該フラグメントは、IL-36Rと結合し、好ましくはその活性を阻害する限り、任意のサイズのものであり得る。これに関して、免疫グロブリン重鎖ポリペプチドのフラグメントは、望ましくは、約5から18の間（例えば、約5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、又は前記値のいずれか2つによって規定される範囲）のアミノ酸を含
む。同様に、免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドのフラグメントは、望ましくは、約5から18の間（例えば、約5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、又は前記値のいずれか2つによって規定される範囲）のアミノ酸を含む。

IL-36R結合剤が抗体又は抗体フラグメントである場合、該抗体又は抗体フラグメントは、望ましくは、任意の適切なクラスの重鎖定常領域（F_c）を含む。好ましくは、抗体又は抗体フラグメントは、野生型IgG1、IgG2若しくはIgG4抗体、又はそのバリアントに基づく重鎖定常領域を含む。そうであるから、いくつかの実施態様において、IL-36R結合剤が抗体又は抗体フラグメントである場合、それは、例えば、エフェクター分子及び細胞との相互作用を介した、抗体依存性の補体媒介性溶解（complement-mediated lysis）又は抗体依
存性の細胞傷害（cellular toxicity）への関与（例えば、補体系の活性化等）等の1つ以上のエフェクター機能を呈し得る。

IL-36R結合剤はまた、一本鎖抗体フラグメントであり得る。一本鎖抗体フラグメントの例としては、（i）Fvフラグメントの2つのドメイン（すなわち、V_L及びV_H）が単一のポリペプチド鎖として合成されることを可能にする合成リンカーによって結合された、該2つの
ドメインからなる一価の分子である一本鎖Fv（scFv）（例えば、Bird et al., Science, 242：423-426（1988）；Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85：5879-5883（1988）；及びOsbourn et al., Nat. Biotechnol., 16：778（1998）を参照）、及び（ii
）ダイアボディ（ポリペプチド鎖の二量体であって、各ポリペプチド鎖はペプチドリンカーによりV_Lと結合されたV_Hを含み、該ペプチドリンカーは同一ポリペプチド鎖上のV_HとV_L間で対合させるには短すぎるものであり、それにより、異なるV_H-V_Lポリペプチド鎖上の
相補的なドメイン間での対合が促されて、2つの機能的な抗原結合部位を有する二量体分
子が生じる）が挙げられるが、これらに限定されない。抗体フラグメントは、当分野で既知であり、例えば、米国特許出願公報第2009/0093024 A1号などに、より詳細に記載され
る。

IL-36R結合剤はまた、イントラボディ又はそのフラグメントであり得る。イントラボディは、細胞内で発現し機能する抗体である。イントラボディは、典型的には、ジスルフィド結合を欠き、その特異的な結合活性により標的遺伝子の発現又は活性を調節することができる。イントラボディは、単離されたV_H及びV_Lドメイン並びにscFvsなどのシングルドメ
インのフラグメントを含む。イントラボディは、標的タンパク質が位置する細胞内コンパートメントにおける高濃度での発現を可能にするため、イントラボディのN又はC末端に付加される細胞内輸送シグナルを含み得る。イントラボディは、標的遺伝子と相互作用すると、標的タンパク質の分解促進や非生理学的な細胞内コンパートメントへの標的タンパク質の隔離（sequestering）などのメカニズムによって、標的タンパク質の機能を調節し、且つ／或いは表現型／機能的ノックアウトを達成する。イントラボディ媒介性の遺伝子不活性化の他のメカニズムは、イントラボディが対象とするエピトープに依存し得る（例えば、標的タンパク質上の触媒部位との結合、又はタンパク質-タンパク質、タンパク質-DNA若しくはタンパク質-RNA相互作用に関与するエピトープとの結合など）。

IL-36R結合剤はまた、抗体コンジュゲートであり得る。これに関して、IL-36R結合剤は、（1）抗体、代替スキャフォールド（alternative scaffold）、又はそのフラグメント、
及び（2）IL-36R結合剤を含むタンパク質又は非タンパク質部分、のコンジュゲートであ
り得る。例えば、IL-36R結合剤は、ペプチド、蛍光分子又は化学療法剤とコンジュゲートされた抗体の全部又は一部であり得る。

IL-36R結合剤は、ヒト抗体、非ヒト抗体若しくはキメラ抗体であり得るか、又はそれから得られ得る。「キメラ（chimeric）」抗体は、ヒト及び非ヒト領域の両方を含む抗体又はそのフラグメントである。好ましくは、IL-36R結合剤はヒト化抗体である。「ヒト化」抗体は、ヒト抗体スキャフォールドと、非ヒト抗体から得られるか又はそれに由来する少なくとも1つのCDRとを含むモノクローナル抗体である。非ヒト抗体には、例えば、齧歯類（例えば、マウス又はラット）などの任意の非ヒト動物から単離された抗体が含まれる。ヒト化抗体は、非ヒト抗体から得られるか又はそれに由来する1つ、2つ又は3つのCDRを含み得る。本発明の一実施態様において、本発明のIL-36R結合剤のCDRH3がマウスモノクロー
ナル抗体から得られるか又はそれに由来する一方、本発明のIL-36R結合剤の残りの可変領域及び定常領域はヒトモノクローナル抗体から得られるか又はそれに由来する。

ヒト抗体、非ヒト抗体、キメラ抗体又はヒト化抗体は、in vitroソース（例えば、ハイブリドーマ、又は組換えにより抗体を産生する細胞株）及びin vivoソース（例えば、齧歯
類）を介することを含む、任意の手段によって得られ得る。抗体を作製するための方法は、当分野で既知であり、例えば、Kohler and Milstein, Eur. J. Immunol., 5：511-519
（1976）；Harlow and Lane（eds.）, Antibodies：A Laboratory Manual, CSH Press（1988）；及びJaneway et al.（eds.）, Immunobiology, 5th Ed., Garland Publishing, New York, NY（2001））に記載される。一定の実施態様において、ヒト抗体又はキメラ抗
体は、1つ以上の内因性免疫グロブリン遺伝子が1つ以上のヒト免疫グロブリン遺伝子に置
き換えられているトランスジェニック動物（例えば、マウス）を使用して作製され得る。内因性抗体遺伝子がヒト抗体遺伝子に効果的に置き換えられているトランスジェニックマウスの例としては、Medarex HUMAB-MOUSE^TM、Kirin TC MOUSE^TM、及びKyowa Kirin KM-MOUSE^TM（例えば、Lonberg, Nat. Biotechnol., 23（9）：1117-25（2005）、及びLonberg,
Handb. Exp. Pharmacol., 181：69-97（2008）を参照）が挙げられるが、これらに限定
されない。ヒト化抗体は、例えば、非ヒトCDRをヒト抗体スキャフォールド上にグラフト
すること（例えば、Kashmiri et al., Methods, 36（1）：25-34（2005）；及びHou et al., J. Biochem., 144（1）：115-120（2008）を参照）などを含む、当分野で既知の任意の適切な方法を用いて作製され得る（例えば、An, Z.（ed.）, Therapeutic Monoclonal Antibodies： From Bench to Clinic, John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, New Jersey
（2009）を参照）。一実施態様において、ヒト化抗体は、例えば米国特許出願公報第2011/0287485 A1号などに記載の方法を用いて作製され得る。

一実施態様において、本明細書に記載の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドのCDR（例えば、CDR1、CDR2又はCDR3）又は可変領域は、タ
ンパク質化学又は組換えDNA技術のいずれかを用いて、抗体又は非抗体ポリペプチドなど
の別の分子へと移植（すなわち、グラフト化）され得る。これに関して、本発明は、本明細書に記載されるような免疫グロブリン重鎖及び／又は軽鎖ポリペプチドの少なくとも1
つのCDRを含む、IL-36R結合剤を提供する。IL-36R結合剤は、本明細書に記載されるよう
な免疫グロブリン重鎖及び／又は軽鎖可変領域の、1つ、2つ又は3つのCDRを含み得る。

好ましい実施態様において、IL-36R結合剤はIL-36Rエピトープと結合し、それにより、IL-36Rの任意のリガンド（例えば、IL-36α、IL-36β、及びIL-36γ）へのIL-36Rの結合が
ブロックされて、IL-36R媒介性のシグナル伝達が阻害される。本発明はまた、単離又は精製されたIL-36Rエピトープを提供し、それにより、IL-36Rに任意のリガンドへのIL-36Rの結合が間接的又はアロステリックな様式でブロックされる。

本発明はまた、本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド、本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド及び本発明のIL-36R結合剤をコードする、1つ以上の単離又は精製された核
酸配列を提供する。

用語「核酸配列」は、DNA又はRNAのポリマー、すなわちポリヌクレオチドを包含するよう意図されており、一本鎖又は二本鎖であり得、非天然の又は改変されたヌクレオチドを含み得る。本明細書で使用する場合、用語「核酸」及び「ポリヌクレオチド」とは、リボヌクレオチド（RNA）又はデオキシリボヌクレオチド（DNA）のいずれかである、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態をいう。これらの用語は、分子の一次構造をいい、従って、二本鎖及び一本鎖DNA、並びに二本鎖及び一本鎖RNAを含む。当該用語は、等価物として、ヌクレオチドアナログ及び改変ポリヌクレオチド（例えば、メチル化及び／又はキャッピングされたポリヌクレオチドなどであるが、これらに限定されない）から作製されるRNA又はDNAいずれかのアナログを含む。核酸は、典型的には、ホスフェート結合を介して連結されて核酸配列又はポリヌクレオチドを形成するが、他にも多くの結合（linkages）が当分野で既知である（例えば、ホスホロチオエート、ボラノホスフェートなど）。

本発明はさらに、本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド、本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド及び／又は本発明のIL-36R結合剤、をコードする1つ以上の核酸配列を含
むベクターを提供する。ベクターは、例えば、プラスミド、エピソーム、コスミド、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルス又はアデノウイルス）又はファージであり得る。適切なベクター及びベクター調製の方法は、当分野で周知である（例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning, a Laboratory Manual, 3rd edition, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y.（2001）、及びAusubel et al., Current Protocols in M
olecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, New York, N.Y.（1994）を参照）。

本発明の免疫グロブリン重ポリペプチド、本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド及び／又は本発明のIL-36R結合剤、をコードする核酸配列に加えて、ベクターは、好ましくは、プロモーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル、転写ターミネーター、シグナルぺプチド（例えば、オステオネクチンシグナルペプチド等）、内部リボソーム侵入部位（internal ribosome entry sites、IRES）などの、宿主細胞におけるコード配列の発現
を提供する発現調節配列を含む。例示的な発現調節配列は当分野で既知であり、例えば、Goeddel, Gene Expression Technology：Methods in Enzymology, Vol. 185, Academic Press, San Diego, Calif.（1990）に記載される。

様々な異なるソースからの、構成的、誘導性及び抑制性（repressible）プロモーターを
含む多数のプロモーターが当分野で周知である。プロモーターの代表的なソースには、例えば、ウイルス、哺乳動物、昆虫、植物、酵母及び細菌が含まれ、これらソースからの適切なプロモーターは、容易に入手可能であるか、或いは、例えば、ATCCなどの寄託機関及び他の商業的又は個人的ソースなどから一般に入手可能な配列に基づいて合成的に作製され得る。プロモーターは、一方向性（すなわち、一方向で転写を開始させる）又は二方向性（すなわち、3’又は5’のいずれの方向でも転写を開始させる）であり得る。プロモーターの非限定的な例としては、例えば、T7バクテリア発現系、pBAD（araA）バクテリア発現系、サイトメガロウイルス（CMV）プロモーター、SV40プロモーター、RSVプロモーターが挙げられる。誘導性プロモーターには、例えば、Tet系（米国特許第5,464,758号及び同第5,814,618号）、エクジソン誘導性（Ecdysone inducible）系（No et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 93：3346-3351（1996））、T-REX^TM系（Invitrogen, Carlsbad, CA）、LACSWITCH^TM系（Stratagene, San Diego, CA）、及びCre-ERTタモキシフェン誘導性リコン
ビナーゼ系（Indra et al., Nuc. Acid. Res., 27：4324-4327（1999）；Nuc. Acid. Res., 28：e99（2000）；米国特許第7,112,715号；及びKramer & Fussenegger, Methods Mol. Biol., 308：123-144（2005））が含まれる。

本明細書で使用する場合、用語「エンハンサー」とは、例えば、それが作動可能（operably）に連結された核酸配列などの転写を増加させるDNA配列をいう。エンハンサーは、核
酸配列のコーディング領域から何キロベースも離れて位置することができ、制御因子の結合、DNAメチル化パターン、又はDNA構造の変化を仲介し得る。様々な異なるソースからの多数のエンハンサーが当分野で周知であり、クローニングされたポリヌクレオチド（例えば、ATCCなどの寄託機関及び他の商業的又は個人的なソースなどから）として又は該ポリヌクレオチド内にて入手可能である。プロモーター（例えば、一般に使用されるCMVプロ
モーターなど）を含む多くのポリヌクレオチドはまた、エンハンサー配列も含む。エンハンサーは、コード配列の上流、内部又は下流に位置し得る。

ベクターはまた、「選択可能マーカー遺伝子（selectable marker gene）」を含み得る。本明細書で使用する場合、用語「選択可能マーカー遺伝子」とは、核酸配列であって、該核酸配列を発現する細胞が、対応する選択剤の存在下、特異的に選択される又はされないようにすることを可能にするものをいう。適切な選択可能マーカー遺伝子は、当分野で既知であり、例えば、国際特許出願公報WO 1992/008796号及びWO 1994/028143号；Wigler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77：3567-3570（1980）；O'Hare et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78：1527-1531（1981）；Mulligan & Berg, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78：2072-2076（1981）；Colberre-Garapin et al., J. Mol. Biol., 150：1-14（1981）；Santerre et al., Gene, 30：147-156（1984）；Kent et al., Science, 237：901-903（1987）；Wigler et al., Cell, 11：223-232（1977）；Szybalska & Szybalski, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 48：2026-2034（1962）；Lowy et al., Cell, 22：81
7-823（1980）；並びに米国特許第5,122,464号及び同第5,770,359号に記載される。

いくつかの実施態様において、ベクターは、「エピソーマル発現ベクター」又は「エピソーム」であり、宿主細胞において複製可能であり、適切な選択圧の存在下、宿主細胞内においてDNAの染色体外セグメントとして存続する（例えば、Conese et al., Gene Therapy, 11：1735-1742（2004）を参照）。代表的な市販のエピソーマル発現ベクターには、エ
プスタイン・バーウイルス由来核抗原1（Epstein Barr Nuclear Antigen 1、EBNA1）及びエプスタイン・バーウイルス（EBV）複製起点（oriP）を利用するエピソーマルプラスミ
ドが含まれるが、これらに限定されない。Invitrogen（Carlsbad, CA）のベクターpREP4
、pCEP4、pREP7及びpcDNA3.1、並びにStratagene（La Jolla, CA）のpBK-CMVは、EBNA1及びoriPの代わりにT抗原及びSV40複製起点を使用するエピソーマルベクターの非限定的な
例を示す。

他の適切なベクターには組込み（integrating）発現ベクターが含まれ、これは宿主細胞
のDNA中にランダムに組込み得るか、又は発現ベクターと宿主細胞染色体との間の特異的
組換えを可能にする組換え部位を含み得る。かかる組込み発現ベクターは、所望のタンパク質の発現をもたらすために、宿主細胞染色体の内因性発現調節配列を利用し得る。部位特異的な様式で組込むベクターの例としては、例えば、Invitrogen（Carlsbad, CA）のflp-in系（例えば、pcDNA^TM5/FRT）、又はcre-lox系（例えば、Stratagene（La Jolla, CA
）のpExchange-6 Core Vectors中に見出され得るものなど）の構成要素が挙げられる。宿主細胞染色体中にランダムに組込むベクターの例としては、例えば、Life Technologies
（Carlsbad, CA）のpcDNA3.1（T抗原の非存在下で導入される場合）、Millipore（Billerica, MA）のUCOE、及びPromega（Madison, WI）のpCI又はpFN10A（ACT）FLEXI^TMが挙げられる。

ウイルスベクターも使用され得る。代表的な市販のウイルス発現ベクターには、Crucell,
Inc.（Leiden, The Netherlands）から入手可能なアデノウイルスベースのPer.C6系、Invitrogen（Carlsbad, CA）のレンチウイルスベースのpLP1、及びStratagene（La Jolla, CA）のレトロウイルスベクターpFB-ERVプラスpCFB-EGSHが含まれるが、これらに限定されない。

本発明のアミノ酸配列をコードする核酸配列は、同じベクター上で（すなわち、cisで）
細胞に提供され得る。一方向性プロモーターを用いて、各核酸配列の発現を調節することができる。別の実施態様において、二方向性プロモーターと一方向性プロモーターの組み合わせを用いて、複数の核酸配列の発現を調節することができる。或いは、本発明のポリペプチドをコードする核酸配列は、別々のベクター上で（すなわち、transで）細胞の集
団に提供され得る。別々のベクターそれぞれにおける各核酸配列は、同一又は異なる発現調節配列を含み得る。別々のベクターは、同時に又は逐次的に細胞に提供され得る。

本発明のポリペプチドをコードする核酸（複数可）を含むベクター（複数可）は、それによってコードされるポリペプチドを発現することが可能な宿主細胞（任意の適切な原核又は真核細胞を含む）へと導入され得る。従って、本発明は、本発明のベクターを含む単離された細胞を提供する。好ましい宿主細胞は、容易且つ確実に増殖でき、合理的に速い増殖速度を有し、十分特徴付けられた発現系を有し、容易且つ効率的に形質転換又はトランスフェクトされ得るものである。

適切な原核細胞の例としては、Bacillus属（例えば、Bacillus subtilis及びBacillus brevisなど）、Escherichia属（例えば、E. coliなど）、Pseudomonas属、Streptomyces属
、Salmonella属、及びErwinia属由来の細胞が挙げられるが、これらに限定されない。特
に有用な原核細胞には、Escherichia coliの種々の株（例えば、K12、HB101（ATCC No. 3
3694）、DH5α、DH10、MC1061（ATCC No. 53338)及びCC102）が含まれる。

好ましくは、ベクターは、真核細胞へと導入される。適切な真核細胞は、当分野で既知であり、例えば、酵母細胞、昆虫細胞及び哺乳動物細胞が含まれる。適切な酵母細胞の例としては、Kluyveromyces属、Pichia属、Rhino-sporidium属、Saccharomyces属、及びSchizosaccharomyces属由来のものが挙げられる。好ましい酵母細胞には、例えば、Saccharomyces cerivisae及びPichia pastorisが含まれる。

適切な昆虫細胞は、例えば、Kitts et al., Biotechniques, 14：810-817（1993）；Lucklow, Curr. Opin. Biotechnol., 4：564-572（1993）；及びLucklow et al., J. Virol.,
67：4566-4579（1993）に記載される。好ましい昆虫細胞には、Sf-9及びHI5（Invitrogen, Carlsbad, CA）が含まれる。

好ましくは、哺乳動物細胞が本発明において利用される。数多くの適切な哺乳動物宿主細胞が当分野で既知であり、多くがAmerican Type Culture Collection（ATCC, Manassas, VA）から入手可能である。適切な哺乳動物細胞の例としては、チャイニーズハムスター卵巣細胞（CHO）（ATCC No. CCL61）、CHO DHFR細胞（Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97：4216-4220（1980））、ヒト胚性腎臓（HEK）293又は293T細胞（ATCC No. CRL1573）、及び3T3細胞（ATCC No. CCL92）が挙げられるが、これらに限定されない。他の適切な哺乳動物細胞株（cell lines）は、サルCOS-1細胞株（ATCC No. CRL1650）及びCOS-7細胞株（ATCC No. CRL1651）、並びにCV-1細胞株（ATCC No. CCL70）である。更なる例示的な哺乳動物宿主細胞には、霊長類細胞株及び齧歯類細胞株（形質転換された細胞株を含む）が含まれる。正常な二倍体細胞、初代組織（primary tissue）及び初代外植片（primary explants）のin vitro培養物由来の細胞株も適切である。他の適切な哺乳動物細胞株には、マウス神経芽細胞腫N2A細胞、HeLa、マウスL-929細胞、及びBHK又はHaKハムスター細胞株（これらは全て、ATCCから入手可能である）が含まれるが、これらに限定されない。適切な哺乳動物宿主細胞を選択するための方法、並びに細胞の形質転換、培養、増幅、スクリーニング及び精製のための方法は、当分野で既知である。

一実施態様において、哺乳動物細胞はヒト細胞である。例えば、哺乳動物細胞は、ヒトリンパ系細胞株又はリンパ系由来細胞株、例えば、プレBリンパ球由来の細胞株などであり
得る。ヒトリンパ系細胞株の例としては、RAMOS（CRL-1596）、Daudi（CCL-213）、EB-3
（CCL-85）、DT40（CRL-2111）、18-81（Jack et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85：1581-1585（1988））、Raji細胞（CCL-86）、PER.C6細胞（Crucell Holland B.V., Leiden, The Netherlands）及びその誘導体（derivatives）が挙げられるが、限定されない
。

本発明のアミノ酸配列をコードする核酸配列は、「トランスフェクション」、「形質転換」又は「形質導入」により細胞に導入され得る。本明細書で使用する場合、「トランスフェクション」、「形質転換」又は「形質導入」とは、物理的又は化学的な方法を使用して、宿主細胞に1つ以上の外因性ポリヌクレオチドを導入することをいう。多くのトランス
フェクション技術が当分野で既知であり、例えば、リン酸カルシウムDNA共沈殿（例えば
、Murray E.J.（ed.）, Methods in Molecular Biology, Vol. 7, Gene Transfer and Expression Protocols, Humana Press（1991）を参照）；DEAE-デキストラン；エレクトロ
ポレーション；カチオン性リポソーム介在トランスフェクション；タングステン粒子促進性の微粒子銃（microparticle bombardment）（Johnston, Nature, 346：776-777（1990
））；及びリン酸ストロンチウムDNA共沈殿（Brash et al., Mol. Cell Biol., 7：2031-2034（1987））が含まれる。ファージ又はウイルスベクターは、適切なパッケージング細胞（その多くが市販されている）内での感染粒子の増殖後に、宿主細胞に導入され得る。

本発明は、本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド、本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド、本発明のIL-36R結合剤、前記いずれかをコードする本発明の核酸配列、又は本発明の核酸配列を含む本発明のベクター、の有効量を含む組成物を提供する。好ましくは、該組成物は、医薬上許容される（例えば、生理学上許容される）組成物であり、担体、好ましくは医薬上許容される（例えば、生理学上許容される）担体、及び本発明のアミノ酸配列、IL-36R結合剤、又はベクターを含む。任意の適切な担体が本発明の文脈において使用され得、かかる担体は当分野で周知である。担体の選択は、部分的には、組成物が投与され得る特定の部位及び組成物を投与するために使用される特定の方法によって決定されるだろう。組成物は、任意選択で無菌であり得る。組成物は、保存のために凍結又は凍結乾燥され得、使用前に適切な無菌の担体で再構成され得る。組成物は、例えば、Remington：The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA（2001）に記載される従来技術に従って作製され得る。

本発明はさらに、哺乳動物において、IL-36Rの阻害又は中和に反応する障害を治療する方法を提供する。当該方法は、IL-36Rの阻害又は中和に反応する障害を有する哺乳動物に前記組成物を投与することを含み、そうすることで、該哺乳動物において該障害が治療される。「IL-36Rの阻害に反応する」又は「IL-36Rの中和に反応する」障害とは、IL-36Rレベル又は活性の低下が哺乳動物（好ましくは、ヒト）において治療的有用性を有するか、或いはIL-36Rの不適切な発現（例えば、過剰発現）又は活性の増加が、疾患又は障害の病理学的作用を引き起こすか又はこれに寄与する、任意の疾患又は障害をいう。IL-36Rの阻害に反応する障害としては、例えば、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、代謝障害及びがんが挙げられる。

炎症性障害には、例えば、皮膚、肺及び消化管のアレルギー性炎症、アトピー性皮膚炎（アトピー性湿疹としても知られる）、喘息（アレルギー性及び非アレルギー性）、上皮介在性の炎症、線維症（例えば、特発性肺線維症、強皮症、腎線維症、及び瘢痕化）、アレルギー性鼻炎、食物アレルギー（例えば、ピーナッツ、卵、乳製品、甲殻類、ナッツ類（tree nuts）などに対するアレルギー）、季節性アレルギー及び他のアレルギーが含まれ
る。

本発明の方法は、例えば、MacKay I.R. and Rose N.R., eds., The Autoimmune Diseases, Fifth Edition, Academic Press, Waltham, MA (2014)に記載される自己免疫疾患など
の、任意のタイプの自己免疫疾患（すなわち、免疫系の活動過剰によって引き起こされる疾患又は障害であり、ここで体は、自己の組織を攻撃し、損傷させる）を治療するのに使用され得る。本発明の方法によって治療され得る自己免疫疾患の例としては、多発性硬化症、喘息、1型糖尿病、関節リウマチ、強皮症、クローン病、尋常性乾癬（一般に、乾癬
と呼ばれる）、膿疱性乾癬、汎発性膿疱性乾癬（GPP）、掌蹠膿疱症（PPP）、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、多発性硬化症、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（SLE）、潰
瘍性大腸炎、及び強直性脊椎炎が挙げられが、これらに限定されない。好ましい実施態様において、本発明の方法は、膿疱性乾癬、汎発性膿疱性乾癬、掌蹠膿疱症（PPP）、又は
尋常性乾癬を治療するのに使用される。

膿疱性乾癬は、赤い皮膚によって囲まれた白い膿疱によって特徴づけられる、珍しい型の乾癬である。汎発性膿疱性乾癬（GPP）は、突然の、繰り返し発症する高熱、全身発疹及
び汎発性の膿疱とともに、白血球増加症及びC反応性タンパク質の血清濃度の上昇によっ
て特徴づけられる重篤な疾患であり、これは、インターロイキン36受容体アンタゴニスト（インターロイキン-36Ra）の欠乏によって起こり得る（Marrakchi et al., N. Engl. J.
Med., 365(7):620-628 (2011)）。GPPは、尋常性乾癬（PV）に罹患しているか又は以前
に罹患していた患者においてしばしば現れる；しかしながら、GPPはPVの病歴のない患者
においても発症し得る（Sugiura et al., J. Invest. Derm., 133: 2514-2521 (2013)）
。掌蹠膿疱症は、無菌性の膿疱及び手のひら及び足底の赤い、鱗上の皮膚によって特徴づけられる慢性型の炎症性皮膚疾患であり、これらの特徴は、病気に冒された個人の生活の質を相当に損なわせる（de Waal, A.C. and van de Kerkhof, P.C.M., J. Dermatological Treatment, 22(2): 102-105 (2011)）。

本発明の方法によって治療され得る呼吸器疾患の例としては、喘息、膿疱性線維症、肺気腫、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、及び急性呼吸窮迫症候群が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法によって治療され得る代謝性障害の例としては、肥満症、2型糖
尿病、アテローム動脈硬化症、及び循環器疾患が挙げられるが、これらに限定されない。

本発明の方法は、当分野で既知の任意のタイプのがん、例えば、メラノーマ、腎細胞がん、肺がん、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、胆嚢がん、喉頭がん、肝臓がん、甲状腺がん、胃がん、唾液腺がん、前立腺がん、膵臓がん、白血病、リンパ腫及びメルケル細胞がんなどが挙げられるが、これらに限定されない癌を治療するために使用され得る（例えば、Bhatia et al., Curr. Oncol. Rep., 13（6）：488-497（2011）を参照）。

本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド、本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド、本発明のIL-36R結合剤、前記いずれかをコードする本発明の核酸配列、又は本発明の核酸配列を含む本発明のベクター、を含む組成物の投与により、哺乳動物において免疫応答が誘導される。「免疫応答」は、例えば、抗体産生、及び／又は免疫エフェクター細胞（例えば、T細胞）の活性化などを伴い得る。

本明細書で使用する場合、用語「治療」、「治療すること」などとは、所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を得ることをいう。好ましくは、該効果は治療的であり、すなわち、該効果は、疾患、及び／又は疾患に起因する有害な症状を部分的に又は完全に治癒する。このために、本発明の方法は、「治療上有効量」のIL-36R結合剤を投与することを含む。「治療上有効量」とは、所望の治療結果を達成するために、必要な投与量及び期間で、有効な量をいう。治療上有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別及び体重などの要因、並びにIL-36R結合剤が個体において所望の応答を引き出す能力によって変化し得る。例えば、本発明のIL-36R結合剤の治療上有効量は、ヒトにおいてIL-36Rの生物活性を低下させる量である。

或いは、薬理学的及び／又は生理学的効果は予防的であり得、すなわち、該効果は、疾患又はその症状を完全に又は部分的に予防する。これに関して、本発明の方法は、「予防上有効量」のIL-36R結合剤を投与することを含む。「予防上有効量」とは、所望の予防結果（例えば、疾患発症の予防）を達成するために、必要な投与量及び期間で、有効な量をいう。

典型的な用量（dose）は、例えば、1 pg/kgから20 mg/kg（動物又はヒトの体重）の範囲
にあり得る；しかしながら、この例示的な範囲より少ない又は多い用量も本発明の範囲内である。一日の非経口用量は、約0.00001 μg/kgから約20 mg/kg（全体重）（例えば、約0.001 μg /kg、約0.1 μg /kg 、約1 μg /kg、約5 μg /kg、約10 μg/kg、約100 μg /kg、約500 μg/kg、約1 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、又は前記値のいずれか2つによって規定される範囲）、好ましくは約0.1 μg/kgから約10 mg/kg（全体重）（例えば、約0.5 μg/kg、約1 μg/kg、約50 μg/kg、約150 μg/kg、約300 μg/kg、約750 μg/kg、
約1.5 mg/kg、約5 mg/kg、又は前記値のいずれか2つによって規定される範囲）、より好
ましくは約1 μg/kgから5 mg/kg（全体重）（例えば、約3 μg/kg、約15 μg/kg、約75
μg/kg、約300 μg/kg、約900 μg/kg、約2 mg/kg、約4 mg/kg、又は前記値のいずれか2
つによって規定される範囲）、なおより好ましくは1日当たり約0.5から15 mg/kg（体重）（例えば、約1 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約6 mg/kg、約9 mg/kg、約11 mg/kg、
約13 mg/kg、又は前記値のいずれか2つによって規定される範囲）であり得る。治療又は
予防の有効性は、処置患者の定期的な評価によってモニタリングされ得る。状態に応じて、数日間又はそれ以上にわたる反復投与のために、病徴の所望の抑制が生じるまで処置を反復してもよく、あるいは、患者の生涯にわたって処置を継続してもよい。しかしながら、他の投与レジメンが有用な場合があり、それも本発明の範囲内である。所望の投与量は、組成物の単回ボーラス投与により、組成物の複数回ボーラス投与により、又は組成物の継続的注入投与により、送達され得る。

本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド、本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド、本発明のIL-36R結合剤、前記いずれかをコードする本発明の核酸配列、又は本発明の核酸配列を含む本発明のベクター、の有効量を含む組成物は、標準的な投与技術（経口、静脈内、腹腔内、皮下、肺内、経皮、筋肉内、鼻腔内、口腔、舌下又は坐剤投与を含む）を使用して哺乳動物に投与され得る。組成物は、好ましくは、非経口投与に適している。本明細書で使用する場合、用語「非経口」は、静脈内、筋肉内、皮下、直腸、膣内及び腹腔内投与を含む。より好ましくは、組成物は、静脈内、腹腔内又は皮下注射による末梢全身性送達（peripheral systemic delivery）を使用して哺乳動物に投与される。

本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド、本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド、本発明のIL-36R結合剤、前記いずれかをコードする本発明の核酸配列、又は本発明の核酸配列を含む本発明のベクター、の有効量を含む組成物は、標準的な投与技術（経口、静脈内、腹腔内、皮下、肺内、経皮、筋肉内、鼻腔内、口腔、舌下又は坐剤投与を含む）を使用して哺乳動物に投与され得る。組成物は、好ましくは、非経口投与に適している。本明細書で使用する場合、用語「非経口」は、静脈内、筋肉内、皮下、直腸、膣内及び腹腔内投与を含む。より好ましくは、組成物は、静脈内、腹腔内又は皮下注射による末梢全身性送達（peripheral systemic delivery）を使用して哺乳動物に投与される。

哺乳動物（例えば、ヒト）に投与されると、本発明のIL-36R結合剤の生物学的活性は、当分野で既知の任意の適切な方法によって測定され得る。例えば、生物学的活性は、特定のIL-36R結合剤の安定性を決定することによって評価され得る。本発明の一実施態様において、IL-36R結合剤（例えば、抗体）は、約30分間から45日間の間（例えば、約30分間、約45分間、約1時間、約2時間、約4時間、約6時間、約10時間、約12時間、約1日間、約5日間、約10日間、約15日間、約25日間、約35日間、約40日間、約45日間、又は前記値のいずれか2つによって規定される範囲）のin vivo半減期を有する。別の実施態様において、IL-36R結合剤は、約2時間から20日間の間（例えば、約5時間、約10時間、約15時間、約20時間、約2日間、約3日間、約7日間、約12日間、約14日間、約17日間、約19日間、又は前記値
のいずれか2つによって規定される範囲）のin vivo半減期を有する。別の実施態様において、IL-36R結合剤は、約10日間から約40日間の間（例えば、約10日間、約13日間、約16日間、約18日間、約20日間、約23日間、約26日間、約29日間、約30日間、約33日間、約37日間、約38日間、約39日間、約40日間、又は前記値のいずれか2つによって規定される範囲
）のin vivo半減期を有する。

本発明のIL-36R結合剤の安定性は、変性中点値（T_m）（アミノ酸配列の50％がその天然の立体構造（confirmation）であり、他方の50％が変性している温度）という観点から測定され得る。一般に、T_mがより高ければ、タンパク質はより安定である。本発明の一実施態様において、本発明のIL-36R結合剤は、約60～100℃のin vitroでの変性中点値（T_m）を
含む。例えば、本発明のIL-36R結合剤は、約65～80℃（例えば、66℃、68℃、70℃、71℃、75℃、又は79℃）、約80～90℃（例えば、約81℃、85℃、又は89℃）、或いは約90～100℃（例えば、約91℃、約95℃、又は約99℃）in vitroでのT_mを含み得る。

本発明のIL-36R結合剤の安定性は、例えば、血中半減期の測定、示差走査熱量測定（DSC
）、サーマルシフトアッセイ、及びパルスチェースアッセイなどの、当分野で既知の任意の他の適切なアッセイを使用して測定され得る。本発明の文脈において使用され得る他のin vivo及びin vitroでのタンパク質安定性の測定方法は、例えば、Protein Stability and Folding, B.A. Shirley (ed.), Human Press, Totowa, New Jersey (1995); Protein Structure, Stability, and Interactions (Methods in Molecular Biology), Shiver J.W. (ed.), Humana Press, New York, NY (2010);及びIgnatova, Microb. Cell Fact., 4:
23 (2005)に記載されている。

特定のIL-36R結合剤の生物学的活性はまた、IL-36R又はそのエピトープとの結合親和性を決定することによっても評価され得る。用語「親和性」とは、2つの作用物質（agents）
の可逆的結合についての平衡定数をいい、解離定数（K_D）として表される。リガンドとの結合剤の親和性（例えば、エピトープに対する抗体の親和性など）は、例えば、約1ピコ
モーラー（pM）から約100マイクロモーラー（μM）（例えば、約1ピコモーラー（pM）か
ら約1ナノモーラー（nM）、約1 nMから約1マイクロモーラー（μM）、又は約1 μMから約100 μM）であり得る。一実施態様において、IL-36R結合剤は、1ナノモーラー以下（例えば、0.9 nM、0.8 nM、0.7 nM、0.6 nM、0.5 nM、0.4 nM、0.3 nM、0.2 nM、0.1 nM、0.05
nM、0.025 nM、0.01 nM、0.001 nM、又は前記値のいずれか2つによって規定される範囲
）のK_DでIL-36Rタンパク質と結合し得る。別の実施態様において、IL-36R結合剤は、200 pM以下（例えば、190 pM、175 pM、150 pM、125 pM、110 pM、100 pM、90 pM、80 pM、75
pM、60 pM、50 pM、40 pM、30 pM、25 pM、20 pM、15 pM、10 pM、5 pM、1 pM、又は前
記値のいずれか2つによって規定される範囲）のK_DでIL-36Rと結合し得る。目的の抗原又
はエピトープに対する免疫グロブリン親和性は、当分野で認識される任意のアッセイを使用して測定され得る。かかる方法には、例えば、蛍光活性化セルソーティング（FACS）、分離可能なビーズ（例えば、磁気ビーズ）、表面プラズモン共鳴（SPR）、液相競合（solution phase competition）（KINEXA^TM）、抗原パニング、競合的結合アッセイ、及び／
又はELISAが含まれる（例えば、Janeway et al.（eds.）, Immunobiology, 5th ed., Garland Publishing, New York, NY, 2001を参照）。

本発明のIL-36R結合剤は、単独で、又は他の薬物と組み合わせて投与され得る。例えば、IL-36R結合剤は、例えば、抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾン及びフルチカゾン）、非ステロイド性抗炎症薬（NSAID）（例えば、アスピリン、イブ
プロフェン及びナプロキセン）、生物学的製剤（biologics）（例えば、インフリキシマ
ブ（REMICADE^TM）、アダリムマブ（HUMIRA^TM）又はエタネルセプト（ENBREL^TM））、メトトレキサート（MTX）、経口レチノイド（例えば、アシトレチン（SORIATANE^TM））、及び局所ステロイド）等の、本明細書に開示する疾患の治療又は予防のための他の薬剤と組み合わせて投与され得る。

治療的使用に加えて、本明細書に記載のIL-36R結合剤は、診断応用又は研究応用において使用され得る。これに関して、IL-36R結合剤は、IL-36Rの不適切な発現（例えば、過剰発現）又は活性の増加が、疾患又は障害の病理学的作用を引き起こすか又はこれに寄与する、障害又は疾患を診断する方法において使用され得る。同様に、IL-36R結合剤は、IL-36Rの阻害に反応する疾患又は障害について試験されている対象において、IL-36Rタンパク質レベルをモニタリングするためのアッセイにおいて使用され得る。研究応用には、例えば、IL-36R結合剤及び標識を利用して、サンプル中（例えば、ヒト体液中、又は細胞若しくは組織抽出物中）のIL-36Rタンパク質を検出する方法が含まれる。IL-36R結合剤は、修飾（例えば、検出可能部分での共有結合又は非共有結合標識など）されるか又はされないで使用され得る。例えば、検出可能部分は、放射性同位体（例えば、³H、¹⁴C、³²P、³⁵S又
は¹²⁵I）、蛍光若しくは化学発光化合物（例えば、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン又はルシフェリン）、酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、β-ガラクト
シダーゼ又は西洋ワサビペルオキシダーゼ）、又は補欠分子族であり得る。抗原結合剤（
例えば、抗体）を検出可能部分と個別にコンジュゲートするための、当分野で既知の任意の方法が、本発明の文脈において用いられ得る（例えば、Hunter et al., Nature, 194：495-496（1962）；David et al., Biochemistry, 13：1014-1021（1974）；Pain et al.,
J. Immunol. Meth., 40：219-230（1981）；及びNygren, J. Histochem. and Cytochem., 30：407-412（1982）を参照）。

IL-36Rタンパク質レベルは、本発明のIL-36R結合剤を使用して、当分野で既知の任意の適切な方法によって測定され得る。かかる方法には、例えば、ラジオイムノアッセイ（RIA
）及びFACSが含まれる。IL-36Rの正常又は標準的な発現値は、任意の適切な技術を使用して、例えば、抗原-抗体複合体を形成するのに適切な条件下で、IL-36Rを含むか又は含む
ことが疑われるサンプルをIL-36R特異的抗体と組み合わせることなどにより確立され得る。抗体は、結合した抗体又は結合していない抗体の検出を容易にするために、検出可能物質で直接又は間接的に標識される。適切な検出可能物質には、種々の酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料及び放射性材料が含まれる（例えば、Zola, Monoclonal Antibodies
：A Manual of Techniques, CRC Press, Inc.（1987）を参照）。次いで、サンプル中で
発現されるIL-36Rポリペプチドの量を標準値と比較する。

IL-36R結合剤は、キット（すなわち、診断アッセイを実施するための説明書を備える、所定量の試薬の包装された組み合わせ）で提供され得る。IL-36R結合剤が酵素で標識される場合には、キットは、望ましくは、酵素により必要とされる基質及び補因子（例えば、検出可能な発色団又はフルオロフォアを提供する基質前駆体）を含む。また、安定化剤、バッファー（例えば、ブロッキングバッファー又は溶解バッファー）などの他の添加剤がキットに含まれていてもよい。種々の試薬の相対量は、アッセイの感度を実質的に最適化する、試薬の溶液中濃度を提供するために変動し得る。試薬は、溶解時に適切な濃度を有する試薬溶液を提供する賦形剤を含む乾燥粉末（典型的には、凍結乾燥されたもの）として提供され得る。

以下の実施例は本発明を更に説明するが、当然のことながら、いかなる場合においてもその範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。

実施例1
本実施例は、本発明の免疫グロブリン重鎖（HC）及び軽鎖（LC）ポリペプチドがin vitroで、ヒトIL-36Rに結合し、かつそのシグナル伝達をブロックする抗体を形成し得ることを実証する。

HEK293T/17細胞（ATCC CRL-11268）を、ヒトIL-36R（hIL-36R）又はカニクイザルIL-36R
（cynoIL-36R）のいずれかをIL-8プロモーター（Promega Corp., Madison, WI）と一緒にコードするプラスミドコンストラクトで安定的にトランスフェクトし、その後の全てのアッセイのために単一細胞クローンを選択した。

HEK293細胞を、10 mLのDMEM+10% FBS中、3×10⁶細胞/フラスコでT75培養フラスコ上へと
プレーティングし、一晩、37℃でインキュベートした。翌朝、24 μlのFUGENE^TM HD （Promega Corporation, Madison, WI）を、500 μｌの OPTI-MEM^TM 培地（Life Technologies, Carlsbad, CA）に添加し、室温で5分間インキュベートした。IL-36RをコードするDNA
（2 μｌ）及びIL8プロモーターをコードするDNA（2 μｌ）を混合物に添加し、さらに25分間、室温でインキュベートさせた。カニクイザルIL-36Rのアレルバリエーションを、サンガーシーケンシングによって検討し、4つの別個のアレルバリアントを、カニクイザル
集団内において同定した。各カニクイザルIL-36Rアレルバリアントを発現するHEK細胞株
を、別々に作出した。ヒト及びカニクイザル両方のIL-8レポーター細胞株で、内因的に発
現するHEKヒトIL1RAcPを利用した。このDNA/FUGENE^TM混合物を、トランスフェクションのために細胞に穏やかに滴下して添加し、一晩、37℃でインキュベートした。トランスフェクションの24時間後にて、細胞を分割（split）し、選択のために4週間の期間、ハイグロマイシン及びピューロマイシンを含有するDMEM+10% FBS中に置いた。4週間後、安定化細
胞を、96ウェルの透明底のプレート上に1細胞／ウェルでプレーティングした（5プレート／細胞株）。単一細胞クローンを、IL-36Rの細胞表面発現についてスクリーニングして増殖させ、以下に記載されるアッセイでは、低い継代数（例えば、1～3）の細胞を使用した。

HEK293ヒトIL36R/IL8又はHEK293-cynoIL36R/IL8バリアント安定化細胞株を、アキュター
ゼで収集し、96ウェルの透明底のプレート上に、100μlのDMEM+10% FBS 中0.06×10⁶細胞／ウェルで一晩、37℃、5% CO₂で播種した。翌朝、プレートをシンク内で反転させて培地を除去し、乾燥させるために、ペーパータオル上で穏やかに軽くたたいた。本発明のHC
及びLC ポリペプチドの種々の組み合わせ（表1を参照）を含む希釈抗体、IL-36Ra （R&D Systems, Minneapolis, MN）、並びにネガティブアイソタイプコントロール抗体を、DMEM+10% FBS （Life Technologies, Carlsbad, CA） 中で所望される濃度に、2倍希釈系列で調製し、直ちにウェルに添加し（50 μl／ウェル）、20分間、37℃、 5% CO₂でインキュ
ベートさせた。

その後、細胞を50 μlのIL36α、IL36β、又はIL36γリガンド（R&D Systems, Minneapolis, MN）で刺激し、追加で24時間、37℃、5% CO₂でインキュベートさせた。個々のサイトカインの各々のEC₅₀を、アッセイの前に 経験的に決定した。ルシフェラーゼ活性を、STEADY-GLO^TM Luciferase Assay System （Promega, Cat# E2520, Madison, WI）を使用して決定した。100 μlの1:1のルシフェラーゼアッセイ基質：バッファー混合物を、各ウェルに添加し、室温で5分間インキュベートし、96ウェルの黒色壁で透明底のプレート上に移
した（150 μl）。プレートをENVISION^TM Plate Reader （PerkinElmer, Waltham, WA）
上で読み取り、発光（60秒ディレイ）を決定した。GraphPad PRISM^TM Software 5 （GraphPad, San Diego, CA）を使用して、データを解析した。

ヒト及びcyno IL-36Rに対するIL-8 ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を、図1A～1F（ヒトIL-36R）、図2A～2C（cyno IL-36R）、図10A～10C（cyno IL-36R）、及び図10D
～10F（ヒトIL-36R）に示す。試験された各抗体の測定された力価（IC₅₀）を、表2並びに3.1及び3.2に記載する。

本実施例の結果は、本発明の免疫グロブリン重鎖（HC）及び軽鎖（LC）ポリペプチドがin
vitroで、ヒトIL-36Rに結合し、かつそのシグナル伝達を阻害する抗体を形成し得ることを実証する。

実施例2
本実施例は、本発明の免疫グロブリン重鎖（HC）及び軽鎖（LC）ポリペプチドがin vitroで、ヒトIL-36Rに結合する抗体を形成し得ることを実証する。

本明細書に記載されるような種々の免疫グロブリン重鎖（HC）及び軽鎖（LC）ポリペプチドをコードするDNAサンプルを、以下のものを組み合わせることによって調製した：マキ
シプレップした（maxi-prepped）DNA（6 μｇのHCプラスミド及び6 μgのLCプラスミドを含む）、1 mlのOPTIMEM^TM （Life Technologies, Carlsbad, CA）、及び72 μlのFUGENE^TM HD Transfection Reagent （Promega, Fitchburg, WI）。全ての試薬を予熱した。徹底的な混合及び室温で25分間のインキュベーションの後、1 mlの試薬／DNA混合物を、各T225培養フラスコ中で8×10⁶ HEK293-c18細胞（ATCC CRL-10852）に添加した。トランスフェクションの18時間前に、各フラスコ当たり10% FBS（Life Technologies, Carlsbad, CA）を含む20 mlのDMEM（Life Technologies, Carlsbad, CA）と一緒に、細胞をT225培養フラスコ中にプレーティングし、37℃で、5% CO₂ 中、一晩インキュベートした。トランスフ
ェクション後、細胞を5% CO₂中で37℃に戻した。翌日、各フラスコ中の培地を、25 mlの2
93 Freestyle 培地（Life Technologies, Carlsbad, CA）と交換し、細胞を8% CO₂のインキュベーターに移動させた。抗体産生を、7～12日間行わせた。各フラスコから上清を回
収し、3000 rpm で10分間遠心沈殿させ、新しい試験管内へと滅菌濾過した。

抗体精製のために、興味の対象である抗体を含むおよそ20～30 mlの細胞培養物の上清を
、1～2 mlの MAB SELECT SURE^TM LX樹脂 （GE Healthcare, Waukesha, WI）を充填し、PBSバッファー （11.9 mM リン酸、137 mM NaCl、2.7 mM KCl、pH 7.4） （Fisher Bioreagents, Waltham, MA）で事前に平衡化させた重力流カラムを通した。カラムを、カラムの5倍量のPBSバッファーで洗浄した。結合した抗体を、カラムの5～10倍量の0.1 M グリシン、pH 3.0、で樹脂から溶出させた。抗体を含む溶出液を、Amicon Ultra 10K concentrator （Millipore, Billerica, MA）中でおよそ0.1～2 mg/mLの抗体濃度まで濃縮させて、バッファーをPBSバッファーで3回交換した。抗体濃度を、Nanodrop 2000c分光光度計（Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA）で決定し、純度を、SDS-PAGE解析によって評価し
た。

本明細書に記載される免疫グロブリン重鎖（HC）及び軽鎖（LC）ポリペプチドを含む、種々の精製抗体の結合親和性を、BIACORE^TM T200 （Sapidyne Instruments, Boise, Idaho
）アッセイを使用して評価した。 BIACORE^TM T200 評価用ソフトウェア（GE Healthcare,
Buckinghamshire, United Kingdom）を使用して、抗体－抗原結合動態及び親和性を決定している。ヒトIL-36Rの細胞外ドメインを、CM5センサーチップ（GE Healthcare, Waukesha, WI）上へ、アミンカップリング化学を使用して、およそ100 RUで固定化した。HBS-EP+バッファー （0.01 M HEPES, 0.15 M NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% ポリソルベート, pH 7.6） （Teknova, Hollister, CA）を使用して、各抗体を種々の濃度で再構築させた。各抗体濃度を次いで、固定化した抗原に対して、30 μL／分の流速で2～3分間注入し、15分間解離させた。各サイクルの後、表面を、60 μLの3 M MgCl₂で再生させた。会合及び解離
動態定数 （kon及びkoff）を、オン及びオフレート（それぞれ、ka及びkd）並びに親和性（KD）を報告するために、BIACORE^TM T200評価ソフトウェアにおけるマストランスポートを伴う1:1結合モデルを用いてグローバルフィッティングした。

本明細書に記載される免疫グロブリン重鎖（HC）及び軽鎖（LC）ポリペプチドを含む種々の精製抗体の結合親和性をまた、KINEXA（登録商標）3000 assay（Sapidyne Instruments, Boise, Idaho）アッセイを用いて評価した。KINEXA（登録商標）技術は、種々の濃度の抗原とのインキュベーションの後に、溶液相中で未結合の／遊離の抗体分子を測定する。表面積の最大化のためにマイクロビーズを用いて溶液相中で結合事象を測定することは、固相への結合を測定する方法に内在するマストランスポートリミテーション及び移動度効果を回避する。各実験について、50 μgの可溶性ヒト又はcyno IL-36R細胞外ドメインを
、50 mgのUltraLink Biosupportビーズ（Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA）にアミン架橋した。（0.8V～1.2Vのシグナルを生じさせるのに十分な）一定濃度の抗体を、サンプルバッファー（1×PBS, pH 7.4, 0.02% NaN₃, 0.1% BSA）中で、量を決定した（titrated）抗原と、平衡に近づくか又は達するために十分な時間（インキュベーションの時間は、各抗体について異なり、親和性に依存する）インキュベートした。次いで、抗体－抗原溶液を、0．25 mL／分の速度で抗原結合ビーズに対して流した。ビーズによって捕捉された遊離の抗体を、ALEXA FLUOR^TM 647結合AffiniPureロバ抗ヒトIgG（H+L）（Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA）（500 ng/ml）を使用して検出した。抗体のKD及び／又はABC（活性結合濃度（active binding concentration））を、KINEXA^TM Proソフトウェ
アにおける1部位（one-site）ホモジニアス結合モデルを使用して非線形回帰分析から取
得した。

BIACORE^TM T200アッセイ及びKINEXA（登録商標）3000 assayによるアッセイで得られたKD値を、表4及び図3A（ヒト化1D9についてのKinExAデータ）、図3B（5D3 APE6194につい
てのBiacore）並びに図3C（ヒト化18D4についてのKinExAデータ）に記載する。

これらのデータは、本明細書に記載される本発明の免疫グロブリンHC及びLCポリペプチドの異なる組み合わせを含む抗体が、ヒトIL-36Rに高い親和性をもって結合し得ることを実証する。

実施例3
本実施例は、本発明の免疫グロブリン重鎖（HC）及び軽鎖（LC）ポリペプチドがin vitroで、ヒトIL-36Rに結合する抗体を形成し、IL-36Rを内因的に発現するヒト初代ケラチノサイト細胞による細胞シグナル伝達及びサイトカイン（例えば、IL-8）放出を阻害し得ることを実証する。

本アッセイにおいて使用される抗体を、上に記載のように製造し、精製した。正常ヒト上皮ケラチノサイト（kerotinocytes）（NHEK）は、Lonza Clonetics （cat# 00192627）から購入した。細胞を、推奨される培養液（Lonza KGM Gold SingleQuotサプリメント（cat# 0092152）を補足したLonza KBM Gold培地（cat# 00192151））を使用して、5% CO₂、37℃のインキュベーター中で培養し、増殖させた。継代数2の細胞を、複数の一回使用のた
めのアリコートで、液体窒素中で凍結させた。

継代数2の細胞を解凍して、上記の推奨培養液中100,000細胞／mlの密度となるように希釈し、100 μl細胞／ウェルを、標準的な平底96ウェル組織培養プレート中に、最終細胞密
度が10,000細胞／ウェルとなるよう、プレーティングした。外側のウェルは、エッジ効果を避けるために、200 μl／ウェルのリン酸緩衝食塩水で満たした。細胞を一晩、5% CO₂
、37℃のインキュベーターで培養して、接着させた。

翌日、培養液中10 μg/ml 又は 1 μg/mlから0までの範囲で半対数希釈（half-log dilution）した濃度で抗体を加えた。30分後、組換えヒトIL-36リガンドを、培養液中およそEC₅₀濃度（各リガンドについて、以前に経験的に決定された）で添加した。抗体及びリガンド濃度は、所望される最終濃度の4倍で作製し、各ウェル当たり50 μlを添加して、各ウ
ェルの最終的な総容積を200 μlとした。およそ48時間後に、プレートを3分間遠心した後に上清を除去し、清潔なプレートに移し、直ちに試験するか又はさらなる解析まで－80℃で保管した。

細胞上清中のヒトIL-8レベルを、R&D Systems DUO-SET ^TM ELISA キット（cat# DY208）
を使用して、製造者の提供する標準的なプロトコルに従って、ELISAによって評価した。
データを、グラフ化し、GraphPad PRISM^TMソフトウェアを使用してIC₅₀ 値を算出した。

本アッセイの結果を表5及び図4A～4Iに示す。

本実施例の結果は、本明細書に記載されるHC及びLCの組み合わせから構成される抗体が、IL-36Rを発現し、かつサイトカインIL-36α、IL-36β及びIL-36γによって刺激される、
ヒト初代ケラチノサイトからの炎症性サイトカイン（IL-8）の放出を、用量依存的な様式で阻害することを実証する。

実施例4
本実施例は、本発明の免疫グロブリン重鎖（HC）及び軽鎖（LC）ポリペプチドがin vitroでカニクイザルIL-36R （cyno IL-36R）に結合する抗体を形成して、IL-36Rを内因的に発現する初代ケラチノサイト細胞によるIL-36依存的な細胞シグナル伝達及びサイトカイン
（例えば、IL-8）放出を阻害し得ることを実証する。

本アッセイにおいて使用される抗体を、実施例3に記載のように製造し、精製した。正常
カニクイザル上皮ケラチノサイトは、CellBiologics （Chicago, IL; cat# MK-6066K）から購入した。細胞を、推奨される培養液（CellBiologics 上皮細胞培地サプリメント、cat# M6621を補足したCellBiologics上皮培地、cat# M6621のキット）を使用して、5% CO₂
、37℃のインキュベーター中で培養し、増殖させた。継代数2の細胞を、複数の一回使用
のためのアリコートで、液体窒素中で凍結させた。

継代数2の細胞を解凍して、上記の培養液中100,000細胞／mlの密度となるように希釈し、100 μl細胞／ウェルを、標準的な平底96ウェル組織培養プレート中に、最終細胞密度が10,000細胞／ウェルとなるよう、プレーティングした。外側のウェルは、エッジ効果を避
けるために、200 μl／ウェルのPBSで満たした。細胞を一晩、5% CO₂、37℃のインキュベーターで培養して、接着させた。

翌日、培養液中、10 μg/ml 又は 1 μg/mlから0までの範囲で半対数希釈した濃度で抗体を加えた。30分後、組換えカニクイザルIL-36リガンドを、培養液中およそEC₅₀濃度（各
リガンドについて、以前に経験的に決定された）で添加した。抗体及びリガンド濃度は、所望される最終濃度の4倍で作製し、各ウェル当たり50 μlを添加して、各ウェルの最終
的な総容積を200 μlとした。およそ48時間後に、プレートを3分間遠心した後に上清を除去し、清潔なプレートに移し、直ちに試験するか又はさらなる解析まで－80℃で保管した。

細胞上清中のカニクイザルIL-8レベルを、eBioscience （San Diego, CA） サル IL-8 platinum ELISAキット（cat# BMS640/3）を使用して、製造者の提供する標準的なプロトコ
ルに従って、ELISAによって評価した。データを、グラフ化し、GraphPad PRISM^TMソフト
ウェアを使用してIC₅₀ 値を算出した。

本アッセイの結果を、表6及び図5A～5Fに示す。

本実施例の結果は、本明細書に記載されるHC及びLCの組み合わせから構成される抗体が、IL-36Rを発現し、かつサイトカインIL-36α、IL-36β及びIL-36γによって刺激される、
カニクイザル初代ケラチノサイトからの炎症性サイトカイン（IL-8）の放出を、用量依存的な様式で阻害することを実証する。

実施例5
本実施例は、本明細書に記載されるHC及びLCから構成される抗体の、IL-36R を発現する
ヒト単球からのヒトIL-36媒介性のIL-8放出を、用量依存的な様式で遮断する能力を実証
する。

ドナーの全血単位から加工されたLeukocyte Reduction System単位を、San Diego Blood Bankから取得した。末梢血単核細胞（PBMC）を、Ficoll密度遠心分離（Sigma HISTOPAQUE^TM cat# 10771）を使用して、標準的な方法によって調製した。単球を、ヒト単球単離キ
ットII（Miltenyi Biotec, San Diego, CA; cat# 130-091-153）を使って、PBMCから単離した。

単球を、10％のウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを含有するRPMI 1640培地中、500,000細胞／mlの密度となるように希釈し、100 μl細胞／ウェルを、標準的
な平底96ウェル組織培養プレート中に、最終細胞密度が50,000細胞／ウェルとなるよう、プレーティングした。外側のウェルは、エッジ効果を避けるために、200 μl／ウェルのPBSで満たした。プレーティングした細胞を2～3時間、5% CO₂、37℃のインキュベーター中でインキュベートして、回復させた。

およそ2～3時間の培養後、培養液中、10 μg/ml 又は 1 μg/mlから0までの範囲で半対数希釈した濃度で抗体を加えた。30分後、組換えヒトIL-36リガンドを、培養液中およそEC₅₀濃度（各リガンドについて、以前に経験的に決定された）で添加した。抗体及びリガ
ンド濃度は、所望される最終濃度の4倍で作製し、各ウェル当たり50 μlを添加して、各
ウェルの最終的な総容積を200 μlとした。およそ48時間後に、プレートを3分間遠心した後に上清を除去し、清潔なプレートに移し、直ちに試験するか又はさらなる解析まで－80℃で保管した。

細胞上清中のヒトIL-8レベルを、R&D Systems DUO-SET ^TM ELISA キット（cat# DY208）
を使用して、製造者の提供する標準的なプロトコルに従って、ELISAによって評価した。
データを、グラフ化し、GraphPad PRISM^TMソフトウェアを使用してIC₅₀ 値を算出した。

これらの実験の結果を、表7並びに図6A及び6Bに記載する。

本実施例の結果は、本明細書に記載されるHC及びLCの組み合わせから構成される抗体が、IL-36Rを発現し、かつサイトカインIL-36α、IL-36β及びIL-36γによって刺激される、
ヒト初代単球からの炎症性サイトカイン（IL-8）の放出を、用量依存的な様式で阻害することを実証する。

実施例6
本実施例は、本明細書に記載される本発明の免疫グロブリン重鎖（HC）及び軽鎖（LC）ポリペプチドが、ヒト初代末梢血単核細胞からのIL-36依存的なサイトカインの放出を阻害
する抗体を形成し得ることを実証する。

ドナーの全血単位から加工されたLeukocyte Reduction System単位を、San Diego Blood Bankから取得した。末梢血単核細胞（PBMC）を、Ficoll密度遠心分離(Sigma HISTOPAQUE^TM cat# 10771）を使用して、標準的な方法によって調製した。

PBMCを、10％のウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを含有するRPMI 1640培地中、1×10⁶細胞／mlの密度となるように希釈し、100 μl細胞／ウェルを、標準的な平底96ウェル組織培養プレート中に、最終細胞密度が100,000細胞／ウェルとなるよう、
プレーティングした。外側のウェルは、エッジ効果を避けるために、200 μl／ウェルのPBSで満たした。プレーティングした細胞を2～3時間、5% CO₂、37℃のインキュベーター中でインキュベートして、回復させた。

およそ2～3時間の培養後、培養液中、10 μg/ml 又は 1 μg/mlから0までの範囲で半対数希釈した濃度で抗体を加えた。30分後、組換えヒトIL-36リガンドを、培養液中およそEC₅₀濃度（各リガンドについて、以前に経験的に決定された）で添加した。抗体及びリガン
ド濃度は、所望される最終濃度の4倍で作製し、各ウェル当たり50 μlを添加して、各ウ
ェルの最終的な総容積を200 μlとした。およそ48時間後に、プレートを3分間遠心した後に上清を除去し、清潔なプレートに移し、直ちに試験するか又はさらなる解析まで－80℃で保管した。

細胞上清中のヒトIL-8レベルを、R&D Systems DUO-SET ^TM ELISA キット(cat# DY208）を使用して、製造者の提供する標準的なプロトコルに従って、ELISAによって評価した。デ
ータを、グラフ化し、GraphPad PRISM^TMソフトウェアを使用してIC₅₀ 値を算出した。

本アッセイの結果は、図7A～7Cに示され、本明細書に記載されるHC及びLCの組み合わせから構成される抗体が、IL-36Rを発現し、かつサイトカインIL-36α、IL-36β及びIL-36γ
によって刺激される、ヒト初代末梢血単核細胞からの炎症性サイトカイン（IL-8）の放出を、用量依存的な様式で阻害することを実証する。

実施例7
本実施例は、本明細書に記載される本発明の免疫グロブリン重鎖（HC）及び軽鎖（LC）ポリペプチドが、カニクイザル初代末梢血単核細胞からのIL-36依存的なサイトカインの放
出を阻害する抗体を形成し得ることを実証する。

末梢血単核細胞（PBMC）を、Biotox Sciences （San Diego, CA）から取得した正常カニ
クイザル全血から、Ficoll密度遠心分離（Sigma HISTOPAQUE^TM cat# 10771）を使用して
、標準的な方法によって調製した。

PBMCを、10％のウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを含有するRPMI 1640培地中、1×10⁶細胞／mlの密度となるように希釈し、100 μl細胞／ウェルを、標準的な平底96ウェル組織培養プレート中に、最終細胞密度が100,000細胞／ウェルとなるよう、
プレーティングした。外側のウェルは、エッジ効果を避けるために、200 μl／ウェルのPBSで満たしている。プレーティングした細胞を2～3時間、5% CO₂、37℃のインキュベーター中でインキュベートして、回復させた。

およそ2～3時間の培養後、培養液中、10 μg/ml 又は 1 μg/mlから0までの範囲で半対数希釈した濃度で抗体を加えた。30分後、組換えカニクイザルIL-36リガンドを、培養液中
およそEC₅₀濃度（各リガンドについて、以前に経験的に決定された）で添加した。抗体及びリガンド濃度は、所望される最終濃度の4倍で作製し、各ウェル当たり50 μlを添加し
て、各ウェルの最終的な総容積を200 μlとした。およそ48時間後に、プレートを3分間遠心した後に上清を除去し、清潔なプレートに移し、直ちに試験するか又はさらなる解析まで－80℃で保管した。

細胞上清中のカニクイザルIL-8レベルを、eBioscienceサルIL-8 platinum ELISAキット（San Diego, CA; cat# BMS640/3）を使用して、製造者の提供する標準的なプロトコルに従って、ELISAによって評価した。データを、グラフ化し、GraphPad PRISM^TMソフトウェア
を使用してIC₅₀ 値を算出した。本アッセイの結果を、表8に記載する。

本実施例の結果は、本明細書に記載されるHC及びLCの組み合わせから構成される抗体が、IL-36Rを発現し、かつサイトカインIL-36α、IL-36β及びIL-36γによって刺激される、
カニクイザル初代末梢血単核細胞からの炎症性サイトカイン（IL-8）の放出を、用量依存的な様式で阻害することを実証する。

実施例8
本実施例は、本明細書に記載される本発明の免疫グロブリン重鎖（HC）及び軽鎖（LC）ポリペプチドが、ヒトIL-36Rとの結合について交差競合する（cross-compete）抗体を形成
し得ることを実証する。

本明細書に記載される種々のHC及びLCポリペプチドを含む抗体による標的IL-36Rの交差競合結合を、BIACORE^TM T200システム（GE Healthcare, Little Chalfont, Buckinghamshire, UK）を使用して決定した。各アッセイにおいて、一時抗体をチップの表面上に補足し
、その後、利用されていない補足部位を、ヒトIL-36Rに結合しないネガティブコントロール抗体の飽和量の添加によってブロックした。この工程の後に、IL-36Rを結合させ、引き続き二次抗体を添加して、抗体が単量体抗原上の同一の結合部位に対して競合しているかを決定した。抗体が同一のエピトープを結合する場合、二次的な結合は観察されない；IL-36R上の異なる結合部位が利用される場合、二次抗体は、一次抗体／抗原複合体に結合するだろう。

抗ヒトIgG （Fc-specific; GE Healthcare, Chalfont St. Giles, United Kingdom） を
、EDC活性化カップリング化学を使用して、BIACORE^TM CM5チップの表面上に、～8,000RU
で固定化した。次いで、本明細書に記載される本発明のHC及びLCポリペプチドの種々の組み合わせを含む抗IL-36R抗体（10 μg/mL；流速10 μL/分で60秒間の接触時間）を、チップの表面上に25℃でキャプチャーし、～500RUのキャプチャーされた抗体を得た。表面を
、標的に対する非特異的な、アイソタイプを合わせたネガティブコントロール抗体を使用してブロックした（APE4909を100 μg/mLで; 流速10 μL/分で60秒間の接触時間）。その後、ランニングバッファー（HBS-EP+、pH 7.6; GE Healthcare, Chalfont St. Giles, United Kingdom）中に（1 μMで）希釈したIL-36Rをチップの表面上を流し（流速 30 μL／分で300秒間）、その後直ちに二次抗体を流した。チップの表面上の質量変化を間接的に
モニターする表面プラズモン共鳴法（SPR）を介して作成された結果のセンサーグラム（sensogram）を検討して、抗体間の交差競合を決定した。

本発明の抗IL-36R抗体についての競合的結合アッセイの結果を、表9並びに図8A及び8Bに
示す。

本実施例の結果は、抗体APE6155 （5D3）及び抗体APE3847（18D4）が、ヒトIL-36R上の同一エピトープへの結合について競合するが、IL-36Rへの結合について抗体APE5100とは
競合しないことを実証し、APE6155もAPE3847も、APE5100とはエピトープを共有しないこ
とが示唆された。競合作用の結果は一貫しており、抗原に対する一次抗体及び二次抗体の順序付けには依存していなかった。

実施例9
本実施例は、本明細書に記載される本発明の免疫グロブリン重鎖（HC）及び軽鎖（LC）ポリペプチドが、ヒト及びカニクイザルIL-36RをIL-1RAcPと一緒に発現する細胞に結合し得ることを実証する。

ヒトIL-36R及びヒトIL-1RAcPを安定的に同時発現するCHO-K細胞への抗体の結合を調べ
た。カニクイザルIL-36Rのアレルのバリエーションを、サンガーシーケンシングによって検討し、4つの別個のアレルバリアントを、カニクイザル集団内において同定した。カニ
クイザルIL-36Rバリアント1及びカニクイザルIL-1RAcPを安定的に同時発現するCHO-K細胞への抗体の結合もまた、APE6155及びAPE7247について調べた。各抗体を、アキュターゼを使用して収集し、洗浄し、500,000細胞／ウェルで播種したCHO細胞と一緒にインキュベートした。細胞を、33 nM～16 pMの範囲にわたる濃度の抗体と一緒に30分間、4℃でインキ
ュベートし、FACS染色バッファーで3回洗浄した。細胞をスピンし、吸引し、次いで、100
μlのパラホルムアルデヒドと一緒に10分間、室温でインキュベートした。細胞を再度洗浄し、吸引し、100 μLの抗ヒト IgG Alexa 647で20分間、4℃で染色した。細胞を、FACS
Array （BD Biosciences）上での解析の前に、100 μLのFACS解析バッファー中に再懸濁した。

本発明の抗IL-36R抗体についての競合的結合アッセイの結果を、図9A及び9Bに示す。図9Aは、ヒトIL-36R及びヒトIL-36Rを安定的に発現するCHO細胞へのAPE06155及び APE07247抗体の結合を示し、図9Bは、カニクイザルバリアント1 IL-36R 及びIL-1RAcPを安定的に
発現するCHO細胞への同一の抗体の結合を示す。Graphpad Prism ソフトウェアを使用してデータをフィットさせ、ヒト及びカニクイザル IL-36R発現CHO細胞へのAPE6155のEC50価
をそれぞれ1.5 nM及び2.4 nMと決定し、バックアップAb APE7247のヒト及びカニクイザルIL-36R発現CHO細胞への結合のEC50をそれぞれ2.8 nM及び3.3 nMと決定した。アイソタイ
プを合わせたネガティブコントロール抗体APE00422は、どちらの細胞株にも結合を示さなかった。

実施例10
本実施例は、本明細書に記載される本発明の免疫グロブリン重鎖（HC）及び軽鎖（LC）ポリペプチドが、カニクイザル（Cynomologous monkey）において、優れた薬物動態的特徴
及び皮下バイオアベイラビリティをもって、in vivoで使用され得ることを実証する。カ
ニクイザルに、単一用量の静脈内（IV）又は皮下（SC）注射として、ANB019を投与した。
投与後0.5～672時間（4週間）後に、単一用量研究におけるサルから血液サンプルを回収
した。得られた血清サンプルを、AnaptysBio, Inc. （San Diego, CA）で、インハウスのELISAに基づく方法を使用して解析した。ANA020の血清濃度対時間のデータに対して、AnaptysBio, Incによって薬物動態解析を行った。

ANB019の血清濃度対時間プロファイルは、IV 及びSCの両方の投与経路について正常に挙
動し、IV投与については、Tmaxから24時間時点までの間で急速にレベルが低下してその後減退し、非ヒト霊長類におけるモノクローナル抗体の予測される挙動と一致した。ANB019血清濃度価からの薬物動態パラメータの推定値は、ノンコンパートメント解析から得られ、表10に表される。パラメータの推定値は、サルにおいて期待される IgG4スキャフォー
ルドモノクローナル抗体の薬物動態と一致していた。ANB019の半減期は、IV注射後～270
時間、SC注射後～330時間と推定された。SC注射後のバイオアベイラビリティは60％であ
った。

刊行物、特許出願及び特許を含む、本明細書に引用した全ての参考文献は、それぞれの参考文献が参照によって組み込まれることが個々に且つ具体的に示され、その全体が本明細書に記載されているのと同程度まで、参照によって本明細書に組み込まれる。

本発明の説明に関して（特に、以下の特許請求の範囲に関して）、用語「a」及び「an」
及び「the」及び「少なくとも1つ（at least one）」並びに同様の指示対象の使用は、本明細書に特記がないか文脈と明らかに矛盾しない限り、単数形及び複数形の両方をカバーすると解釈すべきである。1つ以上の事項の列挙の後での用語「少なくとも1つ」の使用（例えば、「A及びBの少なくとも1つ」）は、本明細書に特記がないか文脈と明らかに矛盾
しない限り、列挙した事項から選択される1つの事項（A又はB）、又は列挙した事項のう
ち2つ以上の任意の組み合わせ（A及びB）を意味すると解釈すべきである。用語「含む（comprising）」、「有する（having）」、「含む（including）」及び「含む（containing）」は、特記のない限り、オープンエンドの用語（すなわち、「～を含むが、それらに限定されない」を意味する）と解釈すべきである。本明細書中の値の範囲の記述は、本明細書に特記のない限り、その範囲内に入る各個別の値に個々に言及する省略方法として働く
ことのみを意図しており、各個別の値は、それが本明細書に個々に記述されているかのように本明細書に組み込まれる。本明細書に記載される全ての方法は、本明細書に特記がないか文脈と明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で実施できる。本明細書で提供される任意の及び全ての例又は例示的用語（例えば、「など（such as）」）の使用は、本
発明をよりよく説明することのみを意図しており、特段特許請求されない限り、本発明の範囲に限定を課すものではない。本明細書の全ての用語は、特許請求されていない任意の要素を本発明の実施に必須のものとして示していると解釈すべきではない。

発明を実施するために本発明者らが知る最良の形態を含む、本発明の好ましい実施態様が本明細書に記載される。これらの好ましい実施態様のバリエーションは、上述の説明を読めば当業者に明らかとなり得る。本発明者らは、当業者がかかるバリエーションを適宜使用することを予期しており、本発明者らは、本明細書に具体的に記載されたのとは異なる方法で本発明が実施されることを意図している。従って、本発明は、適用法によって許容されるとおり、本明細書に添付した特許請求の範囲に記載される主題の全ての改変及び等価物を含む。さらに、その全ての可能なバリエーションにおける上記要素の任意の組み合わせが、本明細書に特記がないか文脈と明らかに矛盾しない限り、本発明によって包含される。

Claims (39)

1. 単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、Gln Val Gln Xaa1 Xaa2 Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Xaa3 Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Xaa4 Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Xaa5 Asp Xaa6 Ser Ala Xaa7 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Xaa8 Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Xaa9 Cys Thr Arg Ser Phe Tyr Thr Met Asp Tyr
   Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (配列番号56)のアミノ酸配列を含み、
   ここで
   (a)Xaa1は、ロイシン(Leu)又はフェニルアラニン(Phe)であり、
   (b)Xaa2は、バリン(Val)、メチオニン(Met)、又はロイシン(Leu)であり、
   (c)Xaa3は、アルギニン(Arg)又はグリシン(Gly)であり、
   (d)Xaa4は、グリシン(Gly)、セリン(Ser)、又はアラニン(Ala)であり、
   (e)Xaa5は、アルギニン(Arg)又はアラニン(Ala)であり、
   (f)Xaa6は、スレオニン(Thr)又はリジン(Lys)であり、
   (g)Xaa7は、セリン(Ser)又はアスパラギン(Asn)であり、
   (h)Xaa8は、セリン(Ser)又はアラニン(Ala)であり、かつ
   (i)Xaa9は、チロシン(Tyr)又はフェニルアラニン(Phe)である、
   単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド。
2. ポリペプチドが、Gln Val Gln Xaa1 Xaa2 Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Xaa3 Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp
   Xaa4 Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Xaa5 Asp Xaa6 Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Xaa7 Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr
   Xaa8 Cys Thr Arg Ser Phe Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (配列番号1)のアミノ酸配列を含み、ここで
   (a)Xaa1は、ロイシン（Leu）又はフェニルアラニン(Phe)であり、
   (b)Xaa2は、バリン(Val)、メチオニン(Met)、又はロイシン(Leu)であり、
   (c)Xaa3は、アルギニン(Arg)又はグリシン(Gly)であり、
   (d)Xaa4は、グリシン(Gly)、セリン(Ser)、又はアラニン(Ala)であり、
   (e)Xaa5は、アルギニン(Arg)又はアラニン(Ala)であり、
   (f)Xaa6は、スレオニン(Thr)又はリジン(Lys)であり、
   (g)Xaa7は、セリン(Ser)又はアラニン(Ala)であり、かつ
   (h)Xaa8は、チロシン(Tyr)又はフェニルアラニン(Phe)である、
   請求項1に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
3. 配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、
   配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、又は配列番号14のいず
   れか1つのアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
4. 単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチドであって、Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Xaa1 Met Xaa2 Trp Val Arg Gln Ala Pro Xaa3 Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Met Phe Xaa4 Pro Xaa5 Xaa6 Xaa7 Val Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Thr Ser Met Ile Ile Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser (配列番号15)のアミノ
   酸配列を含み、ここで
   (a)Xaa1は、トリプトファン(Trp)又はチロシン(Tyr)であり、
   (b)Xaa2は、ヒスチジン(His)、アスパラギン(Asn)、又はチロシン(Tyr)であり、
   (c)Xaa3は、グリシン(Gly)又はアルギニン(Arg)であり、
   (d)Xaa4は、アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸(Glu)、又はヒスチジン(His)であり、
   (e)Xaa5は、セリン(Ser)、スレオニン(Thr)、又はチロシン(Tyr)であり、
   (f)Xaa6は、アスパラギン(Asn)又はグリシン(Gly)であり、かつ
   (g)Xaa7は、セリン(Ser)、アラニン(Ala)、又はアスパラギン酸(Asp)である、
   単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
5. 配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、配列番号23、又は配列番号24のいずれか1つのアミノ酸配列を含む、請求項4に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
6. 単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、Xaa1 Xaa2 Gln Xaa3 Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Xaa4 Xaa5
   Tyr Ser Ile Thr Xaa6 Asp Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Xaa7 Pro Gly Xaa8 Xaa9
   Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
   Ser Arg Val Thr Ile Xaa10 Xaa11 Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser
   Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Xaa12 Tyr Xaa13 Cys Ala Ile Arg Gly Pro Tyr Ser
   Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Xaa14(配列番号57)のアミノ酸配列を含み、ここで
   (a)Xaa1は、グルタミン(Gln)又はアスパラギン酸(Asp)であり、
   (b)Xaa2は、バリン(Val)又はロイシン(Leu)であり、
   (c)Xaa3は、ロイシン(Leu)又はフェニルアラニン(Phe)であり、
   (d)Xaa4は、スレオニン(Thr)又はセリン(Ser)であり、
   (e)Xaa5は、グリシン(Gly)又はアルギニン(Arg)であり、
   (f)Xaa6は、セリン(Ser)又はアラニン(Ala)であり、
   (g)Xaa7は、プロリン(Pro)又はフェニルアラニン(Phe)であり、
   (h)Xaa8は、リジン(Lys)又はアスパラギン(Asn)であり、
   (i)Xaa9は、グリシン(Gly)又はリジン(Lys)であり、
   (j)Xaa10は、セリン(Ser)又はスレオニン(Thr)であり、
   (k)Xaa11は、バリン(Val)又はアルギニン(Arg)であり、
   (l)Xaa12は、スレオニン(Thr)又はバリン(Val)であり、
   (m)Xaa13は、チロシン(Tyr)又はフェニルアラニン(Phe)であり、かつ
   (n)Xaa14は、アラニン(Ala)であるか又は存在しない、
   単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド。
7. ポリペプチドが、Xaa1 Val Gln Xaa2 Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Xaa3 Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Phe Ala Trp
   Asn Trp Ile Arg Gln Xaa4 Pro Gly Xaa5 Xaa6 Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Xaa7 Xaa8 Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Xaa9 Cys Ala Ile Arg Gly Pro Tyr Ser Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser (配列番号25)のアミノ酸配列を含み、ここで
   (a)Xaa1は、グルタミン(Gln)又はアスパラギン酸(Asp)であり、
   (b)Xaa2は、ロイシン(Leu)又はフェニルアラニン(Phe)であり、
   (c)Xaa3は、スレオニン(Thr)又はセリン(Ser)であり、
   (d)Xaa4は、プロリン(Pro)又はフェニルアラニン(Phe)であり、
   (e)Xaa5は、リジン(Lys)又はアスパラギン(Asn)であり、
   (f)Xaa6は、グリシン(Gly)又はリジン(Lys)であり、
   (g)Xaa7は、セリン(Ser)又はスレオニン(Thr)であり、
   (h)Xaa8は、バリン(Val)又はアルギニン(Arg)であり、かつ
   (i)Xaa9は、チロシン(Tyr)又はフェニルアラニン(Phe)である、
   請求項1に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
8. 配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29、配列番号30、配列番号31、配列番号32、配列番号51、配列番号52、配列番号53、又は配列番号54のいずれか1つのアミノ酸
   配列を含む、請求項6に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
9. 配列番号33、配列番号34、又は配列番号35のアミノ酸配列を含む、単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
10. 単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Xaa1 Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Xaa2 Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Xaa3 Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg
    Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
    Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly
    Thr Lys Leu Glu Ile Lys (配列番号36)のアミノ酸配列を含み、ここで
    (a)Xaa1は、グリシン(Gly)又はアラニン(Ala)であり、
    (b)Xaa2は、フェニルアラニン(Phe)又はチロシン(Tyr)であり、かつ
    (c)Xaa3は、チロシン(Tyr)又はセリン(Ser)である、
    単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド。
11. 配列番号37、配列番号38、又は配列番号39のアミノ酸配列を含む、請求項10に記載の単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド。
12. 単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Xaa1 Asn Xaa2 Ile Thr Tyr Phe Tyr Trp Tyr Leu Xaa3 Lys Pro Gly Gln
    Pro Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
    Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp
    Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr
    Lys Val Glu Ile Lys (配列番号40)のアミノ酸配列を含み、ここで
    (a)Xaa1は、セリン(Ser)又はアルギニン(Arg)であり、
    (b)Xaa2は、グリシン(Gly)又はアラニン(Ala)であり、かつ
    (c)Xaa3は、グルタミン(Gln)又はヒスチジン(His)である、
    単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド。
13. 配列番号41、配列番号42、配列番号43、又は配列番号44のアミノ酸配列を含む、請求項12に記載の単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド。
14. 単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Xaa1 Ile Asn Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
    Ile Tyr Tyr Thr Ser Xaa2 Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Xaa3 Ser Gly Ser Gly Xaa4 Asp Xaa5 Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr
    Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
    Lys Xaa6 Xaa7 (配列番号58)のアミノ酸配列を含み、ここで
    (a)Xaa1は、アスパラギン酸(Asp)又はトリプトファン(Trp)であり、
    (b)Xaa2は、アルギニン(Arg)又はメチオニン(Met)であり、
    (c)Xaa3は、グリシン(Gly)、セリン(Ser)又はプロリン(Pro)であり、
    (d)Xaa4は、スレオニン(Thr)又はアスパラギン(Asn)であり、
    (e)Xaa5は、フェニルアラニン(Phe)又はチロシン(Tyr)であり、
    (f)Xaa6は、アルギニン(Arg)であるか又は存在せず、かつ
    (g)Xaa7は、スレオニン(Thr)であるか又は存在しない、
    単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド。
15. ポリペプチドが、Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Xaa1 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Xaa2 Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys (配列番号45)のアミノ酸配列を含み、ここで
    (a)Xaa1は、セリン(Ser)又はプロリン(Pro)であり、かつ
    (b)Xaa2は、フェニルアラニン(Phe)又はチロシン(Tyr)である、
    請求項14に記載の単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド。
16. 配列番号46、配列番号47、又は配列番号55のアミノ酸配列を含む、請求項15に記載の単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド。
17. 配列番号48、配列番号49、又は配列番号50のアミノ酸配列を含む、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド。
18. 請求項1～9のいずれか一項に記載の免疫グロブリン重鎖ポリペプチドをコードする、単離された核酸配列。
19. 請求項10～17のいずれか一項に記載の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドをコードする、単離された核酸配列。
20. 請求項18又は19に記載の単離された核酸配列を含む、ベクター。
21. 以下のうちの1つ以上の生物活性を示すインターロイキン36受容体 (IL-36R)結合剤：
    (a)IL-36RとIL-36α、IL-36β、及び／又はIL-36γとの間の相互作用を阻害する、
    (b)IL-36Rによって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害する、
    (c)ヒトIL-36R、カニクイザルIL-36R、及び非ヒト霊長類IL-36Rと交差反応して、その活
    性を阻害する。
22. 請求項1～9のいずれか一項に記載の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は請求項10～17のいずれか一項に記載の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む、インターロイキン36受容体(IL-36R)結合剤。
23. 請求項1～9のいずれか一項に記載の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び請求項10～17のいずれか一項に記載の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む、請求項21又は請求項22に記載のIL-36R結合剤。
24. 請求項1～9のいずれか一項に記載の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド又は請求項10～17のいずれか一項に記載の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む、請求項21又は請求項22
    に記載のIL-36R結合剤。
25. 抗体、抗体コンジュゲート、又はその抗原結合フラグメントである、請求項21～24のいずれか一項に記載の、IL-36R結合剤。
26. F（ab’）₂フラグメント、Fab’フラグメント、Fabフラグメント、Fvフラグメント、scFvフラグメント、dsFvフラグメント、dAbフラグメント、又は一本鎖結合ポリペプチドで
    ある、請求項22に記載のIL-36R結合剤。
27. IL-36Rへの結合について、請求項18～26のいずれか一項に記載のIL-36R結合剤と競合する、IL-36R結合剤。
28. 請求項21～27のいずれか一項に記載のIL-36R結合剤をコードする、単離された核酸配列。
29. 請求項28に記載の単離された核酸配列を含む、ベクター。
30. 請求項29に記載のベクターを含む、単離された細胞。
31. （a）請求項21～27のいずれか一項に記載のIL-36R結合剤又は請求項29に記載のベクタ
    ー、及び（b）医薬上許容される担体を含む、組成物。
32. 哺乳動物において、IL-36Rの阻害に反応する障害を治療する方法であって、該方法がIL-36Rの阻害に反応する障害を有する哺乳動物に、請求項31に記載の組成物の有効量を投与することを含み、そうすることで、該哺乳動物において該障害が治療される、方法。
33. 障害が、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、代謝障害、上皮介在性の炎症性障害、線維症、又はがんである、請求項32に記載の方法。
34. 障害が、尋常性乾癬、膿疱性乾癬、汎発性膿疱性乾癬（GPP)、掌蹠膿疱症（PPP)、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、多発性硬化症、関節リウマチ、COPD、強皮症、喘息及び強直性脊椎炎である、請求項33に記載の方法。
35. 哺乳動物におけるIL-36R結合剤の半減期が、30分間から45日間の間である、請求項32～34のいずれか一項に記載の方法。
36. IL-36R結合剤が、約1ピコモーラー（pM）から約100マイクロモーラー（μM）の間のKD
    でIL-36Rと結合する、請求項32～35のいずれか一項に記載の方法。
37. 哺乳動物において、IL-36Rの阻害に反応する障害を治療するための薬物を調製するための、請求項31に記載の組成物の使用。
38. 障害が、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、代謝障害、上皮介在性の炎症性障害、線維症、又はがんである、請求項37に記載の使用。
39. 障害が、尋常性乾癬、膿疱性乾癬、汎発性膿疱性乾癬（GPP)、掌蹠膿疱症（PPP)、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、多発性硬化症、関節リウマチ、COPD、強皮症、喘息及び強直性脊椎炎である、請求項37に記載の使用。

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