ES2865055T3 - Partícula y composición farmacéutica que comprenden un compuesto de camptotecina insoluble con estructura de núcleo-cubierta doble y método para fabricar las mismas - Google Patents

Abstract

Una partícula que comprende: i) un compuesto a base de camptotecina hidrófoba; ii) un compuesto a base de camptotecina hidrófila; y iii) un copolímero de bloque anfífilo compuesto por un bloque hidrófobo y un bloque hidrófilo.

Description

DESCRIPCIÓN

Partícula y composición farmacéutica que comprenden un compuesto de camptotecina insoluble con estructura de núcleo-cubierta doble y método para fabricar las mismas

Campo técnico

La presente invención se refiere a un sistema de entrega de fármaco que tiene una estructura de núcleo-cubierta doble, específicamente, a un sistema de entrega de nanofármaco doble que tiene un núcleo-cubierta interior que contiene un compuesto de camptotecina poco soluble y un compuesto de camptotecina hidrosoluble en el interior y una cubierta polimérica anfífila, y a un método de fabricación del mismo.

Antecedentes de la técnica

Para desarrollar un fármaco poco soluble que ha de usarse para inyección, se necesita esencialmente una etapa de solubilización y, para superar dicho problema, se han empleado emulsiones que contienen tensioactivos, microemulsiones, liposomas, micelas, pegilación o preparación de profármacos. La 7-etil 10-hidroxi camptotecina (SN-38), que es uno de los fármacos que tiene mayor actividad como fármaco antineoplásico a base de camptotecina, se suministra como irinotecán en forma de profármaco (nombre comercial: CAMTOSAR®, fabricado por Novartis), que es hidrolizado principalmente por la carboxilesterasa II (CESII) in vivo para convertirlo en SN-38 en forma activa. Sin embargo, la tasa de conversión es tan baja como del 2-8 % y la desviación de la misma también es muy grande y, por lo tanto, un fármaco de este tipo tiene dificultades para su administración adecuada a pacientes con cáncer que necesitan un ajuste preciso de la dosis, con el resultado de que los efectos y los efectos secundarios del mismo son difíciles de predecir.

Otro método para solubilizar un fármaco poco soluble es micelar un fármaco para que tenga un diámetro de partícula nanométrico. Para permitir que la inyección de nanomicelas garantice la esterilidad y la estabilidad, una solución acuosa de nanomicelas se esteriliza por filtración a través de un filtro de 0,22 pm y después se convierte en sólido en polvo a través de liofilización, durante el proceso de fabricación. En este proceso, cuando un producto liofilizado se disuelve de nuevo en un disolvente para inyección (solución salina o similar), puede generarse una gran cantidad de macropartículas (de 200 nm o más a varias decenas de pm) debido a la aglomeración de las propias micelas. En particular, las partículas superiores a 5 pm pueden provocar efectos secundarios graves cuando se inyectan en el cuerpo humano, por lo que se tratan estrictamente a través de ensayos de partículas insolubles de la Farmacopea de los EE.UU., la Farmacopea Europea y la Farmacopea Coreana. Por lo tanto, en un método de solubilización por el que los tamaños de partícula cambian poco antes y después de la liofilización a pesar de la micelización, las partículas muestran una monodistribución y, especialmente, no hay partículas de varios pm o más.

No obstante, es esencial disolver un principio activo en un disolvente adecuado para preparar una inyección, pero la camptotecina o SN-38, que es un compuesto a base de camptotecina hidrófoba, no se disuelve favorablemente ni en agua ni en la mayoría de los disolventes orgánicos polares volátiles (metanol, etanol, acetonitrilo, acetato de etilo, etc.) utilizados en procedimientos de preparación farmacéutica. Los disolventes capaces de disolver dichos compuestos a base de camptotecina hidrófoba en los mismos se limitan a disolventes no volátiles, tales como dimetilsulfóxido (DMSO), dimetilformamida, tolueno y dioxano. Sin embargo, se necesita un procedimiento de diálisis para retirar estos disolventes, y estos disolventes son difíciles de retirar totalmente a pesar de la diálisis, provocando problemas tóxicos cuando permanecen.

Por lo tanto, los presentes inventores buscaron y se esforzaron por desarrollar composiciones de partículas estables por las que: pueden administrarse camptotecina y SN-38, que son principios activos antineoplásicos muy poco solubles, directamente en forma activa pero no en forma de profármaco; no hay problemas de disolventes residuales durante el proceso de preparación; existen pocos cambios en el tamaño de partícula antes y después de la liofilización; y no se generan partículas macroaglomeradas de varios pm o más.

El documento CN102961332A se refiere a una preparación micelar líquida para aumentar la tasa activa de bucle cerrado de derivados de camptotecina, además de métodos de preparación y aplicaciones de la preparación. El documento WO2006/049447A1 se refiere a una formulación farmacéutica para aumentar la solubilidad de compuestos de 10-hidroxicamptotecina en disolventes polares no acuosos.

Sumario de la invención

La invención proporciona una partícula que incluye: i) un compuesto a base de camptotecina hidrófoba; ii) un compuesto a base de camptotecina hidrófila; y iii) un copolímero de bloque anfífilo compuesto por un bloque hidrófobo y un bloque hidrófilo.

La invención también proporciona una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento del cáncer, que comprende la partícula de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La invención proporciona adicionalmente un método para fabricar una partícula, comprendiendo el método:

(a) formar un núcleo-cubierta interior que contiene un compuesto a base de camptotecina hidrófoba y un compuesto a base de camptotecina hidrófila; y (b) formar un núcleo-cubierta exterior que contiene un copolímero anfífilo.

Otros propósitos y ventajas de la presente divulgación serán más evidentes con la siguiente descripción detallada, las reivindicaciones y los dibujos.

En el presente documento también se describe:

1. Una partícula que comprende:

i) un compuesto a base de camptotecina hidrófoba;

ii) un compuesto a base de camptotecina hidrófila; y

iii) un copolímero de bloque anfífilo compuesto por un bloque hidrófobo y un bloque hidrófilo.

2. La partícula de la cláusula 1, en donde el compuesto a base de camptotecina hidrófoba es al menos uno seleccionado del grupo que consiste en 7-etil-10-hidroxicamptotecina (SN-38), camptotecina, 10-hidroxicamptotecina y una sal farmacéutica aceptable de los mismos.

3. La partícula de la cláusula 1, en donde el compuesto a base de camptotecina hidrófila es al menos uno seleccionado de irinotecán, topotecán, belotecán, exatecan, lurtotecán, sinotecán, rubitecán, 9-nitrocamptotecina, 9-aminocamptotequina, gimatecán, BNP-1530, DB-67, BN-80915, BN-80927, una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, un metabolito de glucurónido de los mismos y un metabolito de glucurónido del compuesto a base de camptotecina hidrófoba.

4. La partícula de la cláusula 1, en donde el copolímero de bloque anfífilo se compone de bloques A-B o A-B-A,

(a) en donde A es un polímero hidrófilo, que es monometoxi polietilenglicol, dimetoxi polietilenglicol, polietilenglicol, polipropilenglicol, monometoxi polipropilenglicol, óxido de polietileno, ácido poliacrílico o un polímero de los mismos; y

(b) en donde B es un polímero hidrófobo, que es ácido poliláctico, polilactida, ácido poliglicólico, poliglicolida, un copolímero de ácido poliláctico-co-ácido glicólico, ácido polimandélico, policaprolactona,

polidioxan-2-ona, ácido poliglutámico, ácido poliaspártico, poliornitina, poliortoésteres, un derivado de los mismos, o un copolímero de dos o más compuestos seleccionados de los mismos.

5. La partícula de la cláusula 4, en donde el peso molecular promedio en número del polímero hidrófilo A es de 500-10.000 Da.

6. La partícula de la cláusula 4, en donde el peso molecular promedio en número del polímero hidrófobo B es de 500-10.000 Da.

7. La partícula de la cláusula 1, en donde la relación en peso del compuesto a base de camptotecina hidrófoba y el compuesto a base de camptotecina hidrófila es de 1:10 a 10:1.

8. La partícula de la cláusula 1, en donde la relación en peso de la suma del compuesto a base de camptotecina hidrófoba y el compuesto a base de camptotecina hidrófila y el copolímero de bloque anfífilo es de 1:200 a 10:1.

9. La partícula de la cláusula 1, en donde el tamaño de partícula promedio en número de la partícula es de 10­ 500 nm.

10. La partícula de la cláusula 1, en donde la partícula tiene una estructura de núcleo-cubierta doble:

(a) un núcleo-cubierta interior que contiene el compuesto a base de camptotecina hidrófila y el compuesto a base de camptotecina hidrófoba; y

(b) un núcleo-cubierta exterior que contiene el copolímero de bloque anfífilo.

11. La partícula de la cláusula 1, en donde la partícula tiene una estructura de micela bicapa.

12. Una composición farmacéutica para tratar el cáncer, que comprende la partícula de una cualquiera de las cláusulas 1 a 11 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

13. La composición de la cláusula 12, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer gástrico, cáncer de ovario, cáncer de útero, cáncer de pulmón microcítico, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de páncreas, cáncer de mama, cáncer de esófago, cáncer oral, cáncer rectal, cáncer de colon, cáncer de intestino grueso, cáncer de riñón, cáncer de próstata, melanoma, cáncer de hígado, cáncer de vesícula biliar y otras vías biliares, cáncer de tiroides, cáncer de vejiga, cáncer de cerebro y del sistema nervioso central, cáncer de hueso, cáncer de piel, linfoma no Hodgkin y de Hodgkin, y cáncer hemático.

14. La composición de la cláusula 12, en donde la composición comprende además diferentes tipos de fármacos antineoplásicos.

15. La composición de la cláusula 12, que comprende además sacarosa, manitol, sorbitol, glicerina, trehalosa y un excipiente de polietilenglicol, y un excipiente de ciclodextrina.

16. Un método para tratar el cáncer, comprendiendo el método administrar la composición farmacéutica de una cualquiera de las cláusulas 1 a 15 a un sujeto.

17. El método de la cláusula 16, en donde el sujeto es un ser humano, ratón, rata, cobaya, perro, gato, caballo, vaca, cerdo, mono, chimpancé, babuino o macaco.

18. Un método para fabricar una partícula, comprendiendo el método:

(a) formar un núcleo-cubierta interior que contiene un compuesto a base de camptotecina hidrófoba y un compuesto a base de camptotecina hidrófila; y

(b) formar un núcleo-cubierta exterior que contiene un copolímero anfífilo.

19. El método de la cláusula 18, en donde la etapa (a) comprende mezclar el compuesto a base de camptotecina hidrófoba y un compuesto a base de camptotecina hidrófila en un disolvente orgánico; y

en donde la etapa (b) comprende mezclar el núcleo-cubierta interior y el copolímero de bloque anfífilo en un disolvente acuoso.

20. El método de la cláusula 18, en donde la etapa (a) comprende mezclar una solución acuosa básica, en la que se disuelve un compuesto de camptotecina hidrófoba, y una solución acuosa, en la que se disuelve un compuesto de camptotecina hidrófila; y

en donde la etapa (b) comprende mezclar el núcleo-cubierta interior y el copolímero de bloque anfífilo en un disolvente acuoso.

21. El método de la cláusula 20, en donde la solución acuosa en la que se disuelve el compuesto de camptotecina hidrófila es una solución acuosa básica, neutra o ácida.

22. El método de la cláusula 20, en donde la etapa (a) comprende:

(a1) mezclar una solución acuosa básica, en la que se disuelve un compuesto a base de camptotecina hidrófoba, y una solución acuosa básica, neutra o ácida, en la que se disuelve un compuesto a base de camptotecina hidrófila; y

(a2) reducir el pH de la solución acuosa mixta a 7 o menos.

23. El método de la cláusula 18, en donde la etapa (a) comprende mezclar el compuesto a base de camptotecina hidrófoba y el compuesto a base de camptotecina hidrófila en un disolvente orgánico; y

en donde la etapa (b) comprende mezclar una mezcla del compuesto a base de camptotecina hidrófoba y el compuesto a base de camptotecina hidrófila con el copolímero de bloque anfífilo en un disolvente orgánico. 24. El método de una cualquiera de las cláusulas 18 a 23, en donde el compuesto a base de camptotecina hidrófoba es al menos uno seleccionado del grupo que consiste en 7-etil-10-hidroxicamptotecina (SN-38), camptotecina, 10-hidroxicamptotecina y una sal farmacéutica aceptable de los mismos.

25. El método de una cualquiera de las cláusulas 18 a 24, en donde el compuesto a base de camptotecina hidrófila es al menos uno seleccionado de irinotecán, topotecán, belotecán, exatecan, lurtotecán, sinotecán, rubitecán, 9-nitrocamptotecina, 9-aminocamptotequina, gimatecán, BNP-1530, DB-67, BN-80915, BN-80927, una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, un metabolito de glucurónido de los mismos y un metabolito de glucurónido del compuesto a base de camptotecina hidrófoba.

26. El método de una cualquiera de las cláusulas 18 a 24, en donde el copolímero de bloque anfífilo se compone de bloques A-B o A-B-A,

(a) en donde A es un polímero hidrófilo, que es monometoxi polietilenglicol, dimetoxi polietilenglicol, polietilenglicol, polipropilenglicol, monometoxi polipropilenglicol, óxido de polietileno, ácido poliacrílico o un polímero de los mismos; y

(b) en donde B es un polímero hidrófobo, que es ácido poliláctico, polilactida, ácido poliglicólico, poliglicolida, un copolímero de ácido poliláctico-co-ácido glicólico, ácido polimandélico, policaprolactona, polidioxan-2-ona, ácido poliglutámico, ácido poliaspártico, poliornitina, poliortoésteres, un derivado de los mismos, o un copolímero de dos o más compuestos seleccionados de los mismos.

27. El método de la cláusula 26, en donde el peso molecular del polímero hidrófilo A es de 500-10.000 Da.

28. El método de la cláusula 26, en donde el peso molecular del polímero hidrófobo B es de 500-10.000 Da. 29. El método de una cualquiera de las cláusulas 18 a 24, en donde la relación en peso del compuesto a base de camptotecina hidrófoba y el compuesto a base de camptotecina hidrófila es de 1:10 a 10:1.

30. El método de una cualquiera de las cláusulas 18 a 24, en donde la relación en peso de la suma del compuesto a base de camptotecina hidrófoba y el compuesto a base de camptotecina hidrófila y el copolímero de bloque anfífilo es de 1:200 a 10:1.

31. El método de una cualquiera de las cláusulas 18 a 24, en donde el disolvente orgánico es un alcohol C1-C5 (metanol, etanol, propanol, butanol, n-butanol, iso-propanol, 1-pentanol, 2-butoxietanol, alcohol isobutílico, etc.), un acetato de alquilo, acetona, acetonitrilo, cloroformo, benceno, tolueno, xileno, acetona, fluoroalcano, pentano, hexano, 2,2,4-trimetilpentano, decano, ciclohexano, ciclopentano, diisobutileno, 1-penteno, 1-clorobutano, 1-cloropentano, diisopropil éter, 2-cloropropano, 1-cloropropano, clorobenceno, benceno, dietil éter, sulfuro de dietilo, diclorometano, 1,2-dicloroetano, anilina, dietilamina, un éter, tetracloruro de carbono, tetrahidrofurano (THF) o un disolvente mixto de los mismos.

32. El método de la cláusula 21 o 22, en donde la solución acuosa ácida incluye al menos uno seleccionado de ácidos inorgánicos farmacéuticamente aceptables, incluyendo el ácido clorhídrico, ácido nítrico, ácido sulfúrico y ácido fosfórico, o ácidos orgánicos incluyendo el ácido cítrico, ácido málico, ácido láctico, ácido acético y ácido tartárico.

33. El método de la cláusula 21 o 22, en donde el pH de la solución acuosa ácida es de 1,0 a 6.

34. El método de la cláusula 20, en donde la solución básica incluye al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un álcali inorgánico, una sal alcalina de un ácido orgánico y una alquil amina, incluyendo el álcali inorgánico hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, dihidrogenofosfato de sodio, dihidrogenofosfato de potasio, hidróxido de magnesio, carbonato de sodio e hidrogenocarbonato de sodio.

35. El método de la cláusula 20, en donde el pH de la solución acuosa básica es de 8 a 13.

Los presentes inventores se esforzaron por mejorar la solubilidad y la estabilidad de un compuesto a base de camptotecina hidrófoba, cuya aplicación está restringida debido a la escasa solubilidad del mismo, a pesar de la fuerte actividad antineoplásica del mismo y, como resultado, los presentes inventores confirmaron que la mezcla de un compuesto a base de camptotecina hidrófoba y un compuesto a base de camptotecina hidrófila en un disolvente acuoso o disolvente orgánico conduce a una partícula de núcleo-cubierta (micela) que tiene estructuras de núcleo y cubierta formadas por compuestos de base hidrófoba e hidrófila, respectivamente. Además, se confirmó que la adición de un copolímero de bloque anfífilo a la partícula de núcleo-cubierta forma una partícula de núcleo-cubierta doble (micela bicapa) en la que la partícula está encerrada en el copolímero de bloque anfífilo.

La partícula de núcleo-cubierta doble que contiene tanto un compuesto a base de camptotecina hidrófoba como un compuesto a base de camptotecina hidrófila que se describe en el presente documento tiene una solubilidad notablemente mejorada en comparación con la camptotecina poco soluble existente, incluso sin la administración en forma de profármaco. Por lo tanto, la eficacia farmacológica de la camptotecina activa (SN-38) puede ejercerse independientemente de la actividad de la carboxilesterasa II (CESII) in vivo. Además, se confirmó que las partículas que se describen en el presente documento no provocaban ninguna aglomeración o precipitación de partículas, aunque las partículas se disolvieran de nuevo en un disolvente acuoso después de la liofilización y, por lo tanto, las partículas tenían una forma farmacéutica con una estabilidad excelente. Por lo tanto, en el presente documento se describe una composición de partículas con una estructura de núcleo-cubierta doble estable, que es un avance con respecto a una nanomicela monocapa existente para resolver un problema de solubilidad baja de un fármaco poco soluble.

De acuerdo con un aspecto de la presente invención, se proporciona una partícula que comprende: i) un compuesto a base de camptotecina hidrófoba; ii) un compuesto a base de camptotecina hidrófila; y iii) un copolímero de bloque anfífilo compuesto por un bloque hidrófobo y un bloque hidrófilo.

En el presente documento, la camptotecina es un inhibidor de topoisomerasas que se encuentra en la corteza y el tallo del árbol Camptotheca (árbol de la felicidad) y que presenta un excelente efecto antineoplásico en el estadio preclínico, pero que no puede usarse debido a la solubilidad baja del mismo. Por lo tanto, los investigadores han desarrollado análogos de camptotecina para mejorar la solubilidad de la camptotecina. En la actualidad, se han aprobado tres tipos de derivados de camptotecina, irinotecán, topotecán y belotecán, y se usan en la quimioterapia contra el cáncer.

Como se usa en el presente documento, el término "hidrofobia" se refiere a la exclusión de las moléculas de agua y a la aglomeración, como tendencia que se muestra en materiales no polares. Cuando hay presente un material hidrófobo en un líquido hidrófilo, el material hidrófobo se aglomera mientras aumentan los enlaces hidrófobos como si el material hidrófobo tuviera miedo al agua.

Como se usa en el presente documento, el término "hidrofilia" se refiere a la propiedad de disolución en agua con una afinidad fuerte por el agua, como tendencia que se muestra en materiales polares. Por ejemplo, un compuesto polimérico hidrófilo o una superficie coloidal micelar de un tensioactivo tiene una hidrofilia fuerte.

El compuesto a base de camptotecina hidrófoba puede seleccionarse del grupo que consiste en 7-etil-10-hidroxicamptotecina (SN-38), camptotecina, 10-hidroxicamptotecina y una sal farmacéutica aceptable de los mismos, pero sin limitarse a los mismos.

El compuesto a base de camptotecina hidrófila puede seleccionarse de irinotecán, topotecán, belotecán, exatecan, lurtotecán, sinotecán, rubitecán, 9-nitrocamptotecina, 9-aminocamptotequina, gimatecán, BNP-1530, DB-67, BN-80915, BN-80927, una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, un metabolito de glucurónido de los mismos y un metabolito de glucurónido del compuesto a base de camptotecina hidrófoba, pero sin limitarse a los mismos.

El compuesto a base de camptotecina hidrófoba que se describe en el presente documento puede ser camptotecina, SN-38 o una mezcla de los mismos, y el compuesto a base de camptotecina hidrófila que se describe en el presente documento puede ser clorhidrato de irinotecán, clorhidrato de topotecán y un análogo de glucurónido de SN-38.

Como se usa en el presente documento, el término "copolímero" se refiere a un polímero preparado a partir de dos o más tipos diferentes de monómeros. Por ejemplo, la reacción de acrilonitrilo de estireno en un recipiente de reacción da como resultado un copolímero que tiene los dos monómeros. La expresión "copolímero de bloque" se refiere a un copolímero que tiene una forma en la que un bloque de un tipo de monómeros está unido a un bloque de otro tipo de monómeros. Un caso en el que un bloque de material A va seguido de un bloque de material B se expresa por -[-AB-]-. Una cadena se denomina de tipo AB si la cadena se compone de una sola hebra de cada monómero, de tipo ABA si los bloques A están presentes en ambos extremos del bloque B en el centro, y de tipo ABC si hay presentes tres tipos diferentes de bloques en una cadena principal. Un copolímero de bloque se forma principalmente por polimerización iónica. A diferencia de otros copolímeros, este copolímero de bloque tiene muchas propiedades físicas de un homopolímero formado a partir de dos tipos de monómeros.

El copolímero de bloque anfífilo que se describe en el presente documento puede componerse de bloque A-B o bloque A-B-A. En este caso, A es un polímero hidrófilo, que es monometoxi polietilenglicol, dimetoxi polietilenglicol, polietilenglicol, polipropilenglicol, monometoxi polipropilenglicol, óxido de polietileno, ácido poliacrílico o un polímero de los mismos, pero sin limitarse a los mismos. Además, B es un polímero hidrófobo, que es ácido poliláctico, polilactida, ácido poliglicólico, poliglicolida, un copolímero de ácido poliláctico-co-ácido glicólico, ácido polimandélico, policaprolactona, polidioxan-2-ona, ácido poliglutámico, ácido poliaspártico, poliornitina, poliortoésteres, un derivado de los mismos, o un copolímero de dos o más compuestos seleccionados de los mismos, pero sin limitarse a los mismos. Sería obvio para un experto en la materia que puede usarse sin limitación cualquier compuesto que pueda constituir un copolímero de bloque anfífilo utilizable en la técnica.

El copolímero de bloque anfífilo puede ser PEG-PCL [poli(etilenglicol)-b-poli(caprolactona)]; PEG-PLA [poli(etilenglicol)-b-poli(ácido láctico)]; mPEG-PGA [monometoxi poli(etilenglicol)-b-poli(ácido glicólico)]; mPEG-PLGA [monometoxi poli(etilenglicol)-b-poli(lactida-co-glicolida)]; PEG-PBLA [poli(etilenglicol)-b-poli(ácido p-bencil-L-aspártico)]; PEG-p(Glu) [poli(etilenglicol)-b-poli(ácido glutámico)]; PEG-p(Asp) [poli(etilenglicol)-b-poli(ácido aspártico)]; y/o PEG-PLA-PEG [poli(etilenglicol)-b-poli(ácido láctico)-b-poli(etilenglicol).

El polímero hidrófilo A y el polímero hidrófobo B pueden tener, cada uno, un peso molecular promedio en número de 500-10.000 Da y, más específicamente, de 1.000-7.000 Da. Cuando los pesos moleculares promedio en número del polímero hidrófilo A y el polímero hidrófobo B son inferiores a 500 Da o superiores a 10.000 Da, las partículas producidas tienen un tamaño promedio de 200 nm o más y presentan una distribución multimodal y, por lo tanto, es difícil que sean un fármaco de nanopartículas prescrito por la FDA de los EE.UU.

La relación en peso del compuesto a base de camptotecina hidrófoba y el compuesto a base de camptotecina hidrófila que se describen en el presente documento puede ser de 1-10:1-10, 1-10:1-5, 1-10:1-3, 1-10:1, 1-5:1-10, 1-3:1-10 o 1:1-10, específicamente de 1-5:1-5, 1-5:1-3, 1-5:1, 1-3:1-5 o 1:1-5 y, más específicamente, de 1-3:1-3, 1-3:1 o 1:1-3, pero sin limitarse a los mismos.

La relación en peso de (a) la suma del compuesto a base de camptotecina hidrófoba y el compuesto a base de camptotecina hidrófila y (b) el copolímero de bloque anfífilo puede ser de 1:0,1-200, 1:0,5-200 1:1-200, 1:2-200, 1:5-200, 1:10-200, 1:50-200, 1:100-200, 1:150-200, 1:0,1-100, 1:0,5-100, 1:1-100, 1:2-100, 1:5-100, 1:10-100, 1:20-100, 1:50-100, 1:0,1-50, 1:0,5-50, 1:1-50, 1:5-50, 1:10-50, 1:20-50, 1:0,1-20, 1:0,5-20, 1:1-20, 1:5-20, 1:10-20, 1:0,1-10, 1:0,5-10 o 1:1-10.

Como se usa en el presente documento, el término "a" o entre dos valores numéricos significa una sección entre los valores numéricos incluyendo los valores numéricos descritos antes y después del término.

No obstante, la partícula de la presente invención tiene una estructura de núcleo-cubierta doble que comprende lo siguiente:

(a) un núcleo-cubierta interior que contiene el compuesto a base de camptotecina hidrófila y el compuesto a base de camptotecina hidrófoba; y (b) un núcleo-cubierta exterior que contiene el copolímero de bloque anfífilo.

Además, la partícula de la presente invención tiene una estructura de micela bicapa.

Se sabe que el copolímero de bloque anfífilo en el que se combinan un bloque hidrófilo y un bloque hidrófobo en una relación particular forma una micela a través de autoensamblaje en una solución acuosa. El interior de la micela es hidrófobo y, por lo tanto, el copolímero de bloque anfífilo se aplica como sistema de entrega de fármaco para un preparado poco soluble. Se sabe bien que un copolímero de bloque doble de poliestireno-óxido de polietileno (PS-b-PEO) forma una micela esférica que tiene un núcleo insoluble (PS) y una cubierta soluble (PEO) en agua.

Como se ha descrito anteriormente, la partícula de la presente invención incluye (a) un compuesto a base de camptotecina hidrófila y un compuesto a base de camptotecina hidrófoba; y (b) un copolímero de bloque anfífilo.

Como se demuestra en un ejemplo que se describe en el presente documento, la mezcla del compuesto a base de camptotecina hidrófila y el compuesto a base de camptotecina hidrófoba aumenta significativamente la solubilidad en disolventes acuosos y forma partículas. En este caso, es probable que el compuesto a base de camptotecina hidrófila sirva como bloque hidrófilo del copolímero anfífilo, y el compuesto a base de camptotecina hidrófoba sirva como bloque hidrófobo del copolímero anfífilo, constituyendo una estructura de núcleo-cubierta (micela).

Por lo tanto, la partícula que se describe en el presente documento forma una micela doble (núcleo-cubierta doble) que contiene: una micela monocapa en el interior; y un copolímero de bloque anfífilo que contiene la micela monocapa en el interior, en donde en la micela monocapa, un compuesto a base de camptotecina hidrófila y un compuesto a base de camptotecina hidrófoba constituyen una estructura de núcleo-cubierta. Más específicamente, el bloque hidrófobo del copolímero de bloque anfífilo constituye un núcleo insoluble hacia la micela monocapa, que es relativamente hidrófobo y se compone de compuestos a base de camptotecina, y el bloque hidrófilo constituye una cubierta soluble hacia un disolvente acuoso externo y, como resultado, se forma una micela doble con estructura de núcleo-cubierta doble.

Las partículas con estructura de núcleo-cubierta doble pueden formar espontáneamente partículas cuando se dispersan en una solución acuosa.

El tamaño de partícula promedio en número de las partículas puede ser de 10-500 nm, 10-400 nm, 10-300 nm o 10­ 200 nm y, más específicamente, de 20-500 nm, 20-400 nm, 20-300 nm o 20-200 nm. El tamaño de partícula promedio en número de las partículas que se describen en el presente documento muestra un cambio limitado incluso antes o después de liofilizar las partículas. La razón parece ser que los compuestos a base de camptotecina hidrófoba e hidrófila constituyen principalmente una micela con estructura de núcleo-cubierta interior y el copolímero de bloque anfífilo constituye secundariamente una cubierta exterior que rodea la micela, de manera que durante la liofilización, la cubierta exterior secundaria sirve como crioprotector que evita la cristalización rápida, la aglomeración y el colapso de partículas del núcleo-cubierta interior primario. Como resultado, las partículas que se describen en el presente documento no provocan aglomeración o precipitación incluso cuando las partículas se disuelven de nuevo en el disolvente acuoso después de la liofilización. La composición estable de partículas con estructura de núcleo-cubierta doble que se describe en el presente documento es un avance con respecto a una nanomicela monocapa existente para resolver un problema de solubilidad de un fármaco muy poco soluble.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento del cáncer, comprendiendo la composición farmacéutica la partícula de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

El cáncer puede seleccionarse del grupo que consiste en cáncer gástrico, cáncer de ovario, cáncer de útero, cáncer de pulmón microcítico, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de páncreas, cáncer de mama, cáncer de esófago, cáncer oral, cáncer rectal, cáncer de colon, cáncer de intestino grueso, cáncer de riñón, cáncer de próstata, melanoma, cáncer de hígado, cáncer de vesícula biliar y de otras vías biliares, cáncer de tiroides, cáncer de vejiga, cáncer de cerebro y del sistema nervioso central, cáncer de hueso, cáncer de piel, linfoma no Hodgkin y linfoma de Hodgkin.

Cuando las partículas que se describen en el presente documento o la composición que contiene las mismas se preparan en una composición farmacéutica, la composición farmacéutica que se describe en el presente documento puede contener un vehículo farmacéuticamente aceptable. El vehículo farmacéuticamente aceptable se usa habitualmente en el momento de la formulación, y los ejemplos del mismo pueden incluir, pero sin limitación, lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidón, goma arábiga, fosfato de calcio, alginato, gelatina, silicato cálcico, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, celulosa, agua, jarabe, metilcelulosa, hidroxibenzoato de metilo, hidroxibenzoato de propilo, talco, estearato de magnesio y aceite mineral. La composición farmacéutica que se describe en el presente documento puede contener además un lubricante, un agente humectante, un agente edulcorante, un agente saporífero, un emulsionante, un agente de suspensión, un conservante y similares, además de los ingredientes anteriores. Se describen en detalle vehículos y agentes farmacéuticamente aceptables adecuados en Remington's Pharmaceutical Sciences (19a ed., 1995).

La composición farmacéutica que se describe en el presente documento puede contener además sacarosa, manitol, sorbitol, glicerina, trehalosa, un excipiente a base de polietilenglicol y un excipiente a base de ciclodextrina (alfaciclodextrina, beta-ciclodextrina y gamma-ciclodextrina, hidroxiciclodextrina o un derivado de ciclodextrina). El excipiente se añade a las partículas, que corresponden a un principio activo de la presente composición farmacéutica, sirve como crioprotector u osmorregulador, y se formula por liofilización, evaporación de disolvente o similares.

La composición farmacéutica que se describe en el presente documento puede administrarse por vía oral o por vía parenteral, y los ejemplos de administración parenteral pueden incluir la administración intravenosa, administración subcutánea, administración intradérmica, administración intramuscular, administración intranasal, administración mucosa, administración intradural, administración intraperitoneal, administración intraocular y similares, y, específicamente, la composición farmacéutica que se describe en el presente documento puede administrarse por vía intravenosa.

La dosis adecuada de la composición farmacéutica que se describe en el presente documento varía dependiendo de factores, tales como un método de formulación, una manera de administración, la edad del paciente, el peso corporal, el sexo, la morbilidad y la alimentación, un tiempo de administración, una vía de administración, una tasa de excreción y la sensibilidad de respuesta. Los profesionales de experiencia habitual pueden determinar y prescribir fácilmente la dosis que es eficaz para el tratamiento o la prevención deseados. La dosis diaria de la composición farmacéutica que se describe en el presente documento puede ser de 0,001-100 mg/kg.

La composición farmacéutica que se describe en el presente documento puede formularse en una forma farmacéutica unitaria o puede prepararse en un recipiente multidosis usando un vehículo y/o un excipiente farmacéuticamente aceptables de acuerdo con un método que puede realizarse fácilmente por una persona que tenga una habilidad habitual en la técnica a la que pertenece la presente invención. En este caso, la forma farmacéutica puede ser una solución en un medio oleoso o acuoso, una suspensión, una emulsión, un extracto, un polvo, gránulos, un comprimido o una cápsula, y puede contener adicionalmente un dispersante o un estabilizante.

La composición farmacéutica que se describe en el presente documento puede administrarse en paralelo con un compuesto o una composición farmacéutica conocidos que tengan un efecto de tratamiento del cáncer.

La composición que se describe en el presente documento puede contener además otro tipo de fármaco antineoplásico. Específicamente, la composición que se describe en el presente documento contiene además un fármaco antineoplásico poco soluble, tal como paclitaxel o docetaxel.

Los fármacos antineoplásicos poco solubles representados por el paclitaxel y el docetaxel tienen una utilización baja debido a su escasa solubilidad, como la camptotecina mencionada anteriormente, pero los fármacos antineoplásico poco solubles tienen una solubilidad notablemente mejorada cuando están contenidos en las partículas de micela doble que se describen en el presente documento. Por lo tanto, la partícula en sí que se describe en el presente documento es un fármaco antineoplásico a base de camptotecina, y puede usarse favorablemente como plataforma de sistema de entrega de fármaco, que puede cargar fármacos antineoplásicos poco solubles o fármacos candidatos novedosos con problemas de solubilidad baja para mejorar la solubilidad de los mismos.

En el presente documento también se describe un método para el tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar la composición farmacéutica anterior a un sujeto.

Como se usa en el presente documento, el término "administración" o "administrar" se refiere a la aplicación directa de una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición a un sujeto (es decir, un objeto) con cáncer, formando de este modo la misma cantidad de la misma en el cuerpo del sujeto.

La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" de la composición se refiere al contenido de la composición, que es suficiente para proporcionar un efecto terapéutico o preventivo a un sujeto al que se ha de administrar y, por lo tanto, la expresión tiene un significado que incluye "cantidad profilácticamente eficaz". Como se usa en el presente documento, el término "sujeto" incluye, pero sin limitación, ser humano, ratón, rata, cobaya, perro, gato, caballo, vaca, cerdo, mono, chimpancé, babuino o macaco. Específicamente, el sujeto puede ser un ser humano.

Puesto que el método para el tratamiento del cáncer que se describe en el presente documento incluye una etapa de administración de la composición farmacéutica para el tratamiento del cáncer de acuerdo con un aspecto que se describe en el presente documento, las descripciones que se solapan se omiten para evitar una complicación excesiva de la memoria descriptiva.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método para fabricar una partícula, comprendiendo el método:

(a) formar un núcleo-cubierta interior que contiene un compuesto a base de camptotecina hidrófoba y un compuesto a base de camptotecina hidrófila; y

(b) formar un núcleo-cubierta exterior que contiene un copolímero anfífilo.

La etapa (a) puede comprender mezclar el compuesto a base de camptotecina hidrófoba y un compuesto a base de camptotecina hidrófila en un disolvente orgánico; y la etapa (b) comprende mezclar el núcleo-cubierta interior y el copolímero de bloque anfífilo en un disolvente acuoso.

Puesto que el compuesto a base de camptotecina hidrófoba es muy hidrófobo, se necesita una técnica de solubilización o un método de preparación particulares. En un ejemplo, para superar dicha solubilidad escasa, un compuesto a base de camptotecina hidrófoba y un compuesto a base de camptotecina hidrófila, principalmente, se disolvieron simultáneamente en un disolvente orgánico, y después se retiró totalmente el disolvente orgánico utilizando un evaporador rotativo de vacío, obteniendo de este modo una mezcla en forma de película de compuestos a base de camptotecina. En este caso, se añadió una pequeña cantidad de disolvente acuoso (por ejemplo, agua destilada) a la misma con una mezcla intensiva usando un mezclador de vórtice o con tratamiento por ultrasonidos, obteniendo de este modo un complejo de núcleo-cubierta primario de tamaño nanométrico.

Después, se añadió un polímero anfífilo disuelto anteriormente en un disolvente acuoso (por ejemplo, agua destilada) al complejo de núcleo-cubierta primario, seguido de mezcla homogénea y fuerte usando un mezclador de vórtice o tratamiento por ultrasonidos, obteniendo de este modo partículas de núcleo-cubierta doble de tamaño nanométrico. Por último, se añadió un crioprotector y un agente isotonizante a las mismas para que se disolvieran totalmente en las mismas, y después la solución resultante se filtró a través de un filtro estéril de 0,22 pm, seguido de liofilización. Cuando se añade a una inyección de cloruro de sodio al 0,9 %, una inyección de glucosa al 5 % o agua de inyección, el material liofilizado final se autoensambla para formar partículas de núcleo-cubierta doble con un tamaño de partícula promedio en número de 20-200 nm.

En el caso de que las partículas fabricadas como se describe en el presente documento tengan un tamaño de partícula de 200 nm o menos, puede evitarse la retirada no selectiva de un sistema reticuloendotelial (SRE) en el cuerpo y, por lo tanto, preferible fabricar partículas que tengan un tamaño de partícula uniforme de 200 nm o menos.

La etapa (a) puede comprender mezclar una solución acuosa básica, en la que se disuelve un compuesto de camptotecina hidrófoba, y una solución acuosa, en la que se disuelve un compuesto de camptotecina hidrófila; y la etapa (b) comprende mezclar el núcleo-cubierta interior y el copolímero de bloque anfífilo en un disolvente acuoso.

En este caso, la solución acuosa en la que se disuelve el compuesto de camptotecina hidrófila puede ser una solución acuosa básica, neutra o ácida.

El núcleo-cubierta interior primario puede fabricarse mediante el siguiente método además del método de fabricación en un disolvente orgánico. El compuesto a base de camptotecina hidrófoba (por ejemplo, camptotecina, SN-38) tiene una solubilidad muy baja en una solución acuosa ácida o neutra de pH 7 o menos, pero la solubilidad del compuesto a base de camptotecina hidrófoba aumenta rápidamente en una solución acuosa básica, puesto que se abre un anillo de lactona para que tenga una forma de ácido carboxílico. Por lo tanto, el compuesto a base de camptotecina hidrófoba se disuelve en la solución acuosa básica y, después, se añade a la misma una solución acuosa en la que se disuelve un compuesto a base de camptotecina hidrófila para reducir el pH a 7 o menos, de manera que el compuesto a base de camptotecina hidrófoba y el compuesto a base de camptotecina hidrófila forman una micela, y la acidez se neutraliza y el anillo de lactona se cierra, restaurando de este modo la estructura química original del mismo.

La etapa (a) puede comprender: (a1) mezclar una solución acuosa básica, en la que se disuelve un compuesto a base de camptotecina hidrófoba, y una solución acuosa básica, neutra o ácida, en la que se disuelve un compuesto a base de camptotecina hidrófila; y (a2) reducir el pH de la solución acuosa mixta a 7 o menos.

En un ejemplo que se describe en el presente documento, se disolvió camptotecina o SN-38 en una solución acuosa básica, y se añadió un compuesto a base de camptotecina hidrófila disuelto anteriormente en una solución acuosa a la solución acuosa básica con una mezcla fuerte usando tratamiento por ultrasonidos o un mezclador de vórtice, y se añadió además una solución acuosa ácida para ajustar el pH a 7 o menos, obteniendo de este modo partículas de núcleo-cubierta primarias. Se añadió un polímero anfífilo disuelto anteriormente en un disolvente acuoso (por ejemplo, agua destilada) a una mezcla de las partículas de núcleo-cubierta primarias producidas a través de mezcla con formación de vórtice o tratamiento por ultrasonidos, fabricando de este modo una mezcla de núcleo-cubierta doble. Además, se añadió a la misma un crioprotector y un agente isotonizante para que se disolviera en la misma, seguido de esterilización por filtración usando un filtro de 0,22 pm y seguido de liofilización.

En el método de fabricación que se describe en el presente documento, la solución acuosa ácida contiene un ácido inorgánico farmacéuticamente aceptable, tal como ácido clorhídrico, ácido nítrico, ácido sulfúrico o ácido fosfórico, y al menos un ácido orgánico seleccionado del grupo que consiste en ácido cítrico, ácido málico, ácido láctico, ácido acético y ácido tartárico. El pH de la solución acuosa ácida es de 1-6. En el método de fabricación que se describe en el presente documento, la solución acuosa básica contiene: un álcali inorgánico, incluyendo hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, dihidrogenofosfato de sodio, dihidrogenofosfato de potasio, hidróxido de magnesio, carbonato de sodio e hidrogenocarbonato de sodio; una sal alcalina de un ácido orgánico; una alquil amina; o una mezcla de los mismos. El pH de la solución acuosa básica es de 8-13.

La etapa (a) puede incluir mezclar el compuesto a base de camptotecina hidrófoba y el compuesto a base de camptotecina hidrófila en un disolvente orgánico; y la etapa (b) incluye mezclar una mezcla del compuesto a base de camptotecina hidrófoba y el compuesto a base de camptotecina hidrófila con un copolímero de bloque anfífilo en un disolvente orgánico.

La etapa (a) (fabricación de núcleo-cubierta interior) y la etapa (b) (fabricación de núcleo-cubierta externo) pueden realizarse en una sola etapa.

Un ejemplo que se describe en el presente documento mostró un método para fabricar simultáneamente partículas primarias de núcleo-cubierta interior y partículas secundarias de núcleo-cubierta exterior. Una camptotecina hidrófoba (por ejemplo, 10-hidroxicamptotecina o SN-38), junto con una camptotecina hidrófila (por ejemplo, clorhidrato de irinotecán), se añadió en un disolvente orgánico, y la mezcla se disolvió totalmente con agitación, y un copolímero de bloque anfífilo (por ejemplo, mPEG-PLA) disuelto anteriormente en un disolvente orgánico se añadió a la misma con agitación. La solución de mezcla se secó mediante un evaporador rotativo de vacío y se añadió un disolvente acuoso (por ejemplo, agua destilada) a los residuos, seguido de tratamiento por ultrasonidos en un limpiador ultrasónico durante l0 minutos, fabricando de este modo partículas de nanomicelas dobles.

En el método de fabricación de partículas que se describe en el presente documento, las definiciones de un compuesto a base de camptotecina hidrófoba, un compuesto a base de camptotecina hidrófila y un copolímero de bloque anfífilo, que constituyen las partículas, son como se han descrito anteriormente con respecto a las partículas que se describen en el presente documento.

En el método de fabricación que se describe en el presente documento, el disolvente orgánico es un alcohol C1-C5 (metanol, etanol, propanol, butanol, n-butanol, iso-propanol, 1-pentanol, 2-butoxietanol, alcohol isobutílico, etc.), un acetato de alquilo, acetona, un acetonitrilo, cloroformo, benceno, tolueno, xileno, acetona, un fluoroalcano, pentano, hexano, 2,2,4-trimetil pentano, un decano, un ciclohexano, diisobutileno, 1-penteno, 1-clorobutano, 1-cloropentano, diisopropil éter, 2-cloropropano, 1-cloropropano, clorobenceno, benceno, dietil éter, sulfuro de dietilo, diclorometano, 1,2-dicloroetano, una anilina, una dietil amina, un éter, tetracloruro de carbono, tetrahidrofurano (THF) o un disolvente mixto de los mismos, pero sin limitarse a los mismos.

Efectos ventajosos

Las partículas con estructura de núcleo-cubierta doble que se describen en el presente documento no precipitan en forma de cristales incluso cuando se diluyen a una concentración suficientemente baja en una solución acuosa, conduciendo a partículas muy estables. Las partículas que se describen en el presente documento muestran una monodistribución de partículas en un disolvente de inyección antes y después de la liofilización. La proporción de partículas de 200 nm o más es del 10 % o menos y no hay presentes partículas de 500 nm o más. Además, la presente invención muestra resultados excelentes, en comparación con micelas monocapa existentes en ensayos de eficacia en animales y ensayos farmacocinéticas, y no usa un tensioactivo (Cremophore EL, Pluronic, etc.) que provoca hipersensibilidad y, por lo tanto, el uso de las partículas que se describen en el presente documento puede proporcionar una composición farmacéutica o una plataforma de sistema de entrega de fármaco, que son seguros para el cuerpo humano.

Breve descripción de los dibujos

Las FIG. 1a y 1b son gráficos que muestran los resultados de mediciones de dispersión de luz dinámica (DLD) de los tamaños de partículas formadas en una solución acuosa después de la liofilización, con respecto a partículas de núcleo-cubierta (micelas monocapa) compuestas por SN-38 e irinotecán de acuerdo con un ejemplo que se describe en el presente documento. La FIG. 1c es un gráfico que muestra los resultados de mediciones de dispersión de luz dinámica (DLD) de los tamaños de partículas formadas en una solución acuosa después de la liofilización, con respecto a partículas de núcleo-cubierta doble (micela bicapa) de acuerdo con un ejemplo que se describe en el presente documento.

Las FIG. 2 y 3 son un gráfico e imágenes de tumores extirpados, respectivamente, para comparar el efecto inhibidor tumoral de partículas de núcleo-cubierta (micelas monocapa) y partículas de núcleo-cubierta doble (micelas bicapa) en modelos en ratón de cáncer colorrectal de acuerdo con un ejemplo que se describe en el presente documento. La FIG. 4 es un gráfico para comparar el efecto inhibidor tumoral entre partículas de núcleo-cubierta (micelas monocapa) y partículas de núcleo-cubierta doble (micelas bicapa) en modelos en ratón de cáncer de páncreas (AsPc-1, Xenoinjerto) de acuerdo con un ejemplo que se describe en el presente documento.

Las FIGS. 5a y 5b son un gráfico e imágenes de tumores extirpados, respectivamente, para comparar el efecto inhibidor tumoral de partículas de núcleo-cubierta (micelas monocapa) y partículas de núcleo-cubierta doble (micelas bicapa) en modelos en ratón de cáncer de páncreas (MiaPaca-2, Ortotópico) de acuerdo con un ejemplo que se describe en el presente documento.

La FIG. 6 es un gráfico que muestra la concentración en sangre de Glucurónido de SN-38 para comparar características farmacocinéticas entre partículas de núcleo-cubierta (micelas monocapa) y partículas de núcleocubierta doble (micelas bicapa) que se describen en el presente documento.

Modo para realizar la invención

En lo sucesivo en el presente documento, la presente invención se describirá en detalle con referencia a los ejemplos. Estos ejemplos son solo para ilustrar la presente invención de manera más específica, y será evidente para los expertos en la materia que el alcance de la presente invención no está limitado por estos ejemplos.

Ejemplos

A lo largo de la presente memoria descriptiva, el término "%" utilizado para expresar la concentración de un material específico, a menos que se indique particularmente otra cosa, se refiere al % (peso/peso) para sólido/sólido, % (peso/vol) para sólido/líquido y % (vol/vol) para líquido/líquido.

Materiales

Entre los compuestos que se describen en el presente documento, se usaron compuestos a base de camptotecina hidrófoba e hidrófila, polisacáridos tales como trehalosa, ciclodextrina, polietilenglicol y similares de Sigma-Aldrich, AbCem, Toronto Research Chemical (Canadá) o Tocris (EE.UU.), y se usaron polímeros de Akina Inc (EE.UU.), Advanced Polymer Materials (Canadá), Shanghai Liang Chemical Co., LTD (China), NanoSoft Polymer (EE.UU.) y Samyang BioPharm (Corea).

Ejemplo 1: Solubilidad en diferentes disolventes, cuando se disolvió compuesto de camptotecina hidrófoba solo o se disolvieron compuesto de camptotecina hidrófoba y compuesto de camptotecina hidrófila en mezcla

Se midió el cambio de solubilidad de acuerdo con el disolvente cuando el compuesto de camptotecina hidrófoba, camptotecina o 7-etil-10-hidroxicamptotecina (SN-38) se disolvió solo o junto con el compuesto a base de camptotecina hidrófila, irinotecán (CPT-11), topotecán o belotecán (CKD-602).

1) Solubilidad en diferentes disolventes cuando el compuesto de camptotecina hidrófoba se disolvió solo

Se preparó una solución sobresaturada añadiendo 20 mg del compuesto de camptotecina hidrófoba (camptotecina o SN-38) a 5 ml de etanol, acetonitrilo, acetona, acetato de etilo, cloroformo, dimetilsulfóxido o agua destilada, seguido de tratamiento ultrasónico durante 30 minutos. La solución sobresaturada preparada se filtró a través de un filtro de 0,45 |jm y el filtrado se diluyó adecuadamente, seguido de análisis por HPLC.

2) Solubilidad en diferentes disolventes cuando se disolvieron en mezcla compuesto de camptotecina hidrófoba y compuesto de camptotecina hidrófila

Los presentes inventores prepararon una solución sobresaturada añadiendo 20 mg del compuesto de camptotecina hidrófila (clorhidrato de irinotecán, clorhidrato de topotecán o belotecán) a 5 ml de etanol, acetonitrilo, cloroformo, acetato de etilo, dimetilsulfóxido o agua destilada, y después añadiendo 20 mg del compuesto de camptotecina hidrófoba (SN-38 o camptotecina), seguido de tratamiento por ultrasonidos durante 30 minutos. La solución sobresaturada preparada se filtró a través de un filtro de 0,45 jm y el filtrado se diluyó adecuadamente, seguido de análisis por HPLC.

Las condiciones de HPLC (Agilent 1200 Series, EE.UU.) fueron las siguientes. La columna fue CapcellPak C8 (5 m, 4,6 mm x 25 cm, Shiseido); la fase móvil fue un disolvente mixto de metanol:acetonitrilo:tampón (dihidrogenofosfato de sodio 2,8 g/l, solución acuosa de 1-octanosulfonato 1,8 g/l) = 17:24:59 (v/v); el caudal fue de 1,5 ml/min; la longitud de onda de medición fue de 255 nm; y la cantidad de inyección de muestra fue de 15 jl. Los resultados de ensayo de solubilidad se muestran en la tabla 1 a continuación.

T l 11

Como se muestra en la Tabla 1 anterior, el compuesto poco soluble camptotecina o SN-38 solos apenas se disolvieron en la mayoría de los disolventes, incluyendo el agua, y se disolvieron a 2,26-3,29 mg/ml solamente en dimetilsulfóxido (DMSO) como disolvente no volátil. Sin embargo, la camptotecina o SN-38, cuando se disolvieron junto con el fármaco relativamente hidrófilo, clorhidrato de irinotecán, clorhidrato de topotecán o belotecán, aumentaron su solubilidad hasta 15 veces, lo que corresponde a un nivel adecuado de solubilidad requerido para la fabricación de fármacos. Por tanto, se confirmó a partir de los resultados anteriores que la solubilidad de los compuestos de camptotecina hidrófoba aumentó notablemente cuando se disolvieron en mezcla con un compuesto de camptotecina hidrófila.

Ejemplo 2: Fabricación de partículas de núcleo-cubierta primarias (micelas monocapa) y de núcleo-cubierta secundarias (partículas de núcleo-cubierta doble) a partir de compuesto a base de camptotecina hidrófoba y compuesto a base de camptotecina hidrófila con disolvente orgánico y evaluación del tamaño de partícula

En el presente ejemplo, el compuesto a base de camptotecina hidrófoba o SN-38, y el compuesto a base de camptotecina hidrófila, clorhidrato de irinotecán, clorhidrato de topotecán, belotecán, o SN-38-glucurónido, o un polímero anfífilo (PEG-PBLA) se disolvieron en un disolvente orgánico para fabricar partículas de núcleo-cubierta primarias (micelas monocapa), y se añadió un polímero anfífilo a la mezcla para fabricar partículas de núcleo-cubierta secundarias (micelas bicapa).

1) Fabricación de partículas de núcleo-cubierta primarias (micelas monocapa) (ejemplos comparativos 1 a 6)

Las partículas de núcleo-cubierta primarias como micelas monocapa se fabricaron usando, como ingrediente principal, una camptotecina hidrófoba (camptotecina o SN-38) y una camptotecina hidrosoluble (clorhidrato de irinotecán, clorhidrato de topotecán o SN-38-glucurónido) como compuesto anfífilo para la formación de micelas o un polímero anfífilo (poli(etilenglicol)-poli (p-butirolactona-co-ácido láctico); PEG-PBLA), como se muestra en la tabla 2 a continuación.

Específicamente, se añadieron 20 mg de camptotecina hidrosoluble (clorhidrato de irinotecán, clorhidrato de topotecán o glucurónido de SN-38) o PEG-PBLA a 20 mg de camptotecina hidrófoba, y se añadieron 100 ml de un disolvente orgánico (una solución de mezcla 50:50 de etanol y acetonitrilo) a la mezcla para conseguir una disolución completa, seguido de secado en un evaporador rotativo de vacío. Se añadieron 20 ml de agua destilada al producto seco, seguido de tratamiento por ultrasonidos a 20-300^ durante 20 minutos en un limpiador ultrasónico (UC-20, 20 Hz, 400 W, Jeio Tech, Corea), obteniendo de este modo partículas de tamaño nanométrico (micelas monocapa) en estado disperso en una solución acuosa. Se añadieron 600 mg de D-trehalosa a la solución acuosa que contenía las partículas de tamaño nanométrico, obteniendo de este modo una disolución completa, y después la solución se filtró a través de un filtro estéril de 0,22 pm, y el filtrado se liofilizó. La liofilización se realizó durante un total de 62 horas con un ciclo de temperatura de -45^ ^ -20^ ^ 0^ ^ 20 °C a una presión de vacío de 13,33 Pa (100 mTorr) o inferior, y se usó un liofilizador de Operon (Corea). Se tomó una alícuota del producto liofilizado preparado y se disolvió de nuevo en agua destilada para inyección, y se midió el tamaño de partícula mediante la dispersión de luz dinámica (DLD) (Zetasizer (TM), Malvern, RU).

2) Fabricación de núcleo-cubierta doble (micelas bicapa) (Ejemplos de ensayo 1 a 4)

Para preparar una composición de partículas bicapa que tuviera una estructura de núcleo-cubierta doble, los presentes inventores añadieron 20 mg de cada una de camptotecina hidrófoba y camptotecina hidrófila en 100 ml de disolvente orgánico (una solución de mezcla 50:50 de etanol y acetonitrilo) para que se disolviera en el mismo, seguido de secado usando un evaporador rotativo de vacío (Buchi). Se añadieron 200 ml de agua destilada al producto seco, seguido de tratamiento por ultrasonidos a 20-300^ durante 20 minutos en un limpiador ultrasónico, obteniendo de este modo partículas de núcleo-cubierta de tamaño nanométrico (micelas monocapa) en estado disperso en una solución acuosa. Mientras se agitaba la solución acuosa mezclada con las partículas núcleo-cubierta, se añadieron lentamente 90 mg del copolímero de bloque anfífilo metoxi poli(etilenglicol)-poli(lactida) (mPEG-PLA) (peso molecular de mPEG:peso molecular de PLA = 2.000:1.500) disuelto anteriormente en 10 ml de agua destilada, seguido de agitación a 20-300^ durante 6 horas, preparando de este modo partículas de núcleo-cubierta doble en estado disperso en una solución acuosa. Se añadieron 600 mg de D-trehalosa como crioprotector a la solución acuosa que contenía partículas de núcleo-cubierta doble que iban a disolverse en la misma, y después la mezcla se filtró a través de un filtro estéril de 0,22 pm, y después se realizó la liofilización mediante el mismo método que en la fabricación de partículas de núcleocubierta primarias, obteniendo de este modo un producto liofilizado en forma de un polvo de color blanco. Una cantidad predeterminada del producto liofilizado se disolvió de nuevo en agua de inyección para medir el tamaño de las partículas. Además, se midieron los tamaños promedio de partícula después/antes de la liofilización y se compararon la proporción de partículas con 200 nm o más y la forma de distribución (distribución monomodal o multimodal).

T l 1

Como se muestra en la Tabla 3 anterior, en cuanto al tamaño de partícula promedio después de la liofilización, las partículas de núcleo-cubierta primarias (micelas monocapa) compuestas por camptotecina poco soluble y camptotecina hidrosoluble o las partículas de núcleo-cubierta primarias compuestas por camptotecina poco soluble y un polímero anfífilo aumentaron a aproximadamente 1,2 a 1,5 veces, pero las partículas de núcleo-cubierta doble (micelas bicapa) solo se multiplicaron aproximadamente 1,1 veces.

Con respecto a las partículas de núcleo-cubierta primarias (micelas monocapa), después de la liofilización, las partículas de 200 nm o más se produjeron en grandes cantidades, de aproximadamente el 16-40 % y, especialmente, se produjeron las partículas de varios micrómetros (|jm) o más, capaces de influir en la seguridad cuando se administran en el cuerpo humano (ejemplos comparativos 1 a 6 en la tabla 3 y FIG. 1a y 1b). Por otro lado, con respecto a partículas de núcleo-cubierta doble, las partículas de 200 nm o más se detectaron en aproximadamente el 2,4-3,1 % para SN-38 y aproximadamente el 4,8 % para camptotecina, siendo ambos inferiores al 5 %, mostrando resultados muy favorables, y no se observaron partículas de 500 nm o más (Ejemplos de ensayo 1 a 4 en la tabla 3, y FIG. 1c).

En la distribución particular, las partículas de núcleo-cubierta primarias (micelas monocapa) mostraron una distribución con múltiples picos (FIG. 1a y 1b), pero las partículas de núcleo-cubierta secundarias mostraron una mono-distribución, confirmando una estructura muy estable (FIG. 1c). Además, el tamaño de partícula promedio de las partículas de núcleo-cubierta primarias (micelas monocapa) fue inferior al de las partículas de núcleo-cubierta doble (micelas bicapa) en aproximadamente 10 nm antes de la liofilización, pero el cambio del tamaño de partícula antes y después de la liofilización fue muy grande, con el resultado de que las partículas de núcleo-cubierta doble (micelas bicapa) eran muy estables físicamente.

Ejemplo 3: Evaluación de la estabilidad de partículas de núcleo-cubierta primarias (micelas monocapa) y partículas de núcleo-cubierta doble (micelas bicapa)

En el presente ejemplo, se compararon micelas monocapa (ejemplos comparativos 1, 3 y 6) y partículas de núcleocubierta doble (ejemplos de ensayo 1 y 2) para determinar el cambio en el tamaño de partícula, en donde se almacenaron productos de muestra fabricados de acuerdo con las normas de ensayo de estabilidad de fármacos durante seis meses en condiciones de ensayo aceleradas (40^, humedad relativa del 75 %). Los resultados se muestran en la Tabla 4.

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Las partículas de núcleo-cubierta primarias (micelas monocapa), que contenían camptotecina o SN-38 como ingrediente principal, y partículas de núcleo-cubierta doble (micelas bicapa) se sometieron a ensayos de estabilidad. Como resultado, en el caso de las micelas monocapa, el tamaño de partícula promedio aumentó aproximadamente un 50 % o más y la proporción de las partículas de 200 nm o más aumentó rápidamente hasta el 58 % en condiciones de ensayo acelerado. En el caso de las partículas bicapa, el tamaño de partícula promedio aumentó aproximadamente un 20 %, y la proporción de las partículas de 200 nm o más se restringió dentro del 3,8 % para el SN-38 y el 7,4 % para la camptotecina. Por lo tanto, puede observarse que la estructura de las partículas bicapa que se describe en el presente documento mejoró significativamente desde el punto de vista de la estabilidad, en comparación con las micelas monocapa.

Ejemplo 5: Fabricación de partículas de núcleo-cubierta doble de acuerdo con el tipo de polímero anfífilo y el peso molecular del polímero anfífilo

En el presente ejemplo, se fabricaron partículas de núcleo-cubierta doble usando diversos polímeros anfífilos (copolímeros de bloque). Como se muestra en la Tabla 5, se usaron 20 mg de cada uno de SN-38 y clorhidrato de irinotecán como compuestos de camptotecina hidrófoba e hidrófila, 500 mg de trehalosa como crioprotector y 90 mg de cada uno de los polímeros anfífilos. El método de fabricación se realizó de la misma manera que en el método de fabricación de partículas de núcleo-cubierta del ejemplo 2 anterior, y los materiales se disolvieron de nuevo en agua de inyección después de la liofilización para comparar los tamaños particulares.

T l 1

continuación

Como se muestra en la Tabla 5 anterior, puede observarse que las partículas bicapa que se describen en el presente documento pueden fabricarse mediante el uso de diversos polímeros anfífilos (copolímeros de bloque) y polímeros anfífilos que tienen diversos pesos moleculares promedios y la estabilidad de las partículas fue excelente.

Ejemplo 6: Evaluación del tamaño de partícula de acuerdo con el tipo de crioprotector

En el presente ejemplo, se observaron los efectos de un crioprotector en la fabricación de partículas de núcleo-cubierta primarias (micelas monocapa) y partículas de núcleo-cubierta doble. En este caso, se seleccionaron 10-hidroxicamptotecina y SN-48 como compuestos de camptotecina hidrófoba; se seleccionó clorhidrato de irinotecán como camptotecina hidrófila; y se usó mPEG-PLA (2.000: 1.500) como polímero anfífilo. Como crioprotector, se usaron 500 mg de cada uno de D-trehalosa, D-manitol, PEG2000 e hidroxipropil-p-ciclodextrina (HP-b-CD). Las partículas de núcleo-cubierta doble se fabricaron usando las composiciones que se muestran en la Tabla 6, y el método de fabricación se realizó de la misma manera que en el ejemplo 2.

Como se muestra en la Tabla 6, se observaron resultados favorables en cuanto al tamaño de partícula cuando se usaron los polisacáridos manitol y trehalosa como crioprotectores. Por otro lado, los tamaños de partícula fueron algo grandes, por ejemplo, se detectaron partículas con un tamaño de 1 pm o más, en PEG2000 y HP-b-CD. En los ejemplos de ensayo 18 y 20 para micelas monocapa, se observaron partículas relativamente grandes de 200 nm o más y macropartículas de 1 pm o más cuando se usaron polietilenglicol y ciclodextrina como crioprotectores.

Ejemplo 7: Fabricación de partículas de núcleo-cubierta primarias y partículas de núcleo-cubierta doble en condiciones de disolvente hidrosoluble

Las partículas de núcleo-cubierta primarias (micelas monocapa) pueden fabricarse en una solución acuosa, así como en un disolvente orgánico, como en el ejemplo 2. Como se muestra en la Tabla 7 a continuación, se disolvieron totalmente 10 mg de SN-38 en 0,1 ml de una solución acuosa de hidróxido de sodio 0,5 M, y la solución resultante añadió gota a gota y se neutralizó en una solución acuosa de clorhidrato de irinotecán (1 mg/ml) disuelta anteriormente en 15 ml de una solución acuosa de clorhidrato 0,5 mM, y se añadió además una solución acuosa de clorhidrato para controlar el pH a aproximadamente 5, seguido de tratamiento por ultrasonidos, obteniendo de este modo partículas de núcleo-cubierta primarias (micelas monocapa). Se añadieron a las mismas 40 mg del polímero anfífilo mPEG-PLA, seguido de agitación a temperatura ambiente durante 6 horas y se añadieron además 300 mg de D-trehalosa para su disolución. La solución de mezcla se filtró a través de un filtro estéril de 0,22 pm, se liofilizó y se disolvió de nuevo en agua de inyección y, después, se midió el tamaño de partícula (ejemplo de ensayo 21). Se disolvieron SN-38 e irinotecán usando el álcali orgánico etanolamina como solución acuosa básica o el ácido orgánico ácido cítrico como solución acuosa ácida, y se fabricaron partículas bicapa mediante el mismo método, midiendo de este modo los tamaños de partícula, respectivamente (ejemplos de ensayo 22 y 23).

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Como se muestra en la Tabla 7, las partículas de núcleo-cubierta doble fabricadas disolviendo camptotecina hidrófoba y camptotecina hidrófila en soluciones acuosas básicas y ácidas mostraron un tamaño de partícula de aproximadamente 120 nm y, por lo tanto, las partículas de núcleo-cubierta doble se fabricaron satisfactoriamente.

Ejemplo 8: Fabricación de mezcla de partículas de núcleo-cubierta doble

El presente ejemplo mostró un método para fabricar partículas de núcleo-cubierta doble mezclando toda la camptotecina hidrófoba, la camptotecina hidrófila y el copolímero de bloque anfífilo en una sola etapa. Se colocaron compuestos de camptotecina hidrófoba (10-hidroxicampotecina y SN-38) junto con 20 mg de clorhidrato de irinotecán en 100 ml de un disolvente orgánico (solución de mezcla 50:50 de etanol:acetonitrilo) y se disolvieron totalmente con agitación, y se añadieron 90 mg de mPEG-PLA (2.000:1.500) disueltos en 10 ml de un disolvente orgánico (solución de mezcla 50:50 de etanol:acetonitrilo) con agitación. La solución de mezcla se secó mediante un evaporador rotativo de vacío y se añadieron 200 ml de agua destilada a los residuos, seguido de tratamiento por ultrasonidos durante 10 minutos en un limpiador ultrasónico, obteniendo de este modo partículas de núcleo-cubierta doble que se describen en el presente documento. Se añadieron 400 mg de D-manitol como crioprotector para que se disolvieran y esta solución se filtró a través de un filtro estéril de 0,22 pm y se liofilizó. Una cantidad adecuada del producto liofilizado se disolvió de nuevo en agua de inyección para medir el tamaño de partícula. Los resultados se muestran en la Tabla 8.

T l 1

Como se muestra en la Tabla 8, las partículas de núcleo-cubierta doble fabricadas mezclando y disolviendo simultáneamente camptotecina hidrófoba, camptotecina hidrófila y polímero anfífilo en un disolvente orgánico mostraron una monodistribución de tamaños de partícula de aproximadamente 120-130 nm, en donde se detectaron partículas de 200 nm o más en pequeñas cantidades, del 5 % o menos, pero no se detectaron partículas de 1 pm o más y, por lo tanto, se confirmó que las partículas tenían una estabilidad global favorable.

Ejemplo 9: Ensayo de comparación del efecto inhibidor tumoral de partículas de núcleo-cubierta primarias (micelas monocapa) y partículas de núcleo-cubierta doble (micelas bicapa) en modelos tumorales en ratón (cáncer colorrectal)

En modelos colorrectales en ratones, se midió el efecto antineoplásico de composiciones de micelas monocapa (ejemplos comparativos 3 y 6) y de la composición de partículas bicapa (ejemplo de ensayo 2) mediante el siguiente método.

La estirpe celular de cáncer colorrectal cultivada anteriormente (HT-29) se inyectó a 5*106 células/0,2 ml en el flanco derecho de ratones atímicos Balb/c, y después de aproximadamente 7 días, solo se seleccionaron tumores con un tamaño de 150-200 mm3 Se asignaron nueve animales a cada grupo y se les administró por vía intravenosa un fármaco simulado (grupo sin tratamiento), ejemplo comparativo (micelas monocapa), ejemplo comparativo 6 (micelas monocapa) y ejemplo de ensayo 2 (partículas bicapa), una vez cada tres días, tres veces en total. La dosis fue de 10 mg/kg sobre la base de SN-38. Se usó el volumen del tumor medido cada tres días después de la administración de la composición de ensayo como índice de medición del efecto antineoplásico, y se observó durante un total de 18 días. Los resultados se muestran en las FIG. 2 y 3.

Como resultado de la medición del efecto inhibidor tumoral, las composiciones de micelas monocapa (ejemplos comparativos 3 y 6) mostraron un efecto inhibidor tumoral de aproximadamente el 50-60 % en comparación con un grupo de control negativo, y la composición de partículas bicapa (ejemplo de ensayo 2) mostró un efecto inhibidor tumoral de aproximadamente el 80 % o más en comparación con un grupo de control negativo, indicando efectos excelentes. Estos resultados se debieron al hecho de que la estructura de micela estabilizada y la estructura de micela que tenía un tamaño tan pequeño como de 200 nm o menos se transfirieron eficazmente a los tejidos cancerosos mientras permanecían de forma estable en el cuerpo.

Ejemplo 10: Ensayo de comparación del efecto inhibidor tumoral de partículas de micelas monocapa y bicapa en modelos en ratón de cáncer de páncreas (AsPc-1)

El efecto inhibidor tumoral de la composición de micelas monocapa (ejemplo comparativo 3) se comparó con el de la composición de partículas bicapa (ejemplo de ensayo 2) en modelos en ratón de cáncer de páncreas. La estirpe celular de cáncer de páncreas cultivada anteriormente (AsPc-1) se inyectó a 5x 106 células/0,2 ml en el flanco derecho de ratones BALB/c-nu/nu macho, y después de aproximadamente 10 días, solo se seleccionaron tumores con un tamaño de 100-150 mm3. Se asignaron diez animales a cada grupo y se les administró un fármaco simulado (grupo sin tratamiento), ejemplo comparativo 3 y ejemplo de ensayo 2, una vez cada siete días, tres veces en total. La dosis fue de 10 mg/kg sobre la base de SN-38. Se usó el volumen del tumor medido cada tres días después de la administración de la composición de ensayo como índice de medición del efecto antineoplásico, y se observó durante un total de 24 días. Los resultados se muestran en la FIG. 4.

Como resultado de la medición del efecto inhibidor tumoral, la composición de micelas monocapa (ejemplo comparativo 3) mostró un efecto inhibidor tumoral de aproximadamente el 27 % en comparación con un grupo de control negativo, y la composición de partículas bicapa (ejemplo de ensayo 2) mostró un efecto inhibidor tumoral de aproximadamente el 47 % o más en comparación con un grupo de control negativo, indicando efectos excelentes. Los resultados fueron en general similares a los de los modelos de cáncer colorrectal (Ejemplo 9) y se confirmó que la composición de partículas bicapa era excelente en cuanto a los efectos inhibidores tumorales en comparación con las micelas monocapa.

Ejemplo 11: Ensayo de comparación del efecto inhibidor tumoral de composición de partículas de micelas monocapa y bicapa en modelos en ratón de cáncer de páncreas (MiaPaca-2)

El efecto inhibidor tumoral de la composición de micelas monocapa (ejemplo comparativo 3) se comparó con el de la composición de partículas bicapa (ejemplo de ensayo 2) en modelos en ratón de cáncer de páncreas (Ortotópico) sobre la base de SN-38. Después de la incisión en el flanco izquierdo de ratones BALB/c-nu/nu macho a 0,7-1 cm, el páncreas y el bazo enteros se expusieron al exterior y, después, se inyectó la estirpe celular de cáncer de páncreas (estirpe celular MiaPaca-2) cultivada anteriormente usando una jeringa a 1 x107 células/0,1 ml. Se confirmó que la suspensión de células tumorales no se filtró, y los órganos expuestos al exterior se volvieron a colocar, y se suturó el lugar de la incisión mediante hilo de sutura. Aproximadamente 10 días después de la inoculación de la estirpe celular de cáncer de páncreas, se realizó una agrupación por el peso corporal. Se asignaron diez animales a cada grupo y se les administró un fármaco simulado (grupo sin tratamiento), ejemplo comparativo 3 y ejemplo de ensayo 2, una vez cada siete días, tres veces en total. La dosis fue de 20 mg/kg sobre la base de SN-38. Los animales se observaron durante un total de 28 días, y el tamaño y el peso tumorales se midieron mediante autopsia el día 28. Los resultados se muestran en la FIG. 5.

Como resultado de la medición del efecto inhibidor tumoral, el peso tumoral del grupo sin tratamiento (grupo de control negativo) fue en promedio de 0,46±0,17 g, el peso tumoral del grupo de tratamiento con composición de micelas monocapa (ejemplo comparativo 3) fue de 0,37±0,09 g y el peso tumoral del grupo de tratamiento con composición de partículas bicapa (ejemplo de ensayo 2) fue de 0,21±0,05 g. Por lo tanto, la composición de partículas bicapa mostró un efecto inhibidor tumoral del 55 % o más en comparación con las micelas monocapa y, por lo tanto, un efecto inhibidor tumoral excelente.

Ejemplo 12: Ensayo farmacocinético en perros beagle

Las características farmacocinéticas de la composición de micelas monocapa (ejemplo comparativo 3) se compararon con las de la composición de partículas bicapa (ejemplo de ensayo 2) en perros beagle. Se dividieron perros beagle machos que pesaban 7-10 kg en dos grupos, tres perros por cada grupo, de acuerdo con el peso corporal, y se les administró por vía intravenosa una composición de micelas monocapa (ejemplo comparativo 2) y una composición de partículas bicapa (ejemplo de ensayo 2) a 0,5 mg/kg sobre la base de SN-38 durante 10 minutos de infusión. Se tomaron muestras de sangre 0,33, 0,67, 1, 1,5, 2, 4, 8, 12, 24, 36 horas después del final de la administración, y el plasma obtenido por centrifugación de la sangre se pretrató mediante el siguiente método para medir la concentración de fármaco en plasma. Para el pretratamiento de muestra, se añadieron en primer lugar 20 pl de S-(+)-camptotecina (500 ng/ml, disuelta en acetonitrilo) como sustancia patrón interno a 100 pl de plasma y se añadieron además 500 pl de acetonitrilo, seguido de mezcla con formación de vórtice durante 30 segundos. Después, la mezcla se centrifugó a 12.000 rpm durante 3 minutos, se tomó el sobrenadante y se inyectaron 2 pl en un sistema de CL-EM/EM (modelo API-5.000, AB Sciex). La separación se realizó mientras la columna era Gemini C18 (3 pm, 2,0x50 mm, Phenomenex, EE.UU.), la fase móvil era una solución de acetonitrilo al 50 % que contenía ácido fórmico al 0,1 % y el caudal era de 0,25 ml/min. Las condiciones de detección de EM/EM fueron en modo de iones positivos y el glucurónido de SN-38 se detectó a m/z 569,3 ^ 393,2, y el patrón interno se detectó a m/z 349,2 ^ 305,2.

La concentración de fármaco en sangre a lo largo del tiempo después de la administración se muestra en la FIG. 6 y los parámetros farmacocinéticos correspondientes se muestran en la Tabla 9.

En perros beagle, se analizó el glucurónido de SN-38 producido directamente a partir de SN-38 solubilizado en las partículas que se describen en el presente documento. Los resultados confirmaron que las partículas de bicapa mostraron un aumento de la biodisponibilidad de aproximadamente 2,75 veces, en comparación con las micelas monocapa. A partir de los resultados anteriores se determinó que las partículas bicapa maximizan la solubilidad del fármaco SN-38 poco soluble in vivo.

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. Una partícula que comprende:

i) un compuesto a base de camptotecina hidrófoba;

ii) un compuesto a base de camptotecina hidrófila; y

iii) un copolímero de bloque anfífilo compuesto por un bloque hidrófobo y un bloque hidrófilo.

2. La partícula de la reivindicación 1, en donde el compuesto a base de camptotecina hidrófoba es al menos uno seleccionado del grupo que consiste en 7-etil-10-hidroxicamptotecina (SN-38), camptotecina, 10-hidroxicamptotecina y una sal farmacéutica aceptable de los mismos.

3. La partícula de la reivindicación 1, en donde el compuesto a base de camptotecina hidrófila es al menos uno seleccionado de irinotecán, topotecán, belotecán, exatecan, lurtotecán, sinotecán, rubitecán, 9-nitrocamptotecina, 9-aminocamptotequina, gimatecán, BNP-1530, DB-67, BN-80915, BN-80927, una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, un metabolito de glucurónido de los mismos y un metabolito de glucurónido del compuesto a base de camptotecina hidrófoba.

4. La partícula de la reivindicación 1, en donde el copolímero de bloque anfífilo se compone de bloques A-B o A-B-A,

(a) en donde A es un polímero hidrófilo, que es monometoxi polietilenglicol, dimetoxi polietilenglicol, polietilenglicol, polipropilenglicol, monometoxi polipropilenglicol, óxido de polietileno, ácido poliacrílico o un polímero de los mismos; y

(b) en donde B es un polímero hidrófobo, que es ácido poliláctico, polilactida, ácido poliglicólico, poliglicolida, un copolímero de ácido poliláctico-co-ácido glicólico, ácido polimandélico, policaprolactona, polidioxan-2-ona, ácido poliglutámico, ácido poliaspártico, poliornitina, poliortoésteres, un derivado de los mismos, o un copolímero de dos o más compuestos seleccionados de los mismos.

5. La partícula de la reivindicación 4, en donde el peso molecular promedio en número del polímero hidrófilo A es de 500-10.000 Da.

6. La partícula de la reivindicación 4, en donde el peso molecular promedio en número del polímero hidrófobo B es de 500-10.000 Da.

7. La partícula de la reivindicación 1, en donde la relación en peso del compuesto a base de camptotecina hidrófoba y el compuesto a base de camptotecina hidrófila es de 1:10 a 10:1.

8. La partícula de la reivindicación 1, en donde la relación en peso de la suma del compuesto a base de camptotecina hidrófoba y el compuesto a base de camptotecina hidrófila y el copolímero de bloque anfífilo es de 1:200 a 10:1.

9. Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento del cáncer, que comprende la partícula de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

10. Un método para fabricar una partícula, de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, comprendiendo el método:

(a) formar un núcleo-cubierta interior que contiene un compuesto a base de camptotecina hidrófoba y un compuesto a base de camptotecina hidrófila; y

(b) formar un núcleo-cubierta exterior que contiene un copolímero anfífilo.

11. El método de la reivindicación 10, en donde la etapa (a) comprende mezclar el compuesto a base de camptotecina hidrófoba y un compuesto a base de camptotecina hidrófila en un disolvente orgánico; y

en donde la etapa (b) comprende mezclar el núcleo-cubierta interior y el copolímero de bloque anfífilo en un disolvente acuoso.

12. El método de la reivindicación 10, en donde la etapa (a) comprende mezclar una solución acuosa básica, en la que se disuelve un compuesto de camptotecina hidrófoba, y una solución acuosa, en la que se disuelve un compuesto de camptotecina hidrófila; y

en donde la etapa (b) comprende mezclar el núcleo-cubierta interior y el copolímero de bloque anfífilo en un disolvente acuoso.

13. El método de la reivindicación 10, en donde la etapa (a) comprende mezclar el compuesto a base de camptotecina hidrófoba y el compuesto a base de camptotecina hidrófila en un disolvente orgánico; y

en donde la etapa (b) comprende mezclar una mezcla del compuesto a base de camptotecina hidrófoba y el compuesto a base de camptotecina hidrófila con el copolímero de bloque anfífilo en un disolvente orgánico.

14. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 13, en donde el disolvente orgánico es un disolvente de mezcla que contiene al menos uno seleccionado de un alcohol C1-C5, un acetato de alquilo, acetona, acetonitrilo, cloroformo, benceno, tolueno, xileno, acetona, un fluoroalcano, pentano, hexano, 2,2,4-trimetilpentano, decano, ciclohexano, ciclopentano, diisobutileno, 1-penteno, 1-clorobutano, 1-cloropentano, diisopropil éter, 2-cloropropano, 1-cloropropano, clorobenceno, benceno, dietil éter, sulfuro de dietilo, diclorometano, 1,2-dicloroetano, anilina, dietilamina, un éter, tetracloruro de carbono y tetrahidrofurano (THF).

15. El método de la reivindicación 12, en donde la solución acuosa básica incluye al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un álcali inorgánico, una sal alcalina de un ácido orgánico y una alquil amina, comprendiendo el álcali inorgánico hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, dihidrogenofosfato de sodio, dihidrogenofosfato de potasio, hidróxido de magnesio, carbonato de sodio e hidrogenocarbonato de sodio.