ES2870325T3 - Derivados de 3-metil-pirrolidina-2,5-diona útiles como antagonistas del receptor cgrp - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula **(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable o un hidrato del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de 3-metil-pirrolidina-2,5-diona útiles como antagonistas del receptor cgrp

La presente invención se refiere a ciertos compuestos antagonistas del receptor del péptido relacionado con el gen de la calcitonina (CGRP), a composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos, a procedimientos de uso de los compuestos para prevenir o tratar ciertos trastornos fisiológicos como la migraña, y a productos intermedios y procesos útiles en la síntesis de los compuestos.

La presente invención se encuentra en el campo de la prevención y el tratamiento de la migraña y otras enfermedades y trastornos neurológicos que se cree que están mediados por el CGRP (véase, por ejemplo, S. Benemei, et. al. Current Opinion in Pharmacology, 9, 9-14 (2009)). La migraña es una enfermedad debilitante que padecen millones de personas en todo el mundo. Las opciones de tratamiento para la migraña incluyen los triptanes, como el sumatriptán y el zolmitriptán. Desgraciadamente, los agentes actualmente aprobados y disponibles para el paciente no siempre proporcionan un tratamiento eficaz, y estos agentes pueden asociarse a diversos efectos secundarios adversos, como mareos, parestesias y molestias en el pecho. Además, los triptanes presentan ciertos problemas cardiovasculares que hacen que estén contraindicados en pacientes que sufren una enfermedad cardiovascular subyacente importante o hipertensión no controlada (véase T.W. Ho, et. al. The Lancet, 372, 2115­ 2123 (2008)). Así pues, existe una importante necesidad no cubierta en la prevención y el tratamiento de la migraña. Se desean nuevos antagonistas de los receptores de CGRP para el tratamiento o la prevención de ciertas enfermedades neurológicas, como la migraña.

La publicación de los Estados Unidos Nos 2017/0044138 A1 y 2017/0044163 divulgan cada una ciertos compuestos antagonistas del receptor CGRP útiles en el tratamiento o la prevención de la migraña. La patente de Estados Unidos n° 6.680.387 divulga ciertas 5-bencil- o 5-bencilideno-tiazolidina-2,4-dionas para el tratamiento de la diabetes mellitus de tipo II, la aterosclerosis, la hipercolesterolemia y la hiperlipidemia.

La presente invención proporciona ciertos compuestos novedosos que son antagonistas del receptor CGRP. La presente invención también proporciona antagonistas del receptor CGRp que son penetrantes a nivel central.

En consecuencia, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula I

o una sal farmacéuticamente aceptable o un hidrato del mismo.

La presente invención proporciona además un compuesto de Fórmula II

o una sal farmacéuticamente aceptable o un hidrato del mismo.

La presente invención también proporciona un procedimiento de prevención de la migraña en un paciente, que comprende la administración a un paciente que lo necesita de una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I o Fórmula II, o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

La presente invención proporciona además un procedimiento para tratar la migraña en un paciente, que comprende administrar a un paciente que lo necesita una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I o Fórmula II, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. La presente invención también proporciona un procedimiento para antagonizar el receptor CGRP en un paciente, que comprende administrar a un paciente que lo necesita una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I o Fórmula II, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Además, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula I o Fórmula II, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en terapia, en particular para el tratamiento de la migraña. Además, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula I o Fórmula II, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en la prevención de la migraña. Además, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I o Fórmula II, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la migraña o para la prevención de la migraña.

La invención proporciona además una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I o Fórmula II, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, con uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables. La invención proporciona además un procedimiento para preparar una composición farmacéutica, que comprende la mezcla de un compuesto de Fórmula I o Fórmula II, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, con uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables. La presente invención también abarca nuevos intermedios y procesos para la síntesis de los compuestos de Fórmula I y Fórmula II. Por ejemplo, la invención proporciona además el siguiente intermedio:

en la que PG es un grupo protector apropiado. Ejemplos de grupos protectores adecuados son trifenilmetilo, pmetoxibencil, y similares.

Como se utiliza en el presente documento, los términos "tratar'1, "tratamiento" o "trato" incluyen frenar, ralentizar, detener o revertir la progresión o la gravedad de un síntoma o trastorno existente.

Como se utiliza en la presente memoria, el término "prevenir" o "prevención" se refiere a la protección de un paciente que es propenso a una determinada enfermedad o trastorno, como la migraña, pero que no sufre actualmente los síntomas de la enfermedad o el trastorno, como los síntomas de la migraña.

Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "paciente" se refiere a un mamífero, en particular a un ser humano.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término "cantidad efectiva" se refiere a la cantidad o dosis del compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo que, tras la administración de una dosis única o múltiple al paciente, proporciona el efecto deseado en el paciente bajo diagnóstico o tratamiento. Un experto en la materia puede determinar fácilmente una cantidad eficaz mediante el uso de técnicas conocidas y la observación de los resultados obtenidos en circunstancias análogas. Al determinar la cantidad efectiva para un paciente, el médico que lo atiende tiene en cuenta una serie de factores, entre los que se incluyen: la especie del paciente; su tamaño, edad y estado de salud general; la enfermedad o trastorno específico implicado; el grado de afectación o la gravedad de la enfermedad o el trastorno; la respuesta del paciente individual; el compuesto particular administrado; el modo de administración; las características de biodisponibilidad del preparado administrado; el régimen de dosis seleccionado; el uso de medicación concomitante; y otras circunstancias relevantes.

Los compuestos de la presente invención son efectivos a una dosis por día en el intervalo de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 20 mg/kg de peso corporal. En algunos casos, los niveles de dosificación por debajo del límite inferior del intervalo mencionado pueden ser más que adecuados, mientras que en otros casos se pueden emplear dosis aún mayores con efectos secundarios aceptables, y por lo tanto el intervalo de dosificación anterior no pretende limitar el alcance de la invención de ninguna manera.

Los compuestos de la presente invención se formulan como composiciones farmacéuticas administradas por cualquier vía que haga que el compuesto sea biodisponible, incluidas las vías oral y transdérmica. Más preferentemente, dichas composiciones son para administración oral. Dichas composiciones farmacéuticas y los procedimientos para prepararlas son bien conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, L.V. Allen, Editor, 22a edición, Pharmaceutical Press, 2012).

Los compuestos de Fórmula I y Fórmula II, o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos son particularmente útiles en los procedimientos de prevención y tratamiento de la invención, pero se prefieren ciertas configuraciones. Los siguientes párrafos describen dichas configuraciones preferidas. Aunque la presente invención contempla todos los enantiómeros y diasterómeros individuales, así como las mezclas de los enantiómeros de dichos compuestos, incluidos los racematos, se prefieren especialmente los compuestos con configuración absoluta como se expone a continuación. Se entiende que estas preferencias son aplicables tanto a los procedimientos de prevención y tratamiento como a los nuevos compuestos de la invención.

Se los siguientes compuestos se consideran preferentes

y sus sales e hidratos farmacéuticamente aceptables.

Se considera preferente el siguiente compuesto

y sus sales farmacéuticamente aceptables.

Los siguientes compuestos son especialmente preferentes:

(3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetil]penil]etil]-3-metil-pirrolidina-2,5-diona;

Clorhidrato de (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetil]fenil]etil]-3-metil-pirrolidina-2,5-diona; Bromohidrato de (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetil]fenil]etil]-3-metil-pirrolidina-2,5-diona;

Bromohidrato de (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetil]fenil]etil]-3-metil-pirrolidina-2,5-diona bromohidrato monohidrato; y

Clorhidrato de (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetil]fenil]etil]-3-metil-pirrolidina-2,5-diona monohidrato.

Algunos intermedios descritos en las siguientes preparaciones pueden contener uno o más grupos protectores de nitrógeno. Se entiende que los grupos protectores pueden variarse según lo aprecie un experto en la materia, dependiendo de las condiciones particulares de reacción y de las transformaciones particulares a realizar. Las condiciones de protección y desprotección son bien conocidas por el experto en la materia y se describen en la bibliografía (véase, por ejemplo, "Greene's Protective Groups in Organic Synthesis", cuarta edición, por Peter G.M. Wuts y Theodora W. Greene, John Wiley and Sons, Inc. 2007).

Los isómeros, enantiómeros y diastereómeros individuales pueden ser separados o resueltos por un experto en la materia en cualquier punto conveniente de la síntesis de los compuestos de la invención, mediante procedimientos como las técnicas de cristalización selectiva o la cromatografía quiral (véase, por ejemplo, J. Jacques, et al, "Enantiomers, Racemates, and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc. 1981 , y E.L. Eliel y S.H. Wilen," Stereochemistry of Organic Compounds", Wiley-Interscience, 1994).

Una sal farmacéuticamente aceptable de los compuestos de la invención puede formarse, por ejemplo, por reacción de una base libre apropiada de un compuesto de la invención, un ácido farmacéuticamente aceptable apropiado en un disolvente adecuado tal como éter dietílico bajo condiciones estándar bien conocidas en la técnica. Además, la formación de tales sales puede ocurrir simultáneamente a la desprotección de un grupo protector de nitrógeno. La formación de tales sales es bien conocida y apreciada en la técnica. Véase, por ejemplo, Gould, P.L. "Salt selection for basic drugs", International Journal of Pharmaceutics, 33: 201-217 (1986); Bastin, R.J. et al. "Salt Selection and Optimization Procedures for Pharmaceutical New Chemical Entities", Organic Process Research and Development, 4: 427-435 (2000); y Berge, S.M. et al. "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19, (1977).

Algunas abreviaturas se definen como sigue: "ACN" se refiere a acetonitrilo; "c-Pr" se refiere a ciclopropilo; "DCM" se refiere a DCM o cloruro de metileno; "DMEA" se refiere a N.N-dimetiletilamina; "DIPEA" se refiere a N,N-diisopropiletilamina; "DMF" se refiere a N,N-dimetilformamida; "DMSO" se refiere a dimetilsulfóxido; "Et" se refiere a etilo; "Et²O" se refiere a éter dietílico; "EtOAc" se refiere a acetato de etilo; "EtOH" se refiere al etanol; "g", cuando se utiliza en referencia a la centrifugación, se refiere a la fuerza centrífuga relativa; "HPLC" se refiere a la cromatografía líquida de alto rendimiento; "HOBt" se refiere al hidroxibenzotriazol; "hr" se refiere a la hora u horario; "HATU" se refiere a hexafluorofosfato de 3-oxido de1-[Bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio o hexafluorofosfato de N-óxido de N-[(dimetilamino)-1H-1,2,3-triazolo-[4,5-b]piridin-1-ilmetileno]-N-metilmetanaminio, "HTRF" se refiere a la fluorescencia homogénea resuelta en el tiempo; "IC⁵⁰" se refiere a la concentración de un agente que produce el 50% de la respuesta inhibitoria máxima posible para ese agente; "kPa" se refiere a kilopascal o kilopascales; "kV" se refiere a kilovoltios; "LAH" se refiere a hidruro de aluminio y litio; "LC-ES/MS" se refiere a Espectrometría de Masas de Cromatografía Líquida por Electrodispersión; "LDA" se refiere a diisopropilamida de litio; "mA" se refiere a miliamperio o miliamperios; "MDCK" se refiere a células epiteliales de riñón canino Madin-Darby; "min" se refiere a minuto o minutos; "Me" se refiere al metilo; "MeOH" se refiere al metanol o alcohol metílico; "MTBE" se refiere al tert-butil-éter de butilo; "NaHMDS" se refiere a la bis(trimetilsilil)amida de sodio; "n-BuLi" se refiere al n-butil-litio; "rpm" se refiere a las revoluciones por minuto; "RT" se refiere a la temperatura ambiente; "SEM" se refiere al error estándar de la media; "SFC" se refiere a la cromatografía de fluidos supercríticos; "T3P" se refiere a la solución de 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioxatrifosforinano-2,4,6-trióxido; "t-BuOH" se refiere a terc-butanol; "TEA" se refiere a trietilamina; "^t F^a " se refiere a ácido trifluoroacético; "THF" se refiere a tetrahidrofurano; "TMEDA" se refiere a tetrametilendiamina; "tR" se refiere a tiempo de retención; "U/mL" se refiere a unidades por mililitro.

Los compuestos de la presente invención, o las sales de los mismos, pueden prepararse mediante una variedad de procedimientos conocidos por un experto en la materia, algunos de los cuales se ilustran en los esquemas, preparaciones y ejemplos siguientes. Un experto en la materia reconoce que las etapas sintéticas específicas para cada una de las rutas descritas pueden combinarse de diferentes maneras, o en conjunción con etapas de diferentes esquemas, para preparar compuestos de la invención, o sales de los mismos. Los productos de cada etapa en los esquemas siguientes pueden recuperarse por procedimientos convencionales bien conocidos en la técnica, incluyendo extracción, evaporación, precipitación, cromatografía, filtración, trituración y cristalización. En los esquemas siguientes, todos los sustituyentes, a menos que se indique lo contrario, son como se han definido previamente. Los reactivos y los materiales de partida están fácilmente disponibles para un experto en la materia. Los siguientes esquemas, preparaciones, ejemplos y ensayos ilustran la invención.

El esquema 1 representa la síntesis de (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metM-4-piridil)oximetM]fenM]etM]-3-metilpirrolidina-2,5-diona. En el esquema 1, etapa A, la arilación asimétrica del (E)-but-2-enoato de isopropilo puede llevarse a cabo en condiciones de acoplamiento utilizando catalizadores de metales de transición, como el rodio, como está bien descrito en la técnica. Generalmente, un ácido aril borónico puede acoplarse al (E)-but-2-enoato de isopropilo para obtener el producto de catálisis de butanoato de (3S)-3-(4-bromofenil)isopropilo rodio con alta enantioselectividad. Por ejemplo, unos 1,05-1,1 equivalentes de ácido 4-bromofenil borónico pueden tratarse con unos 0,01 equivalentes de un catalizador de rodio, específicamente, tetrafluoroborato de bis(norbornadieno) rodio(I), seguido de la adición de un ligando quiral apropiado, como 0.01-0,015 equivalentes de (R)-(+)-2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo, aproximadamente 1 equivalente de TEA, y aproximadamente 1 equivalente de (E)-but-2-enoato de isopropilo en una mezcla de disolventes adecuada, como 1,4-dioxano húmedo o THF y agua (aproximadamente 8:1). La mezcla de reacción resultante puede calentarse a unos 40 °C durante unas 18 horas. A continuación, el producto puede aislarse y purificarse utilizando técnicas bien conocidas en la técnica, como los procedimientos de extracción y la cromatografía. Por ejemplo, la mezcla de reacción puede diluirse con agua y extraerse con un disolvente orgánico no polar apropiado, como MTBE o DCM. Los extractos orgánicos pueden combinarse, secarse sobre Na2SO4 anhidro, filtrarse y concentrarse a presión reducida para proporcionar el producto bruto de la etapa A. El producto bruto puede entonces purificarse mediante cromatografía flash sobre gel de sílice con un eluyente adecuado, tal como gradiente de hexanos/EtOAc, para proporcionar el producto purificado de la etapa A, butanoato de isopropilo (3S)-3-(4-bromofenilo) en alto exceso enantiomérico.

En el esquema 1, etapa B, la hidrólisis del producto del esquema 1, etapa A, puede llevarse a cabo en condiciones de saponificación bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, el (3S)-3-(4-bromofenil)butanoato de isopropilo puede disolverse en un disolvente alcohólico apropiado, como MeOH, y tratarse con un exceso de base mineral acuosa, como NaOH. Después de calentar durante aproximadamente 1 hora, el producto puede aislarse y purificarse utilizando técnicas bien conocidas en la técnica, como los procedimientos de extracción, trituración y evaporación. Por ejemplo, la mezcla de reacción puede extraerse con un disolvente orgánico apropiado, como DCM, y la capa acuosa separada resultante puede tratarse con un exceso de un ácido mineral, como HCl concentrado hasta un pH ~ 4. Las capas acuosas acidificadas pueden entonces extraerse con un disolvente orgánico apropiado, como DCM. Los extractos orgánicos pueden combinarse, secarse sobre Na²SO⁴ anhidro, filtrarse y concentrarse a presión reducida para obtener el producto bruto de la etapa B. El producto bruto puede triturarse con un disolvente orgánico no polar, como heptanos, los precipitados resultantes pueden filtrarse y el filtrado puede concentrarse a presión reducida para obtener el producto de la etapa B, el ácido (3S)-3-(4-bromofenil)butanoico, en un exceso enantiomérico muy elevado.

En el Esquema 1, la etapa C, la esterificación del producto del Esquema 1 etapa B, puede llevarse a cabo bajo una amplia gama de procedimientos de esterificación ácida/básica bien conocidos en la técnica, o por esterificación directa con diazometano. Por ejemplo, el ácido (3S)-3-(4-bromofenil)butanoico disuelto en un disolvente alcohólico apropiado, como el MeOH, puede tratarse con un exceso de un ácido mineral, como e1H²SO⁴ concentrado. La mezcla resultante puede calentarse durante unas 2 horas, y el producto puede entonces aislarse utilizando técnicas bien conocidas en la técnica, como la extracción. La mezcla de reacción puede concentrarse a presión reducida, y el residuo resultante puede repartirse entre agua y un disolvente orgánico adecuado, como el MTBE. Los extractos orgánicos pueden combinarse, lavarse con agua, secarse sobre MgSO⁴ anhidro, filtrarse y concentrarse a presión reducida para proporcionar el producto de la etapa C, (3S)-3-(4-bromofenil)butanoato de metilo, adecuado para su uso sin purificación adicional.

En el esquema 1, la etapa D, la alquilación del producto del esquema 1 etapa C, puede lograrse utilizando una variedad de condiciones de alquilación bien conocidas en la literatura. Por ejemplo, la metilación del (3S)-3-(4-bromofenil)butanoato de metilo puede llevarse a cabo mediante el tratamiento con aproximadamente 1,5-1,75 equivalentes de una base no nucleófila como n-BuLi en un disolvente apropiado como THF anhidro a baja temperatura, seguido de la extinción del anión resultante con aproximadamente 1,5-1,6 equivalentes de CH³ I. El producto puede entonces aislarse utilizando técnicas bien conocidas en la técnica, como la extracción. La mezcla de reacción puede dividirse entre agua y un disolvente orgánico apropiado, como el MTBE. Los extractos orgánicos combinados pueden lavarse secuencialmente con agua, NaCl acuoso saturado, secarse sobre MgSO⁴, filtrarse y concentrarse a presión reducida para obtener el producto de la etapa D, 3-(4-bromofenil)-2-metilbutanoato de (3S, 2R/S)-metilo, como una mezcla de diastereómeros adecuada para su uso sin purificación adicional.

En el Esquema 1, etapa E, el producto del Esquema 1, etapa D, 3(4-bromofenil)-2-metilbutanoato de (3S, 2R/S)-metilo como una mezcla de diastereómeros, puede tratarse con aproximadamente 1 equivalente de una base orgánica tal como n-butilitio en un disolvente orgánico apropiado tal como THF anhidro a baja temperatura. La mezcla resultante puede tratarse entonces con una solución de aproximadamente 0,9 equivalentes de 2-bromoacetato de terc-butilo. El producto puede entonces aislarse utilizando técnicas bien conocidas en la técnica, como la extracción. La mezcla de reacción puede dividirse entre agua y un disolvente orgánico apropiado, como el MTBE, y los extractos orgánicos combinados pueden lavarse secuencialmente con agua y NaCl acuoso saturado. Los extractos orgánicos pueden secarse sobre MgSO⁴, filtrarse y concentrarse a presión reducida para obtener el producto de la etapa E, (S/R)-2-((R)-1-(4-bromofenil)etil)-2-metilsuccinato de 4-(terc-butil) 1-metilo , como una mezcla de diastereómeros adecuada para su uso sin purificación adicional.

En el Esquema 1, etapa F, una mezcla de los ésteres diastereoméricos del producto del Esquema 1 etapa E, puede ser hidrolizada bajo condiciones bien conocidas en la técnica anterior. Por ejemplo, el (S/R)-2-((R)-1-(4-bromofenil)etil)-2-metilsuccinato de 4-(terc-butil) 1-metilo puede disolverse en un disolvente orgánico apropiado, como DCM, y tratarse con un exceso o un ácido orgánico, como TFA. La mezcla resultante puede agitarse a temperatura ambiente durante unas 18 horas, y el producto puede aislarse entonces utilizando técnicas bien conocidas en la técnica, como la extracción. La mezcla de reacción puede lavarse secuencialmente con agua y NaCl acuoso saturado, los extractos orgánicos pueden secarse sobre MgSO⁴, filtrarse y concentrarse a presión reducida para obtener el producto de la etapa F, el ácido (3S/R,4R)-4-(4-bromofenil)-3-(metoxicarbonil)-3-metilpentanoico, como una mezcla de diastereómeros adecuada para su uso sin purificación adicional.

En el Esquema 1, etapa G, una mezcla de los diastereómeros del Esquema 1, etapa F, el ácido (3S/R,4R)-4-(4-bromofenil)-3-(metoxicarbonil)-3-metilpentanoico, puede disolverse en un disolvente orgánico polar apropiado, como DMF anhidro, y tratarse secuencialmente con una base no nucleófila, como unos 3 equivalentes de TEA o DIPEA, unos 12 equivalentes de un reactivo de acoplamiento de amida, como HATU, y una solución de amoníaco metanólico en exceso. La mezcla resultante puede agitarse a temperatura ambiente durante unas 2-12 horas, y el producto puede aislarse entonces utilizando técnicas bien conocidas en la técnica, como la extracción. La mezcla de reacción puede dividirse entre agua y un disolvente orgánico apropiado, como DCM, las capas pueden separarse y los extractos orgánicos combinados se lavan secuencialmente con agua y NaCl acuoso saturado. A continuación, los extractos pueden secarse sobre MgSO⁴, filtrarse y concentrarse a presión reducida para obtener el producto de la etapa G, (2S/R)-4-amino-2-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-2-metil-4-oxo-butanoato de metilo, como una mezcla de diastereómeros adecuada para su uso sin purificación adicional.

En el Esquema 1, etapa H, una mezcla del producto diastereomérico del Esquema 1, etapa G, puede ciclizarse por calentamiento en presencia de una base no nucleófila, seguido de la separación de los diastereómeros en condiciones de cromatografía quiral. Por ejemplo, el (2S/R)-4-amino-2-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-2-metil-4-oxobutanoato de metilo puede disolverse en una mezcla de THF/agua (aproximadamente 1:1), tratarse con aproximadamente 2,5 equivalentes de una base no nucleófila como el carbonato sódico, y la mezcla resultante puede calentarse a aproximadamente 60 °C durante aproximadamente 2 h. A continuación, el producto puede aislarse utilizando técnicas bien conocidas en la técnica, como la extracción seguida de la separación de los diastereómeros en condiciones de cromatografía quiral. Por ejemplo, la mezcla de reacción se extrae con EtOAc, los extractos orgánicos combinados se secan sobre MgSO⁴, se filtran y se concentran a presión reducida para dar una mezcla cruda de diastereómeros. Los diastereómeros pueden separarse mediante tecnología SFC quiral, utilizando un sistema de disolvente isocrático de EtOH que contenga una pequeña cantidad de una amina no nucleófila como N,N-dietilmetilamina/CO² (aproximadamente 1:9) para obtener los productos separados del etapa H, (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metilpirrolidina-2,5-diona y (3R)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metilpirrolidina-2,5-diona.

En el Esquema 1, etapa I, el producto de la etapa H puede carbonilarse en condiciones bien descritas en la técnica. Por ejemplo, aproximadamente 1 equivalente de (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metilpirrolidina-2,5-diona puede calentarse con aproximadamente 0,03-0,04 equivalentes de un reactivo de metal de transición tal como acetato de paladio(II), aproximadamente 0,10-0.15 equivalentes de un reactivo de ligando de fosfina adecuado, como butil-di-1-adamantil-fosfina, y un ligero exceso de una base no nucleófila, como TMEDA, en un disolvente orgánico no polar adecuado, como tolueno, en un recipiente de reacción sellado y presurizado a aproximadamente 51,7 kPa bajo una atmósfera de monóxido de carbono/hidrógeno. La mezcla resultante puede calentarse durante unas 16 horas a unos 95 °C, después se enfría a temperatura ambiente, se filtra sobre un lecho de tierra de diatomeas y se concentra a presión reducida. El producto puede aislarse entonces utilizando técnicas bien conocidas en la técnica, como la cromatografía. Por ejemplo, el residuo crudo obtenido tras la evaporación del disolvente puede purificarse mediante cromatografía flash sobre sílice, eluyendo con una mezcla de disolventes orgánicos adecuada, como hexanos/acetato de etilo, para proporcionar el producto de la etapa I, 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioxo-pirrolidin-3-il]etil]benzaldehído.

La succinimidanitrógeno de 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioxo-pirrolidin-3-il]etilo]benzaldehído puede protegerse con un grupo protector adecuado "PG" en condiciones bien conocidas en la técnica, como se muestra en el esquema 1, etapa J. Por ejemplo, para PG = tritil, aproximadamente 1 equivalente de 4-[(1R)-1-[(3 S)-3-metil-2,5-dioxo-pirrolidin-3- il]etil]-benzaldehído, el producto del Esquema 1, etapa I, puede tratarse con aproximadamente 1,5 equivalentes de una base adecuada, tal como Cs²CO³, y aproximadamente 1,2 equivalentes de cloruro de trifenilmetilo, en un disolvente orgánico polar adecuado, tal como DMF, a temperatura ambiente durante aproximadamente 4-6 horas. El producto puede aislarse utilizando técnicas bien conocidas en la técnica, tales como procedimientos de extracción y cromatografía. Por ejemplo, la mezcla de reacción cruda puede diluirse con agua, extraerse con un disolvente orgánico adecuado, como DCM o EtOAc, las capas resultantes pueden separarse, y los extractos orgánicos pueden lavarse con NaCl acuoso saturado, secarse sobre Na²SO⁴, filtrarse y concentrarse a presión reducida. El producto crudo resultante puede purificarse mediante cromatografía flash sobre gel de sílice, eluyendo con una mezcla de disolventes orgánicos adecuada, como hexanos/acetato de etilo, para proporcionar el producto de la etapa J, 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioxo-1-trityl-pirrolidin-3-il]etil]benzaldehído.

En el esquema 1, etapa K, el producto de benzaldehído protegido por N del esquema 1, etapa J, puede reducirse bajo una amplia gama de condiciones bien descritas en la técnica. Por ejemplo, aproximadamente 1 equivalente de 4- [(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioxo-1-tritil-pirrolidin-3-il]-benzaldehído, el producto del Esquema 1, etapa J, puede suspenderse en un disolvente alcohólico adecuado, como EtOH, o disolverse en un disolvente orgánico polar adecuado, como THF o 1,4-dioxano, y tratarse con aproximadamente 1.5 equivalentes de borohidruro de sodio, ya sea todo en una porción, o añadido por partes, a unos 0 °C durante unos 30-60 min. El producto puede aislarse utilizando técnicas bien conocidas en la técnica, como los procedimientos de extracción y la cromatografía. La mezcla de reacción cruda puede diluirse con agua, extraerse con un disolvente orgánico polar adecuado, como EtOAc, las capas resultantes pueden separarse, y los extractos orgánicos pueden lavarse con NaCl acuoso saturado, secarse sobre Na²SO⁴ , filtrarse y concentrarse a presión reducida. El producto crudo resultante puede purificarse mediante cromatografía flash sobre gel de sílice, eluyendo con una mezcla de disolventes orgánicos adecuada, como hexanos/acetato de etilo, para proporcionar el producto de la etapa K, (3S)-3-[(1R)-1-[4-(hidroximetil)fenil]etil]-3-metil-1-tritil-pirrolidina-2,5-diona.

En el esquema 1, etapa L, el producto de alcohol del esquema 1, etapa K, puede convertirse en un grupo saliente adecuado, como un haluro de alquilo, un mesilato de alquilo o un tosilato de alquilo, en una serie de condiciones bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, aproximadamente 1 equivalente de (3S)-3-[(1R)-1-[4-(hidroximetil)fenil]etilo]-3-metil-1-tritil-pirrolidina-2,5-diona, el producto del Esquema 1, etapa K, puede disolverse en un disolvente orgánico adecuado, tal como DCM, enfriado a aproximadamente 0 °C, y tratado secuencialmente con aproximadamente 1,5 equivalentes de una base no nucleófila adecuada, tal como TEA, y aproximadamente 1,2 equivalentes de cloruro de metanosulfonilo. El producto puede aislarse utilizando técnicas bien conocidas en la técnica, como los procedimientos de extracción. La mezcla de reacción puede diluirse con agua y DCM, las capas resultantes se separan, y el extracto orgánico puede lavarse secuencialmente con NaHCO³ acuoso saturado y NaCl acuoso saturado, se seca sobre Na²SO⁴, se filtra, y se concentra a presión reducida, para obtener el producto bruto de la etapa L, [4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioxo-1-trityl-pirrolidin-3-il]etil]fenil]metanosulfonato de metilo, de pureza suficiente para su uso posterior sin purificación adicional.

El producto del Esquema 1, etapa L, puede tratarse con varios nucleófilos bajo una amplia gama de condiciones bien descritas en la técnica. Por ejemplo, en el Esquema 1, etapa M, una solución de aproximadamente 1 equivalente de (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)-oximetil]fenil]etil]-3-metil-1-tritil-pirrolidina-2,5-diona en un disolvente orgánico polar apropiado, tal como DMF, puede añadirse a una suspensión de aproximadamente 0.75-0,95 equivalentes de 2-ciclopropil-6-metil-piridin-4-ol y unos 0,75-0,95 equivalentes de NaH o NaHMDS, en un disolvente orgánico adecuado, como DMF o ACN, a unos 0 °C a RT. La mezcla resultante puede agitarse durante unas 16 horas, y el producto puede aislarse utilizando técnicas bien conocidas en la técnica, como procedimientos de extracción y cromatografía. La mezcla de reacción puede diluirse con agua, extraerse con un disolvente orgánico polar adecuado, como EtOAc, separar las capas y el extracto orgánico puede lavarse con NaCl acuoso saturado, secarse sobre Na2SO4, filtrarse y concentrarse a presión reducida. El producto crudo resultante puede purificarse mediante cromatografía flash sobre gel de sílice, eluyendo con una mezcla de disolventes orgánicos adecuada, como hexanos/acetato de etilo, para proporcionar el producto de la etapa M, (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetil]fenil]etil]-3-metil-1-tritil-pirrolidina-2,5-diona.

El esquema 1, etapa N, representa la desprotección del nitrógeno de la succinimida, que puede llevarse a cabo bajo una amplia gama de condiciones específicas para el grupo protector, como es bien conocido en la técnica. Por ejemplo, cuando PG = tritil, aproximadamente 1 equivalente de (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetil]fenil]etil]-3-metil-1-tritil-pirrolidina-2,5-diona, el producto del Esquema 1, etapa M, puede disolverse en un disolvente orgánico adecuado, como DCM, y tratarse con exceso de TFA durante aproximadamente 12-24 h. La mezcla de reacción puede ajustarse a un pH ~ 6 con una solución acuosa de IN NaOH. El producto puede aislarse utilizando técnicas bien conocidas en la técnica, tales como procedimientos de extracción y cromatografía. La mezcla de reacción puede diluirse con agua, extraerse con DCM, separar las capas y el extracto orgánico puede lavarse con NaCl acuoso saturado, secarse sobre Na2SO4, filtrarse y concentrarse a presión reducida. El producto crudo resultante puede purificarse mediante cromatografía flash sobre gel de sílice, eluyendo con una mezcla de disolventes adecuada, como MeOH en DCM, para obtener el producto de la etapa N, (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetil]fenil]etil]-3-metil-pirrolidina-2,5-diona.

El esquema 2 representa la síntesis de 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioxo-1-trityl-pirrolidin-3-il]etil]benzaldehído. En el esquema 2, etapa A, el nitrógeno succinimida de (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirrolidina-2,5-diona, que es el producto del esquema 1, etapa H, puede protegerse por trilación de manera esencialmente análoga al procedimiento descrito en el esquema 1, etapa J. Por ejemplo, aproximadamente de 1 equivalente de (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metilpirrolidina-2,5-diona puede tratarse con aproximadamente de 1,5 equivalentes de una base apropiada, tal como Cs2CO3, y aproximadamente de 1,2 equivalentes de cloruro de trifenilmetilo, en un disolvente orgánico polar adecuado, tal como DMF, a temperatura ambiente durante aproximadamente de 4 h. El producto puede aislarse utilizando técnicas bien conocidas en la técnica, tales como la filtración. Por ejemplo, la mezcla de reacción puede diluirse con agua y enfriarse hasta aproximadamente 0 °C. El precipitado resultante puede recogerse por filtración, reconstituirse en MeOH caliente, enfriarse a RT, y el precipitado resultante recogerse por filtración para obtener el producto de la etapa A, (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-1-tritil-pirrolidina-2,5-diona. En el Esquema 2, etapa B, este material puede carbonilarse de manera esencialmente análoga al procedimiento descrito en el Esquema 1, etapa I, para proporcionar 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioxo-1-tritil-pirrolidin-3-il]etilo]benzaldehído. La reducción posterior, la conversión a mesilato, la eterificación con 2-ciclopropil-6-metil-piridin-4-ol y la desprotección, todo ello como se describe en el esquema 1, etapas K-N, pueden proporcionar (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetil]fenil]etilo]-3-metil-pirrolidina-2,5-diona.

Preparativos y ejemplos

Las siguientes preparaciones y ejemplos ilustran la invención y representan la síntesis típica del compuesto de la invención. Los reactivos y materiales de partida están fácilmente disponibles o pueden ser fácilmente sintetizados por un experto en la materia. Debe entenderse que las Preparaciones y los Ejemplos se exponen a modo de ilustración y no de limitación, y que un experto en la materia puede realizar diversas modificaciones.

La configuración R- o S- del compuesto de la invención puede determinarse mediante técnicas estándar como el análisis de rayos X y la correlación con el tiempo de retención de la HPLC quiral.

La LC-ES/MS se realiza en un sistema de cromatografía líquida AGILENT® HP1100. Las mediciones de espectrometría de masas por electropulverización (adquiridas en modo positivo y/o negativo) se realizan en un espectrómetro de masas cuadrupolar con detector selectivo de masas interconectado a1HPLC HP1100. Condiciones LC-MS (pH bajo): columna: PHENOMENEX® GEMINI® NX C182,1 * 50 mm 3,0 pm; gradiente: 5-100% B en 3 min, luego 100% B durante 0,75 min temperatura de la columna: 50 °C /-10 °C; caudal: 1,2 mL/min; disolvente A: agua desionizada con 0,1% de HCOOH; disolvente B ACN con 0,1% de ácido fórmico; longitud de onda 214 nm. Condiciones alternativas de LC-MS (pH alto): columna: Columnas XTERRA® MS C18 de 2,1*50 mm, 3,5 pm; gradiente: 5% de disolvente A durante 0,25 min, gradiente de 5% a 100% de disolvente B en 3 min y 100% de disolvente B durante 0,5 min o 10% a 100% de disolvente B en 3 min y al 100% de disolvente B durante 0,75 min; temperatura de la columna: 50 °C /-10 °C; caudal: 1,2 mL/min; Disolvente A: 10 mM NH⁴HCO³ pH 9; Disolvente B: Ac N; longitud de onda: 214 nm.

La cromatografía preparativa en fase inversa se realiza en un LC-ES/MS AGILENT® 1200 equipado con un espectrómetro de masas con detector selectivo de masas y un automuestreador/colector de fracciones LEAP®. Los procedimientos de alto pH se ejecutan en una columna PHENOMENEX® GEMINI®-NX de 75 x 30 mm, con un tamaño de partícula de 5 p y un protector de 10 x 20 mm. Flujo de 85 mL/min. El eluyente es bicarbonato de amonio 10 mM (pH 10) en acetonitrilo.

Los espectros de RMN se realizan en un espectrómetro de RMN Bruker AVIII HD de 400 MHz, obtenidos como soluciones de CDCh o (CD³)²SO informadas en ppm, utilizando el disolvente residual [CDCh, 7,26 ppm; (CD³)²SO, 2,05 ppm] como estándar de referencia. Cuando se indican las multiplicidades de los picos, pueden utilizarse las siguientes abreviaturas: s (singlete), d (doblete), t (triplete), q (cuarteto), m (multiplete), br-s (singlete amplio), dd (doblete de dobletes), dt (doblete de tripletes). Las constantes de acoplamiento (J), cuando se indican, se expresan en hercios (Hz).

Preparación 1

(3S)-3-(4-bromofenil)butanoato de isopropilo

Esquema 1, etapa A: A una solución desoxigenada de ácido (4-bromofenil)borónico (110 g, 547.73 mmol) en 1,4-dioxano (750 mL) bajo atmósfera de N2 se añade tetrafluoroborato de bis(norbornadieno)rodio(I) (2 g, 5,13 mmol) seguido de (R)-(+)-2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo (4,5 g, 7,2 mmol). La mezcla se envejece a temperatura ambiente durante 1 hora antes de añadir H2O (100 mL), TEA (70 mL, 502 mmol) y (E)-but-2-enoato de isopropilo (65 g, 507,14 mmol). La solución roja resultante se calienta a 40 °C durante 18 h. La mezcla de reacción se concentra a presión reducida hasta la mitad del volumen y se diluye con 500 mL de MTBE. La solución orgánica se lava con 500 mL de agua, se seca sobre Na2SO4, se filtra y se concentra hasta sequedad a presión reducida. El producto bruto se purifica por cromatografía flash sobre sílice, eluyendo con hexanos/EtOAc (gradiente de 1:0 a 9:1). Las fracciones cromatográficas puras se combinan y se concentran a presión reducida para dar el compuesto del título (144 g, 94,6% de rendimiento, 94,5% de ee). Enantiómero mayor tR = 2,20 min; enantiómero menor tR = 2,69 min (SFC quiral Lux Amylose-2, 5% MeOH/CO2, 5 mL/min, 225 nm). 1H NMR (DMSO-d6): 81,05 (d, J= 6,2 Hz, 3H), 1,10 (d, J= 6,2 Hz, 3H), 1,19 (d, J= 7,0 Hz, 3H), 2,48-2,59 (m, 2H), 3,08-3,19 (m, 1H), 4,74-4,84 (m, 1H), 7,20-7,24 (m, 2H), 7,44-7,48 (m, 2H).

Preparación 2

Ácido (3S)-3-(4-bromofenil)butanoico

Esquema 1, etapa B: A una solución de (3S)-3-(4-bromofenil)butanoato de isopropilo (1042 g, 3471,0 mmol) en MeOH (8 L) se añade NaOH acuoso 5 M (2 L) mientras se agita a RT. La reacción se calienta a 50 °C bajo atmósfera de N2 durante 40 min. Tras enfriar a 30 °C, la mezcla de reacción se concentra a presión reducida y el residuo se diluye con 2 L de agua. La mezcla acuosa resultante se extrae una vez con DCM (~2 L). La capa acuosa se trata con ~1 kg de hielo y se acidifica hasta pH ~ 4 con HCl conc. (1 L) mediante adición lenta en el transcurso de 20 min. La capa acuosa turbia se extrae entonces con DCM (~4 L). La capa orgánica se seca sobre Na2SO4, se filtra y se concentra a presión reducida hasta obtener un aceite claro de color canela que se solidifica hasta formar un sólido blanquecino. Se añade heptano (~4 L) al sólido y la mezcla resultante se calienta a 45 °C durante 2 h tras lo cual precipita un sólido. Los sólidos se recogen por filtración y se lavan con heptano (200-250 mL). El filtrado se concentra hasta sequedad a presión reducida para dar el compuesto del título como un sólido blanquecino (771 g, 91,4% de rendimiento, 99% ee). ES/MS (m/z): 241,0 (M-H). Enantiómero mayor tR = 2,35 min; enantiómero menor tR = 2,82 min (SFC quiral Lux Amylose-2, 5% MeOH/CO2, 5 mL/min, 225 nm). 1H NMR (DMSO-d6): 81,19 (d, J= 7,0 Hz, 3H), 2,48-2,52 (m, 2H), 3,07-3,17 (m, 1H), 7,20-7,25 (m, 2H), 7,44-7,49 (m, 2H), 12,08 (s, 1H).

[a]D25 25,0 ° (c = 1, MeOH).

Preparación 3

(3S)-3-(4-bromofenil)butanoato de metilo

Esquema 1, etapa C: Se añade H2SO4 concentrado (45 mL, 802 mmol) a una solución de ácido (3S)-3-(4-bromofenil)butanoico (450 g, 1851,1 mmol) en MeOH (4,5 L). La mezcla se calienta a 65 °C durante 2 h, se enfría a RT y se concentra a presión reducida hasta obtener un residuo seco. El sólido se diluye con MTBE (2,5 L) y H2O (2,5 L) y la mezcla resultante se extrae con MTBE (2 x 2,5 L). Los extractos combinados se lavan con H2O (2,5 L), se secan sobre MgSO4, se filtran y se concentran a presión reducida para dar el compuesto del título como un aceite amarillo claro (469,8 g, >99% de rendimiento) que puede usarse sin más purificación. ES/MS (m/z): 274,0 (M+NH4+).

1H NMR (CDCh): 81,27 (d, J= 7,0 Hz, 3H), 2,50-2,62 (m, 2H), 3,20-3,30 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 7,07-7,12 (m, 2H), 7,39-7,43 (m, 2H).

Preparación 4

3-(4-bromofenil)-2-metilbutanoato de (3S, 2R)metilo y 3-(4-bromofenil)-2-metilbutanoato de (3S, 2S)metilo

Esquema 1, etapa D: Una solución 2,5 M de n-BuLi en hexanos (1250 mL) se añade gota a gota a una solución de DIPEA (444 mL, 3150 mmol) en THF anhidro (2,3 L) a -40 °C durante 30 min. Después de 30 min, se añade una solución de (3S)-3-(4-bromofenil)butanoato de metilo (468,90 g, 1750,7 mmol) en THF anhidro (3,3 L) durante 40 min, y la mezcla de reacción se envejece durante 40 min a -40 °C. Se añade CH³ I (176 mL, 2798 mmol) durante 30 min y la mezcla se agita durante 15 min a -40 °C. La mezcla de reacción se apaga lentamente a -40 °C con MeOH (283 mL) seguido de H²O (2,5 L) y se deja que la mezcla se caliente hasta RT. La mezcla de reacción se diluye con H²O (2,5 L) y se separan las capas resultantes. La capa acuosa se extrae adicionalmente con MTBE (7,5 L) y los extractos orgánicos combinados se lavan secuencialmente con H2O (3 L) y NaCl acuoso saturado (2,5 L). Los extractos orgánicos se secan sobre MgSO⁴, se filtran y se concentran a presión reducida para dar el compuesto del título como una mezcla de diastereómeros (7:3) como un aceite marrón claro (489 g, 93% de rendimiento) que puede usarse sin más purificación. Diastereómero mayor tR = 1,29 min; diastereómero menor tR = 1,32 min (columna XBRIDGE® C18, 3,5 p, 2,1 x 50 mm, 1,2 mL/min, 50 °C, 10-95% 10 mM NH4CO3 (pH 10) en ACN). ES/MS (m/z para ⁷⁹Br/⁸¹Br): 288,0, 290,0 (M+NH4⁺).

Preparación 5

(S)-2-((R)-1-(4-bromofenil)etil)-2-metilsuccinato de 4-(terc-butil) 1-metilo y (R)-2-((R)-1-(4-bromofenil)etil)-2-metilsuccinato de 4-(terc-butil) 1-metilo

Esquema 1, etapa E: Se añade una solución 2,5 M de n-BuLi en hexanos (1150 mL, 2900 mmol) durante 20 min a una solución de DIPEA (410 mL, 2910 mmol) en THF anhidro (3 L) a -40 °C. La mezcla resultante se agita a -40 °C durante 30 min, y se añade una solución de una mezcla de diastereómeros l (2R/S,3S)-3-(4-bromofenil)-2-metilbutanoato de metilo (488,00 g, 1619,8 mmol) en THF anhidro (3 L) durante 1 h. La mezcla de reacción se envejece durante 45 min a -40 °C, y se añade una solución de 2-bromoacetato de terc-butilo (391 mL, 2596 mmol) en THF anhidro (250 mL) durante 30 min. La mezcla resultante se agita durante 30 min más a -40 °C. Se añade MeOH (250 mL) seguido de H2O (2,5 L), y se deja que la mezcla resultante se caliente hasta RT. La mezcla se diluye con H2O (2,5 L) y se separan las capas resultantes. La capa acuosa se extrae con MTBE (5 L), y el extracto orgánico se lava secuencialmente con H2O (5 L) seguido de NaCI acuoso saturado (2,5 L), se seca sobre MgSO4, se filtra y se concentra a presión reducida para dar el compuesto del título como una mezcla de diastereómeros en forma de aceite espeso de color marrón (786 g, 87% de rendimiento) que puede utilizarse sin más purificación. Diastereómero mayor tR = 1,51 min; diastereómero menor tR = 1,53 min (columna XBRIDGE® C18, 3,5 |j, 2,1 x 50 mm, 1,2 mL/min, 50 °C, 10-95% 10 mM NH4CO3 (pH 10) en ACN). ES/MS (m/z para 79Br/81Br): 328,8, 330,8 (M-tBu+H).

Preparación 6

Ácido (3S,4R)-4-(4-bromofenilo)-3-(metoxicarbonilo)-3-metilpentanoico y ácido (3R,4R)-4-(4-bromofenilo)-3-(metoxicarbonilo)-3-metilpentanoico

Esquema 1, etapa F: Una solución de una mezcla de diastereómeros (R/S)-2-((R)-1-(4-bromofenil)etil)-2-metilsuccinato de 4-(terc-butil) 1-metilo (785 g, 1406 mmol) en DCM (6 L) se trata con T^fA (1,06 L) y se agita a RT durante 18 h. La mezcla de reacción se lava secuencialmente con H²O (2 x 5 L) y NaCl acuoso saturado (5 L). Los extractos orgánicos se secan sobre MgSO⁴, se filtran y se concentran a presión reducida para dar el compuesto del título como una mezcla de diastereómeros (8:2) como una goma de color marrón oscuro (604 g, 91% de rendimiento) que puede usarse sin más purificación. ES/MS (m/z para ⁷⁹Br/⁸¹Br): 329,0, 331,0 (M+H).

Preparación 7

(2S)-4-amino-2-[(7R)-1-(4-bromofenil)etil]-2-metil-4-oxo-butanoato de metiloi y (2R)-4-amino-2-[(7R)-1-(4-bromofenil)etil]-2-metil-4-oxo-butanoato de metilo

Esquema 1, etapa G: A una mezcla de diastereómeros (3R/S,4R)-4-(4-bromofenil)-3-metoxicarbonil-3-metilpentanoico (603 g, 1282 mmol) y TEA (550 mL, 3870 mmol) en DMF anhidro (4 L) a 0 °C se añade HATU (597 g, 1538,69 mmol) durante 15min. La mezcla de reacción se envejece a RT durante 2 h. Se añade una solución de NH3/MeOH 7 M (1,83 L) durante 30 min a 10 °C, y la mezcla resultante se calienta a RT y se agita durante 1h. La mezcla de reacción se enfría a 10 °C y se diluye lentamente con DCM (5 L) seguido de H²O (5 L). Las capas resultantes se separan y la capa acuosa se extrae adicionalmente con DCM (2,5 L). Los extractos combinados se lavan secuencialmente con H²O (5 L) y NaCl acuoso saturado (5 L), se secan sobre MgSO⁴, se filtran y se concentran a presión reducida para dar el compuesto del título como una mezcla de diastereómeros (8:2) como una goma oscura (520 g, 87% de rendimiento) que puede utilizarse sin más purificación. Diastereómero mayor tR = 0,97 min; diastereómero menor tR = 0,99 min (columna XBRIDGE® C18, 3,5 m, 2,1 x 50 mm, 1,2 mL/min, 50 °C, 10-95% 10 mM NH4CO3 (pH 10) en ACN). ES/MS (m/z para ⁷⁹Br/⁸¹Br) 328,0/330,0 (M+H/M+H+2).

Preparación 8

(3S)-3-[(7R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirrolidina-2,5-diona y (3R)-3-[(7R)-1-(4-bromofenil)ethil]-3-metil-pirrolidina-2,5-diona

Esquema 1, etapa H: A una mezcla de diastereómeros (2R/S)-4-amino-2-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-2-metil-4-oxobutanoato de metilo (519 g, 1107 mmol) disuelta en THF (4. 2 L y H2O (4,2 L) se añade Na2cO3 (293 g, 2764,46 mmol) y la mezcla se calienta a 60 °C durante 2 h.2 L) y H2O (4,2 L) se añade Na2CO3 (293 g, 2764,46 mmol) y la mezcla se calienta a 60 °C durante 2 h. La reacción se enfría a RT y se extrae con EtOAc (2,5 L). La capa orgánica se lava con H2O (3 L). El extracto acuoso resultante se extrae con EtOAc (5 L) y los extractos orgánicos combinados se secan sobre MgSO4, se filtran y se concentran a presión reducida para dar una mezcla cruda de los dos diastereómeros que se separan por SFC [Columna: AS-H, 150 x 50mm; 10% EtOH (0,2% DEMA), 340 g/min; BPR 150 bar; volumen de inyección: 4 ml; 220 nm]. (3R)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirrolidina-2,5-diona: primer compuesto de elución (43,8g, 11%). 1H NMR (CDCl3): 81,33 (d, J= 7,2 Hz, 3H), 1,40 (s, 3H), 2,34 (d, J= 18,4 Hz, 1H), 2,80 (, J= 18,4 Hz, 1H), 3,23 (q, J= 7,2 Hz, 1H), 7,07 (d, 2H), 7,40 (d, 2H), 7,54 (br-s, 1H). ES/MS (m/z para 79Br/81Br): 313,0, 315,0 (M+H). (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirrolidina-2,5-diona: compuesto de segunda elución (241,8 g, 55%). 1H NMR (CDCl3): 81,23 (s, 3H), 1,30 (d, J= 7,1 Hz, 3H), 2,21 (d, J= 18,4 Hz, 1H), 2,96 (d, J= 18,4 Hz, 1H), 3,14 (q, J= 7,1 Hz, 1H), 7,04-7,09 (m, 2H), 7,42-7,48 (m, 2H), 8,09 (br-s, 1H). ES/MS (m/z para 79Br/81Br): 313,0, 315,0 (M+H).

Preparación 9

2-ciclopropil-6-metil-piridina-4-ol

Una suspensión de NaH (60% en aceite, 11,6 g, 289 mmol) en 1,2-dimetoxietano (150 mL) se calienta a 110 °C en un baño de aceite. Se añade una solución de acetilacetona (6,0 mL, 57,8 mmol), ciclopropanocarboxilato de metilo (9,0 mL, 86,8 mmol) y 1,2-dimetoxietano (75 mL) gota a gota durante 40 min. Después de calentar durante 4 horas más, la suspensión se enfría a temperatura ambiente y se elimina el DME a presión reducida. La suspensión resultante se diluye con Et²O (200 mL), se enfría en un baño de hielo/agua a unos 5 °C y se enfría cuidadosamente con agua helada (200 mL). Las capas se separan y la capa orgánica se lava con agua (100 mL) y una solución acuosa de NaOH 0,25M (100 mL). Las capas acuosas combinadas se enfrían en un baño de hielo/agua y se tratan cuidadosamente con HCl concentrado (40 mL). La mezcla acuosa ácida se extrae con Et²O (4 x 200 mL), y los extractos orgánicos se secan sobre Na²SO⁴, se filtran y se concentran a presión reducida para dar un aceite de color ámbar claro. El residuo resultante se trata con NH⁴OH al 28% (180 mL, 4,6 mol) y la mezcla resultante se calienta a reflujo durante 3 h, seguido de concentración a presión reducida. El producto bruto se purifica por cromatografía flash sobre sílice, eluyendo con (2N NH³ / MeOH) / DCM (gradiente de 1:99 a 1:9). Las fracciones cromatográficas puras se combinan y se concentran a presión reducida para dar el compuesto del título (8,0 g, 90% de rendimiento). ES/MS (m/z): 150,0 (M+H⁺).

Preparación 10

4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioxo-pirrolidin-3-yl]etil]benzaldeido

Esquema 1, etapa I: En un autoclave Parr de 100 ml se carga (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metilpirrolidina-2,5-diona (2,47 g, 8.34 mmol), acetato de paladio(II) (75 mg, 0,334 mmol), butildi-1-adamilfosfina (CataCXium A®) (360 mg, 0,954 mmol), tolueno anhidro (70 ml) y TMEDA (1,3 ml, 8,6 mmol). Se cierra el autoclave. La mezcla de reacción se coloca bajo una atmósfera de gas de síntesis (H² / CO (1:1)) (51,7kPa), se calienta a 95 °C y se deja agitar durante 16 h. Se deja enfriar la mezcla y se filtra la suspensión sobre una almohadilla de tierra de diatomeas. La torta del filtro se lava con EtOAc y los filtrados recogidos se concentran a presión reducida para obtener un aceite ámbar. El producto bruto se purifica por cromatografía flash sobre sílice, eluyendo con hexanos/EtOAc (gradiente de 9:1 a 2:3). Las fracciones cromatográficas puras se combinan y se concentran a presión reducida para dar el compuesto del título (1,27 g, 62% de rendimiento). ES/MS (m/z): 263,0 (M+NH⁴⁺).

Preparación 11

4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioxo-1-tritil-pirrolidin-3-yl]etil]benzaldehido

Esquema 1, etapa J: Se añaden carbonato de cesio (2,24 g, 6,87 mmol) y cloruro de trifenilmetilo (1,56 g, 5,50 mmol) a una solución de 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioxo-pirrolidina-3-il]etilo]benzaldehído (1,12 g, 4,58 mmol) y DMF (25 ml) agitando a RT. Tras agitar durante 4,5 h, la mezcla se vierte en agua (100 ml) y se extrae con EtOAc (2 x 75 ml). Los extractos combinados se lavan con agua (50 ml) y NaCl acuoso saturado, se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran a presión reducida, para dar una espuma amarilla. El producto bruto se purifica por cromatografía flash sobre sílice, eluyendo con hexanos / EtOAc (gradiente de 49:1 a 7:3). Las fracciones cromatográficas puras se combinan y se concentran a presión reducida para dar el compuesto del título (2,28 g, rendimiento del 100%). ES/MS (m/z): 510,2 (M+Na+).

Preparación 12

(3S)-3-[(1R)-1-[4-(hidroximetil)fenil]etil]-3-metil-1-tritil-pirrolidina-2,5-diona

Esquema 1, etapa K: En una sola porción, se añade borohidruro de sodio (147 mg, 3,81 mmol) a una suspensión de 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioxo-1-tritil-pirrolidin-3-il]etil]benzaldehído (1,24 g, 2,54 mmol) en EtOH (50 ml), enfriado en un baño de hielo/agua. Tras 40 minutos, la reacción se apaga con agua (10 ml) y se concentra a presión reducida para eliminar el EtOH. El concentrado resultante se diluye con agua (50 ml) y se extrae con EtOAc (2 x 50 ml). Los extractos combinados se lavan con NaCl acuoso saturado, se secan sobre Na²SO⁴, se filtran y se concentran a presión reducida para dar una espuma blanca. El producto bruto se purifica por cromatografía flash sobre sílice, eluyendo con hexanos / EtOAc (gradiente de 19:1 a 1:19). Las fracciones cromatográficas puras se combinan y se concentran a presión reducida para dar el compuesto del título (1,19 g, rendimiento del 95%). ES/MS (m/z): 507,2 (M+NH4⁺).

Procedimiento alternativo a la preparación 12

Se añade borohidruro de sodio (10 g, 264,3 mmol) en porciones de 2 g a una solución de 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioxo-1-tritil-pirrolidin-3-il]etil]benzaldehído(160,7 g, 329,6 mmol) disuelta en THF anhidro (1,6 L) en un matraz de fondo redondo de 3 cuellos equipado con un agitador de cabeza. La mezcla de reacción se agita a RT durante 3 h, se diluye con EtAOc (2 L) y agua (1,5 L), y se separan las capas resultantes. El extracto orgánico se lava secuencialmente con agua (1 L) y NaCl acuoso saturado (500 mL), se seca sobre Na²SO⁴, se filtra y se concentra a presión reducida. El residuo resultante se disuelve en EtOAc (1 L) y MTBE (1 L), se añade agua (500 mL) y IN HCl acuoso (250 mL), y la mezcla bifásica se agita durante unos 15 min. La capa orgánica se separa y se lava con NaCl acuoso saturado, se seca sobre Na²SO⁴, se filtra, se concentra a presión reducida y el residuo resultante se seca en una estufa de vacío a 40-50 °C durante la noche, para obtener el compuesto del título (164,5 g, 96% de rendimiento) como un sólido de color canela.

Preparación 13

(3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetil]fenil]etil]-3-metil-1-tritil-pirrolidina-2,5-diona

Esquema 1, etapa L: Una solución de (3S)-3-[(1R)-1-[4-(hidroximetil)fenil]etil]-3-metil-1-tritil-pirrolidina-2,5-diona (636 mg, 1.30 mmol) en DCM (15 mL), enfriado a unos 5 °C en un baño de hielo/agua, se trata con TEA (274 pL, 1,95 mmol) y cloruro de metanosulfonilo (122 j L, 1,56 mmol). Después de agitar en el baño frío durante 2 horas, la mezcla se diluye con DCM (25 mL) y agua (25 mL). Se separan las capas y se extrae la acuosa con DCM (25 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavan con NaHCO³ acuoso saturado y NaCl acuoso saturado, se secan sobre Na²SO⁴, se filtran y se concentran a presión reducida, para dar metanosulfonato [4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioxo-1-trityl-pirrolidin-3-il]etil]fenil de metilo bruto como aceite.

Esquema 1, etapa M: En un matraz separado, se añade hidruro de sodio (60% en aceite, 78 mg, 1,95 mmol) a una solución de 2-ciclopropil-6-metil-piridin-4-ol (291 mg, 1,95 mmol) en DMF (5 mL). Después de agitar a RT durante 40 minutos, se añade una solución del mesilato crudo en DMF (5 ml) a la mezcla de hidruro de sodio y se agita a RT durante 16 horas. La mezcla de reacción se apaga con agua (50 mL) y se extrae con EtOAc (2 x 50 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavan con agua y NaCl acuoso saturado, se secan sobre Na²SO⁴, se filtran y se concentran a presión reducida, para dar un aceite. El producto bruto se purifica por cromatografía flash sobre sílice, eluyendo con hexanos / EtOAc (gradiente de 19:1 a 1:3). Las fracciones cromatográficas puras se combinan y se concentran a presión reducida para dar el compuesto del título (597 mg, 74% de rendimiento). ES/MS (m/z): 621,3 (M+H+).

Procedimiento alternativo de preparación 13

Una solución de (3S)-3-[(1R)-1-[4-(hidroximetil)fenil]etil]-3-metil-1-tritil-pirrolidina-2,5-diona (121,3 g, 247,8 mmol) en DCM (1.2 L), enfriado a unos 5 °C en un baño de hielo/agua, se trata con TEA (52 mL, 373 mmol) y se añade cloruro de metanosulfonilo (23 mL, 297 mmol) gota a gota durante unos 10 min. La mezcla de reacción se agita a unos 5 °C durante aproximadamente 1 hora y se añade agua (1,2 L). La capa orgánica se separa y se lava con agua (500 mL), se seca sobre Na²SO⁴ , se filtra, se concentra a presión reducida, se azeotropa con hexano (500 mL), se concentra a presión reducida, y el residuo resultante se somete a alto vacío, para obtener [4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioxo-1-tritil-pirrolidin-3-il]etil]fenil]metanosulfonato de metilo (143,6 g, rendimiento cuantitativo, producto que contiene hexano) como un sólido amarillo.

El 2-ciclopropil-6-metil-piridin-4-ol (56 g, 375,4 mmol) se disuelve en ACN (1,3 L), y se añade gota a gota una solución 2M de NaHMDS en THF durante 20 min. Después de la adición completa, la mezcla de reacción se calienta a 55 °C, y se añade una solución de [4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioxo-1-tritil-pirrolidin-3-il]etil]fenil]metanosulfonato de metilo (133,8 g, 235,7 mmol) disuelta en ACN (670 mL) gota a gota durante 45 min a 55 °C. La mezcla de reacción se calienta a 55 °C durante 1 hora y se enfría a RT, se vierte en una mezcla de MTBE (2 L) y agua (2 L), y se separa la capa orgánica, se lava con agua (500 mL), se seca sobre Na²SO⁴ , se filtra y se concentra a presión reducida. El residuo resultante se disuelve en DCM (300 mL), se seca sobre MgSO⁴ y se filtra sobre un lecho de tierra de diatomeas. La torta del filtro se lava con DCM adicional y el filtrado se reduce a presión reducida. El residuo resultante se purifica mediante cromatografía flash sobre sílice, eluyendo con hexanos / acetona (gradiente de 9:1 a 7:3). Las fracciones cromatográficas puras se combinan y se concentran a presión reducida para dar el compuesto del título (62,7 g, 43% de rendimiento) como un sólido blanquecino.

Preparación 14

(3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-1-tritil-pirrolidina-2,5-diona

Esquema 2, etapa A: la (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metilpirrolidina-2,5-diona (201 g, 678,6 mmol) se disuelve en DMF (1500 mL) en un matraz de 3 cuellos de 4L bajo nitrógeno a RT con agitación mecánica. Se añade Cs²CO³ (330 g, 1012,8 mmol) a lo largo de unos 5 minutos, y la mezcla se calienta a RT y se agita durante 3 horas más. La mezcla de reacción se diluye con agua (1500 mL) mientras se mantiene la temperatura interna por debajo de 20 °C. El precipitado resultante se recoge por filtración al vacío; la torta de filtración se lava con agua (2 x 500 mL) y se seca bajo una corriente de nitrógeno. La torta de filtración se transfiere a un recipiente de 3 cuellos de 12 L con agitación mecánica. Se añade MeOH (4 L) y la mezcla se calienta a reflujo durante unos 5 minutos. La solución metanólica se enfría a unos 0 °C, el precipitado resultante se recoge por filtración al vacío y los sólidos se secan a unos 50 °C al vacío para obtener el compuesto del título (350,9 g, 96% de rendimiento) como sólido blanco. ES/MS (m/z, ⁷⁹Br/⁸¹Br): 538,1/540,1 (M+H+).

Preparación 15

4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioxo-1-tritil-pirrolidin-3-yl]etil]benzaldehido

Esquema 2, etapa B: La (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metilpirrolidina-2,5-diona (185,5 g, 0,35 mol) se divide en 3 porciones iguales y cada una se coloca en un recipiente de autoclave Parr, conteniendo cada una acetato de paladio(II) (0.77 g, 3,4 mmol), butildi-1-adamilfosfina (CataCXium A®) (5,0 g, 0,014 mol), tolueno anhidro (500 ml) y TMEDA (17,5 ml, 0,12 mol). Cada recipiente se evacua y se llena hasta aproximadamente 51,7 kPa con una atmósfera de CO / H2. Los recipientes se calientan a 95°C durante 16 horas y se enfrían a RT. Cada reacción se filtra sobre un lecho de tierra de diatomeas, y los filtrados se combinan y se concentran a presión reducida. El residuo resultante se disuelve en tolueno (~ 1 L), se transfiere a un matraz de 3 cuellos de 2 L, se añade carbón activado (200 g (200 g de)), y la mezcla se agita a RT durante la noche. La mezcla de reacción se filtra sobre un lecho de tierra de diatomeas, la torta del filtro se lava con MTBE (1 L), y el filtrado se concentra a presión reducida. El residuo resultante se mezcla con EtOH (1,3 L), se calienta a 75 °C y se añade agua (640 mL) gota a gota durante ~ 20 min. La mezcla se enfría a RT y los sólidos se recogen por filtración, se enjuagan con agua (500 mL) y se secan bajo presión de nitrógeno, para obtener el compuesto del título (160,7 g, 87% de rendimiento) como un sólido amarillo. ES/MS (m/z): 488,1 (M+H+).

Ejemplo 1

(3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropM-6-metil-4-piridM)oximetM]fenM]etM]-3-metM-pirroMdma-2,5-diona

Esquema 1, etapa N: A una solución de (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetil]fenil]etil]-3-metiM-tritil-pirrolidin-2,5-diona (597 mg, 0,961 mmol) en DCM (5 ml) se añade TFA (3 ml, 38,6 mmol) y se agita la mezcla durante 17 h. Tras concentrar a presión reducida, se añade DCM (20 ml) y agua (20 ml) al concentrado, y se ajusta a pH 6 con NaOH acuoso IN. Se extrajo con DCM (2 x 50 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida, para dar un aceite. El producto bruto se purifica por cromatografía flash sobre sílice, eluyendo con DCM / MeOH (gradiente de 1:0 a 9:1). Las fracciones cromatográficas puras se combinan y se concentran a presión reducida para dar el compuesto del título (332 mg, 91% de rendimiento). ES/MS (m/z): 379,0 (M+H+). [a]o20 = -42,142° (C=0,2, MeOH)

Procedimiento alternativo para el ejemplo 1

La (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetil]fenil]etil]-3-metil-1-tritil-pirrolidina-2,5-diona (61,7 g, 99,4 mmol) se disuelve en DCM (230 mL) y se enfría a unos 5 °C. Se añade lentamente TFA (310 mL) durante unos 10 minutos, se calienta la mezcla de reacción hasta RT y se agita durante la noche. La mezcla de reacción se concentra a presión reducida y el residuo resultante se reparte entre MTBE (620 mL) y agua (620 mL). La mezcla se enfría a unos 5 °C, se añade una solución acuosa de NaOH 5N (pH ~ 14), y se separan las capas. El extracto acuoso se acidifica con HCl concentrado (pH ~ 5) y se extrae con EtOAc (1,2 L). Se separan las capas, se lavan los extractos orgánicos con NaHCO3 acuoso saturado (2 x 500 mL), se secan sobre MgSO4, se filtran, se concentran a presión reducida y se someten a alto vacío durante aproximadamente 2 h para obtener el compuesto del título (31,4 g, 83,5% de rendimiento) como un sólido blanquecino. ES/MS (m/z): 379,0 (M+H+).

Ejemplo 1A

Bromohidrato de (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropN-6-metN-4-piridM)oximetN]feml]etM]-3-metN-pirroMdma-2,5-diona monohidrato

La (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridM)oximetM]fenM]etM]-3-metM-pirrolidina-2,5-diona (401 mg, 1,06 mmol) se suspende en EtOAc (8 mL) a 60 °C. Se añade una solución de ácido bromhídrico al 48% disuelto en EtOAc (2 mL), y la mezcla se agita a 60 °C durante 1 h. El sólido blanco resultante se recoge por filtración, se enjuaga con EtOAc y se seca al aire, para obtener el compuesto del título (385 mg, 79% de rendimiento) como un sólido cristalino blanco.

Ejemplo 1B

Clorhidrato de (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetil]fenil]etil]-3-metil-pirrolidina-2,5-diona monohidrato

(3S)-3-[(1R)-1 -[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetM]fenil]etil]-3-metil-pirrolidina-2,5-diona (250 mg, 0,7 mmol) se disuelve en una mezcla de EtOAc/EtOH (4:1) con agitación a 60 °C. Se añade una solución de HCl 1 M en EtOAc (0,7 mL), y la mezcla resultante se agita a 60 °C durante 1 h, se enfría a RT, y el precipitado amarillo claro se recoge por filtración, se enjuaga con EtOAc, y se seca al aire para obtener el compuesto del título (151 mg, 55% de rendimiento) como un sólido cristalino amarillo claro.

Difracción de polvos de rayos X (XRPD)

Los patrones XRPD de los sólidos cristalinos se obtienen en un difractómetro de rayos X Bruker D4 Endeavor, equipado con una fuente de CuKa A = 1,54060 A) y un detector Vantec, que funciona a 35 kV y 50 mA. La muestra se escanea entre 4 y 40° en 20, con un tamaño de paso de 0,009° en 20 y una velocidad de escaneo de 0,5 segundos/paso, y con divergencia de 0,6 mm, antidispersión fija de 5,28 y rendijas de detector de 9,5 mm. El polvo seco se coloca en un portamuestras de cuarzo y se obtiene una superficie lisa con un portaobjetos de vidrio. Los patrones de difracción de la forma de los cristales se recogen a temperatura ambiente y humedad relativa. Es bien conocido en la técnica de la cristalografía que, para cualquier forma cristalina dada, las intensidades relativas de los picos de difracción pueden variar debido a la orientación preferida resultante de factores como la morfología y el hábito del cristal. Cuando los efectos de la orientación preferida están presentes, las intensidades de los picos se alteran, pero las posiciones de los picos característicos del polimorfo no cambian. Véase, por ejemplo, The United States Pharmacopeia #23, National Formulary #18, páginas 1843-1844, 1995. Además, también es bien conocido en la técnica de la cristalografía que para cualquier forma cristalina dada las posiciones angulares de los picos pueden variar ligeramente. Por ejemplo, las posiciones de los picos pueden cambiar debido a una variación en la temperatura o la humedad a la que se analiza una muestra, al desplazamiento de la muestra o a la presencia o ausencia de un estándar interno. En el presente caso, una variabilidad de la posición de los picos de ± 0,2 en 20 tendrá en cuenta estas posibles variaciones sin obstaculizar la identificación inequívoca de la forma cristalina indicada. La confirmación de una forma cristalina puede hacerse sobre la base de cualquier combinación única de picos distintivos (en unidades de ° 20), normalmente los picos más prominentes. Los patrones de difracción de la forma cristalina, recogidos a temperatura ambiente y humedad relativa, se ajustan basándose en los picos estándar NIST 675 a 8,85 y 26,77 grados 20.

Una muestra del compuesto del Ejemplo 1A se caracteriza por un patrón de DRX usando radiación CuKa como teniendo picos de difracción (valores 20) como se describe en la Tabla 1 a continuación. Específicamente el patrón contiene un pico a 26,1° en combinación con uno o más de los picos seleccionados del grupo que consiste en 13,9°, 22,1°, 8,7°, 19,5° y 18,8° con una tolerancia para los ángulos de difracción de ±0,2 grados.

Tabla 1. Picos de difracción de rayos X del compuesto cristalino del Ejemplo 1A; monohidrato de (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetil]fenil]etil]-3-metil-pirrolidina-2,5-diona

Una muestra del compuesto del Ejemplo 1B se caracteriza por un patrón de DRX usando radiación CuKa como teniendo picos de difracción (valores 20) como se describe en la Tabla 2 a continuación. Específicamente el patrón contiene un pico a 26,3° en combinación con uno o más de los picos seleccionados del grupo que consiste en 13,8°, 22,2°, 19,7°, 21,3°, 14,1° y 25,4° con una tolerancia para los ángulos de difracción de ±0,2 grados..

Tabla 2. Picos de difracción de rayos X del compuesto cristalino del Ejemplo 1B; clorhidrato monohidrato de (3S)-3-[(1R)-1 -[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetil]fenil]etil]-3-metil-pirrolidina-2,5-dionahidrato.

Inhibición de la producción de AMPc por los antagonistas del receptor CGRP

El receptor hCGRP (péptido humano relacionado con el gen de la calcitonina) está acoplado funcionalmente a las proteínas Gas. La estimulación del hCGRP resulta en un aumento de la síntesis de AMPc intracelular y puede ser bloqueada por la adición de antagonistas del receptor. La actividad del receptor es, por tanto, un reflejo de la cantidad de AMPc presente en el interior de las células, que puede detectarse mediante tecnología estándar in vitro. Cultivo celular: Las células de neuroblastoma SK-N-MC cultivadas que expresan endógenamente el receptor hCGRP (ATCC) se cultivan en medio esencial mínimo de Eagle (HYCLONE™) complementado con 10% de suero bovino fetal inactivado por calor (FBS; GIBCO®), aminoácidos no esenciales (GIBCO®), 1 mM de piruvato sódico, 2 mM de L-glutamina, 100 U/mL de penicilina y 10 pg/mL de estreptomicina hasta alcanzar aproximadamente el 70% de confluencia. Después de proporcionar medio fresco, las células se incuban a 37 °C durante la noche. El día del ensayo, las células se separan utilizando ACCUTASE® (MP Biomedicals), se resuspenden en tampón de ensayo [solución salina equilibrada de Hank/Salina tamponada con fosfato de Dulbecco con 100 mg/mL de CaCh y MgCh mezclados 1:2,33 mM de ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinaetanosulfónico, 0,03% de albúmina de suero bovino y 0,5 mM de 1-metil-3-isobutilxantina (como inhibidor del AMPc)], y se sembraron 3-5K/pozo en placas blancas de 384 pocillos recubiertas de poli-D-lisina (BD Biosciences).

Inhibición de la producción de AMPc: Para los estudios de dosis-respuesta, los compuestos se diluyen en serie 1:3 en dimetilsulfóxido y luego 1:10 en tampón de ensayo. El CGRP humano (0,8 nM; Bachem) como agonista específico del receptor hCGRP se mezcla con el compuesto diluido y se añade a las células como estimulante de incentivos a sus concentraciones EC^s0.

Análisis de datos: La cantidad de AMPc intracelular se cuantifica utilizando la tecnología HTRF (Cisbio) según las instrucciones del proveedor. Brevemente, el conjugado AMPc-d2 y el conjugado anti-AMPc en tampón de lisis se incuban con las células tratadas a temperatura ambiente durante 90 minutos. La seña1HTRf se detecta inmediatamente utilizando un lector de placas ENVISION® (Perkin-Elmer) para calcular la relación de fluorescencia a 665 y 620 nM. Los datos brutos se convierten en cantidad de AMPc (pmole/pocillo) utilizando una curva estándar de AMPc generada para cada experimento. Los valores EC50 relativos se calculan a partir del intervalo superiorinferior de la curva de respuesta a la concentración utilizando un programa de ajuste de curvas logísticas de cuatro parámetros (ACTIVITYBASE® v5.3.1.22 o GENEDATA SCREEⁿ E^r® v12.0.4), y los valores ^{Kb se estiman} como valores IC⁵⁰ corregidos por el agonista utilizando la ecuación:

Kb = (IC5n) / [ 1+ ([Agonista] i EC50) 1

Los valores K^b estimados se presentan como valores medios ± SEM, promediados a partir del número de ejecuciones (n).

Siguiendo el procedimiento esencialmente como se ha descrito anteriormente, el compuesto del Ejemplo 1 tiene una K^b medida en el CGRP humano de 0,57 ± 0,25 nM (n = 11). Esto demuestra que el compuesto del Ejemplo 1 es un antagonista del receptor CGRP humano in vitro.

Determinación in vitro del eflujo por ABCB1, glicoproteína P humana (Pgp)

Cultivo celular: Las células MDCKII que expresan de forma estable el ABCB1 humano de tipo salvaje (Pgp) se obtienen del Instituto del Cáncer de los Países Bajos (Ámsterdam, Países Bajos). Las células MDCK se mantienen como se ha descrito previamente (Desai et al. Mol Pharm 10:1249-1261, 2013).

Transporte bidireccional a través de células MDCK: El ensayo se realiza esencialmente como se ha descrito anteriormente (Desai et al. Mol Pharm 10:1249-1261,2013). El transporte se mide en ambas direcciones a través de monocapas celulares desinhibidas e inhibidas utilizando una concentración de sustrato de 5 pM diluida a partir de una solución madre de DMSO de 10 mM (concentración final de DMSO de 0,05%) y un único intervalo de tiempo de 60 minutos. Se utilizan 2,5 pM del compuesto del Ejemplo 1 para inhibir selectivamente la Pgp. Los coeficientes de permeabilidad aparente (Papp) se estiman como la pendiente de la masa transportada por 60 minutos en relación con la masa total recuperada. Los coeficientes Papp de basal a apical (B-A)/de apical a basal (A-B) se calculan en ausencia o en presencia del inhibidor en cada línea celular para el coeficiente de eflujo neto (NER). Se determina que la TNE del compuesto del Ejemplo 1 para el eflujo por Pgp es de 1,7.

Determinación in vivo del coeficiente de partición cerebro-plasma no unido (K ^p,uu,cerebro ) en ratas

El coeficiente de partición cerebro-plasma no unido (K^p,uu,cerebro) es uno de los parámetros farmacocinéticos clave para evaluar la capacidad de un compuesto de atravesar la barrera hematoencefálica (BBB) ( Hammarlund-Udenaes, M.; Friden, M.; Syvanen, S.; Gupta, A. On the Rate and Extent of Drug Delivery to the Brain. Pharm. Res.

2008, 25 (8), 1737-1750 ). El K^p,^uu,cerebro se suele medir en especies preclínicas utilizando la siguiente metodología, y los valores de K^p,uu,cerebro que superan el 0,3 sugieren que más del 30% del compuesto no unido en el plasma atraviesa la BBB.

Poblaciones de estudio: Los estudios con animales se realizan bajo protocolos aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de Covance. Las ratas Sprague-Dawley macho que pesan 250-350 g se obtienen de Harlan Sprague Dawley Inc. (Indianápolis, IN). Los animales tienen acceso a comida y agua ad libitum antes y durante el estudio.

Administración de la dosis: Los animales reciben cada uno 10 mg/kg del compuesto antagonista del receptor CGRP del Ejemplo 1, administrado por vía oral en 10 ml/kg de hidroxietilcelulosa 1% p/v/polisorbato 80, 0,25% v/v/Antifoam 1510-US 0,05% v/v/ en agua purificada (sonda sonicada).

Muestreo farmacocinético: Se utilizan tres animales por punto temporal. Las muestras de sangre (por punción cardíaca) y de cerebro se recogen a las 0,5 y 2 h después de la dosis. Las muestras de sangre se tratan con el anticoagulante K3-EDTA, y el plasma se obtiene por centrifugación a 1600 g durante 10 minutos. Las muestras de cerebro se pesan y se homogeneizan, sin perfusión. Todas las muestras se almacenan a -70 °C hasta el análisis por LC-MS/MS para determinar la concentración del compuesto del Ejemplo 1 en el plasma y el cerebro en cada punto temporal.

Determinación de la unión a proteínas plasmáticas y cerebrales: La unión in vitro de proteínas de plasma y cerebro de rata se determina mediante diálisis de equilibrio, como se describe en otro lugar [ Zamek-Gliszczynski et al., J Pharm Sci, 101:1932-1940, 2012 ]. Los resultados se informan como fracción no unida en plasma (f^u,^plasma) y cerebro (f^u,cerebro), que luego se utilizan para calcular K^p,uu,cerebro, como se describe en la Tabla 1. El ^fu,plasma y el f^u,cerebro de rata del compuesto del Ejemplo 1 se determinan como 0,071 y 0,043, respectivamente.

Análisis y resultados:

K^p,uu,cerebro se calcula para cada punto de tiempo a partir de la expresión siguiente, en la que los componentes individuales se derivan de una combinación de mediciones in vitro e in vivo realizadas como se ha descrito anteriormente:

u,p asma -tota .p asma u,p asma

en la que Cto^tal,cerebro, C^u,cerebro, C^total,plasma y C^u,plasma son las concentraciones totales y no ligadas en cerebro y plasma, y f^u,cerebro y f^u,plasma son las fracciones no ligadas en cerebro y plasma, respectivamente.

Las concentraciones plasmáticas y cerebrales para el compuesto del Ejemplo 1 se proporcionan en la Tabla 3. Los resultados se expresan como media ± desviación estándar.

Tabla 3. Concentraciones plasmáticas y cerebrales del compuesto del Ejemplo 1 tras una dosis oral de 10 mg/kg en ratas macho Sprague-Dawley. Los resultados se expresan como media ± desviación estándar.

Las concentraciones cerebrales no ligadas del Ejemplo 1 a 1 y 3 horas después de la dosis oral de 10 mpk en ratas macho Sprague-Dawley se determinan como 41 ± 15 nM y 22 ±5 nM, respectivamente. Además, el Kp,uu,brain del Ejemplo 1 a 1 y 3 horas después de la dosis oral de 10 mpk en ratas Sprague-Dawley macho se determina como 0,89 ± 0,17 y 0,93 ± 0,43, respectivamente.

Tomados en su conjunto, estos datos indican que el compuesto del Ejemplo 1 es un compuesto de penetración central.

Claims (17)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula

o una sal farmacéuticamente aceptable o un hidrato del mismo.

2. El compuesto o la sal según la reivindicación 1 de fórmula

o su hidrato.

3. El compuesto o la sal según la reivindicación 1 o la reivindicación 2 de fórmula

o su hidrato.

4. El compuesto o la sal según la reivindicación 3 que es:

5. El compuesto según la reivindicación 4 que es:

6. El compuesto según la reivindicación 1, que es clorhidrato de (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetil]fenil]etil]-3 -metil-pirrolidina-2,5-diona, o hidrato del mismo.

7. El compuesto según la reivindicación 6, que es clorhidrato de (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetil]fenil]etilo] -3 -metil-pirrolidina-2,5-diona monohidrato.

8. El compuesto según la reivindicación 7, en el que el compuesto es cristalino.

9. El compuesto según la reivindicación 8 que se caracteriza por tener un pico en el espectro de difracción de rayos X en el ángulo de difracción 2-theta de 26,3° en combinación con uno o más picos seleccionados del grupo que consiste en 13,8°, 22,2°, 19,7°, 21,3°, 14,1° y 25,4°, con una tolerancia para los ángulos de difracción de 0,2 grados.

10. El compuesto según la reivindicación 1 que es bromohidrato de (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetil]fenil]etil] -3 -metil-pirrolidina-2,5-diona bromohidrato, o hidrato del mismo.

11. El compuesto según la reivindicación 10, que es bromohidrato de (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciclopropil-6-metil-4-piridil)oximetil]fenil]etil] -3 -metil-pirrolidina-2,5-diona bromohidrato monohidrato.

12. El compuesto según la reivindicación 11, en el que el compuesto es cristalino.

13. El compuesto según la reivindicación 12, que se caracteriza por tener un pico en el espectro de difracción de rayos X en el ángulo de difracción 2-theta de 26,1° en combinación con uno o más picos seleccionados del grupo que consiste en 13,9°, 22,1°, 8,7°, 19,5°, 18,8°, con una tolerancia para los ángulos de difracción de 0,2 grados.

14. El compuesto o sal, o hidrato del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1-13 para su uso en terapia.

15. El compuesto o sal, o hidrato del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1-13 para su uso en el tratamiento de la migraña.

16. Una composición farmacéutica, que comprende un compuesto o una sal, o un hidrato del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1-13 con uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.

17. Un procedimiento de preparación de una composición farmacéutica, que comprende mezclar un compuesto o una sal, o un hidrato del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1-13 con uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.