ES2906364T3 - Nucleósidos de espirotietano - Google Patents

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Abdellah Tahri
Jean-François Bonfanti
Tim Hugo Maria Jonckers
Pierre Jean-Marie Bernard Raboisson
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Abstract

Un compuesto de Fórmula (I') **(Ver fórmula)** o una forma estereoisomérica del mismo, en la que la base se selecciona del grupo que consiste en (B-1), (B-2), (B-3a), (B-3b), (B-4) y (B-5) **(Ver fórmula)** en las que R es hidrógeno o alquilo de C1-6; y R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, **(Ver fórmula)** un grupo de fórmula (a-1), un grupo de fórmula (a-2), un grupo de fórmula (a-3), y un grupo de fórmula (a-4) **(Ver fórmula)** en las que R4 y R7 se selecciona cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fenilo, naftilo, quinolinilo, isoquinolinilo, y piridilo, estando cada uno de los cuales opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1- C6, hidroxi, y NR16R16'; o R4 y R7 son cada uno independientemente indolilo, opcionalmente sustituido en su átomo de nitrógeno con alquilo de C1-C6 o alquilC1-C6oxicarbonilo, y/o en cualquier átomo de carbono disponible con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1- C6, hidroxi, y NR17R17'; R5, R5', R10 y R10' se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1- C6, bencilo, y fenilo; o R5 y R5', o R10 y R10', junto con el átomo de carbono al que están unidos, forman un cicloalcanodiilo de C3-C7 o un anillo heterocíclico de 3 a 7 miembros que contiene un átomo de oxígeno; R6 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7, fenilo y fenil-alquilo de C1-C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en hidroxi, alcoxi de C1-C6, y NR18R18'; R8 es -OR19 o -NR20R20'; R9 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6, fenilo, y fenil-alquilo de C1-C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo y alquiloxi de C1-C6; R11 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7, fenilo o fenil-alquilo de C1-C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en hidroxi, alcoxi de C1-C6, y NR23R23'; R19 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C7, oxetanilo, (alcoxi de C1-C6)alquilo de C1-C6-, -CH2-O-(C=O)alquilo de C1-C6, y -CH2-O-(C=O)Oalquilo de C1-C6; R20 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C6, y cicloalquilo de C3-C7; y R20' se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C7, y (alcoxi de C1-C6)alquilo de C1-C6-; o -NR20R20' forma en conjunto un anillo de azetidinilo, pirrolidinilo o piperidinilo, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con un grupo que consiste en hidroxi, alquilo de C1-C6, alquiloxi de C1-C6, y (C=O)-OR21, en el que R21 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7, fenilo y fenil-alquilo de C1- C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en hidroxi, alcoxi de C1-C6, y NR22R22'; R2 es hidrógeno o un grupo de fórmula (b) **(Ver fórmula)** en la que R12 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6, fenilo, y fenil-alquilo de C1-C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo y alquiloxi de C1-C6; o R1 y R2 están unidos para formar un radical divalente de fórmula (c-1) o (c-2) **(Ver fórmula)** en las que 0 R13 y R13' se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C6, bencilo, y fenilo; o R13 y R13', junto con el átomo de carbono al que están unidos, forman un cicloalcanodiilo de C3-C7 o un anillo heterocíclico de 3 a 7 miembros que contiene un átomo de oxígeno; R14 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7, fenilo y fenil-alquilo de C1-C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en hidroxi, alcoxi de C1-C6, y NR24R24'; R15 es -OR25 o -NR26R26'; en el que R25 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno; alquilo de C1-C6; alquilo de C1-C3 sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en fenilo, naftilo, cicloalquilo de C3- C7, hidroxilo, y alquiloxi de C1-C6; cicloalquilo de C3-C7; (alcoxi de C1-C6)alquilo de C1-C6-; -CH2-O-(C=O)alquilo de C1- C6; -CH2-O-(C=O)Oalquilo de C1-C6; un anillo heterocíclico de 3 a 7 miembros que contiene un átomo de oxígeno; y Ar; en el que Ar se selecciona del grupo que consiste en fenilo, naftilo, quinolinilo, isoquinolinilo, y piridilo, estando cada uno de los cuales opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, hidroxi, y NR27R27'; o Ar es indolilo, opcionalmente sustituido en su átomo de nitrógeno con alquilo de C1-C6 o alquilC1-C6oxicarbonilo, y/o en cualquier átomo de carbono disponible con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, hidroxi, y NR28R28'; R26 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C6, y cicloalquilo de C3-C7; y R26' se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C7, y (alcoxi de C1-C6)alquilo de C1-C6-; o -NR26R26' forma en conjunto un anillo de azetidinilo, pirrolidinilo o piperidinilo, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con un grupo que consiste en hidroxi, alquilo de C1-C6, alquiloxi de C1-C6, y (C=O)-OR27, en el que R27 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7, fenilo y fenil-alquilo de C1- C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en hidroxi, alcoxi de C1-C6, y NR29R29'; R16, R16', R17, R17', R18, R18', R22, R22', R23, R23', R24, R24', R27, R27', R28, R28', R29 y R29' Se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo de C1-C6; y R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, metilo, CH2Cl, CH2F y N3; o sus sales y solvatos farmacéuticamente aceptables.

Description

DESCRIPCIÓN
Nucleósidos de espirotietano
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere a nucleósidos de 2’-espirotietano, y a los fosfatos, y a sus sales y solvatos farmacéuticamente aceptables, y a tales compuestos para uso como medicamento, en particular en la prevención y/o tratamiento de infecciones víricas causadas por virus pertenecientes a la familia Flaviviridae y/o al género Alphavirus. La presente invención se refiere además a composiciones farmacéuticas o preparaciones de combinación de los compuestos, y a las composiciones o preparaciones para uso como medicamento, más preferiblemente para la prevención o el tratamiento de infecciones víricas causadas por virus pertenecientes a la familia Flaviviridae y/o al género Alphavirus. La invención también se refiere a procedimientos para la preparación de los compuestos.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
El virus de la hepatitis C (VHC) es un virus de ARN de sentido positivo, monocatenario, y con cubierta, que pertenece al género Hepacivirus de la familia Flaviviridae. El virus codifica una ARN polimerasa dependiente de ARN (RdRp), NS5B, que es esencial para la replicación del virus. Después de la infección viral inicial, la mayoría de las personas infectadas desarrollan hepatitis crónica que puede progresar a fibrosis hepática, lo que lleva a cirrosis, enfermedad hepática en etapa Terminal, y HCC (carcinoma hepatocelular), lo que lo convierte en la principal causa de trasplantes de hígado. El VHC se agrupa en seis genotipos principales y más de 50 subtipos, que están distribuidos geográficamente de manera diferente. El genotipo 1 es el genotipo predominante en Europa y EE.UU. La extensa heterogeneidad genética del VHC tiene importantes implicaciones diagnósticas y clínicas, que explica quizás las dificultades en el desarrollo de vacunas y la falta de respuesta a la terapia actual.
La transmisión del VHC puede ocurrir a través del contacto con sangre o productos sanguíneos contaminados, por ejemplo después de una transfusión de sangre o el uso de drogas por vía intravenosa. La introducción de ensayos de diagnóstico utilizados en la detección de sangre ha provocado una tendencia a la baja en la incidencia del VHC postransfusional. Sin embargo, dada la lenta progresión hacia la enfermedad hepática en etapa terminal, las infecciones existentes continuarán representando una carga médica y económica grave durante décadas.
La NS5B polimerasa es esencial para la replicación del genoma del ARN del VHC. Esta enzima ha suscitado un gran interés entre los químicos médicos. Se conocen inhibidores tanto nucleósidos como no nucleósidos de NS5B. Los inhibidores de nucleósidos pueden actuar como un terminador de cadena o como un inhibidor competitivo, o como ambos. Para ser activos, la célula debe absorber los inhibidores de nucleósidos y convertirlos in vivo a un trifosfato. Esta conversión en trifosfato está mediada comúnmente por cinasas celulares, lo que imparte requisitos estructurales adicionales a un potencial inhibidor de la nucleósido polimerasa.
Los virus transmitidos por artrópodos son los agentes etiológicos de algunas de las enfermedades infecciosas emergentes y reemergentes más importantes, y causan importantes problemas de salud pública mundial.
Uno de estos virus es el virus del dengue, un Flavivirus que es transmitido por mosquitos Aedes, y puede causar enfermedades graves y mortales, tales como el dengue, el dengue hemorrágico, y el síndrome de choque por dengue. Los virus del dengue se pueden dividir en cuatro serotipos distintos, pero estrechamente relacionados, denominados DENV-1, -2, -3 y -4. El dengue es endémico en la mayoría de las regiones tropicales y subtropicales del mundo, predominantemente en áreas urbanas y semiurbanas. Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), 2500 millones de personas, de las cuales 1000 millones son niños, corren el riesgo de contraer la infección por DENV (OMS, 2002). Se estima que entre 50 y 100 millones de casos de dengue [DF], medio millón de casos de dengue grave (es decir, dengue hemorrágico [DHF] y síndrome de choque por dengue [DSS]), y más de 20.000 muertes se producen mundialmente cada año. DHF se ha convertido en una de las principales causas de hospitalización y muerte entre los niños de las regiones endémicas. En conjunto, el dengue representa la causa más común de enfermedades arbovirales. Debido a los grandes brotes recientes en países de América Latina, el sudeste de Asia y el Pacífico Occidental (incluyendo Brasil, Puerto Rico, Venezuela, Camboya, Indonesia, Vietnam, Tailandia), el número de casos de dengue ha aumentado drásticamente en los últimos años. No solo aumenta el número de casos de dengue a medida que la enfermedad se propaga a nuevas áreas, sino que también los brotes tienden a ser más graves.
Para prevenir y/o controlar las enfermedades asociadas con la infección viral del dengue, los únicos métodos disponibles en la actualidad son las estrategias de erradicación de mosquitos para controlar el vector. Si bien se está avanzando en el desarrollo de vacunas contra el virus del dengue, se encuentran muchas dificultades. Éstas incluyen la existencia de un fenómeno denominado potenciación de la infección por virus dependiente de anticuerpos (ADE).
La infección primaria por un serotipo proporciona inmunidad de por vida contra ese serotipo, pero confiere solo protección parcial y transitoria contra una infección secundaria por uno de los otros tres serotipos. Después de la infección con otro serotipo, los anticuerpos heterólogos preexistentes forman complejos con el virus del dengue recién infectado, pero no neutralizan al patógeno. En cambio, se cree que se facilita la entrada del virus en las células, lo que da como resultado una replicación del virus descontrolada y títulos virales máximos más altos. Tanto en las infecciones primarias como en las secundarias, los títulos virales más altos se asocian con enfermedades más graves del dengue. Dado que los anticuerpos maternos pueden transmitirse fácilmente a los lactantes al amamantarlos, esta podría ser una de las razones por las que los niños se ven más afectados por la enfermedad grave del dengue que los adultos.
En lugares con dos o más serotipos circulando simultáneamente, también conocidos como regiones hiperendémicas, el riesgo de enfermedades graves por dengue es significativamente mayor debido a un mayor riesgo de infección secundaria. Además, en la actualidad, no se dispone de medicamentos antivirales específicos para el tratamiento o la prevención de la infección por el virus del dengue.
Otros virus transmitidos por artrópodos incluyen el género Alphavirus perteneciente a la familia Togaviridae. Los virus de este género causan enfermedades que varían desde fiebre hasta poliartritis grave y encefalitis. Un alfavirus, virus chikungunya (CHIKV), causó brotes recientes asociados con morbilidad severa (Pialoux G. et al., Lancet Infect Dis 2007; 7: 319-27).
CHIKV es una enfermedad viral transmitida por mosquitos que se aisló por primera vez entre 1952-1953 tanto en el hombre como en los mosquitos. Desde entonces, se han documentado numerosas reapariciones de CHIKV tanto en África como en Asia. Alrededor de 2005 a 2006, se produjeron brotes explosivos en el sur y sudeste de Asia, las islas del Océano Índico, África, y el norte de Italia. Por ejemplo, los brotes explosivos alrededor de 2006 en la India, en la que se notificaron 1,4 millones de casos; en Reunión (Francia), en la que unos 266.000 de los 775.000 habitantes han sido infectados; y en Italia, en la que se notificaron unos 300 casos. Aunque la tasa de mortalidad es aproximadamente del 0,1%, causa síntomas muy dolorosos similares a los de la artritis, que pueden durar meses o incluso años. Los brotes recientes en Francia e Italia indican que potencialmente puede constituir una amenaza para Europa y otras regiones del mundo.
CHIKV se transmite al ser humano a través de la picadura de mosquitos A albopictus y A aegypti infectados. Después de la infección por el virus chikungunya, hay un período de incubación que dura de 2 a 4 días en promedio, seguido de síntomas de la enfermedad tales como fiebre alta, erupción cutánea, cefalea, dolor de espalda, mialgia, y artralgia. También pueden presentarse manifestaciones clínicas graves de la infección por chikungunya, por ejemplo fiebre hemorrágica, conjuntivitis, fotofobia, hepatitis, y estomatitis. También se dieron a conocer manifestaciones neurológicas tales como encefalitis, convulsiones febriles, síndrome meníngeo, y encefalopatía aguda.
CHIKV es un virus de ARN monocatenario, de sentido positivo, con cubierta, con un genoma de aproximadamente 12 kb de nucleótidos. El genoma de CHIKV se organiza de la siguiente manera:
5’ cap-nsP1-nsP2-nsP3-nsP4-(región de unión)-C-E3-E2-6k-E1-poly(A)-3’, en el que las primeras cuatro proteínas (nsP1-4) son proteínas no estructurales, y las proteínas estructurales son la cápside (C) y las proteínas de la cubierta (E).
No existe una diferencia de serotipo clara entre el CHIKV aislado de África, Asia y las islas del Océano Índico. Los análisis filogenéticos basados en las secuencias del gen E1 pueden agrupar a CHIKV en tres genotipos (linajes): asiático, este/centro/sur de África (ECSA), y oeste de África. El genotipo asiático se diferenciaba de los genotipos ECSA y de África Occidental por niveles de nucleótidos de ~5% y ~15%, respectivamente. Los genotipos africanos (ECSA frente a África Occidental) fueron ~15% divergentes. Las identidades de aminoácidos en los tres genotipos variaron de 95,2 a 99,8%.
Actualmente no existen vacunas y medicamentos antivirales aprobados para proteger y tratar a los animales, más en particular a los seres humanos, de la infección por CHIKV. El tratamiento, por tanto, es puramente sintomático, y se basa en fármacos antiinflamatorios no esteroideos. Puesto que no existe una vacuna para combatir el virus chikungunya, su mayor propagación e infección en todo el mundo, existe una gran necesidad médica de desarrollar pequeñas moléculas químicas para prevenir y tratar la infección por el virus chikungunya. Asimismo, actualmente no existe ningún tratamiento disponible para combatir otros alfavirus, en particular el virus Sindbis y el virus del bosque Simliki. Por tanto, existe la necesidad médica de desarrollar pequeñas moléculas químicas para prevenir y tratar infecciones por dichos virus.
Además, todavía existe una gran necesidad médica no satisfecha de terapias para la prevención o el tratamiento de infecciones virales en animales, más en particular en seres humanos, y especialmente para infecciones virales causadas por Flavivirus, más concretamente el VHC y el virus del dengue. El documento WO 2012/075140 describe 2’-espiro-nucleósidos y derivados de los mismos útiles para tratar a un sujeto infectado por el virus de la hepatitis C o el virus del dengue. El documento WO 2016/073756 describe derivados de nucleósidos de uridina deuterados para el tratamiento o prevención de infecciones causadas por el VHC. Sin embargo, y a pesar de la disponibilidad de una serie de regímenes anti-VHC para el tratamiento del VHC, tales como los basados en la combinación con Sofosbuvir, y nuevas terapias antivirales de acción directa que se encuentran en ensayos clínicos, sigue existiendo la necesidad de fármacos terapéuticos alternativos y/o terapias con propiedades ventajosas. Por ejemplo, altas barreras genéticas a la resistencia, amplia cobertura genotípica, efectos secundarios favorables y perfiles de seguridad, y/o menor duración del tratamiento; además, son muy necesarios compuestos con buena potencia antiviral, nulos o bajos niveles de efectos secundarios, un amplio espectro de actividad contra múltiples serotipos del virus del dengue, baja toxicidad, y/o buenas propiedades farmacocinéticas o farmacodinámicas.
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
La presente invención proporciona nucleósidos de 2’-espirotietano y el monofosfato, difosfato y trifosfato de los mismos, y sus sales y solvatos farmacéuticamente aceptables, que tienen actividad contra Flaviviridae, en particular VHC y/o virus del dengue, y/o alfavirus, en particular virus Chikungunya y/o virus Sindbis y/o virus del bosque Simliki.
De este modo, en un aspecto, la presente invención proporciona nucleósidos de espirotietano de Fórmula (I)
Figure imgf000004_0001
incluyendo todas las posibles formas estereoisoméricas de los mismos, en la que
La base se selecciona del grupo que consiste en (B-1), (B-2), (B-3a), (B-3b), (B-4) y (B-5)
Figure imgf000004_0002
en las que R es hidrógeno o alquilo de Ci-e; y
R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, metilo, CH2Cl, CH2F y N3 ;
y el monofosfato, el difosfato y el trifosfato de los mismos;
y sus sales y solvatos farmacéuticamente aceptables.
La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz, en particular una cantidad antiviral eficaz, del compuesto de Fórmula (I) o una forma estereoisomérica del mismo, o un fosfato (es decir, monofosfato, difosfato o trifosfato), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.
Además, la invención se refiere a un compuesto de Fórmula (I) o una forma estereoisomérica del mismo, o un fosfato (es decir, monofosfato, difosfato o trifosfato), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso como medicamento, en particular para uso en el tratamiento o en la prevención de infecciones por virus Flaviviridae, en particular hepatitis C y/o infecciones por virus del dengue, y/o en el tratamiento o en la prevención de infecciones por alfavirus, particularmente infecciones por virus Chikungunya y/o virus Sindbis y/o virus del bosque Simliki.
Además, la invención se refiere a un compuesto de Fórmula (I) o una forma estereoisomérica del mismo, o un fosfato (es decir, monofosfato, difosfato o trifosfato), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un antiviral adicional, para uso en el tratamiento o en la prevención de infecciones por virus Flaviviridae, en particular hepatitis C y/o infecciones por virus del dengue, y/o en el tratamiento o en la prevención de infecciones por alfavirus, particularmente infecciones por virus Chikungunya y/o virus Sindbis y/o virus del bosque Simliki.
Además, la invención se refiere a un procedimiento para preparar una composición farmacéutica según la invención, caracterizado por que un vehículo farmacéuticamente aceptable se mezcla íntimamente con una cantidad terapéuticamente eficaz, en particular una cantidad antivíricamente eficaz, de un compuesto de Fórmula (I) o una forma estereoisomérica del mismo, o un fosfato (es decir, monofosfato, difosfato o trifosfato), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.
La invención también se refiere a un producto que comprende un compuesto de Fórmula (I) o una forma estereoisomérica del mismo, o un fosfato (es decir, monofosfato, difosfato o trifosfato), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un agente farmacéutico adicional, en particular un antivírico adicional, como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en el tratamiento o prevención de infecciones por virus Flaviviridae, particularmente hepatitis C y/o infecciones por virus del dengue, y/o en el tratamiento o en la prevención de infecciones por alfavirus, particularmente infecciones por virus Chikungunya y/o virus Sindbis y/o virus del bosque Simliki.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
Como se usa aquí, la expresión “alrededor de” tiene el significado conocido por el experto en la técnica. En ciertas realizaciones, la expresión “alrededor de” puede omitirse, y se refiere a la cantidad exacta. En otras realizaciones, la expresión “alrededor de” significa que el valor numérico que sigue a la expresión “alrededor de” está en el intervalo de ± 15%, o de ± 10%, o de ± 5%, o de ± 1%, de dicho valor numérico.
Como se usa aquí “alquilo de C1-C4”, como un grupo o parte de un grupo, define un radical hidrocarbonado saturado de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, tal como, por ejemplo, metilo, etilo, 1 -propilo, 2-propilo, 1 -butilo, 2-butilo, 2-metil-1 -propilo, 2-metil-2-propilo. “Alquilo de C1-C6” abarca radicales alquilo de C1-C4 y sus homólogos superiores que tienen 5 o 6 átomos de carbono, tales como, por ejemplo, 1 -pentilo, 2-pentilo, 3-pentilo, 1-hexilo, 2-hexilo, 2-metil-1 -butilo, 2-metil-1 -pentilo, 2-etil-1 -butilo, 3-metil-2-pentilo, y similares. De interés entre alquilo de C1-C6 es el alquilo de C1-C4. “Alquilo de C1-C10” abarca radicales alquilo de C1-C6 y sus homólogos superiores con 7, 8, 9 o 10 átomos de carbono, tales como, por ejemplo, heptilo, 2-heptilo, 3-heptilo, 2-metilhexilo, octilo, 2-octilo, 3-octilo, nonilo, 2-nonilo, 3-nonilo, 2-butilpentilo, decilo, 2-decilo, y similares. De interés entre alquilo de C1-C10 es el alquilo de C1-C6 , y alquilo de C1-C2 define metilo y etilo.
“Alcoxi de C1-C6” significa un radical -O-alquilo de C1-C6 , en el que alquilo de C1-C6 es como se definió anteriormente. Ejemplos de alcoxi de C1-C6 son metoxi, etoxi, n-propoxi, o isopropoxi.
“Cicloalquilo de C3-C7” incluye ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, y cicloheptilo. Son de interés ciclopropilo y ciclobutilo.
La expresión “alquenilo de C2-C6”, como un grupo o parte de un grupo, define radicales hidrocarbonados de cadena lineal o ramificada que tienen enlaces carbono-carbono saturados y al menos un doble enlace, y que tienen de 2 a 6 átomos de carbono, tales como, por ejemplo, 1-propenilo, 2-propenilo (o alilo), 1 -butenilo, 2-butenilo, 3-butenilo, 2-metil-2-propenilo, 2-pentenilo, 3-pentenilo, 2-hexenilo, 3-hexenilo, 4-hexenilo, 2-metil-2-butenilo, 2-metil-2-pentenilo, y similares. De interés entre alquenilo de C2-C6 es alquenilo de C3-C6 , en particular alquenilo de C3-C4. De interés entre alquenilo de C2-C6 , en particular alquenilo de C3-C6 o alquenilo de C3-C4 , son aquellos radicales que tienen un doble enlace.
El término “halo” o “halógeno” es genérico para fluoro, cloro, bromo y yodo, en particular fluoro y cloro.
En una realización, la expresión “fenil-alquilo de C1-C6” es bencilo.
Como se usa aquí, el término “(=O)” u “oxo” forma un resto carbonilo cuando se une a un átomo de carbono. Cabe señalar que un átomo solo puede sustituirse con un grupo oxo cuando la valencia de ese átomo lo permita.
La persona experta se dará cuenta de que el anillo heterocíclico de 3 a 7 miembros que contiene un átomo de oxígeno es particularmente un anillo saturado y puede estar unido al resto de la molécula de Fórmula (I) a través de cualquier átomo de carbono disponible. El anillo heterocíclico de 3 a 7 miembros que contiene un átomo de oxígeno es en particular un anillo de 3, 4, 5, o 6 miembros. Los ejemplos no limitantes incluyen oxiranilo, oxetanilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, y similares.
El término “fosfatos” o “un fosfato”, como se usa aquí en general, se refiere al éster de monofosfato, difosfato y/o trifosfato de un compuesto de Fórmula (I) o un subgrupo del mismo como se usa aquí, a menos que se indique lo contrario, es decir, se refiere a grupos:
Figure imgf000005_0001
Los compuestos de la presente invención se representan aquí en su forma neutra; debe quedar claro que la forma o formas cargadas, tal como están presentes en los sistemas biológicos, y conocidas por el experto, también están incluidas dentro del alcance de la presente invención.
Cuando no se especifica la posición de un radical en un resto molecular (por ejemplo, un sustituyente en fenilo), o está representada por enlaces flotantes, dicho radical puede colocarse en cualquier átomo de dicho resto, siempre que la estructura resultante sea químicamente estable. Cuando cualquier variable está presente más de una vez en la molécula, cada definición es independiente.
La persona experta comprenderá que la expresión "opcionalmente sustituido" significa que el átomo o radical indicado en la expresión que utiliza "opcionalmente sustituido" puede estar o no sustituido (esto significa sustituido o no sustituido, respectivamente).
El término “sujeto”, como se usa aquí, se refiere a un animal de sangre caliente, preferiblemente un mamífero (por ejemplo, gato, perro, primate, o ser humano), más preferiblemente un ser humano, que es o ha sido objeto de tratamiento, observación o experimento.
La expresión "cantidad terapéuticamente efectiva", tal como se utiliza en esta memoria, significa la cantidad de compuesto activo o agente farmacéutico que provoca la respuesta biológica o medicinal en un sistema de tejidos, animal o humano, que está buscando un investigador, veterinario, médico u otro personal clínico, que incluye el alivio o la reversión de los síntomas de la enfermedad o trastorno que está siendo tratado.
El término "composición" pretende abarcar un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, así como cualquier producto que resulte, directa o indirectamente, de combinaciones de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas.
El término "tratamiento", tal como se utiliza en esta memoria, pretende referirse a todos los procesos en los que puede haber una desaceleración, interrupción, detención o parada del progreso de una enfermedad, pero no indica necesariamente una eliminación total de todos los síntomas.
Siempre que se use aquí, la expresión “compuestos de Fórmula (I)”, o “los presentes compuestos”, o términos similares, se entiende que incluye los compuestos de Fórmula (I), en particular de Fórmula (I’), incluyendo las posibles formas estereoquímicamente isoméricas, y sus sales y solvatos farmacéuticamente aceptables.
Como se usa aquí, cualquier fórmula química con enlaces mostrados solo como líneas continuas y no como enlaces en cuña ininterrumpidos o discontinuos, o que se indique de otro modo que tiene una configuración particular (por ejemplo, R, S) alrededor de uno o más átomos, contempla cada posible estereoisómero, o mezcla de dos o más estereoisómeros.
Las formas estereoisoméricas puras de los compuestos e intermedios como se mencionan aquí se definen como isómeros sustancialmente libres de otras formas enantioméricas o diastereoméricas de la misma estructura molecular básica de dichos compuestos o intermedios. En particular, la expresión “estereoisoméricamente puro” se refiere a compuestos o intermedios que tienen un exceso estereoisomérico de al menos 80% (es decir, un mínimo de 90% de un isómero y un máximo de 10% de los otros posibles isómeros) hasta un exceso estereoisomérico de 100% (es decir, 100% de un isómero y ninguno del otro), más en particular, compuestos o intermedios que tienen un exceso estereoisomérico de 90% hasta 100%, incluso más en particular que tienen un exceso estereoisomérico de 94% hasta 100%, y lo más en particular que tienen un exceso estereoisomérico de 97% hasta 100%, o de 98% hasta 100%. Las expresiones “enantioméricamente puro” y “diastereoméricamente puro” deben entenderse de forma similar, pero teniendo en cuenta entonces el exceso enantiomérico y el exceso diastereomérico, respectivamente, de la mezcla en cuestión.
Las formas estereoisoméricas puras de los compuestos e intermedios de esta invención pueden obtenerse mediante la aplicación de procedimientos conocidos en la técnica. Por ejemplo, los enantiómeros pueden separarse entre sí mediante la cristalización selectiva de sus sales diastereoméricas con ácidos o bases ópticamente activos. Ejemplos de los mismos son ácido tartárico, ácido dibenzoiltartárico, ácido ditoluoiltartárico, y ácido canfosulfónico. Alternativamente, los enantiómeros pueden separarse mediante técnicas cromatográficas utilizando capas estacionarias quirales. Dichas formas estereoquímicamente isoméricas puras también se pueden derivar de las correspondientes formas estereoquímicamente isoméricas puras de los materiales de partida apropiados, siempre que la reacción se produzca estereoespecíficamente. Preferiblemente, si se desea un estereoisómero específico, dicho compuesto se sintetiza mediante métodos de preparación estereoespecíficos. Estos métodos emplearán ventajosamente materiales de partida enantioméricamente puros.
Los racematos diastereoméricos de los compuestos de Fórmula (I) se pueden obtener por separado mediante métodos convencionales. Los métodos de separación física apropiados que pueden emplearse ventajosamente son, por ejemplo, cristalización selectiva y cromatografía, por ejemplo cromatografía de columna.
Las sales de adición farmacéuticamente aceptables comprenden las formas de sal de adición de ácido y base no tóxicas terapéuticamente activas de los compuestos de Fórmula (I), en particular de Fórmula (I’), y los fosfatos (es decir, monofosfato, difosfato o trifosfato) de los mismos.
Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables se pueden obtener convenientemente tratando la forma de base con dicho ácido apropiado. Los ácidos apropiados comprenden, por ejemplo, ácidos inorgánicos tales como ácidos halohídricos, por ejemplo ácido clorhídrico o bromhídrico, ácidos sulfúrico, nítrico, fosfórico, y similares; o ácidos orgánicos tales como, por ejemplo, ácidos acético, propiónico, hidroxiacético, láctico, pirúvico, oxálico (es decir, etanodioico), malónico, succínico (es decir, ácido butanodioico), maleico, fumárico, málico (es decir, ácido hidroxilbutanodioico), tartárico, cítrico, metanosulfónico, etanosulfónico, bencenosulfónico, p-toluenosulfónico, ciclámico, salicílico, p-aminosalicílico, pamoico, y similares. A la inversa, dichas formas de sal pueden convertirse mediante tratamiento con una base apropiada en la forma de base libre.
Los compuestos de Fórmula (I), en particular de Fórmula (I’), que contienen un protón ácido también pueden convertirse en sus formas de sal de adición de amina o metal no tóxicas mediante tratamiento con bases orgánicas e inorgánicas apropiadas. Las formas de sal de base apropiadas comprenden, por ejemplo, las sales de amonio, las sales de metales alcalinos y alcalino-térreos, por ejemplo las sales de litio, sodio, potasio, magnesio, calcio, y similares, sales con bases orgánicas, por ejemplo las sales de benzatina, W-metil-D-glucamina, hidrabamina, y sales con aminoácidos tales como, por ejemplo, arginina, lisina, y similares.
El término “solvatos” cubre cualquier solvato farmacéuticamente aceptable que los compuestos de Fórmula (I), en particular de Fórmula (I’), así como los fosfatos (es decir, monofosfato, difosfato o trifosfato), los profármacos y las sales de los mismos, son capaces de formar. Dichos solvatos son, por ejemplo, hidratos, alcoholatos, por ejemplo etanolatos, propanolatos, y similares.
Algunos de los compuestos de Fórmula (I), en particular de Fórmula (I’), también pueden existir en su forma tautomérica. Por ejemplo, las formas tautoméricas de los grupos amida (-C(=O)-NH-) son iminoalcoholes (-C(OH)=N-), que pueden estabilizarse en anillos con carácter aromático. La base de uridina es un ejemplo de tal forma. Tales formas, aunque no se indican explícitamente en las fórmulas estructurales aquí representadas, están destinadas a estar incluidas dentro del alcance de la presente invención.
La presente invención también incluye compuestos marcados con isótopos de Fórmula (I) o cualquier subgrupo de Fórmula (I), en particular de Fórmula (I’), en los que uno o más de los átomos está reemplazado por un isótopo que difiere del o de los encontrados típicamente en la naturaleza. Ejemplos de tales isótopos incluyen isótopos de hidrógeno, tales como 2H, 3H; carbono, tales como 11C, 13C y 14C; nitrógeno, tales como 13N y 15N; oxígeno, tales como 15O, 17O y 18O; fósforo, tales como 31P y 32P, azufre, tal como 35S; flúor, tal como 18F; cloro, tal como 36Cl; bromo, tal como 75Br, 76Br, 77Br, 82Br; y yodo, tal como 123I, 124I, 125I y 131I. Los compuestos de la invención marcados con isótopos se pueden preparar mediante procedimientos análogos a los descritos aquí utilizando los reactivos o materiales de partida marcados con isótopos apropiados, o mediante técnicas conocidas en la técnica. La elección del isótopo incluido en un compuesto marcado con isótopos depende de la aplicación específica de ese compuesto. Por ejemplo, para los ensayos de distribución de tejidos, se incorpora un isótopo radiactivo tal como 3H o 14C. Para aplicaciones de radioimágenes, será útil un isótopo emisor de positrones, tal como 11C, 18F, 13N o 15O. La incorporación de deuterio puede proporcionar una mayor estabilidad metabólica, dando como resultado, por ejemplo, una mayor vida media in vivo del compuesto o requisitos de dosificación reducidos.
En una realización particular, la invención proporciona compuestos de Fórmula (I) que tienen la Fórmula (I’):
Figure imgf000007_0001
y formas estereoisoméricas de los mismos, en la que
La base se selecciona del grupo que consiste en (B-1), (B-2), (B-3a), (B-3b), (B-4) y (B-5)
Figure imgf000008_0001
en las que R es hidrógeno o alquilo de Ci-e;
R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno,
Figure imgf000008_0002
un grupo de fórmula (a-1), un grupo de fórmula (a-2), un grupo de fórmula (a-3), y un grupo de fórmula (a-4)
Figure imgf000008_0003
(a-1) (a-2) (a-3) (a-4),
en los que
R4 y R7 se selecciona cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fenilo, naftilo, quinolinilo, isoquinolinilo, y piridilo, estando cada uno de los cuales opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo de C1-C6 , alquenilo de C2-C6 , alcoxi de C1-C6 , hidroxi, y NR16R16; o
R4 y R7 son cada uno independientemente indolilo, opcionalmente sustituido en su átomo de nitrógeno con alquilo de C1-C6 o alquilC1-C6oxicarbonilo, y/o en cualquier átomo de carbono disponible con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo de C1-C6 , alquenilo de C2-C6 , alcoxi de C1-C6 , hidroxi, y NR17R17';
R5, R5', R10 y R10 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C6 , bencilo, y fenilo; o
R5 y R5', o R10 y R10', junto con el átomo de carbono al que están unidos, forman un cicloalcanodiilo de C3-C7 o un anillo heterocíclico de 3 a 7 miembros que contiene un átomo de oxígeno;
R6 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7 , fenilo y fenil-alquilo de C1-C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en hidroxi, alcoxi de C1-C6 , y NR18R18;
R8 es —OR19 o —NR20R20';
R9 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6 , fenilo, y fenil-alquilo de C1-C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo y alquiloxi de C1-C6 ;
R11 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7 , fenilo o fenilalquilo de C1-C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en hidroxi, alcoxi de C1-C6 , y NR23R23';
R19 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6 , cicloalquilo de C3-C7 , oxetanilo, (alcoxi de C1-C6)alquilo de C1-C6-, -CH2-O-(C=O)alquilo de C1-C6 , y -CH2-O-(C=O)0alquilo de C1-C6 ;
R20 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C6 , y cicloalquilo de C3-C7 ; y R20' se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6 , cicloalquilo de C3-C7 , y (alcoxi de C1-C6)alquilo de C1-C6-; o
—NR20R20' forma en conjunto un anillo de azetidinilo, pirrolidinilo o piperidinilo, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con un grupo que consiste en hidroxi, alquilo de C1-C6 , alquiloxi de C1-C6 , y (C=O)-OR21, en el que R21 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7 , fenilo y fenil-alquilo de C1-C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en hidroxi, alcoxi de C1-C6 , y NR22R22';
R2 es hidrógeno o un grupo de fórmula (b)
Figure imgf000009_0001
Cb)
en la que
R12 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6 , fenilo, y fenil-alquilo de C1-C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo y alquiloxi de C1-C6 ; o
R1 y R2 están unidos para formar un radical divalente de fórmula (c-1) o (c-2)
Figure imgf000009_0002
en las que
R13 y R13' se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C6, bencilo, y fenilo; o
R13 y R13', junto con el átomo de carbono al que están unidos, forman un cicloalcanodiilo de C3-C7 o un anillo heterocíclico de 3 a 7 miembros que contiene un átomo de oxígeno;
R14 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7 , fenilo y fenil-alquilo de C1-C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en hidroxi, alcoxi de C1-C6 , y NR24R24;
R15 es —OR25 o —NR26R26'; en el que
R25 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno; alquilo de C1-C6 ; alquilo de C1-C3 sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en fenilo, naftilo, cicloalquilo de C3-C7 , hidroxilo, y alquiloxi de C1-C6 ; cicloalquilo de C3-C7 ; (alcoxi de C1-C6)alquilo de C1-C6-; -CH2-O-(C=O)alquilo de C1-C6 ; -CH2-O-(C=O)Oalquilo de C1-C6 ; un anillo heterocíclico de 3 a 7 miembros que contiene un átomo de oxígeno; y Ar; en el que
Ar se selecciona del grupo que consiste en fenilo, naftilo, quinolinilo, isoquinolinilo, y piridilo, estando cada uno de los cuales opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo de C1-C6 , alquenilo de C2-C6 , alcoxi de C1-C6 , hidroxi, y NR27R27'; o
Ar es indolilo, opcionalmente sustituido en su átomo de nitrógeno con alquilo de C1-C6 o alquilCr C6oxicarbonilo, y/o en cualquier átomo de carbono disponible con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo de C1-C6 , alquenilo de C2-C6 , alcoxi de C1-C6 , hidroxi, y NR28R28';
R26 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C6 , y cicloalquilo de C3-C7 ; y R26' se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6 , cicloalquilo de C3-C7 , y (alcoxi de C1-C6)alquilo de C1-C6-; o
—NR26R26' forma en conjunto un anillo de azetidinilo, pirrolidinilo o piperidinilo, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con un grupo que consiste en hidroxi, alquilo de C1-C6 , alquiloxi de C1-C6 , y (C=O)-OR27, en el que R27 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7, fenilo y fenil-alquilo de C1-C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en hidroxi, alcoxi de C1-C6 , y NR29R29';
R16, R16', R17, R17', R18, R18', R22, R22', R23, R23', R24, R24', R27, R27', R28, R28', R29 y R29' se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo de C1-C6 ; y
R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, metilo, CH2Cl, CH2F y N3 ;
y las sales y los solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.
El grupo -NH-C(R5)(R5)-C(=O)- o -NH-C(R13)(R13')-C(=O)- puede formar un resto de aminoácido, que incluye restos de aminoácidos naturales y no naturales. Son de interés alanina (Ala), glicina (Gly), y dimetilglicina (Dmg). También son de interés aquellos restos de aminoácidos en los que R5' o R13' es hidrógeno. Cuando en este último caso R5'/13' es distinto de hidrógeno, el resto de aminoácido tiene un centro quiral, y la configuración en el átomo de carbono asimétrico puede ser la de un L-aminoácido. Los ejemplos restos de incluyen alanina (Ala), valina (Val), isoleucina (Ile), ácido a-aminobutírico (ABA, también denominado ácido 2-aminobutírico o etilglicina), fenilalanina (Phe) y fenilglicina (Phg), en particular L-Ala, L-Val, L-Ile, L-ABA, L-Phe y L-Phg. Un ejemplo de un resto de aminoácido en el que R5 y R5' o R13 y R13' junto con el átomo de carbono al que están unidos forman cicloalcanodiilo de C3-C7 , es 1,1-ciclopropilaminoácido. Del mismo modo, los grupos —NR20R20' o —NR26R26', que forman un anillo de pirrolidinilo sustituido con (C=O)OR21 o (C=O)OR27, respectivamente, en particular
Figure imgf000010_0001
, forman un resto de prolina, preferiblemente un resto de L-prolina.
Los subgrupos de compuestos de Fórmula (I) son aquellos compuestos de Fórmula (I'), o subgrupos de compuestos de Fórmula (I'), como se define aquí, en los que R1 es un grupo de fórmula (a-1)
Figure imgf000010_0002
Los subgrupos de compuestos de Fórmula (I) son aquellos compuestos de Fórmula (I'), o subgrupos de compuestos de Fórmula (I'), como se define aquí, en los que
(a) R4 es fenilo, opcionalmente sustituido con 1, 2, o con 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente de halo, alquilo de C1-C6 , alquenilo de C3-C6 , alcoxi de C1-C6 , hidroxi, y NR16R16; o R4 es naftilo, opcionalmente sustituido con halo, alquilo de C1-C6 , o alcoxi de C1-C6 ; o R4 es indolilo;
(b) R4 es fenilo, opcionalmente sustituido con 1, con 2, o con 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente de halo, alquilo de C1-C6 , alquenilo de C3-C6 , alcoxi de C1-C6 , hidroxi, y NR16R16; o R4 es naftilo; o R4 es indolilo;
(c) R4 es fenilo, opcionalmente sustituido con 1 o con 2 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente de halo, alquilo de C1-C6 , alquenilo de C3-C6 , alcoxi de C1-C6 , hidroxi, y NR16R16; o R4 es naftilo; o R4 es indolilo;
(d) R4 es fenilo, opcionalmente sustituido con 1 o con 2 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente de halo, alquilo de C1-C6 , alquenilo de C3-C6, y alcoxi de C1-C6 , o R4 es naftilo;
(e) R4 es fenilo, opcionalmente sustituido con halo o con 1 o 2 radicales alquilo de C1-C6 , o R4 es naftilo; (f) R4 es fenilo, halofenilo, dialquilCi-C4fenilo, o naftilo;
(g) R4 es fenilo;
(h) R4 es naftilo.
Los subgrupos de compuestos de Fórmula (I) son aquellos compuestos de Fórmula (I’), o subgrupos de compuestos de Fórmula (I’), como se define aquí, en los que
(a) R5 es metilo y R5’ es metilo; o
(b) R5 es hidrógeno y R5 es fenilo o alquilo de C1-C6 , en particular alquilo de C1-C4 , tal como metilo, etilo, isopropilo, o isobutilo. Los subgrupos de compuestos de Fórmula (I) son aquellos compuestos de Fórmula (I’), o subgrupos de compuestos de Fórmula (I’), como se define aquí, en los que el resto
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es glicilo, dimetilglicilo, a-aminobutirilo, fenilglicina, isoleucilo, alanilo, fenilalanilo, o valilo (respectivamente Gly, Dmg, ABA, Phg, Ile, Ala, Phe o Val; en particular L-ABA, L-Phg, L-Ile, L-Ala, L-Phe o L-Val).
Los subgrupos de compuestos de Fórmula (I) son aquellos compuestos de Fórmula (I’), o de subgrupos de compuestos de Fórmula (I’), como se define aquí, en los que R5 es hidrógeno, alquilo de C1-C6 , bencilo, o fenilo; y R5’ es hidrógeno, alquilo de C1-C6 , bencilo, o fenilo.
Los subgrupos de compuestos de Fórmula (I) son aquellos compuestos de Fórmula (I’), o subgrupos de compuestos de Fórmula (I), como se define aquí, en los que el
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resto tiene la estructura
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en la que R5 es hidrógeno y R5’ es hidrógeno, fenilo, alquilo de C1-C6 , bencilo; o
R5 es hidrógeno y R5 es hidrógeno o alquilo de C1-C6 ;
R5 es hidrógeno y R5 es alquilo de C1-C2 ;
R5 es hidrógeno y R5’ es metilo.
En una realización, R5 y R5’, junto con el átomo de carbono al que están unidos, forman cicloalcanodiilo de C3-C7 ; o en particular forman cicloalcanodiilo de C3-C4 ; o en particular forman ciclopropilideno.
Los subgrupos de compuestos de Fórmula (I) son aquellos compuestos de Fórmula (I’), o de subgrupos de compuestos de Fórmula (I’), como se define aquí, en los que
(a) R6 es alquilo de C1-C6 , bencilo, o fenilo opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente de hidroxi, alcoxi de C1-C6 , y NR18R18, en el que R18 es hidrógeno y R18’ es hidrógeno o alquilo de C1-C6 ;
(b) R6 es alquilo de C1-C6 o bencilo;
(c) R6 es alquilo de C1-C6 ;
(d) R6 es alquilo de C1-C4 ;
(e) R6 es metilo, etilo, o t-butilo;
(f) R6 es cicloalquilo de C3-C7.
Los subgrupos de compuestos de Fórmula (I) son aquellos compuestos de Fórmula (I’), o de subgrupos de compuestos de Fórmula (I’), como se define aquí, en los que
R4 es fenilo, halofenilo, dialquilCi-C4fenilo, o naftilo;
R5 y R5’ son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo de C1-C6 , bencilo o fenilo; y
R6 es alquilo de C1-C6.
Los subgrupos de compuestos de Fórmula (I) son aquellos compuestos de Fórmula (I’), o subgrupos de compuestos de Fórmula (I’), como se define aquí, en los que R1 y R2 están unidos para formar un radical divalente de (c-2)
Figure imgf000012_0001
Figure imgf000012_0002
en el que R15 es —OR25, en el que R25 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C6 ; fenilo; cicloalquilo de C3-C7 ; y alquilo de C1-C3 sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en fenilo, naftilo, cicloalquilo de C3-C7 , hidroxilo, y alquiloxi de C1-C6. En otra realización, R25 es alquilo de C1-C6 o alquilo de C1-C2 sustituido con fenilo, alquiloxi de C1-C2 o cicloalquilo de C3-C7. En una realización adicional, R25 es cicloalquilo de C3-C7 , más en particular, ciclopentilo. En una realización adicional, R25 es alquilo de C2-C4, más en particular, i-propilo.
En una realización particular, la invención proporciona compuestos de Fórmula
Figure imgf000012_0003
como se define aquí, en la que R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno,
Figure imgf000012_0004
un grupo de fórmula (a-1), un grupo de fórmula (a-2), y un grupo de fórmula (a-3), en las que
R4 y R7 son cada uno independientemente fenilo o naftilo, estando cada uno de ellos opcionalmente sustituido con 1, 2, o 3 sustituyentes, seleccionados cada uno independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo de C1-C6 , alquenilo de C2-C6 , alcoxi de C1-C6 , hidroxi, y NR16R16'; en los que R16 y R16' se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo de C1-C6 ; o R4 y R7 son cada uno independientemente indolilo;
R5 y R5’ se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C6, bencilo, y fenilo; o R5 y R5', junto con el átomo de carbono al que están unidos, forman un cicloalcanodiilo de C3-C7;
R6 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7 y fenil-alquilo de C1-C6-; R8 es —OR19 o —NR20R20'; en los que R19 es alquilo de C1-C6 o cicloalquilo de C3-C7 ;
R20 es hidrógeno y R20’ es alquilo de C1-C6 o cicloalquilo de C3-C7 ; y
R9 es alquilo de C1-C6.
R2 es hidrógeno o un grupo de fórmula (b), en la que R12 es alquilo de C1-C6 ; o
R1 y R2 están unidos para formar un radical divalente de fórmula (c-1) o (c-2), en las que
R13 y R13' se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de Ci-C6, bencilo, y fenilo; o R13 y R13', junto con el átomo de carbono al que están unidos, forman un cicloalcanoC3-C7diilo;
R14 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7 y fenil-alquilo de C1-C6-; y
R15 es —OR25 o —NR26R26', en los que R25 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6 ; fenilo; cicloalquilo de C3-C7 ; y alquilo de C1-C3 sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, seleccionados cada uno independientemente del grupo que consiste en fenilo, naftilo, cicloalquilo de C3-C7 , hidroxilo y alquilC1-C6oxi; R26 es hidrógeno; y R26' es alquilo de C1-C6 o cicloalquilo de C3-C7 ;
y las sales y los solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En otra realización, la invención proporciona compuestos de Fórmula
Figure imgf000013_0001
como se define aquí, en la que
La base se selecciona del grupo que consiste en (B-1), (B-2) y (B-3a); y
R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, y N3.
En una realización particular, la invención proporciona compuestos de Fórmula
Figure imgf000013_0002
como se define aquí, en la que La base se selecciona del grupo que consiste en (B-1), (B-2) y (B-3a);
R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno,
Figure imgf000013_0003
un grupo de fórmula (a-1), un grupo de fórmula (a-2), y un grupo de fórmula (a-3), en las que
R4 y R7 son cada uno independientemente fenilo o naftilo, estando cada uno de ellos opcionalmente sustituido con 1, 2, o 3 sustituyentes, seleccionados cada uno independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo de C1-C6 , alquenilo de C2-C6 , alcoxi de C1-C6 , hidroxi, y NR16R16'; en los que R16 y R16' se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo de C1-C6 ; o R4 y R7 son cada uno independientemente indolilo;
R5 y R5’ se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C6, bencilo, y fenilo; o R5 y R5', junto con el átomo de carbono al que están unidos, forman un cicloalcanoC3-C7diilo;
R6 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7 y fenil-alquilo de C1-C6-; R8 es —OR19 o —NR20R20'; en los que R19 es alquilo de C1-C6 o cicloalquilo de C3-C7 ;
R20 es hidrógeno y R20’ es alquilo de C1-C6 o cicloalquilo de C3-C7 ; y
R9 es alquilo de C1-C6 ; y
R2 es hidrógeno o un grupo de fórmula (b), en la que R12 es alquilo de C1-C6 ; o
R1 y R2 están unidos para formar un radical divalente de fórmula (c-1) o (c-2), en las que
R13 y R13’ se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C6, bencilo, y fenilo; o R13 y R13', junto con el átomo de carbono al que están unidos, forman un cicloalcanoC3-C7diilo;
R14 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7 y fenil-alquilo de C1-C6-; R15 es —OR25 o —NR26R26', en los que R25 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6 ; fenilo; cicloalquilo de C3-C7 ; y alquilo de C1-C3 sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, seleccionados cada uno independientemente del grupo que consiste en fenilo, naftilo, cicloalquilo de C3-C7 , hidroxilo y alquilC1-C6oxi; R26 es hidrógeno; y R26’ es alquilo de C1-C6 o cicloalquilo de C3-C7 ; y
R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, y N3 ;
y las sales y los solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En otra realización , la invención proporciona compuestos de Fórmula
Figure imgf000014_0001
como se define aquí, en la que
La base se selecciona del grupo que consiste en (B-1), (B-2) y (B-3a);
R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno,
Figure imgf000014_0002
un grupo de fórmula (a-1), un grupo de fórmula (a-2), y un grupo de fórmula (a-3), en las que
R4 y R7 son cada uno independientemente fenilo o naftilo, estando cada uno de ellos opcionalmente sustituido con 1 sustituyente halo;
R5 y R5’ se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo de C1-C6;
R6 es alquilo de C1-C10.
R8 es —OR19 o —NR20R20'; en los que R19 es alquilo de C1-C6 o cicloalquilo de C3-C7 ;
R20 es hidrógeno y R20’ es alquilo de C1-C6 o cicloalquilo de C3-C7 ; y
R9 es alquilo de C1-C6 ; y
R2 es hidrógeno o un grupo de fórmula (b), en la que R12 es alquilo de C1-C6 ; o
R1 y R2 están unidos para formar un radical divalente de fórmula (c-1) o (c-2), en las que
R13 y R13’ se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo de C1-C6;
R14 es alquilo de C1-C10.
R15 es —OR25 o —NR26R26', en los que R25 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C6 y cicloalquilo de C3-C7 ; R26 es hidrógeno; y R26' es alquilo de C1-C6 o cicloalquilo de C3-C7 ; y
R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, y N3;
y las sales y los solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En otra realización, la invención proporciona compuestos de Fórmula
Figure imgf000014_0003
como se define aquí, en la que
La base se selecciona del grupo que consiste en (B-1), (B-2) y (B-3a);
R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno,
Figure imgf000014_0004
un grupo de fórmula (a-1), un grupo de fórmula (a-2), y un grupo de fórmula (a-3), en las que
R4 y R7 son cada uno fenilo opcionalmente sustituido con 1 sustituyente halo;
R5 y R5’ se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo de C1-C6;
R6 es alquilo de C1-C10.
R8 es —OR19; en el que R19 es alquilo de C1-C6 ;
R9 es alquilo de C1-C6 ; y
R2 es hidrógeno o un grupo de fórmula (b), en la que R12 es alquilo de C1-C6 ; o
R1 y R2 están unidos para formar un radical divalente de fórmula (c-2), en la que
R13 y R13' se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo de C1-C6;
R14 es alquilo de C1-C10.
R15 es —OR25 o —NR26R26', en los que R25 es cicloalquilo de C3-C7 ; R26 es hidrógeno; y R26' es cicloalquilo de C3-C7; y
R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, y N3;
y las sales y los solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En una realización adicional, la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I') como se define aquí, en la que R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno,
Figure imgf000015_0001
, y un grupo de fórmula (a-1); o R1 y R2 están unidos para formar un radical divalente de fórmula (c-2).
En otra realización, la invención proporciona compuestos de Fórmula (I') como se define aquí, en la que
La base se selecciona del grupo que consiste en (B-1), (B-2) y (B-3a);
R1 es
Figure imgf000015_0002
o un grupo de fórmula (a-1), en la que
R4 es fenilo opcionalmente sustituido con 1 sustituyente halo;
R5 y R5' se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo de C1-C6, en particular metilo;
R6 es alquilo de C1-C10, en particular i-propilo o n-butilo;
R2 es hidrógeno; y
R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, en particular fluoro, y N3 ;
y las sales y los solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En otra realización, la invención proporciona compuestos de Fórmula (I') como se define aquí, en la que
La base es (B-1); R1 es un grupo de fórmula (a-1); R2 es hidrógeno; y R3 es hidrógeno o N3 ; o
La base es (B-2); R1 es hidrógeno o un grupo de fórmula (a-1); R2 es hidrógeno; y R3 es halo, en particular fluoro, en los que
R4 es fenilo opcionalmente sustituido con 1 sustituyente halo;
R5 y R5' se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo de Ci-Ü6, en particular metilo; y
R6 es alquilo de C1-C10, en particular i-propilo;
y las sales y los solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En otra realización, la invención proporciona compuestos de Fórmula (I') como se define aquí, en la que
La base es (B-1);
R1 es un grupo de fórmula (a-1), en la que
R4 es fenilo opcionalmente sustituido con 1 sustituyente halo;
R5 y R5' se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo de C1-C6, en particular metilo;
R6 es alquilo de C1-C10, en particular i-propilo o n-butilo;
R2 es hidrógeno; y
R3 es hidrógeno o halo, en particular fluoro;
y las sales y los solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En otra realización, la invención proporciona compuestos de Fórmula (I') como se define aquí, en la que
La base se selecciona del grupo que consiste en (B-1), (B-2) y (B-3a);
R1 es
Figure imgf000016_0001
R2 es hidrógeno; y R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, en particular fluoro, y N3 ; y las sales y los solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Son de interés los compuestos 7, 9, 12, 17, 22, 31 y 45, o 9, 17, 22, 23, 25, 27, 31, 34, 39, 45 o 35 y 58 a 63 mencionados en la sección “Ejemplos”, así como las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de estos compuestos. Son de particular interés los compuestos 7, 9, 12, 17, 22, 23, 25, 27, 31,35, 39, 44, 45, 57 y 58 to 63, ya sea en forma libre (es decir, forma no salina) de estos compuestos o como una sal de adición de ácido de los mismos farmacéuticamente aceptable.
Los compuestos de Fórmula (I), en particular de Fórmula (I'), tienen varios centros de quiralidad, en particular en los átomos de carbono 1', 2', 3' y 4'. Aunque la estereoquímica en estos átomos de carbono es fija, los compuestos pueden presentar al menos 75%, preferiblemente al menos 90%, tal como más de 95% o 98% de pureza enantiomérica en cada uno de los centros quirales.
Figure imgf000016_0002
La quiralidad también puede estar presente en los sustituyentes, tal como en los que R1 es (a-1)
Figure imgf000016_0003
, que puede tener quiralidad en el carbono que porta a R5 (en el que R5 y R5 son diferentes) y en el átomo de fósforo. El centro de fósforo puede estar presente como Rp o Sp, o una mezcla de tales estereoisómeros, incluyendo los racematos. También pueden existir diastereoisómeros resultantes del centro de fósforo quiral y un átomo de carbono quiral.
Los compuestos de Fórmula (I), y en particular de Fórmula (I’), se representan con una estereoconfiguración definida en las posiciones 1 ’, 3’, 4 ’ y 5’, pero no en la posición 2’, ni, por ejemplo, en el átomo de fósforo del grupo fosforamidato cuando está presente. La configuración absoluta de tales compuestos se puede determinar usando métodos conocidos en la técnica, tales como, por ejemplo, difracción de rayos X o RMN y/o implicación a partir de materiales de partida de estereoquímica conocida. Las composiciones farmacéuticas según la invención comprenderán preferiblemente formas estereoisoméricamente puras del estereoisómero indicado del compuesto particular de Fórmula (I) o (I’). En una realización particular, el compuesto de Fórmula (I) como se define aquí tiene la Fórmula (Ia)
Figure imgf000017_0001
En una realización particular, el compuesto de Fórmula
Figure imgf000017_0002
como se define aquí tiene la Fórmula (Ia’)
Figure imgf000017_0003
En una realización particular, los compuestos de la presente invención también pretenden incluir sales farmacéuticamente aceptables del éster de 5’-trifosfato, así como sales farmacéuticamente aceptables de derivados del éster de 5’-difosfato y 5’-monofosfato de las siguientes fórmulas estructurales:
Figure imgf000017_0004
, en particular
Figure imgf000017_0005
, en las que Base, R2 y R3 son como se definen aquí; y en particular, en las que R2 es hidrógeno.
ENFOQUES SINTÉTICOS GENERALES
ESQUEMA 1
En general, los compuestos de Fórmula (I) según el alcance de la presente invención, en particular de Fórmula (I’), en los que R1 es un fosforamidato o un fosfato, denominados aquí compuestos de Fórmula (I’-a1) o (I’-a2), respectivamente, se pueden preparar según el siguiente Esquema 1 de Reacción. En dicho esquema, todas las variables se definen como según el alcance de la presente invención.
Figure imgf000018_0001
En el Esquema 1, se aplican las siguientes condiciones de reacción:
1. (i): pretratamiento con piridina, después concentración y suspensión del producto resultante en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo diclorometano seco, en presencia de una base adecuada, tal como por ejemplo metilimidazol, y se hace reaccionar con un fosforamidocloridato o fosforocloridato adecuado, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo la temperatura ambiente.
El compuesto de fórmula (II) puede ser, por ejemplo, un nucleósido desprotegido, por ejemplo el compuesto de fórmula (1) (Esquema 4), o un nucleósido protegido, por ejemplo el compuesto de fórmula (17) (Esquema 4), a partir del cual se puede escindir el grupo protector después de la reacción con el fosforamidocloridato o fosforocloridato apropiado.
ESQUEMA 2
Los reactivos de fosforamidocloridato o fosforocloridato mencionados en el Esquema 1 están disponibles comercialmente, o pueden sintetizarse mediante procedimientos conocidos por la persona experta; por ejemplo, la síntesis del fosforamidocloridato adecuado mencionado en la etapa (i) se puede preparar haciendo reaccionar un alcohol de Fórmula (III) con POCl3 en presencia de una base, tal como DIPEA, para obtener dicloruro de fosforilo (IV), que además se hace reaccionar con un aminoácido de fórmula (V) para producir el fosforamidocloridato (VI) deseado.
Figure imgf000018_0002
ESQUEMA 3
Los compuestos intermedios de Fórmula (II), en la que R2 y R3 son hidrógeno y la Base es uracilo, referidos aquí como (1), se pueden preparar según el siguiente Esquema 3 de Reacción, en el que PMB significa p-metoxibencilo, y Ms significa metanosulfonilo.
Figure imgf000019_0001
En el Esquema 3, se aplican las siguientes condiciones de reacción:
(i) (4-metoxifenil)metanotiol a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo temperatura ambiente, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo THF; mezcla enfriada a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo -40°C en presencia de una base adecuada, tal como por ejemplo KHMDS o NaH; cromatografía de columna
(ii) en presencia de un agente reductor adecuado, tal como por ejemplo hidruro de litio y aluminio en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo éter dietílico, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo 0°C; (iii) en condiciones adecuadas para formar un grupo saliente, tal como por ejemplo mesilo, mediante reacción con un agente adecuado, tal como cloruro de metanosulfonilo, en presencia de un sistema adecuado de base/disolvente, tal como por ejemplo piridina, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo temperatura ambiente;
(iv) en condiciones de reacción adecuadas para escindir el grupo protector PMB, mediante reacción con un reactivo adecuado, tal como por ejemplo acetato de mercurio (II) en presencia de un ácido adecuado, tal como por ejemplo ácido trifluoroacético, en presencia de un disolvente adecuado, tal como por ejemplo fenol, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo 0°C;
(v) en presencia de una base adecuada, tal como por ejemplo hidruro de sodio, en un disolvente adecuado, tal como tetrahidrofurano, a una temperatura adecuada, tal como a temperatura ambiente;
(vi) en condiciones adecuadas para escindir el grupo protector de alcohol, tal como por ejemplo sometiendo el compuesto de Fórmula (6) a una fuente de fluoruro, tal como por ejemplo fluoruro de amonio, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo metanol, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo la temperatura ambiente, después 50°C durante un período de tiempo suficiente para completar la reacción.
ESQUEMA 4
Alternativamente, los compuestos intermedios de Fórmula (II), en la que R3 es hidrógeno o fluoro, R1 y R2 son hidrógeno, y la Base es uracilo, citosina o una citosina protegida, tal como por ejemplo citosina protegida con un grupo protector dimetoxitritilo (DMT), aquí denominados compuestos de Fórmulas (11), (18) y (17), pueden prepararse de acuerdo con el siguiente Esquema 4 de Reacción.
Figure imgf000020_0001
En el Esquema 4, se aplican las siguientes condiciones de reacción:
(i) a una temperatura adecuada, tal como temperatura ambiente, en un disolvente adecuado, tal como tetrahidrofurano, mediante reacción con yodo en presencia de trifenilfosfina y una base adecuada, tal como piridina;
(ii) mediante reacción con una base adecuada, tal como por ejemplo metóxido de sodio, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo metanol, a una temperatura adecuada, tal como a reflujo;
(iii) en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo una mezcla de acetonitrilo y tetrahidrofurano, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo -15°C, mediante reacción con trihidrofluoruro de trietilamina, seguido de N-yodosuccinimida, seguido de reacción con cloruro de benzoílo en presencia de una base, tal como por ejemplo trietilamina en presencia de un catalizador tal como 4-(dimetilamino)piridina a una temperatura adecuada, tal como 0°C, seguida de temperatura ambiente;
(iv) a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo 120°C, en un disolvente adecuado, tal como dimetilformamida, mediante reacción con benzoato de sodio en presencia de un agente complejante, tal como por ejemplo 15-corona-5;
(v) en condiciones adecuadas para escindir el grupo protector de alcohol, tal como por ejemplo sometiendo el compuesto de Fórmula (10) a amoniaco, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo metanol, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo temperatura ambiente;
(vi) en condiciones adecuadas para formar un alcohol protegido, tal como por ejemplo mediante reacción con anhídrido isobutírico, en presencia de una base adecuada, tal como por ejemplo piridina, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo tolueno, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo 0°C, y posteriormente permitiendo que alcance la temperatura ambiente;
(vii) -(viii): a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo temperatura ambiente, mediante reacción con un reactivo adecuado, tal como por ejemplo cloruro de 2,4,6-triisopropilbencenosulfonilo, en presencia de una base adecuada, tal como trietilamina, y un catalizador tal como 4-(dimetilamino)piridina, seguido de reacción con amoniaco;
(ix) en condiciones adecuadas para escindir el grupo protector de alcohol, tal como por ejemplo sometiendo el compuesto de Fórmula (10) a amoníaco, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo metanol, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo temperatura ambiente;
(x) : a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo a temperatura ambiente, mediante reacción con 1,3-dicloro-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxano en presencia de una base, tal como por ejemplo trietilamina en presencia de un catalizador, tal como por ejemplo 4-(dimetilamino)piridina, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo diclorometano, durante un período de tiempo suficiente para completar la reacción; seguido de reacción con amoniaco, agitando vigorosamente;
(xi) : a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo temperatura ambiente, mediante reacción con un agente de grupo protector, tal como por ejemplo 4,4’-(cloro(fenil)metilen)bis(metoxibenceno) en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo diclorometano, en presencia de nitrato de plata y 2,3,5-trimetilpiridina;
(xii) : en condiciones adecuadas para escindir el grupo protector de alcohol, tal como por ejemplo sometiendo el compuesto de Fórmula (16) a una fuente de fluoruro, tal como por ejemplo TBAF, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo tetrahidrofurano, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo la temperatura ambiente, durante un período de tiempo suficiente para completar la reacción;
(xiii) : en condiciones adecuadas para escindir el grupo protector de amino, tal como por ejemplo sometiendo el compuesto de Fórmula (17) a un ácido, tal como por ejemplo ácido trifluoroacético, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo en diclorometano, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo temperatura ambiente;
(xiv) : a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo temperatura ambiente, mediante reacción con un reactivo adecuado, tal como por ejemplo cloruro de 2,4,6-triisopropilbencenosulfonilo, en presencia de una base adecuada, tal como trietilamina y un catalizador tal como 4-(dimetilamino)piridina, seguida de reacción con amoniaco;
(xv) : en condiciones adecuadas para escindir el grupo protector de alcohol, tal como por ejemplo sometiendo el compuesto de Fórmula (19) a amoníaco, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo metanol, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo temperatura ambiente.
ESQUEMA 5
Alternativamente, los compuestos intermedios de Fórmula (II), en la que R3 es azida y la base es uracilo, denominados aquí compuestos de Fórmula (22), en los que PG y PG’ representan grupos protectores de alcohol adecuados, tal como por ejemplo benzoílo, se pueden preparar según el siguiente Esquema 5 de Reacción.
Figure imgf000021_0001
En el Esquema 5, se aplican las siguientes condiciones de reacción:
(i) a una temperatura adecuada, tal como la temperatura ambiente, en un disolvente adecuado, tal como THF, mediante reacción con azida sódica en presencia de cloruro de N-bencil-N,N-dietiletanaminio y NMM durante un período de tiempo suficiente para completar la reacción, seguido de la adición de yodo en un disolvente adecuado, tal como tetrahidrofurano, a una temperatura adecuada, tal como la temperatura ambiente, durante un período de tiempo suficiente, tal como aproximadamente 5 h, seguido de la adición de N-acetil-cisteína hasta que no se observó desprendimiento de gas, y Na2S2Ü3 acuoso saturado.
(ii) en condiciones adecuadas para formar un alcohol protegido, tal como por ejemplo mediante reacción con cloruro de benzoílo, en presencia de una base adecuada, tal como por ejemplo Et3N, y un catalizador tal como DMP, en un solvente adecuado, tal como por ejemplo THF, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo 0°C, y posteriormente permitiendo que alcance la temperatura ambiente;
(iii) en condiciones adecuadas para formar un alcohol protegido, tal como por ejemplo mediante reacción con benzoato de sodio, en presencia de un agente complejante tal como 15-corona-5, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo DMF, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo 120°C, durante un período de tiempo suficiente para completar la reacción, por ejemplo 12 h.
(iv) en condiciones adecuadas para escindir el grupo protector de alcohol, tal como por ejemplo sometiendo el compuesto de Fórmula (22) a amoníaco, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo metanol, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo temperatura ambiente.
El compuesto 22 puede someterse entonces a una interconversión adicional de grupos funcionales en un nucleósido que porta una base diferente, por ejemplo siguiendo procedimientos análogos a los descritos en el Esquema 4 aquí anteriormente.
ESQUEMA 6
Los compuestos de Fórmula (I) o (I’), en los que R1 y R2 se unen para formar un grupo de tipo fosfato o fosforamidato cíclico o derivado del mismo, denominados aquí compuesto de Fórmula
Figure imgf000022_0001
a3), se pueden preparar según el siguiente Esquema 6 de Reacción.
Figure imgf000022_0002
En el Esquema 6, se aplican las siguientes condiciones de reacción:
(i) pretratamiento con piridina, después concentración y tratamiento del producto resultante con un fosforocloridato o fosforamidocloridato apropiado, a una temperatura adecuada, tal como temperatura ambiente, en un disolvente adecuado, tal como DCM, mediante reacción con N-metilimidazol, durante un un período de tiempo suficiente para completar la reacción, seguido de un tratamiento con una base adecuada, tal como tBuOK en presencia de un disolvente adecuado, tal como por ejemplo THF, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo la temperatura ambiente, durante un período de tiempo suficiente para completar la reacción.
Los reactivos de fosforocloridato o fosforamidocloridato están comercialmente disponibles, o pueden sintetizarse según procedimientos conocidos por la persona experta.
ESQUEMA 7
Alternativamente, los compuestos intermedios de Fórmula (II), en los que R2, R3 son hidrógeno, y la base es guanina, denominados aquí un compuesto de Fórmula (24), se pueden preparar según el siguiente Esquema 7 de Reacción.
Figure imgf000023_0001
(i) a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo a temperatura ambiente, mediante reacción de guanosina
con 1,3-dicloro-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxano en presencia de una base, tal como por ejemplo imidazol, en
un disolvente adecuado, tal como por ejemplo DMF, durante un período de tiempo suficiente para completar
la reacción;
(ii) a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo a 0°C, en un disolvente adecuado, tal como DCM, mediante
reacción con peryodinano de Dess Martin;
(iii) a una temperatura adecuada, tal como a temperatura ambiente, en un disolvente adecuado, tal como 20°C,
mediante reacción con un trifenilfosfanilidenoacetato de alquilo adecuado;
(iv) mediante reacción con (4-metoxifenil)metanotiol a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo a
temperatura ambiente, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo THF, después enfriado a una
temperatura adecuada, tal como por ejemplo -40°C, en presencia de una base adecuada, tal como por
ejemplo KHMDS;
(v) en un disolvente adecuado, tal como piridina, a una temperatura adecuada, tal como a temperatura ambiente,
mediante reacción con anhídrido isobutírico, seguido de la adición de TEA, y posteriormente elevando la
temperatura, por ejemplo hasta 80°C, durante un tiempo suficiente para permitir la finalización de la reacción;
(vi) en presencia de un agente reductor adecuado, tal como por ejemplo hidruro de litio y aluminio, en un disolvente
adecuado, tal como por ejemplo THF, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo 0°C, seguido de
temperatura ambiente;
(vii) en condiciones adecuadas para formar un grupo saliente, tal como por ejemplo mesilo, mediante reacción
con un agente adecuado, tal como cloruro de metanosulfonilo, en presencia de un sistema adecuado de
base/disolvente, tal como por ejemplo piridina, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo
temperatura ambiente;
(viii) en condiciones de reacción adecuadas para escindir el grupo protector PMB, mediante reacción con un
reactivo adecuado, tal como por ejemplo acetato de mercurio (II), en presencia de un ácido adecuado,
utilizado como disolvente, tal como por ejemplo ácido trifluoroacético, en presencia de un exceso de fenol, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo 0°C, seguido de la adición de 1,4-dimercaptobutano-2,3-diol a 0°C;
(ix) en presencia de una base adecuada, tal como por ejemplo hidruro de sodio, en un disolvente adecuado, tal como tetrahidrofurano, a una temperatura adecuada, tal como a temperatura ambiente;
(x) en condiciones adecuadas para escindir el grupo protector de amino, tal como por ejemplo tratando el compuesto de Fórmula (32) con amoniaco, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo metanol, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo temperatura ambiente;
(xi) en condiciones adecuadas para escindir el grupo protector de alcohol, tal como por ejemplo sometiendo el compuesto de Fórmula (33) a una fuente de fluoruro, tal como por ejemplo fluoruro de amonio, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo metanol, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo la temperatura ambiente, después 50°C durante un período de tiempo suficiente para completar la reacción.
ESQUEMA 8
Alternativamente, los compuestos intermedios de Fórmula (II), en los que R2, R3 son hidrógeno, y la base es adenina, denominados aquí un compuesto de Fórmula (42), se puede, preparar según el siguiente Esquema 8 de Reacción.
Figure imgf000024_0001
En el Esquema 8, se aplican las siguientes condiciones de reacción:
(i) a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo a temperatura ambiente, mediante reacción de adenosina con 1,3-dicloro-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxano en presencia de una base, tal como por ejemplo imidazol, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo DMF, durante un período suficiente para completar la reacción; (ii) utilizando un grupo protector de oxígeno adecuado, tal como TMS, a una temperatura adecuada, tal como temperatura ambiente, en un disolvente adecuado, tal como piridina, el grupo amina se protegió usando un grupo protector adecuado, tal como el grupo parametoxibenzoílo.
(iii) a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo a 0°C, en un disolvente adecuado, tal como DCM, mediante reacción con peryodinano de Dess Martin;
(iv) a una temperatura adecuada, tal como a temperatura ambiente, en un disolvente adecuado, tal como 20°C, mediante reacción con un trifenilfosfanilidenoacetato de alquilo adecuado;
(v) mediante reacción con 3-mercaptopropanonitrilo a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo temperatura ambiente, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo THF, después enfriado a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo 0°C, en presencia de una base adecuada, tal como por ejemplo NaH;
(vi) en presencia de un agente reductor adecuado, tal como por ejemplo hidruro de litio y aluminio, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo THF, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo -60°C;
(vii) en condiciones adecuadas para formar un grupo saliente, tal como por ejemplo mesilo, mediante reacción con un agente adecuado, tal como cloruro de metanosulfonilo, en presencia de un sistema adecuado de base/disolvente, tal como por ejemplo piridina, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo temperatura ambiente; después en presencia de una base adecuada, tal como por ejemplo terbutóxido de potasio, en un disolvente adecuado, tal como tetrahidrofurano, a una temperatura adecuada, tal como a -78°C;
(viii) en condiciones adecuadas para escindir el grupo protector de alcohol, tal como por ejemplo sometiendo el compuesto de Fórmula (40) a una fuente de fluoruro, tal como por ejemplo fluoruro de amonio, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo metanol, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo la temperatura ambiente, durante un período suficiente para completar la reacción.
(ix) en condiciones adecuadas para escindir el grupo protector de amino, tal como por ejemplo tratando el compuesto de Fórmula (41) con amoniaco, en un disolvente adecuado, tal como por ejemplo metanol, a una temperatura adecuada, tal como por ejemplo 70°C;
Farmacología
Se ha encontrado que los compuestos de la presente invención muestran actividad contra Flaviviridae y/o alfavirus, en particular los virus VHC, del dengue y/o chikungunya y/o virus Sindbis y/o virus del Bosque Simliki.
Por lo tanto, en una realización, la invención proporciona compuestos de Fórmula (I) y los fosfatos, y sus sales y solvatos farmacéuticamente aceptables, para uso en el tratamiento o prevención (o la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención) de la infección por VHC. Esta última incluye fibrosis hepática progresiva, inflamación y necrosis que conducen a cirrosis, hepatopatía Terminal, y HCC.
La actividad antiviral in vitro contra el VHC de los compuestos de Fórmula (I) se puede probar en un sistema de replicón celular del VHC basado en Lohmann et al. (1999) Science 285:110-113, con las modificaciones adicionales descritas por Krieger et al. (2001) Journal of Virology 75: 4614-4624 (incorporado aquí como referencia), que se ejemplifica adicionalmente en la sección de ejemplos. Este modelo, aunque no es un modelo de infección completo para el VHC, es ampliamente aceptado como el modelo más sólido y eficiente de replicación autónoma del ARN del VHC disponible actualmente. Se apreciará que es importante distinguir entre compuestos que interfieren específicamente con las funciones del VHC de aquellos que ejercen efectos citotóxicos o citostáticos en el modelo de replicón del VHC, y como consecuencia, provocan una disminución del ARN del VHC o de la concentración de la enzima informadora ligada. Se conocen en el campo ensayos para la evaluación de la citotoxicidad celular basados, por ejemplo, en la actividad de enzimas mitocondriales utilizando colorantes redox fluorogénicos tales como resazurina. Además, existen cribados de contadores celulares para la evaluación de la inhibición no selectiva de la actividad del gen indicador vinculado, tal como la luciferasa de luciérnaga. Los tipos de células apropiados pueden equiparse mediante transfección estable con un gen indicador de luciferasa cuya expresión depende de un promotor génico constitutivamente activo, y tales células pueden usarse como un contra-cribado para eliminar inhibidores no selectivos.
En una realización adicional, la invención proporciona compuestos de Fórmula (I) y los fosfatos, y las sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, para uso en el tratamiento o prevención (o la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención) de la infección viral de dengue.
En aún otra realización, la invención proporciona compuestos de Fórmula (I) y los fosfatos, y las sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, para uso en el tratamiento o prevención (o la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención) de la infección por el virus chikungunya y/o Sindbis y/o del bosque Simliki.
Debido a sus propiedades antivirales, los compuestos de Fórmula (I), incluyendo cualesquiera posibles estereoisómeros, y los fosfatos, y las sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, pueden ser útiles en el tratamiento de animales de sangre caliente, en particular seres humanos, infectados con Flaviviridae y/o alfavirus, y en la prevención de infecciones por Flaviviridae y/o alfavirus. Por lo tanto, los compuestos de la presente invención pueden usarse como medicamento, en particular como medicamento anti-viral o inhibidor de virus Flaviviridae y/o alfavirus. La presente invención también se refiere al uso de los presentes compuestos en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de una infección por Flaviviridae y/o alfavirus. En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un compuesto para uso en un método de tratamiento de un animal de sangre caliente, en particular un ser humano, infectado por Flaviviridae y/o alfavirus, o que está en riesgo de infectarse por Flaviviridae y/o alfavirus, comprendiendo dicho método la administración de una cantidad eficaz anti-Flaviviridae y/o anti-alfavirus de un compuesto de Fórmula (I), como se especifica aquí. Dicho compuesto para uso como medicamento o para uso en un método de tratamiento comprende la administración sistémica a sujetos infectados por Flaviviridae y/o alfavirus o a sujetos susceptibles a la infección por Flaviviridae y/o alfavirus de una cantidad eficaz para combatir las afecciones asociadas con infección por Flaviviridae y/o alfavirus.
En una realización particular, el Flavivirus se selecciona del virus de la hepatitis C y virus del dengue. En una realización adicional, el Flavivirus es el virus de la hepatitis C. En otra realización, el Flavivirus es el virus del dengue. En otra realización, el alfavirus se selecciona del virus chikungunya y virus Sindbis y virus del bosque Simliki, en particular el virus chikungunya.
En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz, en particular una cantidad antiviralmente eficaz, de un compuesto de Fórmula (I) como se especifica aquí, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Dicha composición puede contener de 1% a 50%, o de 10% a 40% de un compuesto de Fórmula (I), y el resto de la composición es el mencionado vehículo. Una cantidad terapéuticamente eficaz, en particular una cantidad antiviralmente eficaz, en este contexto, es una cantidad suficiente para actuar de forma profiláctica contra la infección por Flavivirus y/o alfavirus, para inhibir el Flavivirus y/o alfavirus, para estabilizar o para reducir la infección por Flavivirus y/o alfavirus, en sujetos infectados o sujetos que están en riesgo de infectarse. En todavía un aspecto adicional, esta invención se refiere a un procedimiento para preparar una composición farmacéutica como se especifica aquí, que comprende mezclar íntimamente un vehículo farmacéuticamente aceptable con una cantidad terapéuticamente eficaz, en particular una cantidad antiviralmente eficaz, de un compuesto de Fórmula (I), como se especifica aquí.
Los compuestos de Fórmula (I) o de cualquier subgrupo de los mismos se pueden formular en diversas formas farmacéuticas con fines de administración. Como composiciones apropiadas, pueden citarse todas las composiciones empleadas habitualmente para administrar fármacos por vía sistémica. Para preparar las composiciones farmacéuticas de esta invención, una cantidad eficaz del compuesto particular, opcionalmente en forma de sal de adición o complejo metálico, como ingrediente activo, se combina en una mezcla íntima con un vehículo farmacéuticamente aceptable, vehículo el cual puede tomar una amplia variedad de formas, dependiendo de la forma de preparación deseada para la administración. Estas composiciones farmacéuticas son deseables en una forma de dosificación unitaria adecuada, particularmente para la administración por vía oral, rectal, percutánea o por inyección parenteral. Por ejemplo, al preparar las composiciones en forma de dosificación oral, se puede emplear cualquiera de los medios farmacéuticos habituales tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes, y similares, en el caso de preparaciones líquidas orales tales como suspensiones, jarabes, elixires, emulsiones, y disoluciones; o vehículos sólidos tales como almidones, azúcares, caolín, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes, y similares, en el caso de polvos, píldoras, cápsulas, y comprimidos. Debido a su facilidad de administración, los comprimidos y las cápsulas representan las formas unitarias de dosificación oral más ventajosas, en cuyo caso obviamente se emplean soportes farmacéuticos sólidos. Para las composiciones parenterales, el soporte comprenderá generalmente agua estéril, al menos en gran parte, aunque pueden incluirse otros ingredientes, por ejemplo, para ayudar a la solubilidad. Se pueden preparar soluciones inyectables, por ejemplo, en las que el soporte comprende solución salina, solución de glucosa o una mezcla de solución salina y solución de glucosa. También se pueden preparar suspensiones inyectables, en cuyo caso se pueden emplear vehículos líquidos apropiados, agentes de suspensión, y similares. También se incluyen preparaciones en forma sólida destinadas a convertirse, poco antes de su uso, en preparaciones en forma líquida. En las composiciones adecuadas para la administración percutánea, el vehículo comprende opcionalmente un agente potenciador de la penetración y/o un agente humectante adecuado, opcionalmente combinado con aditivos adecuados de cualquier naturaleza en proporciones menores, aditivos que no introducen un efecto perjudicial significativo sobre la piel. Los compuestos de la presente invención también se pueden administrar mediante inhalación o insuflación oral en forma de disolución, suspensión, o polvo seco, usando cualquier sistema de administración conocido en la técnica.
Es especialmente ventajoso formular las composiciones farmacéuticas mencionadas anteriormente en forma de dosificación unitaria para facilidad de administración y uniformidad de dosificación. Forma de dosificación unitaria, tal como se utiliza en esta memoria, se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias, conteniendo cada una de las unidades una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el soporte farmacéutico requerido. Ejemplos de tales formas de dosificación unitaria son comprimidos (incluyendo comprimidos ranurados o recubiertos), cápsulas, píldoras, supositorios, paquetes de polvo, obleas, disoluciones o suspensiones inyectables, y similares, y múltiplos separados de los mismos.
En general, se contempla que una cantidad diaria eficaz antiviral sería de alrededor de 1 a alrededor de 200 mg/kg, o de alrededor de 5 a alrededor de 175 mg/kg, o de alrededor de 10 a alrededor de 150 mg/kg, o de alrededor de 20 a alrededor de 100 mg/kg, o de alrededor de 50 a alrededor de 75 mg/kg de peso corporal. Las dosis diarias promedio se pueden obtener multiplicando estas cantidades diarias por alrededor de 70. Puede ser apropiado administrar la dosis requerida como dos, tres, cuatro o más sub-dosis a intervalos apropiados a lo largo del día. Dichas subdosis se pueden formular como formas de dosificación unitarias, por ejemplo que contienen alrededor de 1 a alrededor de 5000 mg, o alrededor de 50 a alrededor de 3000 mg, o alrededor de 100 a alrededor de 1000 mg, o alrededor de 200 a alrededor de 600 mg, o alrededor de 100 mg a alrededor de 400 mg de ingrediente activo por forma de dosificación unitaria.
EJEMPLOS
Varios métodos para preparar los compuestos de esta invención se ilustran en los siguientes Ejemplos. Salvo que se indique de otro modo, todos los materiales de partida se obtuvieron de proveedores comerciales y se usaron sin purificación adicional.
En adelante, el término “KHMDS” significa hexametildisilazida de potasio, “THF” significa tetrahidrofurano, “EA” o “EtOAc” significa acetato de etilo, “PE” significa éter de petróleo, “TFA” significa ácido trifluoroacético, “MeOH” significa metanol, “TIPSCl” significa cloruro de triisopropilsililo, “DCM” significa diclorometano, “TBAF” significa fluoruro de tetrabutilamonio, “prep” significa preparativa, “HPLC” significa cromatografía de líquidos de altas prestaciones, “TPP” significa trifenilfosfina, “NMI” significa N-metilimidazol, “NaOMe” significa metóxido de sodio, “CAN” o “MeCN” significa acetonitrilo, “NIS” significa N-yodosuccinimida, “DMAP” significa 4-dimetilaminopiridina, “TPSCl” significa cloruro de 2,4,6-triisopropilbencenosulfonilo, “DIPEA” significa N,N-diisopropiletilamina, “DBU” significa 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno, “NMM” significa 4-metilmorfolina, “MS” significa espectrometría de masas, “ES” significa electropulverización, “DMSO” significa dimetilsulfóxido, “DMP” significa peryodinano de Dess-Martin, “TEA” significa trimetilamina, “RT” significa temperatura ambiente, “LC-MS” significa cromatografía de líquidosespectrometría de masas, “MsCl” significa cloruro de metanosulfonilo (o mesilo).
El análisis LC-MS se realizó utilizando uno de los siguientes métodos. Los datos de RMN se registraron en un espectrómetro Bruker de 400 MHz.
La purificación mediante HPLC preparatoria se realizó según los siguientes métodos:
Método A: Fase estacionaria: Uptisphere C18 ODB - 10 gm, 200 g, 5 cm; Fase móvil: disolución de NH4 HCO3 al 0,25% en agua, CH3CN
Método B: Fase estacionaria: RP XBridge Prep C18 OBD-10 gm, 30x150 mm; Fase móvil: disolución de NH4HCO3 al 0,25% en agua, CH3CN
Método C: Fase estacionaria: RP SunFire Prep C18 OBD-10 gm, 30x150 mm; Fase móvil: disolución de NH4HCO3 al 0,25% en agua, CH3CN
Método D: Fase estacionaria: RP XBridge Prep C18 ODB- 5 gm, 30 x 250 mm; Fase móvil: disolución de NH4HCO3 al 0,25% en agua, MeOH
Los siguientes esquemas están destinados a ser ilustrativos y de ninguna manera limitan el alcance.
Esquema 1 Síntesis de 1-((4R,5R,7R,8R)-8-hidroxi-7-(hidroximetil)-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-5-il)pirimidin-2,4(1H,3H)-diona 7
Figure imgf000027_0001
Etapa 1: Síntesis de 2-((6aR,8R,9R,9aR)-8-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropil-9-((4-metoxibencil)tio)tetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il)acetato de etilo 2b
(4-Metoxifenil)metanotiol CAS[258-60-22] (69,4 g, 450,6 mmoles) en THF (5 l) se agitó a 20°C bajo nitrógeno. La mezcla se enfrió a -40°C, y después se añadió gota a gota KHMDS (1 M, 495,7 ml, 495,7 mmoles). El líquido viscoso blanco resultante se agitó durante 30 min, y después se añadió el intermedio 1 (250 g, 450,6 mmoles) en THF (1 l) a -40°C. La mezcla de reacción se dejó calentar lentamente a 20°C y se agitó durante 2 h. La mezcla de reacción se inactivó mediante la adición de una disolución acuosa 1 N de HCl (2 l), y después se extrajo con EtOAc (2x2 l). La capa orgánica se lavó sucesivamente con una disolución acuosa de bicarbonato de sodio (2 l), salmuera (2 l), se secó sobre Na2SO4, y se evaporó. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna (PE/EA = 20/1 a 3/1) para producir el compuesto 2b (159 g, 50%) como un aceite incoloro.
m/z = 710 (M+H)+; 1H RMN: (400 MHz, CDCh):58,26 (s, 1 H), 7,82 (d, J=8,0 Hz, 1 H), 7,29 (d, J=8,4 Hz, 2 H), 6,85 (d, J=8,4 Hz, 2 H), 6,28 (s, 1 H), 5,66-5,63 (m, 1 H), 5,34-5,30 (m, 1 H), 4,41-4,23 (m, 1 H), 4,19-4,04 (m, 5 H), 3,80-3,78 (m, 4 H), 3,23-3,19 (m, 1 H), 2,92 (d, J=16,4 Hz, 1 H), 1,30-0,86 (m, 51 H).
Etapa 2: Síntesis de 1-((6aR,8R,9R,9aR)-9-(2-hidroxietil)-2,2,4,4-tetraisopropil-9-((4-metoxibencil)tio)tetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il)pirimidin-2,4(1H,3H)-diona 3
Se suspendió hidruro de litio y aluminio (4 g, 105 mml) en éter dietílico (1,5 l) bajo nitrógeno a 0°C, y después se añadió lentamente el intermedio 2b (50 g, 70 mmoles) en éter (200 ml) a 0°C. La disolución turbia de color blanco resultante se agitó a 20°C durante 16 h. La mezcla de reacción se inactivó mediante la adición de una disolución acuosa 1 N de HCl (1 l), y después se extrajo con EtOAc (2 x 1 l). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se evaporó. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna (PE/EA = 10/1 a 1/1) para producir el compuesto 3 (27,8 g, 60%) como un aceite incoloro.
m/z = 668 (M+H)+; 1H RMN: (400 MHz, CDCb):58,78 (s, 1 H), 7,89 (d, J=8 Hz, 1 H), 7,30 (d, J=8,4 Hz, 2 H), 6,85 (d, J=8,8 Hz, 2 H), 6,35 (s, 1 H), 5,73 (d, J=8 Hz, 1 H), 4,36-3,91 (m, 12 H), 3,79 (s, 3 H), 2,23-2,20 (m, 2 H), 1,78-1,73 (m, 1 H), 1,11-0,97 (m, 30 H).
Etapa 3: Síntesis de metanosulfonato de 2-((6aR,8R,9R,9aR)-8-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropil-9-((4-metoxibencil)tio)tetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il)etilo 4
Se disolvió el intermedio 3 (50 g, 75 mmoles) en piridina (500 ml) bajo nitrógeno a 25°C, después se añadió lentamente cloruro de mesilo (12,8 g, 112,5 mmoles) a 25°C. La disolución amarilla resultante se agitó a 25°C durante 16 h. La mezcla de reacción se inactivó mediante la adición de una disolución acuosa 1 N de HCl (1 l), y después se extrajo con EtOAc (2 x 1 l). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se evaporó. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna (PE/EA = 10/1 a 1/1) para producir el compuesto 4 (43 g, 78%) como un aceite incoloro. m/z = 746 (M+H)+
1H RMN: (400 MHz, CDCb): ó 8,56 (s, 1 H), 7,92 (d, J=8,4 Hz, 1 H), 7,31 (d, J=8,8 Hz, 2 H), 6,87-6,85 (m, 2 H), 6,27 (s, 1 H), 5,77-5,74 (m, 1 H), 4,55-4,53 (m, 2 H), 4,38-4,02 (m, 8 H), 3,79 (s, 3 H), 2,95 (s, 3 H), 2,28-2,21 (m, 1 H), 1,12-1,01 (m, 31 H).
Etapa 4: Síntesis de metanosulfonato de 2-((6aR,8R,9R,9aR)-8-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropil-9-mercaptotetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il)etilo 5
Al intermedio 4 (62 g, 83,2 mmoles) en TFA (250 ml) a 25°C, se le añadieron lentamente acetato de mercurio (53 g, 166,4 mmoles) y fenol (39,1 g, 416 mmoles) a 0°C. La disolución de color rojo oscuro resultante se agitó a 0°C durante 1 h. Se añadió 1,4-dimercaptobutano-2,3-diol (25,6 g, 166,4 mmoles) a 0°C. La mezcla resultante se agitó 10 min, y después se filtró sobre celite® y se lavó con acetato de etilo (1 l). El pH se ajustó a 7 mediante la adición de una disolución acuosa de bicarbonato de sodio. La mezcla resultante se filtró sobre celite® y se extrajo con EtOAc (2 x 1 l). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se evaporó a 25°C para dar el intermedio 5 (64 g, bruto) como un aceite marrón.
Etapa 5: Síntesis de 1-((2’R,6aR,8R,9aR)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidroespiro[furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9,2’-tietan]-8-il)pirimidin-2,4(1 H,3H)-diona 6
El intermedio 5 (57 g, 91 mmoles) se disolvió en THF (500 ml) a 20°C bajo nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a 0°C, y después se añadió lentamente hidruro de sodio (3,6 g, 135 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a 20°C durante 16 h. La mezcla de reacción se inactivó mediante la adición de una disolución acuosa 1 N de HCl (1 l), y después se extrajo con EtOAc (2 x 1 l). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se evaporó. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna (PE/EA = 10/1 a 5/1) para producir el compuesto 6 (18,3 g, 46%, 2 etapas) como un aceite incoloro.
m/z = 529 (M+H)+
1H RMN: (400MHz, CDCb): 58,55 (s, 1 H), 7,93 (d, J=8 Hz, 1 H), 6,58 (s, 1 H), 5,69 (d, J=8 Hz, 1 H), 4,20-4,17 (m, 1 H), 4,05-3,96 (m, 2 H), 3,54-3,51 (m, 1 H), 3,33-3,32 (m, 1 H), 2,96-2,87 (m, 2 H), 2,85-2,69 (m, 1 H), 1,17­ 0,98 (m, 30 H).
Etapa 6: Síntesis de 1-((4R,5R,7R,8R)-8-hidroxi-7-(hidroximetil)-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-5-il)pirimidin-2,4(1H,3H)-diona 7
El intermedio 6 (50 g, 94,5 mmoles) se disolvió en metanol (500 ml) a 20°C bajo nitrógeno. Se añadió fluoruro de amonio (10,5 g, 283,6 mmoles) a 20°C. La mezcla de reacción se agitó a 50°C durante 16 h. La mezcla de reacción se dejó enfriar a RT, y después el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna (DCM/MeOH: 100/1 a 10/1) para producir (11,2 g, 42%) de 7 en forma de un sólido blanco. m z = 287 (M+H)+
1H RMN: (400MHz, DMSO-d6): ó 8,00 (d, J=8 Hz, 1 H), 6,39 (s, 1 H), 5,68 (d, J=6,4 Hz, 1 H), 5,61 (d, J=8,4 Hz, 1 H), 5,22 (t, J=4,8 Hz, 1 H), 3,92-3,89 (m, 1 H), 3,72-3,71 (m, 1 H), 3,59-3,57 (m, 1 H), 3,38 (d, J=8,4 Hz, 1 H), 3,12-2,94 (m, 1 H), 2,85-2,81 (m, 2 H), 2,47-2,44 (m, 1 H).
Esquema 2 Síntesis de (2S)-2-(((((4R,5R,7R,8R)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2H)-il)-8-hidroxi-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-7-il)metoxi)(fenoxi)fosforil)amino)propanoato de isopropilo 9
Figure imgf000029_0001
Etapa 1: Síntesis de (2S)-2-((cloro(fenoxi)fosforil)amino)propanoato de isopropilo 8
A una disolución de hidrocloruro de (S)-2-aminopropanoato de isopropilo (5 g, 29,8 mmoles) en diclorometano (50 ml), se añadió fosforodicloridato de fenilo (4,45 g, 29,8 mmoles) a 20°C. La mezcla resultante se enfrió a -78°C, y después se añadió gota a gota diisopropiletilamina (10,4 ml, 59,6 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a -78°C durante 1 h, y después se dejó que la temperatura de la reacción subiera a 20°C. Después de 1 h, el disolvente se eliminó a presión reducida.
Se añadió Et2O seco (alrededor de 50 ml), y el precipitado formado se separó por filtración y se lavó dos veces con Et2O bajo nitrógeno. El filtrado se evaporó hasta sequedad para dar un aceite incoloro amarillo 8 (8,32 g) que se almacenó como una disolución 1 M en tetrahidrofurano (THF) seco en el congelador a -20°C.
1H RMN (400 MHz, CDCh) 5 ppm 1,24 - 1,31 (m, 6 H), 1,50 (dd, J=7,0, 2,1 Hz, 3 H), 4,06 - 4,20 (m, 1 H), 4,23 - 4,41 (m, 1 H), 5,02 - 5,14 (m, 1 H), 7,19 - 7,30 (m, 3 H), 7,34-7,41 (m, 2 H).
Etapa 2: Síntesis de (2S)-2-(((((4R,5R,7R,8R)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2H)-il)-8-hidroxi-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-7-il)metoxi)(fenoxi)fosforil)amino)propanoato de isopropilo 9
El compuesto 7 (500 mg, 1,7 mmoles) se disolvió en piridina seca (15 ml) y se agitó durante 1 h a RT, y después se evaporó hasta sequedad.
El precipitado resultante se suspendió en diclorometano seco (15 ml), y se añadió gota a gota metilimidazol (1,3 ml, 17,4 mmoles). La disolución resultante se trató con disolución 1 M de fosforocloridato 8 (2,62 ml, 2,62 mmoles) en THF seco bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó a 20°C durante 16 h, y se diluyó con DCM (20 ml), y se lavó con una disolución acuosa de HCl 1 M (3 x 20 ml). Las capas acuosas combinadas se extrajeron con DCM (30 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (gradiente de DCM/MeOH de 1 a 10%) para producir (100 mg, 12%) de 9 como una espuma blanca.
m/z = 556 (M+H)+; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 ppm 1,18 - 1,26 (m, 6 H), 1,30 - 1,38 (m, 2 H), 2,62 (s, 1 H), 2,66 -2,90 (m, 2 H), 3,01 (td, J=8,7, 5,6 Hz, 1 H), 3,14 - 3,22 (m, 1 H), 3,46 - 3,63 (m, 1 H), 3,70 (s, 1 H), 3,85 - 4,04 (m, 3 H), 4,32 - 4,54 (m, 2 H), 4,97 - 5,07 (m, 1 H), 5,59 - 5,65 (m, 1 H), 6,50 - 6,55 (m, 1 H), 7,15 - 7,25 (m, 3 H), 7,30 - 7,37 (m, 2 H), 7,46 - 7,55 (m, 1 H), 9,07 (s a, 1 H).
Esquema 3 Síntesis de 4-amino-1-((4R,5R,7R,8R)-8-hidroxi-7-(hidroximetil)-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-5-il)pirimidin-2(1H)-ona 12
Figure imgf000030_0001
Etapa 1: Síntesis de isobutirato de (4R,5R,7R,8R)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2H)-il)-7-((isobutiriloxi)metil)-6-oxa-1 -tiaespiro[3.4]octan-8-ilo 10
El compuesto 7 (1 g, 3,5 mmoles) se evaporó dos veces con tolueno, después se disolvió en piridina seca, y la disolución se enfrió a 0°C bajo nitrógeno. A la disolución resultante se le añadió anhídrido isobutírico (2,9 ml, 17,5 mmoles), y la mezcla se agitó a 20°C durante la noche.
La mezcla de reacción se inactivó con MeOH y se agitó a 20°C durante 1 h. Los volátiles se evaporaron a vacío, y el bruto se purificó por cromatografía en columna (gradiente de heptano y EtOAc de 1 a 30%) para producir 10 (1,16 g, 77%) como un sólido blanco.
m/z = 427 (M+H)+; 1H RMN (360 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 1,06 - 1,24 (m, 12 H), 2,52 - 2,60 (m, 1 H), 2,67 - 2,92 (m, 5 H), 3,98 - 4,03 (m, 1 H), 4,18 - 4,28 (m, 2 H), 5,37 (d, J=6,6 Hz, 1 H), 5,73 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 6,19 (s, 1 H), 7,64 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 11,57 (s a, 1 H).
Etapa 2: Síntesis de isobutirato de (4R,5R,7R,8R)-5-(4-amino-2-oxopirimidin-1(2H)-il)-7-((isobutiriloxi)metil)-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-8-ilo 11
A una mezcla de intermedio 10 (1 g, 2,345 mmoles), DMAP (57,29 mg, 0,469 mmoles) y Et3N (0,489 ml, 3,52 mmoles) en DCM seco (50 ml) a 20°C, se añadió TIPSCl (1,065 g, 3,517 mmoles). La mezcla resultante se agitó a 20°C bajo nitrógeno durante 3 h. Se añadió amoniaco (4,8 ml, 2,43 mmoles, 0,5 M en THF), y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente a 20°C durante la noche.
La mezcla de reacción se diluyó con CH2Cl2 (50 ml), y se añadió disolución acuosa saturada de NaHCO3 (50 ml). Las dos capas se separaron; la capa acuosa se extrajo con CH2CL (3 x 25 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se separaron por filtración, y se concentraron a presión reducida.
El residuo se purificó mediante cromatografía en columna ((DCM:MeOH 9:1)/DCM, de 0 a 100%) para producir (1,16 g, 78%) del intermedio 11 como un sólido blanco.
m/z = 426 (M+H)+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1,07 - 1,13 (m, 6 H), 1,16 - 1,20 (m, 3 H), 1,23 (d, J=7,0 Hz, 3 H), 2,57 (dt, J=13,9, 7,0 Hz, 1 H), 2,61 - 2,75 (m, 1 H), 2,78 - 2,89 (m, 2 H), 3,93 - 3,99 (m, 1 H), 4,19 - 4,28 (m, 2 H), 5,35 (d, J=7,0 Hz, 1 H), 5,83 (d, J=7,5 Hz, 1 H), 6,30 (s, 1 H), 7,61 (d, J=7,5 Hz, 1 H)
Etapa 3: Síntesis de 4-amino-1-((4R,5R,7R,8R)-8-hidroxi-7-(hidroximetil)-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-5-il)pirimidin-2(1H)-ona 12
El intermedio 11 (588 mg, 1,36 mmoles) se disolvió en una disolución de metanol amoniacal (7 N) (25 ml). La mezcla de reacción se agitó a 20°C durante 16 horas. Se eliminó el disolvente, y el residuo se purificó mediante HPLC preparativa utilizando el método D.
Los disolventes orgánicos se eliminaron a 40°C, y la capa acuosa se liofilizó para producir 12 (250 mg, 65%) como un sólido blanco. m/z = 286 (M+H)+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 2,34 - 2,45 (m, 1 H), 2,69 - 2,84 (m, 2 H), 3,08 - 3,16 (m, 1 H), 3,30 (s a, 1 H), 3,32 (a d, J=2,4 Hz, 1 H), 3,59 (a d, J=12,1 Hz, 1 H), 3,75 (a d, J=12,1 Hz, 1 H), 3,84 (d, J=8,8 Hz, 1 H), 5,17 (s a, 1 H), 5,55 (s a, 1 H), 5,69 (d, J=7,5 Hz, 1 H), 6,50 (s, 1 H), 7,17 (a d, J=23,8 Hz, 2 H), 7,95 (d, J=7,5 Hz, 1 H).
Esquema 4 Síntesis de (2S)-2-(((((4R,5R,7R,8R)-5-(4-amino-2-oxopirimidin-1(2H)-il)-8-hidroxi-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-7-il)metoxi)(fenoxi)fosforil)amino)propanoato de isopropilo 17
Figure imgf000031_0001
Etapa 1: Síntesis de 4-amino-1-((2’R,6aR,8R,9aR)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidroespiro[furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9,2’-tietan]-8-il)pirimidin-2(1 H)-ona 13
A una mezcla de intermedio 6 (1,6 g, 3,026 mmoles), DMAP (73,9 mg, 0,605 mmoles) y Et3N (0,631 ml, 4,5 mmoles) en diclorometano seco (100 ml) a 20°C, se añadió TIPSCl (1,37 g, 4,53 mmoles). La mezcla resultante se agitó bajo nitrógeno a 20°C durante la noche. Después, se añadió amoniaco (60 ml, 30,25 mmoles, 0,5 M en THF), y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente a 20°C durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (50 ml), y se añadió una disolución acuosa saturada de NaHCÜ3 (100 ml). Las dos capas se separaron, la capa acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 30 ml), y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SÜ4, se separaron filtración, y se concentraron a presión reducida.
El residuo se purificó mediante cromatografía en columna ((DCM:MeOH 9:1)/DCM, de 0 a 100%) para producir 13 (1,12 g, 70%) como una espuma blanca.
m/z = 528 (M+H)+
Etapa 2: Síntesis de 4-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)amino)-1-((2’R,6aR,8R,9aR)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidroespiro[furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9,2’-tietan]-8-il)pirimidin-2(1 H)-ona 14
El intermedio 13 (1,12 g, 2,12 mmoles) se disolvió en diclorometano seco (100 ml), después se añadieron 2,3,5-trimetilpiridina (2,26 ml, 17,4 mmoles), nitrato de plata (6,34 g, 37,34 mmoles) y 4,4’-(cloro(fenil)metilen)bis(metoxibenceno) (2,15 g, 6,36 mmoles). La suspensión de color naranja brillante resultante se agitó a 20°C durante 2 h.
Después, la mezcla de reacción se inactivó con MeÜH (10 ml). La mezcla de reacción se vertió en disolución saturada de NaHCÜ3 (50 ml), y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se secó sobre Na2SÜ4, se filtró y se evaporó para obtener 14 (1,65 g, 93%) como una espuma amarilla.
m/z = 831 (M+H)+
Etapa 3: Síntesis de 4-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)amino)-1-((4R,5R,7R,8R)-8-hidroxi-7-(hidroximetil)-6-oxa-1 -tiaespiro[3.4]octan-5-il)pirimidin-2(1 H)-ona 15
Se añadió TBAF (1 M en THF) [429-41-4] (1,987 ml, 1 M, 1,987 mmoles) a una disolución de intermedio 14 (1,65 g, 1,987 mmoles) (bruto) en THF [109-99-9] (50 ml). La mezcla resultante se agitó bajo N2 a 20°C durante 2 h.
La mezcla se diluyó con EtÜAc (50 ml) y se vertió en agua (100 ml), y después se extrajo con EtÜAc (3 x 25 ml). Las capas orgánicas se secaron sobre MgSÜ4, y se eliminó el disolvente. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna usando diclorometano y metanol (100/0 a 95/5) para producir 15 (1 g, 85%) en forma de un sólido marrón.
m/z = 588 (M+H)+
Etapa 4: Síntesis de (2S)-2-(((((4R,5R,7R,8R)-5-(4-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)amino)-2-oxopirimidin-1(2H)-il)-8-hidroxi-6-oxa-1 -tiaespiro[3.4]octan-7-il)metoxi)(fenoxi)fosforil)amino)propanoato de isopropilo 16
El intermedio 15 (700 mg, 0,953 mmoles) se disolvió en piridina seca (5 ml) y se agitó durante 1 h a RT, y después se evaporó hasta sequedad. La espuma obtenida se suspendió en diclorometano seco (50 ml), y se añadió metilimidazol (0,475 ml, 6 mmoles). La disolución resultante se trató con (2S)-2-((cloro(fenoxi)fosforil)amino)propanoato de isopropilo 8 (1,78 ml, 1,78 mmoles, disolución 1 M en THF seco) bajo nitrógeno.
La mezcla de reacción se agitó a 20°C durante la noche, después se diluyó con diclorometano (50 ml) y se vertió en agua (100 ml), la mezcla resultante se acidificó mediante la adición de una disolución acuosa de HCl 1 M hasta pH = 4. La capa acuosa se extrajo con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SÜ4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (gradiente de DCM/MeOH de 1 a 10%) para producir 16 (110 mg, 17%).
rn/z = 858 (M+H)+
Etapa 5: Síntesis de (2S)-2-(((((4R,5R,7R,8R)-5-(4-amino-2-oxopirimidin-1(2H)-il)-8-hidroxi-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-7-il)metoxi)(fenoxi)fosforil)amino)propanoato de isopropilo 17
El intermedio 16 (110 mg, 0,128 mmoles) se disolvió en diclorometano (15 ml) a 20°C, y después se añadió ácido 2,2,2-trifluoroacético (0,1 ml, 1,28 mmoles). La mezcla resultante se agitó a 20°C durante 3 h.
La mezcla de reacción se inactivó con metanol (10 ml) y se diluyó con diclorometano (25 ml), la mezcla se agitó durante 30 min. La disolución de color naranja brillante se volvió amarilla. La mezcla de reacción se basificó con una disolución acuosa de Na2CÜ3 (hasta pH = 8), y la mezcla se agitó durante 30 min. Las dos capas se separaron, y la capa acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 15 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SÜ4, se separaron por filtración y se concentraron a presión reducida para proporcionar un aceite amarillo. Éste se purificó mediante HPLC preparativa usando el Método D para producir el compuesto 17 (39 mg, 53%) como un polvo blanco.
m/z = 555 (M+H)+; 1H RMN (400 MHz, CDCh) 5 ppm 1,17 - 1,29 (m, 7 H), 1,36 (s, 3 H), 2,66 - 2,86 (m, 2 H), 2,87 -2,99 (m, 1 H), 3,23 - 3,36 (m, 1 H), 3,45 - 3,54 (m, 1 H), 3,55 - 3,72 (m, 1 H), 3,78 - 4,07 (m, 3 H), 4,31 - 4,45 (m, 1 H), 4,46 - 4,56 (m, 1 H), 4,90 - 5,09 (m, 1 H), 5,58 - 5,81 (m, 1 H), 6,59 - 6,77 (m, 1 H), 7,12 - 7,25 (m, 3 H), 7,29 - 7,38 (m, 2 H), 7,54 - 7,69 (m, 1 H).
Esquema 5 Síntesis de 1-((4R,5R,7S,8R)-7-fluoro-8-hidroxi-7-(hidroximetil)-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-5-il)pirimidin-2,4(1H,3H)-diona 22
Figure imgf000032_0001
Etapa 1: Síntesis de 1-((4R,5R,7R,8R)-8-hidroxi-7-(hidroximetil)-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-5-il)pirimidin-2,4(1H,3H)-diona 7
A una disolución del intermedio 6 (15 g, 28,365 mmoles) en THF (300 ml), se añadió TBAF (56,7 ml, 56,7 mmoles, 1 M en THF). La mezcla resultante se agitó bajo atmósfera de N2 a RT durante 2 h. Posteriormente, el disolvente se evaporó, y el bruto se purificó mediante HPLC preparativa usando el método A para producir el intermedio 7 (7 g, 86%) como un polvo blanco.
MS (ES-): 285,0; 1H RMN (400 MHz, DMSÜ-de) 5 ppm 2,44 - 2,49 (m, 1 H), 2,78 - 2,90 (m, 2 H), 2,99 - 3,09 (m, 1 H), 3,39 - 3,45 (m, 1 H), 3,59 (dd, J=12,4, 2,8 Hz, 1 H), 3,74 (dd, J=12,4, 2,1 Hz, 1 H), 3,92 (a d, J=8,1 Hz, 1 H), 5,23 (s a, 1 H), 5,62 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 5,68 (s a, 1 H), 6,40 (s, 1 H), 8,00 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 11,40 (s a, 1 H).
Etapa 2: Síntesis de 1-((4R,5R,7S,8R)-8-hidroxi-7-(yodometil)-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-5-il)pirimidin-2,4(1H,3H)-diona 18
Se añadieron yodo (6,649 g, 26,196 mmoles) y TPP (6,871 g, 26,196 mmoles) a una suspensión de intermedio 7 (5 g, 17,464 mmoles) en NMI (6,96 ml, 1,03 g/ml, 87,318 mmoles) y THF (200 ml, 0,886 g/ml, 2457,462 mmoles) a RT. La mezcla de reacción se agitó durante 4 h bajo atmósfera de N2. La mezcla de reacción se inactivó con una disolución saturada de Na2S2O3, se concentró y se diluyó con EtOAc (100 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera (50 ml), y se secó sobre MgSO4 y se concentró. El bruto se purificó mediante cromatografía de columna usando heptano/EtOAc como eluyente para producir un sólido blanco (6 g) que contenía el intermedio 1880% y óxido de trifenilfosfina 20%.
MS (ES-): 395,0; 1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 2,55 - 2,67 (m, 1 H), 2,68 - 2,80 (m, 1 H), 2,85 - 2,95 (m, 2 H), 3,35 - 3,47 (m, 2 H), 3,50 - 3,60 (m, 1 H), 3,81 (t, J=6,7 Hz, 1 H), 5,66 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 5,97 (d, J=6,2 Hz, 1 H), 6,33 (s, 1 H), 7,53 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 11,50 (s, 1 H).
Etapa 3: 1-((4R,5R,8R)-8-hidroxi-7-metilen-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-5-il)pirimidin-2,4(1H,3H)-diona 19
La mezcla que contenía el intermedio 18 (6 g) se suspendió en MeOH (100 ml). Se añadió a la suspensión NaOMe (30% en MeOH) (14,022 ml, 5,4 M, 75,718 mmoles). La mezcla resultante se agitó a reflujo durante 2,5 h. La mezcla de reacción se dejó enfriar a RT y se filtró sobre una pequeña almohadilla de Decalite®. El filtrado se purificó mediante HPLC preparativa usando el método A. Las fracciones se liofilizaron para producir el intermedio 19 (2,6 g, 55% para dos etapas) como un sólido blanco.
MS (ES-): 267,0
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 2,54 - 2,68 (m, 1 H), 2,72 - 2,84 (m, 1 H), 2,91 (td, J=8,5, 5,7 Hz, 1 H), 2,94 -3,05 (m, 1 H), 4,26 (s, 1 H), 4,45 (t, J=1,8 Hz, 1 H), 4,56 (a d, J=6,2 Hz, 1 H), 5,66 (d, J=7,9 Hz, 1 H), 6,06 (d, J=6,4 Hz, 1 H), 6,51 (s, 1 H), 7,33 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 11,54 (s a, 1 H).
Etapa 4: Síntesis de benzoato de (4R,5R,7R,8R)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2H)-il)-7-fluoro-7-(yodometil)-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-8-ilo 20
El intermedio 19 (1 g, 3,7 mmoles) se disolvió en ACN (20 ml) y THF (30 ml), la mezcla resultante se enfrió a -15°C bajo atmósfera de N2, después se añadió gota a gota trihidrofluoruro de trietilamina (0,6 ml, 0,989 g/ml, 3,7 mmoles) en 5 ml de ACN, seguido de la adición de NIS (1 g, 4,4 mmoles). La mezcla de reacción resultante se agitó durante 1 h a -15°C bajo atmósfera de N2. Posteriormente, a la mezcla de reacción se añadieron Et3N (2,6 ml, 0,728 g/ml, 18,6 mmoles) y DMAP (9,107 mg, 0,08 mmoles). La mezcla de reacción se diluyó con 40 ml de THF, seguido de la adición gota a gota de cloruro de benzoílo (0,433 ml, 1,211 g/ml, 3,7 mmoles) a 0°C. La mezcla de reacción se dejó calentar a RT, y se agitó durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (30 ml) y se lavó sucesivamente con salmuera, una disolución saturada de Na2S2O3, se secó sobre MgSO4, y se purificó mediante cromatografía en columna (heptano/EtOAc) para producir el intermedio 20 (1,2 g, rendimiento del 62%) como un sólido amarillo claro. MS (ES-): 516,8; 1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 2,80 (s a, 2 H), 2,93 (a d, J=5,3 Hz, 1 H), 3,04 - 3,20 (m, 1 H), 3,50 - 3,77 (m, 2 H), 5,78 (a d, J=7,7 Hz, 1 H), 6,04 (s a, 1 H), 6,59 (s a, 1 H), 7,63 (a t, J=7,3 Hz, 2 H), 7,70 - 7,98 (m, 1 H), 8,18 (a d, J=7,3 Hz, 2 H), 11,65 (s a, 1 H).
Etapa 5: Síntesis de benzoato de ((4R,5R,7S,8R)-8-(benzoiloxi)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2H)-il)-7-fluoro-6-oxa-1 -tiaespiro[3.4]octan-7-il)metilo 21
El intermedio 20 (1,2 g, 2,3 mmoles), benzoato de sodio (1,7 g, 11,6 mmoles) y 15-corona-5 (4,6 ml, 1,11 g/ml, 23,2 mmoles) se suspendieron en DMF (50 ml) bajo atmósfera de N2. La mezcla de reacción se agitó durante 18 h a 120°C. Posteriormente, la mezcla de reacción se dejó enfriar a 45-50°C, después se diluyó con EtOAc (100 ml) y se filtró. La capa orgánica se lavó sucesivamente con salmuera, una disolución saturada de Na2S2O3, y se secó sobre Na2SO4. Se eliminó el disolvente, el bruto se purificó mediante cromatografía en columna (heptano/EtOAc: 100/100 a 50/50) para producir el intermedio 21 (700 mg, 59%) en forma de un sólido amarillo claro.
MS (ES-): 511,0; 1H RMN (400 MHz, CDCh) 5 ppm 2,76 (s a, 1 H), 2,89 - 2,95 (m, 1 H), 3,11 (s a, 1 H), 3,17 - 3,30 (m, 1 H), 4,54 (dd, J=12,3, 5,7 Hz, 1 H), 4,72 (dd, J= 12,2, 8,7 Hz, 1 H), 5,53 - 5,64 (m, 1 H), 5,92 (s, 1 H), 6,58 - 6,79 (m, 1 H), 7,28 (s, 1 H), 7,33 - 7,42 (m, 2 H), 7,47 - 7,54 (m, 2 H), 7,54 - 7,59 (m, 1 H), 7,65 (t, J=6,9 Hz, 1 H), 7,98 (d, J=7,7 Hz, 2 H), 8,25 (d, J=7,6 Hz, 2 H).
Etapa 6: Síntesis de 1-((4R,5R,7S,8R)-7-fluoro-8-hidroxi-7-(hidroximetil)-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-5-il)pirimidin-2,4(1H,3H)-diona 22
El intermedio 21 (700 mg, 1,4 mmoles) se solubilizó en NH3 (7M en MeOH) (200 ml) y se agitó durante la noche a RT. El disolvente se eliminó, y el sólido se trituró en Et2O para obtener el compuesto 22 (269 mg, 65%).
MS (ES-): 303,0; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 2,32 - 2,45 (m, 1 H), 2,83 (a dd, J=8,4, 4,0 Hz, 1 H), 2,88 - 3,03 (m, 1 H), 3,08 - 3,20 (m, 1 H), 3,51 - 3,67 (m, 2 H), 4,08 (a d, J=19,4 Hz, 1 H), 5,67 (d, J=7,9 Hz, 1 H), 5,75 (s a, 1 H), 5,93 (s a, 1 H), 6,71 (s a, 1 H), 7,65 (a d, J=8,4 Hz, 1 H), 11,53 (s a, 1 H).
Esquema 6: Síntesis de (2S)-2-(((((4R,5R,7S,8R)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2H)-il)-7-fluoro-8-hidroxi-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-7-il)metoxi)(fenoxi)fosforil)amino)propanoato de isopropilo 23
Figure imgf000034_0001
El compuesto 22 (100 mg, 0,329 mmoles) se disolvió en piridina seca (5 ml), y el disolvente se eliminó a presión reducida. La espuma obtenida se solubilizó en diclorometano (5 ml) y N-metilimidazol (0,131 ml, 1,03 g/ml, 1,643 mmoles). A esta mezcla se añadió gota a gota el intermedio 8 (0,5 ml, 1 M, 0,5 mmoles) bajo atmósfera de N2 a RT. Después de 5 h de agitación, se añadió otro equivalente de intermedio 8. Después de agitar durante la noche, la mezcla de reacción se inactivó con una mezcla de 20 ml de agua fría y 20 ml de diclorometano. La mezcla resultante se acidificó con HCl 1 M hasta pH = 4, y se extrajo con diclorometano (3 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró, y el disolvente se eliminó a presión reducida para proporcionar 400 mg de espuma que contenía el compuesto. Se realizó una purificación mediante HPLC preparativa usando el método B para producir 23 (44 mg, rendimiento 23%).
MS (ES-): 572,1; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1,15 (d, J=6,2 Hz, 6 H), 1,21 (dd, J=10,6, 7,3 Hz, 3 H), 2,53 -2,64 (m, 1 H), 2,82 - 2,97 (m, 2 H), 3,05 (s a, 1 H), 3,72 - 3,85 (m, 1 H), 4,14 - 4,34 (m, 3 H), 4,85 (dt, J=12,5, 6,3 Hz, 1 H), 5,58 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 6,02 - 6,19 (m, 2 H), 6,67 (s a, 1 H), 7,14 - 7,25 (m, 3 H), 7,37 (a t, J=7,9 Hz, 3 H), 10,86 - 11,82 (m, 1 H).
Esquema 7 Síntesis de (2R)-2-(((((4R,5R,7S,8R)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2H)-il)-7-fluoro-8-hidroxi-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-7-il)metoxi)(fenoxi)fosforil)amino)propanoato de butilo 25
Figure imgf000034_0002
Etapa 1: Síntesis de (2S)-2-((cloro(fenoxi)fosforil)amino)propanoato de butilo 24
(S)-1 -butoxi-1 -oxopropan-2-aminio (2 g, 11 mmoles) se solubilizó en diclorometano (50 ml) y se enfrió a -78°C. A esta mezcla se añadió lentamente fosforodicloridato de fenilo (1,6 ml, 11 mmoles), seguido de la adición gota a gota de DIPEA (3,9 ml, 0,742 g/ml, 22 mmoles) bajo atmósfera de N2. La mezcla de reacción se agitó durante 1 h, después se dejó calentar hasta RT y se agitó durante 2 h. Posteriormente, se eliminó el solvente. Se añadió Et2O seco (100 ml) bajo nitrógeno, la mezcla resultante se filtró, y el filtrado se concentró a presión reducida de flujo de nitrógeno para producir el intermedio 24 (2,877 g, rendimiento 82%) como un aceite incoloro. Este aceite se almacenó como una disolución 1 M en tetrahidrofurano seco en el congelador a -20°C.
1H RMN (400 MHz, CDCl3) 5 ppm 0,94 (td, J=7,4, 5,4 Hz, 3 H), 1,33 - 1,45 (m, 2 H), 1,49 - 1,54 (m, 3 H), 1,59 - 1,70 (m, 2 H), 4,09 - 4,26 (m, 3 H), 4,53 - 4,67 (m, 1 H), 7,20 - 7,30 (m, 3 H), 7,33 - 7,41 (m, 2 H).
Etapa 2: Síntesis de (2S)-2-(((((4R,5R,7S,8R)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2H)-il)-7-fluoro-8-hidroxi-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-7-il)metoxi)(fenoxi)fosforil)amino)propanoato de butilo 25
El compuesto 22 (100 mg, 0,329 mmoles) se disolvió en piridina (5 ml), y el disolvente se eliminó a presión reducida. La espuma obtenida se solubilizó en diclorometano (5 ml) y N-metilimidazol (0,131 ml, 1,643 mmoles). A la mezcla resultante se añadió el intermedio 24 (0,657 ml, 1 M, 0,657 mmoles) gota a gota bajo atmósfera de N2 a RT. Después de 5 h de agitación, se añadió otro equivalente de intermedio 24, y la mezcla se agitó durante la noche, la mezcla de reacción se inactivó con una mezcla de 20 ml de agua fría y 20 ml de diclorometano. La mezcla resultante se acidificó con HCl 1 M hasta pH = 4, y se extrajo con diclorometano (3 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró, y el disolvente se eliminó a presión reducida para proporcionar 300 mg de espuma que contenía el compuesto. La purificación se realizó mediante HPLC preparativa usando el método B para producir 25 (32,6 mg, 17%).
MS (ES-): 586,1; 1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 0,85 (td, J=7,4, 2,6 Hz, 3 H), 1,22 (dd, J=10,6, 7,3 Hz, 3 H), 1,25 - 1,33 (m, 2 H), 1,47 - 1,54 (m, 2 H), 2,52 - 2,62 (m, 1 H), 2,88 (s a, 2 H), 3,05 (s a, 1 H), 3,83 (a d, J=9,7 Hz, 1 H), 4,00 (qd, J=6,4, 2,5 Hz, 2 H), 4,22 (a d, J=9,2 Hz, 3 H), 5,57 (d, J=8,4 Hz, 1 H), 6,13 (a d, J=8,4 Hz, 2 H), 6,60 -6,73 (m, 1 H), 7,20 (a t, J=8,2 Hz, 3 H), 7,33 - 7,40 (m, 3 H), 11,00 - 11,61 (m, 1 H).
Esquema 8 Síntesis de 4-amino-1-((4R,5R,7S,8R)-7-fluoro-8-hidroxi-7-(hidroximetil)-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-5-il)pirimidin-2(1 H)-ona 27
Figure imgf000035_0001
Etapa 1: Síntesis de benzoato de (4R,5R,7S,8R)-5-(4-amino-2-oxopirimidin-1(2H)-il)-7-((benzoiloxi)metil)-7-fluoro-6-oxa-1 -tiaespiro[3.4]octan-8-ilo 26
El intermedio 21 (600 mg, 1,171 mmoles), DMAP (28,6 mg, 0,234 mmoles) y Et3N (0,244 ml, 0,728 g/ml, 1,8 mmoles) se solubilizaron en diclorometano (60 ml). A la mezcla resultante se añadió TPSCl (532 mg, 1,8 mmoles). La mezcla de reacción se agitó durante 20 h a RT. Posteriormente, se añadió NH3 (0,5 M en THF) (60 ml) a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción resultante se agitó durante 3 h. La mezcla de reacción se vertió en una mezcla de diclorometano (60 ml) y una disolución saturada de NaHCO3. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 60 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, y se purificó por cromatografía en columna (heptano/EtOAc: 100/0 a 50/50) para producir el intermedio 26 (350 mg, 58%).
MS (ES-): 510,0
Etapa 2: Síntesis de 4-amino-1-((4R,5R,7S,8R)-7-fluoro-8-hidroxi-7-(hidroximetil)-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-5-il)pirimidin-2(1H)-ona 27
El intermedio 26 (150 mg, 0,293 mmoles) se agitó en NH3 (7M en MeOH) (50 ml) durante 5 h a RT. El disolvente se eliminó, y el bruto se purificó mediante HPLC preparativa usando el método C para producir el compuesto 27 (54,8 mg, 62%).
MS (ES-): 302,0; 1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 2,35 (ddd, J=12,2, 8,6, 4,0 Hz, 1 H), 2,74 - 2,93 (m, 2 H), 3,16 - 3,22 (m, 1 H), 3,56 - 3,68 (m, 2 H), 4,05 (a d, J=21,1 Hz, 1 H), 5,42 (s, 2 H), 5,73 (d, J=7,5 Hz, 1 H), 6,79 (s, 1 H), 7,11 (s, 2 H), 7,59 (d, J=7,5 Hz, 1 H).
Esquema 9 Síntesis de (2S)-2-(((((4R,5R,7S,8R)-5-(4-amino-2-oxopirimidin-1(2H)-il)-7-fluoro-8-hidroxi-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-7-il)metoxi)(fenoxi)fosforil)amino)propanoato de isopropilo 31
Figure imgf000036_0001
Etapa 1: Síntesis de benzoato de ((4R,5R,7S,8R)-8-(benzoiloxi)-5-(4-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)amino)-2-oxopirimidin-1(2H)-il)-7-fluoro-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-7-il)metilo 28
El intermedio 26 (600 mg, 1,172 mmoles) se disolvió en diclorometano (20 ml). A la mezcla resultante se añadieron 4,4’-(cloro(fenil)met¡len)b¡s(metox¡benceno) (1,2 g, 3,5 mmoles), nitrato de plata (3,4 g, 20 mmoles) y 2,3,5-trimetilpiridina (1,2 ml, 0,931 g/ml, 9,6 mmoles) a RT. La mezcla de reacción se agitó durante 2 h bajo atmósfera de N2. Posteriormente, la mezcla de reacción se vertió en una mezcla de diclorometano (20 ml) y agua fría (50 ml). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 25 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SÜ4 y se purificó por cromatografía en columna (heptano/EtOAc: 100/0 a 70/30) para producir el intermedio 28 (470 mg, 49%) como un sólido blanco.
MS (ES-): 812,2
Etapa 2: Síntesis de 4-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)amino)-1-((4R,5R,7S,8R)-7-fluoro-8-hidroxi-7-(hidroximetil)-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-5-il)pirimidin-2(1H)-ona 29
El intermedio 28 (470 mg, 0,577 mmoles) se solubilizó en NH3 (7M en MeOH) (150 ml, 7 M, 1050 mmoles), y se agitó durante 2 h a RT. El disolvente se eliminó, y el bruto se trituró en Et2O para obtener: intermedio 29 (310 mg, 87%) como un sólido blanco.
MS (ES-): 604,3
Etapa 3: Síntesis de (2S)-2-(((((4R,5R,7S,8R)-5-(4-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)amino)-2-oxopirimidin-1(2H)-il)-7-fluoro-8-hidroxi-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-7-iÍ)metoxi)(fenoxi)fosforil)amino)propanoato de isopropilo 30
El intermedio 29 (310 mg, 0,512 mmoles) se disolvió en piridina, y el disolvente se eliminó a presión reducida para obtener una espuma. Esta espuma se disolvió en THF (10 ml), y se añadió NMI (0,204 ml, 1,03 g/ml, 2,559 mmoles). La mezcla de reacción se agitó durante 5 min a RT bajo atmósfera de N2. Se añadió lentamente (2S)-2-[[cloro(fenoxi)fosforil]amino]propanoato de isopropilo 8 (1,024 ml, 1 M, 1,024 mmoles) a la mezcla, y la mezcla resultante se agitó durante 6 h. La mezcla de reacción se vertió en una mezcla de agua fría (50 ml) y DCM (50 ml), se acidificó hasta pH = 4 con una disolución acuosa de HCl 1M. La capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO4, y el disolvente se eliminó a presión reducida. El bruto obtenido se purificó mediante HPLC preparativa usando el método B. La fracción obtenida se liofilizó para producir el intermedio 30 (100 mg, 22%). MS (ES-): 873,2
Etapa 4: Síntesis de (2S)-2-(((((4R,5R,7S,8R)-5-(4-amino-2-oxopirimidin-1(2H)-il)-7-fluoro-8-hidroxi-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-7-il)metoxi)(fenoxi)fosforil)amino)propanoato de isopropilo 31
Se añadió TFA (0,0875 ml, 1,49 g/ml, 1,143 mmoles) a una disolución del intermedio 19 (100 mg, 0,114 mmoles) en DCM (10 ml) a RT. La mezcla resultante se agitó a RT bajo atmósfera de N2 durante 1h. La mezcla de reacción se vertió en MeOH (50 ml), y después se evaporaron los disolventes. El bruto se purificó mediante HPLC preparativa usando el método B. La fracción obtenida se liofilizó para producir el compuesto 31 (20 mg, 31%).
MS (ES-): 571,3; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1,12 - 1,17 (m, 6 H), 1,18-1,24 (m, 3 H), 2,26 - 2,38 (m, 1 H), 2,83 (s, 2 H), 3,06 - 3,18 (m, 1 H), 3,73 - 3,85 (m, 1 H), 4,01 - 4,29 (m, 3 H), 4,85 (td, J=6,3, 2,4 Hz, 1 H), 5,70 (dd, J=7,5, 4,0 Hz, 1 H), 6,12 (s a, 2 H), 7,16 - 7,24 (m, 3 H), 7,32 - 7,40 (m, 4 H), 7,48 - 7,65 (m, 1 H). Esquema 10: Síntesis de 1 -((2’R,4aS,6R,7aR)-2-(ciclopentiloxi)-4a-fluoro-2-oxidotetrahidroespiro[furo[3,2-d][1,3,2]dioxafosfinin-7,2’-tietan]-6-il)pirimidin-2,4(1 H,3H)-diona 35
Figure imgf000037_0001
Etapa 1: Síntesis de 2-clorofenil ciclopentil fosforocloridato 32
Se solubilizó ciclopentanol (1,096 ml, 0,786 g/ml, 10 mmoles) en DCM (20 ml) y se enfrió a -78°C. A esta mezcla, se añadió diclorofosfato de 2-clorofenilo (1,64 ml, 1,49 g/ml, 10 mmoles), seguido de la adición gota a gota de DIPEA (1,72 ml, 0,75 g/ml, 10 mmoles). La mezcla de reacción se agitó durante 20 h desde -78°C hasta RT bajo atmósfera de N2. La disolución se utilizó como tal en la etapa 2.
Etapa 2: Síntesis de (((4R,5R,7S,8R)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2H)-il)-7-fluoro-8-hidroxi-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-7-il)metil)fosfato de 2-clorofenilo y ciclopentilo 34
El intermedio 22 (284 mg, 0,933 mmoles) se disolvió en piridina (5 ml), y el disolvente se eliminó a presión reducida para obtener una espuma. La espuma se disolvió en DCM (10 ml) y NMI (0,372 ml, 1,03 g/ml, 4,666 mmoles) a RT bajo atmósfera de N2. A esta mezcla, se añadió el intermedio 32 (2,24 ml, 0,5 M, 1,12 mmoles) a RT. Después de 6 h, la mezcla de reacción se vertió sucesivamente en una mezcla de DCM (20 ml) y agua fría (20 ml), se acidificó hasta pH = 4 con una disolución acuosa de HCl 1M, y se extrajo con DCM (3 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSÜ4, se concentró, y el bruto se purificó por cromatografía en columna usando DCM/MeOH como eluyente para producir el intermedio 34 (350 mg, 67%) como un sólido blanco.
MS (ES-): 561,1; 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó ppm 1,51 - 1,71 (m, 4 H), 1,77 (dt, J=7,3, 3,9 Hz, 4 H), 2,56 - 2,70 (m, 1 H), 2,83 - 2,94 (m, 2 H), 2,94 - 3,04 (m, 1 H), 4,26 - 4,48 (m, 3 H), 5,00 (a d, J=3,3 Hz, 1 H), 5,56 - 5,64 (m, 1 H), 6,13 (s a, 1 H), 6,62 (s a, 1 H), 7,22 - 7,28 (m, 1 H), 7,32 - 7,52 (m, 3 H), 7,57 (d, J=7,9 Hz, 1 H), 11,55 (s a, 1 H). Etapa 3: Síntesis de 1-((2’R,4aS,6R,7aR)-2-(ciclopentiloxi)-4a-fluoro-2-oxidotetrahidroespiro[furo[3,2-d][1,3,2]dioxafosfinin-7,2’-tietan]-6-il)pirimidin-2,4(1 H,3H)-diona 35
El intermedio 34 (300 mg, 0,533 mmoles) se solubilizó en THF (7 ml), y se añadió tBuOK (119,6 mg, 1,066 mmoles) a RT en una atmósfera de N2. Después de 6 h, la mezcla de reacción se vertió sucesivamente en una mezcla de agua fría (20 ml) y EtOAc (20 ml), se acidificó hasta pH = 3 con una disolución acuosa de HCl 1 M, y se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se concentró, y el bruto se purificó por HPLC preparativa usando el método B. La fracción obtenida se liofilizó para producir 35 (46,3 mg, 20%).
MS (ES-): 433,0; 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 ppm 1,61 (s a, 2 H), 1,74 (s a, 2 H), 1,88 (s a, 4 H), 2,67 - 2,90 (m, 1 H), 2,96 (a d, J=9,9 Hz, 1 H), 2,98 - 3,09 (m, 2 H), 4,26 - 4,39 (m, 1 H), 4,55 - 4,71 (m, 1 H), 5,00 (s a, 1 H), 5,46 (a d, J=19,8 Hz, 1 H), 5,78 (a d, J=7,7 Hz, 1 H), 6,39 (s, 1 H), 8,02 (a d, J=7,7 Hz, 1 H), 11,62 (s a, 1 H).
Esquema 11 Síntesis de (((4R,5R,7S,8R)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2W)-il)-7-fluoro-8-hidroxi-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-7-il)metil)fosfato de 4-clorofenil e isopropilo (37)
Figure imgf000037_0002
1-cloro-4-diclorofosforiloxi-benceno (1,628 ml, 1,508 g/ml, 10 mmoles) se disolvió en DCM (25 ml), y la mezcla se enfrió a -15°C bajo atmósfera de N2. A esta mezcla se añadió lentamente isopropanol (0,765 ml, 0,786 g/ml, 10 mmoles), seguido de la adición gota a gota de DIPEA (1,723 ml, 0,75 g/ml, 10 mmoles). La mezcla de reacción se agitó durante 20 h desde -15°C hasta RT para obtener el reactivo (36) in situ.
El compuesto 22 (100 mg, 0,329 mmoles) se disolvió en piridina (5 ml), y el disolvente se eliminó a presión reducida. La espuma se colocó en DCM (5 ml), y se añadió NMI (0,131 ml, 1,03 g/ml, 1,643 mmoles). La mezcla de reacción se agitó durante 5 min a RT. Se añadió la mezcla que contenía 36 (1,232 ml, 0,4 M, 0,493 mmoles), y la mezcla de reacción se agitó durante 4 h a RT bajo atmósfera de N2. La mezcla de reacción se vertió en una mezcla de agua fría (20 ml) y DCM (20 ml). La capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO4, y el disolvente se eliminó a presión reducida. El bruto obtenido se purificó mediante HPLC preparativa usando el método E. Las fracciones obtenidas se liofilizaron para proporcionar el compuesto 37 (50 mg, rendimiento 28%) en forma de un sólido blanco.
MS (ES-): 535,1; 1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 1,27 (dd, J=9,0, 6,1 Hz, 6 H), 2,53 - 2,70 (m, 1 H), 2,82 - 2,94 (m, 2 H), 2,94 - 3,04 (m, 1 H), 4,22 - 4,43 (m, 3 H), 4,70 (dqd, J=12,6, 6,3, 6,3, 6,3, 1,8 Hz, 1 H), 5,62 (t, J=8,4 Hz, 1 H), 6,11 (s a, 1 H), 6,61 (s a, 1 H), 7,20 - 7,27 (m, 2 H), 7,44 (d, J=8,6 Hz, 3 H), 11,50 (s a, 1 H).
Esquema 12 Síntesis de 1-((2R,2’R,4aS,6R,7aR)-2-(ciclobutilamino)-4a-fluoro-2-oxidotetrahidroespiro[furo[3,2-d][1,3,2]dioxafosfinin-7,2’-tietan]-6-il)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona 40a y 1 -((2S,2’R,4aS,6R,7aR)-2-(ciclobutilamino)-4a-fluoro-2-oxidotetrahidroespiro[furo[3,2-d][1,3,2]dioxafosfinin-7,2’-tietan]-6-il)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona 40b
Figure imgf000038_0001
Etapa 1: Síntesis de ciclobutilfosforamidocloridato de 4-clorofenilo 38
Se disolvió ciclobutanamina (5 ml, 0,83 g/ml, 58,35 mmoles) en diclorometano seco (50 ml, 1,326 g/ml, 780,622 mmoles), la mezcla resultante se agitó a -78°C durante 10 min, después se añadió gota a gota fosforodicloridato de 4-clorofenilo (9,497 ml, 1,508 g/ml, 58,35 mmoles) (precipitado blanco). La mezcla resultante se agitó a -78°C durante 10 min, después se añadió gota a gota DIPEA [7087-68-5] (11,18 ml, 0,742 g/ml, 64,185 mmoles), y se desarrolló una disolución transparente. La mezcla resultante se agitó a -78°C durante 2 horas, y se agitó a RT durante 2 horas. El disolvente se retiró a presión reducida.
Se añadió Et2O seco (alrededor de 50 ml), y el precipitado formado se filtró y se lavó dos veces con Et2O seco bajo un flujo de nitrógeno. El filtrado se evaporó a sequedad, y se aisló un aceite amarillo incoloro (18,7 g). Éste se disolvió en THF (66,8 ml), y se mantuvo en el congelador a -18°C como una disolución 1 M del intermedio 38 en THF.
Etapa 2: Síntesis de (((4R,5R,7S,8R)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2H)-il)-7-fluoro-8-hidroxi-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-7-il)metil)ciclobutilfosforamidato de 4-clorofenilo 39
El material de partida (400 mg, 1,314 mmoles) se disolvió en piridina (10 ml) y se agitó durante 30 min a RT, y después se evaporó hasta sequedad.
A una disolución agitada del nucleósido 22 (400 mg, 1,314 mmoles) en diclorometano seco (50 ml, 1,326 g/ml, 780,622 mmoles) se añadió metilimidazol (1079,268 mg, 13,145 mmoles) hasta que se disolvieron todo el 22. La disolución resultante se trató con disolución 1 M de fosforocloridato 38 (552,266 mg, 1,972 mmoles) en THF seco en atmósfera de argón. La mezcla de reacción se agitó a RT durante la noche, y se diluyó con DCM (50 ml) y se vertió en agua (100 ml). La mezcla resultante se acidificó mediante la adición de una disolución 1M de HCl hasta pH = 4. La mezcla resultante se extrajo con diclorometano, se secó sobre MgSO4, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para producir 39 (430 mg, 38%) como un sólido blanco.
m/z = 549 (M+H)+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 1,32 - 1,56 (m, 2 H), 1,72 - 1,90 (m, 2 H), 1,97 - 2,14 (m, 2 H), 2,54 - 2,65 (m, 1 H), 2,79 - 2,95 (m, 2 H), 2,96 - 3,11 (m, 1 H), 3,47 - 3,66 (m, 1 H), 4,08 - 4,35 (m, 3 H), 5,53 - 5,67 (m, 1 H), 5,92 - 6,18 (m, 2 H), 6,58 - 6,73 (m, 1 H), 7,15 - 7,28 (m, 2 H), 7,30 - 7,61 (m, 3 H), 11,38 - 11,62 (m, 1 H) Etapa 3: Síntesis de 1-((2R,2’R,4aS,6R,7aR)-2-(ciclobutilamino)-4a-fluoro-2-oxidotetrahidroespiro[furo[3,2-d][1,3,2]dioxafosfinin-7,2’-tietan]-6-il)pirimidin-2,4(1 H,3H)-diona 40a y 1-((2S,2’R,4aS,6R,7aR)-2-(ciclobutilamino)-4a-fluoro-2-oxidotetrahidroespiro[furo[3,2-d][1,3,2]dioxafosfinina-7,2’-tietan]-6-il)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona 40b
El intermedio 39 (130 mg, 0,237 mmoles) se disolvió en DMSO (5 ml, 1,092 g/ml, 69,879 mmoles) y se trató a RT con terbutóxido de potasio (0,0399 g, 0,356 mmoles). La mezcla resultante se agitó a RT durante la noche. Ésta se purificó mediante HPLC. La capa acuosa se liofilizó, y los compuestos se aislaron como un polvo blanco 40a (22,8 mg, 23%) y 40b (18 mg, 18%). m/z = 420 (M+H)+; 1H RMN (600 MHz, Acetona, -11°C) 5 ppm 1,50 - 1,66 (m, 4 H), 2,04 - 2,07 (m, 4 H), 2,20 - 2,26 (m, 2 H), 2,32 - 2,40 (m, 2 H), 2,86 (ddd, J=13,1, 8,7, 4,7 Hz, 1 H), 2,94 - 3,04 (m, 3 H), 3,04 -3,22 (m, 4 H), 3,69 - 3,81 (m, 2 H), 4,38 - 4,47 (m, 2 H), 4,52 (ddd, J=22,2, 12,0, 9,4 Hz, 1 H), 4,83 (dd, J=31,0, 11,3 Hz, 1 H), 4,96 (d, J=18,8 Hz, 1 H), 5,49 (a dd, J=15,0, 9,8 Hz, 1 H), 5,55 (dd, J=15,1, 9,9 Hz, 1 H), 5,61 (dd, J=19,9, 1,9 Hz, 1 H), 5,73 (d, J=8,2 Hz, 1 H), 5,83 (d, J=7,9 Hz, 1 H), 6,25 (s, 1 H), 7,05 (s, 1 H), 7,68 (d, J=8,2 Hz, 1 H), 8,02 (d, J=8,1 Hz, 1 H)
Esquema 13 Síntesis de 1-[(4R,5R,6R,8R)-6-azido-5-hidroxi-6-(hidroximetil)-7-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-8-il]pirimidin-2,4-diona 44
Figure imgf000039_0001
Etapa 1: Síntesis de 1-((4R,5R,8R)-8-hidroxi-7-metilen-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-5-il)pirimidin-2,4(1H,3H)-diona 19
El intermedio 18 (5,29 g, 13,352 mmoles) se solubilizó en THF (150 ml) y se añadió gota a gota durante 1 hora a una disolución agitada de DBU (3,174 ml, 1,019 g/ml, 21,245 mmoles) en THf (100 ml) a 60°C. La mezcla resultante se agitó a 60°C durante 5 h. La mezcla de reacción se dejó enfriar a RT, y se vertió en agua (200 ml). La mezcla se acidificó hasta pH = 4 con una disolución de HCl 1M. La capa orgánica se extrajo 3 veces con EtOAc (200 ml), se secó sobre MgSO4, y se concentró a sequedad. El sólido se trituró en DCM y se filtró para producir el intermedio 19 (2,68 g, rendimiento del 75%) como un sólido blanco.
MS (ES-): 267,0; 1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 2,54 - 2,68 (m, 1 H), 2,72 - 2,84 (m, 1 H), 2,91 (td, J=8,5, 5,7 Hz, 1 H), 2,94 - 3,05 (m, 1 H), 4,26 (s, 1 H), 4,45 (t, J=1,8 Hz, 1 H), 4,56 (a d, J=6,2 Hz, 1 H), 5,66 (d, J=7,9 Hz, 1 H), 6,06 (d, J=6,4 Hz, 1 H), 6,51 (s, 1 H), 7,33 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 11,54 (s a, 1 H).
Etapa 2: Síntesis de 1-((4R,5R,7S,8R)-7-azido-8-hidroxi-7-(yodometil)-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-5-il)pirimidin-2,4(1H,3H)-diona 41
El cloruro de N-bencil-N,N-dietiletanaminio (BnEtaNCl) (4,585 g, 20,127 mmoles) y azida de sodio (NaN3) (1,308 g, 20,127 mmoles) se suspendieron en MeCN (30 ml) y se agitaron durante 16 h. La mezcla se filtró en una disolución de intermedio 19 (900 mg, 3,355 mmoles) y NmM (5,4 ml, 0,917 g/ml, 48,956 mmoles) en THF (60 ml). La mezcla de reacción se enfrió a 0°C, y se añadió yodo (5,11 g, 20,127 mmoles) en THF (18 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 5 h a RT. Se añadió N-acetil-cisteína (2 g) a la mezcla hasta que no se desprendió gas. Se añadió Na2S2O3 acuoso saturado a la mezcla hasta que se desarrolló una disolución de color amarillo claro. La disolución se concentró a presión reducida, y después se diluyó en EtOAc (50 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4. El disolvente se eliminó, y el bruto se purificó mediante cromatografía en columna usando heptano/EtOAc como eluyente para producir el intermedio 41 (1,49 g, rendimiento del 99%).
MS (ES-): 436,0; 1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 2,52 - 2,61 (m, 1 H), 2,76 - 2,98 (m, 3 H), 3,75 (s, 2 H), 4,34 (s a, 1 H), 5,68 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 6,47 (a d, J=6,2 Hz, 2 H), 7,43 - 7,57 (m, 1 H), 11,57 (s, 1 H).
Etapa 3: Síntesis de benzoato de (4R,5R,7S,8R)-7-azido-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2H)-il)-7-(yodometil)-6- oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-8-ilo 42
El intermedio 41 (1,49 g, 3,408 mmoles) se disolvió en THF (45 ml), y la mezcla se enfrió a 0°C. Se añadieron Et3N (2,368 ml, 0,728 g/ml, 17,04 mmoles) y DMAP (8,327 mg, 0,0682 mmoles) a la mezcla, seguido de la adición gota a gota de cloruro de benzoílo (0,475 ml, 1,211 g/ml, 4,089 mmoles). La mezcla de reacción se agitó durante 1,5 h a RT. La mezcla de reacción se diluyó en EtOAc (100 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, y se concentró. El bruto se purificó mediante cromatografía en columna usando heptano/EtOAc como eluyente para producir el intermedio 42 (1,5 g, rendimiento del 81%) como una espuma blanca.
MS (ES-): 540,0; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó ppm 2,73 - 2,84 (m, 2 H), 2,84 - 2,94 (m, 1 H), 3,02 - 3,12 (m, 1 H), 3,79 (a d, J=11,7 Hz, 1 H), 3,92 (a d, J=11,7 Hz, 1 H), 5,77 (dd, J=8,0, 2,1 Hz, 1 H), 6,02 (s a, 1 H), 6,50 (s a, 1 H), 7,63 (t, J=7,2 Hz, 2 H), 7,72 - 7,85 (m, 2 H), 8,18 (d, J=7,6 Hz, 2 H), 11,63 (s, 1 H).
Etapa 4: Síntesis de benzoato de [(4R,5R,6R,8R)-6-azido-5-benzoiloxi-8-(2,4-dioxopirimidin-1-il)-7-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-6-il]metilo 43
El intermedio 42 (1,5 g, 2,771 mmoles) y BzONa (1,997 g, 13,855 mmoles) se suspendieron en DMF (80 ml), seguido de la adición de 15-corona-5 (5,499 ml, 1,11 g/ml, 27,71 mmoles). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a 120°C. La mezcla de reacción se diluyó en EtOAc (100 ml), se filtró sobre un lecho pequeño de decalita, y se lavó con agua. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, y se eliminó el disolvente. El bruto se purificó mediante cromatografía en columna usando heptano/EtOAc como eluyente para producir el intermedio 43 (700 mg, rendimiento del 47%) como un sólido amarillo claro con una pureza del 63% según se determinó por LC-MS. El compuesto se utilizó como tal.
MS (ES-): 534,1
Etapa 5: Síntesis de benzoato de (4R,5R,7R,8R)-7-azido-7-((benzoiloxi)metil)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1 (2H)-il)-6-oxa-1 -tiaespiro[3.4]octan-8-ilo 44
El intermedio 43 (700 mg, 1,307 mmoles) se disolvió en NH3 (7M en MeOH) (150 ml, 7 M, 1050 mmoles), y la mezcla se agitó durante la noche a RT. La mezcla de reacción se concentró hasta sequedad, y el sólido se trituró en Et2O para producir 1 -[(4R,5R,6R,8R)-6-azido-5-hidroxi-6-(hidroximetil)-7-oxa-1 -tiaespiro[3.4]octan-8-il]pirimidin-2,4-diona 44 (360 mg, rendimiento 84%) como un sólido amarillo claro MS (ES-): 326,0; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó ppm 2,38 - 2,48 (m, 1 H), 2,78 - 2,92 (m, 2 H), 3,02 - 3,10 (m, 1 H), 3,69 - 3,78 (m, 2 H), 4,11 (a d, J=5,3 Hz, 1 H), 5,67 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 5,76 (s a, 1 H), 5,93 (a d, J=4,2 Hz, 1 H), 6,60 (s a, 1 H), 7,66 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 11,31 (s a, 1 H).
Esquema 14 Síntesis de (2R)-2-[[[(4R,5R,6R,8R)-6-azido-8-(2,4-dioxopirimidin-1-il)-5-hidroxi-7-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-6-il]metoxi-fenoxi-fosforil]amino]propanoato de isopropilo 45
Figure imgf000040_0001
El intermedio 44 (200 mg, 0,611 mmoles) se disolvió en piridina seca (5 ml), y el disolvente se eliminó a presión reducida para obtener una espuma. La espuma se disolvió en DCM (10 ml), y se añadió (0,244 ml, 1,03 g/ml, 3,055 mmoles) de N-metilimidazol. La mezcla de reacción se agitó durante 5 min a rT bajo atmósfera de N2. Se añadió (2R)-2-[[cloro(fenoxi)fosforil]amino]propanoato de isopropilo 8 (1M en THF) (0,917 ml, 1 M, 0,917 mmoles), y la mezcla de reacción se agitó durante 20 h a RT en atmósfera de N2. La mezcla de reacción se vertió en agua fría (20 ml) y DCM (20 ml). La capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO4, y el disolvente se eliminó a presión reducida. El bruto obtenido se purificó por HPLC preparativa usando el método E. La fracción obtenida se liofilizó para producir (2R)-2-[[[(4R,5R, 6R,8R)-6-azido-8-(2,4-dioxopirimidin-1-il)-5-hidroxi-7-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-6-il]metoxi-fenoxi-fosforil]amino]propanoato de isopropilo 45 (80 mg, rendimiento 22%).
MS (ES-): 595,2; 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) ó ppm 1,14 (dd, J=6,2, 2,4 Hz, 6 H), 1,22 (d, J=7,3 Hz, 3 H), 2,52 -2,60 (m, 1 H), 2,80 - 2,90 (m, 2 H), 2,95 - 3,04 (m, 1 H), 3,72 - 3,84 (m, 1 H), 4,21 - 4,38 (m, 3 H), 4,84 (quind, J=6,3, 6,3, 6,3, 6,3, 4,0 Hz, 1 H), 5,60 (dd, J=7,9, 3,3 Hz, 1 H), 6,06 - 6,22 (m, 2 H), 6,49 - 6,62 (m, 1 H), 7,15 - 7,24 (m, 3 H), 7,33 - 7,40 (m, 2 H), 7,47 (a d, J=7,0 Hz, 1 H), 11,52 (s a, 1 H).
Esquema 15 Síntesis de 2-amino-9-((4R,5R,7R,8R)-8-hidroxi-7-(hidroximetil)-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-5-il)-1 H-purin-6(9H)-ona 57
Figure imgf000041_0001
Etapa 1: Síntesis de 2-amino-9-((6aR,8R,9R,9aS)-9-hidroxi-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il)-1 H-purin-6(9H)-ona 47
El intermedio 46 (100 g, 353 mmoles, 1 eq) y TIPSCI (133,6 g, 423,6 mmoles, 1,2
eq) se disolvieron en DMF (500 ml) a RT. Se añadió imidazol (72,1 g, 1 mol, 3 eq) en una porción a 20°C. La disolución resultante se agitó durante 16 horas a RT bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se vertió en agua con hielo (200 ml). El precipitado resultante se filtró, se lavó con agua varias veces, y se secó a vacío. El compuesto 47 (133 g, bruto) se recuperó como un sólido blanco.
MS (ES+): 526
Etapa 2: Síntesis de 2-amino-9-((6aR, 8R, 9aR)-2,2,4,4-tetraisopropil-9-oxotetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il)-1 H-purin-6(9H)-ona 48
El intermedio 47 (50 g, 95,2 mmoles, 1 eq) se disolvió en DCM (500 ml) a 20°C bajo nitrógeno. Se añadió DMP (80 g, 190 mmoles, 2 eq) a 0°C. La mezcla resultante se agitó a 20°C durante 16 h bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se vertió en una disolución acuosa de NaHCÜ3 (100 ml) y disolución acuosa de Na2SÜ3 (100 ml).
El sólido se separó por filtración, el filtrado se extrajo con DCM (2 x 100 ml), se secó sobre Na2SÜ4, y se concentró a vacío para producir el compuesto 48 (70 g, bruto) como un sólido rojo oscuro.
MS (ES+): 524
Etapa 3: Síntesis de (Z)-2-((6aR,8R,9aS)-8-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9(6H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropil-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9(6aH,8H,9aH)-iliden)acetato de etilo 49
El intermedio 48 (70 g, 133,8 mmoles, 1 eq) se disolvió en DCM (1 l) a 20°C bajo nitrógeno.
Se añadió 2-(trifenilfosfaniliden)acetato de etilo (32,6 g, 93,7 moles, 0,7 eq) en una porción a 20°C. La mezcla resultante se agitó a 20°C durante 16 h bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se filtró y se concentró, y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (DCM: MeOH = 100/1 a 20:1) para producir el compuesto 49 (39 g, bruto) como un sólido blanco.
MS (ES+): 595
Etapa 4: Síntesis de 2-((6aR,8R,9R,9aR)-8-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9(6H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropil-9-((4-metoxibencil)tio)tetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il)acetato de etilo 50
(4-Metoxifenil)metanotiol (38,4 g, 249,2 mmoles, 3,7 eq) se disolvió en THF (500 ml) a 202C. La disolución resultante se enfrió a -40°C, y después se añadió KHMDS (1 M, 74,1 ml, 1,1 eq) gota a gota a -40°C. Durante la adición, la disolución amarilla se convirtió lentamente en un líquido viscoso blanco. La mezcla de reacción se agitó durante 0,5 h tras la adición, después se añadió gota a gota el intermedio 49 (40 g, 67,3 mmoles, 1 eq) disuelto en THF (1 l) a -40°C a la disolución. Se dejó que la mezcla de reacción se calentara lentamente hasta 20°C, y entonces la agitación se mantuvo durante 2 h. La mezcla de reacción se inactivó sucesivamente con HCl acuoso (200 ml), se extrajo con EtOAc (2 x 200 ml), la capa orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso (200 ml) y salmuera (200 ml), se secó sobre Na2SO4 y se evaporó a vacío. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna (DCM/MeOH = 100/0 a 95/5) para producir el compuesto 50 (12,5 g, bruto) como un aceite incoloro.
MS (ES+): 749
Etapa 5: Síntesis de 2-((6aR,8R,9R,9aR)-8-(2-isobutiramido-6-oxo-1 H-purin-9(6H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropil-9-((4-metoxibencil)tio)tetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il)acetato de etilo 51
El intermedio 50 (25 g, 33,4 mmoles, 1 eq) se disolvió en piridina (200 ml) a 20°C, se añadió entonces anhídrido isobutírico (15,8 g, 100 mmoles, 3 eq). La mezcla resultante se agitó a 20°C, y después se añadió lentamente TEA (16,9 g, 167,1 mmoles, 5 eq). La mezcla de reacción se agitó entonces a 80°C durante 2 h, después se dejó enfriar a RT, y se inactivó mediante la adición de una disolución acuosa de NH4Cl (200 ml). La mezcla resultante se extrajo con EtOAc (2 x 200 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, y se evaporó a vacío. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna (PE/EA = 10/1 a 1/1) para producir el compuesto 51 (11,8 g, bruto) como un aceite marrón.
MS (ES+): 819
Etapa 6: Síntesis de N-(9-((6aR,8R,9R,9aR)-9-(2-hidroxietil)-2,2,4,4-tetraisopropil-9-((4-metoxibencil)tio)tetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il)-6-oxo-6,9-dihidro-1H-purin-2-il)isobutiramida 52
El intermedio 51 (3 g, 3,6 mmoles, 1 eq) se disolvió en THF (30 ml) bajo nitrógeno a 20°C. La disolución resultante se enfrió a 0°C, y después se añadió lentamente LiAlH4 (417,4 mg, 11 mmoles, 3 eq) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a 20°C durante 1 h. Después, la reacción sucesivamente se inactivó con HCl acuoso (30 ml), se extrajo con EtOAc (2 x 30 ml) y se lavó con NaHCO3 acuoso (20 ml) y salmuera (20 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se evaporó a vacío. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna (DCM/MeOH = 100/1 a 50/1). El compuesto 52 (240 mg, rendimiento del 10%) se aisló como un sólido amarillo.
MS (ES+): 777
Etapa 7: Síntesis de metanosulfonato de 2-((6aR,8R,9R,9aR)-8-(2-isobutiramido-6-oxo-1H-purin-9(6H)-il)-2.2.4.4- tetraisopropilo-9-((4-metoxibencil)tio)tetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il)etilo 53 El intermedio 52 (1,6 g, 2 mmoles, 1 eq) se disolvió en piridina (20 ml) a 20°C. La mezcla resultante se enfrió a 0°C, y después se añadió lentamente MsCl (0,35 g, 3 mmoles, 1,5 eq). Después, la mezcla resultante se agitó a 20°C durante 12 h. La mezcla de reacción se inactivó sucesivamente con agua (10 ml), se extrajo con EtOAc (2 x 10 ml), y la capa orgánica se secó sobre Na2SO4, y se evaporó el disolvente. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna (DCM/MeOH = 100/1 a 30/1) para producir el compuesto 53 (1,6 g, 90% de rendimiento) como un aceite amarillo.
MS (ES+): 854
Etapa 8: Síntesis de metanosulfonato de 2-((6aR,8R,9R,9aR)-8-(2-isobutiramido-6-oxo-1H-purin-9(6H)-il)-2.2.4.4- tetraisopropil-9-mercaptotetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il)etilo 54
El intermedio 53 (1,6 g, 1,8 mmoles, 1 eq) se disolvió en TFA (1,5 ml) a 25°C. La disolución resultante se enfrió a 0°C, y después se añadieron lentamente acetato de mercurio (Hg(OAc)2) (1,1 g, 3,7 mmoles, 2 eq) y fenol (0,87 g, 9,3 mmoles, 5 eq). La disolución de color rojo oscuro resultante se agitó a 0°C durante 1 h. Entonces se añadió 1,4-dimercaptobutano-2,3-diol (DTT) (0,57 g, 3,7 mmoles, 2 eq) a 0°C.
La mezcla resultante se agitó durante 10 min, se filtró sobre celite® y se lavó con EtOAc (10 ml).
La capa orgánica se mezcló con agua, y el pH de la disolución se ajustó a pH~7 con la adición de una disolución acuosa saturada de NaHCO3. La mezcla resultante se filtró sucesivamente sobre celite®, se extrajo con EtOAc (2 x 30 ml) y se evaporó a vacío a 252C. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna (DCM: MeOH = 100:1 a 30:1) para producir el compuesto 54 (2 g, bruto) como aceite marrón.
MS (ES+): 734
Etapa 9: Síntesis de N-(6-oxo-9-((2’R,6aR,8R,9aR)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidroespiro[furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocina-9,2’-tietan]-8-il)-6,9-dihidro-1 H-purin-2-il)isobutiramida 55
El intermedio 54 (2 g, 2,7 mmoles, 1 eq) se disolvió en THF (20 ml) a 20°C. La mezcla resultante se enfrió a 0°C, y después se añadió lentamente NaH (0,16 g, 4 mmoles, 60% de pureza, 1,5 eq) a 0°C. La mezcla de reacción (disolución turbia blanca) se agitó a 20°C durante 16 h. La mezcla se vertió en una disolución de agua helada, y después se inactivó con una disolución acuosa de HCl 1M (20 ml). La mezcla resultante se extrajo sucesivamente con EtOAc (2 x 20 ml), se secó sobre Na2SO4 y se evaporó. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna (DCM/MeOH: 100/0 a 95/5) para producir el compuesto 55 (200 mg, rendimiento del 9,5%/2 etapas) como un aceite amarillo.
MS (ES+): 637
Etapa 10: Síntesis de 2-amino-9-((2’R,6aR,8R,9aR)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidroespiro[furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocina-9,2’-tietan]-8-il)-1 H-purin-6(9H)-ona 56
El intermedio 55 (160 mg, 250,8 umol, 1 eq) se colocó en un tubo sellado bajo nitrógeno, y después se añadió MeOH/NH3 (4 ml) a 20°C. La disolución resultante se agitó a 110°C durante 16 h. La mezcla de reacción se concentró a vacío para producir el compuesto 16 ( 12 0 mg, bruto) como un aceite amarillo.
MS (ES+): 568
Etapa 11: Síntesis de 2-amino-9-((4R,5R,7R,8R)-8-hidroxi-7-(hidroximetil)-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-5-il)-1H-purin-6(9H)-ona 57
El intermedio 56 (120 mg, 211 Dmoles, 1 eq) se disolvió en MeOH (5 ml) a 20°C bajo nitrógeno, y después se añadió NH4 F (23,5 mg, 633 Dmoles, 3 eq). La mezcla de reacción se agitó a 50°C durante 16 h, después se concentró. El residuo resultante se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto 57 (20 mg, rendimiento del 29%) como un sólido de color blanco.
MS (ES+): 326; 1H RMN (400 MHz, MeOD): 57,93 (s, 1 H), 6,19 (s, 1 H), 4,43 (d, J=5,6 Hz, 1 H), 3,76-3,74 (m, 2 H), 3,74-3,73 (m, 1 H), 3,67-3,65 (m, 1 H), 2,90-2,87 (m, 2 H), 2,76-2,73 (m, 1 H).
Esquema 16 Síntesis de (4R,5R,7R,8R)-5-(6-amino-9H-purin-9-il)-7-(hidroximetil)-6-oxa-1-tiaespiro[3.4]octan-8-ol 67 Etapa 1: (6aR,8R,9R,9aS)-8-(6-am¡no-9H-pur¡n-9-il)-2,2,4,4-tetra¡soprop¡ltetrah¡dro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]tr¡oxad¡s¡loc¡n-9-ol 58
A una disolución de adenosina (20 g, 74,838 mmoles) e imidazol (7,642 g, 112,257 mmoles) en DMF seco (100 ml) a r.t. se añadió 1,3-dicloro-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxano (26,335 ml, 0,986 g/ml, 82,322 mmoles) en atmósfera de nitrógeno. La mezcla se agitó a r.t. durante 2 h.
La mezcla se vertió en una mezcla de hielo y agua (200 ml), y después se extrajo con EtOAc (2 x 300 ml). La capa orgánica se lavó sucesivamente con salmuera (4 x 300 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró, y se concentró para producir el intermedio bruto 58 como una espuma blanca (41,3 g), que se usó como tal para el siguiente etapa.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1,01 - 1,09 (m, 28 H), 3,91 - 3,96 (m, 1 H), 4,00 (dt, J=8,5, 2,9 Hz, 1 H), 4,04 (d, J=3,3 Hz, 1 H), 4,52 (t, J=4,5 Hz, 1 H), 4,80 (dd, J=8,5, 5,2 Hz, 1 H), 5,59 (d, J=4,6 Hz, 1 H), 5,87 (d, J=1,1 Hz, 1 H), 7,29 (s, 2 H), 8,07 (s, 1 H), 8,20 (s, 1 H)
MS (ES+): 560,3,
Etapa 2: N-(9-((6aR,8R,9R,9aS)-9-h¡drox¡-2,2,4,4-tetra¡soprop¡ltetrah¡dro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]tr¡oxad¡s¡loc¡n-8-¡l)-9H-pur¡n-6-¡l)-4-metox¡-N-(4-metox¡benzo¡l)benzam¡da 59
A una disolución del intermedio bruto 58 (20,5 g, 36,194 mmoles) en piridina seca (150 ml) se añadió a 20°C en atmósfera de nitrógeno TMSCl (19,43 ml, 0,85 g/ml, 152,015 mmoles). Después de 1 h30 de agitación a temperatura ambiente, se añadió cloruro de parametoxibenzoílo (24,698 g, 144,776 mmoles). La mezcla resultante se agitó a r.t. durante la noche. La mezcla de reacción se enfrió con un baño de hielo, y se añadieron 10 ml de agua. Después de 5 min, se añadió una disolución acuosa saturada de NaHCO3 (200ml), y la mezcla se agitó a 40°C durante la noche.
La mezcla resultante se extrajo con EtOAc (3 x 500 ml). Las capas orgánicas se combinaron sucesivamente, se lavaron con una disolución acuosa de HCl 1M (2 x 500 ml), salmuera (3 x 500 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron, y se concentraron para producir el intermedio bruto 59 (39,18 g) como un sólido amarillo.
MS (ES+): 778,5,
Etapa 3: 4-metox¡-N-(4-metox¡benzo¡l)-N-(9-((6aR,8R,9aR)-2,2,4,4-tetra¡soprop¡l-9-oxotetrah¡dro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]tr¡oxad¡s¡loc¡n-8-¡l)-9H-pur¡n-6-¡l)benzam¡da 60
A una disolución del intermedio bruto 59 (38,5 g, 35,381 mmoles) en diclorometano seco (400 ml) se añadió peryodinano de Dess-Martin (45,021 g, 106,144 mmoles) a r.t. bajo atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a r.t. durante la noche.
Después se diluyó con diclorometano (200 ml), se lavó con agua (200 ml), y la capa de agua se extrajo con DCM (200 ml). Las capas orgánicas se combinaron sucesivamente, se lavaron con una disolución saturada de NaHCO3 (200 ml), con salmuera (2 x 200 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron.
El residuo bruto se purificó mediante una columna de cromatografía sobre gel de sílice (heptano/EtOAc, 10/0 a 6/4) para producir el intermedio 60 como una espuma blanca (17,11 g, 22,04 mmoles, 63% en 3 etapas). El intermedio 60 se obtiene como una cetona, y como una cetona hidratada, y ambas son reactivos en la reacción de Wittig que sigue.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 0,99 - 1,19 (m, 28 H), 3,80 (d, J=1,1 Hz, 6 H), 3,82 - 3,85 (m, 1 H), 3,95 - 4,06 (m, 2 H), 5,36 (d, J=9,7 Hz, 1 H), 6,32 (s, 1 H), 6,98-7,03 (m, 4 H), 7,71 - 7,76 (m, 4 H), 8,47 (s, 1 H), 8,81 (s, 1 H)
MS (ES+): 776,3,
Etapa 4: 2-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-tetra¡soprop¡l-8-(6-(4-metox¡-N-(4-metox¡benzo¡l)benzam¡do)-9H-pur¡n-9-¡l)d¡h¡dro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]tr¡oxad¡s¡loc¡n-9(8H)-¡l¡den)acetato de et¡lo 61
A una disolución de fosfonoacetato de trietilo (4,404 ml, 1,13 g/ml, 22,197 mmoles) en Me-THF (250 ml) se añadió terc-butóxido de potasio (2,874 g, 25,612 mmoles) a -10°C □ -5°C, y la mezcla se agitó durante 30 min. A esta mezcla se añadió gota a gota una disolución del intermedio 60 (13,25 g, 17,075 mmoles) en Me-THF (250 ml), y se dejó calentar a r.t. y se agitó durante 1 h.
Se añadió agua (100 ml), y la mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 200 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera (2 x 200 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se disolvió en DCM y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (hept/EtOAc, 9/1 a 6/4) para producir el intermedio 61 como una espuma blanca (13,03 g, 15,4 mmoles, mezcla Z/E, 90%).
Z: 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 5 ppm 1,00 - 1,28 (m, 31 H), 3,73 - 3,86 (m, 6 H), 3,96 - 4,19 (m, 5 H), 5,75 - 5,82 (m, 1 H), 5,98 - 6,05 (m, 1 H), 6,94 - 7,04 (m, 5 H), 7,70 - 7,78 (m, 4 H), 8,65 (s, 1 H), 8,66 - 8,70 (m, 1 H)
E: 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 5 ppm 1,00 - 1,30 (m, 31 H), 3,74 - 3,85 (m, 6H), 3,94 - 4,18 (m, 5 H), 5,75 - 5,79 (m, 1 H), 6,02 (t, J=2,2 Hz, 1 H), 6,97 - 7,02 (m, 5 H), 7,71 - 7,76 (m, 4 H), 8,64 (s, 1 H), 8,68 (s, 1 H)
MS (ES+): 846,5,
Etapa 5: 2-((6aR,8R,9R,9aR)-9-((2-c¡anoet¡l)tio)-2,2,4,4-tetra¡soprop¡l-8-(6-(4-metox¡benzam¡do)-9H-pur¡n-9-il)tetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il)acetato de et¡lo 62
A una disolución de 3-mercaptopropiononitrilo (3,605 g, 41,366 mmoles) en THF seco (100 ml) se añadió NaH (dispersión al 60% en aceite mineral) (1,985 g, 49,64 mmoles) a 0°C en atmósfera Ce nitrógeno, y la mezcla se agitó Curante 30 min. A esta mezcla se añadió a 0°C el intermedio 61 (7 g, 8,273 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 2 h.
La mezcla de reacción se vertió lentamente en una disolución acuosa saturada de NH4Cl y hielo (100 ml), se diluyó con EtOAc (100 ml) y se añadió una disolución acuosa de HCl 1M hasta pH 7. Las dos capas se separaron, y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml). Las capas orgánicas se combinaron sucesivamente, se lavaron con salmuera (2 x 100 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron.
El residuo bruto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (heptano/EtOAc, 10/0 a 6/4) para producir el intermedio 62 como una espuma blanca (1,43 g, 1,789 mmoles, 22%).
1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 5 ppm 0,98 - 1,29 (m, 31 H), 2,81 - 3,00 (m, 4 H), 3,23 (m, 2 H), 3,54 - 3,77 (m, 2 H), 3,86 (s, 3 H), 3,94 - 4,13 (m, 2 H), 4,30 (a dd, J=7,9, 2,6 Hz, 1 H), 5,72 (a d, J=7,9 Hz, 1 H), 6,41 (s, 1 H), 7,08 (d, J=8,6 Hz, 2 H), 8,03 (d, J=8,8 Hz, 2 H), 8,46 (s, 1 H), 8,68 (s, 1 H), 11,07 (s, 1 H)
MS (ES+): 799,7,
Etapa 6: N-(9-((6aR,8R,9R,9aR)-9-((2-cianoet¡l)t¡o)-9-(2-h¡drox¡et¡l)-2,2,4,4-tetra¡soprop¡ltetrah¡dro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxad¡s¡loc¡n-8-¡l)-9H-pur¡n-6-¡l)-4-metox¡benzam¡da 63
A una disolución del intermedio 62 (1,43 g, 1,789 mmoles) en THF seco (50 ml) se añadió gota a gota LAH (1M en THF) (8,947 ml, 8,947 mmoles) a -60°C en atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a -60°C durante la noche.
Se añadió gota a gota una disolución acuosa saturada de NH4Cl (30 ml) a -60°C a la mezcla de reacción. Después, la mezcla resultante se dejó calentar lentamente de nuevo a r.t., y se añadió EtOAc (50 ml). Las dos capas se separaron, y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron sucesivamente, se lavaron con salmuera (2x80 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron.
El residuo bruto se purificó mediante cromatografía en columna (Hept/EtOAc, 1/9 a 0/10) para producir el intermedio 63 como una espuma amarillenta (285 mg, 0,376 mmoles, 21%).
MS (ES+): 757,7,
Etapa 7: metanosulfonato de 2-((6aR,8R,9R,9aR)-9-((2-cianoetil)t¡o)-2,2,4,4-tetra¡soprop¡l-8-(6-(4-metoxibenzamido)-9H-pur¡n-9-¡l)tetrah¡dro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4] trioxadisilocin-9-il)etilo 64
A una disolución del intermedio 63 (427 mg, 0,564 mmoles) en piridina seca (15 ml) se añadió MsCl (0,0657 ml, 1,475 g/ml, 0,846 mmoles) a r.t. La mezcla resultante se agitó a r.t. durante 1 hora en atmósfera de nitrógeno.
El disolvente se evaporó, y el residuo resultante se disolvió en acetato de etilo (10 ml), después se lavó con una disolución acuosa saturada de NaHCO3 (10ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron sucesivamente con salmuera (2 x 10 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para producir el intermedio 64 como una espuma amarilla bruta (471 mg), que se usó inmediatamente para la siguiente etapa, ya que es inestable.
MS (ES+): 835,5,
Etapa 8: 4-metoxi-N-(9-((6aR,8R,9R,9aR)-2,2,4,4-tetra¡soprop¡ld¡hidro-6H,8H-esp¡ro[furo[3,2-f][1,3,5,2,4]tr¡oxad¡s¡loc¡na-9,2’-tietan]-8-¡l)-9H-pur¡n-6-¡l)benzam¡da 65
A una disolución del intermedio bruto 64 (471 mg, 0,564 mmoles) en THF seco (15 ml) a -782C en atmósfera de nitrógeno se añadió gota a gota una disolución fría de KOtBu en THF (1,128 ml, 1 M, 1,128 mmoles). La mezcla resultante se agitó a -78°C durante 10 min.
La mezcla de reacción se inactivó vertiendo una disolución acuosa saturada de NH4Cl (5 ml) a -78°C, y la mezcla se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente. Se añadió EtOAc (20 ml), las dos capas se separaron, y la capa de agua se extrajo usando EtOAc (2 x 20 ml). Las capas orgánicas se combinaron sucesivamente, se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para producir el intermedio bruto 65 (380 mg). El bruto contiene 65, y 65 hidrolizado en la posición 5’. Ambos intermedios reaccionan de la misma manera en la siguiente etapa.
MS (ES+): 686,5,
Etapa 9: N-(9-((4R,5R,7R,8R)-8-h¡drox¡-7-(h¡drox¡met¡l)-6-oxa-1-t¡aesp¡ro[3.4]octan-5-¡l)-9H-pur¡n-6-¡l)-4-metox¡benzam¡da 66
A una disolución del intermedio bruto 65 (380 mg, 0,554 mmoles) en MeOH (10 ml) se añadió fluoruro de amonio (0,205 g, 5,539 mmoles) a r.t. bajo atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó durante la noche a r.t. La mezcla resultante se diluyó con agua (20 ml) y EtOAc (20 ml). Las dos capas se separaron, y la capa de agua se extrajo usando EtOAc (3 x 20 ml). Las capas orgánicas se combinaron sucesivamente, se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron.
El residuo bruto se purificó mediante cromatografía en columna (DCM/MeOH, 1% a 6%) para producir el intermedio 66 como una espuma blanca (140 mg, 0,278 mg, 88% de pureza, 50% en 3 etapas).
MS (ES+): 444,3,
Etapa 10: (4R,SR,7R,8R)-5-(6-am¡no-9H-pur¡n-9-¡l)-7-(h¡drox¡met¡l)-6-oxa-1-t¡aesp¡ro[3.4]octan-8-ol 67
El intermedio 66 (140 mg, 0,278 mmoles) se disolvió en NH3 (7M en MeOH) (15 ml, 7 M, 105 mmoles), y la mezcla de reacción se agitó a 70°C durante 10 h.
La mezcla resultante se evaporó, y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (DCM/NH3 (7M en MeOH), 3% a 9%) para producir un producto puro como un polvo blanco (77,1 mg, 0,249 mmoles, 90%).
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 2,28 (ddd, J=12,5, 8,7, 5,6 Hz, 1 H), 2,68 (ddd, J=12,4, 8,5, 6,8 Hz, 1 H), 2,82 -2,92 (m, 2 H), 3,55 (dt, J=7,6, 3,0 Hz, 1 H), 3,64 (dt, J=12,3, 4,4 Hz, 1 H), 3,72 - 3,82 (m, 1 H), 4,32 (a d, J=5,1 Hz, 1 H), 5,23 (t, J=5,2 Hz, 1 H), 5,70 - 5,77 (m, 1 H), 6,55 (s, 1 H), 7,32 (s, 2 H), 8,20 (s, 1 H), 8,46 (s, 1 H)
13C RMN (101 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 19,11 (s, 1 C), 30,15 (s, 1 C), 59,48 (s, 1 C), 60,86 (s, 1 C), 72,17 (s, 1 C), 82,31 (s, 1 C), 91,32 (s, 1 C), 118,56 (s, 1 C), 138,68 (s, 1 C), 149,34 (s, 1 C), 152,75 (s, 1 C), 156,05 (s, 1 C)
MS (ES+): 310,2,
SÍNTESIS DE 5’-TRIFOSFATOS DE NUCLEÓSIDO
El nucleósido seco (0,05 mmoles) se disolvió en PO (OMe)3 seco (0,7 ml), se añadió N-metilimidazol (0,009 ml, 0,11 mmoles), seguido de POCh (0,009 ml, 0,11 mmoles), y la mezcla se mantuvo a R.T. durante 20-40 minutos. La reacción se controló mediante LCMS y se monitoreó mediante la aparición del correspondiente 5’-monofosfato del nucleósido. Después de completarse la reacción, se añadió sal de pirofosfato de tetrabutilamonio (150 mg) y a continuación DMF (0,5 mL) para obtener una solución homogénea. Después de 1,5 horas a temperatura ambiente, la reacción se diluyó con agua (10 mL) y se introdujo en una columna HiLoad 16/10 con Q Sepharose de alto rendimiento. La separación se realizó en un gradiente lineal de NaCl de 0 a IN en amortiguador de TRIS 50 mM (pH 7,5). El trifosfato se eluyó a 75-80% B. Se concentraron las fracciones correspondientes. La eliminación de las sales se consiguió mediante RP HPLC en una columna Synergy Hydro-RP de 4 micras (Phenominex). Para la elución, se utilizó un gradiente lineal de metanol de 0 a 30% en amortiguador de acetato de trietilamonio 50 mM (pH 7,5). Las fracciones correspondientes se combinaron, se concentraron y se liofilizaron 3 veces para eliminar el exceso de tampón.
Figure imgf000047_0001
EJEMPLOS BIOLÓGICOS
ENSAYO DE REPLICÓN
Los compuestos de Fórmula (I) se examinaron para determinar la actividad frente a VHC en un ensayo celular. El ensayo se usó para demostrar que los compuestos de Fórmula (I) inhibían una línea celular de replicación celular funcional del VHC, también conocida como replicones del VHC. El ensayo celular se basó en una construcción de expresión bicistrónica, tal como se describe por Lohmann et al. (1999) Science vol. 285 pp.110-113 con modificaciones descritas por Krieger et al. (2001) Journal of Virology 75: 4614-4624, en una estrategia de detección de múltiples dianas.
En esencia, el método fue el siguiente. El ensayo utilizó la línea celular transfectada de forma estable Huh-7 luc/neo (en lo sucesivo denominada Huh-Luc). Esta línea celular alberga un ARN que codifica una construcción de expresión bicistrónica que comprende las regiones NS3-NS5B de tipo salvaje del VHC tipo 1b traducidas de un sitio de entrada de ribosoma interno (IRES) del virus de la encefalomiocarditis (EMCV), precedidas por una porción informadora (FfL-luciferasa), y una porción marcadora seleccionable (neoR, neomicina fosfotransferasa). La construcción está delimitada por las NTR (regiones no traducidas) 5' y 3' del genotipo 1b del VHC. El cultivo continuado de las células del replicón en presencia de G418 (neoR) depende de la replicación del ARN del VHC. Las células del replicón transfectadas de forma estable que expresan el ARN del VHC, que se replica de forma autónoma y en niveles altos, que codifican entre otros luciferasa, se usaron para la identificación de los compuestos antivirales.
Las células del replicón se sembraron en placas de 384 pocillos en presencia de los compuestos de ensayo y de control, que se añadieron en diversas concentraciones. Después de una incubación de tres días, se midió la replicación del VHC analizando la actividad de luciferasa (utilizando sustratos y reactivos de ensayo de luciferasa estándar y un generador de imágenes de microplacas Perkin Elmer ViewLux™ ultraHTS). Las células del replicón en los cultivos de control tienen una alta expresión de luciferasa en ausencia de cualquier inhibidor. La actividad inhibidora del compuesto sobre la actividad de luciferasa se monitorizó en las células Huh-Luc, lo que permitió una curva de respuesta a la dosis para cada compuesto de ensayo. Entonces se calcularon los valores de EC50, valor que representa la cantidad del compuesto necesaria para disminuir en un 50% el nivel de actividad de luciferasa detectada, o más específicamente, la capacidad para replicarse del ARN del replicón del VHC ligado genéticamente.
ACTIVIDAD ANTIVIRAL FRENTE A DENV-2/16681/eGFP EN CÉLULAS Vero Y Huh-7
Métodos
La actividad antiviral de los compuestos frente a DENV-2/16681/eGFP se determinó en un ensayo antiviral fenotípico con lectura de eGFP, una medida para la cantidad de virus (TV-WI-03476 y TV-WI-05601). Paralelamente, se midió la citotoxicidad de los compuestos utilizando ATPLite™ (PerkinElmer, Waltham, MA). El ensayo se realizó en dos líneas celulares diferentes (Vero y Huh-7) para excluir la actividad del compuesto específica de las células.
DENV-2/16681/eGFP se produjo mediante la transfección del ARN transcrito in vitro del plásmido pFK-DVs-G2A (adquirido del Prof. R. Bartenschlager, University of Heidelberg, Alemania; Figura 1) en células Huh-7 (células de hepatocarcinoma humano; amablemente proporcionadas por el Prof. R. Bartenschlager) (TV-WI-04247).
En resumen, se sembraron 2.500 células Vero (células de riñón de mono verde africano; Colección europea de cultivos celulares [ECACC], Porton Down, Reino Unido; número de catálogo 84113001) o células Huh-7 en placas de 384 pocillos que contenían compuesto de ensayo diluido en serie 9 veces. Después de incubar 24 h a 37°C, las células Vero y Huh-7 se infectaron con DENV-2/16681/eGFP a una multiplicidad de infección (MOI) de 1 y 5, respectivamente. Después de 3 días de incubación a 37°C, se cuantificó la replicación viral midiendo la expresión de eGFP en las células con un microscopio de láser. La concentración efectiva del 50% (EC50) se definió como la concentración que inhibe el 50% de la expresión de eGFP de las células infectadas con DENV tratadas con compuesto frente las células infectadas con DENV no tratadas (control de virus), utilizando los controles de células como línea de base de la señal de eGFP (es decir, 0% de señal). De la misma forma, se calculó la concentración efectiva al 90% (EC90).
Paralelamente, los efectos citotóxicos de los compuestos (concentración citotóxica del 50% [CC50] y concentración citotóxica del 90% [CC90]) se evaluaron utilizando un ensayo de luminiscencia de viabilidad celular ATPlite (PerkinElmer). Para este fin, se añadió ATPlite a los pocillos según con las instrucciones del proveedor una vez que se realizó la lectura de eGFP, y se midió la luminiscencia; una medida directamente relacionada con el número de células viables. La CC50 se determinó como la concentración inhibidora del 50% para la señal luminiscente en células infectadas con DENV tratadas con compuesto en comparación con células infectadas con DENV no tratadas (control de virus), usando un control de medio como línea de base de la luz emitida (es decir, 0% de señal).
ENSAYO DE INHIBICIÓN DE POLIMERASA DEL VIRUS DEL DENGUE
La actividad enzimática del dominio de NS5 polimerasa del virus del dengue (DENVpol, serotipo 2, cepa C de Nueva Guinea) se mide como una incorporación de NMP tritiado en productos de ARN insolubles en ácido. Las reacciones del ensayo de DENVpol contienen enzima recombinante, ARN heteropolimérico, alrededor de 0,5 gCi de NTP tritiado, 0,33 gM de NTP frío competitivo, HEPES 40 mM (pH 7,5), ditiotreitol 3 Mm, y MgCl22 mM. Las reacciones estándar se incuban durante 3 horas a 30°C, en presencia de una concentración creciente de inhibidor. Al final de la reacción, el ARN se precipita con TCA al 10%, y los productos de ARN insolubles en ácido se filtran en una placa de 96 pocillos de exclusión por tamaño. Después de lavar la placa, se añade líquido de centelleo, y los productos de ARN radiomarcados se detectan según procedimientos estándar con un contador de centelleo Trilux Topcount. La concentración de compuesto a la que la velocidad catalizada por enzima se reduce en un 50% (IC50) se calcula ajustando los datos a una regresión no lineal (sigmoidea).
PRINCIPIO Y MÉTODO DE ENSAYO CONTRA CHIKV
Las actividades antivirales de los análogos de nucleósidos frente al virus chikungunya (CHIKV) se ensayaron usando un ensayo de inhibición de CPE (efecto citopático) de alto rendimiento basado en células. En este ensayo, se emplearon la cepa S27 de CHIKV y células Huh7 (una línea celular de hepatoma humano). Los compuestos de ensayo se prepararon en diluciones en serie de cuatro veces de 9 puntos, y se sembraron en una placa de 384 pocillos. A continuación, se añadió a cada pocillo una densidad de 8000 células/pocillo y una MOI (multiplicidad de infección) de 0,25 CHIKV. Las placas se incubaron a 37°C/5% de CO2 durante 2 días. La actividad antiviral de un compuesto de ensayo se midió mediante la adición de un kit de 1 etapa ATPLite™ 1 (PerkinElmer), que mide los niveles de ATP en células vivas protegidas del CPE viral por un compuesto de ensayo. La citotoxicidad de los compuestos de ensayo se midió en paralelo en ausencia de infección por virus. La lectura es la luminiscencia.
Resultados
La Tabla 1A muestra los datos antivirales obtenidos frente a HCV, DV y CHIKV, y la toxicidad celular.
Tabla 1A. Actividad antiviral de compuestos seleccionados (ensayos basados en células)
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Figure imgf000050_0001
Figure imgf000051_0001
Figure imgf000052_0001
Tabla 1B. Datos bioquímicos de inhibición de la polimerasa
Figure imgf000052_0002
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La Tabla 1C muestra los datos antivirales de los compuestos de la presente invención obtenidos frente a VHC y CHIKV en comparación con los datos obtenidos para derivados de espiro-oxetano. Los datos muestran claramente que los compuestos de la presente invención (dos primeras líneas de la tabla 1C) son más activos en VHC y CHIKV en comparación con los derivados de espiro-oxetano (dos últimas líneas de la tabla 1C).
Tabla 1C. Actividad antiviral de compuestos seleccionados de la presente invención
en comparación con derivados de espiro-oxetano.
Figure imgf000053_0002

Claims (13)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de Fórmula
Figure imgf000054_0001
Figure imgf000054_0002
o una forma estereoisomérica del mismo, en la que
la base se selecciona del grupo que consiste en (B-1), (B-2), (B-3a), (B-3b), (B-4) y (B-5)
Figure imgf000054_0003
en las que R es hidrógeno o alquilo de C1-6 ; y
R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno,
Figure imgf000054_0004
un grupo de fórmula (a-1), un grupo de fórmula (a-2), un grupo de fórmula (a-3), y un grupo de fórmula (a-4)
Figure imgf000054_0005
en las que
R4 y R7 se selecciona cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fenilo, naftilo, quinolinilo, isoquinolinilo, y piridilo, estando cada uno de los cuales opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo de C1-C6 , alquenilo de C2-C6 , alcoxi de C1-C6, hidroxi, y NR16R16’; o
R4 y R7 son cada uno independientemente indolilo, opcionalmente sustituido en su átomo de nitrógeno con alquilo de C1-C6 o alquilC1-C6oxicarbonilo, y/o en cualquier átomo de carbono disponible con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo de C1-C6 , alquenilo de C2-C6 , alcoxi de C1-C6, hidroxi, y NR17R17’;
R5, R5', R10 y R10' se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de Ci-C6, bencilo, y fenilo; o
R5 y R5', o R10 y R10', junto con el átomo de carbono al que están unidos, forman un cicloalcanodiilo de C3-C7 o un anillo heterocíclico de 3 a 7 miembros que contiene un átomo de oxígeno;
R6 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7 , fenilo y fenil-alquilo de C1-C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en hidroxi, alcoxi de C1-C6 , y NR18R18';
R8 es —OR19 o —NR20R20';
R9 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6, fenilo, y fenil-alquilo de C1-C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo y alquiloxi de C1-C6 ;
R11 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7 , fenilo o fenil-alquilo de C1-C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en hidroxi, alcoxi de C1-C6 , y NR23R23';
R19 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6 , cicloalquilo de C3-C7 , oxetanilo, (alcoxi de C1-C6)alquilo de C1-C6-, -CH2-O-(C=O)alquilo de C1-C6 , y -CH2-O-(C=O)Oalquilo de C1-C6 ;
R20 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C6 , y cicloalquilo de C3-C7 ; y R20' se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6 , cicloalquilo de C3-C7 , y (alcoxi de C1-C6)alquilo de C1-C6-; o
—NR20R20' forma en conjunto un anillo de azetidinilo, pirrolidinilo o piperidinilo, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con un grupo que consiste en hidroxi, alquilo de C1-C6 , alquiloxi de C1-C6 , y (C=O)-OR21, en el que R21 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7 , fenilo y fenil-alquilo de C1-C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en hidroxi, alcoxi de C1-C6 , y NR22R22';
R2 es hidrógeno o un grupo de fórmula (b)
Figure imgf000055_0001
Figure imgf000055_0002
en la que
R12 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6 , fenilo, y fenil-alquilo de C1-C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo y alquiloxi de C1-C6 ; o
R1 y R2 están unidos para formar un radical divalente de fórmula (c-1) o (c-2)
Figure imgf000055_0003
en las que
R13 y R13' se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C6 , bencilo, y fenilo; o
R13 y R13', junto con el átomo de carbono al que están unidos, forman un cicloalcanodiilo de C3-C7 o un anillo heterocíclico de 3 a 7 miembros que contiene un átomo de oxígeno;
R14 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7 , fenilo y fenil-alquilo de C1-C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en hidroxi, alcoxi de C1-C6 , y NR24R24';
R15 es —OR25 o —NR26R26'; en el que
R25 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno; alquilo de C1-C6 ; alquilo de C1-C3 sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en fenilo, naftilo, cicloalquilo de C3-C7 , hidroxilo, y alquiloxi de C1-C6 ; cicloalquilo de C3-C7 ; (alcoxi de C1-C6)alquilo de C1-C6-; -CH2-O-(C=O)alquilo de C1-C6; -CH2-O-(C=O)Oalquilo de C1-C6 ; un anillo heterocíclico de 3 a 7 miembros que contiene un átomo de oxígeno; y
Ar; en el que
Ar se selecciona del grupo que consiste en fenilo, naftilo, quinolinilo, isoquinolinilo, y piridilo, estando cada uno de los cuales opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo de C1-C6 , alquenilo de C2-C6 , alcoxi de C1-C6 , hidroxi, y NR27R27'; o
Ar es indolilo, opcionalmente sustituido en su átomo de nitrógeno con alquilo de C1-C6 o alquilC1-C6oxicarbonilo, y/o en cualquier átomo de carbono disponible con 1,2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo de C1-C6 , alquenilo de C2-C6 , alcoxi de C1-C6 , hidroxi, y NR28R28';
R26 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C6 , y cicloalquilo de C3-C7 ; y R26' se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6 , cicloalquilo de C3-C7 , y (alcoxi de C1-C6)alquilo de C1-C6-; o
—NR26R26' forma en conjunto un anillo de azetidinilo, pirrolidinilo o piperidinilo, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con un grupo que consiste en hidroxi, alquilo de C1-C6 , alquiloxi de C1-C6 , y (C=O)-OR27, en el que R27 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7 , fenilo y fenil-alquilo de C1-C6-, en el que el resto fenilo en fenilo o fenil-alquilo de C1-C6- está opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en hidroxi, alcoxi de C1-C6 , y NR29R29';
R16, R16', R17, R17', R18, R18', R22, R22', R23, R23', R24, R24',
Figure imgf000056_0001
R28, R28', R29 independientemente de hidrógeno y alquilo de C1-C6 ; y
R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, metilo, CH2Cl, CH2 F y N3 ;
o sus sales y solvatos farmacéuticamente aceptables.
2. El compuesto según la reivindicación 1 en el que
R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno,
Figure imgf000056_0002
un grupo de fórmula (a-1), un grupo de fórmula (a-2), y un grupo de fórmula (a-3), en las que
R4 y R7 son cada uno independientemente fenilo o naftilo, estando cada uno de los cuales opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6 , alcoxi de C1-C6 , hidroxi, y NR16R16';
en la que R16 y R16 se seleccionan independientemente de hidrógeno y alquilo de C1-C6 ; o R4 y R7 son cada uno independientemente indolilo;
R5 y R5' se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C6 , bencilo, y fenilo; o R5', junto con el átomo de carbono al que están unidos, forman un cicloalcanodiilo de C3-C7 ;
R6 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7 y fenil-alquilo de C1-C6-;
R8 es —OR19 o —NR20R20'; en los que R19 es alquilo de C1-C6 o cicloalquilo de C3-C7 ;
R20 es hidrógeno y R20' es alquilo de C1-C6 o cicloalquilo de C3-C7 ; y
R9 es alquilo de C1-C6.
R2 es hidrógeno o un grupo de fórmula (b), en la que R12 es alquilo de C1-C6 ; o
R1 y R2 están unidos para formar un radical divalente de fórmula (c-1) o (c-2), en la que R13 y R13' se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de C1-C6, bencilo, y fenilo; o R13 y R13', junto con el átomo de carbono al que están unidos, forman un cicloalcanodiilo de C3-C7 ;
R14 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, cicloalquilo de C3-C7 y fenil-alquilo de C1-C6-; y R15 es —OR25 o —NR26R26', en los que R25 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6 ; fenilo; cicloalquilo de C3-C7 ; y alquilo de C1-C3 sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, seleccionados cada uno independientemente del grupo que consiste en fenilo, naftilo, cicloalquilo de C3-C7 , hidroxilo y alquilC1-C6oxi; R26 es hidrógeno; y R26' es alquilo de C1-C6 o cicloalquilo de C3-C7.
3. El compuesto según la reivindicación 1 o 2 en el que R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno,
Figure imgf000057_0001
, y un grupo de fórmula (a-1);
O R1 y R2 están unidos para formar un radical divalente de fórmula (c-2).
4. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde
R4 es fenilo, halofenilo, dialquilC1-C4fenilo, o naftilo;
y R5' son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo de C1-C6 , bencilo o fenilo;
R6 es alquilo de C1-C6 ; y
R15 es —OR25, en el que R25 es alquilo de C1-C6 o alquilo de C1-C2 sustituido con fenilo, alquilC1-C2oxi o cicloalquilo de C3-C7.
5. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que la base es (B-1), (B-2) o (B-3a), y R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, y N3.
6. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz, en particular una cantidad antiviralmente eficaz, de un compuesto de Fórmula (I') como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
7. Un procedimiento para preparar la composición farmacéutica según la reivindicación 6, caracterizado por que un vehículo farmacéuticamente aceptable se mezcla íntimamente con una cantidad terapéuticamente eficaz, en particular una cantidad antiviralmente eficaz, de un compuesto de Fórmula (I') como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.
8. Un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una composición farmacéutica como se define en la reivindicación 6, para uso como medicamento.
9. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una composición farmacéutica como se define en la reivindicación 6, para uso en el tratamiento o prevención de infecciones por virus Flaviviridae, y/o en el tratamiento o en la prevención de infecciones por alfavirus.
10. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una composición farmacéutica como se define en la reivindicación 6, para uso como inhibidor del VHC y/o del virus del dengue.
11. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una composición farmacéutica como se define en la reivindicación 6, para uso como inhibidor del virus chikungunya y/o virus Sindbis y/o virus Bosque Simliki.
12. Compuesto de Fórmula (I') como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para uso en el tratamiento de un animal de sangre caliente, en particular un ser humano, infectado por Flaviviridae y/o alfavirus, o que está en riesgo de infectarse por Flaviviridaey/o alfavirus, en el que el tratamiento comprende la administración de una cantidad eficaz anti-Flaviviridae y/o anti-alfavirus de un compuesto de Fórmula (I').
13. Un producto que comprende un compuesto de Fórmula (I') como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y un agente farmacéutico adicional, en particular un antiviral adicional, como preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en el tratamiento o la prevención de infecciones por virus Flaviviridae, y/o para uso en el tratamiento o en la prevención de infecciones por alfavirus.
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