ES2902585T3

ES2902585T3 - Composición que tiene actividad antimicrobiana

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Publication number: ES2902585T3
Application number: ES19729843T
Authority: ES
Inventors: Alessandro Zanini; Marco Vellante; Eugenio Sodo; Giovanni Cavallo; Fulvio Foschini
Original assignee: Offhealth SpA
Current assignee: Offhealth SpA
Priority date: 2018-05-11
Filing date: 2019-05-10
Publication date: 2022-03-29
Anticipated expiration: 2039-05-10
Also published as: CA3099892A1; EP3772946A1; MA52229A; WO2019215700A1; PL3772946T3; IT201800005309A1; EP3772946B1

Abstract

Asociación de liposomas de estearilamina con ácido hialurónico o una sal sódica del mismo, en la que los fosfolípidos y la estearilamina están en diferentes proporciones molares en los liposomas, con los fosfolípidos igual al 0,5 % en peso y la estearilamina variando entre 0,001 y 0,010 % en peso, para su uso en el tratamiento de infecciones microbianas causadas por bacterias, hongos y Candida albicans.

Description

DESCRIPCIÓN

Composición que tiene actividad antimicrobiana

Campo de la invención

[0001] La presente invención se refiere al campo medico-farmacéutico y más específicamente al campo de preparaciones para el uso tópico que tienen actividad antimicrobiana que se utilizan en una amplia gama de aplicaciones. Por ejemplo, la composición puede aplicarse en todas aquellas áreas en las que es necesario eliminar o reducir el riesgo de infección causada por microbios en un amplio rango de superficies, en particular en la superficie epitelial.

Antecedentes de la invención

[0002] Las infecciones microbianas representan un riesgo de salud global importante que afecta a millones de personas en todo el mundo. A lo largo de años, se han desarrollado muchos fármacos y dispositivos antimicrobianos para mejorar el tratamiento o la prevención de infecciones microbianas. Sin embargo, estamos presenciando en este tiempo una pérdida progresiva de eficacia de las terapias antibióticas en el uso y la emergencia de infecciones resistentes a estos fármacos representa un daño potencialmente devastador para la salud colectiva, los sistemas de salud y las economías del mundo entero. Por lo tanto, es necesario contraatacar lo antes posible actuando en dos frentes: el de la prevención, dirigido a evitar o contener el desarrollo de una futura resistencia y propagación de infecciones que se realiza en el campo de observación, uso correcto de antibióticos y protocolos en hospitales. El otro frente es la investigación y el desarrollo de nuevos principios activos y composiciones con dicha actividad.

[0003] Por lo tanto, existe una gran necesidad de composiciones nuevas y alternativas con actividad antimicrobiana que permita ampliar el rango de acción contra los determinantes microbianos de patologías dañinas para seres humanos y animales.

[0004] La solicitud de patente de Estados Unidos US2013/0216606 se refiere a una formulación liposomal para administrar fármacos en el ojo que comprende (i) liposomas que comprenden como mínimo una bicapa lipídica y (ii) un fármaco de prostaglandina y/o un derivado de prostaglandina asociado en liposomas, en donde los liposomas tienen un diámetro promedio inferior a 2|jn, y el producto farmacéutico que comprende la formulación liposomal y un procedimiento para producir la formulación liposomal para la liberación de fármacos oculares. En una realización de la misma, la composición farmacéutica reivindicada está en forma de un portador acuoso viscoso, en donde el portador acuoso viscoso comprende una solución acuosa de polisacáridos, donde el polisacárido es ácido hialurónico.

[0005] En la bibliografía, el artículo "Hyaluronic Acid and its Composites as a Local Antimicrobial/Antiadhesive Barrier" de JOURNAL OF BONR AND JOINT INFECTION, volumen 2, número 1, 1 de enero de 2017 (01-01-2017), páginas 63-72, informa de un estudio de la actividad antibacteriana de ácido hialurónico como tal, en particular centrado en la capacidad de HA de destruir biopelículas. En particular, el gran potencial se proporciona en el caso de implantes y tejidos del huésped. Los estudios de adhesión se realizan en el caso de S. aureus (véase el resumen, figuras 2-5).

[0006] El artículo "Influence of hyaluronic acid on bacterial and fungal species, including clinically relevant opportunistic pathogens" en JOURNAL OF MATERIALS SCIENCE: MATERIALS IN MEDICINR, KLUWER ACADEMIC PUBLKISH-ERS, BO, VOLUMEN 22, NÚMERO 10, 4 de septiembre de 2011, páginas 2329 -2338), es un estudio sobre el efecto antibacteriano de ácido hialurónico como tal, contra determinadas cepas de diferentes bacterias. La inhibición de desarrollo se observa in vitro en muchos casos y depende de la dosis (véase el resumen; figuras 1-4).

[0007] Drulis-Kawa Zuzanna et Al. en el artículo: "A comparison of the vitroantimicrobial activity of liposomes containing meropenem and gentamicin" publicado en CELLULAR & MOLECULAR BIOLOGY LETTERS, UNIVERSITY OF WRO-CAW. INSTITUTE OF BIOCHEMISTRY, WROCAW; POLONIA, volumen 11, número 3, enero de 1901, páginas 360 375, informa de un estudio sobre el efecto de encapsulación de fármacos (meropenem y gentamicina) con liposomas que están cargadas positivamente o negativamente o son neutral. Meropenem y la Gentamicina son antibióticos cuya actividad se cambia con el tipo de encapsulación. Los liposomas de colesterol y fosfatidilcolina son preparaciones para soportar la octadecilamina y se observa el efecto antibacteriano de los fármacos antibióticos transportados por los liposomas.

[0008] A diferencia de la técnica anterior, la presente invención propone la asociación de estearilamina en liposomas y de ácido hialurónico o una sal del mismo, ambos en forma reticulada o no reticulada, de las cuales se muestran las propiedades antimicrobianas destacadas, donde la concentración de cada componente, así como la proporción molar entre fosfolípidos y estearilamina en liposomas están bien definidas.

Características de la invención

[0009] La presente invención se refiere, en primer lugar, a la asociación de estearilamina en liposomas y de ácido hialurónico, o una sal del mismo, ambos en una forma reticulado o no reticulado.

[0010] La presente invención se refiere, en segundo lugar, a tal asociación de estearilamina en liposomas y ácido hialurónico, o una sal del mismo, ambos en forma reticulado o no reticulado, para el uso en el tratamiento de infecciones causadas por microorganismos de diferente naturaleza que incluyen bacterias, hongos y levaduras.

[0011] La presente invención se refiere, además, a composiciones que comprenden dicha asociación de estearilamina en liposomas y ácido hialurónico o una sal del mismo, ambos en una forma reticulado o no reticulado, para ser utilizadas en higiene personal para desinfectar la superficie corporal de seres humanos y animales, para la desinfección de superficies en un entorno doméstico y/o en áreas de servicio de alimentación, hospitales y en el tratamiento y la profilaxis de infecciones microbianas.

[0012] En una realización particularmente preferida, la composición comprende la asociación de estearilamina en liposomas y una sal de ácido hialurónico reticulado para el uso en el tratamiento y la profilaxis de infecciones oculares causadas por microorganismos.

Breve descripción de los dibujos

[0013]

La Figura 1 muestra el diagrama logarítmico de la concentración del grupo inóculo de las cepas analizadas en contacto con la composición 1 que comprende un 0,005 % p/p de Estearilamina.

La Figura 2 muestra el diagrama logarítmico de la concentración del grupo inóculo de las cepas analizadas en contacto con la composición 2 que comprende un 0,005 % p/p de Estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico.

La Figura 3 muestra el diagrama logarítmico de la concentración del grupo inóculo de las cepas analizadas en contacto con la composición 3 que comprende un 0,005 % p/p de Estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico reticulado. La Figura 4 muestra el diagrama logarítmico de la concentración del grupo inóculo de las cepas analizadas en contacto con la composición 1 que comprende un 0,005 % p/p de liposomas de Estearilamina.

La Figura 5 muestra el diagrama logarítmico de la concentración del grupo inóculo de las cepas analizadas en contacto con la composición 5 que comprende un 0,005 % p/p de liposomas de Estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico.

La Figura 6 muestra el diagrama logarítmico de la concentración del grupo inóculo de las cepas analizadas en contacto con la composición 3 que comprende un 0,005 % p/p de liposomas de Estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico reticulado.

La Figura 7 muestra el diagrama logarítmico de la concentración del grupo inóculo de las cepas analizadas en contacto con la composición 7 que comprende un 0,00125 % p/p de liposomas de Estearilamina y sal sódica de ácido hialurónico reticulado.

La Figura 8 muestra el diagrama logarítmico de la concentración del grupo inóculo de las cepas analizadas en contacto con la composición 8 que comprende un 0,00125 % p/p de liposomas de Estearilamina y sal sódica de ácido hialurónico.

La Figura 9 muestra el diagrama logarítmico de la concentración del grupo inóculo de las cepas analizadas en contacto con la composición 9 que comprende un 0,00125 % p/p de liposomas de Estearilamina.

La Figura 10 muestra el diagrama logarítmico de la concentración del grupo inóculo de las cepas analizadas en contacto con la composición 10 que comprende un 0,0025 % p/p de liposomas de Estearilamina y sal sódica de ácido hialurónico reticulado.

La Figura 11 muestra el diagrama logarítmico de la concentración del grupo inóculo de las cepas analizadas en contacto con la composición 11 que comprende un 0,0025 % p/p de liposomas de Estearilamina y sal sódica de ácido hialurónico.

La Figura 12 muestra el diagrama logarítmico de la concentración del grupo inóculo de las cepas analizadas en contacto con la composición 12 que comprende el 0,0025 % p/p de liposomas de Estearilamina.

Descripción detallada de la invención

[0014] La siguiente descripción se refiere en detalle a algunas realizaciones particularmente preferidas para la aplicación de la presente invención, con particular referencia a la amplia sección experimental a partir de la cual los expertos en la técnica pueden entender fácilmente las ventajas considerables relacionadas con y que son resultado del uso de la presente invención.

[0015] Las diferentes realizaciones de la presente invención proporcionan formulaciones liposomales que contienen estearilamina de diferentes proporciones molares entre fosfolípidos y estearilamina, donde, según la presente invención, el principio activo se proporciona mediante la asociación de liposomas que contienen estearilamina con ácido hialurónico, o una sal del mismo, preferentemente en una forma reticulado, pero, tal como se mostrará mediante los datos experimentales presentados a continuación, la formulación liposomal que contiene estearilamina en la misma tiene un efecto antimicrobiano mayor que la estearilamina no liposomal y, además, la adición de sal de ácido hialurónico permite obtener un efecto antibacteriano y antifúngico mejorado.

[0016] En el contexto de la presente descripción, la expresión “formulación liposomal” indica una formulación liposomal, en la que los liposomas son vesículas preparadas de manera artificial que consisten en capas dobles de lípidos que forman una membrana fina que consiste en dos capas de moléculas lipídicas; las capas dobles lipídicas pueden ser únicas o múltiples. Estas estructuras vesiculares pueden rellenarse o cargarse con fármacos o principios activos y se utilizan con precisión para la transmisión de los mismos en algunas regiones difíciles de alcanzar de otra manera. Por lo tanto, el fármaco o el principio activo puedenn asociarse con liposomas, donde el término “asociado” se refiere de manera general a estar emparejado, enlazado, correlacionado, unido o encapsulado.

[0017] En diferentes realizaciones, los liposomas pueden comprender lípidos seleccionados del grupo de: ácidos grasos, glicerolípidos, fosfolípidos, glicerofosfolípidos, esfingolípidos, sacarolípidos, esteroles de policétidos y prenoles. Los liposomas pueden consistir en fosfolípidos naturales con cadenas lipídicas mixtas u otros tensioactivos.

[0018] En una realización particularmente preferida de la presente invención, los lípidos de la formulación lipídica son fosfolípidos. Los fosfolípidos son moléculas anfipáticas, es decir, compuestos orgánicos que tienen una cabeza polar basada en fosfato soluble en agua y una cola apolar insoluble en agua, es decir no soluble en agua y soluble en disolventes apolares.

[0019] El interés por los liposomas está unido claramente a las propiedades estructurales y, por lo tanto, funcionales de su membrana, cuya estructura, composición y proporciones son similares a los de la membrana celular. En un medio acuoso, las colas hidrofóbicas de los fosfolípidos se atraen entre sí, mientras que las cabezas hidrofílicas se disponen entre sí para tener contacto con el exterior y con el medio interno acuoso, con una disposición similar a la de las micelas. Por tanto, se forman las dobles capas lipídicas, formando de este modo vesículas pequeñas similares a las células del organismo y de los orgánulos de las mismas.

[0020] Tales esferas o liposomas forman pequeños depósitos que pueden contener un antígeno, un antibiótico, un alérgeno, un fármaco o un gen (terapia genética) y pueden introducirse en el cuerpo sin causar reacciones de rechazo inmunológico. En particular, las moléculas liposolubles se situarán en la doble capa, las moléculas solubles en agua dentro del liposoma y las moléculas con propiedades mixtas, entre la doble capa y el interior.

[0021] Además, las características de los liposomas pueden modificarse según los diferentes fármacos transportados. Por ejemplo, para aumentar la velocidad de degradación del liposoma y ralentizar la liberación de los contenidos de la misma, se modifican la composición y las dimensiones. También es posible aumentar la afinidad de los liposomas para un tejido dado cambiando su composición y carga eléctrica. Por ejemplo, según la presente invención, la adición de estearilamina proporciona una carga positiva a la formulación liposomal.

[0022] El ácido hialurónico es un polisacárido con alto peso molecular del grupo de glicosaminoglicanos. El ácido hialurónico consiste en una cadena lineal que consiste en unidades de disacáridos de N-acetilglucosamina y ácido glucurónico. El ácido hialurónico es uno de los componentes principales del tejido conectivo y juega un papel estructural importante en la piel conjuntamente con colágeno y elastina. Las propiedades principales del ácido hialurónico es enlazar un alto número de moléculas de agua que aseguran la hidratación de la piel. Debido a su gran afinidad con el agua, el ácido hialurónico se utiliza como un hidratante de la piel. De hecho, cuando se aplica a la piel, forma una película fina que la mantiene lisa e hidratada. Finalmente, las moléculas más pequeñas son capaces de penetrar en las capas subcutáneas proporcionando firmeza a los tejidos y causando un relleno temporal y alisado de pequeñas arrugas.

[0023] Sorprendentemente, se ha descubierto que los liposomas de Estearilamina asociados con ácido hialurónico o una forma salificada de ácido hialurónico, en particular en forma reticulada, están provistos de actividad antimicrobiana, preferiblemente la sal es una sal sódica.

[0024] En la asociación de acuerdo con la presente invención, la estearilamina varía entre 0,001 y 0,01 % en peso, preferiblemente entre 0,0125 y 0,005 % en peso, más preferiblemente en la asociación de acuerdo con la invención, la estearilamina está presente en una concentración igual a 0,025 % en peso.

[0025] El ácido hialurónico o una sal del mismo, preferiblemente sal sódica, en la asociación según la presente invención, está en una concentración que varía entre 0,05 y 0,5 % en peso, preferiblemente entre 0,1 y 0,3 % en peso, más preferiblemente en la asociación según la presente invención, la sal del ácido hialurónico está presente en una concentración del 0,15 % en peso. En una realización particularmente preferida, el ácido hialurónico está reticulado.

[0026] En otro aspecto, la presente invención se refiere a la composición que comprende la formulación liposomal descrita anteriormente y los excipientes farmacéuticamente aceptables. Dicha composición puede comprender además principios activos, agentes tamponantes, conservantes, diluyentes, portadores y agentes humectantes.

[0027] Las características técnicas de la segunda composición son tales como para permitir la esterilización mediante filtración de 0,2 micras, haciéndola adecuada para todos los usos en los que se requiere esterilidad.

[0028] La formulación de la composición de acuerdo con la invención se proporciona a continuación a modo de ejemplo:

Ejemplo 1

[0029]

[0030] De acuerdo con la formulación del ejemplo 1 la capacidad tamponante se proporciona mediante el sistema de fosfato de sodio monobásico/dibásico, sin embargo, será evidente para los expertos en la técnica que en algunas realizaciones, según la presente invención, pueden utilizarse otros sistemas tampón conocidos en la técnica, tales como, por ejemplo, el sistema de tampón de citrato o borato que ha mostrado que proporciona capacidad tamponante adecuada para mantener el valor de pH en el intervalo deseado, como en el ejemplo 2 presentado a continuación. Ejemplo 2

[0031]

[0032] De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, la composición descrita se utiliza aprovechando su actividad antimicrobiana, demostrada en particular con respecto a bacterias, hongos y levaduras; por lo tanto, puede ser útil en limpieza profunda e higiene personal para desinfectar la superficie corporal de humanos y animales, para la desinfección de superficies en un entorno doméstico, áreas de servicio de alimentación, en hospitales y similares, y para uso en el tratamiento y la profilaxis de infecciones microbianas.

[0033] En particular, otro aspecto de la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden la formulación liposomal de estearilamina en asociación con ácido hialurónico o una sal del mismo, en particular en una forma reticulado, donde la sal es sal sódica.

[0034] En una realización particularmente preferida, tales composiciones farmacéuticas están en forma de una solución oftálmica con actividad antimicrobiana para su uso en el tratamiento de infecciones de ojo causadas por bacterias, hongos y levaduras, tales como, a modo de ejemplo, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Aspergillus niger y Candida albicans.

[0035] La presencia de estearilamina convierte la formulación liposomal, y, por lo tanto, la composición farmacéutica para el uso oftálmico, en cargada positivamente y, por lo tanto, particularmente adaptada para retenerse sobre la superficie del epitelio corneal, que como todas las membranas celulares está cargada negativamente. Por lo tanto, la composición oftálmica con atracción electroestática se retiene en la superficie ocular y es capaz de realizar mejor la acción de administración y su acción terapéutica. Por el contrario, las composiciones aniónicas tienden a no integrarse en el epitelio, más bien son rechazadas por el epitelio y permanecen en la película lacrimal, siendo, de este modo, más eficaces como lágrimas artificiales o integradores de película lipídica.

[0036] A modo de ejemplo, las formulaciones de la composición oftálmica de acuerdo con la presente invención que comprenden la formulación liposomal de estearilamina y sal sódica de ácido hialurónico reticulado, se proporcionan en una realización particularmente preferida.

Ejemplo 3

[0037]

Ejemplo 4

[0038]

Ejemplo 5

[0039]

[0040] El efecto técnico de la presente invención en diferentes aspectos y en diferentes realizaciones de la misma se describirá ahora a través de la experimentación realizada mediante la cual los expertos en la técnica serán capaces de entender las ventajas derivadas de su uso.

PARTE EXPERIMENTAL

[0041] Se evaluó la actividad antimicrobiana de la composición que comprende la combinación de liposomas de Estearilamina y ácido hialurónico, o una sal del mismo, ambos en una forma reticulado o no reticulado, de acuerdo con la invención mediante la “Prueba de exposición” y se analizó el efecto sinérgico producido por la asociación particular de ingredientes de la formulación liposomal comparando la actividad de composiciones similares que difieren en presencia de un componente o una característica técnica, por ejemplo, la formulación liposomal, o la forma reticulado o no reticulado.

PRUEBA DE EXPOSICIÓN 1

[0042] Composiciones analizadas:

Composición 1: 0,005 % p/p de solución de estearilamina;

Composición 2: 0,005 % p/p de solución de estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico;

Composición 3: 0,005 % p/p de solución de estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico reticulado;

Composición 4: 0,005 % p/p de liposomas de Estearilamina;

Composición 5: 0,005 % p/p de liposomas con solución de estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico;

Composición 6: 0,005 % p/p de liposomas de Estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico reticulado.

[0043] La tabla 1 muestra las diferencias en la composición de las soluciones probadas en el siguiente estudio.

Tabla 1

[0044] Se llevó a cabo el recuento de las colonias sobre la placa a T6h, T24h, T7d, T-Md, T28d de acuerdo con el procedimiento de la F.U.I. (Farmacopea Ufficiale Italiana, Farmacopea Oficial Italiana), XII edición. Los valores de referencia establecidos por la F.U.I de XII edición proporcionan una inoculación de bacterias de entre 107 - 108 ufc/ml, y una inoculación de hongos y levaduras de entre 105 - 106 ufc/ml.

[0045] La F.U.I. de XII edición distingue entre el criterio A, que representa la eficacia que se recomienda alcanzar, y el criterio B que se aplica en casos justificados, donde no se puede cumplir el criterio A, por ejemplo, debido a un riesgo elevado de reacciones no deseadas. La Tabla 4 muestra el cumplimiento del criterio recomendado por la F.U.I. de XII edición. Para cumplir con el criterio A, una composición debe ser capaz de proporcionar una reducción de 2 unidades logarítmicas de la concentración del inóculo bacteriano después de 6 horas desde el contacto y de tres unidades logarítmicas dentro de 24 horas desde el contacto. El criterio B incluye la composición capaz de proporcionar la reducción de una unidad logarítmica dentro de 24 horas y de tres unidades logarítmicas dentro de 7 días. En cuanto a las cepas fúngicas, la composición cumple con el criterio A de la Farmacopea cuando es capaz de proporcionar una reducción de 2 unidades logarítmicas de la concentración inicial de inóculo después de 7 días a partir del contacto, la composición cumple con el criterio B cuando la reducción equivale a una unidad logarítmica después de 14 días.

Tabla 2 - reducción logarítmica

Resultados

Composición 1 - 0,005% p/p de solución de estearilamina.

[0046] Los resultados relacionados con la composición 1 que comprende 0,005 % en peso de estearilamina se muestran en las tablas 3 y 4.

Tabla 3 - Recuento de microorganismos vivos (ufc/ml) en función del tiempo.

T l 4 - R i n l rí mi n l n m r mi r r ni m n f n i n l i m .

[0047] La composición 1 de acuerdo con la presente invención que comprende únicamente esterilamina con una concentración de 0,005 % en peso, cumple el criterio B recomendado por la Farmacopea Oficial Italiana de XII edición; se ha demostrado la actividad bacteriostática de la misma contra Staphylococcus aureus (T24h-T-i4d) y el descenso gradual en la concentración del microorganismo después de 28 días. Se ha demostrado también la actividad bacteriostática contra Pseudomonas aeruginosa (T24h-T14d) con un descenso lento del microorganismo a los 28 días. Finalmente, la composición 3 analizada mostró acción fungistática hacia Candida albicans y Aspergillus niger (T24h-T-Md), un descenso lento en la concentración de inóculo a los 28 días. Los resultados obtenidos in vitro con la composición 1 se representan en la figura 1.

Composición 2 - 0,005 % p/p de solución de estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico.

[0048] Los resultados relacionados con la composición 2 que comprende la asociación de 0,005 % en peso de estearilamina y sal sódica de ácido hialurónico no reticulado se muestran en las tablas 5 y 6.

Tabla 5 - Recuento de microorganismos vivos (ufc/ml) en función del tiempo.

T l - R i n l rími n l n m r mi r r ni m n f ni n l i m .

[0049] La composición 2 de acuerdo con la presente invención que comprende la asociación de 0,005 % en peso de estearilamina y sal sódica de ácido hialurónico no reticulado cumple con el criterio B recomendado por la Farmacopea Oficial Italiana de XII edición. La composición se proporcionó con capacidad bacteriostática contra Staphylococcus aureus (T24h-T14d) con un descenso gradual en la concentración del microorganismo a los 28 días, se informa de la actividad bacteriostática (T7d-T14d) y un descenso claro posterior (T7d-T14d) de la misma contra Pseudomonas aeruginosa. Del mismo modo, se ha demostrado que la composición analizada tiene actividad fungistática hacía Candida albicans y Aspergillus niger (T7d-T14d). Los resultados obtenidos in vitro con la composición 2 se representan en la figura 2.

Composición 3 - 0,005% p/p de solución de estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico reticulado.

[0050] Los resultados relacionados con la composición 3 que comprende la asociación de 0,005% en peso de estearilamina y sal sódica de ácido hialurónico reticulado se muestran en las tablas 7 y 8.

T l 7 - R n mi r r ni m ^ viv f ml n f ni n l i m .

T l - R i n l rími n l n m r mi r r ni m n f ni n l i m .

[0051] La composición 3 de acuerdo con la presente invención que comprende la asociación de 0,005% en peso de estearilamina y sal sódica de ácido hialurónico reticulado cumple con el criterio B recomendado por la Farmacopea Oficial Italiana de XII edición; se ha demostrado actividad bacteriostática contra Pseudomonas aeruginosa (T24h-T-i4d) y Staphylococcus aureus (T7d-T-i4d), a continuación, se observa un descenso bueno en la concentración del inóculo a los 28 días, especialmente contra Pseudomonas aeruginosa. La actividad satisfactoria contra Candida albicans y Aspergillus niger. Los resultados obtenidos in vitro con la composición 3 se representan en la figura 3.

Composición 4 - 0,005% p/p de liposomas de Estearilamina.

[0052] Los resultados relacionados con la composición 4 que comprende liposomas de 0,005 % en peso de estearilamina se muestran en las tablas 9 y 10.

T l - R n mi r r ni m ^ viv f ml n f ni n l i m .

T l 1 - R i n l rími n l n m r mi r r ni m n f n i n l i m .

[0053] La composición 4 de acuerdo con la presente invención que comprende la formulación liposomal de 0,005% en peso de estearilamina cumple con el criterio A recomendado por la Farmacopea Oficial Italiana de XII edición; se ha demostrado actividad bacterioestática contra Staphylococcus aureus (T24h-T7d) con un descenso gradual en la concentración del microorganismo a los 28 días, y contra Pseudomonas aeruginosa (T24h-T4d) con un descenso gradual en la concentración del microorganismo a los 28 días. Se observa la buena actividad contra Candida albicans y Aspergillus niger. Los resultados obtenidos in vitro con la composición 4 se representan en la figura 4.

Composición 5 - Liposomas de 0,005% p/p de solución de estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico.

[0054] Los resultados relacionados con la composición 5 que comprende la formulación liposomal de 0,005 % en asociación con la sal sódica de ácido hialurónico no reticulado se muestran en las tablas 11 y 12.

Tabla 11 - Recuento de microor anismos vivos ufc/ml en función del tiem o.

T l 12 - R i n l rími n^l n m r mi r r ni m n f ni n l i m .

[0055] La composición 5 de acuerdo con la presente invención que comprende la formulación liposomal de 0,005 % en peso de estearilamina y sal sódica de ácido hialurónico no reticulado cumple con el criterio A recomendado por la Farmacopea Oficial Italiana; se ha demostrado su actividad bacteriostática contra Staphylococcus aureus (17d-T28d) y la actividad bacteriostática contra Pseudomonas aeruginosa (T24h-Ti4d), con un descenso gradual del microorganismo a los 28 días, mientras que la actividad microbicida es buena contra Candida albicans y Aspergillus niger. Los resultados obtenidos in vitro con la composición 5 se representan en la figura 5.

[0056] Composición 6 - Liposomas de 0,005 % p/p de solución de estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico reticulado.

[0057] Los resultados relacionados con la composición 5 que comprende la formulación liposomal de 0,005% de estearilamina en asociación con la sal sódica de ácido hialurónico reticulado se muestran en las tablas 13 y 14.

Tabla 13 - Recuento de microor anismos vivos ufc/ml en función del tiem o.

T l 14 - R i n l rími n^l n m r mi r r ni m n f ni n l i m .

[0058] La composición 6 de acuerdo con la presente invención que comprende la formulación liposomal en asociación con 0,005 % de estearilamina y sal sódica de ácido hialurónico reticulado cumple con el criterio A recomendado por la Farmacopea Oficial Italiana, ha demostrado su actividad bacteriostática contra Staphylococcus aureus (T24h-T-i4d), no se observó ninguna recuperación del microorganismo a los 28 días, mientras que la actividad microbicida es buena contra Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans y Aspergillus niger. Los resultados obtenidos in vitro con la composición 6 se representan en la figura 6.

[0059] Los datos obtenidos a partir de la experimentación in vitro realizada mediante la Prueba de exposición mostró en primer lugar un comportamiento microbicida mejor de la composición de acuerdo con la invención que comprende la asociación de una formulación liposomal de 0,005 % en peso de estearilamina y una sal sódica de ácido hialurónico con respecto a la composición que tiene una formulación similar, pero sin liposomas (composiciones 4, 5 y 6 frente a composiciones 1, 2 y 3). La formulación liposomal proporciona claramente a la composición un carácter técnico que mejora el efecto final del mismo. Además, se obtiene otro dato inesperado a partir de la experimentación, es decir, la sal sódica de ácido hialurónico en forma reticulado con respecto a la forma no reticulado representa una característica técnica de mejoría del efecto final de la composición, tanto en la formulación liposomal como en la formulación sin estructuras liposomales, tal como se puede observar en los gráficos adjuntos (composición 2 frente a composición 3 y composición 5 frente a composición 6).

[0060] Sin embargo, la estearilamina con una concentración del 0,005 % en peso se asocia con una toxicidad determinada que, aunque no está contraindicada en la composición de un producto para el uso de desinfección, por ejemplo, para ser utilizada en la limpieza doméstica o de alimentos o incluso de la piel de las manos, puede no permitir formular una hipótesis del uso de la misma en una composición farmacéutica para el uso tópico sobre la superficie del epitelio corneal.

[0061] Con tal fin, se analizó la actividad microbicida utilizando el procedimiento de la Prueba de exposición sobre las mismas cepas microbianas de composiciones que, según la presente invención, comprenden la asociación de una formulación liposomal de estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico, en una forma reticulado y no reticulado, con una concentración de estearilamina igual a 0,00125 y 0,0025% en peso, respectivamente.

PRUEBA DE EXPOSICIÓN 2

[0062] Dado el comportamiento mejorado de las composiciones que comprenden la formulación liposomal, se decidió centrar la atención sobre la última.

Composiciones analizadas:

[0063]

Composición 70,00125% p/p de liposomas de Estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico reticulado;

Composición 80,00125% p/p de liposomas con solución de estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico;

Composición 90,00125% p/p de liposomas de Estearilamina;

Composición 100,0025% p/p de liposomas de Estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico reticulado;

Composición 11 0,0025% p/p de liposomas de Estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico;

Composición 12: 0,0025% de liposomas de Estearilamina.

[0064] La tabla 15 muestra las diferencias en la composición de las soluciones analizadas en el siguiente estudio.

Tabla 15

Composición 7 - Liposomas de 0,00125% p/p de solución de estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico reticulado.

[0065] Los resultados relacionados con la composición 7 que comprende la formulación liposomal de 0,00125 % en peso de estearilamina y sal sódica de ácido hialurónico reticulado se muestran en las tablas 16 y 17.

Tabla 16 - Recuento de microor anismos vivos ufc/ml en función del tiem o.

T l 17 - R i n l rími n l n m r mir r ni m n f ni n l i m .

[0066] La composición 7 de acuerdo con la presente invención que comprende la formulación liposomal de 0,00125 % en peso de estearilamina y sal sódica de ácido hialurónico reticulado cumple con el criterio A recomendado por la Farmacopea Oficial Italiana: se informa de la reducción total de la concentración inicial de inóculos de Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans y Aspergillus niger a T7d. En relación con la cepa de Staphylococcus aureus, se observa una buena reducción de la concentración inicial del inóculo a los 7 días y una disminución posterior a los 28 días. Los resultados obtenidos in vitro con la composición 7 se muestran en la figura 7.

Composición 8 - Liposomas de 0,00125% p/p de solución de estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico.

[0067] Los resultados relacionados con la composición 8 que comprende la formulación liposomal de 0,00125% en peso de estearilamina y sal sódica de ácido hialurónico reticulado se muestran en las tablas 18 y 19.

Tabla 18 - Recuento de microor anismos vivos ufc/ml en función del tiem o.

T l 1 - R i n l rí mi n^ l n m r mi r r ni m n f n i n l i m .

[0068] La composición 8 de acuerdo con la presente invención que comprende la formulación liposomal de 0,00125 % en peso de estearilamina y sal sódica de ácido hialurónico no reticulado cumple con el criterio A recomendado por la Farmacopea Oficial Italiana. Los resultados del ensayo mostraron buena actividad antifúngica hacia Candida albicans y Aspergillus niger (sin recuperación a T7d), mientras que para la cepa de Staphylococcus aureus (tiempo de contacto T24h-T28d) se observó una disminución lenta de la concentración inicial del inóculo. Para Pseudomonas aeruginosa (tiempos de contacto T24h-T28d), se observa una disminución gradual y lenta de la concentración inicial del inóculo, aunque ya es evidente una buena reducción a tiempos de contacto más cortos (tiempos de contacto T6h-T24h).

[0069] Los resultados obtenidos in vitro con la composición 8 se representan en la figura 8.

Composición 9 - 0,00125% p/p de liposomas de Estearilamina.

[0070] Los resultados relacionados con la composición 9 que comprende la formulación liposomal de 0,00125% en peso de estearilamina en asociación con sal sódica de ácido hialurónico reticulado se muestran en las tablas 20 y 21.

Tabla 20 - Recuento de microor anismos vivos ufc/ml en función del tiem o.

Tabla 21 - Reducción logarítmica en el número de microorganismos en función del tiempo.

[0071] La composición 9 de acuerdo con la presente invención que comprende la formulación liposomal de 0,00125% en peso de estearilamina en asociación con sal sódica de ácido hialurónico no reticulado cumple con el criterio A recomendado por la Farmacopea Oficial Italiana. Los resultados del ensayo mostraron buena actividad antifúngica hacia Candida albicans y Aspergillus niger (sin recuperación a T7d), mientras que para las cepas de Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa, se observaron disminuciones graduales en las concentraciones iniciales del inóculo a los 28 días (tiempos de contacto T7d-T28d), aunque ya se observa una buena reducción en tiempos de contacto más cortos (T6h-T24h). Los resultados se muestran en el gráfico de la figura 9.

Composición 10 - Liposomas de 0,0025% p/p de solución de estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico reticulado.

[0072] Los resultados relacionados con la composición 10 que comprende la formulación liposomal de 0,0025 % en peso de estearilamina y sal sódica de ácido hialurónico reticulado se muestran en las tablas 22 y 23.

Tabla 22 - Recuento de microor anismos vivos ufc/ml en función del tiem o.

T l 2 - R i n l rí mi n^ l n m r mi r r ni m n f n i n l i m .

[0073] La composición 10 de acuerdo con la presente invención que comprende la formulación liposomal de 0,0025 % en peso de estearilamina en asociación con sal sódica de ácido hialurónico no reticulado no cumple con el criterio recomendado por la Farmacopea Oficial Italiana. XII edición, ya que el criterio A se cumple solamente para hongos y levaduras, y para Pseudomonas aeruginosa se cumple solamente el criterio B. De hecho, los resultados de la Prueba de exposición no mostraron reducción en la concentración inicial del inóculo de Pseudomonas aeruginosa a las 6 horas y una reducción lenta hasta 28 días, aunque fue evidente una reducción de 2 unidades logarítmicas en el tiempo de contacto de 24 horas. Para Staphylococcus aureus, no existe reducción en la concentración inicial del inóculo a las 24 horas y una reducción gradual hasta los 28 días, aunque se registra una reducción de 1,5 unidades logarítmicas en los tiempos de contacto de T7d-Ti4d.

Para Candida albicans y Aspergillus niger, no se ha destacado ninguna reducción de las concentraciones iniciales del inóculo a las 24 horas y la actividad fungistática en el tiempo de contacto de T7d-T28d, aunque aparece una reducción logarítmica a T7d de acuerdo con las especificaciones A de la Farmacopea.

[0074] Los resultados obtenidos in vitro con la composición 10 se representan en la figura 10.

Composición 11 - Liposomas de 0,0025% p/p de solución de estearilamina con sal sódica de ácido hialurónico.

[0075] Los resultados relacionados con la composición 11 que comprende la formulación liposomal de 0,0025 % de estearilamina y sal sódica de ácido hialurónico no reticulado se muestran en las tablas 24 y 25.

Tabla 24 - Recuento de microor anismos vivos ufc/ml en función del tiem o.

T l 2 - R i n l rími n l n m r mi r r ni m n f n i n l i m .

[0076] La composición 11 de acuerdo con la presente invención que comprende la formulación liposomal de 0,0025 % en peso de estearilamina en asociación con sal sódica de ácido hialurónico no reticulado cumple con el criterio A recomendado por la Farmacopea Oficial Italiana. XII edición, dado que se observó una buena actividad antibacteriana contra Pseudomonas aeruginosa (sin recuperación a los 7 días) y actividad antifúngica contra Candida albicans y Aspergillus niger, sin recuperación a las 24 horas. Para la cepa de Staphylococcus aureus, se observa una buena reducción de la concentración inicial del inóculo a los 7 días y una disminución gradual posterior a los 28 días. Los resultados obtenidos se muestran en el gráfico de la figura 11.

Composición 12 - Liposomas de Estearilamina de 0,0025 % p/p.

[0077] Los resultados relacionados con la composición 12 que comprende 0,00125 % de liposomas de Estearilamina se muestran en las tablas 26 y 27.

Tabla 26 - Recuento de microor anismos vivos ufc/ml en función del tiem o.

T l 27 - R i n l rími n^l n m r mir r ni m n f ni n l i m .

[0078] La composición 12 de acuerdo con la presente invención que comprende la formulación liposomal de 0,0025 % de estearilamina cumple con el criterio A recomendado por la Farmacopea Oficial Italiana. Los resultados del ensayo mostraron una actividad antibacteriana y antifúngica buena contra todas las cepas analizadas en el ensayo. En particular, se informa de la reducción total de la concentración inicial de los inóculos de Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans y Aspergillus niger a T24h y a T7d contra la cepa de Staphylococcus aureus.

[0079] Los resultados obtenidos in vitro con la composición 12 se representan en la figura 12.

[0080] A partir de los resultados de esta segunda prueba de exposición realizada sobre las formulaciones liposomales de acuerdo con la presente invención, se confirmó el mejor comportamiento de las composiciones con la asociación de estearilamina y sal sódica de ácido hialurónico, en particular aquellas en las que esta sal está en una forma reticulado. Además, disminuyendo la concentración de estearilamina, se elimina el problema de la posible toxicidad de la composición, de este modo, haciéndola adecuada para contrarrestar infecciones microbianas, incluso en un uso tópico sobre epitelio delicado del cuerpo humano y animal, tal como el epitelio corneal, proporcionando así una composición oftálmica con actividad antimicrobiana demostrada.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Asociación de liposomas de estearilamina con ácido hialurónico o una sal sódica del mismo, en la que los fosfolípidos y la estearilamina están en diferentes proporciones molares en los liposomas, con los fosfolípidos igual al 0,5 % en peso y la estearilamina variando entre 0,001 y 0,010 % en peso, para su uso en el tratamiento de infecciones microbianas causadas por bacterias, hongos y Candida albicans.

2. Asociación para su uso, según la reivindicación 1, en la que la estearilamina varía entre 0,0012 y 0,005 % en peso, y el ácido hialurónico, o la sal sódica del mismo, varía entre 0,05 y 0,5 % en peso.

3. Asociación para su uso, según la reivindicación 2, en la que la estearilamina es igual a 0,025 % en peso, y el ácido hialurónico o la sal sódica del mismo, varía entre 0,1 y 0,3 % en peso, preferiblemente, 0,15% en peso.

4. Asociación para su uso, según las reivindicaciones 1,2 y 3, en la que el ácido hialurónico está en forma reticulada.

5. Asociación para su uso, según la reivindicación 1, en la que las infecciones son infecciones oftálmicas.

6. Asociación de liposomas de estearilamina con ácido hialurónico o una sal sódica del mismo, en la que los fosfolípidos y la estearilamina están en diferentes proporciones molares en los liposomas, con los fosfolípidos igual al 0,5% en peso y la estearilamina variando entre 0,001 y 0,010 % en peso, para su uso en un método de tratamiento para limpiar y desinfectar superficies en un entorno doméstico y/o áreas de servicios de alimentación, hospitales y similares.

7. Asociación de liposomas de estearilamina con ácido hialurónico o una sal sódica del mismo, en la que los fosfolípidos y la estearilamina están en diferentes proporciones molares en los liposomas, con los fosfolípidos igual al 0,5 % en peso y la estearilamina variando entre 0,001 y 0,010 % en peso, para su uso en un método de tratamiento de la superficie de un cuerpo humano y animal, y en higiene personal.

8. Asociación para su uso, según la reivindicación 6, en la que la estearilamina varía entre 0,0012 y 0,005 % en peso, y el ácido hialurónico, o la sal sódica del mismo, varía entre 0,05 y 0,5 % en peso.

9. Asociación para su uso, según la reivindicación 6, en la que el ácido hialurónico está en forma reticulada.

10. Asociación para su uso, según la reivindicación 7, de liposomas de estearilamina con ácido hialurónico o una sal sódica del mismo, en la que los fosfolípidos y la estearilamina están en diferentes proporciones molares en los liposomas, en la que el ácido hialurónico está en forma reticulada.

11. Composición que comprende una asociación de liposomas de estearilamina con ácido hialurónico o una sal sódica del mismo, en la que los fosfolípidos y la estearilamina están en diferentes proporciones molares en los liposomas, con fosfolípidos igual a 0,5 % en peso y la estearilamina variando entre 0,001 y 0,010 % en peso, y los excipientes farmacéuticamente aceptadoss.

12. Composición, según la reivindicación 11, en la que la estearilamina varía entre 0,0012 y 0,005 % en peso, y el ácido hialurónico, o la sal sódica del mismo, varía entre 0,05 y 0,5 % en peso.

13. Composición, según la reivindicación 12, en la que la estearilamina está en un 0,025 % en peso y el ácido hialurónico, o la sal sódica del mismo, varía entre 0,1 y 0,3 % en peso.

14. Composición, según la reivindicación 13, en la que la estearilamina está en un 0,025 % en peso, y el ácido hialurónico, o la sal sódica del mismo, es igual al 0,15 % en peso.

15. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones 11-14, en la que el ácido hialurónico está en forma reticulada.

16. Composición, según las reivindicaciones 11 a 15, que comprende además principios activos, agentes tamponantes, conservantes, diluyentes, portadores y agentes humectantes.

17. Composición, según las reivindicación 16, en la que los agentes tamponantes son el sistema de fosfato de sodio monobásico/dibásico, el sistema de borato y el sistema tampón de citrato.

18. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 17, que tiene la siguiente formulación, en la que la cantidad de cada ingrediente se expresa en porcentaje en peso:

Fosfolípidos E80 0,500 % p/p

Estearilamina 0,0025 % p/p

Ácido hialurónico reticulado 0,15 % p/p

Cloruro de sodio 0,480 % p/p

Dihidrato de fosfato de sodio monobásico 0,225 % p/p

Dihidrato de fosfato de sodio dibásico 0,685 % p/p

Trehalosa 0,30 % p/p

Agua destilada c.s. hasta 100 g

19. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 17, que tiene la siguiente formulación, en la que la cantidad de cada ingrediente se expresa en porcentaje en peso:

Fosfolípidos E80 0,500 % p/p

Estearilamina 0,0025 % p/p

Ácido hialurónico reticulado 0,15 % p/p

Cloruro de sodio 0,480 % p/p

Ácido bórico 0,775 % p/p

Decahidrato de tetraborato de sodio 0,125 % p/p

Trehalosa 0,30 % p/p

Agua destilada c.s. hasta 100 g

20. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 19, esterilizada mediante filtración a 0,25 micras de porosidad.

21. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 20, para uso médico.

22. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 20, para su uso en el tratamiento de infecciones microbianas causadas por bacterias, hongos y Candida albicans.

23. Composición para su uso, según las reivindicación 22, en la que las infecciones son infecciones oftálmicas.

24. Composición, según las reivindicaciones 11 a 19, para su uso en un tratamiento de desinfección de la superficie del cuerpo humano y animal, y para la higiene personal.

25. Composición, según las reivindicaciones 11 a 19, para su uso en la limpieza y la desinfección de superficies en un entorno doméstico y/o áreas de servicio de alimentación, hospitales.