ES2857101T3 - Acido (2R,4R)-5-(5’-cloro-2’-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(5-metiloxazol-2-carbonil)amino]pentanoico - Google Patents

Abstract

Un compuesto ácido (2R,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(5-metil-oxazol-2- carbonil)amino]pentanoico que tienen la estructura: **(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN

Ácido (2R,4R)-5-(5’-doro-2’-fluorobifenN-4-il)-2-hidroxi-4-[(5-metNoxazol-2-carbonN)amino]pentanoico

Antecedentes de la invención

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un compuesto nuevo y una forma cristalina del mismo que tiene actividad inhibidora de la neprilisina. La invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto y los procesos para preparar el compuesto y encuentra utilidad en los métodos para usar el compuesto para tratar enfermedades tales como hipertensión, insuficiencia cardíaca y nefropatía.

Estado de la técnica

La neprilisina (endopeptidasa neutra, EC 3.4.24.11) (NEP, forma siglada de neutral endopeptidase), es una Zn2+ metalopeptidasa unida a membrana endotelial que se encuentra en muchos órganos y tejidos, entre ellos el cerebro, los riñones, los pulmones, el tracto gastrointestinal, el corazón y la vasculatura periférica. NEP degrada e inactiva varios péptidos endógenos, tales como encefalinas, bradicinina circulante, péptidos de angiotensina y péptidos natriuréticos, el último de los cuales tiene varios efectos que incluyen, por ejemplo, vasodilatación y natriuresis/diuresis, así como la inhibición de la hipertrofia cardíaca y la fibrosis ventricular. Por tanto, la NEP desempeña un papel importante en la homeostasis de la presión sanguínea y la salud cardiovascular.

Los inhibidores de la NEP, taled como el tiorfán, el candoxatril y el candoxatrilat, se han estudiado como posibles terapias. Además, se conocen compuestos que inhiben tanto la NEP como la enzima convertidora de la angiotensina I (ECA), e incluyen omapatrilat, gempatrilat y sampatrilat. Denominados inhibidores de vasopeptidasa, esta última clase de compuestos se describe en Robl et al. (1999) Exp. Opin. Ther. Patentes 9(12): 1665-1677.

En la Patente de Estados Unidos N.° 8.263.629 para Coppola et al. y en la Patente de Estados Unidos N.° 8.586.536 para Gendron et al. se describen numerosos inhibidores de NEP. Muchos de estos compuestos tienen una o más propiedades convenientes. Sin embargo, a pesar de estos compuestos, sigue existiendo la necesidad de un inhibidor de NEP potente que tenga una alta biodisponibilidad oral y una depuración baja en todas las especies analizadas. La presente invención está dirigida a esa necesidad.

Adicionalmente, para utilizar de forma eficaz un compuesto inhibidor de NEP como agente terapéutico, sería conveniente tener una forma en estado sólido que se pueda fabricar fácilmente y que tenga una estabilidad química y física aceptable. Por ejemplo, sería muy conveniente tener una forma física que sea térmicamente estable a una temperatura razonablemente alta, facilitando de este modo el procesamiento y almacenamiento del material. Los sólidos cristalinos se prefieren generalmente a las formas amorfas, para potenciar la pureza y la estabilidad del producto fabricado. Sin embargo, la formación de formas cristalinas de compuestos orgánicos es muy impredecible. No existen métodos fiables para predecir cuál, en caso de que la hubiera, forma de un compuesto orgánico será cristalina. Además, no existen métodos para predecir cuál, en caso de que la hubiera, forma cristalina tendrá las propiedades físicas deseadas para su uso como agentes farmacéuticos. Por consiguiente, existe la necesidad de una forma cristalina estable que tenga un punto de fusión razonablemente alto.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona un nuevo compuesto (1) que se ha encontrado que posee actividad inhibidora de la enzima neprilisina (NEP). En consecuencia, se espera que este compuesto sea útil y ventajoso como agente terapéutico para tratar afecciones tales como hipertensión, hipertensión pulmonar, insuficiencia cardíaca y nefropatía.

Un aspecto de la invención se refiere al ácido (2R,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(5-metil-oxazol-2-carbonil)amino]pentanoico (1):

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Otro aspecto de la invención se refiere a una forma cristalina del compuesto 1. En una realización, la forma cristalina (1') no está solvatada.

Otro aspecto de la invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables y un Compuesto 1 o una forma cristalina del mismo. Dichas composiciones pueden contener opcionalmente otros agentes terapéuticos, incluyendo, pero sin limitación, un antagonista del receptor de AT1, un inhibidor de la enzima convertidora de la angiotensina, un inhibidor de la fosfodiesterasa (PDE), un inhibidor de renina, un diurético o combinaciones de los mismos.

El Compuesto 1 de la invención posee actividad de inhibición de la enzima NEP y, por lo tanto, se espera que sea útil como agente terapéutico para el tratamiento de pacientes que padecen una enfermedad o trastorno que se trata inhibiendo la enzima NEP o aumentando los niveles de sus sustratos peptídicos. Por tanto, la invención encuentra utilidad en un método de tratamiento de pacientes que padecen una enfermedad o trastorno que se trata inhibiendo la enzima NEP, que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de Compuesto 1. La invención también encuentra utilidad en un método para el tratamiento de la hipertensión, la hipertensión pulmonar, la insuficiencia cardíaca o la nefropatía, que comprende administrar a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de Compuesto 1; y en un método para la inhibición de una enzima NEP en un sujeto que comprende administrar al sujeto, una cantidad de Compuesto 1 inhibidora de la enzima NEP.

Dado que el Compuesto 1 de la invención posee actividad de inhibición de la NEP, también es útil como herramienta de investigación. Por consiguiente, la invención encuentra utilidad en un método de uso del Compuesto 1 de la invención como herramienta de investigación, comprendiendo el método realizar un ensayo biológico utilizando el Compuesto 1. El Compuesto 1 también puede utilizarse para evaluar nuevos compuestos químicos. Por tanto, la invención encuentra utilidad en un método de evaluación de un compuesto de prueba en un ensayo biológico, que comprende: (a) realizar un ensayo biológico con un compuesto de prueba para proporcionar un primer valor de ensayo; (b) realizar el ensayo biológico con el compuesto 1 para proporcionar un segundo valor de ensayo; en donde la etapa (a) se realiza antes, después o simultáneamente con la etapa (b); y (c) comparar el primer valor de ensayo de la etapa (a) con el segundo valor de ensayo de la etapa (b). Los ensayos biológicos de ejemplo incluyen un ensayo de inhibición de la enzima NEP. La invención también encuentra utilidad en un método de estudio de un sistema biológico o muestra que comprenda una enzima NEP, comprendiendo el método: (a) poner en contacto el sistema biológico o la muestra con el Compuesto 1; y (b) determinar los efectos provocados por el Compuesto 1 sobre el sistema biológico o la muestra.

Otro aspecto de la invención se refiere a procedimientos útiles para la preparación del Compuesto 1 o una forma cristalina del mismo.

La invención encuentra además utilidad en el uso del Compuesto 1 o una forma cristalina del mismo para la fabricación de un medicamento, especialmente para la fabricación de un medicamento útil para tratar la hipertensión, la insuficiencia cardíaca o la nefropatía. En el presente documento se divulgan otros aspectos y realizaciones de la invención.

Breve descripción de los dibujos

Se ilustran diversos aspectos de la presente invención por referencia a los dibujos adjuntos.

La FIG. 1 muestra un patrón de difracción de rayos X de polvo (PXRD, forma siglada de powder x-ray diffraction) del cristalino no solvatado (2R, 4R)-5-(5-cloro-2-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(5-metil-oxazol-2-carbonil) amino]pentanoico (1').

La FIG.2 muestra un termograma de calorimetría de barrido diferencial (DSC, forma siglada de differential scanning calorimetry) de la forma cristalina no solvatada (1').

La FIG. 3 muestra un perfil de gravimetría térmica para la forma cristalina no solvatada (1').

La FIG. 4 muestra una isoterma de sorción de humedad dinámica de la forma cristalina no solvatada (1').

La FIG. 5 es una imagen de microscopio de luz polarizada (PLM, forma siglada de polarizedlight microscope) de la forma cristalina no solvatada (1').

Descripción detallada de la invención

En un aspecto, la invención se refiere a ácido (2R,4R)-5-(5-cloro-2-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(5-metil-oxazol-2-carbonil)amino]pentanoico (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

El compuesto 1 de la invención contiene dos centros quirales y, por lo tanto, un compuesto de dicha estructura puede existir en diversas formas estereoisoméricas. De manera específica, los átomos de carbono pueden tener una configuración (R,R), (S,S), (S,R) o (R,S) particular o está enriquecido en una forma estereoisomérica que tiene dicha configuración. El compuesto 1, como se muestra y se denomina está en la configuración (R,R). Los expertos en la técnica entenderán que pueden estar presentes cantidades menores de los otros isómeros en las composiciones de la invención a menos que se indique de otro modo, con la condición de que la utilidad de la composición en su conjunto no se elimine por la presencia de dichos otros isómeros. Los estereoisómeros individuales se pueden obtener por numerosos métodos que se conocen bien en la técnica, incluyendo cromatografía quiral usando una fase o soporte estacionario quiral adecuado o convirtiéndolos químicamente en diastereómeros, separando los diaestereoisómeros por medios convencionales tales como cromatografía o recristalización, regenerando después el estereoisómero original.

El compuesto 1 de la invención posee actividad inhibidora de la neprilisina (NEP), es decir, el compuesto se capaz de inhibir la actividad catalítica de la enzima. Una medida de la habilidad de un compuesto para inhibir la actividad NEP es la constante de inhibición (pKj). El valor pKi es el logaritmo negativo en base 10 de la constante de disociación (K¡), el cual se indica habitualmente en unidades molares. El compuesto de la invención tiene un pKi de NEP > 9,0. Se pueden demostrar otras propiedades y utilidades del compuesto 1 usando ensayos in vitro e in vivo que son bien conocidos por los expertos en la técnica, incluyendo, entre otros, los descritos en la patente de Estados Unidos n.° 8.586.536.

El compuesto 1, así como aquellos compuestos usados en su síntesis, pueden incluir también compuestos marcados isotópicamente, es decir, en donde uno o más átomos han sido enriquecidos con átomos que tienen una masa atómica diferente de la masa atómica que se encuentra de manera predominante en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que se pueden incorporar en los compuestos descritos en esta invención, incluyen por ejemplo, pero no se limitan a, 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 35S, 36Cl y 18F. Es de particular interés el compuesto 1 enriquecido con tritio o carbono 14, el cual se puede usar, por ejemplo, en estudios de distribución de tejidos; El compuesto 1 enriquecido con deuterio especialmente en un sitio de metabolismo da como resultado, por ejemplo, un compuesto que tiene mayor estabilidad metabólica y el compuesto 1 enriquecido con un isótopo que emite positrones, tales como 11C, 18F, 15O y 13N, que se puede usar, por ejemplo, en estudios de tomografía de emisión de positrones (PET).

En el presente documento las estructuras químicas se denominan de acuerdo con las convenciones de la IUPAC según se implementan en el programa informático ChemDraw (Perkin Elmer, Inc., Cambridge, MA).

Definiciones

Cuando se describen los compuestos, composiciones, métodos y procesos de la invención, los siguientes términos tienen los significados siguientes a menos que se indique de otro modo. Además, como se usa en el presente documento, las formas singulares "un", "una" y "el/la" incluyen las formas plurales correspondientes a menos que el contexto de su uso dicte claramente de otro modo. Las expresiones "que comprende", "que incluye" y "que tiene" pretenden ser incluyentes y significan que puede haber elementos adicionales distintos a los elementos enumerados. Todos los números que expresan cantidades de ingredientes, propiedades tales como peso molecular, condiciones de reacción, etc., usados en el presente documento, han de entenderse como modificados en todos los casos por el término "aproximadamente", a menos que se indique otra cosa. En consecuencia, los números indicados en el presente documento son aproximaciones y pueden variar dependiendo de las propiedades deseadas que se buscaba obtener en el presente documento. Al menos y no como un intento de limitar la aplicación de la doctrina de equivalentes al alcance de las reivindicaciones, cada número se debe interpretar al menos en vista de los dígitos significativos indicados y aplicando técnicas de redondeo habituales.

El término "alrededor de" o "aproximadamente", cuando se usa en el contexto del comportamiento térmico del compuesto 1, se define como ± 1-3 °C. El término "aproximado" cuando se usa % de dosis del compuesto 1 excretado en la orina se define como un margen de error que habitualmente es de aproximadamente dos veces la desviación estándar o la amplitud media de un intervalo de confianza del 95 por cien. El término "aproximado" en otras áreas de la divulgación se puede usar para indicar la desviación estándar o la cantidad de variación o dispersión de un conjunto de valores de datos.

La expresión "liberación controlada", como se usa en el presente documento, es sinónima de liberación sostenida y liberación extendida y se refiere a la cantidad de fármaco liberada durante un periodo extendido de tiempo en un sujeto. En general, los comprimidos y cápsulas de liberación controlada liberan el principio activo en el sujeto durante periodos de tiempo de aproximadamente 8, 12, 16 y 24 horas. Por otro lado, la expresión "liberación inmediata" se refiere a que el principio activo se libera en un sujeto en un periodo corto de tiempo, habitualmente menos de aproximadamente 30 minutos. La expresión "liberación retardada" se refiere a comprimidos y cápsulas que liberan la dosis farmacéutica después de un periodo de tiempo establecido. Habitualmente estas formas de dosificación están recubiertas para prevenir la liberación en el estómago pero permitir la liberación en el tracto intestinal.

Como se usa en el presente documento, la locución "de fórmula" o "que tiene la fórmula" o "que tiene la estructura" no pretende ser limitante y se usa de la misma manera en la que se usa la expresión "que comprende". Por ejemplo, si se representa una estructura, se entiende que están incluidas todas las formas de estereoisómeros y tautómeros, a menos que se indique lo contrario.

En general, al describir sólidos farmacéuticos, la expresión "no solvatados" implica "sin disolvente". Por lo tanto, cuando se describe la forma cristalina de la invención como que está "no solvatada", esto significa que las partículas cristalinas contienen esencialmente solo moléculas de ácido (2R,4R)-5-(5’-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(5-metiloxazol-2-carbonil)amino]pentanoico; la forma no contiene cantidades significativas de otras moléculas de disolvente incluidas en la red cristalina o, en otras palabras, el disolvente no está incorporado de manera significativa en la red cristalina. El término "no solvatado" también significa no hidratado o anhidro cuanto el disolvente es agua.

La expresión "punto de fusión", tal como se usa en el presente documento, significa la temperatura a la que se observa el flujo de calor endotérmico máximo mediante calorimetría de barrido diferencial, para la transición térmica que corresponde al cambio de la fase sólida a la líquida.

La expresión "farmacéuticamente aceptable" se refiere a un material que no es biológicamente o de otro modo inaceptable cuando se usa en la invención. Por ejemplo, la expresión "vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a un material que se puede incorporar a una composición y administrar a un paciente sin provocar efectos biológicos inaceptables o interactuar de una manera inaceptable con otros componentes de la composición. Dichos materiales farmacéuticamente aceptables habitualmente reúnen los estándares requeridos de los ensayos toxicológicos y de fabricación e incluyen los materiales identificados como principios inactivos adecuados por la U.S. Food and Drug administraron.

La expresión "sal farmacéuticamente aceptable" significa una sal preparada a partir de una base o un ácido que es aceptable para su administración a un paciente, tal como un mamífero (por ejemplo, sales que tienen una seguridad aceptable para mamíferos para un régimen de dosificación dado). Sin embargo, se entiende que las sales cubiertas por la invención no requieren ser sales farmacéuticamente aceptables, tal como sales de los compuestos intermedios que no están destinadas a su administración a un paciente. Las sales farmacéuticamente aceptables pueden derivar de bases inorgánicas u orgánicas farmacéuticamente aceptables y de ácidos inorgánicos u orgánicos farmacéuticamente aceptables. Además, cuando un compuesto contiene tanto un resto básico, tal como una amina, piridina o imidazol como un resto ácido tal como ácido carboxílico o tetrazol, se pueden formar zwitteriones y están incluidos dentro del término "sal" tal como se usa en el presente documento. Las sales derivadas de bases farmacéuticamente aceptables incluyen sales de amonio, calcio, cobre, férricas, ferrosas, litio, magnesio, mangánicas, manganosas, potasio, sodio y cinc y similares. Las sales derivadas de bases orgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, incluyendo aminas sustituidas, aminas cíclicas, aminas de origen natural y similares, tales como arginina, betaína, cafeína, colina, W,W-dibenciletilendiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilendiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperadina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina y similares. Las sales derivadas de ácidos inorgánicos farmacéuticamente aceptables incluyen sales de los ácidos borónico, carbónico, hidrohálico (bromhídrico, clorhídrico, fluorhídrico o yohídrico), nítrico, fosfórico, sulfámico y sulfúrico. Las sales de ácidos orgánicos farmacéuticamente aceptables incluyen sales de ácidos hidroxilo alifáticos (por ejemplo, ácidos cítrico, glucónico, glicólico, láctico, lactobiónico, málico y tartárico), ácidos monocarboxílico alifáticos (por ejemplo, ácidos acético, butírico, fórmico, propiónico y trifluoroacético), aminoácidos (por ejemplo, ácidos aspártico y glutámico), ácidos carboxílicos aromáticos (por ejemplo, ácidos benzoico, p-clorobenzoico, difenilacético, gentísico, hipúrico y trifenilacético), ácidos hidroxilo aromáticos (por ejemplo, ácidos o-hidroxibenzoico, p-hidroxibenzoico, 1-hidroxinaftalen-2-carboxílico y 3-hidroxinaftalen-2-carboxílico), ascórbico, ácidos dicarboxílicos (por ejemplo, ácidos fumárico, maleico, oxálico y succínico), glucurónico, mandélico, múcico, nicotínico, orótico, pamoico, pantoténico, ácidos sulfónicos (por ejemplo, ácidos bencenosulfónico, camfosulfónico, edisílico, etanosulfónico, isetiónico, metanosulfónico, naftalenosulfónico, naftalen-1,5-disulfónico, naftalen-2,6-disulfónico y p-toluenosulfónico), ácido xinafoico y similares.

La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" significa una cantidad suficiente para realizar un tratamiento cuando se administra a un paciente que lo necesita, es decir, la cantidad de fármaco necesaria para obtener el efecto terapéutico deseado. Por ejemplo, la cantidad terapéuticamente eficaz para tratar la hipertensión es una cantidad de compuesto necesaria para, por ejemplo, reducir, suprimir, eliminar o prevenir los síntomas de la hipertensión o para tratar la causa subyacente de la hipertensión. En una realización, la cantidad terapéuticamente eficaz es la cantidad de fármaco necesaria para reducir la presión sanguínea o la cantidad de fármaco necesaria para mantener la presión sanguínea normal. Por otro lado, la expresión "cantidad eficaz" significa una cantidad suficiente para obtener un resultado deseado, el cual puede no ser necesariamente un resultado terapéutico. Por ejemplo, cuando se estudia un sistema que comprende una enzima NEP, una "cantidad eficaz" puede ser la cantidad necesaria para inhibir la enzima.

El término "tratar" o "tratamiento", como se usa en el presente documento, significa tratar o el tratamiento de una enfermedad o una afección médica (tal como hipertensión) en un paciente), tal como un mamífero (en particular un ser humano) que incluye uno o más de los siguientes: (a) evitar que aparezca la enfermedad o afección médica, es decir, prevenir la reaparición de la enfermedad o afección médica o el tratamiento profiláctico de un paciente predispuesto a la enfermedad o afección médica; (b) mejorar la enfermedad o afección médica, es decir, eliminar o provocar la regresión de la enfermedad o afección médica en un paciente; (c) suprimir la enfermedad o afección médica, es decir, ralentización o detención del desarrollo de la enfermedad o afección médica en un paciente o (d) aliviar los síntomas de la enfermedad o afección médica en un paciente. Por ejemplo, la expresión "tratar la hipertensión" incluiría prevenir la aparición de la hipertensión, mejorar la hipertensión, suprimir la hipertensión y aliviar los síntomas de la hipertensión (por ejemplo, disminuir la presión sanguínea). El término "sujeto" o "paciente" pretende incluir a aquellos mamíferos, tales como seres humanos, que necesitan tratar o prevenir una enfermedad o que se están tratando en la actualidad para prevenir una enfermedad o tratar una enfermedad o afección específica, así como sujetos de ensayo en los cuales el compuesto cristalino se está evaluando o se está usando en un ensayo, por ejemplo un modelo animal.

Se pretende que todos los demás términos usados en el presente documento tengan sus significados ordinarios tal como los entienden los expertos habituales en la técnica a la que pertenecen.

PROCEDIMIENTOS DE SÍNTESIS GENERALES

El compuesto 1 de la invención y su forma cristalina no solvatada se puede sintetizar a partir de materiales de partida fácilmente disponibles como se describe a continuación y en los ejemplos. Se apreciará que cuando se dan las condiciones de proceso habituales o preferidas (es decir, temperaturas de reacción, tiempos, relaciones molares de reactivos, disolventes, presiones, etc.), también pueden usarse otras condiciones de proceso, a menos que se indique otra cosa. Se apreciará que si bien las condiciones específicas del proceso (es decir, temperaturas de cristalización, tiempos, relaciones molares de reactivos, disolventes, presiones, etc.) se dan, también pueden usarse otras condiciones de proceso, a menos que se indique otra cosa. En algunos casos, las reacciones o cristalizaciones se llevaron a cabo a temperatura ambiente y no se tomó medición de ninguna temperatura real. Se entiende que temperatura ambiente significa una temperatura dentro del intervalo normalmente asociado con la temperatura ambiente en un entorno de laboratorio y habitualmente estará en el intervalo de aproximadamente 15°C a aproximadamente 30 °C, tal como de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 25 °C. En otros casos, las reacciones o cristalizaciones se llevaron a cabo a temperatura ambiente y la temperatura se midió y se registró realmente.

Cualquier relación molar descrita en los métodos de la invención se puede determinar fácilmente mediante diversos métodos disponibles para los expertos en la técnica. Por ejemplo, dichas relaciones molares se pueden determinar con facilidad mediante RMN 1H. Como alternativa, se puede usar análisis elemental y HPLC para determinar la relación molar.

En una realización, la invención se refiere al ácido (2R,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(5-metiloxazol-2-carbonil)amino]pentanoico (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En otra realización, el compuesto 1 se puede preparar mediante acoplamiento del éster etílico del ácido (2R,4R)-4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanoico con ácido 5-metiloxazol-2-carboxílico para producir el compuesto 1.

En otra realización más, el compuesto 1 se puede preparar mediante (a) combinar ácido 5-metiloxazol-2-carboxílico y hexafluorofosfato de W,W,W',W’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronio (HATU) en W,W-dimetilformamida (DMF) y agitar a temperatura ambiente; (b) añadir éster etílico del ácido (2R,4R)-4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanoico y W,W-diisopropiletilamina y agitar a temperatura ambiente; (c) aislar y después disolver los sólidos resultantes en etanol seco y tetrahidrofurano seco; (d) añadir una solución de hidróxido de litio en agua y (e) aislar los sólidos resultantes para producir el compuesto 1. Los sólidos resultantes de las etapas anteriores (c) y (e) se pueden purificar también mediante cromatografía.

La preparación de la forma cristalina generalmente se realiza en un diluyente inerte adecuado, cuyos ejemplos incluyen, pero no se limitan a, acetona, acetonitrilo, acetato de etilo, metil etil cetona, metanol, etanol, isopropanol, isobutanol, diclorometano, metil f-butil éter, ciclopentil-metiléter, hexanos y similares y mezclas de los mismos, que, opcionalmente, contienen agua. Las mezclas de diluyentes inertes (también denominadas sistemas disolventes) incluyen acetona con agua, acetonitrilo con agua, etanol y acetato de etilo, acetato de etilo y hexanos y alcoholes inferiores (alquil C1-6-OH) con agua, por ejemplo, metanol y agua e isopropanol y agua. Los sistemas disolventes particularmente adecuados incluyen acetato de etilo y hexanos. Tras completarse la cristalización, el compuesto cristalino se puede aislar de la mezcla de reacción por medios convencionales tales como precipitación, filtración, concentración, centrifugado, secado al vacío y similares.

En una realización, la invención se refiere a una forma cristalina de ácido (2R,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(5-metiloxazol-2-carbonil)amino]pentanoico. En otra realización, la forma cristalina es una forma de cristal no solvatado de ácido (2R,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(5-metiloxazol-2-carbonil)amino]pentanoico (1').

En otra realización, la forma cristalina (1') se puede preparar mediante (a) disolver el ácido (2R,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(5-metiloxazol-2-carbonil)amino]pentanoico (1) en acetato de etilo y hexanos hasta su disolución completa y (b) aislar los sólidos resultantes para producir la forma cristalina (1'). La etapa (a) habitualmente se realiza a temperatura ambiente.

En otra realización más, la forma cristalina (1') se puede preparar mediante (a) acoplar éster etílico del ácido (2R,4R)-4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanoico con 5-metiloxazol-2-carboxilato de sodio para producir ácido ^2R,4Rj-5-(5'-doro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(5-metiloxazol-2-carbonil)amino]pentanoico; (b) tratar ácido ^2R,4Rj-5-(5'-doro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(5-metiloxazol-2-carbonil)amino]pentanoico con acetato de etilo y hexanos hasta su disolución completa y (c) aislar los sólidos resultante para producir la forma cristalina (1').

PROPIEDADES CRISTALINAS

Como es bien sabido en el campo del análisis por difracción de rayos X de polvo (PXRD), las alturas máximas relativas de los patrones de PXRD dependen de una diversidad de factores en relación con la preparación de la muestra y la geometría del instrumento, mientras que las posiciones de los picos son relativamente insensibles a los detalles experimentales. La PXRD, la calorimetría diferencial de barrido (CDB), los análisis termogravimétricos (TGA) y el estudio dinámico de sorción de humedad (DMS) (conocido también como análisis de sorción-desorción de humedad) se llevaron a cabo como se describe en el presente documento.

En otro aspecto, la invención se refiere al ácido ^2R,4Rj-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(5-metil-oxazol-2-carbonil)amino] pentanoico en forma cristalina. En otra realización, la forma cristalina no está solvatada (1') y se caracteriza por un patrón de PXRD en el que las posiciones de los picos están sustancialmente de acuerdo con las que se muestran en la FIG. 1. El inserto con líneas de puntos en la FIG. 1 muestra el patrón aumentado de y, para acentuar los picos con menor intensidad.

Los picos con intensidades relativas mayores del 1 % en el área se enumeran en la tabla siguiente. Este patrón muestra picos de difracción agudos en el intervalo de 5-35° en 20. Estos y otros picos en el patrón de difracción se pueden usar para identificar esta forma.

continuación

Por lo tanto, en una realización, la forma cristalina 1' se caracteriza por un patrón de PXRD que comprende picos de difracción a valores 20 de 8,48±0,20, 14,19±0,20, 17,03±0,20, 21,15±0,20 y 25,41±0,20.

En otra realización, la forma cristalina 1' se caracteriza por un patrón de PXRD que comprende picos de difracción a valores 20 de 7,51±0,20, 8,48±0,20, 14,19±0,20, 17,03±0,20, 17,62±0,20, 17,87±0,20, 20,59±0,20, 21,15±0,20, 21,88±0,20, 24,45±0,20, 24,78±0,20, 25,41 ±0,20, 25,67±0,20, 27,67±0,20 y 28,22±0,20.

En otra realización, la forma cristalina 1' se caracteriza además porque tiene uno o más picos de difracción adicionales a valores 20 seleccionados entre 16,09±0,20, 18,70±0,20, 19,21±0,20, 19,40±0,20, 21,64±0,20, 22,25±0,20, 26,43±0,20, 28,55±0,20, 30,73±0,20, 31,10±0,20, 32,64±0,20, 33,14±0,20 y 34,46±0,20; y en otra realización más, el compuesto cristalino se caracteriza además porque tiene tres o más de dichos picos de difracción adicionales.

En una realización, la forma cristalina 1' se caracteriza por el termograma de DSC o el trazo de calorimetría diferencial de barrido sustancialmente de acuerdo con el mostrado en la FIG. 2. La forma cristalina 1' se caracteriza por un trazo de calorimetría diferencial de barrido registrada a una velocidad de calentamiento de 10 °C por minuto que muestra un máximo en el flujo de calor endotérmico a una temperatura de entre aproximadamente 165 °C y aproximadamente 169 °C. El termograma de la DSC o trazo de calorimetría diferencial de barrido ilustra una endotermia de fusión con un pico a aproximadamente 167,1 °C, inicio a los 165,2 °C y con un área bajo la endotermia que corresponde a 114 J/g. La descomposición del compuesto coincide con la fusión y la contribución de 114 J/g hacia la entalpia de fusión no está establecida.

En una realización, la forma cristalina 1' se caracteriza por el perfil de TGA de la FIG. 3. Este perfil no muestra pérdida de masa hasta los aproximadamente 150 °C; el compuesto cristalino se descompone después de la fusión, como se ve por la pérdida significativa de peso que tiene lugar a un inicio de aproximadamente 159 °C.

En una realización, la forma cristalina 1' se caracteriza por la isoterma de la DMS de la FIG. 4. Esta forma es un sólido no higroscópico. La ganancia total de humedad observada es menor del 0,025 % en peso cuando se expone a una humedad relativa del 5-70 %. La ganancia total de humedad es menor del 0,235 % en peso cuando se expone a una humedad relativa del 5-90 %. No se encuentra una histéresis significativa entre dos ciclos de sorción-desorción consecutivos. El sólido obtenido después de los ciclos de sorción-desorción muestra el mismo patrón de PXRD que el material de partida, lo que indica que no hay cambio de forma después de este experimento.

La forma cristalina 1' puede estar caracterizada por la imagen de la PLM de la FIG. 5, que muestra que esta forma es cristalina, birrefringente, con agujas finas a partículas en forma de listón finas.

UTILIDAD

La extrapolación in vitro a in vivo del comportamiento de los fármacos en un sujeto continúa mejorando (véase, por ejemplo, Chiba et al., AAPS J., junio de 2009; 11(2): 262-276). En la presente invención, se evaluó la actividad in vitro de inhibidores de neprilisina humana (Ensayo 1) para determinar la actividad inhibidora de neprilisina del Compuesto 1. Se alcanzó un umbral de pKi > 9,0. Sin embargo, Se realizaron además experimentos in vivo adicionales para predecir de forma más precisa el comportamiento del Compuesto 1 en un sujeto.

Respecto al comportamiento in vivo, hay varias propiedades que son útiles para evaluar si se administrará al plasma una cantidad suficiente del fármaco para lograr el beneficio terapéutico necesario, por ejemplo, una baja depuración plasmática en todas las especies analizadas, una alta biodisponibilidad oral, una potenciación favorable de la respuesta de monofosfato de guanosina cíclico (cGMP) y una baja depuración renal para los sujetos con función renal comprometida.

Para la presente invención, se realizaron estudios farmacocinéticos orales e intravenosos en rata y perro, para determinar la biodisponibilidad oral del Compuesto 1 en comparación con otros inhibidores de neprilisina (Ensayo 2). Este ensayo también se utilizó para determinar la tasa de depuración plasmática de estos compuestos; se cree que una tasa de depuración baja predice cuánto tiempo se espera que el compuesto permanezca en circulación, es decir, su estabilidad y persistencia in vivo, sin identificar los procesos de eliminación individuales implicados. Adicionalmente, se llevó a cabo la biodisponibilidad oral y la tasa de depuración plasmática en una especie de mono (Ensayo 4).

Se realizaron estudios farmacocinéticos/farmacodinámicos en ratas para determinar el nivel de inhibición de neprilisina que se obtiene con el Compuesto 1 en comparación con otros inhibidores de neprilisina (Ensayo 3). En este ensayo se mide el nivel de monofosfato de guanosina cíclico (cGMP). El cGMP es una molécula efectora aguas abajo de la unión al receptor de péptidos natriuréticos y, por tanto, sirve como un biomarcador in vivo de la actividad de los péptidos natriuréticos. El nivel de cGMP aumenta cuando a un animal se le administra un inhibidor de neprilisina en comparación con el placebo. La invención encuentra utilidad en un método para aumentar los niveles basales de péptido natriurético auricular (ANP, forma siglada de atrial natriuretic peptide) o de GMPc en un sujeto con hipertensión, insuficiencia cardíaca o nefropatía, que comprende administrar a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz del Compuesto 1 o una forma cristalina del mismo. Los niveles de ANP y cGMP se miden en orina o plasma, o en ambos, en un sujeto. Por ejemplo, el nivel de ANP o cGMP se elevado en al menos > 1,1 veces, > 1,2 veces, > 1,3 veces, > 1,4 veces, > I , 5 veces, > 2 veces, > 3 veces, > 4 veces o > 5 veces durante un período de 24 horas en un sujeto cuando se le administra una cantidad terapéuticamente eficaz del Compuesto 1 o una forma cristalina del mismo.

El Compuesto 1 inhibe la enzima NEP y, por lo tanto, se espera que sea útil para el tratamiento y/o la prevención de afecciones médicas con capacidad de respuesta a la inhibición de NEP. Por tanto, se espera que los pacientes que padecen una enfermedad o trastorno que se trata inhibiendo la enzima NEP o aumentando los niveles de sus sustratos peptídicos, pueda tratarse administrando una cantidad terapéuticamente eficaz de Compuesto 1. Por ejemplo, al inhibir la NEP, se espera que el Compuesto 1 potencie los efectos biológicos de los péptidos endógenos que son metabolizados por la NEP, tales como péptidos natriuréticos, bombesina, bradicininas, calcitonina, endotelinas, encefalinas, neurotensina, sustancia P y péptido intestinal vasoactivo. Por tanto, se espera que este compuesto tenga otras acciones fisiológicas, por ejemplo, sobre los sistemas renal, nervioso central, reproductivo y gastrointestinal.

Los fármacos se eliminan del organismo de un sujeto mediante diversos procesos de eliminación que se clasifican de forma general como excreción y biotransformación. Excreción se refiere a la eliminación del fármaco intacto no volátil principalmente por vía renal (riñón) a la vejiga a la orina, mientras que otras vías de excreción incluyen la bilis (hígado), sudor, saliva, leche (a través de la lactancia) u otros líquidos corporales. Los fármacos volátiles como el alcohol y los anestésicos gaseosos se excretan a través de los pulmones en el aire espirado. Por otro lado, biotransformación, o metabolismo de fármacos, se refiere a un fármaco que se convierte químicamente en el cuerpo en un metabolito y suele ser un proceso enzimático. La excepción a esto es cuando un fármaco cambia químicamente de forma no enzimática, por ejemplo, la hidrólisis de ésteres. Las enzimas implicadas en la biotransformación de fármacos se encuentran principalmente en el hígado. Otros tejidos como el riñón, el pulmón, el intestino delgado y la piel también contienen enzimas metabólicas.

Los estudios farmacocinéticos también se pueden utilizar para investigar las vías de eliminación en un sujeto, por ejemplo, depuración renal mediante la excreción del fármaco administrado en la orina a lo largo del tiempo. La excreción renal del Compuesto 1 en las especies rata, perros y mono se realizó para evaluar la excreción renal como vía de eliminación (Ensayo 5). Esta vía de eliminación es importante para sujetos que tienen la función renal comprometida y necesitan terapias que se eliminen mínimamente por la excreción renal. En una realización, la excreción renal del Compuesto 1 o la forma cristalina del mismo en el sujeto es de aproximadamente <15 %, <10 %, <5 %, <3 %, <2 %, <1 % o <0,5 % de la dosis administrada durante 24 horas.

Como se describe a continuación en la sección de ensayos, junto con el Compuesto 1 se incluyeron compuestos comparadores de estructura química similar en un ensayo enzimático de NEP in vitro, y en determinaciones in vivo de la depuración plasmática, la biodisponibilidad oral y la excreción renal en múltiples especies animales. Sorprendentemente, se observaron diferencias significativas en los resultados. Si bien los compuestos comparadores individuales presentaron propiedades, similares a las del Compuesto 1 en uno o más ensayos, solo el Compuesto 1 presentó, al mismo tiempo, alta actividad inhibidora de neprilisina humana, alta biodisponibilidad oral, baja depuración plasmática, potenciación aumentada de cGMP y baja excreción renal, que se espera que conduzca a una utilidad particular en el tratamiento de enfermedades.

Enfermedades cardiovasculares

Potenciando los efectos de péptidos vasoactivos como los péptidos natriuréticos y la bradicinina, se espera que el Compuesto 1 resulte útil en el tratamiento y/o la prevención de afecciones médicas tales como enfermedades cardiovasculares. Véase, por ejemplo, Roques et al. (1993) Pharmacol. Rev. 45:87-146 y Dempsey et al. (2009) Amer. J. of Pathology 174(3):782-796. Las enfermedades cardiovasculares de particular interés incluyen la hipertensión y la insuficiencia cardíaca. La hipertensión incluye, a modo de ilustración y no de limitación: hipertensión primaria, que también denomina hipertensión esencial o hipertensión idiopática; hipertensión secundaria; hipertensión con nefropatía concomitante; hipertensión grave con o sin nefropatía concomitante; hipertensión pulmonar, incluida la hipertensión arterial pulmonar; e hipertensión resistente. La insuficiencia cardíaca incluye, a modo de ilustración y no de limitación: insuficiencia cardiaca congestiva; insuficiencia cardíaca aguda; insuficiencia cardíaca crónica, por ejemplo, con fracción de eyección ventricular izquierda reducida (también denominada insuficiencia cardíaca sistólica) o con fracción de eyección ventricular izquierda conservada (también denominada insuficiencia cardíaca diastólica); e insuficiencia cardíaca descompensada aguda y crónica. Por tanto, la invención encuentra utilidad en un método para tratar la hipertensión, particularmente la hipertensión primaria o hipertensión arterial pulmonar, que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de Compuesto 1.

Para el tratamiento de la hipertensión primaria, la cantidad terapéuticamente eficaz es normalmente la cantidad que es suficiente para reducir la presión sanguínea del paciente. Esto incluiría tanto la hipertensión leve a moderada como la hipertensión grave. Cuando se utiliza para tratar la hipertensión, el Compuesto 1 puede administrarse en combinación con otros agentes terapéuticos tales como antagonistas de la aldosterona, inhibidores de aldosterona sintasa, inhibidores de la enzima convertidora de la angiotensina e inhibidores de la enzima convertidora de la angiotensina de /neprilisina de acción doble, activadores y estimuladores de la enzima convertidora de la angiotensina 2 (ECA2), vacunas para angiotensina-II, agentes antidiabéticos, agentes antilipídicos, agentes antitrombóticos, antagonistas del receptor de AT1 y antagonista del receptor de ATi/inhibidores de neprilisina de acción doble, antagonistas de receptores pi-adrenérgicos, antagonista de receptores p-adrenérgicos/antagonistas de receptores de ai de acción doble, bloqueadores de los canales de calcio, diuréticos, antagonistas del receptor de endotelina, inhibidores de la enzima convertidora de la endotelina, inhibidores de neprilisina, péptidos natriuréticos y sus análogos, antagonistas del receptor de depuración de los péptidos natriuréticos, donantes de óxido nítrico, agentes antinflamatorios no esteroideos, inhibidores de la fosfodiesterasa (específicamente inhibidores de PDE-V), agonistas del receptores de prostaglandinas, inhibidores de la renina, estimuladores y activadores de guanilato ciclasa soluble, y combinaciones de los mismos. En un uso particular de la invención, el compuesto de la invención se combina con un antagonista del receptor de ATi, un bloqueador de los canales de calcio, un diurético, o una combinación de los mismos, y se utiliza para tratar la hipertensión primaria. En otro uso particular de la invención, el compuesto de la invención se combina con un antagonista del receptor de ATi y se utiliza para tratar la hipertensión con nefropatía concomitante. Cuando se utiliza para tratar la hipertensión resistente, el compuesto puede administrarse en combinación con otros agentes terapéuticos tales como inhibidores de la aldosterona sintasa.

Para el tratamiento de la hipertensión arterial pulmonar, la cantidad terapéuticamente eficaz es normalmente la cantidad que es suficiente para reducir la resistencia vascular pulmonar. Otros objetivos de la terapia son mejorar la capacidad de ejercicio del paciente. Por ejemplo, en un contexto clínico, la cantidad terapéuticamente eficaz puede ser la cantidad que mejora la capacidad de un paciente para caminar cómodamente durante un período de 6 minutos (cubriendo una distancia de aproximadamente 20 a 40 metros). Cuando se usa para tratar la hipertensión arterial pulmonar el Compuesto 1 puede administrarse en combinación con otros agentes terapéuticos tales como antagonistas de receptores a-adrenérgicos, antagonistas de receptores pi-adrenérgicos, agonistas de receptores p2-adrenérgicos, inhibidores de la enzima convertidora de la angiotensina, anticoagulantes, bloqueadores de los canales de calcio, diuréticos, antagonistas del receptor de endotelina, inhibidores de la PDE-V, análogos de prostaglandinas, inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina y combinaciones de los mismos. En un uso particular de la invención, el Compuesto 1 se combina con un inhibidor de la PDE-V o un inhibidor selectivo de la recaptación de serotonina y se utiliza para tratar la hipertensión arterial pulmonar.

La invención también encuentra utilidad en un método para tratar la insuficiencia cardíaca, en particular la insuficiencia cardíaca congestiva (incluida la insuficiencia cardíaca congestiva tanto sistólica como diastólica), que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de Compuesto 1. Normalmente, la cantidad terapéuticamente eficaz es la cantidad que es suficiente para reducir la presión sanguínea y/o mejorar las funciones renales. En un contexto clínico, la cantidad terapéuticamente eficaz puede ser la cantidad suficiente para mejorar la hemodinámica cardíaca, como por ejemplo la reducción de la presión de enclavamiento pulmonar, la presión auricular derecha, la presión de llenado y la resistencia vascular. El compuesto puede administrarse como una forma de dosificación intravenosa. Cuando se utiliza para tratar la insuficiencia cardíaca, el Compuesto 1 puede administrarse en combinación con otros agentes terapéuticos tales como antagonistas del receptor de adenosina, rompedores de los productos finales de la glucación avanzada, antagonistas de la aldosterona, antagonistas del receptor de ATi, antagonistas de receptores pi-adrenérgicos, antagonista de receptores p-adrenérgicos/antagonistas de receptores de ai de acción doble, inhibidores de quimasa, digoxina, diuréticos, inhibidores de la enzima convertidora de la endotelina (ECE), antagonistas del receptor de endotelina, péptidos natriuréticos y sus análogos, antagonistas del receptor de depuración de los péptidos natriuréticos, donantes de óxido nítrico, análogos de prostaglandinas, inhibidores de la PDE-V, activadores y estimuladores de guanilato ciclasa soluble, y antagonistas del receptor de vasopresina. En un uso particular de la invención, el Compuesto 1 se combina con un antagonista de la aldosterona, un antagonista de receptores pi-adrenérgicos, un antagonista del receptor de ATi o un diurético, y se utiliza para tratar la insuficiencia cardíaca congestiva.

Diarrea

Como inhibidor de la NEP, se espera que el Compuesto 1 inhiba la degradación de las encefalinas endógenas y, por tanto, tales compuestos también pueden resultar útiles para el tratamiento de la diarrea, incluyendo diarrea infecciosa y secretora/acuosa. Véase, por ejemplo, Baumer et al. (i992) Gut 33:753-758; Farthing (2006) Digestive Diseases 24:47-58; y Margais-Collado (i987) Eur. J. Pharmacol. i44(2): i25-i32. Cuando se utiliza para tratar la diarrea, el

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compuesto 1 puede combinarse con uno o más agentes antidiarreicos adicionales.

Nefropatías

Potenciando los efectos de péptidos vasoactivos como los péptidos natriuréticos y la bradicinina, se espera que el Compuesto 1 potencie la función renal (véase Chen et al. (1999) Circulation 100:2443-2448; Lipkin et al. (1997) Kidney Int. 52:792-801; y Dussaule et al. (1993) Clin. Sci. 84:31-39) y resulten útiles en el tratamiento y/o la prevención de nefropatías en un sujeto con afectación renal. Las nefropatías de particular interés incluyen la nefropatía diabética, nefropatía crónica, proteinuria, y en particular lesión renal aguda (provocada, por ejemplo, por cirugía cardiovascular, quimioterapia o por el uso de colorantes de contraste en el diagnóstico por la imagen) o insuficiencia renal aguda (véase Sharkovska et al. (2011) Clin. Lab. 57:507-515 y Newaz et al. (2010) Renal Failure 32:384-390).

Un sujeto con afectación renal que tiene una nefropatía crónica (NC) puede clasificarse de acuerdo con las Pautas de la National Kidney Foundation Kidney Disease Outcomes Quality Initiative (NKF KDOQI). Una vez que se ha constatado la nefropatía crónica, es decir, daño renal o filtración glomerular (FG) <60 ml/min/1,73 m2 durante >3 meses, el estadio de la enfermedad puede asignarse de acuerdo con la clasificación de NC del KDOQI. Estas incluyen el Estadio 1 (daño renal con FG normal o aumentada): FG >90; el Estadio 2 (daño renal con FG con disminución leve): FG 60-89; el Estadio 3 (FG con disminución moderada): FG 30-59; el Estadio 4 (FG con disminución grave): FG 15­ 29; y el Estadio 5 (insuficiencia renal): FG <15 (o diálisis). La FG se define en unidades de ml/min/1,73 m2

La invención resulta útil en un método para tratar a un sujeto con afectación renal que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de Compuesto 1 o una forma cristalina del mismo, específicamente la forma cristalina 1'. Este método incluye además el tratamiento de un sujeto con afectación renal con hipertensión o insuficiencia cardíaca. Cuando se utiliza para tratar la nefropatía, el Compuesto 1 o una forma cristalina del mismo, específicamente la forma cristalina 1', puede administrarse en combinación con otros agentes terapéuticos tales como inhibidores de la enzima convertidora de la angiotensina, antagonistas del receptor de AT1 y diuréticos.

La invención también encuentra utilidad en un método para el tratamiento de un sujeto con afectación renal que tiene una enfermedad renal crónica con una filtración glomerular estimada (FGe) de entre 60 ml/min/1,73 m2 y 15 ml/min/1,73 m2, que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de Compuesto 1 o una forma cristalina del mismo, específicamente la forma cristalina 1'. La invención también encuentra utilidad en un método para el tratamiento de un sujeto con afectación renal que tiene una enfermedad renal crónica con una filtración glomerular estimada (FGe) > 90 ml/min/1,73 m2 (Estadio 1) o una FGe <15 ml/min/1,73 m2 (Estadio 5), que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de Compuesto 1 o una forma cristalina del mismo, específicamente la forma cristalina 1'. Para los fines de la presente invención, la enfermedad renal grave puede clasificarse como una FGe <30 ml/min/1,73 m2. En aún otra realización, se incluye un método para el tratamiento de un sujeto con afectación renal que tiene una enfermedad renal crónica clasificada como de Estadio 1, Estadio 2, Estadio 3, Estadio 4, Estadio 5 o intervalos de FGe que cubren uno o más de estos estadios, con el Compuesto 1 o una forma cristalina del mismo, específicamente la forma cristalina 1'.

Terapia preventiva

Al potenciar los efectos de los péptidos natriuréticos, también se espera que el Compuesto 1 sea útil en la terapia preventiva, debido a los efectos antihipertróficos y antifibróticos de los péptidos natriuréticos (véase Potter et al. (2009) Handbook of Experimental Pharmacology 191:341-366), por ejemplo, en la prevención de la progresión de la insuficiencia cardíaca después de un infarto de miocardio, la prevención de la reestenosis arterial después de una angioplastia, la prevención del engrosamiento de las paredes de los vasos sanguíneos después de operaciones vasculares, la prevención de la ateroesclerosis y la prevención de la angiopatía diabética.

Glaucoma

Al potenciar los efectos de los péptidos natriuréticos, se espera que el Compuesto 1 sea útil para tratar el glaucoma. Véase, por ejemplo, Diestelhorst et al. (1989) International Ophthalmology 12:99-101. Cuando se utiliza para tratar el glaucoma, el Compuesto 1 puede combinarse con uno o más agentes antiglaucoma adicionales.

Alivio del dolor

Como inhibidor de la NEP, se espera que el Compuesto 1 inhiba la degradación de las encefalinas endógenas y, por tanto, tal compuesto también puede resultar útil como analgésico. Véase, por ejemplo, Roques et al. (1980) Nature 288:286-288 y Thanawala et al. (2008) Current Drug Targets 9:887-894. Cuando se utiliza para tratar el dolor, el Compuesto 1 puede combinarse con uno o más fármacos antinociceptivos adicionales, tales como inhibidores de la aminopeptidasa N o de la dipeptidil peptidasa III, agentes antinflamatorios no esteroideos, inhibidores de la recaptación de la monoamina, relajantes musculares, antagonistas del receptor de NMDA, agonistas de los receptores opioides, agonistas del receptor de serotonina 5-HT-id y antidepresivos tricíclicos.

Otras utilidades

Debido a sus propiedades de inhibición de NEP, también se espera que el Compuesto 1 sea útil como un agente antitusígeno, así como resultar útil en el tratamiento de la hipertensión portal asociada con la cirrosis hepática (véase Sansoe et al. (2005) J. Hepatol. 43:791-798), cáncer (véase Vesely (2005) J. Investigative Med. 53:360-365), depresión (véase Noble et al. (2007) Exp. Opin. Ther. Targets 11:145-159), trastornos menstruales, parto prematuro, preeclampsia, endometriosis, trastornos reproductivos (por ejemplo, infertilidad masculina y femenina, síndrome de ovario poliquístico, fallo de implantación) y disfunción sexual masculina y femenina, incluida la disfunción eréctil masculina y el trastorno de la excitación sexual femenina. Más específicamente, se espera que el Compuesto 1 sea útil en el tratamiento de la disfunción sexual femenina (véase Pryde et al. (2006) J. Med. Chem. 49:4409-4424), que a menudo se define como la dificultad o incapacidad de una paciente para encontrar satisfacción en la expresión sexual. Esto cubre una variedad de diversos trastornos sexuales femeninos que incluyen, a modo de ilustración y no de limitación, trastorno del deseo sexual hipoactivo, trastorno de la excitación sexual, trastorno orgásmico y trastorno de dolor sexual. Cuando se utiliza para tratar tales trastornos, especialmente la disfunción sexual femenina, el compuesto de la invención puede combinarse con uno o más de los siguientes agentes secundarios: inhibidores de la PDE-V, agonistas de la dopamina, agonistas y/o antagonistas de los receptores de estrógenos, andrógenos y estrógenos. Debido a su propiedad de inhibición de NEP, también se espera que el Compuesto 1 tenga propiedades antinflamatorias, y se espera que tenga utilidad como tal, particularmente cuando se utiliza en combinación con estatinas.

Estudios recientes sugieren que la NEP desempeña un papel en la regulación de la función nerviosa en la diabetes con deficiencia de insulina y la obesidad inducida por la alimentación. Coppey et al. (2011) Neuropharmacology 60:259-266. Por lo tanto, debido a su propiedad de inhibición de NEP, también se espera que el Compuesto 1 sea útil para proporcionar protección contra el deterioro nervioso provocado por la diabetes o la obesidad inducida por la alimentación.

La cantidad de Compuesto 1 administrada por dosis o la cantidad total administrada por día puede predeterminarse o puede determinarse para cada paciente individual teniendo en cuenta numerosos factores, entre ellos la índole y gravedad de la afección del paciente, la afección que se esté tratando, la edad, el peso y la salud general del paciente, la tolerancia del paciente al agente activo, la vía de administración, consideraciones farmacológicas tales como la actividad, la eficacia, los perfiles farmacocinéticos y toxicológicos del compuesto y cualquier agente secundario que se esté administrando, y similares. El tratamiento de un paciente que padece una enfermedad o afección médica (tal como hipertensión) puede comenzar con una dosificación predeterminada o una dosis determinada por el médico responsable, y continuará durante un período de tiempo necesario para prevenir, mejorar, suprimir o aliviar los síntomas de la enfermedad o afección médica. Los pacientes sometidos a tal tratamiento se controlarán normalmente de forma rutinaria para determinar la eficacia de la terapia. Por ejemplo, en el tratamiento de la hipertensión, pueden utilizarse mediciones de la presión arterial para determinar la eficacia del tratamiento. Indicadores similares para otras enfermedades y afecciones descritas en el presente documento son bien conocidos y están fácilmente disponibles para el médico responsable. El control continuo por parte del médico garantizará que la cantidad óptima de Compuesto 1 se administrará en un momento dado, además de facilitar la determinación de la duración del tratamiento. Esto es de particular valor cuando también se administran agentes secundarios, ya que su selección, dosis y duración de la terapia también pueden precisar un ajuste. De esta forma, el régimen de tratamiento y la pauta posológica pueden ajustarse durante el curso de la terapia de modo que se administre la menor cantidad de agente activo que presente la eficacia deseada y, además, esa administración se continúa solo mientras sea necesario para tratar satisfactoriamente la enfermedad o afección médica.

El Compuesto 1 también encuentra utilidad como un intermedio útil para la preparación de formas cristalinas del Compuesto 1, entre ellas, por ejemplo, la forma cristalina 1'.

Herramientas de investigación

Dado que Compuesto 1 posee actividad de inhibición de la enzima NEP, también es útil como herramienta de investigación para investigar o estudiar sistemas biológicos o muestras que tienen una enzima NEP, por ejemplo, para estudiar enfermedades en que la enzima NEP o sus sustratos peptídicos desempeñan un papel. En tales estudios, que pueden realizarse in vitro o in vivo, puede emplearse cualquier sistema biológico adecuado o muestra que tenga una enzima NEP. Los sistemas biológicos o muestras representativos adecuados para tales estudios incluyen, pero sin limitación, células, extractos celulares, membranas plasmáticas, muestras de tejido, órganos aislados, mamíferos (tales como ratones, ratas, cobayas, conejos, perros, cerdos, humanos, y así sucesivamente), y similares, siendo los mamíferos de particular interés. Por tanto, la actividad de la enzima NEP de un mamífero puede inhibirse administrando una cantidad de Compuesto 1 inhibidora de NEP.

Cuando se utiliza como herramienta de investigación, un sistema biológico o muestra que comprende una enzima NEP normalmente se pone en contacto con una cantidad de Compuesto 1 inhibidora de la enzima NEP. Después de que el sistema biológico o la muestra se exponen al compuesto, los efectos de la inhibición de la enzima NEP se determinan utilizando procedimientos y equipos convencionales, tal como midiendo la unión al receptor en un ensayo de unión o midiendo los cambios mediados por ligando en un ensayo funcional. La exposición abarca la puesta en contacto de células o tejidos con el compuesto, la administración del compuesto a un mamífero, por ejemplo por i.p., v.o., i.v., s.c., o administración inhalada, etcétera. Esta etapa de determinación puede implicar medir una respuesta (un análisis cuantitativo) o puede implicar hacer una observación (un análisis cualitativo). La medición de una respuesta implica, por ejemplo, determinar los efectos del compuesto en el sistema biológico o la muestra utilizando procedimientos y equipos convencionales, tal como ensayos de actividad enzimática y medición de cambios mediados por sustrato o producto enzimático en ensayos funcionales. Los resultados del ensayo se pueden utilizar para determinar el nivel de actividad, así como la cantidad de compuesto necesaria para lograr el resultado deseado, es decir, una cantidad inhibidora de la enzima NEP. Normalmente, la etapa de determinación implicará determinar los efectos de la inhibición de la enzima NEP.

Adicionalmente, el Compuesto 1 puede utilizarse como una herramienta de investigación para evaluar otros compuestos químicos y, por tanto, también es útil en ensayos de cribado para descubrir, por ejemplo, nuevos compuestos que tienen actividad inhibidora de NEP. De esta manera, el Compuesto 1 se utiliza como patrón en un ensayo para permitir la comparación de los resultados obtenidos con un compuesto de prueba y con el compuesto 1 para identificar los compuestos de prueba que tienen una actividad aproximadamente igual o superior, si la hubiera. Por ejemplo, los datos de pKi para un compuesto de prueba o un grupo de compuestos de prueba se comparan con los datos de pKi para el Compuesto 1 para identificar los compuestos de prueba que tienen las propiedades deseadas, por ejemplo, compuestos de ensayo que tienen un valor de pKi igual o superior al compuesto de la invención. Esto incluye, como aspectos separados, tanto la generación de datos de comparación (utilizando los ensayos apropiados) como el análisis de datos de prueba para identificar compuestos de prueba de interés. Por tanto, un compuesto de prueba puede evaluarse en un ensayo biológico, mediante un método que comprende las etapas de: (a) realizar un ensayo biológico con un compuesto de prueba para proporcionar un primer valor de ensayo; (b) realizar el ensayo biológico con el compuesto 1 para proporcionar un segundo valor de ensayo; en donde la etapa (a) se realiza antes, después o simultáneamente con la etapa (b); y (c) comparar el primer valor de ensayo de la etapa (a) con el segundo valor de ensayo de la etapa (b). Los ensayos biológicos de ejemplo incluyen un ensayo de inhibición de la enzima NEP.

La invención encuentra además utilidad en un método de estudio de un sistema biológico o muestra que comprende una enzima NEP, comprendiendo el método: (a) poner en contacto el sistema biológico o la muestra con el Compuesto 1; y (b) determinar los efectos provocados por el compuesto sobre el sistema biológico o la muestra.

COMPOSICIONES Y FORMULACIONES FARMACÉUTICAS

El compuesto 1 habitualmente se administra a un paciente en forma de una composición o formulación farmacéutica. Dichas composiciones farmacéuticas se pueden administrar al paciente por cualquier vía de administración aceptable que incluye, pero no se limita a, los modos de administración oral, rectal, vaginal, nasal, inhalada, tópica (incluyendo transdérmica), ocular y parenteral. Además, el compuesto 1 se puede administrar, por ejemplo, por vía oral, en dosis múltiples al día (por ejemplo, dos, tres o cuatro veces al día), en una única dosis diaria o en una única dosis a la semana. Se entenderá que cualquier forma del compuesto 1, (es decir, una base libre, un ácido libre, una sal farmacéuticamente aceptable, un solvato, etc.) que es adecuada para el modo de administración particular, se puede usar en las composiciones farmacéuticas analizadas en el presente documento.

En consecuencia, en una realización, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y el compuesto 1. La composición puede contener otros agentes terapéuticos y/o de formulación si se desea. Cuando se analizan las composiciones, "compuesto 1" se puede denominar también en el presente documento como "agente activo", para distinguirlo de otros componentes de la formulación, tales como el vehículo. Por lo tanto, se entiende que la expresión "agente activo" incluye el compuesto 1 así como sus sales farmacéuticamente aceptables.

Las composiciones farmacéuticas de la invención habitualmente contienen una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto 1. Los expertos en la materia reconocerán, sin embargo, que una composición farmacéutica puede contener más de una cantidad terapéuticamente eficaz, tal como composiciones a granel o menos de una cantidad terapéuticamente eficaz, es decir, dosis unitarias individuales diseñadas para administración múltiple para conseguir una cantidad terapéuticamente eficaz. Habitualmente, la composición contendrá aproximadamente el 0,01-95 % en peso del agente activo, incluyendo, aproximadamente el 0,01-30 % en peso, tal como aproximadamente el 0,01-10 % en peso, dependiendo de la cantidad real de la propia formulación, la vía de administración, la frecuencia de dosificación, etc. En una realización, una composición adecuada para una forma de dosificación oral, por ejemplo, puede contener aproximadamente el 5-70 % en peso o aproximadamente el 10-60 % en peso del agente activo.

Puede usarse cualquier vehículo o excipiente convencional en las composiciones farmacéuticas de la invención. La elección de un vehículo o excipiente particular, o combinaciones de vehículos o excipientes, dependerá del modo de administración que se use para tratar a un paciente o tipo de afección médica o patología particular. En este sentido, la preparación de una composición adecuada para una forma particular de administración está bien incluida dentro del alcance de los expertos en las técnicas farmacéuticas. Además, los vehículos o excipientes usados en dichas composiciones están disponibles en el mercado. A modo de ilustración adicional, se describen técnicas de formulación convencionales en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20.a edición, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000) y H. C. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7a edición, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999).

Los ejemplos representativos de materiales que pueden servir como vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: azúcares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; almidones, tales como almidón de maíz y almidón de patata; celulosa, tal como celulosa microcristalina y sus derivados, tales como carboximetilcelulosa de sodio, etilcelulosa y acetato de celulosa; sales de ácidos grasos, tales como estearato de magnesio; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; excipientes, tales como manteca de cacao y ceras de supositorio; aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de cártamo, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja; glicoles, tales como propilenglicol; polioles, tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol; ésteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; agentes tamponantes, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; ácido algínico; agua libre de pirógenos; solución salina isotónica; solución de Ringer; alcohol etílico; soluciones tampón de fosfato; gases de propulsión comprimidos, tales como clorofluorocarbonos e hidrofluorocarbonos y otras sustancias compatibles no tóxicas empleadas en composiciones farmacéuticas.

En una realización de la invención, el vehículo farmacéuticamente aceptable es estearato de magnesio. Por ejemplo, la composición farmacéutica puede comprender el compuesto 1 o una forma cristalina 1' y estearato de magnesio en una proporción de aproximadamente 3:1 a aproximadamente 10:1 de compuesto 1 o una forma cristalina 1' a estearato de magnesio. Otras proporciones de compuesto 1 o una forma cristalina 1' a estearato de magnesio incluyen, pero no se limitan a, 1:1,5:1, 15:1, 20:1,25:1, 30:1 y 50:1.

Habitualmente las composiciones farmacéuticas se preparan mezclando o combinando de manera completa e íntima el agente activo con un vehículo farmacéuticamente aceptable y uno o más ingredientes opcionales. Después, la mezcla combinada de forma uniforme resultante se puede conformar o cargar en comprimidos, cápsulas, píldoras, botes, cartuchos, dispensadores y similares usando procedimientos y equipamiento convencionales.

En una realización, las composiciones farmacéuticas son adecuadas para administración oral. Las composiciones adecuadas para administración oral pueden estar en forma de cápsulas, comprimidos, píldoras, pastillas para chupar, sellos, grageas, polvos, gránulos; soluciones o suspensiones en un líquido acuoso o no acuoso; emulsiones líquidas de aceite en agua o agua en aceite; elixires o jarabes y similares; conteniendo cada uno una cantidad predeterminada del agente activo.

Cuando se pretende para administración oral en una forma de dosificación sólida (cápsulas, comprimidos, píldoras y similares), habitualmente la composición comprenderá el agente activo y uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, tales como citrato sódico, fosfato dicálcico o estearato de magnesio. Las formas sólidas de dosificación también pueden comprender agentes de relleno o expansores, tales como almidones, celulosa microcristalina, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y/o ácido silícico; aglutinantes, tales como carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y/o goma arábiga; humectantes, tales como glicerol; agentes disgregantes, tales como agar-agar, carbonato cálcico, almidón de patata o tapioca, ácido algínico, determinados silicatos y/o carbonato de sodio; agentes retardadores de la disolución, tales como parafina; acelerantes de la absorción, tales como compuestos de amonio cuaternario; agentes humectantes, tales como alcohol cetílico y/o monoestearato de glicerol; absorbentes, tales como caolín y/o arcilla de bentonita; lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, lauril sulfato de sodio y/o mezclas de los mismos; agentes colorantes y agentes tamponantes. A efectos de la presente invención, las expresiones "vehículos farmacéuticamente aceptables" son inclusivas de todos los términos tales como vehículos, agentes de relleno o expansores, aglutinantes, humectantes, agentes retardadores de la disolución, agentes humectantes, absorbentes, lubricantes, agentes colorantes y agentes tamponantes descritos anteriormente.

Agentes de liberación, agentes humectantes, agentes de recubrimiento, edulcorantes, agentes aromatizantes y perfumantes, conservantes y antioxidantes también pueden estar presentes en las composiciones farmacéuticas. Los agentes de recubrimiento a modo de ejemplo para comprimidos, cápsulas, píldoras y similares, incluyen los utilizados para recubrimientos entéricos, tales como ftalato de acetato de celulosa, ftalato de acetato de polivinilo, ftalato de hidroxipropil metilcelulosa, copolímeros de ácido metacrílico y de éster del ácido metacrílico, trimelitato de acetato de celulosa, carboximetil etil celulosa, acetato succinato de hidroxipropil metil celulosa y similares. Los ejemplos de antioxidantes farmacéuticamente aceptables incluyen: antioxidantes hidrosolubles, tales como ácido ascórbico, clorhidrato de cisteína, bisulfato sódico, metabisulfato sódico sulfito sódico y similares; antioxidantes solubles en aceite, tales como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, lecitina, galato de propilo, alfatocoferol y similares y agentes quelantes de metales, tales como ácido cítrico, ácido etilendiamina tetraacético, sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico y similares.

Las composiciones también se pueden formular para proporcionar una liberación lenta o controlada del agente activo usando, a modo de ejemplo, hidroxipropil metil celulosa en proporciones variables u otras matrices poliméricas, liposomas y/o microesferas. Además, las composiciones farmacéuticas de la invención pueden contener agentes opacificantes y se pueden formular de modo que liberen el agente activo solo o de manera preferente, en una determinada parte del tracto gastrointestinal, opcionalmente, de manera retardada. Los ejemplos de composiciones incluidas que pueden utilizarse incluyen sustancias poliméricas y ceras. El agente activo también puede estar en forma microencapsulada, opcionalmente con uno o más de los excipientes descritos anteriormente.

Una realización de la invención incluye una forma de dosificación oral que comprende el compuesto 1 o la forma cristalina 1' en una cápsula, comprimido, líquido o suspensión. Otra realización de la invención se refiere a una forma de dosificación oral en donde una liberación del compuesto 1 o la forma cristalina 1' en un sujeto es una liberación inmediata, controlada o retrasada. Si se usa una cápsula como una forma de dosificación oral, otra realización incluye que la cápsula esté compuesta por gelatina, polisacáridos o polímeros sintéticos. En una realización particular, la cápsula comprende hidroxipropil metilcelulosa.

Los materiales para una cápsula adecuados de acuerdo con la invención se seleccionan entre gelatina, derivados de celulosa, almidón, derivados de almidón, chitosán y plásticos sintéticos. Si se usa gelatina como material para una cápsula, esta se puede usar mezclada con otros aditivos seleccionados entre polietilenglicol (PEG), glicerol, sorbitol, polipropilenglicol, copolímeros de bloque PEO-PPO y otros polialcoholes y poliéteres. Cuando se usa un derivado de celulosa como el material para la cápsula, hidroxipropilmetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, metilcelulosa, hidroximetilcelulosa e hidroxietilcelulosa son los polímeros preferidos. Si se usan plásticos sintéticos como material para la cápsula, polietileno, policarbonato, poliéster, polipropileno y tereftalato de polietileno son los materiales preferidos. En particular se prefieren polietileno, policarbonato o tereftalato de polietileno.

Las formas farmacéuticas líquidas adecuadas para la administración oral incluyen, a modo de ilustración, emulsiones farmacéuticamente aceptables, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires. Las formas farmacéuticas líquidas habitualmente comprenden el agente activo y un diluyente inerte, tal como, por ejemplo, agua u otros disolventes, agentes solubilizantes y emulsionantes, tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, aceites (por ejemplo, semillas de algodón, cacahuete, maíz, germen, oliva, ricino y sésamo), glicerol, alcohol tetrahidrofurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos de sorbitán y mezclas de los mismos. Las suspensiones pueden contener agentes de suspensión tales como, por ejemplo, alcoholes isoestearílicos etoxilados, polioxietilensorbitol y ésteres de sorbitán, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto y mezclas de los mismos.

Cuando están destinadas a administración oral, las composiciones farmacéuticas de la invención se pueden empaquetar en una forma farmacéutica unitaria. La expresión "forma farmacéutica unitaria" se refiere a una unidad físicamente aislada adecuada para administrar a un paciente, es decir, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada del agente activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado ya sea sola o en combinación con una o más dosis adicionales. Por ejemplo, dichas formas farmacéuticas unitarias pueden ser cápsulas, comprimidos, píldoras y similares.

En otra realización, las composiciones de la invención son adecuadas para su administración por inhalación y habitualmente estarán en forma de un aerosol o un polvo. Dichas composiciones se administran generalmente usando dispositivos de administración bien conocidos, tales como un nebulizador, polvo seco o inhalador de dosis medida. Los dispositivos nebulizadores producen una corriente de aire a alta velocidad que provoca que la composición se pulverice en forma de una niebla que se dirige al tracto respiratorio de un paciente. Una formulación para nebulizador a modo de ejemplo comprende el agente activo disuelto en un vehículo para formar una solución o micronizado, y combinado con un vehículo para formar una suspensión de partículas micronizadas de un tamaño respirable. Los inhaladores de polvo seco administran el agente activo en forma de un polvo de flujo libre que se dispersa en la corriente de aire de un paciente durante la inspiración. Una formulación en polvo seco a modo de ejemplo comprende el ingrediente activo mezclado en seco con un excipiente tal como lactosa, almidón, manitol, dextrosa, ácido poliláctico, poliláctido-co-glicólido y combinaciones de los mismos. Los inhaladores de dosis medida descargan una cantidad medida del agente activo usando un gas propelente comprimido. Una formulación de dosis medida a modo de ejemplo comprende una solución o suspensión del agente activo en un propelente licuado, tal como clorofluorocarbono o hidrofluoroalcano. Los componentes opcionales de dichas formulaciones incluyen codisolventes, tales como etanol o pentano y tensioactivos, tales como trioleato de sorbitán, ácido oleico, lecitina, glicerina y lauril sulfato de sodio. Dichas composiciones habitualmente se preparan añadiendo hidrofluoroalcano congelado o presurizado a un recipiente adecuado que contiene el agente activo, etanol (si está presente) y el tensioactivo (si está presente). Para preparar una suspensión, el agente activo se microniza y después se combina con el propulsor. Como alternativa, se puede preparar una formulación para suspensión secando por pulverización un revestimiento de tensioactivo sobre partículas micronizadas del agente activo. La formulación se carga después en un bote para aerosol, que forma parte del inhalador.

El compuesto 1 y las composiciones del mismo también se pueden administrar por vía parenteral, por ejemplo, por inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular o intraperitoneal. Para dicha administración, el agente activo se proporciona en una solución, suspensión o emulsión estéril. Los disolventes a modo de ejemplo para preparar dichas formulaciones incluyen agua, solución salina, electrolitos, alcoholes de bajo peso molecular tales como propilenglicol y polietilenglicol, aceites, aminoácidos, gelatina, azúcares, ésteres de ácidos grasos tales como oleato de etilo y similares. Las formulaciones parenterales también pueden contener uno o más antioxidantes, solubilizantes, estabilizantes, conservantes, agentes humectantes, emulsionantes y agentes dispersantes. Tensioactivos, agentes estabilizantes adicionales o agentes de ajuste de pH (ácidos, bases o tampones) y antioxidantes son particularmente útiles para proporcionar estabilidad a la formulación, por ejemplo, para minimizar o evitar la hidrólisis de los enlaces éster y amida que pueden estar presentes en el compuesto. Estas formulaciones se pueden esterilizar usando un medio inyectable estéril, un agente esterilizante, filtración, irradiación o calor.

Los vehículos acuosos fisiológicamente aceptables representativos incluyen, a modo de ejemplo, agua estéril para inyección, USP; inyección de dextrosa, USP (por ejemplo, dextrosa al 2,5, 5,0, 10, 20 %, incluyendo inyección de dextrosa al 5 % (D5/W)); inyección de dextrosa y clorito sódico, USP (por ejemplo, dextrosa que varía del 2,5 al 10 % y cloruro de sodio que varía del 0,12 (sodio 19 mEq ) al 0,9 % (sodio 154 mEq)); inyección de manitol, USP, (por ejemplo, manitol al 5, 10, 15, 20 y 25 %); inyección de Ringer, USP (por ejemplo, sodio 147 mEq, potasio 4 mEq, calcio 4,5 mEq y cloruro 156 mEq por litro); inyección de Ringer lactato, USP (por ejemplo, calcio 2,7 mEq, potasio 4 mEq, sodio 130 mEq y lactato 28 mEq por litro); inyección de cloruro sódico, USP (por ejemplo, cloruro sódico al 0,9 %) y similares.

Cuando se administra a un paciente, el compuesto 1 normalmente se diluirá en de aproximadamente 0,5 ml a aproximadamente 10 ml del vehículo acuoso por mg del compuesto 1, tal como de aproximadamente 0,6 a aproximadamente 8 ml por mg.

En una realización particular, la formulación parental comprende una solución acuosa de ciclodextrina como el vehículo farmacéuticamente aceptable. Las ciclodextrinas adecuadas incluyen moléculas cíclicas que contienen seis o más unidades de a-D-glucopiranosa unidas en las posiciones 1,4 mediante enlaces como en la amilasa, la p-ciclodextrina o la cicloheptaamilosa. Las ciclodextrinas a modo de ejemplo incluyen derivados de ciclodextrina tales como hidroxipropil y sulfobutil éter ciclodextrinas tales como hidroxipropil-p-ciclodextrina y sulfobutil éter p-ciclodextrina. Los tampones a modo de ejemplo para dichas formulaciones incluyen tampones con base de ácido carboxílico tales como soluciones tampón de citrato, lactato y maleato. En una realización de la invención, una forma farmacéutica intravenosa comprende el compuesto 1 en una solución tamponada.

En una realización, el compuesto 1 o una composición farmacéutica del mismo es un polvo liofilizado. Habitualmente, el polvo liofilizado es estéril y está envasado en un vial o ampolla o recipiente similar, cerrado herméticamente.

El compuesto 1 también se puede administrar por vía transdérmica usando sistemas de administración y excipientes transdérmicos. Por ejemplo, El compuesto 1 se puede mezclar con potenciadores de la permeación, tales como propilenglicol, monolaurato de polietilenglicol, azacicloalcan-2-onas y similares e incorporarse en un parte o un sistema de administración similar. Si se desea, se pueden usar más excipientes incluyendo agentes gelificantes emulsionantes y tampones en dichas composiciones transdérmicas.

Agentes secundarios

El compuesto 1 puede ser útil como tratamiento único de una enfermedad o se puede combinar con uno o más agentes terapéuticos adicionales para obtener el efecto terapéutico deseado. Por lo tanto, en una realización, las composiciones farmacéuticas de la invención contienen otros fármacos que se coadministran con el compuesto 1. Por ejemplo, la composición puede comprender además uno o más fármacos (también denominados "agente o agentes secundarios"). Dichos agentes terapéuticos se conocen bien en la técnica e incluyen antagonistas del receptor de adenosina, antagonistas del receptor a-adrenérgico, antagonistas del receptor p1-adrenérgico, agonistas del receptor p2-adrenérgico, antagonistas del receptor p-adrenérgico/antagonistas del receptor a1 de acción dual, rompedores del producto final avanzado de la glicación, antagonistas de la aldosterona, inhibidores de aldosterona sintasa, inhibidores de la aminopeptidasa N, andrógenos, inhibidores de la enzima convertidora de la angiotensina e inhibidores de la enzima convertidora de la angiotensina/neprilisina de acción dual, activadores y estimuladores de la enzima convertidora de la angiotensina 2, vacunas de la angiotensina II, anticoagulantes, agentes antidiabéticos, agentes antidiarreicos, agentes antiglaucoma, agentes antilípidos, agentes antinociceptivos, agentes antitrombóticos, antagonistas del receptor AT1 e inhibidores del antagonista del receptor At-i/neprilisina de acción dual y bloqueadores del receptor de la angiotensina multifuncionales, antagonistas de los receptores de la bradiquinina, bloqueadores de los canales de calcio, inhibidores de quimasa, digoxina, diuréticos, agonistas de la dopamina, inhibidores de la enzima convertidora de la endotelina, antagonistas del receptor de endotelina, inhibidores de HMG-CoA reductasa, estrógenos, agonistas y/o antagonistas del receptor de estrógenos, inhibidores de la recaptación de la monoamina, relajantes musculares, péptidos natriuréticos y sus análogos, antagonistas del receptor de aclaramiento del péptido natriurético, inhibidores de la neprilisina, donantes de óxido nítrico, agentes antiinflamatorios no esteroideos, antagonistas del receptor de N-metil d-aspartato, agonistas de los receptores opioideos, inhibidores de la fosfodiesterasa, análogos de la prostaglandina, agonistas del receptor de la prostaglandina, inhibidores de la renina, inhibidores selectivos de la recaptación de la serotonina, bloqueador del canal de sodio, estimuladores y activadores de la guanilato ciclasa soluble, antidepresivos tricíclicos, antagonistas del receptor de la vasopresina y combinaciones de los mismos. En el presente documento se detallan ejemplos específicos de estos agentes.

Una realización específica incluye una composición farmacéutica que comprende el compuesto 1 o una forma cristalina del mismo y un antagonista del receptor de AT1, un inhibidor de la enzima convertidora de la angiotensina, un inhibidor de fosfodiesterasa (PDE), un inhibidor de renina, un diurético o combinaciones de los mismos y, opcionalmente, uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables.

En consecuencia, en aún otro aspecto de la invención, una composición farmacéutica comprende el compuesto 1, un segundo agente activo y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Terceros, cuartos, etc., agentes activos se pueden incluir en la composición. En terapia de combinación, la cantidad de compuesto 1 que se administra, así como la cantidad de los agentes secundarios, puede ser inferior a la cantidad normalmente administrada en monoterapia.

El compuesto 1 se puede mezclar físicamente con el segundo agente activo para formar una composición que contiene ambos agentes; o cada agente puede estar presente en composiciones separadas y distintas que se administran al paciente de manera simultánea o en momentos separados. Por ejemplo, el compuesto 1 se puede combinar con un segundo agente activo usando procedimientos y equipamiento convencionales para formar una combinación de agentes activos que comprende el compuesto 1 y un segundo agente activo. Además, los agentes activos se pueden combinar con un vehículo farmacéuticamente aceptable para formar una composición farmacéutica que comprende el compuesto 1, un segundo agente activo y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En esta realización, los componentes de la composición normalmente están mezclados o combinados para crear una mezcla física. La mezcla física se administra después en una cantidad terapéuticamente eficaz usando cualquiera de las vías descritas en el presente documento.

Como alternativa, los agentes activos pueden permanecer separados y diferenciados antes de su administración al paciente. En esta realización, los agentes no están físicamente mezclados antes de su administración pero se administran de manera simultánea o en momentos separados en forma de composiciones separadas. Dichas composiciones se pueden envasar por separado o se pueden envasar juntas en un kit. Cuando se administran en momentos separados, el agente secundario normalmente se administrará menos de 24 horas después de la administración del compuesto 1, variando desde concurrente con la administración del compuesto de la invención hasta aproximadamente 24 horas después de la dosis. Esto también se denomina administración secuencial. Por lo tanto, el compuesto 1 se puede administrar por vía oral de manera simultánea o secuencial con otro agente activo usando dos comprimidos, con un comprimido para cada agente activo, en donde secuencial puede significar ser administrado inmediatamente después de la administración del compuesto 1 o en algún momento posterior predeterminado (por ejemplo, una hora después o tres horas después). También se contempla que el agente secundario se puede administrar más de 24 horas después de la administración del compuesto 1. Como alternativa, la combinación se puede administrar por diferentes vías de administración, es decir, una por vía oral y la otra por inhalación.

En una realización, el kit comprende una primera forma de dosificación que comprende el compuesto 1 y al menos una forma de dosificación adicional que comprende uno o más de los agentes secundarios expuestos en el presente documento, en cantidades suficientes para llevar a cabo los métodos de la invención. La primera forma farmacéutica y la segunda forma farmacéutica juntas comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de agentes activos para el tratamiento o prevención de una enfermedad o afección médica en un paciente.

El agente o agentes secundarios, cuando se incluyen, están presentes en una cantidad terapéuticamente eficaz tal que normalmente estos se administran en una cantidad que produce un efecto terapéuticamente beneficioso cuando se coadministran con el compuesto 1 de la invención. El agente secundario puede estar en forma de una sal, un solvato, un estereoisómero, etc, farmacéuticamente aceptable. El agente secundario también puede estar en forma de un profármaco, por ejemplo, un compuesto que tiene un grupo ácido carboxílico que se ha esterificado. Por lo tanto, los agentes secundarios enumerados en el presente documento pretenden incluir todas estas formas y están disponibles en el mercado o se pueden preparar usando procedimientos y reactivos convencionales.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un antagonista del receptor de adenosina, los ejemplos de los cuales incluyen naxifilina, rolofilina, SLV-320, teofilina y tonapofilina.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un antagonista de receptores a-adrenérgicos, los ejemplos de los cuales incluyen doxazosina, prazosina, tamsulosina y terazosina.

El Compuesto 1 también puede administrarse en combinación con un antagonista de receptores pi-adrenérgicos ("bloqueador pi"), los ejemplos de los cuales incluyen acebutolol, alprenolol, amosulalol, arotinolol, atenolol, befunolol, betaxolol, bevantolol, bisoprolol, bopindolol, bucindolol, bucumolol, bufetolol, bufuralol, bunitrolol, bupranolol, bubridina, butofilolol, carazolol, carteolol, carvedilol, celiprolol, cetamolol, cloranolol, dilevalol, epanolol, esmolol, indenolol, labetolol, levobunolol, mepindolol, metipranolol, metoprolol, tal como succinato de metoprolol y tartrato de metoprolol, moprolol, nadolol, nadoxolol, nebivalol, nipradilol, oxprenolol, penbutolol, perbutolol, pindolol, practolol, pronetalol, propranolol, sotalol, sufinalol, talindol, tertatolol, tilisolol, timolol, toliprolol, xibenolol y combinaciones de los mismos. En una realización particular, el antagonista de pi se selecciona de atenolol, bisoprolol, metoprolol, propranolol, sotalol y combinaciones de los mismos. Normalmente, el bloqueador pi se administrará en una cantidad suficiente para proporcionar de aproximadamente 2-900 mg por dosis.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un agonista de receptores p2-adrenérgicos, los ejemplos de los cuales incluyen albuterol, bitolterol, fenoterol, formoterol, indacaterol, isoetarina, levalbuterol, metaproterenol, pirbuterol, salbutamol, salmefamol, salmeterol, terbutalina, vilanterol y similares. Normalmente, el agonista de receptores p2 adrenérgicos se administrará en una cantidad suficiente para proporcionar de aproximadamente 0,05­ 500 |jg por dosis.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un rompedor de los productos finales de la glucación avanzada (AGE, forma siglada de advanced glycation end product), los ejemplos de los cuales incluyen alagebrium (o ALT-711) y TRC4149.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un antagonista de la aldosterona, los ejemplos de los cuales incluyen eplerenona, espironolactona y combinaciones de las mismas. Normalmente, el antagonista de aldosterona se administrará en una cantidad suficiente para proporcionar de aproximadamente 5-300 mg por día.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un inhibidor de la aminopeptidasa N o la dipeptidil peptidasa III, los ejemplos del cual incluyen bestatina y PC18 (2-amino-4-metilsulfonil butano tiol, metionina tiol).

El Compuesto 1 también puede administrarse en combinación con un inhibidor de la enzima convertidora de la angiotensina (ECA), los ejemplos de los cuales incluyen accupril, alacepril, benazepril, benazeprilat, captopril, ceranapril, cilazapril, delapril, enalapril, enalaprilat, fosinopril, fosinoprilat, imidapril, lisinopril, moexipril, monopril, moveltipril, pentopril, perindopril, quinapril, quinaprilat, ramipril, ramiprilato, acetato de saralasina, espirapril, temocapril, trandolapril, zofenopril y combinaciones de los mismos. En una realización particular, el inhibidor de la ECA se selecciona de: benazepril, captopril, enalapril, lisinopril, ramipril y combinaciones de los mismos. Normalmente, el inhibidor de la ECA se administrará en una cantidad suficiente para proporcionar de aproximadamente 1-150 mg por día.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un inhibidor de la enzima convertidora de la angiotensina/neprilisina (ECA/NEP) de acción doble, los ejemplos de los cuales incluyen: AVE-0848 (ácido (4S,7S,t26Rj-7-[3-metil-2(S)-sulfanilbutiramido]-6-oxo-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahidropirido[2,1-a][2]-benzazepina-4-carboxílico); AVE-7688 (ilepatril) y su compuesto precursor; BMS-182657 (ácido 2-[2-oxo-3(S)-[3-fenil-2(S)-sulfanilpropionamido]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-1-benzazepin-1-il]acético); CGS-35601 (N-[1-[4-metil-2(S)-sulfanilpentanamido]ciclopentil-carbonil]-L-triptofano); fasidotril; fasidotrilato; enalaprilat; ER-32935 (ácido (3R,6S,9aR)-6-[3(S)-metil-2(S)-sulfanilpentanamido]-5-oxoperhidrotiazolo[3,2-a]azepina-3-carboxílico); gempatrilat; MDL-101264 (ácido (4S,7S,t26Rj-7-[2(S)-(2-morfolinoacetiltio)-3-fenilpropionamido]-6-oxo-1,2,3,4,6,7,8,12boctahidropirido[2,1-a][2]benzazepina-4-carboxílico); MDL-101287 (ácido [4S-[4a,7a(R*), 12bp]]-7-[2-(carboximetil)-3-penilpropionamido]-6-oxo-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahidropirido[2,1-a][2]benzazepina-4-carboxílico); omapatrilat; RB-105 (N-[2(S)-(mercaptometil)-3(R)-fenilbutil]-L-alanina); sampatrilat; SA-898 ((2R,4R)-N-[2-(2-hidroxifenil)-3-(3-mercaptopropionil)tiazolidin-4-ilcarbonii]-L-fenilalanina); Sch-50690 (N-[1(S)-carboxi-2-[N2-(metanosulfonil)-L-lisilamino]etil]-L-valil-L-tirosina); y también puede incluirse combinaciones de los mismos. En una realización particular, el inhibidor de ECA/NEP se selecciona de: AVE-7688, enalaprilat, fasidotril, fasidotrilato, omapatrilat, sampatrilat y combinaciones de los mismos.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un activador o estimulador de la enzima convertidora de la angiotensina 2 (ECA2).

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con una vacuna para la angiotensina II, los ejemplos de las cuales incluyen ATR12181 y CYT006-AngQb.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un anticoagulante, los ejemplos de los cuales incluyen: cumarinas tales como warfarina; heparina; e inhibidores directos de la trombina tales como argatroban, bivalirudina, dabigatrán y lepirudina.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un agente antidiabético, los ejemplos de los cuales incluyen fármacos inyectables así como fármacos eficaces por vía oral, y combinaciones de los mismos. Los ejemplos de medicamentos inyectables incluyen insulina y derivados de insulina. Algunos ejemplos de fármacos eficaces por vía oral incluyen: biguanidas tales como metformina; antagonistas del glucagón; inhibidores de la a-glucosidasa tales como acarbosa y miglitol; inhibidores de la dipeptidil peptidasa IV (inhibidores de DPP-IV) tales como alogliptina, denagliptina, linagliptina, saxagliptina, sitagliptina y vildagliptina; meglitinidas (tales como repaglinida; oxadiazolidinadionas; sulfonilureas tales como clorpropamida, glimepirida, glipizida, gliburida y tolazamida; tiazolidinadionas tales como pioglitazona y rosiglitazona; y combinaciones de las mismas.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con tratamientos antidiarreicos. Las opciones de tratamiento representativas incluyen soluciones de rehidratación oral (SRO), loperamida, difenoxilato y subsalicilato de bismuto.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un agente antiglaucoma, los ejemplos de los cuales incluyen: agonistas a-adrenérgicos tales como brimonidina; antagonistas de receptores p-i-adrenérgicos; bloqueadores pi tópicos tales como betaxolol, levobunolol y timolol; inhibidores de la anhidrasa carbónica tales como acetazolamida, brinzolamida o dorzolamida; agonistas colinérgicos tales como cevimelina y DMXB-anabaseína; compuestos de epinefrina; mióticos tales como pilocarpina; y análogos de prostaglandinas.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un agente antilipídico, los ejemplos de los cuales incluyen: inhibidores de la proteína de transferencia de ésteres de colesterol (las pTe C), tales como anacetrapib, dalcetrapib y torcetrapib; estatinas tales como atorvastatina, fluvastatina, lovastatina, pravastatina, rosuvastatina y simvastatina; y combinaciones de las mismas.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un agente antitrombótico, los ejemplos de los cuales incluyen: aspirina; agentes inhibidores plaquetarios tales como clopidogrel, prasugrel y ticlopidina; heparina y combinaciones de los mismos.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un antagonista del receptor de AT1, también conocidos como bloqueadores del receptor de angiotensina II de tipo 1 (los BRA). Los BRA representativos incluyen abitesartán, azilsartán (por ejemplo, azilsartán medoxomil), bencilosartán, candesartán, candesartán cilexetilo, elisartán, embusartán, enoltasosartán, eprosartán, EXP3174, fonsartán, forasartan, glicilosartán, irbesartán, isoteolina, losartán, medoxomilo, milfasartán, olmesartán (por ejemplo, olmesartán medoxomilo), opomisartán, pratosartán, ripisartán, saprisartán, saralasina, sarmesina, TAK-591, tasosartán, telmisartán, valsartán, zolasartán y combinaciones de los mismos. En una realización particular, el BRA se selecciona de azilsartán medoxomil, candesartán cilexetilo, eprosartán, irbesartán, losartán, olmesartán medoxomilo, saprisartán, tasosartán, telmisartán, valsartán y combinaciones de los mismos. Los ejemplos de sales y/o profármacos incluyen candesartán cilexetilo, mesilato de eprosartán, sal de potasio de losartán y olmesartán medoxomilo. Normalmente, el BRA se administrará en una cantidad suficiente para proporcionar de aproximadamente 4-600 mg por dosis, con dosificaciones diarias de ejemplo que oscilan entre 20-320 mg por día.

El Compuesto 1 también puede administrarse en combinación con un inhibidor de acción doble, tal como un inhibidor de antagonista del receptor de AT 1/inhibidor de neprilisina (BRA/NEP), los ejemplos de los cuales incluyen compuestos descritos en las Patentes de Estados Unidos N.° 7.879.896 y 8.013.005, ambas para Allegretti et al., tal como el compuesto, ácido 4'-{2-etoxi-4-etil-5-[((S)-2-mercapto-4-metilpentanoilamino)-metil]imidazol-1-ilmetil}-3'-fluorobifenil-2-carboxílico.

El Compuesto 1 también puede administrarse en combinación con bloqueadores de los receptores de angiotensina multifuncionales como se describe en Kurtz y Klein (2009) Hypertension Research 32:826-834.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un antagonista del receptor de la bradicinina, por ejemplo, icatibant (HOE-140). Se espera que esta terapia de combinación pueda presentar la ventaja de prevenir el angioedema u otras consecuencias no deseadas de los niveles elevados de bradicinina.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un bloqueador de los canales de calcio, los ejemplos de los cuales incluyen amlodipino, anipamil, aranipina, barnidipina, benciclano, benidipina, bepridil, clentiazem, cilnidipina, cinarizina, diltiazem, efonidipina, elgodipina, etafenona, felodipina, fendilina, flunarizina, gallopamil, isradipino, lacidipina, lercanidipina, lidoflazina, lomerizina, manidipina, mibefradil, nicardipina, nifedipina, niguldipina, niludipina, nilvadipina, nimodipina, nisoldipina, nitrendipina, nivaldipina, perhexilina, prenilamina, riosidina, semotiadil, terodilina, tiapamil, verapamil y combinaciones de los mismos. En una realización particular, el bloqueador de los canales de calcio se selecciona de amlodipino, bepridil, diltiazem, felodipina, isradipino, lacidipina, nicardipina, nifedipina, niguldipina, niludipina, nimodipina, nisoldipina, riosidina, verapamil y combinaciones de los mismos. Normalmente, el bloqueador de los canales de calcio se administrará en una cantidad suficiente para proporcionar de aproximadamente 2-500 mg por dosis.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un inhibidor de quimasa, tal como TPC-806 y 2-(5-formilamino-6-oxo-2-fenil-1,6-dihidropirimidina-1-il)-N-[{3,4-dioxo-1-fenil-7-(2-piridiloxi)}-2-heptil]acetamida (NK3201).

En una realización, el Compuesto 1 se administra en combinación con un diurético, los ejemplos de los cuales incluyen: inhibidores de la anhidrasa carbónica tales como acetazolamida y diclorfenamida; diuréticos del asa, que incluyen derivados de sulfonamida tales como acetazolamida, ambusida, azosemida, bumetanida, butazolamida, cloraminofenamida, clofenamida, clopamida, clorexolona, disulfamida, etoxzolamida, furosemida, mefrusida, metazolamida, piretanida, torsemida, tripamida y xipamida, así como diuréticos no sulfonamida tales como el ácido etacrínico y otros compuestos del ácido fenoxiacético tales como el ácido tienílico, indacrinona y quincarbato; diuréticos osmóticos tales como manitol; diuréticos ahorradores de potasio, que incluyen antagonistas de la aldosterona tales como la espironolactona e inhibidores de los canales de Na+ tales como amilorida y triamtereno; tiazidas y diuréticos similares a tiazida tales como altiazida, bendroflumetiazida, bencilhidroclorotiazida, benztiazida, butiazida, clortalidona, clorotiazida, ciclopentiazida, ciclotiazida, epitiazida, etiazida, fenquizona, flumetiazida, hidroclorotiazida, hidroflumetiazida, indapamida, metilclotiazida, meticrano, metolazona, paraflutizida, politiazida, quinetazona, teclotiazida y triclorometiazida; y combinaciones de las mismas. En una realización particular, el diurético se selecciona de amilorida, bumetanida, clorotiazida, clortalidona, diclorfenamida, ácido etacrínico, furosemida, hidroclorotiazida, hidroflumetiazida, indapamida, metilclotiazida, metolazona, torsemida, triamtereno y combinaciones de los mismos. El diurético se administrará en una cantidad suficiente para proporcionar de aproximadamente 5-50 mg por día, más normalmente 6-25 mg por día, siendo las dosificaciones comunes de 6,25 mg, 12,5 mg o 25 mg por día.

El Compuesto 1 también puede administrarse en combinación con un inhibidor de la enzima convertidora de la endotelina (ECE), los ejemplos del cual incluyen fosforamidón, CGS 26303 y combinaciones de los mismos.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un antagonista del receptor de la endotelina, los ejemplos de los cuales incluyen: antagonistas selectivos del receptor de endotelina que afectan a los receptores de endotelina A, tales como avosentán, ambrisentán, atrasentán, BQ-123, clazosentán, darusentán, sitaxentán y zibotentán; y antagonistas dobles del receptor de endotelina que afectan a los receptores de endotelina A y B, tales como bosentán, macitentán y tezosentán.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con uno o más inhibidores de la HMG-CoA reductasa, que también se conocen como estatinas. Las estatinas representativas incluyen atorvastatina, fluvastatina, lovastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina y simvastatina.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un inhibidor de la recaptación de monoamina, los ejemplos de los cuales incluyen inhibidores de la recaptación de norepinefrina tales como atomoxetina, bupropión y el metabolito de bupropión hidroxibupropión, maprotilina, reboxetina y viloxazina; inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina (ISRS) tales como citalopram y el metabolito de citalopram desmetilcitalopram, dapoxetina, escitalopram (por ejemplo, escitalopram oxalato), fluoxetina y el metabolito desmetil fluoxetina norfluoxetina, fluvoxamina (por ejemplo, maleato de fluvoxamina), paroxetina, sertralina y el metabolito de sertralina demetilsertralina; inhibidores dobles de la recaptación de serotonina-norepinefrina (IRSN) tales como bicifadina, duloxetina, milnaciprán, nefazodona y venlafaxina; y combinaciones de las mismas.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un relajante muscular, los ejemplos de los cuales incluyen: carisoprodol, clorzoxazona, ciclobenzaprina, diflunisal, metaxalona, metocarbamol y combinaciones de los mismos.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un péptido natriurético o un análogo, los ejemplos de los cuales incluyen: carperitida, CD-NP (Nile Therapeutics), CU-NP, nesiritida, PL-3994 (Palatin Technologies, Inc.), ularitida, cenderitida y compuestos descritos en Ogawa et al (2004) J. Biol.Chem. 279:28625-31. Estos compuestos también se denominan agonistas del receptor de péptidos natriuréticos A (NPR-A). El Compuesto 1 también puede administrarse en combinación con un antagonista del receptor de depuración de péptidos natriuréticos (NPR-C) tal como SC-46542, cANF (4-23) y AP-811 (Veale (2000) Bioorg Med Chem Lett 10:1949-52). Por ejemplo, AP-811 ha mostrado sinergia cuando se combina con el inhibidor de NEP, tiorfán (Wegner (1995) Clin.Exper.Hypert. 17:861-876).

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un inhibidor de la neprilisina (NEP), los ejemplos de los cuales incluyen: AHU-377; candoxatril; candoxatrilat; dexecadotril (bencil éster de (+)-N-[2(R)-(acetiltiometil)-3-fenilpropionil]glicina); CGS-24128 (ácido 3-[3-(bifenil-4-il)-2-(fosfonometilamino)propionamido]propiónico); CGS-24592 (ácido(S)-3-[3-(bifenil-4-il)-2-(fosfonometilamino)propionamido]propiónico); CGS-25155 (bencil éster de N-[9(R)-(acetiltiometil)-10-oxo-1-azaciclodecan-2(S)-ilcarbonil]-4(R)-hidroxi-L-prolina); derivados del ácido 3-(1-carbamoilciclohexil)propiónico descritos en el documento W o 2006/027680 para Hepworth et al. (Pfizer Inc.); JMV-390-1 (2(R)-bencil-3-(N-hidroxicarbamoil)propionil-L-isoleucil-L-leucina); ecadotril; fosforamidón; retrotiorfán; RU-42827 (2-(mercaptometil)-N-(4-piridinil)bencenopropionamida); RU-44004 (N-(4-morfolinil)-3-fenil-2-(sulfanilmetil)propionamida); SCH-32615 ((S)-N-[N-(1-carboxi-2-feniletil)-L-fenilalanil]-p-alanina) y su profármaco SCH-34826 ((S)-N-[N-[1-[[(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metoxi]carbonil]-2-feniletil]-L-fenilalanil]-p-alanina); sialorfina; SCH-42495 (etil éster de N-[2(S)-(acetilsulfanilmetil)-3-(2-metilfenil)propionil]-L-metionina); espinorfina; SQ-28132 (N-[2-(mercaptometil)-1-oxo-3-fenilpropil]leucina); SQ-28603 (N-[2-(mercaptometil)-1-oxo-3-fenilpropil]-p-alanina); SQ-29072 (ácido 7-[[2-(mercaptometil)-1-oxo-3-fenilpropil]amino]heptanoico); tiorfán y su profármaco racecadotril; UK-69578 (ácido cis-4-[[[1-[2-carboxi-3-(2-metoxietoxi)propil]ciclopentil]carbonil]amino] ciclohexanocarbóxilico); UK-447.841 (ácido 2-{1-[3-(4-clorofenil)propilcarbamoil]-ciclopentilmetil}-4-metoxibutírico); UK-505.749 (ácido (R)-2-metil-3-{1-[3-(2-metilbenzotiazol-6-il)propilcarbamoil]ciclopentil}propiónico); ácido 5-bifenil-4-il-4-(3-carboxipropionilamino)-2-metilpentanoico y etil éster del ácido 5-bifenil-4-il-4-(3-carboxipropionilamino)-2-metilpentanoico (documento WO 2007/056546); daglutril [ácido(3S,2'R/)-3-{1-[2'-(etoxicarbonil)-4'-fenilbutil]-ciclopentan-1-carbonilamino}-2,3,4,5-tetrahidro-2-oxo-1H-1-benzazepina-1-acético] descrito en el documento WO 2007/106708 para Khder et al. (Novartis AG); y combinaciones de los mismos. En particular, el inhibidor de NEP se selecciona de AHU-377, candoxatril, candoxatrilat, CGS-24128, fosforamidón, SCH-32615, SCH-34826, SQ-28603, tiorfán y combinaciones de los mismos. El inhibidor de NEP puede ser un compuesto tal como daglutril o CGS-26303 (ácido [N-[2-(bifenil-4-il)-1(S)-(1H-tetrazol-5-il)etil]amino]metilfosfónico), que tienen actividad como inhibidores de la enzima convertidora de la endotelina (ECE) y de NEP. También se pueden utilizar otros compuestos ECE/NEP de acción doble. El inhibidor de NEP se administrará en una cantidad suficiente para proporcionar de aproximadamente 20-800 mg por día, con dosificaciones diarias típicas que oscilan entre 50-700 mg por día, más comúnmente de 100-600 o 100-300 mg por día.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un donante de óxido nítrico, los ejemplos de los cuales incluyen: nicorandil; nitratos orgánicos tales como tetranitrato de pentaeritritol; y sydnoniminas tales como linsidomina y molsidomina.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un agente antinflamatorio no esteroideo (AINE), los ejemplos de los cuales incluyen: acemetacina, ácido acetil salicílico, alclofenaco, alminoprofeno, amfenaco, amiprilosa, aloxiprina, anirolaco, apazona, azapropazona, benorilato, benoxaprofeno, benzopiperilona, broperamol, ácido buclóxico, carprofeno, clidanaco, diclofenaco, diflunisal, diftalona, enolicam, etodolaco, etoricoxib, fenbufeno, fenclofenaco, ácido fenclózico, fenoprofeno, fentiazaco, feprazona, ácido flufenámico, flufenisal, fluprofeno, flurbiprofeno, furofenaco, ibufenaco, ibuprofeno, indometacina, indoprofeno, isoxepaco, isoxicam, ketoprofeno, ketorolaco, lofemizol, lornoxicam, meclofenamato, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, meloxicam, mesalamina, miroprofeno, mofebutazona, nabumetona, naproxeno, ácido niflúmico, oxaprozina, oxpinaco, oxifenbutazona, fenilbutazona, piroxicam, pirprofeno, pranoprofeno, salsalato, sudoxicam, sulfasalazina, sulindaco, suprofeno, tenoxicam, tiopinaco, ácido tiaprofénico, tioxaprofeno, ácido tolfenámico, tolmetina, triflumidato, zidometacina, zomepirac y combinaciones de los mismos. En una realización particular, el AINE se selecciona de etodolaco, flurbiprofeno, ibuprofeno, indometacina, ketoprofeno, ketorolaco, meloxicam, naproxeno, oxaprozina, piroxicam y combinaciones de los mismos.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un antagonista del receptor N-metil D-aspartato (NMDA), los ejemplos de los cuales incluyen amantadina, dextrometorfán, dextropropoxifeno, ketamina, ketobemidona, memantina, metadona, y etcétera.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un agonista de los receptores opioides (también denominados analgésicos opioides). Los agonistas de los receptores opioides representativos incluyen: buprenorfina, butorfanol, codeína, dihidrocodeína, fentanilo, hidrocodona, hidromorfona, levalorfán, levorfanol, meperidina, metadona, morfina, nalbufina, nalmefeno, nalorfina, naloxona, naltrexona, nalorfina, oxicodona, oximorfona, pentazocina, propoxifeno, tramadol y combinaciones de los mismos. Por ejemplo, el agonista de los receptores opioides se puede seleccionar de codeína, dihidrocodeína, hidrocodona, hidromorfona, morfina, oxicodona, oximorfona, tramadol y combinaciones de los mismos.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un inhibidor de la fosfodiesterasa (PDE), particularmente un inhibidor de PDE-V. Los inhibidores representativos de PDE-V incluyen avanafil, lodenafil, mirodenafil, sildenafil (Revatio®), tadalafilo (Adcirca®), vardenafil (Levitra®) y udenafil.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un análogo de la prostaglandina (también denominados análogos de prostanoides o de prostaciclina). Los análogos de prostaglandinas representativos incluyen beraprost sódico, bimatoprost, epoprostenol, iloprost, latanoprost, tafluprost, travoprost y treprostinil, con bimatoprost, latanoprost y tafluprost siendo de particular interés.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un agonista de receptores de prostaglandinas, los ejemplos de los cuales incluyen bimatoprost, latanoprost, travoprost, y etcétera.

El Compuesto 1 también puede administrarse en combinación con un inhibidor de la renina, los ejemplos de los cuales incluyen aliskirén, enalkirén, remikirén y combinaciones de los mismos.

En otra realización, El Compuesto 1 se administra en combinación con un inhibidor selectivo de la recaptación de serotonina (ISRS), los ejemplos de los cuales incluyen: citalopram y el metabolito de citalopram desmetil-citalopram, dapoxetina, escitalopram (por ejemplo, escitalopram oxalato), fluoxetina y el metabolito desmetil fluoxetina norfluoxetina, fluvoxamina (por ejemplo, maleato de fluvoxamina), paroxetina, sertralina y el metabolito de sertralina desmetilsertralina, y combinaciones de los mismos.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un agonista del receptor de serotonina 5-HT-id, los ejemplos de los cuales incluyen, triptanos tales como almotriptán, avitriptán, eletriptán, frovatriptán, naratriptán, rizatriptán, sumatriptán y zolmitriptán.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un bloqueador de los canales de sodio, los ejemplos de los cuales incluyen carbamazepina, fosfenitoína, lamotrigina, lidocaína, mexiletina, oxcarbazepina, fenitoína y combinaciones de los mismos.

Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un estimulador o activador de la guanilato ciclasa soluble, los ejemplos de los cuales incluyen ataciguat, riociguat y combinaciones de los mismos.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un antidepresivo tricíclico (ATC), los ejemplos de los cuales incluyen amitriptilina, amitriptilinóxido, butriptilina, clomipramina, demexiptilina, desipramina, dibenzepina, dimetacrina, dosulepin, doxepina, imipramina, imipraminóxido, lofepramina, melitraceno, metapramina, nitroxazepina, nortriptilina, noxiptilina, pipofezina, propizepina, protriptilina, quinupramina y combinaciones de los mismos.

El Compuesto 1 puede administrarse en combinación con un antagonista del receptor de la vasopresina, los ejemplos de los cuales incluyen conivaptán y tolvaptán.

Los agentes terapéuticos secundarios combinados también pueden ser útiles en una terapia de combinación adicional con el compuesto de la invención. Por ejemplo, el compuesto de la invención se puede combinar con un diurético y un BRA, o un bloqueador de los canales de calcio y un b Ra , o un diurético y un inhibidor de la ECA, o un bloqueador de los canales de calcio y una estatina. Los ejemplos específicos incluyen, una combinación del inhibidor de la ECA enalapril (en forma de sal de maleato) y el diurético hidroclorotiazida, que se vende con la marca Vaseretic®, o una combinación del bloqueador de los canales de calcio amlodipino (en forma de sal de besilato) y el BRA olmesartán (en forma del profármaco medoxomil), o una combinación de un bloqueador de los canales de calcio y una estatina, que también pueden utilizarse con el Compuesto 1. Otros agentes terapéuticos tales como agonistas de receptores a2-adrenérgicos y los antagonistas de receptores de vasopresina también pueden ser útiles en la terapia de combinación. Los agonistas de receptores a2 adrenérgicos de ejemplo incluyen clonidina, dexmedetomidina y guanfacina.

Las formulaciones siguientes ilustran composiciones farmacéuticas representativas de la invención.

Cápsulas de gelatina dura a modo de ejemplo para administración oral

El compuesto de la invención (50 g), 440 g de lactosa secada por pulverización y 10 g de estearato de magnesio se mezclan por completo. La composición resultante se carga después dentro de cápsulas de gelatina dura (500 mg de composición por cápsula). Como alternativa, el compuesto 1 (20 mg) se mezcla por completo con almidón (89 mg), celulosa microcristalina (89 mg) y estearato de magnesio (2 mg). La mezcla se pasa después a través de un tamiz de malla n.° 45 de Estados Unidos y se carga dentro de una cápsula de gelatina dura (200 mg de composición por cápsula).

Como alternativa, el compuesto 1 (30 g), un agente secundario (20 g), 440 g de lactosa secada por pulverización y 10 g de estearato de magnesio se mezclan por completo y se procesan como se ha descrito anteriormente.

Formulación de cápsula de gelatina a modo de ejemplo para administración oral

El compuesto 1 (100 mg) se mezcla en profundidad con monooleato de polioxietilen sorbitán (50 mg) y almidón en polvo (250 mg). La mezcla se carga después dentro de una cápsula de gelatina (400 mg de composición por cápsula). Como alternativa, el compuesto 1 (70 mg) y un agente secundario (30 mg) se mezcla por completo con monooleato de polioxietilen sorbitán (50 mg) y almidón en polvo (250 mg) y la mezcla resultante se carga dentro de una cápsula de gelatina (400 mg de composición por cápsula).

Como alternativa, el compuesto 1 (40 mg) se mezcla por completo con celulosa microcristalina (Avicel PH 103; 259,2 mg) y estearato de magnesio (0,8 mg). La mezcla se carga después dentro de una cápsula de gelatina (Tamaño n.° 1, blanca, opaca) (300 mg de composición por cápsula).

Cápsula de hidroxipropil metilcelulosa (HPMC) a modo de ejemplo para administración

El compuesto 1 (50 mg o 100 mg) se carga directamente dentro de una cápsula HPMC.

Formulación en comprimido a modo de ejemplo para administración oral

El compuesto 1 (10 mg), almidón (45 mg) y celulosa microcristalina (35 mg) se pasan a través de un tamiz de malla n.° 20 de Estados Unidos y se mezclan por completo. Los gránulos así producidos se secan a 50-60 °C y se pasan a través de un tamiz de malla n.° 16 de Estados Unidos. Una solución de polivinilpirrolidona (4 mg en forma de una solución al 10 % en agua estéril) se mezcla con almidón carboximetil sódico (4,5 mg), estearato de magnesio (0,5 mg) y talco (1 mg) y esta mezcla se pasa después a través de un tamiz de malla n.° 16 de Estados Unidos. El almidón carboximetil sódico, el estearato de magnesio y el talco se añaden después a los gránulos. Después de mezclar, la mezcla se comprime en una máquina de comprimidos para proporcionar un comprimido que pesa 100 mg.

Como alternativa, el compuesto 1 (250 mg) se mezcla por completo con celulosa microcristalina (400 mg), dióxido de silicio pirógeno (10 mg) y ácido esteárico (5 mg). La mezcla se comprime después para formar comprimidos (665 mg de composición por comprimido).

Como alternativa, el compuesto 1 (400 mg) se mezcla por completo con almidón de maíz (50 mg), croscarmelosa sódica (25 mg), lactosa (120 mg) y estearato de magnesio (5 mg). La mezcla se comprime después para formar un comprimido con una ranura (600 mg de composición por comprimido).

Como alternativa, el compuesto 1 (100 mg) se mezcla por completo con almidón de maíz (100 mg) con una solución acuosa de gelatina (20 mg). La mezcla se seca y se muele hasta un polvo fino. Después se mezclan celulosa microcristalina (50 mg) y estearato de magnesio (5 mg) con la formulación en gelatina, se granula y la mezcla resultante se comprime para formar comprimidos (100 mg del compuesto de la invención por comprimido).

Formulación en suspensión a modo de ejemplo para administración oral

Los ingredientes siguientes se mezclan para formar una suspensión que contiene 100 mg del compuesto 1 por 10 ml de suspensión:

Ingredientes_______________________________________ Cantidad

Compuesto 1 1,0 g

Ácido fumárico 0,5 g

Cloruro de sodio 2,0 g

Metil parabeno 0,15 g

Propil parabeno 0,05 g

Azúcar granulado 25,5 g

Sorbitol (solución al 70 %) 12,85 g

Veegum® K (silicato de aluminio y magnesio) 1,0 g

Aromatizante 0,035 ml

Colorantes 0,5 mg

Agua destilada c.s.p. 100 ml

Formulación líquida a modo de ejemplo para administración oral

Una formulación líquida adecuada es una con un tampón con base de ácido carboxílico tal como soluciones tampón de citrato, lactato y maleato. Por ejemplo, el compuesto 1(que se puede premezclar con DMSO) se mezcla con un tampón de citrato de amonio 100 mM y el pH se ajusta a pH 5 o se mezcla con una solución de ácido cítrico 100 mM y el pH se ajusta a pH 2. Dichas soluciones pueden incluir un excipiente de solubilización tal como ciclodextrina, por ejemplo la solución puede incluir un 10 % en peso de hidroxipropil-p-ciclodextrina.

Otras formulaciones adecuadas incluyen una solución al 5 % de NaHCO3, con o sin ciclodextrina.

Formulación IV parenteral a modo de ejemplo para administración por inyección

El compuesto 1 (0,2 g) se mezcla con solución tampón de acetato sódico 0,4 M (2,0 ml). El pH de la solución resultante se ajusta a pH 4 usando ácido clorhídrico acuoso 0,5 N o hidróxido sódico acuoso 0,5 N, según sea necesario y después se añade agua para inyección suficiente para proporcionar un volumen total de 20 ml. Después, la mezcla se filtra a través de un filtro estéril (0,22 micrómetros) para proporcionar una solución estéril adecuada para su administración mediante inyección.

Las formulaciones siguientes ilustran composiciones farmacéuticas representativas de la presente invención.

Ejemplo de formulación A

Una solución congelada adecuada para preparar una solución inyectable se prepara como sigue:

Ingredientes Cantidad

Compuesto activo 1 o 1' de 10 a 1000 mg

Excipientes (por ejemplo, dextrosa) de 0 a 50 g

Agua para solución inyectable de 10 a 100 ml

Procedimiento representativo: Los excipientes, en caso de que los hubiera, se disuelven en aproximadamente el 80 % del agua para inyección y el compuesto activo 1 o 1' se añade y se disuelve. El pH se ajusta con hidróxido sódico 1 M a de 3 a 4,5 y el volumen se ajusta después al 95 % del volumen final con agua para inyección. El pH se comprueba y se ajusta, si es necesario y el volumen se ajusta hasta el volumen final con agua para inyección. La formulación se esteriliza después de forma estéril a través de un filtro de 0,22 micrómetros y se coloca en un recipiente estéril en condiciones asépticas. El vial se tapa, se etiqueta y se almacena congelado.

Ejemplo de formulación B

Un polvo liofilizado o un sólido cristalino adecuado para preparar una solución inyectable se prepara como sigue:

Ingredientes Cantidad

Compuesto activo 1 o 1' de 10 a 1000 mg

Excipientes (por ejemplo, manitol y/o sacarosa) de 0 a 50 g

Agente tamponante (por ejemplo, citrato) de 0 a 500 mg

Agua para inyección de 10 a 100 ml

Procedimiento representativo: Los excipientes y/o agentes tamponantes, en caso de que los hubiera, se disuelven en aproximadamente un 60 % del agua para inyección. El compuesto activo 1 o 1' se añade y se disuelve y el pH se ajusta con hidróxido sódico 1 M a de 3 a 4,5 y el volumen se ajusta al 95 % del volumen final con agua para inyección. El pH se comprueba y se ajusta, si es necesario y el volumen se ajusta hasta el volumen final con agua para inyección. La formulación se esteriliza después de forma estéril a través de un filtro de 0,22 micrómetros y se coloca en un recipiente estéril en condiciones asépticas. La formulación se liofiliza después usando un ciclo de liofilización apropiado. El vial se tapa (opcionalmente con vacío parcial o nitrógeno seco), se etiqueta y se almacena con refrigeración.

Ejemplo de formulación C

Una solución inyectable para administración intravenosa para un paciente se prepara a partir del ejemplo de formulación B anterior como sigue:

Procedimiento representativo: El polvo liofilizado del ejemplo de formulación B (por ejemplo, que contiene de 10 a 1000 mg del compuesto activo 1 o 1') se reconstituye con 20 ml de agua estéril y la solución resultante se vuelve a diluir con 80 ml de solución salina estéril en una bolsa de infusión de 100 ml. La solución diluida se administra después al paciente por vía intravenosa durante de 30 a 120 minutos.

Composiciones a modo de ejemplo para administración por inhalación

El compuesto 1 (0,2 mg) se microniza y después se mezcla con lactosa (25 mg). Esta mezcla se carga después en un cartucho de inhalación de gelatina. Los contenidos del cartucho se administran usando un inhalador de polvo seco, por ejemplo.

Como alternativa, el compuesto micronizado 1 (10 g) se dispersa en una solución preparada disolviendo lecitina (0,2 g) en agua desmineralizada (200 ml). La suspensión resultante se seca por pulverización y después se microniza para formar una composición micronizada que comprende partículas que tienen un diámetro medio inferior a aproximadamente 1,5 pm. La composición micronizada se carga después en cartuchos de inhalación de dosis medida que contienen 1,1,1,2-tetrafluoroetano presurizado en una cantidad suficiente para proporcionar de aproximadamente 10 pg a aproximadamente 500 pg del compuesto de la invención por dosis cuando se administra mediante el inhalador.

Como alternativa, el compuesto 1 (25 mg) se disuelve en solución salina isotónica (125 ml) tamponada con citrato (pH 5). La mezcla se agita y se somete a sonicación hasta que el compuesto se disuelve. El pH de la solución se comprueba y se ajusta, si es necesario, a pH 5 mediante la adición lenta de NaOH acuoso 1 N. La solución se administra usando un dispositivo nebulizador que proporciona de aproximadamente 10 pg a aproximadamente 500 pg del compuesto 1 por dosis.

Ejemplos

Las preparaciones y ejemplos siguientes se proporcionan para ilustrar las realizaciones específicas de la invención. Estas realizaciones específicas, sin embargo, no pretenden limitar el alcance de la invención de ninguna manera a menos que se indique específicamente.

Las abreviaturas siguientes tienen los significados siguientes a menos que se especifique de otro modo y cualquier otra abreviatura usada en el presente documento y no definida tiene su significado habitual, generalmente aceptado:

BOC t-butoxicarbonil(-C(O)OC(CHa)a)

DCM diclorometano o cloruro de metileno

DIPEA W,W-diisopropiletilamina

DMF W,W-dimetilformamida

EDTA ácido etilendiaminotetraacético

EtOH etanol

Et2O éter dietílico

EtOAc acetato de etilo

HATU Hexafluorofosfato de W,W,W',W’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronio

KHMDS bis(trimetilsilil)amida potásica

MeCN acetonitrilo

NaHMDS bis(trimetilsilil)amida sódica

Pd(dppf)2Cl2 Cloruro de 1,1-bis(difenilfosfino)ferroceno paladio

Pd(PPha)4 tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0)

PE éter de petróleo

PyBOP Hexafluorofosfato de benzotriazol-1 -iloxitris(pirrolidino)fosfonio

TFA ácido trifluoroacético

THF tetrahidrofurano

A menos que se indique otra cosa, todos los materiales, tales como reactivos, materiales de partida y disolventes, se adquirieron de proveedores comerciales (tales como Sigma-Aldrich, Fluka Riedel-de Haen y similares) y se usaron sin más purificación.

Las reacciones se realizaron en atmósfera de nitrógeno, a menos que se indique lo contrario. El progreso de las reacciones se controló por cromatografía de capa fina (TLC), cromatografía líquida de alto rendimiento analítica (HPLC anal.) y espectrometría de masas, cuyos detalles se dan en los ejemplos específicos. En general, los disolventes usados en la HPLC analítica fueron como sigue: el disolvente A fue H2O al 98 %/MeCN al 2 % /1,0 ml/l de TFA; el disolvente B fue MeCN al 90 %/H2O al 10 %/1,0 ml/l de TFA.

Las reacciones se ejecutaron como se describe de manera específica en cada preparación del ejemplo; las mezclas de reacción habitualmente se purificaron mediante extracción y otros métodos de purificación tales como cristalización y precipitación dependiente de temperatura y disolvente. Además, las mezclas de reacción se purificaron de manera rutinaria mediante HPLC preparativa, habitualmente usando rellenos de columna Microsorb C18 y Microsorb BDS y eluyentes convencionales. El progreso de las reacciones normalmente se midió mediante cromatografía líquida con espectrometría de masas (LCMs ). La caracterización de los isómeros se realizó mediante espectroscopía con efecto Overhauser nuclear (NOE). La caracterización de los productos de reacción se realizó como habitualmente mediante espectrometría de masas y RMN 1H. Para la medición por RMN, las muestras se disolvieron en un disolvente deuterado (CD3OD, CDCl3 o DMSO-cfe) y los espectros de r Mn 1H se registraron con un instrumento Varian Gemini 2000 (400 MHz) en condiciones de observación convencionales. La identificación espectrométrica de masas de los compuestos habitualmente se llevó a cabo usando un método de ionización por electronebulización (ESMS) con un instrumento de Applied Biosystems (Foster City, CA) modelo API 150 EX o un instrumento de Agilent (Palo Alto, CA) modelo 1200 LC/MSD.

Técnicas de medición

Difracción de rayos X de polvo

Se realizó análisis de difracción de rayos X de polvo usando un difractómetro de rayos Bruker D8-Advance. La fuente de rayos X fue radiación Cu-Ka con un voltaje de salida de 40 kV y una corriente de 40 mA. El instrumento se operó en geometría de Bragg-Brentano y se usaron espejos Goebel para obtener un haz de rayos X paralelo. Cualquier divergencia en el rayo se limitó mediante una ranura de divergencia vertical de 0,2° en la fuente y ranuras Soller (2,5°) en la fuente y el detector. Para la medición, una pequeña cantidad de polvo (5-25 mg) se presionó suavemente sobre un portamuestras de silicio de fondo cero para formar una superficie lisa y se sometió a exposición a rayos X. Las muestras se escanearon en modo acoplado 0-20 de 2° a 35° en 20 con un tamaño de etapa de 0,02° y una velocidad de barrido de 0,3 segundos por etapa. La obtención de datos se controló mediante el software Bruker DiffracSuite y se analizó mediante el software Jade (versión 7.5.1). El instrumento se calibró con un patrón de corindón, con un ángulo 20 ± 0,02°.

Se debe recordar que la geometría de Bragg-Brentano usada en la recogida de datos es propensa a la orientación preferida. En estas condiciones es posible que las intensidades relativas de los picos de difracción pueden no representar las intensidades relativas reales que se obtendrían de una distribución idealizada de partículas esféricas o de un patrón de difracción simulado a partir de los datos de un solo cristal. También es posible que algunos picos no se vean en algunos patrones de difracción debido a la amplia orientación preferida.

Calorimetría de barrido diferencial

Las mediciones por DSC se realizaron usando un módulo modelo Q-100 de TA Instruments con un controlador Thermal Analyst. Los datos se recogieron y analizaron usando el software Universal Analysis de TA Instruments. Se pesó con precisión una muestra en un recipiente de aluminio cubierto. Después de un período de equilibrio isotérmico de 5 minutos a 5 °C, la muestra se calentó usando una rampa de calentamiento lineal de 10 °C/min de 0 °C a 200 °C.

Análisis termogravimétricos

Las mediciones de gravimetría térmica se realizaron usando un módulo Modelo Q-500 de TA Instruments equipado con capacidad de resolución alta. Los datos se recogieron usando el controlador Thermal Analyst de TA Instruments y se analizaron usando el software Universal Analysis de TA Instruments. Se colocó una muestra pesada sobre un recipiente de platino y se escaneó con una velocidad de calentamiento de 10 °C/min desde temperatura ambiente hasta 200 °C. Las cámaras de equilibrio y horno se purgaron con corriente de nitrógeno durante el uso.

Microscopía de luz polarizada

Para los estudios con microscopía de luz polarizada (PLM), las muestras se examinaron con un microscopio óptico (Olympus BX51) con filtro de luz polarizada cruzada. Las imágenes se recogieron con una cámara PaxCam controlada por el software PaxIt Imaging (versión 6.4). Las muestras se prepararon sobre portaobjetos de vidrio con aceite mineral ligero como medio de inmersión. Dependiendo del tamaño de las partículas, se usó una lente de objetivo 4x, una 10x o una 20x para los aumentos.

Evaluación de sorción de humedad dinámica

Las mediciones de DMS se realizaron usando una microbalanza atmosférica VTI, sistema SGA-100 (VTI Corp., Hialeah, FL 33016). Se usó una muestra pesada y la humedad fue el valor más bajo posible (cercano al 0% de humedad relativa) al inicio del análisis. El análisis de DMS consistió en una velocidad de barrido de una humedad relativa del 5 %/etapa en el intervalo de humedad completo del 5-90 %. La realización de la DMS se realizó de manera isoterma a 25 °C.

Procedimientos sintéticos y ejemplos comparativos

Los siguientes compuestos se sintetizaron y se evaluaron para actividad de inhibición de la enzima NEP:

Preparación 1: Etil éster del ácido (2R4ffl-4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanoico (Compuesto 7)

A una solución de f-butil éster del ácido (S)-2-(4-bromobencil)-5-oxopirrolidin-1-carboxílico (25 g, 70,6 mmol) en 1,4-dioxano (500 ml) se le añadió ácido 5-cloro-2-fluorofenilborónico (24,6 g, 141 mmol), Pd(PPh3)4 (4,1 g, 3,5 mmol) y una solución de K2CO3 (17,8 g, 141 mmol) en agua (90 ml), a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno. La mezcla se calentó a 60 °C y se agitó durante una noche. Se añadió agua (500 ml) y el disolvente se evaporó. La mezcla se extrajo con EtOAc (200 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaCl acuoso saturado (300 ml) y se filtraron. El filtrado se concentró para producir el residuo en bruto que se purificó por cromatografía para producir el compuesto 2 (22,7 g) en forma de un sólido de color amarillo claro. LC-MS: 829,2 [2M+Na+].

A una solución del compuesto 2 (4,9 g, 12,1 mol) en DCM (100 ml) se le añadió TFA (4,5 ml, 60,7 mmol) a 0 °C en atmósfera de nitrógeno y se agitó durante 1 hora. La mezcla se calentó a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Después de la evaporación del disolvente, el residuo se diluyó con EtOAc (100 ml), después se lavó con NaHCO3 acuoso saturado (100 ml x 3), agua (100 ml x 2), NaCl acuoso saturado (100 ml) y después se secó sobre Na2SO4. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró para producir el compuesto 3 en bruto. LC-MS: 304 [M+H]+.

A una solución de NaH (2,4 g, 695 mmol) en THF (200 ml) se le añadió gota a gota una solución del compuesto 3 (8,5 g, 278 mmol) en THF (50 ml) a 0 °C en atmósfera de nitrógeno. La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas. Después de enfriar a 0 °C, se añadió cloruro de pivaloílo (5 g, 41,7 mmol) gota a gota durante 30 minutos. La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 9,5 horas. La reacción se interrumpió con NH4Cl acuoso saturado (250 ml) y se extrajo con EtOAc (400 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para producir el residuo en bruto que se purificó por cromatografía para producir el compuesto 4 (18 g) en forma de un sólido de color amarillo. LC-MS: 388 [M+H+].

A una solución del compuesto 4 (9 g, 23,2 mmol) en THF (200 ml) se le añadió gota a gota NaHMDS (20,9 ml, 41,8 mmol) a -78 °C en atmósfera de nitrógeno. Después de agitar durante 1 hora a -78 °C, se añadió una solución de (+)-(8,8-diclorocanforilsulfonil)oxaziridina (10,4 g, 34,8 mmol) en THF (50 ml) gota a gota. Después de agitar a -78 °C durante 1 hora, la reacción se interrumpió con NH4Cl acuoso saturado (50 ml) y se extrajo con EtOAc (400 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con HCl acuoso 1 M (400 ml), NaHCO3 acuoso saturado (400 ml) y NaCl acuoso saturado (400 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para dar el residuo en bruto que se purificó por cromatografía para producir el compuesto 5 (8,8 g) en forma de un semisólido de color blanco. LC-MS: 426,1 [M+Na+].

Una solución del compuesto 5 (8,8 g, 21,8 mmol) en EtOH (12 ml) se añadió a HCl concentrado (200 ml) y se calentó a 100 °C y se agitó durante una noche. Después, la mezcla se concentró para dar el residuo en bruto que se purificó lavando con Et2O (100 ml) para producir el compuesto 6 (7,5 g) en forma de una sal de HCl sólida. LC-MS: 338 [M+H+].

Una solución del compuesto 6 (7,5 g, 20,1 mmol) en 1:1 EtOH/HCl (100 ml) se calentó a 50 °C durante una noche. La mezcla se concentró y el residuo en bruto se purificó lavando con Et2O (200 ml) para producir el compuesto 7 (6,5 g) en forma de una sal de HCl sólida de color blanco. LC-MS: 366,1 [M+H+].

EJEMPLO 1: Ácido (2R.4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(5-metiloxazol-2-carbonil)amino]pentanoico (Compuesto 1)

Se combinaron ácido 5-metiloxazol-2-carboxílico (182 mg, 1,4 mmol) y HATU (546 mg, 1,4 mmol) con DMF (3 ml) y se agitaron durante 15 minutos a temperatura ambiente. Después se añadieron el compuesto 7 (500 mg, 1,4 mmol) y DIPEA (716 |jl, 4,1 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 15 minutos a temperatura ambiente, momento en el cual la LC/MS finalización. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo en bruto se purificó por normal cromatografía ultrarrápida (hexanos:EtOAC 20-95 %) para producir un sólido (590 mg, 1,2 mmol), que se disolvió en EtOH seco (5 ml) y THF seco (5 ml). Después se añadió una solución de LiOH 1 N en agua (9,9 ml, 9,9 mmol). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, momento en el cual la LC/MS finalización. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo en bruto se purificó por cromatografía de fase inversa para producir el compuesto 1 (490 mg) en forma de un polvo de color blanco. MS m/z [M+H]+ calc. para C22H20CIFN2O5, 447,10; encontrada 447,2.

Ácido (2R,4R)-5-(5'-doro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(5-metiloxazol-2-carbonil)amino]pentanoico cristalino no solvatado (Compuesto 1')

El compuesto 7 (HCl; 190,0 g, 472 mmol) se disolvió en DMF (2 l) y la mezcla resultante se enfrió a 0 °C. Se añadió 5-metiloxazol-2-carboxilato de sodio (73,9 g, 496 mmol), seguido de DIPEA (124 ml, 708 mmol) se añadió en una porción. Se añadió PyBOP (320 g, 614 mmol) en porciones durante 20 minutos, mientras se mantenía la temperatura interna por debajo de 10 °C (6,5 °C máx.) y la mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 1 hora y después a 20 °C durante 1 hora, mientras se controlaba la reacción. A > 99 % de conversión, la mezcla se agitó después durante 30 minutos más a temperatura ambiente. se añadieron EtOAc (6 l) y agua (5 l) y la mezcla resultante se agitó durante 20 minutos. Las fases se separaron y la capa orgánica se lavó con HCl 0,5 M (5 l), una solución acuosa al 5 % de NaHCO3 (5 l) y una solución acuosa saturada al 5 % de NaCl (5 l). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 durante 24 horas a temperatura ambiente, después se concentró por evaporación rotatoria. Se añadió THF (500 ml) y la mezcla resultante se concentró para producir el compuesto 8 en forma de un aceite espeso.

El compuesto 8 en bruto (224 g, 472 mmol) se disolvió en THF (2 l). Se añadió LiOH monohidrato (39,6 g, 944 mmol) disuelto en agua (400 ml) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente, mientras se controlaba la reacción. Se observó conversión completa después de 2 horas. Después, la reacción se interrumpió con HCl acuoso 1 M (1180 ml, 1180 mmol). Se añadieron EtOAc (2 l) y NaCl acuoso saturado (2 l) y la mezcla resultante se agitó durante 15 minutos. Las fases se separaron y la capa orgánica se lavó con una solución acuosa al 10 % de NaCl (3 l) y se secó sobre Na2SO4 (500 g) durante una noche, seguido de eliminación del disolvente. Al aceite resultante se le añadió EtOAc (2 l) y el volumen se redujo a aproximadamente 500 ml. La suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, produciendo una suspensión espesa difícil de agitar (desarrollada en 10 minutos). Se añadieron hexanos (500 ml) lentamente (durante 10 minutos) y la suspensión de flujo libre resultante se agitó durante 20 minutos a temperatura ambiente. La filtración y el secado produjeron el compuesto 1' (170 g; 99,2 % material puro) en forma de un sólido. Este producto se analizó por PXRD, d Sc y gravimetría térmica, como se describe en el presente documento y se determinó que era un material cristalino no solvatado. Estos datos se presentan en las FIGS. 1-3.

EJEMPLO 2: Ácido (2R4ffl-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(3-metoxiisoxazol-5-carbonil)aminolpentanoico (Compuesto de comparación C2)

Se añadió DIPEA (227 pl, 1,3 mmol) a una solución de ácido 3-metoxiisoxazol-5-carboxílico (74,7 mg, 522 pmol), el compuesto 7 (175 mg, 435 pmol) y HATU (248 mg, 653 pmol) en DMF (2 ml). La mezcla resultante se agitó durante 10 minutos a temperatura ambiente, momento en el cual la LC/MS finalización. Se añadió LiOH acuoso 5,0 M (696 pl, 3,5 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadió HCl concentrado (~ 0,4 ml) hasta que la mezcla de reacción se hizo ácida y la mezcla en bruto se purificó por cromatografía de fase inversa (30­ 90 % de MeCN en agua con TFA al 0,05 %) para producir el compuesto de comparación C2 (132 mg) en forma de un sólido de color blanco. MS m/z [M+H]+ calc. para C22H20CFN2O6, 463,10; encontrada 463,2.

El compuesto de comparación C2 se describe en ejemplo 19-9 de la patente de Estados Unidos n.° 8.586.536 de Gendron et al.

Preparación 2: Etil éster del ácido (2R4S)-4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-metilpentanoico (Compuesto 11)

T-butil éster del ácido S)-2-(4-bromobencil)-5-oxop¡rrol¡din-1-carboxíl¡co (90 g, 254 mmol), ácido 5-cloro-2-fluorofenilborónico (48,7 g, 279,4 mmol), Pd(dppf)2Ch (5,6 g, 7,6 mmol), KF (29,5 g, 508 mmol) en dioxano (900 ml) y agua (300 ml), se combinaron a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se calentó a 85 °C y se agitó durante 4 horas. Se añadió agua (500 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc (500 ml x 2). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaCl acuoso saturado (500 ml), se secaron, se concentraron y se purificaron por cromatografía (EP/EtOAc = 6:1 a 3:1) para producir el compuesto 2 (96 g) en forma de un sólido de color amarillo. LC-MS: m/z = 348 [(M-56)++1].

A una solución del compuesto 2 (20 g, 49,5 mmol) en DCM anhidro (200 ml) se le añadió TFA (30 ml) a 0 °C en atmósfera de nitrógeno. La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después de la evaporación del disolvente, el residuo se diluyó con EtOAc (200 ml), después se lavó con NaHCO3 acuoso saturado (200 ml x 3) y NaCl acuoso saturado (200 ml x 2). La capa orgánica se secó y se concentró para producir el compuesto 3 (14 g, en bruto) en forma de un aceite de color amarillo. LC-MS: m/z = 304 [(M++1)], m/z = 607 [(2M++1)].

A una solución del compuesto 3 (14 g, 46 mmol) en THF anhidro (150 ml) se le añadió gota a gota una solución 2,5 M de n-butillitio en hexanos (21 ml, 52,9 mmol) a -78 °C en atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a -78 °C durante 1 hora. Después se añadió cloruro de pivaloílo (7,2 g, 59,8 mmol) gota a gota a -78 °C y la mezcla se agitó a -78 °C durante otras 2 horas. La reacción se interrumpió con agua (200 ml) y se extrajo con EtOAc (200 ml x 2). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaCl acuoso saturado (200 ml), se secaron sobre Na2SO4, se concentraron y se purificaron por cromatografía en columna (EP/EtOAc= 50:1) para producir el compuesto 4 (14,6 g) en forma de un aceite de color amarillo claro. LC-MS: m/z = 388 [(M++1)].

A una solución del compuesto 4 (14,6 g, 37,4 mmol) en tolueno (200 ml) se le añadió gota a gota KHMDS (82 ml, 41,1 mmol) a -78 °C en atmósfera de nitrógeno. Después de agitar a -78 °C durante 2 horas, se añadió Me2SO4 (4,3 ml, 44,9 mmol) gota a gota. Después de agitar a -78 °C durante 2 horas, la reacción se interrumpió con NH4Cl acuoso saturado (100 ml) y se extrajo con EtOAc (100 ml x 2). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaCl acuoso saturado (200 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía (EP/EtOAc = 100:1) para producir el compuesto 9 (3,4 g) en forma de un aceite incoloro. LC-MS: m/z = 402 [(M++1)].

Una solución del compuesto 9 (3,4 g, 8,5 mmol) en HCl concentrado (50 ml) se calentó a reflujo durante 2 días. Después, la mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó lavando con EtOAc (20 ml) para producir el compuesto 10 (2,2 g) en forma de una sal de HCl sólida de color blanquecino. LC-MS: m/z = 336 [(M++1)].

Una solución del compuesto 10 (2,2 g, 5,9 mmol) en HCl 4 M en EtOH (15 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después, la mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó lavando con EtOAc (20 ml) para producir el compuesto 11 (2,3 g) en forma de un sólido de color blanquecino. LC-MS: m/z = 364 [(M++1)] r Mn 1H (300 MHz, DMSO) 87,61-7,52 (m, 3H), 7,47 (ddd, J= 8,7, 4,3, 2,7 Hz, 1H), 7,38 (dd, J = 13,5; 5,5 Hz, 3H), 3,98 (c, J = 7,1 Hz, 2H), 3,37 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 3,11 (dd, J = 13,7, 5,1 Hz, 1H), 2,90-2,67 (m, 2H), 1,85 (ddd, J = 14,0, 9,3, 4,8 Hz, 1H), 1,68-1,54 (m, 1H), 1,13-0,99 (m, 6H).

EJEMPLO 3: Ácido (2R4S)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-4-[(2-etiloxazol-5-carbonil)amino1-2-metilpentanoico (Compuesto de comparación C3)

Se añadió DIPEA (228 pl, 1,3 mmol) a una solución de ácido 2-etiloxazol-5-carboxílico (67,9 mg, 481 pmol), el compuesto 11 (175 mg, 437 pmol) y HATU (249 mg, 656 pmol) en DMF (2,0 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. Se añadió LiOH acuoso 5,0 M (699 pl, 3,5 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Se añadió HCl concentrado (~0,5 ml) hasta que la mezcla se hizo ácida y la mezcla en bruto se purificó por HPLC preparativa (20-80 % de MeCN en agua con TFA al 0,05 %) para producir el compuesto de comparación C3 (170 mg) en forma de un sólido de color blanco. MS m/z [M+H]+ calc. para C24H24CFN2O4, 459,14; encontrada 459,05.

El compuesto de comparación C3 se describe en ejemplo 71-1 de la patente de Estados Unidos n.° 8.263.629 de Coppola et al.

EJEMPLO 4: Ácido (2R4S)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-metil-4-[(oxazol-5-carbonil)amino]pentanoico (Compuesto de comparación C4)

Se añadió DIPEA (228 jl, 1,3 mmol) a una solución de ácido oxazol-5-carboxílico (49,4 mg, 437 |jmol), El compuesto 11 (HCl; 175 mg, 437 jm ol) y HATU (249 mg, 656 jm ol) en DMF (2 ml). La mezcla resultante se agitó durante 10 minutos a temperatura ambiente, momento en el cual la LC/MS finalización. Se añadió LiOH acuoso 5,0 M (699 jl, 3,5 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió HCl concentrado (~0,5 ml) hasta que la mezcla de reacción se hizo ácida y la mezcla en bruto se purificó por HPLC preparativa (20-80 % MeCN en agua con TFA al 0,05 %) para producir el compuesto de comparación C4 (103 mg) en forma de un sólido de color blanco. MS m/z [M+H]+ calc. para C22H20CFN2O4, 431,11; encontrada 431,1.

El compuesto de comparación C4 se describe en el ejemplo 68-1 de la patente de Estados Unidos n.° 8.263.629 de Coppola et al.

ENSAYOS

El compuesto 1 y los compuestos de comparación C2, C3 y C4 se evaluaron en los ensayos descritos a continuación. ENSAYO 1: Ensayo in vitro para la cuantificación de la potencia del inhibidor en la NEP humana

La actividad inhibidora en la neprilisina humana (EC 3.4.24.11; NEP) se determinó de la siguiente manera.

La NEP humana recombinante se obtuvo en el mercado (R&D Systems, Mineápolis, MN, número de catálogo 1182-ZN). Se utilizó el sustrato peptídico fluorogénico Mca-D-Arg-Arg-Leu-Dap-(Dnp)-OH (Medeiros et al. (1997) Braz. J. Med. Biol. Res. 30:1157-62; Anaspec, San Jose, CA).

El ensayo se realizó en placas opacas blancas de 384 pocillos a 37 °C utilizando el sustrato peptídico fluorogénico a una concentración de 10 jM en tampón de ensayo (HEPES 50 mM, pH 7,5, NaCl 100 mM, monolaurato de polietilenglicol sorbitán 0,01 % (Tween-20), ZnSO4 10 jM ). La enzima se utilizó a una concentración que dio como resultado una proteólisis cuantitativa de 1 jM del sustrato después de 20 minutos a 37 °C.

Los compuestos de prueba se sometieron a ensayo en el intervalo de concentraciones de 10 jM a 20 pM. Los compuestos de prueba se añadieron a la enzima y se incubaron durante 30 minutos a 37 °C antes de iniciar la reacción mediante la adición de sustrato. Las reacciones se finalizaron después de 20 minutos de incubación a 37 °C mediante la adición de ácido acético glacial hasta una concentración final del 3,6 % (v/v).

Las placas se leyeron en un fluorómetro con longitudes de onda de excitación y emisión ajustadas a 320 nm. Las constantes de inhibición se obtuvieron mediante regresión no lineal de los datos utilizando la ecuación (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA):

v = vü/[1+(I/K')]

en que v es la velocidad de reacción, V0 es la velocidad de la reacción no inhibida, I es la concentración de inhibidor y K' es la constante de inhibición aparente.

Los compuestos se probaron en este ensayo y se descubrió que tenían los siguientes valores de pKi en la NEP humana.

ENSAYO 2: Estudio farmacocinético i.v/v.o. en ratas y perros

Cada estudio de PK (forma siglada de pharmacokinetics, farmacocinética) en ratas o perros comenzó con la formulación del compuesto de prueba. Se añadieron masas apropiadas de cada compuesto de prueba en un volumen de vehículo (por ejemplo, bicarbonato de sodio al 5 %, dextrosa al 5 % en H2O) de manera que la concentración final de cada compuesto fuera apropiada para dosificarla a 2 ml/kg. Aunque una suspensión homogénea era aceptable para la dosificación oral, las soluciones de dosificación intravenosa se esterilizaron por filtración (0,2 jm ) antes de la dosificación para garantizar que no se administraran partículas.

En el estudio en ratas, se obtuvieron de Harlan Laboratories (Indianapolis, IN) ratas Sprague-Dawley macho precanuladas (3 por vía) de entre 8 y 10 semanas de edad. Las ratas recibieron una única sonda oral o una única dosis intravenosa (a través de la vena lateral de la cola) de la solución de dosificación. La dosis final fue normalmente de 0,5-3 mg/kg. Se recogieron muestras sucesivas de sangre mediante la cánula implantada en la vena yugular a los 3 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas y 24 horas posdosis. Se realizó un muestreo de forma manual o utilizando muestreadores de sangre automatizados. Las muestras se recogieron en tubos microtainer que contenían EDTA como anticoagulante y se procesaron a plasma mediante centrifugación refrigerada.

En el estudio de perros, perros beagle macho (3 por vía) alojados en Agilux Laboratories (Worcester, MA) y que pesaban entre 7-12 kg recibieron una única sonda oral o una única dosis intravenosa (a través de un catéter permanente) de la solución de dosificación. La dosis final fue normalmente de 0,1-2 mg/kg. Se recogieron muestras sucesivas de sangre mediante venopunción directa a los 3 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas y 24 horas posdosis. Todas las muestras se recogieron de forma manual en tubos microtainer que contenían EDTA como anticoagulante y se procesaron a plasma mediante centrifugación refrigerada.

Las muestras de plasma se extrajeron con 3 volúmenes de MeCN que contenía un patrón interno adecuado. Los extractos se reconstituyeron en 3 volúmenes de agua que contenían ácido fórmico al 1 % y se analizaron mediante EM/EM acoplada a HPLC. Los datos de concentración en plasma-tiempo se analizaron utilizando el software Phoenix (Pharsight Corp., St. Louis, MO) para calcular los parámetros farmacocinéticos.

La depuración plasmática se determinó a partir de la rama intravenosa del estudio y representa la velocidad a la que el plasma se depura del fármaco. Es igual a la dosis dividida por el área bajo la curva de concentración en plasmatiempo. Además de la depuración plasmática, también es esencial que un fármaco administrado por vía oral alcance niveles sistémicos eficaces después del suministro oral. La biodisponibilidad oral es una medición de las exposiciones plasmáticas después de la administración oral con respecto a las exposiciones después de la administración intravenosa.

Datos farmacocinéticos en ratas

Este dato en rata muestra que el compuesto de la invención (Compuesto 1) tiene una alta biodisponibilidad oral (67 %). Los Compuestos de comparación C3 y C4 presentaron una biodisponibilidad oral similar (del 60 % y el 60%, respectivamente). Sin embargo, el compuesto de comparación C2 tuvo una menor biodisponibilidad oral (20 %). Estos datos de ratas también muestran que el Compuesto 1 tiene una tasa de depuración baja similar en comparación con la de los Compuestos de comparación C3 y C4 (0,83, 0,60 y 0,67, respectivamente). Sin embargo, El Compuesto de comparación C2 se depuró mucho más rápidamente (media CLúltima de 1,7).

Para obtener una determinación más predictiva de cómo se comportará un compuesto en seres humanos (por ejemplo, seguridad y eficacia), se realizó una evaluación en una segunda especie animal.

Este dato en perros muestra que el compuesto de la invención (Compuesto 1) tiene una alta biodisponibilidad oral (> 100%) y una baja depuración plasmática. Mientras que los Compuestos de comparación C2 presentaron una biodisponibilidad oral similar (99%), los Compuestos de comparación C3 y C4 presentaron una biodisponibilidad oral mucho menor (del 64 % y el 42%, respectivamente). Adicionalmente, estos datos en perros también muestran que el Compuesto 1 tiene una tasa de depuración más baja (0,29) en comparación con la de los tres compuestos de Comparación C2, C3, y C4 (0,65, 0,59 y 1,54, respectivamente).

En conclusión, el Compuesto 1 presentó constantemente tanto una alta biodisponibilidad oral como una baja depuración plasmático tanto en rata como en perro. Por el contrario, el Compuesto de comparación C2 presentó una menor biodisponibilidad en ratas que el Compuesto 1 y una mayor depuración plasmática, tanto en rata como en perro, que el Compuesto 1. Los Compuestos de comparación C3 y C4, si bien son comparables en biodisponibilidad oral y depuración al Compuesto 1 en rata, presentaron menor biodisponibilidad oral, y una alta depuración, que el Compuesto 1 en perro.

ENSAYO 3: Ensayo farmacocinético/farmacodinámico (PK-PD) para la actividad de NEP en ratas Sprague-Dawley normotensas conscientes

Se añadieron masas apropiadas de cada compuesto de prueba en un volumen de vehículo (por ejemplo, bicarbonato de sodio al 5 %, dextrosa al 5 % en H2O) de manera que la concentración final de cada compuesto fuera apropiada para dosificarla a 2 ml/kg. Cabe destacar que se consideró aceptable una suspensión homogénea para la dosificación oral.

Se obtuvieron de Harlan Laboratories (Indianapolis, IN) ratas Sprague-Dawley macho precanuladas (3 por compuesto evaluado) de entre 8 y 10 semanas de edad. Las ratas recibieron una única sonda oral de la solución de dosificación. La dosis final estuvo normalmente en el intervalo de 3-30 mg/kg. Se recogieron muestras sucesivas de sangre mediante la cánula implantada en la vena yugular a los 3 minutos, 15 minutos, 35 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas y 24 horas posdosis. Las muestras se recogieron en tubos microtainer que contenían EDTA como anticoagulante y se procesaron a plasma mediante centrifugación refrigerada. Quince minutos antes de las muestras de 45 minutos, 2 horas, 4 horas, 6 horas y 24 horas, se administró una inyección en embolada i.v. (30 pg/kg) de péptido natriurético auricular (ANP). Si el compuesto de prueba inhibe satisfactoriamente a la neprilisina, un mediador clave de la depuración del ANP, el ANP administrado aumentaría los niveles basales de ANP, potenciando de este modo la señalización aguas abajo. Si el compuesto de prueba no inhibe satisfactoriamente a la neprilisina, los niveles de ANP en circulación y la cascada de señalización aguas abajo volverían a su estado basal durante los 15 minutos entre la administración de la inyección en embolada de ANP y el momento en el que se toma la muestra de plasma. Dado que la unión del ANP a su receptor conduce a la activación de la guanilil ciclasa y la posterior producción de monofosfato de guanosina cíclico (cGMP), la observación de niveles elevados de cGMP (> 20 nM) en el plasma 15 minutos después de la administración i.v. de la inyección en embolada de ANP se interpretó como prueba de inhibición en curso de la neprilisina. Los niveles elevados de cGMP en plasma 24 horas después de la dosificación es un indicador de la duración del efecto farmacológico, de manera análoga a los valores de depuración plasmática como indicadores de persistencia farmacocinética.

Las muestras de plasma se extrajeron con 3 volúmenes de MeCN que contenía un patrón interno adecuado. Los extractos se reconstituyeron en 3 volúmenes de agua que contenían ácido fórmico al 1 %. Las concentraciones plasmáticas de cGMP y del compuesto de ensayo se cuantificaron en muestras de plasma mediante detección espectrométrica de masas acoplada a HPLC.

Por tanto, el compuesto de la invención (Compuesto 1) presentó una potenciación de cGMP mayor de 2 veces 24 h después de la dosificación en comparación con lo observado para los Compuestos de la técnica anterior C2, C3, y C4.

ENSAYO 4: Estudio farmacocinético i.v./v.o. del Compuesto 1 en monos

Se realizó un estudio de PK en monos con una masa apropiada de compuesto 1 en volumen de vehículo (por ejemplo, bicarbonato de sodio al 5 %, dextrosa al 5 % en H2O, pH 7,4, para la oral y PEG200:EtOH:agua (40:10:50), pH 7,0, filtrado a través de una jeringuilla de PDVF 0,22 pM para i.v.), de modo que la concentración final se dosificó a 0,5 ml/kg (i.v.) o 2,0 ml/kg (v.o.).

Monos cinomologo machos (3 por vía) alojados en Xenometrics (Stilwell, KS) recibieron una dosis i.v. o v.o. de compuesto 1 a 1 mg/kg. Los animales a los que se les administraron dosis i.v. tuvieron acceso al alimento a demanda y los que se les administraron dosis v.o. se mantuvieron en ayunas durante una noche y recibieron alimentos aproximadamente 4 horas después de la administración de la dosis. En cada punto de tiempo se recolectaron muestras de sangre de cada animal (antes de la dosis, a las 0,083 horas, 0,25 horas, 0,5 horas, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas y 24 horas) a través de la vena cefálica, femoral o safénica, durante 48 horas. Todas las muestras se recogieron en tubos de K2EDTA y se colocan en hielo. Las muestras se procesaron para obtener el plasma mediante centrifugación (3200 rpm, 10 minutos, 5 °C) y se acidificaron con una concentración final de ácido acético al 2 %. Se transfirieron alícuotas de plasma a tubos de placas de 96 pocillos y se almacenaron congeladas (­ 70 °C) antes del bioanálisis. Las concentraciones plasmáticas del compuesto 1 se determinaron mediante CL/EM/EM. Las muestras de plasma de estudio se sometieron a agitación vorticial y se colocaron en una placa de 96 pocillos. Las muestras se extrajeron con 200 pl de ácido fórmico al 0,2 % en acetonitrilo con un patrón interno. El extracto se centrifugó durante 10 minutos a 3700 RPM y el sobrenadante se mezcló con ácido fórmico al 0,2% en agua. Se inyectaron las muestras (15 pl) en una columna de Thermo (C18 50x2,1 mm) con un caudal de 0,3 ml/min. La fase móvil A consistió en ácido fórmico al 0,2 % en agua y la fase móvil B consistió en ácido fórmico al 0,2 % en acetonitrilo. La elución en gradiente comenzó con B del 0 % al 95 % de 0,5 a 1,5 min., se mantuvo al 95 % de 1,5 a 1,85 min., seguido de un gradiente de B del 95 % al 0 % de 1,85 a 1,86 min. y se detuvo a los 2,6 min. El intervalo de ensayo del Compuesto 1 fue de 0,0005 a 5 pg/ml. Los parámetros farmacocinéticos del compuesto 1 se determinaron mediante análisis no compartimental (Modelo 201 y Modelo 200 para administración i.v. y v.o., respectivamente) utilizando Phoenix WinNonlin Versión 6.3 (Certara, Sunnyvale, c A) y utilizando perfiles de concentración plasmática tiempo individuales de 3 animales.

La depuración plasmática se determinó a partir de la rama intravenosa del estudio y representa la velocidad a la que el plasma se depura del fármaco. Es igual a la dosis dividida por el área bajo la curva de concentración en plasmatiempo. Además de la depuración plasmática, también es esencial que un fármaco administrado por vía oral alcance niveles sistémicos eficaces después del suministro oral. La biodisponibilidad oral es una medición de las exposiciones plasmáticas después de la administración oral con respecto a las exposiciones después de la administración intravenosa.

Datos farmacocinéticos en monos

Este dato muestra que el compuesto de la invención (Compuesto 1) tiene una alta biodisponibilidad oral (de aproximadamente el 60 %) y una baja depuración plasmática (de aproximadamente 0,36) en monos cinomolgo macho. Esto fue concordante y similar a los datos de biodisponibilidad y depuración generados a partir de las especies rata y perro.

ENSAYO 5: Excreción renal del Compuesto 1 en las especies rata, perro y mono

Un factor importante para asegurar una dosificación del fármaco prolongada apropiada y concentraciones en equilibrio correctas del fármaco en los pacientes es la depuración del fármaco. En general, depuraciones del fármaco disminuidas dan como resultado concentraciones del fármaco más altas y mayores efectos del fármaco. Para conocer la depuración renal del Compuesto 1, se evaluó el porcentaje de dosis administrada recuperada en orina después de una única dosis i.v. en tres especies animales. Se realizaron tres estudios distintos en ratas Sprague Dawley macho, perros beagle macho y monos cinomolgo macho, respectivamente, y el procedimiento y los resultados experimentales se describen a continuación.

Ratas Sprague Dawley machos (N=3), con pesos corporales de 0,348 a 0,362 kg, recibieron una dosis i.v. del Compuesto 1 a 0,5 mg/kg como parte de un casete de dosificación. El Compuesto 1 se disolvió en NaHCO3 al 5 % en D5W (dextrosa al 5 % en agua, pH 7,4) y se filtró a través de un filtro de jeringuilla de difluoruro de polivinilo (PVDF) 0,22 |jM antes de la administración. Las ratas tuvieron acceso al alimento a demanda antes y después de la administración del Compuesto 1. Las muestras de orina se recogieron en jaulas metabólicas y se mantuvieron en hielo seco congelado durante la recolección. Las muestras se descongelaron y se registró el volumen de orina. Se transfirió una alícuota de la muestra de orina a un tubo de almacenamiento de polipropileno, se congeló y se almacenó (-80 °C) antes del bioanálisis.

Se determinaron las concentraciones del Compuesto 1 en la orina de las ratas mediante CL/EM/EM. Las muestras de orina se descongelaron y se diluyeron 5 veces en plasma K2EDTA de rata. Se transfirió una alícuota de 50 j l de la orina diluida a una placa de 96 pocillos y se extrajo con un volumen de 200 j l de ácido fórmico al 2 % en acetonitrilo que contenía un patrón interno. La placa de 96 pocillos se centrifugó durante 10 minutos a 3700 RPM y el sobrenadante se transfirió a una nueva placa de 96 pocillos. El sobrenadante se diluyó en ácido fórmico al 0,2 % en agua (dilución de 4 veces). Se inyectó un volumen de 10 o 20 j l en una columna de fenilo Xbridge (21x50 mm; 5 j) . La fase móvil A consistió en ácido fórmico al 0,2 % en agua y la fase móvil B consistió en ácido fórmico al 0,2 % en acetonitrilo. La elución en gradiente comenzó con B del 20 % al 95 % de 0,5 a 2,0 min, se mantuvo al 95 % de 2,0 a 2,2 min., seguido de un gradiente de B del 95 % al 20 % de 2,2 a 2,3 min. y se detuvo a los 3,3 min. El intervalo de ensayo del Compuesto 1 fue de 0,00125 a 25 jg/ml.

Perros beagle machos (N=6, dos grupos de 3), con pesos corporales de 9,04-10,2 kg y de 10,8-11,5 kg, recibieron una dosis i.v. de Compuesto 1 a 0,1 mg/kg (Grupo I) y 1,255 mg/kg (Grupo II) como parte de un casete de dosificación. El Compuesto 1 se disolvió en PEG-200:etanol:agua (40:10:50) y se filtró a través de un filtro de jeringuilla de difluoruro de polivinilo (PVDF) 0,22 mM antes de la administración. Los perros tuvieron acceso al alimento a demanda antes y después de la administración del Compuesto 1. Se recogieron muestras de orina en paquetes fríos en recipientes pesados previamente que se prellenaron con 0,5 ml de ácido acético glacial. Las muestras se pesaron de nuevo y se añadió ácido acético glacial adicional si era necesario hasta una concentración final del 2 %. Las muestras se congelaron y almacenaron (-80 °C) antes del bioanálisis.

Se determinaron las concentraciones del Compuesto 1 en la orina de los perros mediante CL/EM/EM. Las muestras de orina de estudio (diluidas en plasma K2EDTA (1:9)) se agitaron vorticialmente y se colocaron 25 j l en una placa de 96 pocillos. Las muestras se extrajeron con 100 j l en acetonitrilo con un patrón interno de Gliburida. El extracto se centrifugó durante 5 minutos a 3100 RPM y se transfirieron 75 j l de sobrenadante y se mezclaron con 150 j l de agua. Se inyectaron muestras (12 j l ) en una columna Waters Acquity UPLC BEH C18 (50 x 2,1 mm, 1,7 jm ) con un caudal de 0,9 ml/min. La fase móvil A consistió en agua:acetonitrilo:ácido fórmico 95:5:0,1 (v:v:v) y la fase móvil B consistió en metanol:acetonitrilo:ácido fórmico 50:50:0,1 (v:v:v). La elución en gradiente comenzó con B del 35 % al 90 % de 0,2 a 1,6 min, se mantuvo al 95 % de 1,7 a 2,2 min., seguido de una etapa de B del 95 % al 35 % de 2,20 a 2,30 min. El intervalo de ensayo del Compuesto 1 fue de 0,000100 a 1,00 jg/ml.

Monos cinomolgo machos (N=3), con pesos corporales de 4,42-5,81 kg, recibieron una dosis i.v. de compuesto 1 a 1 mg/kg. El Compuesto 1 se disolvió en PEG-200:etanol:agua (40:10:50) y se filtró a través de un filtro de jeringuilla de difluoruro de polivinilo (PVDF) 0,22 mM antes de la administración. Los monos tuvieron acceso al alimento a demanda antes y después de la administración del Compuesto 1. Se recogieron muestras de orina en hielo seco durante los períodos de intervalo de recolección, se registraron los volúmenes de las muestras y la orina se acidificó con ácido acético hasta una concentración final de ácido acético de aproximadamente el 2 %. Se obtuvieron alícuotas y se congelaron (-70 °C) antes del bioanálisis.

Se determinaron las concentraciones del Compuesto 1 en la orina de los monos mediante CL/EM/EM. Las muestras de orina se descongelaron y se diluyeron en plasma K2EDTA (1:4). Las muestras se extrajeron con 200 j l de ácido fórmico al 0,2% en acetonitrilo con patrón interno. El extracto se centrifugó durante 10 minutos a 3700 RPM y el sobrenadante se mezcló con ácido fórmico al 0,2 % en agua. Las muestras (15 j l ) se inyectaron en una columna de Thermo (C1850x2,1 mm) con un caudal de 0,3 ml/min. La fase móvil A consistió en ácido fórmico al 0,2 % en agua y la fase móvil B consistió en ácido fórmico al 0,2 % en acetonitrilo. La elución en gradiente comenzó con B del 0 % al 95 % de 0,5 a 1,5 min, se mantuvo al 95 % de 1,5 a 1,85 min, seguido de un gradiente de B del 95 % al 0 % de 1,85 a 1,86 min. y se detuvo a los 2,6 min. El intervalo de ensayo del Compuesto 1 fue de 0,0025 a 25 jg/ml.

La cantidad media de orina excretada durante un período de recolección de 24 horas y el % aproximado de dosis administrada excretada en la orina se informa a continuación en la tabla.

La excreción renal del Compuesto 1 en la rata fue aproximadamente del 0,03 % de la dosis administrada, en el perro fue aproximadamente del 1 al 1,5 % de la dosis administrada y en el mono de aproximadamente el 3 % de la dosis administrada. Estos datos indican que el Compuesto 1 tiene baja excreción renal en las tres especies analizadas.

Claims (17)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto ácido (2R,4RJ-5-(5’-cloro-2’-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(5-metil-oxazol-2-carbonil)amino]pentanoico que tienen la estructura:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. El compuesto de la reivindicación 1, que es una forma cristalina del ácido (2R,4R)-5-(5’-cloro-2’-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(5-metil-oxazol-2-carbonil)amino]pentanoico.

3. La forma cristalina de la reivindicación 2, en donde la forma cristalina está caracterizada por un patrón de difracción de rayos X de polvo que comprende picos de difracción a valores 20 de 8,48±0,20, 14,19±0,2o, 17,03±0,20, 21,15±0,20 y 25,41±0,20, en donde los valores 20 se obtuvieron usando radiación Cu-Ka.

4. La forma cristalina de la reivindicación 3, en donde la forma cristalina está caracterizada por un patrón de difracción de rayos X de polvo que comprende picos de difracción a valores 20 de 7,51 ±0,20, 8,48±0,20, 14,l9±0,20, 17,03±0,20, 17,62±0,20, 17,87±0,20, 20,59±0,20, 21,15±0,20, 21,88±0,20, 24,45±0,20, 24,78±0,20, 25,41±0,20, 25,67±0,20, 27,67±0,20 y 28,22±0,20, en donde los valores 20 se obtuvieron usando radiación Cu-Ka.

5. La forma cristalina de la reivindicación 4, en donde la forma cristalina además está caracterizada porque tiene uno o más picos de difracción adicionales a valores 20 seleccionados entre 16,09±0,20, 18,70±0,20, 19,21 ±0,20, 19,40±0,20, 21,64±0,20, 22,25±0,20, 26,43±0,20, 28,55±0,20, 30,73±0,20, 31,10±0,20, 32,64±0,20, 33,14±0,20 y 34,46±0,20, en donde los valores 20 se obtuvieron usando radiación Cu-Ka.

6. La forma cristalina de la reivindicación 2, en donde la forma cristalina está caracterizada por un trazo de calorimetría diferencial de barrido a una velocidad de calentamiento de 10 °C por minuto que muestra un máximo en el flujo de calor endotérmico a una temperatura entre aproximadamente 165 °C y 169 °C.

7. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, opcionalmente junto con otro agente terapéutico.

8. La composición farmacéutica de la reivindicación 7, en donde el vehículo farmacéuticamente aceptable es estearato de magnesio.

9. La composición farmacéutica de la reivindicación 7, que incluye un antagonista del receptor de AT1, un inhibidor de la enzima convertidora de la angiotensina, un inhibidor de fosfodiesterasa (PDE), un inhibidor de renina, un diurético o combinaciones de los mismos.

10. La composición farmacéutica de la reivindicación 7, que es una forma farmacéutica oral que comprende el compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en una cápsula, comprimido, líquido o suspensión.

11. La composición farmacéutica de la reivindicación 7, que es una forma farmacéutica intravenosa que comprende el compuesto de la reivindicación 1 en una solución tamponada.

12. Un proceso para preparar el compuesto de la reivindicación 1, comprendiendo el proceso acoplar el éster etílico del ácido (2R,4RM-amino-5-(5’-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanoico con ácido 5-metiloxazol-2-carboxílico para producir el compuesto de la reivindicación 1.

13. El proceso de la reivindicación 12, que comprende:

(a) combinar ácido 5-metiloxazol-2-carboxílico y hexafluorofosfato de W,W,W',W-tetrametil-O-(7-azabenzotr¡azol-1 il)uronio (HATU) en N,N-dimetilformamida (DMF) y agitar a temperatura ambiente;

(b) añadir éster etílico del ácido ^2R,4Rj-4-amino-5-(5'-doro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanoico y N,N-diisopropiletilamina y agitar a temperatura ambiente;

(c) aislar y después disolver los sólidos resultantes en etanol seco y tetrahidrofurano seco;

(d) añadir una solución de hidróxido de litio en agua y

(e) aislar los sólidos resultantes para producir el compuesto de la reivindicación 1.

14. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para uso en terapia.

15. Un compuesto para su uso como se reivindica en la reivindicación 14, para tratar hipertensión, hipertensión pulmonar, insuficiencia cardíaca o nefropatía.

16. Un compuesto para su uso como se reivindica en la reivindicación 14, en un sujeto con insuficiencia renal.

17. Un compuesto para su uso como se reivindica en la reivindicación 16, para tratar a un sujeto con insuficiencia renal que tiene nefropatía crónica con una tasa de filtración glomerular estimada (eGFR) de entre 60 ml/min/1,73 m2 y 15 ml/min/1,73 m2.